[go: up one dir, main page]

PL212750B1 - Complex genistein derived C-glycosides with cytotoxic and antiproliferative activity and the application thereof - Google Patents

Complex genistein derived C-glycosides with cytotoxic and antiproliferative activity and the application thereof

Info

Publication number
PL212750B1
PL212750B1 PL390766A PL39076610A PL212750B1 PL 212750 B1 PL212750 B1 PL 212750B1 PL 390766 A PL390766 A PL 390766A PL 39076610 A PL39076610 A PL 39076610A PL 212750 B1 PL212750 B1 PL 212750B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
genistein
complex
cytotoxic
glycosides
derived
Prior art date
Application number
PL390766A
Other languages
Polish (pl)
Other versions
PL390766A1 (en
Inventor
Wieslaw Szeja
Piotr Świerk
Maciej Chrubasik
Grzegorz Grynkiewicz
Zdzisław Krawczyk
Aleksandra Rusin
Joanna Wietrzyk
Maria Świtalska
Original Assignee
Politechnika Slaska Im Wincent
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Politechnika Slaska Im Wincent filed Critical Politechnika Slaska Im Wincent
Priority to PL390766A priority Critical patent/PL212750B1/en
Publication of PL390766A1 publication Critical patent/PL390766A1/en
Publication of PL212750B1 publication Critical patent/PL212750B1/en

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku są złożone C-glikozydy pochodne genisteiny o działaniu cytotoksycznym i antyproliferacyjnym.The subject of the invention is complex genistein C-glycosides with cytotoxic and antiproliferative activity.

Źródłem wielu substancji biologicznie aktywnych są rośliny. Dużo uwagi poświęca się właściwościom flawonoidów, wtórnych metabolitów roślinnych. Dobrze udokumentowano ich aktywność przeciwnowotworową, antywirusową, przeciwbakteryjną właściwości przeciw utleniające. Naturalnymi postaciami izoflawonoidów w roślinach są ich pochodne glikozydowe oraz ich estry z niższymi kwasami karboksylowymi, zwłaszcza malonowym i octowym. Bogatym źródłem izoflawonów są nasiona roślin motylkowatych (Legitminosae. Fubaceae), zwłaszcza nasiona soi (Glicynę max. Merill). Genisteina, należąca do fitoestrogenowych izoflawonoidów jest uważana za perspektywiczny czynnik chemoprewencyjny i lek komplementarny w chorobach układu krążenia i nowotworowych. Na podstawie wieloletnich badań stwierdzono zróżnicowanie biologicznego działania genisteiny. [L.L.Marchand, Biomem. Pharmacother. 2002, 56, 296-201: R.A.Dixon. D-Ferreira, Phytochemistry 2002, 60, 205-211 i literatura cytowana]. Określono szereg celów molekularnych działania genisteiny ale zasadnicze oddziaływania decydujące o aktywności przeciwnowotworowej to inhibicja kinaz tyrozynowych, topoizomerazy II, blokowanie onkogenów.Plants are the source of many biologically active substances. Much attention is paid to the properties of flavonoids, secondary plant metabolites. Their antitumor, antiviral, antimicrobial and antioxidant properties have been well documented. The natural forms of isoflavonoids in plants are their glycoside derivatives and their esters with lower carboxylic acids, especially malonic and acetic acids. The seeds of legumes (Legitminosae. Fubaceae), especially soybeans (Glycine max. Merill) are a rich source of isoflavones. Genistein, belonging to the phytoestrogenic isoflavonoids, is considered to be a prospective chemopreventive agent and a complementary drug in cardiovascular and neoplastic diseases. Based on many years of research, the biological activity of genistein has been diversified. [L.L.Marchand, Biomem. Pharmacother. 2002, 56, 296-201: R.A. Dixon. D-Ferreira, Phytochemistry 2002, 60, 205-211 and references cited]. A number of molecular targets of genistein action have been determined, but the main influences determining the antitumor activity are the inhibition of tyrosine kinases, topoisomerase II, and blockade of oncogenes.

Lipofilowe glikozydy izoflawonów są znacznie bardziej aktywnymi związkami o działaniu cytotoksycznym od niepodstawionych połączeń z tej grupy [K. Polkowski, J. Popiołkiewicz, P. Krzeczyński, J. Ramza,. W. Pucko, O. Zegrocka-Stendel, J. Boryski, J. S. Skierski, A. P. Mazurek, G. Grynkiewicz; Cancer Lett., 2004, 203, 59-69. patent PL nr 205635]. Szczególnie aktywny był produkt glikozylacji genisteiny per-O-acetylową pochodną laktalu oznaczony symbolem G-21. Z kolei według zgłoszenia patentowego P 384578 aktywność przeciwnowotworową wykazują glikokoniugaty zawierające resztę acylowanego cukru 2,3-nienasyconego otrzymane w reakcji glikozylacji 7-O-hydroksyalkilowych pochodnych genisteiny. Wykazują one działanie cytotoksyczne i cytostatyczne w odniesieniu do szeregu linii komórek nowotworowych przy stężeniu znacznie niższym niż genisteina. Z uwagi na obecność wiązania O-glikozylowego otrzymane połączenia ulegają hydrolizie działaniem glikozydaz, co obniża ich biodostępność. Poszukując połączeń biomimetycznych zwrócono uwagę na glikokoniugaty w których cukier połączony jest z linkerem wiązaniem C-glikozydowym odpornym na działanie enzymów hydrolitycznych. Związki otrzymano w reakcji z C-glikozydów pochodnych acylowanych cukrów z 7-O-allilo-genisteiną. Otrzymane połączenia hamują proliferację komórek nowotworowych oraz progresję guza w badaniach na zwierzętach.Lipophilic isoflavones glycosides are much more active compounds with cytotoxic activity than unsubstituted compounds from this group [K. Polkowski, J. Popiołkiewicz, P. Krzeczyński, J. Ramza. W. Pucko, O. Zegrocka-Stendel, J. Boryski, J. S. Skierski, A. P. Mazurek, G. Grynkiewicz; Cancer Lett., 2004, 203, 59-69. PL patent No. 205 635]. The glycosylation product of genistein per-O-acetyl derivative of lactal, designated G-21, was particularly active. In turn, according to the patent application P 384578, anti-tumor activity is demonstrated by glycoconjugates containing an acylated 2,3-unsaturated sugar residue obtained in the glycosylation reaction of 7-O-hydroxyalkyl genistein derivatives. They exhibit cytotoxic and cytostatic activity against a number of tumor cell lines at a concentration much lower than that of genistein. Due to the presence of an O-glycosyl bond, the obtained connections are hydrolyzed by the action of glycosidases, which reduces their bioavailability. Searching for biomimetic connections, attention was paid to glycoconjugates in which sugar is linked to a linker by a C-glycosidic bond resistant to the action of hydrolytic enzymes. Compounds were prepared by reaction of acylated sugar C-glycosides with 7-O-allyl-genistein. The resulting combinations inhibit the proliferation of neoplastic cells and tumor progression in animal studies.

