KR870001020B1 - 실리비닌 유도체의 제조방법 - Google Patents

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Description

실리비닌 유도체의 제조방법

제1도는 열적 피부 손상으로 인한 마이크로소말간 지질변화에 관한 지방산 분포를 나타낸다.

제2도는 임파구의 배자 발생에 대한 실리비닌-C-2',3-디하이드로겐숙시네이트의 디소듐의 영향을 나타낸다.

본 발명은 신규의 실리비닌 유도체와 그것의 제조방법과 그 약학적 조성물에 관한 것이다. 레이디스 엉겅퀴(Lady's thistle)(Silybum marianum)(L.) Gaertn. (Carduus marianus L.)은 오래전부터 공지되어 온 약용 식물이다. 이 식물의 열매중에 발견되는 플라보리그난으로부터 R. M

nster는 실리빈이라는 성분을 분리한바 있다(Dissertation R. M

nster, M

nchen, 1966 참조). 이 화합물의 화학구조는 A. Pelter와 R. M

nsen에 의해 밝혀졌다(Tetrahedron Letters, London, 25, 2911-2916/1968 참조). 또한 실리마린(Ⅰ)으로 불리우던 실리빈은 간장 치료 물질로 유효하다는 것이 밝혀졌다(독일특허출원 제1767666호 참조). 실리빈의 제조방법이 독일특허출원 제1923082에서 공지되었다.

1974년경에는 H. Wogner, P. Diesel과 M.Seitz(Arzneimittelforschung, 24(4),(466-471))가 실리빈에 대한 두개의 위치 이성질체, 즉 실리빈과 이소실리빈을 가정하였다. 이 가정이 추적되었고 A. Armone, L. Merlin와 A.Zanarotti(J. Soc. Chem. Chem. Comm., 16, 496-697/1079)에 의해 실험적으로 증명되었다. 이에 따라서, 공지된 실리빈은 두개의 다른 화합물, 즉, 하기구조식(A)와 (B)의 화합물로 이루어진다.

상기 구조식들로부터, 이 화합물들이 위치 이성질체임이 증명될 수 있다. 구조식(A) 화합물은 최근에 INN명으로 '실리비닌'으로 공지되었다. 본 발명에서는 구조식 (A) 화합물에 대하여 이 명칭을 사용한다.

실리빈의 치료학적 용도는 실리빈이 물에 불용성이어서 특정한 수용성이 필요한 경우에는 실리빈 함유 주사액 또는 제조물이 생산될 수 없는 문제를 가지고 있다.

독일특허출원 제1963318은 특정한 수용성을 가지는 실리빈 유도체를 설명하지만 이들은 숙신산의 세미에스테르의 매우 복잡한 혼합물이다. 이 혼합물에는 5개의 에스테르화성 수산기가 실리빈에 존재하고 그 실리빈은 또한 두 개의 상기 위치 이성질체를 가지며 에스테르화에 사용되는 숙신산은 하나의 모노에스테르뿐 아니라 디에스테르까지 생성할 수 있는 디카르복실산이므로 대단히 복잡하다.

약학적 목적에 있어서, 예상할 수 없이 많은 상이하고 분명치 않은 화합물들로 이루어진 제조물을 사용할 수는 없다.

그러므로, 약학적 목적에도 적합하고 화학적으로도 개개의 화합물로써 명확하게 특징이 규명되어 있는 수용성 실리빈 유도체를 제공하고자 하는 것이 본 발명의 목적이다.

본 발명가들은 특정한 알칸과 알킬렌디카르복실산의 실리빈 유도체가 이러한 요건에 충족되는 것임을 밝혔다.

