PT1360178E - Novos análogos heterocíclicos de compostos difeniletileno - Google Patents

Description

ΡΕ1360178 1

DESCRIÇÃO "NOVOS ANÁLOGOS HETEROCÍCLICOS DE COMPOSTOS DIFENILETILENO"

Antecedentes da Invenção O presente pedido de patente é dirigido a novos compostos formados por acoplamento químico de compostos difeniletileno, e seus derivados, com intermediários tiazolidina ou oxazolidina. Estes compostos são eficazes para proporcionar uma variedade de efeitos farmacológicos úteis. Por exemplo, os compostos são úteis na diminuição dos níveis de glucose no sangue, insulina no soro e triglicéridos em modelos animais de diabetes do tipo II. Surpreendentemente verificou-se que estes compostos aumentam o nível de leptina e não são tóxicos para o fígado.

Além disso, estes compostos são úteis para o tratamento de perturbações associadas à resistência à insulina, como síndroma do ovário poliquístico, bem como hiperlipidemia, doença da artéria coronária e doença vascular periférica, e para o tratamento de inflamação e doenças imunológicas, particularmente as mediadas por citoquinas e ciclo-oxigenase, como TNF-alfa, IL-1, IL-6 e/ou COX-2. 2 ΡΕ1360178

As causas da diabetes de tipo I e de tipo II ainda são desconhecidas, apesar da genética e ambiente parecerem ser factores importantes. 0 tipo I dependente de insulina e o tipo II não dependente de insulina são os tipos conhecidos. 0 tipo I é uma doença autoimune em que o autoantigene responsável ainda é desconhecido. Os pacientes de tipo I necessitam de receber insulina, parentérica ou subcutaneamente, para sobreviverem. Todavia, a diabetes de tipo II, a forma mais comum, é uma perturbação metabólica resultante da incapacidade do corpo para produzir uma quantidade suficiente de insulina ou para utilizar apropriadamente a insulina que é produzida. A secreção de insulina e a resistência à insulina são consideradas as principais deficiências, mas os factores genéticos precisos envolvidos no mecanismo permanecem desconhecidos.

Os pacientes com diabetes têm geralmente uma ou mais das seguintes deficiências:

Menos produção de insulina pelo pâncreas;

Secreção excessiva de glucose pelo fígado;

Independente da captação de glucose pelos músculos-esqueléticos ;

Deficiências em transportadores de glucose, dessensibilização de receptores da insulina; e

Deficiências na degradação metabólica de polissa-cáridos.

Para além da aplicação parentérica ou subcutânea de insulina, há cerca de 4 classes de agentes hipoglicé-micos orais utilizados. 3 ΡΕ1360178

Classe Fármacos Aprovados Mecanismos de Limitações Sulfonilureia 4 (Ia geração) e 2 (2a geração) actua no pâncreas para libertar mais insulina desenvolvimento de resistência Biguanidas Metformina reduz a produção de glucose pelo fígado; melhora a sensibilidade à insulina problemas de fígado, acidose láctica Inibidor da alfa-glucosidase Acarbose interfere no processo digestivo; reduz a absorção de glucose só é útil ao nível pós-prandial Tiazolidino-diona Troglitazona (retirado) rosiglitazona pioglitazona reduz a resistência à insulina "aditivo" com insulina; não é útil para pessoas com doença do coração e fígado

Como é claro da tabela acima, cada um dos agentes correntes disponíveis para utilização no tratamento de diabetes tem certas desvantagens. Em conformidade, há interesse continuado na identificação e desenvolvimento de novos agentes, particularmente agentes solúveis em água que possam ser administrados oralmente, para utilização no tratamento de diabetes. A classe de tiazolidinodionas listada na tabela acima tem sido utilizada de forma mais disseminada em anos recentes para o tratamento de diabetes do tipo II, exibindo utilidade particular como sensibilizador à insulina para 4 ΡΕ1360178 combater a "resistência à insulina", um estado em que o paciente passa a responder menos aos efeitos da insulina. No entanto, as tiazolidinodionas conhecidas não são eficazes numa porção significativa da população de pacientes. Adicionalmente, o primeiro fármaco desta classe a ser aprovado pela FDA, troglitazona, foi retirado do mercado devido a problemas de toxicidade para o fígado. Assim, há uma necessidade continuada de sensibilizadores à insulina não tóxicos e eficazes de forma mais ampla.

Composições tiazolidinodionas são farmacêuticas e métodos que empregam descritos nas Patentes 6,133,295; 6,117,893; 6,103,742; 6,030,973; 5,990,139; 6,133,293; 6,114,526; 6,080,765; RE 36,575; 5,985,884; 6,130,216; 6,110,951; 6,046,222; 6,011,036; 5,972,973 e 6,121,295; 6,110,948; 6,046,202; 6,011,031; outras. U.S. N°s 6,121,294; 6,107,323; 6,034,110; 6,008,237; auxilio

Como indicado acima, a presente invenção também diz respeito ao tratamento de doenças imunológicas ou inflamação, especialmente as doenças mediadas por citoquinas ou ciclo-oxigenase. Os elementos principais do sistema imunológico são macrófagos ou células apresentadoras de antigenes, células T e células B. Conhece-se o papel de outras células imunológicas, como células NK, basófilos, mastócitos e células dendríticas, mas o seu papel em perturbações imunológicas primárias não é certo. Os macrófagos são mediadores importantes em inflamação e em conseguir o "auxílio" necessário para a estimulação e 5 ΡΕ1360178 proliferação de células T. De modo mais importante, os macrófagos produzem IL 1, IL 12 e TNFa, todos os quais são moléculas pró-inflamatórias potentes e também proporcionam auxilio para células T. Adicionalmente, a activação de macrófagos origina a indução de enzimas, como a ciclo-oxigenase II (COX-2), óxido nítrico sintase indutível (iNOS) e produção de radicais livres capazes de danificarem células normais. Muitos factores activam macrófagos, incluindo produtos bacterianos, superantigenes e interferão gama (IFNy). Crê-se que fosfotirosina quinases (PTKs) e outras quinases celulares não definidas estão envolvidas no processo de activação.

Os macrófagos recolhem e degradam antigenes em pequenos fragmentos. Em seguida, estes fragmentos associam-se ao complexo principal de histocompatibilidade II (MHC II) . Este complexo de fragmentos de antigenes e MHC II é reconhecido pelo receptor de células T. Associada a sinais de co-estimulação apropriados, esta interacção receptor-ligando conduz à activação e proliferação de células T. Dependendo da via de administração do antigene, da sua dose e das condições em que os macrófagos são activados, a resposta imunológica pode resultar em auxílio de células B e produção de anticorpos ou no desenvolvimento de uma resposta mediada por células. Uma vez que os macrófagos são sentinelas do desenvolvimento de uma resposta imunológica, é provável que agentes que modificam a sua função, especificamente o seu perfil de secreção de citoquinas, determinem a direcção e potência da resposta imunológica. 6 ΡΕ1360178