Złożone C-glikozydy według wynalazku o strukturze przedstawionej wzorem 1, gdzie jednostka cukrowa którą stanowi per-O-acylowany mono- di- lub trisacharyd, 2,3-nienasycony mono-, di-, lub trisacharyd połączona jest wiązaniem C-glikozydowym z łącznikiem R zawierający od dwu do dziesięciu atomów węgla w którym grupa funkcyjna A, to wiązanie podwójne, a łącznik związany jest wiązaniem 7-O-eterowym z genisteiną.The complex C-glycosides of the invention having the structure represented by formula 1, wherein a sugar unit which is a per-O-acylated mono- di- or trisaccharide, 2,3-unsaturated mono-, di-, or trisaccharide is linked by a C-glycosidic linkage to a linker R containing from two to ten carbon atoms in which the functional group A is a double bond and the linker is connected by a 7-O-ether bond with genistein.

W toku badań nieoczekiwanie stwierdzono, że glikokoniugaty pochodne genisteiny powodują znaczące zahamowanie proliferacji komórek nowotworowych in vitro, oraz spowolnienie wzrostu guza nowotworowego in vivo w badaniach na myszach, w związku z czym mogą znaleźć zastosowanie w leczeniu chorób nowotworowych.In the course of the research, it was surprisingly found that genistein-derivative glycoconjugates significantly inhibit the proliferation of neoplastic cells in vitro, and slow the growth of neoplastic cells in vivo in mice, and therefore may find application in the treatment of neoplastic diseases.

Niżej podane przykłady ilustrują wynalazek.The following examples illustrate the invention.

PL 212 750 B1PL 212 750 B1

P r z y k ł a d 1P r z k ł a d 1

Otrzymywanie 7-O-[3-(4-O-acetylo-2,3,6-trideoksy-a-L-erytro-heks-2-enopyranosyl)-propylo ge-Preparation of 7-O- [3- (4-O-acetyl-2,3,6-trideoxy-α-L-erythro-hex-2-enopyranosyl) -propyl ge-

Schemat 1. Otrzymywanie C-glikokoniugatu przez alkilowanie genisteiny.Scheme 1. Preparation of C-glycoconjugate by alkylation of genistein.

Mieszaninę C-glikozydu (1 mmol, 277 mg), soli tetrabutyloamoniowej genisteiny (1,05 mmol, 537 mg) DMF (4 ml) ogrzewano w temperaturze 45-50°C do momentu całkowitego rozpuszczenia soli (około 4 godzin). Po zakończeniu reakcji mieszaninę reakcyjną wlano do wody i ekstrahowano chloroformem. Ekstrakt suszono siarczanem sodowym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem w wyparce rotacyjnej, zaś pozostałość oczyszczano metodą chromatografii kolumnowej (eluent: chlorek metylenu-aceton (50:1 - 30:1) Uzyskano 429 mg produktu (92% wydajności) w postaci białych kryształów.A mixture of C-glycoside (1 mmol, 277 mg), genistein tetrabutylammonium salt (1.05 mmol, 537 mg) DMF (4 ml) was heated at 45-50 ° C until the salt was completely dissolved (approximately 4 hours). After completion of the reaction, the reaction mixture was poured into water, followed by extraction with chloroform. The extract was dried over sodium sulfate, concentrated under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue was purified by column chromatography (eluent: methylene chloride-acetone (50: 1 - 30: 1). 429 mg of the product (92% yield) were obtained as white crystals.