따라서, 본 발명에 의하여 하기 일반식(Ⅰ)의 실리비닌 유도체가 제공된다 :

(여기서 n과 m은 각각 2이며 Alk₁과 Alk₂는 서로 같으면서 4 이하의 탄소원자를 갖는 알킬렌 라디칼 또는 2내지 4탄소원자를 갖는 알케닐렌 라디칼이며 M₁과 M₂는 서로 무관하게 수소원자 또는 알카리 금속원자이다)

일반식(Ⅰ)의 바람직한 화합물은 Alk₁과 Alk₂가 각각 메틸렌 라디칼이며 M₁과 M₂가 같은 알카리 금속원자인 것이다.

실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염이 특히 바람직하다.

본 발명에 의한 화합물의 경우에 실리비닌의 벤젠핵에 결합되지 않은 수산기는, 예컨대 옥살산, 말론산, 숙신산, 아디핀산, 말레인산 또는 푸마르산에 의해 부분적으로 또는 완전히 에스테르화된다. 실리비닌의 두개의 비 방향족성으로 결합된 수산기들이 상술한 카르복실산중 하나에 의해 단순히 에스테르화되는 것이 바람직하다.

본 발명은 또한, 상기 일반식(A)의 실리비닌 약 1중량부를 피리딘의 1 내지 2중량부에 용해시키고 교반중에 디카르복실산무수물(일반식 : O=C(Alk)_n-C=O, Alk는 상기의 Alk₁과 Alk₁라디칼중 하나임)와 반응시키며 균일 혼합물이 얻어질때까지 에탄올을 가하고 가하게 교반하면서 연속적으로 물을 혼합하면, 방향족으로 결합된 수산기에 에스테르가 가수분해되고 이 가수분해가 완결되자마자 그 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 에틸 아세테이트로 포화된 산성수로 세척, 그 에틸 아세테이트상을 증발시키고 그 잔사를 에탄올에 취하여 알카리금속 하이드록사이드의 알콜성용액을 유리의 비-에스테르화 카르복실산 잔기의 염으로 전환시키는 일반식(Ⅰ)의 신규 화합물의 제조방법을 제공한다. 디카르복실산 무수물과의 반응은 40 내지 50℃에서 바람직하게 실시된다. 에틸 아세테이트-포화된 산성수의 pH는 1.5 내지 2.4로 유지되는 것이 유익하다.

이들 화합물, 특히 실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 다소듐염은 놀랍게도 화상의 치료에서 뛰어난 약제학적 작용을 나타낸다. 또한, 상기 변화에도 불구하고 그들은 간 치료학적으로 공지된 실리빈의 완전한 약제학적 유효성을 보유한다. 그들은 특히 간 경화증과 독성-대사간 손상의 치료에 적합하다.

놀랍게도 본 발명에 의한 화합물은 또한 진균감염, 특히 그린 데스 캡(green death cap) 또는 데드리 아제릭(deadly ageric)(아마니타팔로이데스(Amanita phallo -ides))로 공지된 진균에 의한 대단히 위험한 감염치료에 특별히 유효한 것으로 증명되었다. 카본 테트라클로라이드, 트리클로로에틸렌, 클로로포름등과 같은 할로겐화 유기용매에 의한 중독이 또한 그로써 대단히 우수하게 치료될 수 있다. 질병예방학적용도에 경우에 본 발명에 의한 화합물은 상술한 피해를 방지한다.

그러므로, 본 발명은 또한 신규 화합물중 하나 이상을 약학적 허용고체 또는 액체희석제 또는 담체와 함께 함유하는 약한 조성물을 제공한다. 그들은 일반적으로 통상의 담체중에서 가능하면 통상의 매질과 함께 환약, 캡슐, 용액 등의 형태로 일반적으로 전신체상에 대하여 사용된다.

성인의 일일 투여분은 환자의 상태, 질병 증후의 정도에 따라서 약 50 내지 500㎎의 양이 된다.

