KR970008132B1 - 생체 임상의학용 키틴 및 키토산 제조방법 - Google Patents

Abstract

요약없음.

Description

생체 임상의학용 키틴 및 키토산 제조방법

본 발명은 키틴 및 키토산의 제조방법, 특히 게 갑각으로부터 고순도로 키틴을 분리하여, 이로부터 고순도, 고분자량, 고탈아세틸화도 및 고백색도를 갖는 생체 임상의학용 키토산을 제조하는 방법에 관한 것이다.

키틴은 지구상에 섬유소 다음으로 풍부한 천연 고분자 물질로서, 갑각류 동물의 갑각으로부터 상업적으로 추출되는 고부가가치의 생체 고분자이다. 이러한 키틴은 수불용성이므로 활용에 큰 장애가 되고 있다. 따라서, 키토산을 탈아세틸화시켜 키토산을 얻음으로써 약산성 액성에서 수용성이 발현되는 키토산으로 전환시킬 수 있으며, 이러한 수용성 키토산이 산업적으로 키틴보다 더 유용하게 이용되고 있다.

최근들어 게 및 새우의 대량 어획으로 수산 폐기물인 갑각의 처분에 관심을 가지게 되면서 이로부터 추출 가능한 키틴의 이용도를 다양하게 개발하려 하게 되었다. 이들 키틴 및 키토산은 초기에는 식품 공장 폐수내의 유효물질(단백질 등)을 회수하는 응집제로 쓰였으나, 최근들어서는 식품 분야, 의료의학 분야, 기능성막, 효소 및 미생물의 고정화 담체 등과 같은 생물공학 분야, 화장품 분야, 농업 분야, 화공 분야, 환경 분야 등 전 분야에 걸쳐 폭넓게 개발되고 있다.

지금까지 널리 이용되고 있는 키틴의 제법은 키틴의 주원료인 게나 새우 껍질을 전처리한 후 잘게 자르거나 부수어 결체 조직인 단백질을 제거하고, 이를 다수 염산 수용액중에 침지시켜 탄산 칼슘을 제거함으로써 하기 구조식의 키틴을 수득하는 것이다.

상기 구조식의 키틴에서 생물학적 또는 화학적 처리에 의해 아세틸기를 제거하여 유리 아미노(-NH₂)를 생성시킴으로써 하기 구조식의 키토산을 수득할 수 있다.

상기 구조식에서 알 수 있듯이 키토산은 섬유소에 존재하는 수산기의 하나가 유리 아미노기로 치환된 상태이므로 그 화학적 반응성과 화학적 개질면에서 유리하다.

키틴의 일반적인 제조공정은 다음과 같다 : 게나 새우를 탈육시킨 후 제조 효율을 높이기 위해 0.5 내지 3cm 의 크기로 분쇄시킨다. 이어서, 약 5%의 염산용액 중에서 실온하에 탈 탄산칼슘 반응을 시킨 다음 5%의 수산화나트륨 수용액에 침지시켜 실온 또는 고온에서 수시간동안 가열함으로써 단백질을 제거한다. 마지막으로 95% 에탄올 중에서 수시간동안 환류시켜 키틴을 수득한다.

공지된 또 하나의 방법으로서, 갑각을 세척하고 50℃의 진공오브에서 건조시킨 다음 분쇄시켜 10% NaOH 용액에 침지시킨다. 탈단백질된 키틴을 수세한 후 용매로 수회 세척한다. 수득된 생성물을 감압하에서 건조한 후-20℃의 염산 수용액에서 4시간 유지시킨 후 세척한다. 염산에의 침지와 세척을 반복한다(휘슬러-베밀러(Whistler & BeMiller)법).

또 다른 방법은, 갑각을 세척하고 100℃에서 건조한 다음 실온에서 2N 염산 용액으로 5시간 처리하고 세척 및 건조하여 미세 분말로 분쇄한다. 분말을 2N 염산 용액으로 0℃하에 교반하면서 추출한 후 수거된 물질을 세척한 후 100℃ 하에서 1N NaOH 수용액으로 추출한다. NaOH 수용액 처리를 수회 반복한다(해크만(Hackman)법).