1H NMR (CDCl3, 600 MHz): δ (ppm) 1,27 (d, 3H, J=6,6 CH3 ram.), 1,68-2,05 (m, 4H, CH2CH2), 2,10 (s, 3H, CO-CH3), 3,91 (dq, 1H, J=6,6, J=4,6 H-5), 3,95 (t, 2H, J=6,1, OCH2), 4,24 (m, 1H, H-1), 4,91 (m, 1H, H-4), 5,78 (ddd, 1H, J=10,3, J=3,6, J=2,0 H-3), 5,94 (ddd, 1H, J=10,3, J=10,3, J=2,1, J=1,1 H-2), 6,29 (s, 1H, 4'-OH), 6,37 (dd, 2H, H-6g, H-8g, J=7,8, J=2,4), 6,84 (d, 2H, Η-3'g, Η-5'g, J=8,7), 7,34 (d, 2H, Η-2'g, Η-6'g ,1=8,7), 7,84 (s, 1H, H-2g), 12,80 (s, 1H, 5g-OH). 1 H NMR (CDCl3, 600 MHz): δ (ppm) 1.27 (d, 3H, J = 6.6 CH3 frames.), 1,68-2,05 (m, 4H, CH2CH2), 2.10 (s, 3H, CO-CH3), 3.91 (dq, 1H, J = 6.6, J = 4.6 H-5), 3.95 (t, 2H, J = 6.1, OCH2) , 4.24 (m, 1H, H-1), 4.91 (m, 1H, H-4), 5.78 (ddd, 1H, J = 10.3, J = 3.6, J = 2 , 0 H-3), 5.94 (ddd, 1H, J = 10.3, J = 10.3, J = 2.1, J = 1.1 H-2), 6.29 (s, 1H , 4'-OH), 6.37 (dd, 2H, H-6g, H-8g, J = 7.8, J = 2.4), 6.84 (d, 2H, Η-3'g, Η-5'g, J = 8.7), 7.34 (d, 2H, Η-2'g, Η-6'g, 1 = 8.7), 7.84 (s, 1H, H- 2g), 12.80 (s, 1H, 5g-OH).

13C NMR (CDCl3): δ(ppm) 16,82(^3^, 21,19(CH3CO), 25,23(CH?CH?CH9), 29,91(CH?CH2CH9), 68,24(C-5), 68,72(CH3O), 69,53(C-4), 69,55(C-1), 92,82(C-8g), 98,64(C-6g), 106,12(C-4a), 115,67 (C-3'g, C-5'g), 122,52(C-1'g) 122,85(C-3), 123,71(C-3g), 130,22(C-2'g, C-6'g) 133,82(C-2), 152,80 (C-2g), 156,26(C-4'g), 157,94(C-8a), 162,50(C-5g), 164,99(C-7g) 171,00(C=O), 180,94(C-4g) 13 C NMR (CDCl3): δ (ppm) 16.82 (^ 3 ^, 21.19 (CH 3 CO), 25.23 (CH? CH? CH9), 29.91 (CH? CH2CH9), 68, 24 (C-5), 68.72 (CH 3 O), 69.53 (C-4), 69.55 (C-1), 92.82 (C-8g), 98.64 (C-6g ), 106.12 (C-4a), 115.67 (C-3′g, C-5′g), 122.52 (C-1′g) 122.85 (C-3), 123.71 (C-3g), 130.22 (C-2′g, C-6′g) 133.82 (C-2), 152.80 (C-2g), 156.26 (C-4′g) , 157.94 (C-8a), 162.50 (C-5g), 164.99 (C-7g) 171.00 (C = O), 180.94 (C-4g)

PL 212 750 B1PL 212 750 B1

P r z y k ł a d 2.P r z k ł a d 2.

Otrzymywanie 7'-O-(4''-(2,3,4,6-tetra-O-acetylo-glukopiranozyIo)-but-2-en-1yl)-genisteiny.(C2)Preparation of 7'-O- (4 '' - (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-glucopyranosyl) -but-2-en-1-yl) -genistein. (C2)

i) CH2CI2, kompleks Grubbsa, 40° Ci) CH 2 Cl 2 , Grubbs complex, 40 ° C

Schemat 2. Otrzymywanie glikokoniugatu w reakcji metatezyScheme 2. Preparation of glycoconjugate by metathesis reaction

Przy gotowanie katalizatora kompleksu Grubbsa w parafinie:When cooking the Grubbs complex catalyst in paraffin:

Parafinę (1,385 g) oraz kompleks Grubbsa (0,112 g; 0,1361 mmol) naważono do kolbki którą następnie zamknięto za pomocą septy. Wypompowano powietrze (obniżono ciśnienie do około 50 mmHg) i wprowadzono argon - operację powtórzono trzy razy. Kolbkę umieszczono na łaźni ultradźwiękowej, ogrzanej do około 60°C, co spowodowało stopienie parafiny i homogenizację całego układu.Paraffin (1.385 g) and Grubbs complex (0.112 g; 0.1361 mmol) were weighed into the flask which was then sealed with a septum. Air was pumped out (pressure decreased to about 50 mmHg) and argon was introduced - this operation was repeated three times. The flask was placed in an ultrasonic bath heated to approximately 60 ° C, which melted the paraffin and homogenized the entire system.

Po ochłodzeniu otrzymano brązowy wosk, który przechowywano w temperaturze pokojowej w atmosferze powietrza. Nie zaobserwowano utraty właściwości katalitycznvch tak zabezpieczonego kompleksu Grubbsa po 6 miesiącach.Upon cooling, a brown wax was obtained which was stored at room temperature under an air atmosphere. No loss of the catalytic properties of the so protected Grubbs complex was observed after 6 months.

Stosowane stężenie kompleksu Grubbsa w parafinie: 0,098 mmol / 1g mieszanin)The used concentration of Grubbs complex in paraffin: 0.098 mmol / 1g of mixtures)

Synteza 7'-O-(4''-(2,3,4,6-tetra-O-acetylo-glukopiranozylo)-but-2-en-1-yl)-genisteiny:Synthesis of 7'-O- (4 '' - (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-glucopyranosyl) -but-2-en-1-yl) -genistein:

1-allilo-1-deoksy-2,3,4,6-tetra-O-acetylo-D-glukopiranozyd, (84 mg; 0,226 mmola) oraz 7-O-allilo-genisteinę (127 mg, 0,41 mmol; 1,8 eq) naważono do kolbki i rozpuszczono w dichlorometanie (10 cm3). Kompleks Grubbsa w parafinie (55 mg; 0,0054 mmola; 0,024eq) umocowano na wewnętrznej ściance chłodnicy zwrotnej, którą zamontowano na kolbkę zawierającą roztwór z reagentami. Całość zamknięto za pomocą septy. Wypompowano powietrze (obniżono ciśnienie do około 50 mmHg) i wprowadzono argon - operację powtórzono trzy razy. Mieszaninę ogrzewano na łaźni wodne). Reakcja rozpoczęła się, gdy kompleks Grubbsa w parafinie został spłukany przez wrzący rozpuszczalnik z chłodnicy zwrotnej. Po 3 godzinach, ochłodzono mieszaninę do temperatury pokojowej. Odsączono osad homodimeru, przemyto na sączku chlorkiem metylenu. Połączone przesącze zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem w wyparce rotacyjnej. Otrzymano 70 mg kremowego ciała stałego w postaci mieszanin) homodimerów cukru i glikokoniugatów genisteiny. Składniki mieszaniny rozdzielono metodą chromatografii kolumnowej. Układy eluujące: (heksan: wydzielono parafinę), (heksan : octan etylu 5 : 1 v/v, wydzielono substraty), (heksan : octan etyIu 2 : 1 wydzielono produkty reakcji w następującej kolejności: glikokoniugaty genisteiny (64 mg, wydajność 43% mieszanina izomerów E : Z = 2,5 : 1) oraz homodimer cukrowy (6 mg, wydajność 8%).1-allyl-1-deoxy-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-D-glucopyranoside, (84 mg; 0.226 mmol) and 7-O-allyl-genistein (127 mg, 0.41 mmol; 1.8 eq) was weighed into a flask and dissolved in dichloromethane (10 cm 3 ). The Grubbs complex in paraffin (55 mg; 0.0054 mmol; 0.024eq) was attached to the inner wall of a reflux condenser which was mounted on a flask containing the reagent solution. Everything was closed with a septum. Air was pumped out (pressure decreased to about 50 mmHg) and argon was introduced - this operation was repeated three times. The mixture was heated in a water bath. The reaction commenced when the Grubbs paraffin complex was washed away by the boiling solvent in the reflux condenser. After 3 hours, cool the mixture to room temperature. The homodimer precipitate was filtered off, washed on the filter with methylene chloride. The combined filtrates were concentrated under reduced pressure on a rotary evaporator. 70 mg of a cream solid were obtained in the form of mixtures of sugar homodimers and genistein glycoconjugates. The components of the mixture were separated by column chromatography. Elution systems: (hexane: paraffin isolated), (hexane: ethyl acetate 5: 1 v / v, substrates isolated), (hexane: ethyl acetate 2: 1 isolated reaction products in the following order: genistein glycoconjugates (64 mg, 43% yield) mixture of E: Z isomers = 2.5: 1) and sugar homodimer (6 mg, 8% yield).

PL 212 750 B1PL 212 750 B1

E izomer)E isomer)

7'-O-(1-C-(2.3.4.6-tetra-O-acetylo-a-D-glukopiranozylo)-but-2-en-4'-ylo)-genisteina7'-O- (1-C- (2.3.4.6-tetra-O-acetyl-α-D-glucopyranosyl) -but-2-en-4'-yl) -genistine

!H NMR (600 MHz, DMSO-D6) δ ppm: 12.94 (OH-5 ; s ; 1H ) 9.60 ( OH-4” ; s ; 1H ) 8.39 ( H-2' ;s;1H ) 7.39 (H-2 , H-6 ; d ; J, ,·.Ι2·, is-u = 8.8 ; 2H ) 6.83 ( H-3, H-5 ; d ; J,2·. π· μ.is = 8.8 ; 2H ) 6.65 ( H-8' ; d ; J5-.7· = 2.4 ; 1H ) 6.40 ( H-6' ; d ; Jy .s- = 2.4 ; 1H ) 5.87 ( H-3' ; dt ; J3-.2· = 14.6 ; J3 -4- = 5.4 x 2 ; 1H ) 5.81 ( H-2'” ; ddd ; J2-.3·· = 14.6 ; J2”.1L·· = 6.8 ; J2··., -a = 6.3 ; 1H ) 5.30 ( H-3 ; dd ; J3.2 = 8.8 ; J3.4 = 8.8 ; 1H ) 4.91 ( H-2 ; dd ; J2.3 = 8.8 ; J2., = 5.9 ; 1H ) 4.86 ( H-4 ; dd ; J4.3 = 9.1 ; J4.5 = 9.1 ; 1H ) 4.64 ( H-4” ; d ; J4 ,3 = 5.4 ; 2H ) 4.21-4.13 ( H-l, H-6a ; m ; 2H ) 4.00-3.93 ( H-5, H-6b ; m ; 2H ) 2.71 ( H-l a ; m ; J, a.,-b = 15.0 ; J, a-2 = 10-9 ; Jra-i = 7.6 ; 1H ) 2.32 ( H-l b ; m ; 1H ) 2.03; 2.00; 1.99; 1.98 ( CH3- ; 12H ) l3C NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ ppm: ! H NMR (600 MHz, DMSO-D6) δ ppm: 12.94 (OH-5; s; 1H) 9.60 (OH-4 ";s; 1H) 8.39 (H-2 ';s; 1H) 7.39 (H-2 , H-6; d; J ,, Ι2 , is-u = 8.8; 2H) 6.83 (H-3, H-5; d; J, 2. Πμ.is = 8.8; 2H) 6.65 (H-8 ';d; J 5 -. 7 · = 2.4; 1H) 6.40 (H-6';d; Jy. S- = 2.4; 1H) 5.87 (H-3 ';dt; J 3 - . 2 · = 14.6; J 3 - 4 - = 5.4 x 2; 1H) 5.81 (H-2 "";ddd; J 2 -. 3 ·· = 14.6; J 2 ". 1L ·· = 6.8; J 2 ··., - a = 6.3, 1 H) 5.30 (H-3; dd, J 3. 2 = 8.8, J 3. 4 = 8.8, 1 H) 4.91 (H-2; dd, J 2. 3 = 8.8; J 2. = 5.9, 1 H) 4.86 (H-4, dd, J 4. 3 = 9.1, J 4. 5 = 9.1, 1 H) 4.64 (H-4 ', d, J 4, 3 = 5.4, 2H ) 4.21-4.13 (Hl, H-6a; m; 2H) 4.00-3.93 (H-5, H-6b; m; 2H) 2.71 (Hl a; m; J, a ., - b = 15.0; J, a-2 = 10-9, Jr. from a = 7.6, 1 H) 2.32 (Hl b, m, 1 H) 2.03; 2.00; 1.99; 1.98 (CH 3 -; 12H) l3 C NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ ppm:

