KR890000405B1

KR890000405B1 - 아버멕틴 및 밀베마이신 유도체의 제조방법

Info

Publication number: KR890000405B1
Application number: KR1019860006110A
Authority: KR
Inventors: 폴 깁슨 스티븐; 스코트 홀덤 캘빈; 크로산 고디 알렉산더; 데스몬드 브록 존
Original assignee: 화이자 코포레이션; 윌리엄 존 윌슨
Priority date: 1985-07-27
Filing date: 1986-07-26
Publication date: 1989-03-16
Also published as: KR870001234A; IN165518B; EG17814A

Abstract

내용 없음.

Description

아버멕틴 및 밀베마이신 유도체의 제조방법

본 발명은 구충제로 유용한 신규한 다음 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

상기식에서 22 내지 23-위치의 점선은 임의의 이중결합을 나타내는데 : 이중결합 부재시, R¹은 H 또는 OH이고 : 이중결합 존재시, R¹은 부재하며 : R²는 알파-측쇄 C₃-C₈알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시알킬 또는 알킬티오알킬 그룹 : C₅-C₈시클로알킬 알킬 그룹(여기에서 알킬 그룹은 알파-측쇄 C₂-C₅알킬 그룹이다) : C₃-C₈시클로알킬 또는 C₅-C₈시클로알케닐 그룹(이들은 메틸렌, 또는 하나 이상의 C₁-C₄알킬 그룹 또는 할로원자로 임의 치환될 수 있다) : 또는 포화 또는, 불포화 또는 부분적 불포화될 수 있고 하나 이상의 C₁-C₄알킬 그룹 또는 할로원자로 임의 치환될 수 있는, 3 내지 6원 산소 또는 황-함유 헤테로시클릭 환이고 : R³는 H 또는 메틸이며 : R₄는 H 또는, 구조식

의 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시 그룹이며 : 단, R²가 알킬일 경우, R²는 이소프로필 또는 2급-부틸이 아니며 : R¹이 H이고 R⁴가 H이며 이중결합이 부재할 경우, R²는 메틸 또는 에틸이 아니며 : R¹이 OH이고 R⁴가 H이며 이중결합이 부재할 경우, R²는 2-부텐-2-일, 2-펜텐-2-일 또는 4-메틸-2-펜텐-2-일이 아니다.

또한 본 발명은 구충제 및 특히 아버메틱(avermectin) 및 밀베마이신(milbemycin)과 관련되며 25-위치에 신규 치환체 그룹을 갖는 화합물에 관한 것이다.

아버메틱은 C-076 화합물로서 이미 알려진 광범위한 구충제중의 한 그룹이다. 이들은 미생물 균주 스트렙토마이세스 아버미틸리스(Streptomyces avermitilis) ATCC 31267, 31271 및 31272를 무기염, 탄소 및 질소 동화성(assimilable) 공급원-함유 수성 영양 배지중 호기성 조건하에서 발효시켜 제조한다.

균주 ATCC 31267, 31272의 형태 및 배양특성은 영국 특허 제 1573955호에 상술되어 있으며, 여기에는 또한 C-076 복합물을 구성하는 8개 개별 성분의 분리 및 화학적 구조가 기술되어 있다.

밀베마이신은 13-위치에 단 잔기가 없는 마크로라이드(macrolide) 항생제와 구조적으로 관련되는데, 이들은 발효시켜 제조한다(참조 : 예를들면 영국 특허 제 1390336호 및 유럽 특허원 공고 제 0170006호).

본 발명에서는 특정한 카복실산 또는 그의 유도체를 아버멕틱-생성 균주(organism)의 발효액에 가하여, 아버멕틱과 관련된, 단 통상적으로 존재하는 이소프로필 또는 2급-부틸 그룹 대신 25-위치에 비천연 치환체 그룹을 갖는 신규 화합물을 수득할 수 있는 것을 밝혀내었다. 이 신규 화합물은 특히 구충제(anthelmintics), 체외구충제, 살충제 및 살비제로 유용한 고활성 구충제(antiparasiticide)이다.

즉, 본 발명의 한 국면은 카복실산 또는 그의 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 그의 산화성 전구체를 아버멕틴-생성 균주의 발효액에 가하고, 신규 아버멕틴 유도체를 분리시킴을 특징으로 하여, 25-위치에 비천연 치환제 그룹을 갖는 신규 아버멕틴 유도체를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

이러한 화합물로부터 유도체를 더 제조하기 위하여 통상적인 화학적 변환 반응을 사용할 수 있다.

상기 일반식(Ⅰ)에서, 탄소수 3이상인 알킬 그룹은 직쇄 또는 측쇄가 될 수 있다. 할로는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다. 알파-측쇄는 25-환상 위치에 부착된 탄소원자가 탄소원자 2개에 더 연결된 2급 탄소원자인 것을 의미한다. R²가 탄소수 5이상의 알킬일 경우, 알킬쇄의 나머지는 직쇄 또는 측쇄일 수 있다.

일반식(Ⅰ)의 바람직한 화합물은 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 화합물이다. 또 바람직한 화합물은 R²가 하나 이상의 C₁-C₄알킬 그룹으로 임의 치환될 수 있는 C₅또는 C₆시클로알킬 또는 시클로알케닐 그룹인 화합물이며, 시클로펜틸인 화합물이 특히 바람직하다. 또 다른 바람직한 화합물의 그룹은 R²가 시클로부틸인 화합물이다. 또 다른 바람직한 화합물의 그룹은 R²가 하나 이상의 C₁-C₄알킬 그룹 또는 할로겐 원자로 임의 치환될 수 있는, 5 또는 6원 산소 또는 황 함유 헤테로시클릭환, 특히 3-티에닐 또는 3-푸릴환인 화합물이다. 또한 또 다른 바람직한 화합물의 그룹은 R²가 C₃-C₈알킬티오알킬 그룹, 특히 1-메틸티오에틸 그룹인 것이 바람직하다.