키토산은 불용성인 키틴을 탈아세틸화함으로써 수득할 수 있는데, 일반적으로 30% 내지 50%의 수산화나트륨 용액을 키틴량의 약 20배 정도 사용하여 5 내지 20시간 동안 처리한다.

상술한 기존의 키틴 분리 방법들에 있어서는 단백질 및 CaCO₃의 함량을 줄이기 위해 비교적 과도한 반응조건들을 도입하는데, 탈탄산칼슘 반응의 경우 염산 수용액 처리를 상온 또는 대략 10℃ 이상의 온도에서 수행함으로써, 탄산칼슘의 제거는 용이해지나 분자쇄의 절단이 증가되어 분자량이 높은 키틴을 얻기가 곤란하며, 또한 단백질 제거를 위한 NaOH 용액 처리시에도 여러 단계에 걸쳐 12시간 이상의 장시간이 소요된다는 단점이 있다. 이렇게 수득된 키틴은 공기중에 방치되어 시간이 경과하면 변색이 일어나며 불순물의 함량도 높다.

따라서, 본 발명자들은 상술한 문제점을 해소하고 필요로 하는 의약 및 식품 용도에 적합한 고순도 및 고분자량의 키틴 및 키토산을 수득할 수 있는 방법에 대해 계속하여 연구한 결과, 수득된 키틴의 변색은 분자쇄의 파괴에 의한 것이므로 염산 처리시 처리 온도를 비교적 낮추어 분자쇄의 절단을 막아 분자량이 높으면서도 탄산 칼슘의 함량이 낮은 키틴을 수득하고 또한 NaOH 용액 처리시에도 분자쇄의 절단을 막기 위해 불활성 기체를 주입하면서 3시간씩 2회 처리하여 단계를 간소화하고 시간도 단축함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 하나의 목적은 고순도, 고분자량 및 고백색도로 키틴을 수득하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 하나의 목적은 그렇게 수득된 키틴으로부터 고분자량 및 고탈아세틸화도의 키토산의 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

즉, 본 발명은, 게 갑각을 건조시켜 보관하는 단계, 건조된 게 갑각을 분쇄시키는 단계, 분쇄된 게 갑각을 염산 수용액중에서 -10 내지 10℃ 미만의 온도에서 10 내지 25시간 동안 유지한 후 온도를 급격히 상승시켜 10 내지 20℃ 온도에 2 내지 8시간 동안 유지시키거나, 달리 한 단계로 -10 내지 8℃의 온도에서 20 내지 60시간 동안 유지시키는 단계, 염산 처리된 게 갑각을 연속적으로 수세, 여과, 유기 용매처리 및 건조하여 조 키틴을 수득하는 단계, 수득된 조 키틴을 NaOH 수용액에 침지시켜 가열 처리하는 단계 및 NaOH 처리된 키틴을 수세, 여과, 유기 용매 처리 및 건조시키는 단계를 포함하는 생체 임상의학용 키틴을 제조하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 상술한 바와 같은 방법에 의해 수득한 키틴에 NaOH 수용액을 가하여 80 내지 100℃의 온도에서 2 내지 12시간 가열처리한 후 수세 및 여과하는 단계, 수득된 조 키토산을 탈이온수에 이어 유기용매의 수용액에 침지시킨 후 여과 및 건조시키는 단계 및 상기 NaOH 수용액 처리 및 유기 용매처리 공정을 반복하는 단계를 포함하는 키토산 제법에 관한 것이다.

본 발명을 더욱 자세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명에서는 갑각을 건조시키기 전에 갑각으로부터 육질 부분을 효과적으로 분리하기 위해 열수 처리를 통상 수행하는데, 일반적으로 갑각을 40 내지 50℃ 온도의 더운물 중에 30분 1시간동안 침지시킴으로써 수행한다.