As citoquinas são moléculas segregadas por células imunológicas que são importantes na mediação de respostas imunológicas. A produção de citoquinas pode conduzir à secreção de outras citoquinas, função celular alterada, divisão ou diferenciação celular. A inflamação é a resposta normal do corpo a lesão ou infecção. No entanto, em doenças inflamatórias como artrite reumatóide, processos inflamatórios patológicos podem conduzir a morbidez e mortalidade. A citoquina factor de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) desempenha um papel central na resposta inflamatória e foi considerado um ponto de intervenção em doença inflamatória. O TNF-alfa é uma hormona polipeptídica libertada por macrófagos activados e outras células. A baixas concentrações, o TNF-alfa participa na resposta inflamatória protectora ao activar leucócitos e promover a sua migração para sítios extravasculares de inflamação (Moser et al., J. Clin. Invest., ^3_: 444-55, 1989). A concentrações mais elevadas, o TNF-alfa pode actuar como pirogénio potente e induzir a produção de outras citoquinas pró-inflamatórias (Haworth et al., Eur. J. Immunol., 21: 2575-79, 1991; Brennan et al., Lancet, 2: 244-7, 1989). O TNF-alfa também estimula a síntese de proteínas de fase aguda. Em artrite reumatóide, uma doença inflamatória crónica e progressiva que afecta cerca de 1% da população adulta dos E.U.A., o TNF-alfa medeia a cascata de citoquinas que conduz a danos e destruição das articulações (Arend et al., Arthritis Rheum., 3_8: 151-60, 1995). Inibidores do TNF-alfa, incluindo receptores solúveis do 7 ΡΕ1360178 TNF (etanercept) (Goldenberg, Clin. Ther., 2_1: 75-87, 1999) e anticorpos anti-TNF-alfa (infliximab) (Luong et al., Ann. Pharmacother., 3_4: 743-60, 2000), foram recentemente aprovados pela Food and Drug Administration (FDA) dos E.U.A. como agentes para o tratamento de artrite reumatóide. Níveis elevados de TNF-alfa também foram implicados em muitas outras perturbações e estados de doença, incluindo caquexia (Fong et ai., Am. J. Physiol., 256: R659-65, 1989), síndroma do choque séptico (Tracey et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 200: 233-9, 1992), osteoartrite (Venn et ai., Arthritis Rheum., 36_: 819-26, 1993), doença inflamatória do intestino, como doença de Crohn e colite ulcerativa (Murch et al., Gut, 3_2: 913-7, 1991), doença de Behcet (Akoglu et ai., J. Rheumatol., 1_7: 1107-8, 1990), doença de Kawasaki (Matsubara et al., Clin. Immunol. Immunopathol., 56p 29-36, 1990), malária cerebral (Grau et al., N. Engl. J. Med., 320: 1586-91, 1989), síndroma da dificuldade respiratória do adulto (Millar et al., Lancet 2: 712-4, 1989), asbestose e silicose (Bissonnette et al.,

Inflammation, 13_: 329-39, 1989), sarcoidose pulmonar (Baughman et ai., J. Lab. Clin. Med., 115: 36-42, 1990), asma (Shah et al., Clin. Exp. Allergy, 25: 1038-44, 1995), SIDA (Dezube et al., J. Acquir. Immune Defic. Syndr., 5p 1099-104, 1992), meningite (Waage et ai., Lancet, 1: 355-7, 1987), psoríase (Oh et ai., J. Am. Acad. Dermatol., 42: 829-30, 2000), reacção enxerto versus hospedeiro (Nestel et al., J. Exp. Med., 175: 405-13, 1992), esclerose múltipla ΡΕ1360178 (Sharief et al., N. Engl. J. Med. , 325: 467-72, 1991), lúpus eritematoso sistémico (Maury et ai., Int. J. Tissue React., 1_1: 189-93, 1989), diabetes (Hotamisligil et ai.,

Science, 259: 87-91, 1993) e aterosclerose (Bruunsgaard et ai., Clín. Exp. Immunol., 121: 255-60, 2000) .

Das referências citadas acima pode observar-se que inibidores do TNF-alfa são potencialmente úteis no tratamento de uma grande variedade de doenças. Compostos que inibem o TNF-alfa foram descritos nas Patentes U.S. N°s 6,090,817; 6,080,763; 6,080,580; 6,075,041; 6,048,841; 6,046,319; 6,046,221; 6,040,329; 6,057,369; 6,034,100; 6,028,086; 6,022,884; 6,015,558; 6,004,974; 5,990,119; 5,981,701; 5,977,122; 5,972,936; 5,968,945; 5,962,478; 5,958,953; 5,958,409; 5,955,480; 5,948,786; 5,935,978; 5,935,977; 5,929,117; 5,925,636; 5,900,430; 5,900,417; 5,891,883, 5,869,677 e outras. A interleuquina-6 (IL-6) é outra citoquina pró-inflamatória que exibe pleiotropia e redundância de acção. A IL-6 participa na resposta imunológica, inflamação e hematopoiese. É um indutor potente da resposta hepática de fase aguda e é um estimulador poderoso do eixo hipota-lâmico-pituitária-adrenal que está sob o controlo negativo de glucocorticóides. A IL-6 promove a secreção da hormona de crescimento mas inibe a libertação da hormona estimuladora da tiróide. Observam-se níveis elevados de IL-6 em várias doenças inflamatórias, e a inibição da subfamília de citoquinas IL-6 foi sugerida como estratégia para melhorar ΡΕ1360178 a terapia de artrite reumatóide (Carroll et ai., Inflamm. Res., 4_7: 1-7, 1998). Adicionalmente, a IL-6 foi implicada na progressão de aterosclerose e na patogénese de doença cardíaca coronária (Yudkin et ai., Atherosclerosis, 148: 209-14, 1999). Também se observa super-produção de IL-6 na síndroma de privação de esteróides, estados relacionados com secreção desregulada de vasopressina e osteoporose associada a reabsorção óssea aumentada, como em casos de hiper-paratiroidismo e deficiência de esteróides sexuais (Papanicolaou et ai., Ann. Intern. Med., 128: 127-37, 1998).

Uma vez que a produção excessiva de IL-6 está implicada em vários estados de doença, é altamente desejável desenvolver compostos que inibam a secreção de IL-6. Compostos que inibem a IL-6 foram descritos nas Patentes U.S. N°s 6,004,813; 5,527,546 e 5,166,137. A ciclo-oxigenase é uma enzima que cataliza um passo determinante da velocidade na biossíntese de pros-taglandinas, que são mediadores importantes de inflamação e dor. A enzima ocorre na forma de pelo menos dois isómeros distintos, ciclo-oxigenase-1 (COX-1) e ciclo-oxigenase-2 (COX-2). O isómero COX-1 é constitutivamente expresso nas mucosas gástricas, plaquetas e outras células e está envolvido na manutenção da homeostasia em mamíferos, incluindo protecção da integridade do tracto digestivo. O isómero COX-2, por outro lado, não é expresso de forma constitutiva; ao invés, é induzido por vários agentes, como cito- 10 ΡΕ1360178 quinas, mitogenes, hormonas e factores de crescimento. Em particular, a COX-2 é induzida durante a resposta inflamatória (DeWitt D.L., Biochim. Biophys. Acta, 1083: 121-34, 1991; Seibert et al., Receptor, _4: 17-23, 1994.). A aspirina e outros fármacos anti-inflamatórios não este-róides convencionais (NSAIDs) são inibidores não selectivos da COX-1 e COX-2. Podem ser eficazes na redução de dor e inchaço inflamatórios mas, uma vez que atenuam a acção protectora da COX-1, produzem efeitos secundários indesejáveis de patologia gastrointestinal. Em consequência, agentes que inibem selectivamente a COX-2 mas não a COX-1 são preferíveis para o tratamento de doenças inflamatórias. Recentemente, uma diarilpirazolossulfonamida (celecoxib) que inibe selectivamente a COX-2 foi aprovada pela FDA para utilização no tratamento de artrite reumatóide (Luong et al., Ann. Pharmacother., 3_4: 743-60, 2000; Penning et al., J. Med. Chem., _40_: 1347-65, 1997). A COX-2 também é expressa em muitos cancros e lesões pré-cancerosas e há evidências crescentes de que inibidores selectivos da COX-2 podem ser úteis no tratamento e prevenção de cancro colorrectal, da mama e outros (Taketo M.M., J. Natl. Câncer Inst., 9_0: 1609-20, 1998; Fournier et al., J. Cell. Biochem. Suppl., 3_4: 97-102, 2000; Masferrer et al., Câncer Res., 6_0: 1306-11, 2000). Em 1999, o celecoxib foi aprovado pela FDA como adjunto ao tratamento habitual de pacientes com polipose adenomatosa familiar, um estado que, se não for tratado, conduz geralmente a cancro colorrectal.