본 발명에서는, 이중결합이 부재하고 R¹이 OH이거나, 또는 이중결합이 존재하고 R¹이 부재하며, R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 알반식(Ⅰ)의 화합물은 일반식 R²CO₂H의 적절한 카복실산 또는 그의 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 그의 산화성 전구체 존재하에 아버멕틴-생성 균주(예를들면 스트렙토마이세스 아버미틸리스 ATCC 31267, 31271 또는 31272)를 발효시켜 제조한다. 이 산은 접종시 또는 발효동안 일정간격으로 발효액에 가한다. 일반식(Ⅰ) 화합물의 제조는 발효액으로부터 샘플을 분리시키고, 유기 용매로 추출하고, 크로마토그라피(예를들면 고압 액체 크로마토그라피)로 일반식(Ⅰ)의 화합물을 분석하여 탐지한다. 일반식(Ⅰ)화합물의 수율이 극대화될때까지, 일반적으로 4 내지 6일동안 계속 배양한다.

카복실산 또는 그 유도체의 바람직한 각각의 첨가량은 0.05 내지 1.0g/1이다. 이 산을 발효액에 조금씩, 예를들면 수일간 이 산 또는 그의 유도체를 매일 가하면, 일반식(Ⅰ) 화합물의 수율이 가장 높아진다. 이 산은 염(예를들면 나트륨염 또는 암모늄염)으로서 가하는 것이 바람직하지만, 에스테르(예를들면 메틸 또는 에틸에스테르) 또는 아미드로서 가할 수도 있다. 발효액에 사용할 수 있는 또 다른 기질은 카복실산의 산화성 전구체인 유도체인데, 예를들면 적절한 기질은 일반식 R²CH(NH₂)CO₂H의 아미노산, 일반식 R²COCO₂H의 글리옥실산, 일반식 R²CH₂NH₂의 메틸아민 유도체, 일반식 R²(CH₂)nCO₂H(여기에서 n은 2, 4 또는 6이다)의 치환된 저급 알카노산, 일반식 R²CH₂OH의 메탄올 유도체 또는 일반식 R²CH0의 알데히드이다. 발효에 사용하는 배지는 통상적인 탄소, 질소 및 다른 미량원소 동화성 공급원 함유 복합배지일 수 있다. 그러나 본 발명에서는 보다 우수한 결과를 얻기 위하여 반 정제(semi-defined)배지중에서 배양시킬 경우 일반식(Ⅰ) 화합물의 수율이 개선되는 스트랩토마이세스 아버미틸리스 ATCC 31271 균주로부터 유도된 균주를 사용할 수 있으며, 이것은 조용매 추출물이 부산물을 현저하게 더 조금 함유하므로, 후속 분리 및 정제단계를 매우 단순화시키는 장점을 가지고 있다는 것을 밝혀내었다.

이 균주는 National Collection of Industrial Bacteria (NCIB) (1985. 7. 19. 기탁번호 NCIB 12121) [기탁번호 : KFCC-10300, 기탁일 : 1986. 11. 3, 기탁기관 : 한국종균협회]에 기탁되어 있다. 이외에, 이 균주의 형태 및 배양특성은 ATCC 31267에 대해 영국 특허 제 1573955호에 총괄적으로 기술되어 있다.

수일간, 바람직하게는 24 내지 33℃의 온도에서 배양시킨후, 발효육즙을 원심분리하거나 여과하고, 균사케이크를 아세톤 또는 메탄올로 추출한다. 용매 추출물을 농축시킨후, 목적하는 생성물을 수-비온화성 유기용매(예를들면 메틸렌 클로라이드, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부탄올 또는 메틸이소부틸케톤)로 추출한다. 용매 추출물을 농축시키고, 일반식(Ⅰ)의 화합물을 함유하는 조생성물을, 필요할 경우, 크로마토그라피(예를들면 예비역상, 고압액체 크로마토그라피)로 더 정제한다.

이 생성물은 일반적으로 이중결합이 부재하고 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시이며 R¹이 OH이거나, 또는 이중결합이 존재하고, R¹이 부재하며 R³가 H 또는 CH₃인 일반식(Ⅰ) 화합물의 혼합물로서 일반적으로 수득되는데, 그 비는 사용하는 특정한 카복실산 및 사용조건에 따라 변화할 수 있다.

본 발명에서는 R²CO₂H로 정의된 광범한 범위의 카복실산을 발효액에 가하여 25-위치에 신규 치환체 그룹을 갖는 아버멕틴을 수득할 수 있다는 것을 밝혀내었다. 사용할 수 있는 특정한 산의 예는 다음과 같다 : 2-메틸발레르산, 2-메틸펜트-4-에노산, 2-메틸티오프로피온산, 2-시클로프로필프로피온산, 시클로부탄 카복실산, 시클로펜탄 카복실산, 시클로헥산 카복실산, 시클로헵탄 카복실산, 2-메틸시클로프로판 카복실산, 3-시클로헥산-1-카복실산, 및 티오펜-3-카복실산.

본 발명의 한 특정하고 바람직한 국면에서, 시클로펜탄카복실산 나트륨염 존재시 발효를 수행하면, R¹이 OH이고, 이중결합이 부재하며, R²가 시클로펜틸이고, R³가 CH₃이며, R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-4-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물이 수득된다.

본 발명의 또 다른 바람직한 국면에서, 티오펜-3-카복실산 나트륨염은 존재시 발효를 수행하면, R¹이 OH이고, 이중결합이 부재하며, R²가 티엔-3-일이고, R³가 CH₃이며, R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-4-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물이 수득된다.