수거한 갑각을 수세한 후 탈수기로 건조시키고 상온에서 에탄올, 메탄올, 아세톤, 테트라히드로푸란(THF), 디옥산 또는 메틸에틸케톤(MEK)과 같은 유기 용매에 일정시간, 예를들면 30분 내지 1시간 동안 침지한 후 그늘에서 건조(보통 수분 함량 8 내지 12%)시킨 후 서늘한 상태로 보관하였다가 차후의 단계에 사용한다. 보관 상태가 불량하면 보존시 부패가 일어나므로, 분자량 저하가 수반되고 변질되어 높은 품질의 키틴을 얻기가 어렵다.

육질이 제거된 갑각은 보다 효과적인 염산 처리를 위해 분쇄하는 것이 바람직하다. 일반적으로 통상의 분쇄기에 의해 0.5 내지 3mm의 크기 또는 200 내지 300메쉬(mesh)의 크기로 분쇄하여 반응시키는 것이 바람직하다.

이어서, 갑각으로부터 석회질(CaCO₃)을 제거하기 위해, 염산 수용액을 -10 내지 10℃ 미만, 바람직하게는 -5 내지 5℃의 온도로 조절한 다음 기계적 교반기로 교반하면서 갑각(통상 수분함량 8 내지 12%)을 첨가하고 그 온도에서 10 내지 25시간, 바람직하게는 15 내지 20시간 동안 처리한 후, 염산 수용액의 온도를 급격히 10 내지 20℃, 바람직하게는 12 내지 18℃로 상승시켜 그 온도에서 2 내지 8시간, 바람직하게는 3 내지 5시간 동안 유지함으로써, 홍게 갑각의 염산처리 단계를 수행한다. 이때, 염산 수용액은 0.8N 내지 3N 범위가 적합하고, 기계적 교반기는 50 내지 200rpm, 보통 100rpm의 속도로 교반하며, 처리공정중 적절한 시기에 새로운 염산 수용액으로 1,2회 교환하는 것이 바람직하다. 또한 교반속도가 200rpm 이상이 되면 염산처리 효능이 저하되므로 주의하여야 한다.

상기 방법중 염산 수용액 처리를, 달리 하나의 단계로 하여, -10 내지 8℃, 바람직하게는 -5 내지 5℃의 온도에서 20 내지 60시간, 바람직하게는 30 내지 50시간 유지함으로써 수행할 수 있다.

염산 처리에 의해 석회질이 제거된 갑각은 이어서 수세에 의해 잔류하는 염산 성분을 제거시킨다. 물로 세척하는 대신, NaOH 수용액을 적가하여 게 갑각 침지 수용액의 pH 7 내지 9로 조절한 후 탈이온수 중에서 일정시간, 예를들면 1 내지 6시간 방치할 수도 있다. 이어서 여과한 후, 유기 용매, 예를들면 에탄올, 메탄올, 아세톤, THF, 디옥산, MEK 등의 용매로 1 또는 2회 세척한 후 건조시킨다. 상기 용매 세척은 게 갑각의 적색을 제거하여 키틴의 백색도를 상승시키기 위한 것이며, 따라서 이 용매가 탈색제로서 작용하여, 본 발명에서는 탈색제로서 별도의 산화제 또는 환원제를 사용하지 않아도 되는 잇점이 있다.

이렇게 하여 수득된 조 키틴은 단백질 제거 공정에 들어가게 되는데, 이는 수득한 조 키틴을 NaOH 수용액에 침지시켜 가열처리 함으로써 수행한다. NaOH 수용액의 농도는 2 내지 10중량%가 적합하며, 반응온도는 80 내지 100℃ 범위이고, 가열 시간은 2 내지 4시간이 일반적이다. 이 공정은 불활성 기체, 예를들면 질소, 아르곤, 헬륨 또는 네온 기체를 연속적으로 주입하면서 수행하는 것이 바람직하다. 이렇게 함으로써 키틴의 분자쇄 절단을 방지할 수 있다.