180.37 ( C-4' ) 170-169 (C=O x 4, C-6' ) 164.12 ( C-5' ) 161.74 ( C-4 ) 157.49 ( C-9' ) 154.28 ( C-2' ) 130.67 ( C-2' ) 130.13 ( C-2, C-6 ) 126.79 ( C-3’ ) 122.51 ( C3' ) 121.04 ( C-1 ) 115.08 (C-3”, C-5” ) 105.42 ( C-10' ) 98.49 ( C-8' ) 92.96 ( C-6' ) 71.13 ( C-1 ) 69.81 ( C-2 ) 69.46 ( C-3 ) 68.38 ( C-4, C-5 ) 68.79 (C-4”’ )61.80 (C-6 )28.42 (C-1' ) 20.45 ( CH3- x 4 )180.37 (C-4 ') 170-169 (C = O x 4, C-6') 164.12 (C-5 ') 161.74 (C-4) 157.49 (C-9') 154.28 (C-2 ') 130.67 (C-2 ') 130.13 (C-2, C-6) 126.79 (C-3') 122.51 (C3 ') 121.04 (C-1) 115.08 (C-3 ”, C-5”) 105.42 (C- 10 ') 98.49 (C-8') 92.96 (C-6 ') 71.13 (C-1) 69.81 (C-2) 69.46 (C-3) 68.38 (C-4, C-5) 68.79 (C-4 ”') 61.80 (C-6) 28.42 (C-1') 20.45 (CH 3 - x 4)

Izomer Z *H NMR (600 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12.96 (OH-5' ; s ; 1H ) 9.60 ( OH-4 ; s ; 1H ; zakryty ) 8.40 ( H-2' ; s ; 1H ) 7.39 (H-2 , H-6” ; 2H ; zakryty) 6.83 (H-3”, H-5 ; 2H ; zakryty ) 6.69 ( H-8' ; d ; J5-.7- = 2.35 ; 1H ) 6.45 ( H-6' ; d ; J7 .5· = 2.35 ; 1H ) 5.76 ( H-3' ; dt ; J3 -.2·· = 10.50 ; J3-.4 = 5.40 x 2 ; 1H ) 5.63 ( H-2' ; ddd ; J2- .3- = 10.50 ; J2-., b = 6.80 ; J2-.ra = 6.30 ; 1H ) 5.37 ( H-3 ; dd ; J3.2 = 9.10 ; J3.4 = 9.10 ; 1H ) 4.94 ( H-2 ; dd ; J2.3 = 9.10 ; J2., = 5.87 ; 1H ) 4.86 ( H-4 ; 1H ; zakryty ) 4.80 ( H-4' ; d ; J4-.3- = 5.40 ; 2H ) 4.21-4.13 ( H-l, H-6a ; m ; 2H ) 4.00-3.93 ( H-5, H-6b ; m ; 2H ) 2.82 ( H-l a ; m ; J,· a., b = 15.26 ; Ji a-2” = 9.39 ; J,· a-i = 9.39 ; 1H ) 2.38 ( H-l'b ; m ; 1H ) 2.02; 2.01; 1.99; 1.98 ( CH3- ; 12H ) l3C NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ ppm: 180.37 ( C-4' ; zakryty) 170-169 (C=O x 4, C-6’ ) 164.23 ( C-5' ) 161.74 ( C-4 ; zakryty ) 157.42 ( C-9' ) 154.28 ( C-2' ; zakryty ) 130.13 (C-2”, C-6 ; zakryty ) 129.98 ( C-2”' ) 126.00 ( C-3' ) 122.51 ( C-3' ; zakryty ) 121.04 ( C-1 ; zakryty ) 115.08 (C-3, C-5 ; zakryty ) 105.42 ( C-10' ; zakryty ) 98.49 ( C-8' ; zakryty) 93.12 ( C-6’ ) 71.55 ( C-1 ) 69.90 ( C-2 ) 69.46 ( C-3 ; zakryty ) 68.38 ( C-4, C-5 ; zakryty ) 64.89 ( C-4' ) 61.80 ( C-6 ;Z1 H NMR isomer (600 MHz, DMSO-D6) δ ppm 12.96 (OH-5 ';s; 1H) 9.60 (OH-4; s; 1H; occluded) 8.40 (H-2';s; 1H) 7.39 (H-2, H-6 ”; 2H; covered) 6.83 (H-3”, H-5; 2H; covered) 6.69 (H-8 ';d; J 5 -. 7 - = 2.35; 1H) 6.45 (H-6 ', d; J = 7. 5 · = 2.35, 1H), 5.76 (H-3'; dt, J 3 -. 2 ·· = 10.50, J 3 -. 4 x 2 = 5.40, 1 H) 5.63 (H-2 ', ddd, J 2 -. 3 - = 10.50, J 2 -., b = 6.80, J 2 -.ra = 6.30; 1 H), 5.37 (H-3; dd, J 3. 2 = 9.10 ; J 3 : 4 = 9.10; 1H) 4.94 (H-2; dd; J 2. 3 = 9.10; J 2 , = 5.87; 1H) 4.86 (H-4; 1H; hidden) 4.80 (H-4 ';d; J 4 -. 3 - = 5.40; 2H) 4.21-4.13 (Hl, H-6a; m; 2H) 4.00-3.93 (H-5, H-6b; m; 2H) 2.82 (Hl a; m ; J, · a ., B = 15.26; Ji a -2 ”= 9.39; J, · a -i = 9.39; 1H) 2.38 (H-l'b;m; 1H) 2.02; 2.01; 1.99; 1.98 (CH 3 -; 12H) l3 C NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ ppm 180.37 (C-4 '; concealed), 170-169 (C = O x 4, C-6'), 164.23 (C 5 ') 161.74 (C-4; face down) 157.42 (C-9') 154.28 (C-2 '; face down) 130.13 (C-2 ", C-6; face down) 129.98 (C-2"") 126.00 ( C-3 ') 122.51 (C-3'; masked) 121.04 (C-1; masked) 115.08 (C-3, C-5; masked) 105.42 (C-10 '; masked) 98.49 (C-8'; face down) 93.12 (C-6 ') 71.55 (C-1) 69.90 (C-2) 69.46 (C-3; face down) 68.38 (C-4, C-5; face down) 64.89 (C-4') 61.80 ( C-6;