실리비닌-C-2,3-디하이드로겐숙시네이트의 디소듐 (Sili-suc-na)의 실험

화상으로 인한 증상은 특히 열조직 괴사의 생성물에 의한 중독에 의해 발생된다. 심각한 피부 화상후의 자가 중독 과정은 그것에 의한 것임이 여러 방법으로 증명되어 왔다. 특히 건강한 동물과 화상 동물에 대한 화상과 비-화상 피부의 교차-이식으로써 화상 피부의 비화상 수용체는 사망하고 반면 비화상 피부의 화상 수용체는 어떠한 해로운 작용을 나타내지 않음이 증명되었다. (참조. K.H. Schmidt, New aspects of autointoxication after severe burnings: The burning disease; F.W. Ahnefeld et al., eds. pub. Springer Verlag, Berlin, pp.42∼52).

피부 화상의 경우에, 많은 화학 성분의 유리 또는 새로운 생성이 일어난다. 그것의 다수 구조에도 불구하고, 이들 화합물중 일부의 구조가 규명되는 것은 가능하다. 그중에서도 특히, 피부화상의 경우에 초래되는 화합물들은 지질과산화의 경우에 발생하는 화합물들과 유사성을 갖는다. 이들 물질들의 독성작용에도 또한 유사성이 있다.

특히 인상적인 것은 지질 과산화(Benedetti et al., Identification of 4-hydroxynonenal as a cytotoxic product originating from the peroxidation of liver microsomal lipids, Biochem. Biochem. Biophys. Acta, 620, 281∼296 /1980)와 열조직 손상(K.H. Schmidt et al., Studies on the structure and biological effects of pyrotoxins purified from burned skin, World J. Surg., 3,361-365/1979)의 결과로서 체인의 길이가 변화되는 독성으로 작용하는 포화 및 비포화 알데히드의 생성이다. 그러므로, 화상은 세포 구조의 산화성 손상을 초래함이 추정된다.

그러므로, 막지질의 자가 산화성 변화는 심각한 화상후의 자가중독의 결과로서 연구 조사되었다. 특히, 막 지질의 지방산 조성물의 변화가 연구조사되었다. 또한 본 발명의 실리비닌 유도체의 어느 정도의 양이 지방산 조성물중의 변화에 영향을 끼칠 것인가가 실험되었다.

심한 화상후의 막 지질의 지방산 조성물의 변화

평균 360g 체중의 암컷 위스터(wistar) 레트를 물과 건식(dry feed)에 자유롭게 접촉하도록 하여 세개그룹으로 나눈다. 실험 개시 이전까지, 실온은 22℃이며 실험 건시후에는 30℃로 유지시킨다.

일정 압력과 250℃ 온도로 20㎠의 표면적의 구리 스탭프를 사용하여 피부 화상을 입힌다. 심부기관에 대한 열손상을 막기 위하여 피부를 공냉식 스패튜러(air-cooled hollow spatula)에 노출시킨다. 매우 정확한 화상 외상은 일정한 생존률을 제공하는 동물 모델로써 이루어질 수 있다.

실험 개시전에, 그 동물을 50㎎/kg의 넴부탈로 마취시킨다. 화상후, 20㎖의 링거(Rnger) 락테이트를 쇼크 예방을 위해 경구 주입한다.

5개 실험군을 사용한다 :

a) 정상군 : 완전히 온전한 동물

b) 대조군 Ⅰ : 75.5mg의 실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염으로 6일간 실리비닌 치료.

c) 대조군 Ⅱ : 위(僞)조작된 동물

d) 화상동물군 : 25%, 250℃., 20초, 0.5기압

e) 실험군 : 화상전 1일부터 시작하여 6일동안 75.5mg의 실리비닌-C-2',3-디하이드로 겐숙시네이트의 디소듐염을 경구 투여한 동물.

실험기간 종식후, 마이크로솜의 분리를 위해 그 동물들을 마취하에 유혈시킨다. 연속적으로 간을 제거하여 칭량한 즉시 얼음 냉각 분리 매질(0.25M 사카로즈, 1mMEDTA, 10mMol 트리스. 염산, pH7.2)에 옮긴다. 간을 분쇄하고 매질질중에서 균질화시킨다. 마이크로솜 분획을 차등의 원심분리로 압착 결정화시킨다. 마이크로솜을 재 현탁시킨 후에 다시 원심분리한다. 연속적으로, 1g의 간 조직에 해당하는 1㎖의 현탁액을 제조한다.