이어서, 세액의 pH가 중성이 될때까지 조 키틴을 탈이온수로 세척하거나, 염산 용액을 적가하여 조 키틴 침지 수용액의 pH를 7 내지 8로 조절한 후 탈이온수중에 일정 시간, 예를들면 1 내지 5시간 침지시킨다. 이어서, 조 키틴을 여과한 후, 염산 처리후의 경우와 마찬가지로 유기 용매, 예를 들면 에탄올, 메탄올, 아세톤, THF, 디옥산, MEK 등이 용매로 1 또는 2회 세척한 후 건조시킨다.

1차 NaOH 처리된 조 키틴을 보다 고순도로 만들고 탈색을 촉진시키기 위해 상술한 NaOH 처리 공정 및 세척공정을 2회 이상 반복하는 것이 바람직하다. 최종 NaOH 처리 및 수세된 키틴을, 키틴의 백색도를 높이기 위해 탈이온수 중에 2 내지 5일간 방치한 후 여과하여 진공 건조시켜 생체 임상 의학용 키틴을 수득할 수 있다.

본 발명에 따라 수득한 생체 임상의학용 키틴으로부터 다음과 같이하여 고분자량이면서 탈아세틸화도가 높은 키토산을 얻을 수 있다.

우선, 상기 수득된 키틴에 예를들면 30 내지 50%의 NaOH 수용액을 가하고 80 내지 100℃의 온도하에 2 내지 12시간 가열한 후, 세액의 pH가 중성이 될때까지 탈이온수로 세척하고 여과한다. 이때 불활성 기체, 예를들면 질소, 아르곤, 헬륨 또는 네온 가스를 연속적으로 주입하면서 수행하는 것이 바람직하다. 또한, NaOH 수용액 처리시 온도 및 시간이 상기 범위를 벗어나면 분자쇄가 절단될 염려가 있다.

이어서, NaOH 수용액 처리된 조 키토산을 탈이온수에 침지시킨 후 여과하여, 키토산의 백색도를 높히고 불순물의 용해 제거를 위해 유기 용매, 예를들면 아세톤, 에탄올, 메탄올, 이소프로판올, 디옥산, THF, MEK 등의 용매의 수용액(통상 5 내지 30중량%의 농도)중에 침지시킨 다음 여과하여 건조시킨다.

이어서, 건조된 조 키토산을 다시 NaOH 수용액 처리 및 유기용매 수용액 처리하여 고탈아세틸화도의 최종 키토산을 수득한다.

키토산의 탈아세틸화도를 보다 높히기 위해 상술한 1차 및 2차 NaOH 수용액 처리 및 세척 공정을 2회 이상 반복 시행할 수도 있다.

이상에서 기술한 바와 같이, 본 발명에서는 온화한 HCl 처리조건에 의해 분자쇄의 절단을 크게 방지하고, HCl 처리 후 및 NaOH 처리 후 유기용매를 사용함으로써 별도의 탈색제를 사용하지 않고서도 키틴의 백색도를 높이는 효과를 얻을 수 있으며, NaOH 처리시 불활성 기체를 주입하여 분자쇄의 절단을 방지함으로써 고분자량의 키틴을 얻을 수 있고, 또한 그러한 키틴으로부터 NaOH 수용액 처리를 반복하여 고아세틸화도의 키토산을 얻을 수 있다.

본 발명을 하기 실시예로 예시하며, 본 발명이 이에 국한되는 것은 아니다.

실시예에서, 키틴중의 잔류 CaCO₃함량은 키틴을 800℃에서 1시간 연소시킨 후에 강열 감량으로서 측정하였으며, 단백질 함량은 바이오-래드(Bio-Rad)사의 단백질 분석 키트(kit)를 이용하여 브래드포드(Bradford)법에 따라 미국 휴렛트-패커드(Hewlett-Packard)사의 UV/VIS 분광분석계로 측정하였다. 또한, 금속함량은 일본 세이코사의 ICP-AES 및 미국 퍼킨-엘머(Perkin-Elmer)사의 AA 분광계를 사용함으로써 측정하였다. 탈아세틸화도는 논문[J. Appl. Polym. Sci. 28, 1909(1983)]에 게재된 IR 이용법(Mima 법)에 의거하여 측정하였다. 경시 백색도는 30일 이상 경과한 후의 외관상태를 육안으로 판별하여 우수(백색)와 불량(황색을 띰)으로 나누어 평가하였다. 또한, 점도는 브룩필드(Brookfield) 점도계에서 #4 스핀들을 이용하여 60rpm으로 1% 아세트산용액 중의 0.5% 키토산 용액으로써 측정하였다.