Compostos que inibem selectivamente a COX-2 foram 11 ΡΕ1360178 descritos nas Patentes U.S. N°s 5,344,991; 5,380, 738; 5,434,178; 5,466,823; 5,474,995; 5,510,368; 5,521, 207; 5,521,213; 5,536,752; 5,550,142; 5,552,422; 5,604, 260; 5,639,780; 5,643,933; 5,677,318; 5,691,374; 5,698, 584; 5,710,140; 5,733,909; 5,789,413; 5,811,425; 5,817, 700; 5,849,943; 5,859,257; 5,861,419; 5,905,089; 5,922, 742; 5,925,631; 5,932,598; 5,945,539; 5,968,958; 5,981, 576; 5,994,379; 5,994,381; 6,001,843; 6,002,014; 6,004, 950; 6,004,960; 6,005,000; 6,020,343; 6,034,256; 6,046, 191; 6,046,217; 6,057,319; 6,071,936; 6,071,954; 6,077, 850; 6,077,868; 6,077,869 e 6 ,083,969. A citoquina IL-1 beta também participa na resposta inflamatória. Estimula a proli feração de timócitos, actividade do factor de crescimento de fibroblastos e a libertação de prostaglandina de células sinoviais. Níveis elevados ou desregulados da citoquina IL-1 beta foram associados a algumas doenças inflamatórias e outros estados de doença, incluindo mas não se limitando a síndroma da dificuldade respiratória do adulto (Meduri et al., Chest 107: 1062-73, 1995), alergia (Hastie et al., Cytokine 8_: 730-8, 1996), doença de Alzheimer (0'Barr et al., J. Neuroimmunol. 109: 87-94, 2000), anorexia (Laye et al., Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2 79: R93-8, 2000), asma (Sousa et al., Thorax 52_: 407-10, 1997), aterosclerose (Dewberry et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Bíol. 2_0: 2394-400, 2000), tumores cerebrais (Ilyin et al., 12 ΡΕ1360178

Mol. Chem. Neuropathol. 33_: 125-37, 1998), caquexia (Nakatani et al., Res. Commun. Mol. Pathol. Pharmacol. 102: 241-9, 1998), carcinoma (Ikemoto et ai., Anticancer Res. 20: 317-21, 2000), artrite crónica (van den Berg et al.,

Clin. Exp. Rheumatol. 11_: S105-14, 1999), síndroma de fadiga crónica (Cannon et al., J. Clin. Immunol. 1_7: 253-61, 1997), traumatismo do SNC (Herx et al., J. Imnunol. 165: 2232-9, 2000), epilepsia (De Simoni et al., Eur. J.

Neurosci. 12_: 2623-33, 2000), doenças do pulmão fibrótico (Pan et al., Pathol. Int. 46_: 91-9, 1996), falha hepática fulminante (Sekiyama et ai., Clin. Exp. Immunol. 98_: 71-7, 1994), gengivite (Biesbrock et ai., Monogr. Oral. Sei. 17: 20-31, 2000), glomerulonefrite (Kluth et ai., J. Nephrol. 12: 66-75, 1999), síndroma de Guillain-Barre (Zhu et al.,

Clin. Immunol. Immunopathol. 8_4: 85-94, 1997), hiperalgesia térmica (Opree et ai., J. Neurosci. 2_0: 6289-93, 2000), hemorragias e endotoxemia (Parsey et al., J. Immunol. 160: 1007-13, 1998), doença inflamatória do intestino (Olson et al., J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1_6: 241-6, 1993), leucemia (Estrov et al., Leuk. Lymphoma 2_4: 379-91, 1997), artrite leucémica (Rudwaleit et al., Arthritis Rheum. 41: 1695-700, 1998), lúpus eritematoso sistémico (Mao et ai.,

Autoimmunity 2_4: 71-9, 1996), esclerose múltipla (Martin et al., J. Neuroimmunol. 6_1: 241-5, 1995), osteoartrite (Hernvann et ai., Osteoarthritis Cartilage A·. 139-42, 1996) , osteoporose (Zheng et ai., Maturitas 26_: 63-71, 1997) , doença de Parkinson (Bessler et al., Biomed.

Pharmacother. _53p 141-5, 1999), síndroma de POEMS (Gherardi et al., Blood 83_: 2587-93, 1994), parto pré-termo (Dudley, 13 ΡΕ1360178 J. Reprod. Immunol. 36_: 93-109, 1997), psoríase (Bonifati et al., J. Biol. Regul. Homeost. Agents 11_: 133-6, 1997), lesão de reperfusão (Clark et al., J. Surg. Res. 58_: 675-81, 1995), artrite reumatóide (Seitz et al., J. Rheumatol. 23: 1512-6, 1996), choque séptico (van Deuren et al., Blood 9 0: 1101-8, 1997), vasculite sistémica (Brooks et ai., Clin. Exp. Immunol. 106: 273-9, 1996), doença das articulações temporo-mandibulares (Nordahl et ai., Eur. J. Oral. Sei. 106: 559-63, 1998), tuberculose (Tsao et ai., Tuber. Lung Dis. 7_9; 279-85, 1999), rinite virai (Roseler et ai., Eur. Arch. Otorhinolaryngol. Suppl. _1: S61-3, 1995) e dor e/ou inflamação resultantes de esforço excessivo, entorse, traumatismo, cirurgia, infecção ou outros processos de doença.

Uma vez que a produção excessiva de IL-1 beta está associada a numerosos estados de doença, é desejável desenvolver compostos que inibam a produção ou actividade da IL-1 beta .. Métodos e composições para inibir a . IL-1 beta são descritos nas Patentes U.S. N°s 6,096,728; 6,090,775; 6,083,521; 6,036,978; 6,034,107; 6,034,100; 6,027,712; 6,024,940; 5,955,480; 5,922,573; 5,919,444; 5,905,089; 5,874,592; 5,874,561; 5,874,424; 5,840,277; 5,837,719; 5,817,670; 5,817,306; 5,792,778; 5,780,513; 5,776,979; 5,776,954; 5,767,064; 5,747,444; 5,739,282; 5,731,343; 5,726,148; 5,684,017; 5,683,992; 5,668,143; 5,624,931; 5,618,804; 5,527,940; 5,521,185; 5,492,888; 5, 488,032 e outras. 14 ΡΕ1360178

Do anteriormente exposto será apreciado que, tendo havido esforços prévios extensos para proporcionar compostos para inibir, por exemplo, o TNF-alfa, IL-1, IL-6, COX-2 ou outros agentes considerados responsáveis pela resposta imunológica, inflamação ou doenças inflamatórias, por exemplo, artrite, ainda são necessários compostos novos e melhorados para tratar ou inibir eficazmente essas doenças. Um objectivo principal da invenção é proporcionar compostos que sejam eficazes para esses tratamentos, bem como para o tratamento, por exemplo, de resistência à insulina, hiperlipidemia, doença cardíaca coronária, esclerose múltipla e cancro.

Sumário da Invenção

Num aspecto da invenção é proporcionado um composto seleccionado de entre: 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxotiazolidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}acrilamida, 3-(3,5-dimetoxifenil)—2—{4—[4—(2,4-dioxotiazolidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}-N,N-dimetilacrilamida, 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxotiazolidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}-N-metoxi-N-metilacrilamida.

Estes compostos são úteis para o tratamento de diabetes, hiperlipidemia e outras doenças ligadas à resistência à insulina, como doença da artéria coronária e doença vascular periférica, e também para o tratamento ou 15 ΡΕ1360178 inibição de inflamação ou doenças inflamatórias, como artrite inflamatória, e doenças vasculares relacionadas com o colagénio, que são causadas, por exemplo, por citoquinas ou ciclo-oxigenase, como TNF-alfa, IL-1, IL-6 e/ou COX-2. Os compostos também são úteis para o tratamento ou prevenção de outras doenças mediadas por citoquinas e/ou ciclo-oxigenase, como cancro.

Em conformidade, o âmbito da invenção também inclui a utilização de um composto de acordo com a invenção na preparação de um medicamento para o tratamento de diabetes, inflamação, artrite, doença inflamatória, inibição de TNF-alfa, IL-1, IL-6 ou COX-2, tratamento de esclerose múltipla, cancro ou doença cardíaca.

Também são proporcionadas composições farmacêuticas contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos de acordo com a invenção juntamente com um transportador farmacêutico ou fisiologicamente aceitável para utilização nos tratamentos contemplados aqui.

Descrição Breve dos Desenhos

As FIGS. IA e 1B mostram gráficos dos níveis de glucose no sangue e pesos corporais, respectivamente, de ratinhos machos db/db (espontaneamente diabéticos) que receberam o composto VIII durante um período de 15 dias. 16 ΡΕ1360178

As FIGS. 2A e 2B mostram gráficos dos níveis de glucose no sangue e pesos corporais de ratinhos machos ob/ob (geneticamente obesos e espontaneamente diabéticos) que receberam o composto VIII durante um período de 15 dias.