zakryty ) 24.58 ( C-Γ ) 20.45 ( CH3 x 4; zakryty)covered) 24.58 (C-Γ) 20.45 (CH 3 x 4; covered)

Termin „zakryty” zastosowano w przypadku analizy widm NMR mieszanin izomerów E:Z, gdy pik izomeru E (występującego w mieszaninie w przewadze) zakrywał pik izomeru Z. Przypisanie sygnałów izomeru Z odbywało się wtedy na podstawie widm korelacyjnych 2D NMR: ‘Η-’Η cosy oraz 'H-^C hetcor.The term "covered" was used when analyzing the NMR spectra of mixtures of E: Z isomers, when the peak of the E isomer (predominantly present in the mixture) covered the peak of the Z isomer. The Z isomer signals were then assigned on the basis of 2D NMR correlation spectra: 'Η-' Η cozy and 'H- ^ C hetcor.

PL 212 750 B1PL 212 750 B1

Zastosowanie złożonych C-glikozydów pochodnych genisteiny w chemioterapii przedstawiono na przykładach poniżej.The use of complex genistein C-glycosides in chemotherapy is exemplified below.

Jako związki do badań zastosowano pochodne przedstawione na schemacie 3.The compounds shown in Scheme 3 were used as test compounds.

Wpływ flawonoidów na cykl komórkowy badano przy użyciu cytometru przepływowej. Indeks mitotyczny w komórkach barwionych DAPI badano przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego.The effect of flavonoids on the cell cycle was investigated using a flow cytometer. The mitotic index in DAPI stained cells was examined using a fluorescence microscope.

P r z y k ł a d 3P r z k ł a d 3

Hamowanie proliferacji komórek nowotworowych in vitro.Inhibition of tumor cell proliferation in vitro.

Glikokoniugaty zawierające resztę acylowanego cukru nienasyconego połączoną poprzez łącznik (spacer) z genisteiną w pozycji 7 wykazują działanie cytotoksyczne i cytostatyczne w odniesieniu do linii komórkowych wywodzących się z nowotworów jelita grubego i gruczołu krokowego przy stężeniu niższym niż genisteina.Glycoconjugates containing an acylated unsaturated sugar residue linked via a spacer to genistein at position 7 show cytotoxic and cytostatic activity against colorectal and prostate cancer cell lines at a concentration lower than that of genistein.

Proliferację komórek rosnących w obecności różnych stężeń genisteiny i jej glikokoniugatów badano z użyciem MTT [bromek 3-4,5-dietylotiazolo-2-ilo)-2,-difenylotetrazoliowy].The proliferation of cells growing in the presence of various concentrations of genistein and its glycoconjugates was investigated using MTT [3-4,5-diethylthiazol-2-yl) -2, -diphenyltetrazolium bromide].

PL 212 750 B1PL 212 750 B1

T a b e l a 1T a b e l a 1

Hamowanie proliferacji komórek wyrażone wartością IC 50 (IC50 - stężenie substancji, przy którym proliferacja komórek ulega zahamowaniu do połowy wartości kontrolnej).Inhibition of cell proliferation expressed by the IC50 value (IC50 - the concentration of the substance at which cell proliferation is inhibited to half of the control value).