실시예 1

홍게(학명 : Chionoecetes opilio)의 갑각 300g을 40 내지 50℃의 수욕중에 30분간 방치한 후 게의 육질이 부유되지 않을 때까지 수세하였다. 탈수기로 수분을 제거하고 에탄올욕에 1시간 동안 침지한 후 다시 탈수기로 수분을 제거하여 그늘에서 10일간 건조시켜 건조 홍게 갑각 200g을 얻었다.

이어서, 건조된 홍게 갑각(수분 함량 10%) 200g을 분쇄기(디츠-모토렌사(Dietz-Motoren Gmbh & Co. KG)의 Mot. WRB 90LB/4P)의 0.5 내지 3mm의 입경으로 분쇄한 후, 기계적 교반기가 장착된 반응 용기에 넣은 다음 여기에 0℃의 1N 염산 수용액 5ℓ를 가하고 50rpm의 속도로 교반하면서 그 온도에서 20시간 동안 반응시킨 후, 온도를 급격하게 15℃로 상승시켜 그 온도에서 4시간 동안 반응시켰다.

염산 처리된 홍게 갑각을 여과한 후 물에 침지시켜 5중량% NaOH 수용액으로 침지액의 pH가 7 내지 8이 되도록 조절한 후 그 상태로 6시간 방치한 후 여과하였다. 여과된 조 키틴을 아세톤 3ℓ로 2회 세척한 후 여과하여 30℃의 진공 오븐 중에서 36시간 동안 건조시켰다.

건조된 조 키틴을 5중량%의 NaOH 수용액 6ℓ에 침지시킨후 질소기체를 주입시키면서 3시간 동안 90℃로 가열한 다음, 2N 염산 수용액을 가해 조 키틴 침지 수용액의 pH를 7 내지 8로 조절하고 6ℓ의 탈이온수 중에 6시간 동안 침지시킨 다음 여과하였다. 여과된 물질을 아세톤 3ℓ로 2회 세척후 여과하여 30℃의 진공 오븐에서 12시간 건조시켰다.

건조된 1차 NaOH 수용액 처리된 키틴에 대해 다시 상술한 NaOH 수용액 처리 공정을 반복하였다. 2차 NaOH 수용액 처리된 키틴을 탈이온수로 5내지 10회 세척한 후 탈이온수 6ℓ에 3일 동안 방치한 후 여과 및 진공 오븐하에서 건조하여 생체 임상의학용 키틴 50g을 최종적으로 수득하였다.

실시예 2

실시예 1에서 염산 수용액 처리 공정을 하나의 단계로 하여 0℃의 온도에서 48시간 유지하도록 수행한점을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.

실시예 3 및 4

실시예 1에서 염산 수용액 처리 조건을 1 단계로 5℃, 24시간 및 -8℃, 40시간(2N 염산)으로 한다는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.

비교예 1 및 2

본 비교예는 본 발명에 따른 염산 수용액 처리시 온도 및 시간 조건의 변화에 대해 시험한 것으로, 실시예 1에서 염산 수용액 처리 조건을 1 단계로 하되, 본 발명의 범위에서 벗어나도록 각각 15℃, 8시간 및 10℃, 24시간으로 한다는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.

비교예 3

건조된 홍게 갑각 200g을 0.5 내지 3mm의 입경으로 분쇄한 후 기계적 교반기가 장착된 반응 용기에 넣은 다음 실온하에 2N 염산 수용액 5ℓ를 가하고 교반하면서 5시간 반응시켰다. 염산 용액의 온도를 0℃로 낮추어 그 온도에서 48시간 동안 반응시켰다. 세척 및 여과한 후 여과 물질을 물로 세척하고 1N NaOH 수용액으로 100℃ 하에서 12시간 동안 처리하였다. 세척 및 건조하여 키틴 80g을 수득하였다.