As FIGS. 3A e 3B mostram gráficos dos níveis de glucose no sangue de ratinhos db/db e ob/ob, respecti-vamente, que receberam o composto VIII durante um período de 20-25 dias. A FIG. 4 mostra um gráfico do nível de glucose no sangue de ratinhos db/db durante 72 horas após uma dosagem do composto VIII.

As FIGS. 5A, 5B, 5C e 5D mostram gráficos dos níveis de triglicéridos, níveis de ácidos gordos livres, níveis de glyc-Hb e níveis de leptina no soro dos ratinhos db/db tratados com o composto VIII.

As FIGS. 6A, 6B, 6C e 6D são gráficos que mostram os níveis de insulina no soro, níveis de triglicéridos, níveis de ácidos gordos livres e níveis de Glyc-Hb do soro de ratinhos ob/ob tratados com o composto VIII.

As FIGS. 7A e 7B mostram os ensaios de enzimas do fígado em ratinhos 21 dias após o tratamento com o composto VIII. 17 ΡΕ1360178 A FIG. 8 mostra a captação de glucose em células 3T3-L1 para o composto VIII. A FIG. 9 mostra um gráfico da comparação do composto VIII com rosiglitazona quanto à inibição da produção de TNF induzida por LPS. A FIG. 10 é um gráfico da comparação do composto VIII com rosiglitazona quanto à inibição da produção de IL-6 induzida por LPS. A FIG. 11 é um gráfico da comparação do composto VIII com rosiglitazona quanto à inibição da produção de IL-1-beta induzida por LPS.

As FIGS. 12A e 12B mostram uma comparação do composto VIII (FIG. 12A) com rosiglitazona (FIG. 12B) quanto à inibição da actividade da COX-2 induzida por LPS.

As FIGS. 13A, 13B, 13C e 13D ilustram a supressão de artrite induzida pelo colagénio utilizando o composto VIII. A FIG. 14 ilustra a supressão de encefalomielite alérgica experimental (EAE) por utilização do composto VIII. 18 ΡΕ1360178

Descrição das Formas de Realização Preferidas

Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser combinados com um transportador ou veiculo fisio-logicamente aceitável para formar uma composição farmacêutica, tal como pó liofilizado na forma de pastilhas ou cápsulas com vários agentes de enchimento e aglutinantes. A dosagem eficaz de um composto presente na composição pode variar muito, sendo seleccionada pelos habitualmente experimentados na área e podendo ser determinada empiricamente.

Tal como foi anteriormente indicado, os compostos da invenção são úteis para o tratamento de diabetes, caracterizada pela presença de níveis aumentados de glucose no sangue, isto é, perturbações hiperglicémicas, como diabetes mellitus, incluindo diabetes do tipo I e II, bem como outras perturbações relacionadas com hiperglicemia, como obesidade, colesterol aumentado, hiperlipidemia, como hipertrigliceridemia, perturbações relacionadas com os rins e afins. Os compostos também são úteis para o tratamento de perturbações ligadas à resistência à insulina e/ou hiper-insulinemia, que incluem, para além da diabetes, estados hiperandrogénicos, como síndroma do ovário poliquístico (Ibanez et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. £15: 3526-30, 2 000; Taylor A. E., Obstet. Gynecol. Clin. North. Am. 27: 583-95, 2000), doença da artéria coronária, como ateros-clerose e restenose vascular, e doença vascular periférica. Adicionalmente, os compostos da presente invenção também são úteis para o tratamento de inflamação e doenças imuno- 19 ΡΕ1360178 lógicas que incluem as mediadas por vias de sinalização ligadas a citoquinas pró-inflamatórias, como artrite reumatóide, esclerose múltipla, doença inflamatória do intestino, psoriase e dermatite de contacto e atópica.

Por "tratamento" pretende-se significar que os compostos da invenção são administrados numa quantidade que é pelo menos suficiente, por exemplo, para reduzir o nivel de glucose no sangue num paciente que sofre de perturbação hiperglicémica ou para inibir ou prevenir o desenvolvimento de respostas de citoquinas pró-inflamatórias ou afins num paciente que sofre de doença inflamatória ou imunológica. No caso da diabetes, o composto é habitualmente administrado na quantidade suficiente para reduzir o nível de glucose no sangue, nível de ácidos gordos livres, nível de colesterol e afins para uma gama aceitável, em que uma gama aceitável significa + ou - 10% e habitualmente + ou - 5% do nível médio normal de glucose no sangue e nível afim do sujeito, ou suficiente para atenuar os sintomas e/ou reduzir o risco de complicações associadas a níveis aumentados destes parâmetros. Uma variedade de sujeitos pode ser tratada com os presentes compostos para reduzir os níveis de glucose no sangue, como gado, animais selvagens ou raros, animais de estimação, bem como humanos. Os compostos podem ser administrados a um sujeito que sofre de perturbação hiperglicémica utilizando qualquer técnica de administração conveniente, incluindo intravenosa, intradér-mica, intramuscular, subcutânea, oral e afins. No entanto, é preferida a dosagem diária oral. A dosagem aplicada ao hospedeiro dependerá necessariamente da via pela qual é 20 ΡΕ1360178 administrado o composto, mas geralmente varia entre cerca de 0, 1 - 500 mg/kg de peso do corpo humano ou tipicamente desde cerca de 1 até 50 mg/kg de peso do corpo humano. Em geral, também são contemplados tipos de administração e dosagens semelhantes quando os compostos da invenção são utilizados para tratar doenças inflamatórias ou imunoló-gicas.

Os compostos desta invenção podem ser utilizados em formulações utilizando veículos farmacêuticos aceitáveis para administração entérica ou parentérica, tais como, por exemplo, água, álcool, gelatina, goma-arábica, lactose, amilase, estearato de magnésio, talco, óleos vegetais, polialquilenoglicol e afins. Os compostos podem ser formulados em forma sólida, por exemplo, na forma de pastilhas, cápsulas, drageias e supositórios, ou na forma líquida, por exemplo, soluções, suspensões e emulsões. As preparações também podem ser distribuídas por via transdérmica ou por aplicação tópica. O que se apresenta a seguir refere-se ao composto VIII, que é 5-(4-(4-(1-carbometoxi)-2-(3,5-dimetoxifenil)-etil)fenoxi)benzil)-2,4-tiazolidinodiona. O composto VIII não está de acordo com a invenção. O esquema IA abaixo ilustra a preparação do composto VIII, ao passo que o esquema 1B descreve mais genericamente um método de síntese que pode ser utilizado para sintetizar compostos de acordo com a invenção. ΡΕ1360178 21 ESQUEMA ΙΑ

ΡΕ1360178 22

ESQUEMA 1B

Referindo-nos ao Esquema IA, o aldeído (II) e ácido (III) podem ser condensados em anidrido acético e trietilamina para formar o ácido insaturado (IV). Após esterificação do ácido para dar origem ao Composto (V) , o grupo hidroxi fenólico é transformado num éter (VI) com p- 23 ΡΕ1360178 fluorobenzaldeído. Em seguida, o aldeído (VI) é condensado com a tiazolidinodiona para dar origem ao Composto (VII) e a ligação exo ao heterociclo do Composto (VII) é reduzida com hidrogénio para formar o Composto (VIII) objectivo.

Os passos do Esquema IA estão generalizados no Esquema 1B. As fórmulas gerais Ilb, Illb, IVb, VIb, Vllb e VlIIb correspondem, respectivamente, às fórmulas II, III, IV, VI, VII e VIII do Esquema IA.