Linia komórkowa i jej pochodzenie The cell line and its origin Badany związek Examined relationship IC50 [μΜ] IC50 [μΜ] DU145 (rak stercza) DU145 (prostate cancer) Genisteina Genistein 47,29±11,78 47.29 ± 11.78 C1 C1 29,61±15,45 29.61 ± 15.45 C2 C2 9,50±2,21 9.50 ± 2.21 C3 C3 25,43±11,58 25.43 ± 11.58 C4 C4 113±59 113 ± 59 R3-alfa R3-alpha 15,47±9,69 15.47 ± 9.69 R4-a/fa R4-a / fa 19,24±7,46 19.24 ± 7.46 R3-beta R3-beta 19,24±5,56 19.24 ± 5.56 HCT116 (rak jelita grubego) HCT116 (colorectal cancer) Genisteina Genistein 34,90±9,84 34.90 ± 9.84 C1 C1 8,99±2,41 8.99 ± 2.41 C2 C2 4,20±1,11 4.20 ± 1.11 C3 C3 4,31±2,55 4.31 ± 2.55 C4 C4 64,63±17,93 64.63 ± 17.93 R3-a/fa R3-a / fa 6,86±1,07 6.86 ± 1.07 R4-a/fa R4-a / fa 6,66±1,19 6.66 ± 1.19 R3-beta R3-beta 10,62±6,27 10.62 ± 6.27

P r z y k ł a d 4P r z k ł a d 4

Hamowanie cyklu komórkowegoCell cycle inhibition

Badania cyklu komórkowego z użyciem cytometru przepływowego wskazują, że niektóre glikokoniugaty-genisteiny są zdolne do hamowania cyklu komórkowego w fazie G2/M przy niższym stężeniu niż genisteina. Szczególnie silne hamowanie cyklu komórkowego po 24 godzinnym traktowaniu komórek 20 μΜ stężeniem badanych związków obserwuje się dla związków R3 i R4. Nieznaczne hamowanie cyklu w fazie G2/M obserwuje się dla związku C2. Dla związków: C2, C3, R3, R4 obserwuje się wzrost odsetka komórek hipodiploidalnych, co wskazuje, że w komórkach ulega nasileniu proces apoptozy. Spośród badanych związków nieznaczny blok mitotyczny wywołuje związek C2. Pozostałe związki nie powodują zmian indeksu mitotycznego. Oznacza to, ze blok G2/M, obserwowany po traktowaniu komórek związkami R3 i R4 zachodzi w fazie G2.Cell cycle studies using a flow cytometer indicate that some genistein glycoconjugate are able to inhibit the cell cycle in the G2 / M phase at a lower concentration than genistein. Particularly strong inhibition of the cell cycle after 24 hours of treatment of cells with 20 μΜ concentration of test compounds is observed for compounds R3 and R4. Slight inhibition of the cycle in the G2 / M phase is observed with Compound C2. For compounds: C2, C3, R3, R4, an increase in the percentage of hypodiploid cells is observed, which indicates that the cellular apoptosis process is intensified. Compound C2 causes a slight mitotic block among the compounds tested. The other compounds do not change the mitotic index. This means that the G2 / M block observed after the treatment of cells with R3 and R4 compounds occurs in the G2 phase.

T a b e l a 2T a b e l a 2

Indeks mitotyczny w komórkach linii HCT 116 wyznaczany po 24 godzinnym traktowaniu pochodnymi genisteiny w stężeniu 20 μΜ.Mitotic index in HCT 116 cells determined after 24-hour treatment with genistein derivatives at a concentration of 20 μΜ.

Kontrola Control 1,8% 1.8% Genisteina Genistein 1,7% 1.7% C1 C1 2,2% 2.2% C2 C2 6,3% 6.3% C3 C3 3,3% 3.3% C4 C4 1,2% 1.2% R3-alfa R3-alpha 2,3% 2.3% R4-a/fa R4-a / fa 1,3% 1.3% R3-beta R3-beta 3,3% 3.3%

PL 212 750 B1PL 212 750 B1

P r z y k ł a d 5P r z k ł a d 5

Aktywność przeciw nowotworowa glikokoniugatu genisteiny (R3- ) w podaniu doguzowym na modelu mysiego czerniaka B16Anti-tumor activity of genistein glycoconjugate (R3-) in intratumoral administration in a B16 mouse melanoma model

Związki G21 i (R3-a) - rozpuszczono w DMSO i 0,9%NaCl (10%+90%) i sonifikowano 15-30 mm, w ten sposób, aby stężenie końcowe wynosiło 1 mg/50 pi.Compounds G21 and (R3-a) - were dissolved in DMSO and 0.9% NaCl (10% + 90%) and sonicated 15-30 mm, such that the final concentration was 1 mg / 50 µl.

MyszyMice

Myszy szczepu C57B1/6 (samiczki) zaszczepiono podskórnie w prawy bok komórkami mysiego czerniaka B16 (3 x 105 mysz).Mice C57B1 / 6 (male) were inoculated subcutaneously in the right flank of the mouse B16 melanoma cells (3 x 10 5 mouse).

DawkowanieDosage

W eksperymencie użyto G21 i (R3-a) w dawce 1 mg /50 μΙ/ guz /dzień. Grupa kontrolna otrzymywała mieszankę rozpuszczalnika (DMSO) z 0,9%NaG. Oba badane związki były podawane doguzowo w dniach 9-14 po wszczepieniu nowotworu.In the experiment, G21 i (R3-a) was used at a dose of 1 mg / 50 μΙ / tumor / day. The control group received a solvent mixture (DMSO) with 0.9% NaG. Both test compounds were administered intratumorally on days 9-14 after tumor inoculation.

Ocena aktywnościActivity evaluation

Parametrem oceny działania przeciw nowotworowego związku była objętość guza i parametr TGI (% zahamowania wzrostu guza). Oceniano także masę ciała myszy.The parameters for assessing the anti-tumor activity of the compound were the tumor volume and the TGI parameter (% tumor growth inhibition). The body weight of the mice was also assessed.

Nie stwierdzono istotnych statystycznie różnic w objętości guzów między grupami badanymi a grupą kontrolną. Poniższa tabelka obrazuje kinetykę wzrostu guzów w trakcie eksperymentu. Jednakże zaobserwowano znaczne, dochodzące do 50% zahamowanie wzrostu guzów (TGI) pod wpływem (R3-a).There were no statistically significant differences in the volume of tumors between the study groups and the control group. The table below shows the growth kinetics of tumors during the experiment. However, a significant up to 50% inhibition of tumor growth (TGI) by (R3-a) was observed.