그 지질을 J. Folch의 방법(Asimple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues, J. biol. Chem., 226, 497-508/1957)과 Bligh와 Dyer의 응용방법(A rapid method of total lipid extraction and purification, Can. J. Biochem. Physiol., 37, 911-917/1959)에 의해 측정한다.

추출된 마이크로소말 지질을 수용성 수산화나트륨 용액으로 비누화한다. 유리 지방산을 BF₃-메탄올을 부가함으로써 에스테르화한다. 메탄올의 증발과 친수성 부산물의 제거후에 그 지방산 에스테르를 정량 측정한다.

비화상군의 경우에, 어떠한 주목할만한 지방산의 변화도 확인되지 않았다. 따라서 마취와 제2의 조작적개재가 마이크로소말 지질의 변화를 결과하지 않는다. 이러한 이유로 해서 다른 비교를 위해 정상군과 이 대조군을 한 대조군으로 결합한다.

그들의 마이크로소말 지방산에 관한 비화상 및 화상동물의 비교는 일련의 비포화 지방산이 포화지방산으로 변화되었음을 나타낸다. 첨부된 제1도는 마이크로소말간 지질에서의 지방산 분포와 열적 피부 손상에 의한 변화를 나타낸다. 팔미트산(C 16)의 비율은 25.1로부터 화상후에는 총 지방산의 34.4%로 증가한다.

스테아르산(C 18)의 경우에 화상동물의 경우에서 그 비율은 그 대조 동물로써 얻어진 값보다 13.2%가 높은 46.3%이다. 올레산(C 18:1)의 경우에 약간의 미소한 감소가 검측되었다. 리놀레산(C 18:2)의 경우는 화상후 최초 값의 약 1/3으로 감소되었다. 마지막으로 아라키돈산(C 20:4)의 경우에 화상후 최초함량의 단지 31%만이 검출되었다.

하기표는 화상 및 비화상 동물에서 지방산 비율에 대한 실리비닌-C-2',3-디하드로겐숙시네이트의 디소듐염의 영향을 나타낸다.

본 발명에 의한 실리비닌 유도체로써의 처리는 비화상 대조동물의 경우에서는 비처리 동물과 비교할때 어떠한 중요한 변화를 일으키지 않음을 나타낸다. 화상동물의 경우에, 그 처리는 비포화 지방 손실의 완전한 제거를 초래한다.

간략하게, 하기와 같이 설명될 수 있다. 화상에 의하여 마이크로소말 지질의 지방산패턴은 변화된다. 이것은 막의 산화성 손상에 의한 것으로 가정된다. 이것은 특히 폴리-비포화 지방산의 현저한 감소에 의해 증명된다. 따라서, 본 발명에 의한 실리비닌 유도체는 산화성 세포 손상을 억제할 수 있다. 그러므로, 그들은 심각한 화상후 산화성 손상 기적을 방해하는데 특히 유효하다.

이미 언급된 바와 같이 심한 화상 후의 자기중독반응은 특히 산화적 세포 손상을 유도한다. 그러므로, 본 발명가들은 표준 열적 외상이 쥐의 비장 및 말초 혈액으로부터 PHA-유도의 T-임파구 배자발생에 어떠한 영향을 끼치는가를 연구하였다. 또한, 본 발명가들은 본 발명에 의한 실리비닌 유도체가 어떻게 심한 화상후 그러한 임파구 기능 장해에 영향을 미치는가도 연구하였다.

쥐(레트)의 비장 및 말초 혈액으로부터의 T-임파구의 식물응집소(PHA)-유도배자 발생에 대한 표정된(Standardised)열적 외상의 작용

위스터 쥐(Wister rat)의 등 피부에 상술한 방법에 따라 구리 스탭프로 화상을 입힌다. 대조군으로서, 화상없이 모든 조작과장을 실시한 위(僞)화상군을 이용한다. 2,4,7,9일 후에 혈액과 비장을 에테르 마취하에 그 화상군 및 대조군에 제거해낸다.