Exemplo 1 (a) Síntese do ácido 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-(4-hidroxi-fenil) acrílico (Composto IV) A uma mistura de 3,5-dimetoxibenzaldeído (500 g, 3 mol) e ácido p-hidroxifenilacético (457 g, 3 mol) adicionou-se anidrido acético (1 L) e trietilamina (420 mL). Por aquecimento, esta mistura não homogénea torna-se homogénea a ~70°C. Depois de ser agitada a 130 - 140°C durante 6 horas, arrefeceu-se a mistura para a temperatura ambiente. À mistura reaccional adicionou-se HC1 concentrado (1 L) lentamente, durante 50 minutos, mantendo a temperatura entre 20 - 30°C. 0 precipitado amarelo claro obtido foi filtrado e enxaguado com água Dl no funil de Buchner. 0 sólido foi dissolvido em NaOH 3 N (5 L), foi agitado durante 1 hora e filtrado. O filtrado foi acidificado, mantendo a temperatura a 25 - 30°C, com HC1 concentrado para pH 1. 0 produto precipitado foi filtrado e lavado com 24 ΡΕ1360178 água, dando origem ao produto em bruto. 0 produto em bruto foi recristalizado a partir de Me0H-H20 e depois foi seco a 40°C durante 6 horas. Rendimento: sólido amarelo pálido 428 g (47%). 1HNMR (DMS0-d6) : δ 12,48 (largo, 1H), 9,42 (s, 1H) , 7,59 (s, 1H), 6,95 (d, J=8, 0 Hz, 2H), 6,76 (d, J=8,0 Hz, 2H) , 6,35 (t, J=2,2 Hz, 1H), 6,27 (d, J=2,2Hz, 2H) , 3,56 (s, 6H) . (b) Síntese do éster de metilo do ácido 3-(3,5-dimetoxi-fenil)-2-(4-hidroxifenil) acrílico (Composto V)

Adicionou-se metanol (3 L) ao Composto IV extensamente seco (427,5 g, 1,42 mol) sob árgon. A esta suspensão agitada adicionou-se ácido sulfúrico concentrado (100 mL) e aqueceu-se o sistema no refluxo durante 20 horas sob árgon. Evaporou-se o metanol sob pressão reduzida a 30°C. O resíduo foi recolhido em acetato de etilo (3 L) e foi lavado com água (2 x 1 L), NaHCCb aquoso saturado (pH 8, 2 x 1 L), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 1 L) . A camada orgânica foi seca em sulfato de magnésio anidro e foi filtrada e o solvente foi evaporado. O produto em bruto obtido foi extensamente seco sob alto vácuo e foi utilizado como tal no passo seguinte. Rendimento: sólido branco, 433,6 g (97%). 1HNMR (CDC13) : δ 7,72 (s, 1H), 7,06 (d, C-l II -J > <vD Hz, 2H), 6,77 (d, J=7,9 Hz, 2H), 6,33 CM CM II -P Hz, 1H) , 6,26 (d, J=2,2 Hz, 2H) , 5,74 (s, 1H) , 3,81 (s, 3H) , 3,60 (s, 6H) . 25 ΡΕ1360178 (c) Síntese do éster de metilo do ácido 3-(3,5-dimetoxi-fenil)-2-[4-(4-formilfenoxi)fenil] acrílico (Composto VI)

Sob árgon, dissolveu-se Composto V (433 g, 1,37 mol) em DMF seco (1,6 L) e adicionou-se a este sistema hidreto de sódio (60% em óleo, 60,4 g, 1,51 mol). À solução cor de laranja resultante adicionou-se p-fluorobenzaldeido (185 mL, 1,71 mol) e agueceu-se o sistema a 80°C durante 18 horas. A mistura reaccional foi arrefecida para a temperatura ambiente, foi diluída com acetato de etilo (3 L) e extraída com água (3 x 1 L), depois solução salina (1 x 1 L) . A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro e foi filtrada e o solvente foi evaporado. 0 resíduo foi suspenso em metanol (3 L) e foi agitado durante a noite. A suspensão foi arrefecida e depois foi filtrada. 0 sólido obtido foi seco sob vácuo a 40°C. Rendimento 445 g (77% ) . 1HNMR (CDC1 3) : δ 9,94 (s , 1H) , 7, 86 (d, J=8, 6 Hz, 2H) , 7, 8 0 (s, 1H) , 7, 28 (d, J=8 ,6 Hz, 2H) , 7,11 (d, J=2, 9 Hz, 2H) , 7,08 (d, J=2,9 Hz, 2H) , 6,36 (t , J=2,2 Hz, 1H) , 6,25 (d , J=2,2 Hz, 2H) , 3, 83 (s, 3H) , 3 , 63 (s, 6H). (d) Síntese do éster de metilo do ácido 3-(3,5-dimetoxi-fenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxotiazolidino-5-ilidenometil) fenoxi]fenil} acrílico (Composto VII) A uma suspensão agitada do Composto VI (352 g, 0,82 mol) em tolueno anidro (2,5 L) adicionaram-se sequencialmente 2, 4-tiazolidinodiona (98,6 g, 0,84 mol), ácido benzóico (134 g, 1,10 mol) e piperidina (107,4 g, 1,26 mol) 26 ΡΕ1360178 e o sistema foi aquecido à temperatura de refluxo com remoção continua de água, com o auxilio de um aparato Dean-Stark, durante 5 horas. Removeu-se tolueno (1 L) da mistura reaccional e colocou-se a mistura durante a noite numa sala fria a 4°C. O sólido separado foi removido por filtração e o liquido-mãe foi evaporado até à secura sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi novamente dissolvido numa mistura de MeOH - éter dietílico (1:1, 3 L) . Por repouso durante a noite a 4°C, a solução originou mais sólidos. O sólido foi filtrado; as duas fracções recolhidas foram reunidas e secas durante a noite num forno de vácuo a 40°C.

Rendimento : 362,5 g (86%). ΧΗ NMR (DMSO-dg) : δ 12,53 (largo, 1H ) , 7,78 (s, 1H), 7, 73 (s, 1H) , 7,63 (d, J=9, 2 Hz, 2H), 7,25 (d , J=9,2 Hz, 2H), 7,15 (d, J=4,3 Hz, 2H) , 7,12 (d, J=4,3 Hz , 2H), 6,42 (t, J=2,2 Hz, 1H), 6,27 (d, J=2,2

Hz, 2H), 3,73 (s, 3H) e 3,59 (s, 6H). (e) Síntese de 5-(4-(4-(1-carbometoxi)-2-(3,5-dimetoxi- fenil)etenil)fenoxi)benzil)-2,4-tiazolidinodiona,_também denominado éster de metilo do ácido 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxotiazolidino-5-il-metil)fenoxi]fenil} acrílico (Composto VIII) O composto VII (30 g, 58 mmol) foi dissolvido em dioxano morno (900 mL), foi transferido para uma garrafa de hidrogenação de 2 L e adicionou-se a este sistema 10% Pd-C (-50% água, 15 g) , tendo sido hidrogenado num aparato de hidrogenação Parr a 60 psi durante 24 horas. Passado este período de tempo adicionaram-se mais 15 g de Pd-C e deixou- 27 ΡΕ1360178 se continuar a hidrogenação durante mais 24 horas. 0 catalisador foi filtrado num leito de Celite e o solvente foi evaporado. 0 resíduo foi recolhido em acetonitrilo (500 mL) e foi adsorvido em sílica C-18 (50 g). O material adsorvido foi colocado no topo de uma coluna que continha sílica gel de fase reversa C-18 (400 g) . A coluna eluiu com CH3CN em H20 (45%, 2 L), CH3CN em H20 (50%, 2 L), CH3CN em H20 (55%, 2 L), para eluir as fracções indesejadas. Recolheram-se fracções com o início da eluição com 60% CH3CN em H20, para se obter o composto desejado. Misturaram-se as fracções com base na sua pureza de HPLC. Evaporou-se o acetonitrilo sob pressão reduzida. Removeu-se a água por liofilização.

Rendimento : 12 g ( 40%) . Sólido branco ; p. f. 126 - 128 °C. λΕ NMR (DMSO- d6) δ 12 ,01 (largo, 1H) , 7, , 73 (s, 1H) , 7, 28 (d, J=8, 6 Hz, 2H) , 7,19 (d, J=8,6 Hz, 2H ), 7,02 (d, J=8 , 6 Hz, 2H) , 6, 96 (d, J=8, 6 Hz, 2H), ( 5,40 (t , J= =2,2 Hz, 1H) , 6,27 (d, J=2,2 Hz, 2H) , 4,92 (dd, J =9,2 e 4,4 Hz, 1H) , 3, 73 (s, 3H) , 3,57 (s, 6H) , 3,37 (dd, J=14 ,8 e 4 , 3 Hz, 1H) e 3,12 (dd, J=14, 8 e 9, 4 Hz, 1H); IR (KBr) ^max 3200, 2 1950, 2850, 1700 , 160C ), 1. 500, 1350, 1150 e 850 crrf1 ; EIMS: m/ z , 518, [M-H]“ 265, 249 e 113.