T a b e l a 3T a b e l a 3

Kinetyka wzrostu guzów mysiego czerniaka B16Growth kinetics of B16 murine melanoma tumors

Dzień eksperymentu Day experiment Objętość guzów [mm3]Tumor volume [mm 3 ] Kontrola Control G21 G21 R3-a R3-a 8 8 10 10 0 0 0 0 10 10 250 250 100 100 50 50 12 12 400 400 300 300 150 150 14 14 1100 1100 600 600 500 500 16 16 1600 1600 1200 1200 700 700

Zastrzeżenie patentowePatent claim

Claims (1)

Zastrzeżenie patentowePatent claim Złożone C-glikozydy pochodne genisteiny o działaniu cytotoksycznym i antyproliferacyjnym o strukturze przedstawionej wzorem I, gdzie jednostka cukrowa którą stanowi per-O-acylowany mono- dilub trisacharyd, 2,3-nienasycony mono-, di-, lub trisacharyd połączona jest wiązaniem C-glikozydowym z łącznikiem R zawierający od dwu do dziesięciu atomów węgla w którym grupa funkcyjna A, to wiązanie podwójne, a łącznik związany jest wiązaniem 7-O-eterowym z genisteiną.Complex C-glycosides derived from genistein with cytotoxic and antiproliferative activity with the structure shown in formula I, where the sugar unit, which is a per-O-acylated mono-dil or trisaccharide, 2,3-unsaturated mono-, di-, or trisaccharide, is linked by a C- bond a glycoside with an R linker containing from two to ten carbon atoms in which the A functional group is a double bond, and the linker is linked to a 7-O-ether bond with genistein.
PL390766A 2010-03-19 2010-03-19 Complex genistein derived C-glycosides with cytotoxic and antiproliferative activity and the application thereof PL212750B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL390766A PL212750B1 (en) 2010-03-19 2010-03-19 Complex genistein derived C-glycosides with cytotoxic and antiproliferative activity and the application thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL390766A PL212750B1 (en) 2010-03-19 2010-03-19 Complex genistein derived C-glycosides with cytotoxic and antiproliferative activity and the application thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL390766A1 PL390766A1 (en) 2011-09-26
PL212750B1 true PL212750B1 (en) 2012-11-30

Family

ID=44675205

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL390766A PL212750B1 (en) 2010-03-19 2010-03-19 Complex genistein derived C-glycosides with cytotoxic and antiproliferative activity and the application thereof

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL212750B1 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL399467A1 (en) 2012-06-08 2013-12-09 3G Therapeutics Inc. The use of genistein for lowering the storage organic compounds in cells in the treatment and/or prevention of lysosomal storage diseases

Also Published As

Publication number Publication date
PL390766A1 (en) 2011-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ayyad et al. In vitro and in vivo study of cucurbitacins-type triterpene glucoside from Citrullus colocynthis growing in Saudi Arabia against hepatocellular carcinoma
AU2003282999A1 (en) Chromones and chromone derivatives and uses thereof
JP2009280610A (en) Compound isolated from gamboge resin having activity in inhibiting growth of tumor/cancer cells and pharmaceutical composition comprising the same
Wang et al. Synthesis and cancer cell growth inhibitory activity of icaritin derivatives
Sharipova et al. Synthesis and anti-cancer activities of glycosides and glycoconjugates of diterpenoid isosteviol
US8299125B2 (en) Water-soluble triterpenephenol compounds having antitumor activity and the preparation thereof
Uddin et al. Bioactive flavonoids from the leaves of Lawsonia alba (Henna)
Zheng et al. Cytotoxic guaianolides and seco-guaianolides from Artemisia atrovirens
CA2741096C (en) Triterpenoid 2-deoxy glycosides, method of preparation thereof and use thereof as medicaments
CN101003528B (en) En-kaurene diterpenoids and derivatives thereof, preparation methods and uses thereof
Liu et al. Dihydromyricetin from Ampelopsis grossedentata and its derivatives: Structural characterization and anti-hepatocellular carcinoma activity
PL212750B1 (en) Complex genistein derived C-glycosides with cytotoxic and antiproliferative activity and the application thereof
Min et al. Glycosylation of ent-kaurene derivatives and an evaluation of their cytotoxic activities
CN104610212B (en) Icaritin derivatives as well as preparation method and application thereof
EP1963349B1 (en) Novel loganin analogues and a process for the preparation thereof
CN109734561A (en) A kind of farnesyl phenolic compound and its pharmaceutical composition and its application
Song et al. Synthesis and anti-cancer activity of paclitaxel− coumarin conjugate
CN115073406B (en) An eucalyptane-type sesquiterpene lactone TBA derivative and its use
CN101283998B (en) Application of bromine phenolic compound in preparing the medicine for curing the malignancy
CA3233367A1 (en) Cannabinoids c- and o-glycosides possessing anti-proliferative and anti-metastatic properties and process for preparation thereof
Mimaki Structures and biological activities of plant glycosides: cholestane glycosides from Ornithogalum saundersiae, O. thyrsoides and Galtonia candicans, and their cytotoxic and antitumor activities
TW201836614A (en) Compound
CN107236004B (en) Dihydromyricetin cyclophosphamide derivative and its preparation method and application
KR101068990B1 (en) Pharmaceutical composition for anticancer agent, which contains Echinacea extract, Echinacea fraction, and canesanone H isolated from it or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient
Mojarrab et al. New coumarin-hemiterpene ether glucosides and a structurally related phenylpropanoic acid derivative from Artemisia armeniaca