임파구의 분리를 위해, 헤파린화 혈액을 피콜-하이패크(Ficoll Hypaque)용액(농도 1.077)상에 피복시킨다. 연속적으로, 이것을 원심분리하고 산출된 임파구를 그들의 활력에 대하여 트립판 블루로 피검한다. 비장 임파구의 분리를 위해 그 기관을 분쇄하여 체를 통과시키고 게이(Gay)의 용해(Iysis)용액으로써 적혈구를 제거한다. 연속적으로, 용기 벽에서 점착에 의해 그 현탁액에서 모노-뉴클레아세포의 비율을 감소하기 위하여(5%) 30분간 5% 가열-불활성화된 태아 송아지 혈청의 존재하에 그 세포 혼합물을 용기내에 항은 보존시킨다. 배양을 위해서, 그 세포를 평편한 바닥의 마이크로타이터 플레이트에 놓는다. 20%의 태아 송아지 혈청을 첨가한다. 이 방법으로, 자발적인 배자 발생이 3H-티미딘-(2Ci/mM)과 그 세포의 DNA와의 결합측정에 의해 검사된다.

상기 실험에서, 최적 미토겐 자극에 5㎍/㎖의 PHA(미토겐 식물응집소)의 경우에 발생되는 것이 명백해졌다. 세포 테스트 시스템의 최적화를 위한 이들 실험의 경우에, 72시간후에 새로운 DNA합성의 최대자극이 발생됨이 또한 확인되었다. 또한, 그 최고의 자극을 얻기 위한 태아 송아지 혈청의 최적 농도는 20%로 또한 밝혀졌다.

전술한 바와 같이, 자발적인 배자발생은 세포의 DNA에의 3H-티미딘의 결합 측정으로 측정되었다. 그 세포를 3H-티미딘을 부가한지 18시간 후에 수거하는데 그로써 18시간동안의 영점은 최대자극의 시간 포인트와 일치한다.

본 발명에 의한 실리비닌 유도체의 작용에 대한 연구 조사를 위하여 레트 군을 실리비닌 유도체로 처리한다. 이 목적으로, 75.5mg의 실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염을 1일 1회 경구투여한다. 이 치료는 화상일로부터 그 기관이 제거되는 날까지(최대 9일) 실시한다.

대조군에서 얻은 결과와 실리비닌-C-2', 3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염 처리군으로 얻은 결과를 평가하기 위하여 자극지수를 계산한다. 이 수치는 대조표본의 평균값과 자극된 표본의 평균값의 몫을 나타낸다. 따라서, 각 실험군의 경우에서 얻은 자극지수로부터 각 동물군당 평균 자극지수가 계산된다. 산출된 결과는 지수로 나타낸다.

첨부된 제2도는 임파구의 배자 발생에 사용된 실리비닐-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염의 영향을 나타낸다. 화상동물의 경우에, 그 세포의 감소된 자극 능력은 실리비닌 유도체에 의해 현저하게 증가되었다.

이미 2일째에, 실리비닌-C-2,3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염 처리군의 경우에, 식물응집소에 대하여 약 10배 높은 혈액임파구의 반응성이 발견되었다. 화상 입힌 4일째에, 처리군에 대한 혈액)임파구의 경우에는 그 자극 지수값이 8이며, 비처리군의 경우에는 1.5이었다.

비장 세포의 경우에 화상의 비처리 군의 자극지수는 모두 현저하게 1미만이었다. 실리비닌 유도체의 투여로써 모든 조사일에 상당한 향상이 전개되었는데 7일째에 그 최대치가 발견되었다.

비교 실험을 또한 실시하는데, 건강한 동물의 경우에는 실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염만으로 비장 및 말초혈액으로부터 T-임파구의 식물응집소 유도 배자발생의 자극능에서 현저한 변화를 초래되지 않음이 나타났다.