Referindo-nos aos desenhos, administrou-se Composto VIII, numa única dose oral (50 mg/kg de peso do corpo), durante 15 dias a ratinhos machos db/db, como mostrado na FIG. IA. Observou-se uma redução substancial do nível de glucose no sangue. Não se observou aumento do peso 28 ΡΕ1360178 do corpo no grupo de tratamento em comparação com o controlo tratado com veículo sem o ingrediente activo, FIG. 1B. 0 composto foi administrado oralmente a ratinhos ob/ob numa única dose oral (50 mg/kg de peso do corpo) . Como mostrado na FIG. 2A, ocorreu uma diminuição de 62% do nível de glucose no sangue e, de modo semelhante aos ratinhos db/db, não se observou um aumento significativo do peso do corpo entre os grupos de controlo e tratamento, como mostrado na FIG. 2B. Isto contrasta com o tratamento de animais diabéticos com compostos do tipo tiazolidino-diona, que se sabe estarem associados a aumento do peso do corpo. Ver Okuno et ai., J. Clin. Invest., 101, 1354-1361 (1998), e Yoshioka et ai., Metabolism, _42, 75-80 (1993). Ao terminar o tratamento após o dia 15 em ambos os modelos observou-se um aumento do nível de glucose, como representado nas FIGs. 3A e 3B. A progressão no tempo do efeito do fármaco está apresentada na FIG. 4. A administração oral de uma única dose do composto a ratinhos db/db foi eficaz durante mais de 24 horas.

Também se mediram os níveis de triglicéridos. Os triglicéridos, que são ésteres de ácidos gordos e glicerol, não circulam livremente no plasma, mas estão ligados a proteínas e são transportados na forma de complexos macromoleculares denominados lipoproteínas. Mediram-se os triglicéridos pelo método enzimático descrito por McGowen et ai., 1983, com uma modificação para determinar os níveis de triglicéridos em ratinhos db/db e ob/ob. Observou-se uma 29 ΡΕ1360178 redução de 24% dos níveis de triglicéridos em ratinhos db/db (FIG. 5A) após 15 dias de tratamento com o composto e, em ratinhos ob/ob, ocorreu um decréscimo de 65% dos triglicéridos em comparação com o controlo (FIG. 6B) após tratamento durante 10 dias.

Os ácidos gordos livres (FFA) foram medidos de forma enzimática utilizando coenzima A na presença de acil-CoA sintase (Wako Chemicals, E.U.A.). Os níveis de ácidos gordos livres de ratinhos db/db e ob/ob tratados com o composto foram significativamente inferiores em comparação com os animais de controlo. Observou-se uma redução de 34% dos níveis de FFA em ratinhos db/db (FIG. 5B) após 15 dias de tratamento com o composto. Em ratinhos ob/ob, após 10 dias de tratamento, ocorreu uma diminuição de 33% de FFA comparativamente ao controlo (FIG. 6C). A percentagem de glico-hemoglobina (GHb) no sangue reflecte a concentração média de glucose no sangue. É uma medida do controlo diabético global e pode ser utilizada para monitorizar os níveis médios de glucose no sangue. A glicosilação da hemoglobina ocorre continuamente nos glóbulos vermelhos. Mas uma vez que a reacção é não enzimática e irreversível, a concentração de glico-hemoglobina numa célula reflecte os níveis médios de glucose no sangue observados pela célula durante a sua vida. Conduziu-se um ensaio utilizando cromatografia de afinidade com boronato, como descrito por Abraham et al., J. Lab. Clin. Med., 102, 187 (1983). Há um decréscimo de 30 ΡΕ1360178 0,7% do nível de GHb em ratinhos db/db (FIG. 5C) após 15 dias de tratamento com o composto, e em ratinhos ob/ob, após 14 dias de tratamento, ocorre uma diminuição de 1,3% (FIG. 6D) do nível de GHb em comparação com o controlo.

Mediu-se o nível de insulina no sangue por ELISA seguindo um protocolo padrão. Observou-se uma redução de 58% da insulina no soro em ratinhos ob/ob (FIG. 6A) após 10 dias de tratamento com o composto, demonstrando assim a sua capacidade para actuar como sensibilizador à insulina. A obesidade é considerada um factor de risco importante para várias doenças do adulto, como diabetes e doença cardíaca. A leptina, um produto do gene relacionado com a obesidade, foi identificada a partir da investigação de ratinhos ob/ob, onde a leptina está ausente devido a uma mutação desse gene (Zhiang et ai., Nature, 372, 425 (1994)). A leptina é uma proteína de cerca de 16 kDa que é expressa em tecido adiposo e que promove perda de peso por supressão do apetite e estimulação do metabolismo. Presentemente crê-se que a leptina desempenha um papel chave na síndroma da obesidade. Nos ratinhos db/db, de acordo com a experiência, mediu-se o nível de leptina por ELISA seguindo um protocolo padrão. Após 15 dias de tratamento com o composto observou-se um aumento de 23% (FIG. 5D) do nível de leptina no soro em comparação com o grupo de controlo.

As enzimas do fígado transaminase glutâmico oxa- 31 ΡΕ1360178 lacética/aspartato aminotransferase (AST/GOT) e transami-nase glutâmico pirúvica/alanina aminotransferase (ALT/GPT) foram avaliadas nos soros de ratinhos ob/ob após 21 dias de tratamento (oralmente, 50 mg/kg) com o composto de teste. O teste também foi conduzido utilizando troglitazona. Os níveis destas enzimas estão aumentados em vários tipos de perturbações hepáticas ou necrose do fígado. Como mostrado na FIG. 7A, o nível de AST nos ratinhos não estava aumentado em comparação com ratinhos não tratados ou com ratinhos tratados com troglitazona. De modo semelhante, a FIG. 7B mostra que o nível de ALT não aumentou em comparação com ratinhos não tratados ou ratinhos tratados com troglitazona.

Referindo-nos à FIG. 8, mediu-se a captação de glucose em adipócitos diferenciados 3T3-L1 após tratamento com o composto de teste. O ensaio foi conduzido de acordo com o método de Tafuri, Endocrinology, 137, 4706-4712 (1996). As células privadas de soro foram tratadas com o composto de teste durante 48 horas a diferentes concentrações, depois foram lavadas e incubadas em meio sem glucose durante 30 minutos a 37°C. Seguidamente adicionou-se 14C-desoxiglucose e monitorizou-se a captação durante 30 minutos com incubação. Após a lavagem, as células foram submetidas a lise (SDS 0,1%) e foram contadas. Como mostrado na FIG. 8, há um aumento de 3,5 até 4 vezes da captação de glucose às concentrações indicadas do composto de teste relativamente aos níveis basais. 32 ΡΕ1360178

Referindo-nos à FIG. 9, células RAW foram pré-incubadas com Composto VIII ou rosiglitazona (0,1, 1, 10, 50 ou 100 μΜ) durante 1 hora a 37°C em RPMI-1640 contendo FBS 10%. Passada 1 hora adicionou-se LPS (0,1 μρ/ιηΑ) e incubaram-se as células durante mais 6 horas. Em seguida, sobrenadante celular foi recolhido, separado em aliquotas e congelado a -70°C, e utilizou-se uma aliquota para determinar a concentração de TNF-alfa por ELISA. O Composto VIII foi melhor inibidor do TNF-alfa do que rosiglitazona.

Referindo-nos à FIG. 10, células RAW foram pré-incubadas com Composto VIII ou rosiglitazona (0,1, 1, 10, 50 ou 100 μΜ) durante 1 hora a 37°C em RPMI-1640 contendo FBS 10%. Passada 1 hora adicionou-se LPS (0,1 μg/mL) e incubaram-se as células durante mais 6 horas. Em seguida, sobrenadante celular foi recolhido, separado em aliquotas e congelado a -70°C, e utilizou-se uma aliquota para determinar a concentração de IL-6 por ELISA. O Composto VIII foi melhor inibidor de IL-6 do que rosiglitazona.