본 발명의 또 다른 바람직한 국면에서, 2-메틸티오프로피온산 나트륨염 존재시 발효를 수행하면, R¹이 OH이고, 이중결합이 부재하며, R²가 1-메틸티오 에틸이고, R³가 CH₃이며, R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-4-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물이 수득된다.

이중결합이 존재하고 R¹이 부재하는 일반식(Ⅰ)의 화합물은 다른 방법으로 R¹이 OH이고 이중결합이 부재하는 일반식(Ⅰ)의 상응하는 화합물을 탈수 반응시켜 제조할 수도 있다. 이 반응은 먼저 5 및 4" 위치의 하이드록실 그룹을 선택적 보호한후(예를들면 t-부틸디메틸실릴옥시아세틸 유도체로서), 치환된 티오카보닐할라이드[예를들면(4-메틸펜옥시)티오카보닐 클로라이드]와 반응시키고, 고비점 용매(예를들면 트리클로벤젠 중에서 가열하여 탈수시켜 수행하고, 마지막으로 생성물을 탈보호시켜 불포화 화합물을 수득한다. 적절한 시약 및 반응조건과 함께 이러한 단계들은 미합중국 특허 제 4328335호에 기술되어 있다.

R³가 H인 일반식(Ⅰ)의 화합물도 또한 R³가 CH₃인 상응하는 화합물을 탈메틸화시켜 제조할 수 있다. 이 반응은 3-메톡시 화합물 또는 그의 적절히 보호된 유도체를 아세트산 제2수은으로 처리하고, 생성된 3-아세톡시 엔을 에테르를 묽은 산으로 가수분해시켜 5-케토 화합물을 수득하여 수행하고, 그후 예를들면 수소화붕소나트륨으로 환원시켜 5-하이드록시 유도체를 수득하여 수행한다. 이러한 단계에 적절한 시약 및 반응조건은 미합중국 특허 제4423209호에 기술되어 있다.

R¹이 H이고 이중결합이 부재하는 일반식(Ⅰ)의 화합물은 이중결합이 존재하고 R¹이 부재하는 상응하는 화합물을 적절한 촉매로 선택적 촉매 수소화시켜 제조할 수 있다. 예를들면 이 환원 반응은 트리스(트리페닐포스핀) 로듐(Ⅰ) 클로라이드를 사용하여 수행한다(유럽 특허원 공고 제 0001689호).

R⁴가 H인 일반식(Ⅰ)의 화합물은 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 상응하는 화합물을 수성 유기 용매중 산으로 완화한 가수분해에 의해 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로스 그룹을 분리시켜 13-위치에 하이드록시 그룹을 갖는 아글리콘을 수득하여 제조할 수 있다. 그후 이것을, 예를들면 벤젤설포닐 할라이드와 반응시켜 할로겐화하여 13-데옥시-13-할로 유도체를 수득하고, 마지막으로, 예를들면 트리부틸주석 하이드라이드를 사용하여 선택적 환원시킨다. 바람직하지 않은 부반응을 피하기 위하여, 예를들면 3급-부틸디메틸실릴 그룹을 사용하여 존재할 수 있는 어떠한 다른 하이드록시 그룹이라도 보호하는 것이 바람직하다. 그후 이것을 미량의 산 함유 메탄올로 처리하여 할로겐화 또는 환원시킨후 쉽게 분리시킨다. 적절한 시약 및 반응조건과 함께 이러한 단계는 유럽 특허원 제 0002615호에 기술되어 있다.

R⁴가 H이고 R¹이 H 또는 OH이며 이중결합이 부재하는 일반식(Ⅰ)의 화합물도 또한 적절한 카복실산 또는 그의 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 그의 산화성 전구체를 밀베마이신 생성 균주의 발효액에 가하고, 25-위치에 비천연 치환체 그룹을 갖는 목적하는 밀베마이신 유도체를 분리시켜 제조할 수 있다. 밀베마이신 생성 균주의 예에는 스트렙토마이세스 하익로스코피쿠스(Streptomyces hygroscopicus) 균주 NRRL 5739(참조 : 영국 특허 제 1390336호), 스트렙토마이세스 시아네오그리세우스(Streptomyces cyaneogriseus) 아종 논시아노게누스 NRRL 15773(참조 : 유럽 특허원 공고 제 0170006호) 및 스트렙토마이세스 더모아카에니스(Streptomyces thermoarchaenis) NCIB 12015(참조 : GB 제 2166436A호)가 포함된다.

본 발명의 화합물은 구충제(anthelmintics), 체외구충제, 살충제 및 살비제로 특히 유용한 고활성 구충제이다.

즉, 본 화합물은 특히 선충으로 나타내는 기생충 그룹에 의해 가장 빈번하게 야기되고, 돼지, 양, 말 및 소 뿐아니라 가축 및 가금에 심각한 피해를 입힐 수 있는 기생충 등을 포함하는, 체내기생충에 의해 야기된 여러 증상을 치료하는데 효과적이다. 본 화합물은 또한 여러 종류의 동물에 영향을 미치는 다른 선충[예를 들면 개의 디로필라리아(Dirofilaria)] 및 위장내 기생충[예를들면 안클로스토마(Ancylostoma), 네카토(Necator), 아스카리스(Ascaris), 스트롱길로이데스(Strongyloides), 트리키넬라(Trichinella), 카필라리아(Capillaria), 트리쿠리스(Trichuris), 엔테로비우스(Enterobius)] 및, 혈액 또는 다른 조직 및 기관에서 발견되는 기생충(예를들면 필라리아성 기생충 및, 스트롱길로이데스 및 트리키넬라의 장의 단계 기생충)을 포함하는 인간에게 전염될 수 있는 여러 기생충 방제에 효과적이다.