따라서, 본 발명에 의한 실리비닌 유도체는 화상 동물의 임파구의 배자발생을 현저히 촉진시킨다.

또한 본 발명의 실리비닌 유도체로 처리된 동물의 경우에, 일반적인 이화작용이 저하되는데, 이유는 화상후에 그 동물은 다시 빠르게 체중이 증가되기 때문이다.

진균 감염

의학에서 가장 심각한 것으로 알려진 것은 데드리 아제릭(아마니타 팔로이데스 (Amanita phalloides))에 의한 것이다. 모든 진균감염 중 단지 10 내지 30%만이 아마니터 팔로이데스(Amanita phalloides)에 의해 발생될지라도, 그 진균의 감염은 항상 그것의 위험성때문에 대단히 큰 의학적 관심이 되고 있다. 구 문헌들에서, 그 치명률이 30 내지 50%로 서술되어 있다.

현대의 점진적인 의학 덕분에, Floersheim 등의 205명 환자에 대한 집단연구에 따르면, 이 값은 평균 22.4%로 감소되었다.

아마니타팔로이데스로부터의 독성인 아마니틴(amanitin)은 7mg 양으로도 성인에게 치명적일 수 있는데, 이 양은 약 50g의 신선한 진균에 존재한다.

일련의 동물실험후, 그 활성물질 실리비닌-C-2',3-디하이드로겐숙시네이트의 디소듐염은 아미니타팔로이데스에 의한 감염치료에 사용되었다.

아미니타팔로이데스 감염환자 28을 통상의 치료방법에 부가하여 실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염으로 치료하였다. 이들 28명 환자중, 단지 한명만이 사망했는데 그는 자살 기도로써 격심하게 많은 양의 진균으로 감염되었었다. 이 결과는 이 분야에서 막대한 치료학적 진보를 나타내는 것이다.

이소실리비닌의 없는 실리비닌의 제조

2kg의 메탄올(약 2.53ℓ) 중의 독일특허출원 제1923082(참조. 컬럼 8, 라인 14-19)에 의한 생산물 500g과 약 70% 함량의 실리마틴과 약 3:1:1 실리빈/실리디아닌/실리크리스틴(그 실리빈은 1/3의 이소실리빈 함유)의 현탁액을 교반하면서 15분간 가열, 비등시킨다. 이후에 약간의 실리비닌이 산출된 용액에서 이미 침전될 수 있다. 연속적으로 0.75 내지 1.25kg(약 0.96-1.581)의 메탄올을 진공하에 제거하고 그 잔사를 주변온도에서 10 내지 28일동안 정치시킨다. 침전된 실리비닌을 여과 제거하고 50㎖의 냉메탄올로 2회 세척한다. 40℃ 진공에서 건조시킨후, 그 분리된 조 실리비닌을 다시 하기와 같이 정제한다.

60g의 조 실리비닌을 가열하면서 공업 등급의 에틸아세테이트 31에 용해시킨다. 연속적으로, 20g의 활성목탄을 그에 가하고 그 혼합물을 다시 2시간동안 교반하면서 환류하에 가열시킨다. 그후, 여과로 정제하고 감압하에서 그 용액을 50℃에서 250㎖로 증발시킨다.

그 농축액을 울트라-투렉스(Uitra Turrax)기기를 사용하여 15분간 교반시키고 25㎖의 메탄올과 함께 교반중에 혼합한다. 연속적으로, 그 혼합물을 주변온도로 하룻밤 정치시킨다. 침전된 실리빈을 흡입으로 여과하기 전에, 5분간 울트라-투렉스 (UItra Turrax)기기로서 다시 교반을 실시한다.

흡입-여과된 침전물을 50㎖의 에틸아세테이트로 2회 세척하고 40℃, 진공 건조 캐비넷에서 하룻밤 건조시킨다. 산출된 생성물을 분쇄하고 다시 같은 조건하에 48시간동안 건조시켰다.