Referindo-nos à FIG. 11, células RAW foram pré-incubadas com Composto VIII ou rosiglitazona (0,1, 1, 10, 50 ou 100 μΜ) durante 1 hora a 37°C em RPMI-1640 contendo FBS 10%. Passada 1 hora adicionou-se LPS (0,1 μg/mL) e incubaram-se as células durante mais 6 horas. Em seguida, sobrenadante celular foi recolhido, separado em aliquotas e congelado a -70°C, e utilizou-se uma aliquota para determinar a concentração de IL-l-beta por ELISA. O Composto VIII inibiu a IL-l-beta melhor do que rosiglitazona. 33 ΡΕ1360178

Referindo-nos às FIGs. 12A e 12B, células RAW foram pré-incubadas com Composto VIII (12A) ou rosigli-tazona (12B) (0,1, 1, 10, 50 ou 100 μΜ) durante 1 hora a 37°C em RPMI-1640 contendo FBS 10%. Passada 1 hora adicio-nou-se LPS (0,1 μρ/πΛ) e incubaram-se as células durante mais 6 horas. Em seguida, sobrenadante celular foi recolhido, separado em alíquotas e congelado a -70°C, e utilizaram-se aliquotas para determinar a actividade de COX-1 e COX-2. O Composto VIII, mas não rosiglitazona, inibiu a actividade da COX-2 (medido por produção de PEG2 numa amostra de 50 μΐϋ) . Nenhum composto inibiu a actividade da COX-1. O factor de transcrição NF-kapaB coordena a activação de muitos genes envolvidos na resposta a cito-quinas pró-inflamatórias e, em consequência, desempenha um papel chave no desenvolvimento de doenças inflamatórias. O NF-kapaB é activado por fosforilação da proteína inibidora IkapaB. Para examinar o efeito do composto VIII na fosforilação estimulada por LPS da IkapaB, células RAW 264.7 foram pré-incubadas apenas com veículo, 15-desoxi-A12,14-prostaglandina J2 (3 μΜ) como controlo positivo, composto VIII (3, 10 ou 30 μΜ) ou rosiglitazona (3, 10 ou 30 μΜ) durante 1 hora a 37°C. Seguidamente, as células foram tratadas com ou sem LPS (10 ng/mL) mais IFN-gama (10 U/mL) durante 5 minutos ou 15 minutos a 37°C. As células foram submetidas a lise e os lisatos celulares (27 μg/via) foram separados por electroforese num gel de poliacrilamida 4-20%, foram corados numa membrana de nitrocelulose e sondados com anticorpo anti-fosfο-IkapaB. Os resultados 34 ΡΕ1360178 revelaram que o composto VIII, mas não rosiglitazona, exibiu inibição dependente da dose da fosforilação da IkapaB.

As Figuras 13A-D ilustram a supressão de artrite induzida pelo colagénio por tratamento com Composto VIII. A artrite foi induzida por administração intradérmica de colagénio (100 μg/ratinho) em adjuvante completo em ratinhos machos DBA/ILac com 7 semanas de idade. A imunização de reforço (100 μg/ratinho) em adjuvante incompleto foi administrada subcutaneamente no Dia 21. Dois dias depois, quando as pontuações de artrite estavam próximas de 1, dividiram-se os animais em dois grupos. Um grupo recebeu uma dose de 50 mg/kg por dia de Composto VIII oralmente durante 17 dias. O segundo grupo recebeu PEG 10% em água e foi utilizado como grupo tratado com veiculo. O peso do corpo (Figura 13Ά), pontuação Clínica (Figura 13B), Articulações afectadas (Figura 13C) e espessura da Pata (Figura 13D) foram monitorizados 24 horas após a administração do fármaco em diferentes intervalos de tempo. Como mostrado nas Figuras, os ratinhos tratados com Composto VIII exibiram pontuações clinicas, articulações afectadas e espessura da pata significativamente menores em comparação com o grupo tratado com veículo. Não se observou alteração do peso do corpo entre os grupos de veículo e tratamento. A encefalomielite alérgica experimental (EAE) é uma doença inflamatória desmielinizante autoimune do sistema nervoso central. A EAE exibe muitas das manifestações clínicas e patológicas da esclerose múltipla (MS) 35 ΡΕ1360178 humana e é um modelo animal para testar agentes terapêuticos potenciais para MS (Scolding et al., Prog. Neurobiol. 43: 143-73, 2000). A Figura 14 ilustra a supressão de EAE pelo Composto VIII. Induziu-se EAE activa em ratinhos SJL/J essencialmente de acordo com o método de Owens e Sriram (Neurol. Clin. , _13_: 51-73, 1995). Ratinhos não manipulados foram imunizados subcutaneamente com 400 μg cada de homogenato da espinal-medula de ratinho em adjuvante de Freund completo no dia 0 e dia 7. Em seguida, os ratinhos foram tratados uma vez por dia por injecção subcutânea de 50 μρ ou 200 μρ de Composto VIII ou apenas com veículo. A paralisia foi pontuada de acordo com a escala numérica indicada. Como evidenciado pela redução dramática da pontuação clinica apresentada na Figura 14, o tratamento com a dose de 200 μρ de Composto VIII foi altamente eficaz na melhoria de EAE.

Do exposto acima será evidente que os compostos de acordo com a presente invenção não só diminuem o nível de glucose no sangue, nível de triglicéridos, nível de ácidos gordos livres, glico-hemoglobina e insulina no soro, mas também aumentam o nível de leptina, não exibindo um aumento significativo do peso do corpo ou toxicidade para o fígado. Os compostos também inibem a produção de TNF-alfa, IL-6 e IL-Ιβ e a actividade da COX-2 in vitro e, como mostrado pelas Figuras 13A-13D e 14, os compostos podem ser utilizados para suprimir artrite e potencialmente para tratar esclerose múltipla, respectivamente. As propriedades demonstradas acima indicam que os compostos da invenção 36 ΡΕ1360178 devem ser úteis no tratamento de perturbações associadas à resistência à insulina, hiperlipidemia, doença da artéria coronária e doença vascular periférica e para o tratamento de inflamação, doenças inflamatórias, doenças imunológicas e cancro, especialmente as mediadas por citoquinas e ciclo-oxigenase.

Embora a invenção tenha sido exemplificada ante- riormente por referência à preparação e utilização do composto VIII, deve ser entendido que a invenção é de aplicacação mais ampla consistente com o âmbito dos compostos de fórmula I. Isto inclui, por exemplo, o composto VII, que não é apenas útil como intermediário para a preparação do composto VIII tal como mostrado mas também demonstra actividade biológica útil por si próprio, consistente com as actividades do composto VIII. A síntese de outros compostos de acordo com a invenção é ilustrada pelos exemplos seguintes:

Exemplo 2 Síntese do ácido 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxotiazolidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil} acrílico (Composto XVII) 0 Composto XVII, um metabolito do Composto VIII, pode ser preparado por hidrólise do composto VIII de acordo com o seguinte esquema reaccional. 37 ΡΕ1360178

A uma suspensão agitada e arrefecida para menos de 10°C de éster de metilo do ácido 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxotiazolidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}acrílico (composto VIII) em metanol (50 mL) adicionou-se hidróxido de sódio aquoso (2 N, 50 mL) e agitou-se o sistema durante 15 horas à temperatura ambiente. A solução amarelo pálido resultante foi arrefecida para 10°C e acidificada com HC1 aquoso (5%, 115 mL). O sólido separado foi filtrado e lavado com água (3 x 30 mL), foi recristalizado a partir de metanol e seco, dando origem a um produto caracterizado do modo seguinte: ΧΗ NMR (DMSO-de) δ 7,69 (s, 1H) , 7,28 (d, J=8,8 Hz, 2H) , 7,19 (d, J=8,8 Hz, 2H) , 7,02 (d, J=8,8 Hz, 2H) , 6,97 (d, J=8,8 Hz, 2H) , 6,41 (t, J=2,4 Hz, 1H) , 6,28 (d, J=2,4 Hz, 2H), 4,92 (dd, J=9,2 e 4,4 Hz, 1H), 3,58 (s, 6H) , 3,38 (dd, J=14,0 e 4,0 Hz, 1H) e 3,13 (dd, J=14,4 e 9,2 Hz, 1H).