또한 본 화합물은 특히 진드기, 응애류(mites), 이, 벼룩, 금파리, 흡혈곤충 및, 양 또는 말에 영향을 미칠수 있는 이동 쌍시류 유충과 같은 동물 및 새의 절지체의 기생충을 포함하는 체외 기생충 방제에도 유용하다.

또한 본 화합물은 옥내 해충(예를들면 바퀴, 옷좀나방, 동글수시렁이 및 집파리) 및, 저장곡식과 농작물의 해충(예를들면 거미 응애류, 진디 및 쇄기벌레) 및 이동성 메뚜기목(예를들면 메뚜기) 방제에 유용한 살충제이다.

일반식(Ⅰ)의 화합물은 당면한 특정 용도 및 처리할 숙주동물 및 기생충 또는 해충의 특정한 종류에 적절한 제형으로 투여한다. 구충제(anthelmintic)로 사용할 경우, 이 화합물을 캡슐제, 환제(bolus), 정제 또는, 바람직하게는 액상음제(liguid drench), 또는 이와 다른 형태로 경구 투여할 수 있으며, 주사 또는 삽입관으로 투여할 수도 있다. 이러한 제형은 표준 수의학적 관행에 따라 통상적인 방법으로 제조한다. 즉, 캡슐제, 환제 또는 정제는 활성성분을 적절한 미분 희석제 또는, 추가로 붕해제 및/또는 결합제(예를들면 전분, 락토오즈, 탈크, 스테아린산 마그네슘 등) 함유 담체와 혼합시켜 제조할 수 있다. 음제 제형은 활성 성분을 분산제 또는 습윤제 등과 함께 수용액중에 분산시켜 제조할 수 있고, 주사 제형은 다른 물질(예를들면 용액을 혈액과 등장성으로 만들기에 충분한 염 또는 글루코우즈)을 함유할 수 있는 멸균 용액 형태로 제조할 수 있다. 이러한 제형은 처리할 숙주동물의 종류, 감염의 중증도 및 유형 및 숙주동물의 체중에 따른 활성성분의 중량에 의거하여 변화한다. 일반적으로 경구투여할 경우, 1 내지 5일간 단일 용량 또는 분할용량으로서 처리 동물 체중 kg당 약 0.001 내지 10mg의 용량이 바람직하지만, 이와 다소 다른 용량을 사용할 경우도 있으며 이는 본 발명의 범주에 속한다.

이와는 달리, 본 화합물은 동물 사료로 투여할 수도 있는데, 이렇게 하기 위하여 통상 동물 사료와 혼합시키는 농축사료 첨가제 또는 전혼합물(premix)을 제조할 수도 있다.

살충제 및 농작물 해충 방지제로서 사용할 경우, 본 화합물은 표준 농업 관행에 따라 스프레이, 산제, 유제 등으로 사용할 수 있다.

본 발명을 다음 실시예에서 예시하는 데, 실시예Ⅰ 내지 19는 일반식(Ⅰ) 화합물의 제조실시예이고, 실시예 20은 음제 제형화의 예이고, 실시예21 및 22는 본 화합물의 구충 및 살충 활성을 예시한다.

[실시예 1]

25-시클로펜틸-아버멕틴 A²

S. 아버미틸리스 NCIB 12121[기탁번호 : KFCC-10300, 기탁일 : 1986. 11. 3, 기탁기관 : 한국종균협회]의 사면배양(slope culture) 현탁액을 락토오즈(12.0g), 증류 용해약(8.0g) 및 효모 추출물(3.0g) 함유 배지(600ml)에 접종시키고, 3ℓ 플라스크에 넣고, 28℃에서 3일간 배양시킨다. 접종물을 사용하여, 20ℓ 발효기에 넣은 용성 전분(640g), 황산암모늄(32g), 인산수소이칼륨(16g), 염화나트륨(16g), 황산마그네슘·7H₂O(16g), 탄산칼슘(32g), 용성 효모 추출물(6.4g), 황산제 1철·7H₂O(0.016g), 황산아연·7H₂O(0.016g) 및 염화망간·4H₂O(0.016g) 함유 배지(16ℓ)에 접종시킨다. 250 r.p.m.으로 교반시키고 15ℓ/분으로 통기시키면서, 발효액을 28℃에서 배양시킨다. 24, 48 및 72시간 배양시킨후, 시클로펜탄 카복실산 나트륨염(1.6g)을 가하고, 120시간동안 계속 발효시킨다. 그후 균사체를 여과에 의해 분리하고, 아세톤 : 1N 염산(100 : 1, 7ℓ씩 3회)으로 추출한다. 추출물을 감압하에서 약 2ℓ로 농축시키고, 메틸렌 클로라이드(5ℓ씩 2회)로 추출한다. 메틸렌 클로라이드 추출물을 농축 건고시켜, 유동성 오일인 조생성물을 수득하고, 디에틸에테르에 용해시키고, 실리카겔(1kg) 컬럼에 가한다. 이 컬럼을 디에틸에테르로 용출시켜 분획(100ml)을 모은다. 분획 20 내지 40을 합하고, 용매를 증발시켜, 부분적 정제된 물질을 수득한다. 이 생성물을 메탄올 : 물(4 : 1) 혼합물물에 용해시키고, 유속 100ml/분으로 동일 용매를 사용하여 Waters Preps 500 고압 액체 크로마토그라피 C18 Micro-Bondapack 컬럼(50mm×50cm)상에서 크로마토그라피한다. 목적하는 생성물 함유 분획 35 내지 50을 합하여, 유속 9ml/분으로 메탄올 : 물(4 : 1) 혼합물을 용출액으로 사용하여 C18 Zorbax ODS(상표, Dupont) 컬럼(21mm×25cm)상에서 재크로마토그라피시킨다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시켜, 흰색 분말인 R¹이 CH이고, 이중결합이 부재하며, R²가 시클로펜틸이고, R³가 CH₃이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 150.5 내지 151℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법 및 C₁₃핵자기 공명 분광법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리에틸렌 글리콜의 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 939(이론치 939)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 335, 317, 275, 257, 251, 233, 205, 181, 179, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