하기 실시예들은 본 발명의 예시를 위한 것들이다.

[실시예 1]

실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 제조

50g의 실리비닌을 45℃에서 70㎖ 피리딘에 용해하고 무수물을 그에 가한후, 그 혼합물을 8시간동안 45℃에서 교반하고 30㎖의 에탄올을 그에 가한후 그 혼합물을 다시 교반하여 균일한 혼합물을 얻는다. 연속적으로, 60㎖의 물을 강하게 교반하면서, 30분 이내에 가하여 페닐에스테르를 비누화한다. 30℃에서 약 1시간동안 교반한 후, 페닐 에스테르를 정량적으로 가수 분해한다. 그 가수분해의 완료는 HPLC로써 피검된다. 가수분해는 그 반응 혼합물에 1.71의 에틸 아세테이트를 빠르게 가함으로써 정지시킨다.

과량의 숙신산과 피리딘의 분리를 위하여 에틸 아세테이트로 희석한 그 반응 용액을 5ℓ의 물을 역류시켜 2회 추출하며 에틸 아세테이트로 포화시키며, 1.85의 pH를 만든다(희석된 수용성 염산으로 조절). 에틸 아세테이트-포화, 산성화 세척 수를 사이클카운터로 희석된 반응 용액으로 펌프시키고 이 pH 값이 에틸 아세테이트 통과후 일정하게 될때까지 희석염산을 가하여 pH를 1.85로 유지시킨다.

연속적으로, 과량의 염산세척을 위해, 에틸 아세테이트 상을 3.4ℓ의 물 역류로써 2회 추출시키고 에틸 아세테이트로 포화시킨다. 세척수의 pH값이 4.5 이상이 되자마자, 그 유기상을 정량적으로 분리시키고 40 내지 50℃, 진공에서 증발시켜 최초 부피(약 0.2ℓ)의 1/12이 되게 하여 125㎖ 에탄올에 희석시킨다.

그 표제 화합물을 에탄올/물로 재침전시켜 얻고 50℃, 진공에서 15시간동안 건조시킨다.

분석 표본 제조를 위하여, 그 표제화합물을 에탄올/물로부터 3회 재침전시켜 연속적으로 15시간동안 50℃, 진공하에 건조시킨다.

FD 질량 스펙트럼에서 그 분자 피크는 682의 예상 분자량에서 나타난다.

IR 스펙트럼은 CO의 원자가 진동수의 지역에서 두개의 겹침밴드를 나타나는데, 그중 하나는 또한 실리비닌의 경우에서와 같으며 1635cm^-1의 파장에서 피론링의 카르보닐 작용과 관련되는 것으로 보여진다. 두번째 밴드는 1730cm^-1이며, 두개의 에스테르 카르보닐 작용으로부터 기원된다.

1H-NMR 스팩트럼은 두배의 에스테르화가 일어났음을 증명한다. 따라서, 적분으로 측정된 숙신산 잔기의 메틸렌 양자에 대한 방향족 양자의 비는 8:8에 달한다 (ppm 범위 5.9-7.1), 메톡시 라디칼(ppm3.8)의 메틸 양자에 대한 이들 메틸렌 양자의 비는 8:3에 달하고 따라서 그것으로써 일치된다.

13C-조사의 경우에 화학적 치환은 또한 화학적 치환이 C₁₁에서 가장 강하게 그리고 인접한 탄소 원자 C₁₂-C₁₄와 C₂-C₄에서 변화하므로, 두개의 알콜성 수산기의 에스테르화가 일어남을 나타낸다.