상기 실시예 1 내지 4와 비교예 1 내지 3에 사용된 중요한 실험 조건 및 수득된 키틴의 특성들을 하기 표 1에 나타내었다.

[표 1]

* 본 발명의 경우 K, Ca, Mg, Fe, Ba, Zn 뿐이었으나, 비교 방법의 경우 기타 금속 및 중금속도 포함되어 있었다.

상기 표 1에서 알 수 있듯이, 본 발명의 방법에 의하면, 수득된 키틴이 고순도, 고분자량 및 우수한 백색도를 갖는다.

실시예 5

상기 실시예 1에서 수득한 키틴 45g을 4ℓ 용량의 3구 플라스크에 넣고 40중량% NaOH 수용액 3ℓ를 첨가한 후 질소 가스를 연속 주입하면서 90℃의 온도로 7시간 가열하였다. 침지 수용액의 pH가 중성이 될때까지 탈이온수로 조 키토산을 수세한 후 여과하여 탈이온수 3ℓ 속에 2일간 방치한 다음 여과하여 즉시 10% 에탄올 수용액 3ℓ 중에 3일간 침지시켰다. 침지된 키토산을 여과하여 40℃의 진공오븐에서 2일간 건조시켰다(1차 NaOH 수용액 처리).

건조된 키토산에 40중량% NaOH 수용액 3ℓ 를 첨가한 후 질소가스를 연속 주입하면서 90℃의 온도로 3시간 가열하였다. 침지 수용액의 pH가 중성이 될때까지 탈이온수로 수세한 후 탈이온수 욕에 2일간 침지시킨 다음 여과하여, 10% 에탄올 수용액중에 3일간 침지시킨 후 여과 및 건조시켰다(2차 NaOH 수용액 처리). 이렇게 하여 탈아세틸화도가 90% 이상인 키토산을 얻었다.

상기 1차 및 2차 NaOH 수용액 처리를 1회 더 반복하여 탈아세틸화도가 92% 이상인 키토산을 얻었다.

비교예 4 내지 8

본 실시예는 본 발명의 경우 처리 조건의 변화에 따른 영향을 실험한 것으로, 실시예 5에서 NaOH 수용액 처리 조건을 본 발명의 범위에서 벗어나도록 표 2와 같이 하고, NaOH 처리후에 유기용매 처리를 생략하는 것을 제외하고는 실시예 5과 동일하게 실시하였다.

비교예 9

상기 비교예 3에서 수득한 키틴을 플라스크에 넣고 40중량% NaOH 수용액을 첨가한 후 115℃의 온도로 6시간 동안 가열하였다. 세척 및 여과하여 진공오븐에서 건조시켰다.

상기 실시예 5 및 비교예 4 내지 9에 사용된 실험조건 및 수득된 키토산의 특성들을 하기 표 2에 나타내었다.

[표 2]

* 본 발명의 경우, K, Ca, Mg, Fe, Ba, Zn 뿐이었으나, 비교 방법의 경우 기타 금속 및 중금속도 포함되어 있었다.

상기 표 2에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따라 NaOH 수용액의 처리 및 용매 세척 공정을 2회 이상 반복함으로써 높은 탈아세틸화도, 순도 및 분자량을 가진 키토산을 수득할 수 있으며, 또한 비교예에서와 같이 고온에서 처리하는 것은 쇄파괴를 일으켜 백색도를 불량하게 만든다. 본 발명의 방법에 의해 제조된 키토산은 순도가 중요한 의학 분야에 특히 유용하다. 본 발명에 의해 제조된 키토산은 카복시 메틸그룹으로 치환시켜 N,O-카복시메틸키토산을 제조하는데 사용될 수 있다.