중클로로포름중 샘플(20mg/ml)로 Brucker 모델 WM-250 분광기상에서 13C 핵자기 공명 분광자료를 얻는다. 테트라메틸실란을 기준으로한 화학적 이동(ppm)은 14.1, 15.3, 17.8, 18.5, 19.9, 20.3, 24.6, 25.9, 26.2, 29.3, 34.4(2C), 34.7, 36.7, 37.8, 39.8, 40.5, 41.0, 41.3, 45.8, 56.4, 56.6, 57.8, 67.4 : 67.6, 68.0, 68.3, 68.7, 69.9, 70.5, 76.0, 77.6(2C), 78.3, 79.5, 80.7(2C), 81.8, 94.9, 98.7, 99.8, 117.7, 118.5, 119.8, 125.0, 135.8, 136.3, 137.8, 140.1 및 173.8이다.

[실시예 2]

S. 아버미틸리스 ATCC 31271의 사면 배양 현탁액을 락토오즈(1.0g), 증류 용해액(0.75g) 및 효모추출액(0.25g) 함유 배지(50ml)에 접종시키고, 28℃에서 3일간 배양시킨다. 이 접종물(4ml)을 사용하여, 350ml 플라스크에 넣은 옥수수 전분(2.0g), 콩가루(0.35g) 및 효모 추출물(0.25g) 함유 배지(50ml)를 각각의 플라스크 50개에 접종시키고, 이 플라스크를 28℃에서 배양시킨다.

24시간 배양시킨후, 시클로펜탄 카복실산 나트륨염(5mg)을 각각의 플라스크에 가하고, 5일간 더 계속 배양시킨다. 그후, 플라스크의 내용물을 벌크(bulk)시키고, 균사체를 원심분리에 의해 분리시킨다. 균사체를 아세톤 : 1N 염산(100 : 1)으로 추출하고, 아세톤 추출물을 농축 건고시킨다. 추출물을 고압 액체 크로마토그라피로 분석하면, 실시예1의 생성물과 동일한 생성물을 함유하는 것으로 나타난다.

[실시예 3]

실시예1과 같이 제조된 접종물을 사용하여, 350ml 플라스크에 넣은 실시예1에서 사용된 바와 같은 배지(50ml)에 접종시킨다. 24시간 배양시킨후, 2-아미노-시클로펜틸 아세트산(시클로펜틸글리신)(5mg)을 가하고, 5일간 더 계속 발효시킨다. 균사체를 아세톤 및 메틸렌 클로라이드로 추출하여 생성물을 회수한다. 추출물을 HPLC로 분석하면, 실시예1의 생성물과 동일한 생성물을 함유하는 것으로 나타난다.

[실시예 4]

실시예3의 방법으로, 단, 기질로서 시클로펜틸메탄올을 사용하여 비슷한 결과를 수득한다.

[실시예 5]

실시예3의 방법으로, 단, 기질로서 메탄올에 용해된 시클로펜탄 카복실산의 메틸에스테르를 사용하여 비슷한 결과를 수득한다.

[실시예 6]

실시예3의 방법으로, 단, 기질로서 메탄올에 용해된 시클로펜탄 카복실산을 사용하여 비슷한 결과를 수득한다.

[실시예 7]

25-(티엔-3-일)아버멕틴

S. 아버미틸리스 NCIB 12121[기탁번호 : KFCC-10300, 기탁일 : 1986. 11. 3, 기탁기관 : 한국종균협회]의 사면 배양 현탁액을 3l 플라스크에 넣은 락토오즈(12.0g), 증류 용해액(8.0g) 및 효모 추출물(3.0g) 함유 배지(600ml)에 접종시키고, 28℃에서 3일간 배양시킨다. 이 접종물을 사용하여 20l 발효기에 넣은 용성 전분(640g), 황산 암모늄(32g), 인산수소이칼륨(16g), 염화나트륨(16g), 황산마그네슘·7H₂O(16g), 탄산칼슘(32g), 용성 효모 추출물(64g), 황산제1철·7H₂O(0.016g), 황산아연·7H₂O(0.016g) 및 염화망간·4H₂O(0.016g) 함유 배지(16l)에 접종시킨다. 250 r.p.m.으로 교반시키고 15l/분으로 통기시키면서, 발효액을 28℃에서 배양시킨다. 24, 48 및 72시간 배양시킨후, 티오펜-3-카복실산 나트륨염(1.6g)을 가하고, 120시간 동안 계속 발효시킨다. 그후 균사체를 여과에 의해 분리하고, 아세톤 : 1N 염산(100 : 1.71ℓ씩 3회)으로 추출한다. 추출물을 감압하에서 약 2l로 농축시키고, 메틸렌 클로라이드(5l씩 2회)로 추출한다. 메틸렌 클로라이드 추출물을 농축 건고시켜, 유동성 오일인 조생성물을 수득하고, 디에틸에테르에 용해시키고, 실리카겔(1kg) 컬럼에 가한다. 이 컬럼을 디에틸에테르로 용출시켜 분획(200ml)을 모은다. 분획 32 내지 45를 합하고, 용매를 증발시켜, 부분적 정제된 물질을 수득한다. 이 생성물을 메탄올 : 물(3 : 1) 혼합물에 용해시키고, 유속 100ml/분으로 동일 용매를 사용하여 Waters Preps 500 고압 액체 크로마토그라피 C18 Micro-Bondapack 컬럼(500mm×50cm)상에서 크로마토그라피한다. 목적하는 생성물 함유 분획 27 내지 36을 합하여, 유속 9ml/분으로 메탄올 : 물(3 : 1) 혼합물을 용출액으로 사용하여 C18 Zorbax ODS(상표 Dupont) 컬럼(21mm×25cm)상에서 재크로마토그라피시킨다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시켜, 흰색 분말인 R¹이 OH이고 이중결합이 부재하며 R²가 티엔-3-일이고 R³가 CH₃이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 167℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리에틸렌 글리콜의 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 953(이론치 953)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 349, 331, 275, 265, 257, 247, 237, 219, 195, 145, 127, 113, 95 및 87이다.