원소분석

C₃₃H₃₀O₁₆(분자량 682.60)

계산치 : C 58.07% : H 4.4% ; O 37.50%

실측치 : 58.05% ; 4.57% ; 37.31%

[실시예 2]

실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염 제조

실시예 1의 에탄올성 용액에, -5 내지 9℃에서 교반, 냉각하면서 이 에탄올성 용액의 고체 함량에 대한 6%의 에탄올성 수산화나트륨용액을 가한다. 그 현탁액을 1시간동안 주변온도에서 다시 교반하고 베이지색 침전 고체를 흡입으로 여과하고 2회 각각 5내지 10분간 150㎖ 에탄올중에 투렉스(Turrax)를 사용하여 현탁시키고 다시 흡입으로 여과한다.

잔류 에틸 아세테이트 제거를 위해, 그 생성물을 연속적으로 14시간동안 280㎖의 에탄올중에 주변온도에서 현탁시키며 다시 흡입으로 여과시킨후 70㎖의 에탄올로 세척하여 40 내지 45℃ 진공 건조 캐비넷에서 15분간 건조시킨다. 건조된 생성물을 연속적으로 분쇄, 0.2mm 이하의 입자 크기로 체별하여 다시 40 내지 45℃에서 48시간동안 진공중에서 건조시킨다. 그로써 52g(이론의 69%)의 표제화합물이 산출된다.

그 표제화합물은 정확한 융점을 가지지 않는다. 약 80℃에서 이 화합물은 소결되기 시작하여 약 100℃에서 기포를 형성하면서 용융된다.

메탄올에서의 UV스펙트럼은 하기와 같다 :

λ=_max=288nm, ε=1.73.10₄.

표제 화합물의 분자량은 726.56이다. 이 화합물은 밝은 베이지색으로 미소결정 분말이며 특정한 냄새가 없고 짠맛이 있다. 이 화합물은 물에 쉽게 용해되며 에탄올에는 불충분하게 용해하며 아세톤, 디에틸에테르와 클로로포름에서는 실제적으로 불용성이다.

사용실시예

정맑투여를 위한 동결 건조제의 제조

실리비닌-C-2',3-디하이드로겐 숙시네이트의 디소듐염 75.0mg

만니톨 10.0mg

주사용 증류수 총 1.5㎖가 4되는 충분량

1.5㎖의 용액을 5㎖ 동공의 뾰족한 앰플에 넣고 공지 방법으로 냉동 건조시킨다. 보관 목적으로, 최종동결 건조제가 함유된 앰플을 공지방법으로 밀폐시킨다. 사용시에는 그 동결 건조제를 5㎖의 멸균된 생리적 염수액에 용해시켜 투명한 용액을 얻는다.

Claims (3)

1부의 하기 일반식(Ⅱ)의 실리비닌을 1 내지 2부의 피리딘에 용해하고 교반중에 1 내지 3부의 하기 일반식(Ⅲ)의 디카르복실산무수물과 반응시키며, 균일한 혼합물이 이루어질때까지 에탄올을 가하고 연속적으로 물을 가하여서 방향족으로 결합된 수산기의 에스테르를 가수분해하고 이 가수분해가 완결되자마자 그 혼합물을 메틸 세테이트로 희석한 후, 에틸아세테이트로 포화된 산성화 수로써 세척한 후에 에틸 아세테이트상을 증발시키고 난 잔사를 에탄올 중에 취하여 알콜성 수산화 알카리 금속용액으로써 유리 카르복실산 잔기 염으로 전환시키는 것을 특징으로 하는 하기 일반식(Ⅰ)의 실리비닌 유도체의 제조 방법.

(상기 식들에서 n과 m은 각각 2이며, Alk, Alk₁과 Alk₂는 서로 같으며, 4이하의 C원자를 가지는 알킬렌 라디칼 또는 2내지 4C 원자를 가지는 알케닐렌 라디칼이며, M₁과 M₂는 서로 무관하게 수소원자 또는 알카리 금속 원자임).

제1항에 있어서, 디카르복실산무수물과의 반응이 약 40 내지 50℃의 온도에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.

제1항 또는 제2항에 있어서, 그 에틸 아세테이트-포화, 산성화 수가 약 1.5내지 2.4의 pH로 유지되는 것을 특징으로 하는 방법.

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