Claims (14)

1. (1) 한국산 홍게 갑각을 건조시켜 보관하는 단계,

   (2) 건조된 게 갑각을 분쇄시키는 단계,

   (3) 분쇄된 게 갑각을 -10℃ 내지 10℃ 미만의 온도에서 10 내지 25시간 동안 및 10 내지 20℃의 온도에서 2 내지 8시간 동안 0.8N 내지 3N 미만의 염산 수용액으로 처리하는 단계,

   (4) 염산 처리된 게 갑각을 수세 및 여과시키는 단계,

   (5) 여과시킨 게 갑각을 수세 및 여과시키는 단계,

   (6) 유기용매 처리된 게 갑각을 건조시켜 조(crude) 키틴을 수득하는 단계,

   (7) 건조된 조 키틴을 NaOH 수용액에 침지시켜 가열시키는 단계,

   (8) NaOH 처리된 키틴을 수세 및 여과시키는 단계,

   (9) 여과시킨 조 키틴을 유기용매로 처리하는 단계, 및

   (10) 유기용매처리된 조 키틴을 건조시키는 단계를 포함하는, 게 갑각으로부터 키틴을 제조하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 염산 처리 단계(3)에서의 처리 조건이 -5 내지 5℃의 온도에서 15 내지 20시간 및 12 내지 18℃의 온도에서 3 내지 5시간인 방법.
3. (1) 한국산 홍게 갑각을 건조시켜 보관하는 단계,

   (2) 건조된 게 갑각을 분쇄시키는 단계,

   (3) 분쇄된 게 갑각을 -10℃ 내지 8℃의 온도에서 20 내지 60시간 동안 0.8N 내지 3N 미만의 염산 수용액으로 처리하는 단계,

   (4) 염산 처리된 게 갑각을 수세 및 여과시키는 단계,

   (5) 여과시킨 게 갑각을 유기용매로 처리하는 단계,

   (6) 유기용매 처리된 게 갑각을 건조시켜 조 키틴을 수득하는 단계,

   (7) 건조된 조 키틴을 NaOH 수용액에 침지시켜 가열시키는 단계,

   (8) NaOH 처리된 키틴을 수세 및 여과시키는 단계,

   (9) 여과시킨 조 키틴을 유기용매로 처리하는 단계, 및

   (10) 유기용매처리된 조 키틴을 건조시키는 단계를 포함하는, 게 갑각으로부터 키틴을 제조하는 방법.
4. 제3항에 있어서, 상기 염산 처리 단계(3)에서의 처리 조건이 -5 내지 5℃에서 30 내지 50시간의 방법.
5. 제1항에 있어서, 상기 건조 단계(6)에서, 게 갑각을 그늘에서 수분 함량 12% 이하로 건조하여 서늘한 상태로 보관하는 방법.
6. 제1항에 있어서, 상기 염산 처리 단계(3)에서, 염산처리를 기계적 교반기로 50 내지 200rpm의 속도로 교반하면서 수행하는 방법.
7. 제1항에 있어서, 상기 용매 처리 단계(5) 및 (9)에 사용되는 용매가 에탄올, 메탄올, 아세톤, 테트라하이드로푸란, 디옥산 및 메틸에틸케톤으로 구성된 그룹에서 선택되는 하나 이상의 용매인 방법.
8. 제1항에 있어서, 상기 (7) 내지 (10) 단계를 2회 이상 반복하는 방법.
9. 제1항에 있어서, 상기 NaOH 처리 단계(7)를 불활성 대기하에서 수행하는 방법.
10. 제8항에 있어서, 최종 NaOH 처리된 키틴을 수세 및 여과시키는 단계(8)후에, 탈이온수 중에 3 내지 4일간 침지시킨 후 여과 및 건조시키는 방법.
11. 제1항에 있어서, 한국산 홍게가 키오노에세테스 오필리오(Chionoecetes opillio)인 방법.
12. 제1항에 있어서, 상기 염산 처리 단계(3)에서의 염산 수용액 농도가 1N 내지 2N인 방법.
13. 제3항에 있어서, 상기 염산 처리 단계(3)에서 염산 수용액 농도가 1N 내지 2N인 방법.
14. 제3항에 있어서, 상기 NaOH 처리 단계(7)를 불활성 대기하에서 수행하는 방법.