Exemplo 3 Síntese de 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxo-tiazo-lidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}acrilamida (Composto XVIII) O Composto XVIII, que pode ser representado pela fórmula: ΡΕ1360178 38

k -H 8 ’ΐγ O-v-^ ./

. y foi preparado como se segue a partir do composto (XVII):

Um balão seco e limpo com uma barra de agitação foi carregado com o composto (XVII) (0,423 g, 0,837 mmol) e DMF seco (10 mL). Depois adicionou-se, com agitação, carbonildiimidazole (0,271 g, 1,67 mmol) e aqueceu-se a reacção para 60°C durante 1 hora enquanto era ventilada por intermédio de um borbulhador de óleo. Arrefeceu-se a mistura reaccional para 0°C e adicionou-se amoníaco 2 M em metanol (2,1 mL, 4,2 mmol). A reacção foi processada submetendo a mistura a partição com ácido cítrico 10% (10 mL), acetato de etilo (50 mL) e água (40 mL). Em seguida, a fase orgânica foi enxaguada sequencialmente com água (2 x 30 mL) e solução salina (1 x 20 mL) e foi seca com sulfato de magnésio anidro. A concentração dos compostos orgânicos deu origem ao produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel utilizando eluição com gradiente de acetato de etilo - hexanos (1:1) em ácido acético 1% até acetato de etilo - hexanos (3:2) em ácido acético 1%. A concentração das fracções apropriadas deu origem a 200 mg (47%) da amida primária branca-amarelo claro na forma de um sólido. Análise: 1H-NMR, 400 MHz (DMSO-de): δ 12,06 (largo, 1H) , 7,40 (s, 1H), 7,34 (largo, 1H), 7,27 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,18 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7,05 39 ΡΕ1360178 CM II Hz, 2H) , 6,98 (d, co II •~D r 4 Hz, 2H) , 6, 93 (largo, 1H), 6,36 (m, 1H) , 6,20 (s, 1H) , 6, 19 (s, 1H) , 4,91 (dd, C-| II o rn N 1H), 3,57 (s, 6H), 3,12 (dd, J= =9,2 Hz, 1H) .

Exemplo 4 Síntese de 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxo-tiazo-lidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}-N,N-dimetilacrilamida (Composto XIX) 0 Composto (XIX), representado pela fórmula:

o foi preparado do modo seguinte:

Um balão seco e limpo com uma barra de agitação foi carregado com o composto (XVII) (0,422 g, 0,835 mmol) e DMF seco (10 mL). Depois adicionou-se, com agitação, carbonildiimidazole (0,271 g, 1,67 mmol) e aqueceu-se a reacção para 60°C durante 1 hora enquanto era ventilada por intermédio de um borbulhador de óleo. Arrefeceu-se a mistura reaccional para 0°C e adicionou-se uma solução de dimetilamina 2 M em THF (2,1 mL, 4,2 mmol) . A reacção foi processada submetendo a mistura a partição com ácido cítrico 10% (10 mL), acetato de etilo (50 mL) e água (40 mL). Em seguida, a fase orgânica foi enxaguada sequencialmente com água (2 x 30 mL) e solução salina (1 x 20 mL) e 40 ΡΕ1360178 foi seca com sulfato de magnésio anidro. A concentração dos compostos orgânicos deu origem ao produto em bruto. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel utilizando eluição com acetato de etilo - hexanos (3:2) em ácido acético 1%. A concentração das fracções deu origem a 381 mg (86%) da dimetilamida terciária quase branca na forma de um sólido. Análise: 1H-NMR, 400 MHz (DMSO-d6): δ 11, Í )7 (largo, i h; >, 7,29 (d, co II •~D 8 Hz , 2H) , . 7,27 (d, CO II •~0 Hz, 2H), 6,99 (d, J=8,8 Hz), 6,95 (d, J=8, 8 Hz, 2H), 6,57 (s, 1H), 6,35 (m, 1H), 6,29 (s, 1H), 6,28 (S, 1H), 4, 91 (dd, . J=4,4 Hz, 1H) , 3,58 (s, 6H) , 3,12 (dd, J=9,2 Hz, 1H) , 3,05 (largo, 3H), 2,91 (s, 3H).

Exemplo 5 Síntese de 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxo-tiazo-lidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}-N-metoxi-N-metil-acrilamida (Composto XX) O Composto (XX) foi preparado do modo seguinte:

Um balão seco e limpo com uma barra de agitação foi carregado com o composto (XVII) (0,450 g, 0,890 mmol) e DMF seco (10 mL). Depois adicionou-se, com agitação, carbo-nildiimidazole (0,29 g, 1,78 mmol) e aqueceu-se a reacção para 60°C durante 1 hora enquanto era ventilada por intermédio de um borbulhador de óleo. Arrefeceu-se a mistura reaccional para 0°C, adicionou-se cloridrato de N-metil-iV-metoxi-hidroxilamina (0,43 4 g, 4,45 mmol) em água (10 mL) e trietilamina (0,62 mL) e agitou-se o sistema durante a noite. A reacção foi processada submetendo a mistura a 41 ΡΕ1360178 partição com ácido cítrico 10% (10 mL) , acetato de etilo (50 mL) e água (40 mL) . Em seguida, a fase orgânica foi enxaguada sequencialmente com água (2 x 30 mL) e solução salina (1 x 20 mL) e foi seca com sulfato de magnésio anidro. A concentração dos compostos orgânicos deu origem ao produto em bruto. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel utilizando eluição com acetato de etilo - clorofórmio (1:5). A concentração das fracções apropriadas deu origem a 400 mg (82%) da N-metil-N-meto-xiamida terciária quase branca na forma de um sólido. Aná- lise : 1H-NMR, 400 MHz (DMSO- d6 ): δ 12, 06 (largo, \—1 7, 27 (d, J=9,2 Hz, 2H) , 7, 26 (d, J= =8, 8 Hz, 2H) , 7, 00 (d, J=8 ,8 Hz) , 6,95 (d, J=8, 4 Hz, 2H) r 6,57 (s , 1H) , 6,35 (m, 1H) , 6,29 (s, 1H) , 6,28 (s, 1H) , 4 ,91 (dd, J=4, 4 Hz, 1H) , 3, 58 (s, 6H) , 3,12 (dd, J=9, 2 Hz r 1H) , 3, 05 (largo, 3H) , 2, 91 (s, 3H) . 0 Composto (XX) pode ser apresentado estruturalmente do modo seguinte: Ν'» 8 J 1. o

Lisboa, 3 de Março de 2009

Claims (11)

1. ΡΕ1360178 1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto seleccionado de entre: 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxotiazolidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}acrilamida, 3-(3,5-dimetoxifenil)-2-{4-[4-(2,4-dioxotiazolidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}-N,N-dimetilacrilamida, 3-(3,5-dimetoxifenil)—2—{4—[4—(2,4-dioxotiazolidino-5-ilmetil)fenoxi]fenil}-N-metoxi-N-metilacrilamida.
2. 2. Composição farmacêutica para o tratamento de diabetes, que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, ou mistura de compostos, de acordo com a Reivindicação 1 num transportador fisiologicamente aceitável.
3. 3. Utilização de um composto de acordo com a Reivindicação 1 na preparação de um medicamento para o tratamento de diabetes.
4. 4. Utilização de um composto de acordo com a Reivindicação 1 na preparação de um medicamento para o tratamento de inflamação, artrite ou doença inflamatória.
5. 5. Composição farmacêutica para o tratamento de inflamação, artrite ou doença inflamatória, que compreende 2 ΡΕ1360178 uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, ou mistura de compostos, de acordo com a Reivindicação 1 num transportador fisiologicamente aceitável.
6. 6. Utilização de um composto de acordo com a Reivindicação 1 na preparação de um medicamento para a inibição do TNF-alfa, IL-1, IL-6 ou COX-2.
7. 7. Composição farmacêutica para a inibição do TNF-alfa, IL-1, IL-6 ou COX-2, que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, ou mistura de compostos, de acordo com a Reivindicação 1 num transportador fisiologicamente aceitável.
8. 8. Utilização de um composto de acordo com a Reivindicação 1 na preparação de um medicamento para o tratamento de esclerose múltipla.
9. 9. Composição farmacêutica para o tratamento de esclerose múltipla, que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, ou mistura de compostos, de acordo com a Reivindicação 1 num transportador fisiolo-gicamente aceitável.
10. 10 . Utilização de um composto de acordo com a Reivindicação 1 na preparação de um medicamento para o tratamento de cancro ou doença cardíaca. 3 ΡΕ1360178 o tratamento de uma quantidade ou mistura de 1 num trans-
11. 11. Composição farmacêutica para cancro ou doença cardiaca, que compreende terapeuticamente eficaz de um composto, compostos, de acordo com a Reivindicação portador fisiologicamente aceitável. Lisboa, 3 de Março de 2009