[실시예 8]

-60℃에서 10용적% 수성 글리세롤(2ml)중 보유시킨 S. 아버밀리스 NCIB 12121[기탁번호 : KFCC-10300, 기탁일 : 1986. 11. 3, 기탁기관 : 한국종균협회]의 식물세포 현탁액을, 300ml 원뿔형 플라스크에 넣은 락토오즈(1.0g), 증류 용해물(0.75g) 및 효모 추출물(0.25g) 함유 배지(50ml)에 접종시키고, 흔들면서 28℃에서 24시간 동안 배양시킨다. 그후 이 접종물을 3l 플라스크에 넣은 상기 배지(600ml)에 가하고, 혼합물을 흔들면서 28℃에서 24시간동안 배양시킨다. 이 생성물을 사용하여 16l 발효기에 넣은 상기 배지(10l)를 350 r.p.m.으로 교반시키고 151/분으로 통기시키면서 28℃에서 24시간 동안 배양시킨다. 이 발효액(600ml)을 사용하여 20l발효기에 넣은 부분적 가수분해 된 전분(640g), 황산암모늄(32g), 인산수소이칼륨(16g), 염화나트륨(16g), 황산마그네슘·7H₂O(16g), 탄산칼슘(32g), 용성 효모 추출물(6.4g), 황산제1철·7H₂O(0.016g), 황산아연·7H₂O(0.016g) 및 염화망간·4H₂O(0.016g) 함유 배지(16l)에 접종시킨다. 350 r.p.m.으로 교반시키고 15l/분으로 통기시키면서, 발효액을 28℃에서 배양시킨다. 24, 28 및 72시간 배양시킨후, 시클로부탄 카복실산 나트륨염(1.6g)을 가하고, 120시간 동안 계속 발효시킨다. 그후 균사체를 여과에 의해 분리하고, 아세톤(7l씩 3회)으로 추출한다. 추출물을 감압하에서 약 21로 농축시키고, 메틸렌 클로라이드(5l씩 2회)로 추출한다. 메틸렌 클로라이드 추출물을 농축 건고시켜, 유동성 오일인 조생성물을 수득하고, 이소-옥탄(150ml)에 용해시키고, 메탄올 : 물(95 : 5) 혼합물(100ml)로 추출한다. 메탄올성 추출물을 증발시켜 부분적 정제된 물질을 수득하고, 다음과 같이 HPLC로 개별 성분으로 분리시킨다. 잔사를 소량의 메탄올에 용해시키고, 유속 100ml/분으로 메탄올 : 물(4 : 1) 혼합물을 사용하여 Waters Preps 500 고압 액체 크로마토그라피 C18 Micro-bandapack 컬럼(500mm×50cm)상에서 크로마토그라피한다. 분획 1 내지 4를 합하여 실시예9에서 사용하고, 분획 5 내지 9를 합하여 실시예10에서 사용하며, 실시예10 내지 19를 합하여 실시예11에서 사용하고, 분획 20 내지 35를 합하여 실시예12에서 사용한다.

[실시예 9]

25-시클로부틸-아버멕틴 B2(R¹=OH, R³=H)

실시예8의 분획 1 내지 4를 합하여 증발 건고시키고, 유속 9ml/분으로 메탄올 : 물(3 : 1) 혼합물을 용출액으로 사용하여 C18 Zorbax ODS(상표 Dupont) 컬럼(21mm×25cm)상에서 재크로마토그라피시킨다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시키고, 유속 4ml/분으로 메틸 클로라이드 : 메탄올(98 : 2) 혼합물을 용출액으로 사용하여 실리카 Spherisorb 5μ(상표, HPLC Technology) 컬럼(10.5mm×25cm)상에서 최종 정제시킨다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시켜, 흰색 분말인 R¹이 OH이고 이중결합이 부재하며 R²가 시클로부틸이고 R³가 H이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 110 내지 112℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다. : 고체 염화나트륨과 트리에틸렌 글리콜의 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 911(이론치 911)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 321, 303, 261, 257, 237, 219, 209, 191, 179, 167, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

[실시예 10]

25-시클로부틸-아버멕틴 A2(R¹=OH, R³=CH₃)

실시예8의 분획 5 내지 9를 합하여 증발 건고시키고, 잔사를 유속 9ml/분으로 메탄올 : 물(77 : 23) 혼합물을 용출액으로 사용하여 C18 Zorbax ODS(상표, Dupont) 컬럼(21mm×25cm)상에서 2회 재크로마토그라피시킨다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시켜, 흰색 분말인 R¹이 OH이고 이중결합이 부재하며 R²가 시클로부틸이고 R³가 CH₃이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 135 내지 140℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리엔틸렌 글리콜의 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 925(이론치 925)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 596, 454, 321, 303, 275, 237, 219, 191, 179, 167, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

[실시예 11]

25-시클로부틸-아버멕틴 B1(22, 23-이중결합 존재, R³=H)

실시예 8의 분획 10 내지 19를 합하여 증발 건고시키고, 잔사를 메탄올에 용해시키고, 유속 9ml/분으로 메탄올 : 물(4 : 1) 혼합물을 용출액으로 사용하여 C18 Zorbax ODS(상표, Dupont) 컬럼(21mm×25cm)상에서 재크로마토그라피한다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시켜 생성물을 수득하여, 유속 9ml/분으로 디클로로메탄 : 메탄올(98.5 : 1.5) 혼합물을 용출액으로 사용하여 실리카 Zorbax SIL(상표, Dupont) 컬럼(21mm×25cm)상에서 재크로마토그라피한다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시켜, 흰색 분말인 R¹이 부재하고 이중결합이 존재하며 R²가 시클로부틸이고 R³가 H이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 135 내지 138℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리에틸렌 글리콜의 샘플 매트릭스를 사용하여 VG모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 893(이론치 893)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 303, 261, 257, 219, 191, 167, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

[실시예 12]

25-시클로부틸-아버멕틴 A1(22, 23-이중결합 존재, R³=CH₃)

실시에 8의 분획 20 내지 35를 합하여 증발 건고시키고, 잔사를 유속 9ml/분으로 C18 Zorbax ODS(상표, Dupont) 컬럼(21mm×25cm)상에서 크로마토그라피한다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시키고, 생성물을 유속 4ml/분으로 디클로로메탄 : 메탄올(98.5 : 1.5) 혼합물을 용출액으로 사용하여 실리카 Spherisorb 5μ(상표, Dupont) 컬럼(10.5mm×25cm)상에서 재크로마토그라피한다. 관련 분획을 모으고, 용매를 증발시켜, 흰색 분말인 R¹이 부재하고 이중결합이 존재하며 R²가 시클로부틸이고 R³가 CH³이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 120 내지 124℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리에틸렌글리콜의 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 907(이론치 907)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 578, 303, 275, 257, 219, 191, 167, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

[실시예 13]

25-(시클로헥스-3-에닐)아버멕틴 A2

실시에 1의 배지 및 조건으로, 단, 기질로서 3-시클로헥세노산 나트륨염을 사용하여 흰색 분말인 R¹이 OH이고 이중결합이 부재하여 R²가 시클로헥스-3-에닐이고 R³가 CH₃이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 131 내지 135℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리에틸FPS 글리콜의 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 951(이론치 951)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 624, 480, 347, 329, 275, 263, 245, 235, 217, 205, 193, 179, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

[실시예 14]

25-시클로헥실 아버멕틴 A2

실시예 1의 배지 및 조건으로, 단, 기질로서 시클로헥산 카복실산 나트륨염을 사용하여 흰색 분말인 R¹이 OH이고 R²가 시클로헥실이며 R³가 CH₃이며 R⁴가 4'-(알파-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 112 내지 117℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리에틸렌 글리콜 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 953(이론치 953)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 624, 482, 349, 331, 275, 265, 247, 237, 219, 207, 195, 179, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

[실시예 15]

25-(1-메틸티오에틸)아버멕틴 A2

실시예 1의 배지 및 조건으로, 단, 기질로서 2-메틸티오프로판산 나트륨염을 사용하여, 흰색 분말인 R¹이 OH이고 R²가 1-메틸티오 에틸이고 R³가 OH이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 134 내지 138℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리에틸렌 글리콜의 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 945(이론치 945)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 341, 323, 275, 263, 257, 239, 211, 187, 179, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

[실시예 16]

25-(2-메틸시클로프로필)아버멕틴 A2

실시예 1의 배지 및 조건으로, 단, 기질로서 2-메틸시클로프로판 카복실산 나트륨염을 사용하여, 흰색 분말인 R¹이 OH이고 R²가 2-메틸시클로프로필이며 R³가 CH₃이며 R⁴가 4'-(알파-L-올레안드로실)-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다. 융점 : 147 내지 150℃. 생성물의 구조를 다음과 같이 질량 분석법으로 확인한다 : 고체 염화나트륨과 트리에틸렌 글리콜 샘플 매트릭스를 사용하여 VG 모델 7070F 질량 분석기상에서 고속 원자 충격 질량 분석법을 수행한다. m/e 925(이론치 925)에서 (M+Na)⁺가 관찰된다.

VG 모델 7070F 질량 분석기를 사용하여 전자 충격 질량 분석법을 수행한다. 주단편에 대한 m/e 값은 596, 454, 303, 275, 237, 219, 209, 191, 179, 167, 145, 127, 113, 111, 95 및 87이다.

[실시예 17]

실시예1의 방법으로, 단, 기질로서 시클로펜탄 카복실산 대신 다음 카복실산을 사용하여, R¹이 OH이고 이중결합이 부재하거나, 또는 이중결합이 존재하고, R¹이 부재하며, R³가 H 또는 OH이고, R⁴가 4-(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시인 일반식(Ⅰ)의 적절한 24-치환된 아버멕틴을 수득한다 : 2- 메틸발레르산, 2, 3-디메틸부티르산, 2-메틸헥사노산, 2-메틸펜트-4-에노산, 2-메틸펜타노산, 2-시클로프로필 프로피온산, 시클로헵탄 카복실산, 4, 4-디플루오로시클로헥산 카복실산, 4-메틸렌시클로헥산 카복실산, 3-메틸시클로헥산 카복실산, 시클로펜텐-1-카복실산, 1-시클로헥산 카복실산, 테트라하이드로피란-4-카복실산, 티오펜-2-카복실산, 3-푸로산 및 2-클로로-티오펜-4-카복실산.

[실시예 18]

25-시클로부틸-22, 23-디하이드로-아버멕틴 B1

벤젠중 실시예11의 생성물을 유럽 특허 제 0001689호의 방법으로 트리스(트리페닐포스핀)로듐(Ⅰ) 존재하에 수소화시켜, R¹이 H이고 이중결합이 부재하는 일반식(Ⅰ)의 상응하는 화합물을 수득한다.

[실시예 19]

13-데옥시-25-시클로펜틸-아버멕틴 A2-아글리콘

실시예1의 생성물을 실온에서 묽은 황산으로 처리하고, 생성된 아글리콘 생성물을 분리시키고, 디메틸포름아미드중 t-부틸디메틸실릴클로라이드와 반응시켜 23-o-t-부틸디메틸실릴 아글리콘 유도체를 제조한다. 이것을 4-디메틸아미노피리딘 및 디이소프로필에틸아민 함유 메틸렌클로라이드에 용해시키고, 얼음중에서 냉각시키고, 4-니트로벤젠설포닐 클로라이드가 적가 처리하여 13-클로로-13-데옥시 생성물을 수득한다. 이 생성물을 최종적으로 트리부틸주석 하이드라이드와 반응시켜 탈할로겐화시키고, 유럽 특허 제 0002615호에 기술된 방법으로 미량의 톨루엔설폰산 함유 메탄올로 탈보호시켜, R¹및 R⁴가 각각 H이고 R²가 시클로펜틸이며 이중결합이 부재하고 R³가 OH인 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득한다.

[실시예 20]

음제 제형화

상기 실시예의 생성물중 하나를 폴리에틸렌 글리콜(평균 분자량 300)에 용해시켜 음제 제형용 400μℓ/ml함유 용액을 수득한다.

[실시예 21]

구충(anthelmintic) 활성

생체내 스크린 시험을 사용하여 카에노하디티스 엘레강스(Caenorhabditis elegans)에 대해 구충 활성을 측정한다(참조 : K.G. Simpkin 및 G.L. Coles, Parisitology, 1979, 79, 19). 실시예 1, 7 및 9 내지 16의 생성물 0.1μg/ml를 사용하면 해충의 100%가 사멸한다.

[실시예 22]

살충활성

집파리 성충 무스카 도메스티카(Musca Domestica)를 이산화탄소로 마취시키고, 암컷 파리의 흉곽에 시험 화합물 함유 아세톤 0.1μl을 투여하는 표준 시험 방법을 사용하여 집파리에 대한 활성을 측정한다. 파리 1마리당 실시예 1, 7 및 9 내지 11의 생성물 0.01μg을 사용하면, 처리 파리의 100%가 사멸한다.

Claims

카복실산 또는 그의 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 그의 산화성 전구체를 아버멕틴(avermectin)-생성 균주의 발효액에 가하고, 목적하는 아버멕틴 유도체를 분리시킴을 특징으로하여, 아버멕틴 유도체(단, 25-위치에 이소프로필 또는 2급-부틸 그룹을 갖는 유도체는 제외)를 제조하는 방법.
스트렙토마이세스 아버미틸리스(Streptomyces avermitilis)의 아버멕틴-생성 균주를 일반식 R²CO₂H의 카복실산 또는 그의 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 그의 산화성 전구체 존재하에 발효시키고, R¹이 OH이고 이중결합이 부재하거나, 또는 이중결합이 존재하고, R¹이 부재하는 일반식(Ⅰ)의 화합물을 분리시킴을 특징으로 하여, 일반식(Ⅰ)의 화합물을 제조하는 방법.

상기식에서, 22 내지 23-위치의 점선은 이중결합이 존재하거나 부재함을 의미하며, 이중결합 부재시, R¹은 H 또는 OH이고 : 이중결합 존재시, R¹은 부재하며 : R²는 알파-측쇄 C₃-C₈알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시알킬 또는 알킬티오알킬 그룹 : C₅-C₈시클로알킬 알킬 그룹(여기에서 알킬 그룹은 알파-측쇄 C₂-C₅알킬 그룹이다) : C₃-C₈시클로알킬 또는 C₅-C₈시클로알케닐 그룹(이들은 비치환되거나 메틸렌, 또는 하나 이상의 C₁-C₄알킬 그룹 또는 할로원자로 치환될 수 있다) : 또는 포화 또는, 불포화 또는 부분적 불포화될 수 있고, 비치환되거나 하나 이상의 C₁-C₄알킬 그룹 또는 할로원자로 치환될 수 있는, 3 내지 6원 산소 또는 황-함유 헤테로시클릭의 환이고 : R³는 H 또는 메틸이며 : R⁴는 구조식

의 4'(알파-L-올레안드로실)-알파-L-올레안드로실옥시 그룹이며 : 단, R²가 알킬일 경우, R²는 이소프로필 또는 2급-부틸이 아니다.
제2항에 있어서, 균주가 스트렙토마이세스 아버미틸리스 NCIB 12121[기탁번호 : KFC-10300, 기탁일 : 1986. 11. 3, 기탁기관 : 한국종균협회]인 방법.
제2항에 있어서, 산을 염형태로 가하는 방법.
제2항에 있어서, R²가 비치환되거나 하나 이상의 C₁-C₄알킬 그룹으로 치환될 수 있는 C₅또는 C₆시클로알킬 또는 시클로알케닐 그룹인 방법.
제5항에 있어서, R²가 시클로펜틸인 방법.
제2항에 있어서, R²가 시클로부틸인 방법.
제2항에 있어서, R²가 3-티에닐인 방법.
제2항에 있어서, R²가 1-메틸티오 에틸인 방법.
제2항에 있어서, 이중결합이 존재하고 R¹이 부재하는 일반식(Ⅰ)의 화합물을 환원시켜 R¹이 H이고 이중결합이 부재하는 일반식(Ⅰ)의 화합물을 수득하는 단계를 추가로 포함하는 방법.