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KR20240110891A - 동적 인간 중쇄 항체 라이브러리 - Google Patents

동적 인간 중쇄 항체 라이브러리 Download PDF

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KR20240110891A
KR20240110891A KR1020247022149A KR20247022149A KR20240110891A KR 20240110891 A KR20240110891 A KR 20240110891A KR 1020247022149 A KR1020247022149 A KR 1020247022149A KR 20247022149 A KR20247022149 A KR 20247022149A KR 20240110891 A KR20240110891 A KR 20240110891A
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KR
South Korea
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hvr
amino acid
acid sequence
seq
formula
Prior art date
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Application number
KR1020247022149A
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KR102907590B1 (ko
Inventor
피터 페이치 루오
얀 리
팡용 두
Original Assignee
아다진 인크.
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Publication date
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Abstract

본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 라이브러리가 제공되되, 상기 폴리뉴클레오타이드 중 하나는 특정 초가변 영역 HVR-H1 및 HVR-H2를 갖는 항체 중쇄를 암호화한다. 추가로 본 명세서에는 복수의 고유한 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 라이브러리가 제공되되, 각각의 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 또한 항체, 폴리펩타이드 라이브러리, 벡터 라이브러리, 세포, 비인간 동물, 항체 중쇄, 항체 라이브러리의 제조 방법, 키트, 및 이와 관련된 이중특이적 항체의 제조 방법이 제공된다.

Description

동적 인간 중쇄 항체 라이브러리{DYNAMIC HUMAN HEAVY CHAIN ANTIBODY LIBRARIES}
본 개시내용은 항체 중쇄(예를 들어, 동적 인간 항체(dynamic human antibody)의 중쇄)를 암호화하는 합성 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 라이브러리, 뿐만 아니라 이와 관련된 항체 중쇄, 항체, 세포, 동물, 방법, 및 키트에 관한 것이다.
단클론성 항체는 생물학적 연구, 의학적 진단 및 약제학적 제품을 비롯한 광범위한 분야에 매우 유용해졌다. 잠재적인 결합 특이성의 가변성은 가치있는 특이성 및 효력을 갖는 항체를 가능하게 한다. 그러나, 이러한 가변성은 목적하는 특성을 갖는 하나 이상의 항체를 식별하기 위해서 매우 많은 항체를 스크리닝하는 것을 어렵고 힘들게 한다.
관심대상 항체를 식별하는 한 방법은 항체 라이브러리, 예컨대, 클로닝된(cloned) B 세포 서열의 라이브러리, 파지 디스플레이 라이브러리(phage display library), 효모 디스플레이 라이브러리 등을 통해서 스크리닝하는 것이다. 이러한 라이브러리는 다수의 고유한 항체 서열을 나타내는 상당한 수의 항체를 통해서 스크리닝하는 것을 허용하여, 관심대상의 특정 특성, 예를 들어, 특정 표적에 대한 결합, 결합 친화도, 선택성 등을 갖는 항체를 식별할 수 있게 한다. 그러나, 현재 라이브러리는 특별한 한계를 갖는다. 생물학적 공급원, 예컨대, 인간 B 세포 레퍼토리로부터 유래된 라이브러리는 공급원으로부터 클로닝될 수 있는 항체 서열로 제한된다. 합성 라이브러리는 생물학적으로 유래된 라이브러리와 비교할 때 비자연 발생 서열을 포함할 수 있지만, 이것은 또한 특정 기간에 합성될 수 있는 항체의 양에 의해서 제한된다. 추가로, 매우 큰 라이브러리는 보다 시간 소모적이고, 철저한 스크리닝 접근법을 요구하고; 그렇지 않으면, 단지 일부의 라이브러리가 관심대상 항체에 대해서 실제로 스크리닝될 수 있다.
따라서, 잠재적으로 보다 기능적으로 관련된 동적 항체를 설계 및 작제하기 위해서 양호하게 정의된 개발 가능한 서열 프로파일을 갖는 동적 단위의 강력한 세트를 함유하는 동적 항체 라이브러리의 개발에 대한 요구가 존재한다. 이러한 라이브러리는 라이브러리 내의 항체 상의 항체 결합 부위의 다양화뿐만 아니라 주어진 항원 상의 항체를 보유하는 신규 및/또는 입체구조 에피토프에 대한 스크리닝의 효율성을 상당히 개선시킬 것이다. 추가로, 이러한 라이브러리는, 특정 관심대상 항체가 높은 친화도 및 개발 가능성 프로파일을 갖는 것으로 식별될 수 있는 가능성을 증가시킬 것이다.
특허 출원, 특허 공개 및 UniProtKB/Swiss-Prot 수탁 번호를 비롯한, 본 명세서에 인용된 모든 참고 문헌은, 각각의 개별 문헌이 구체적으로 그리고 개별적으로 참고로 포함되어 있는 것으로 제시된 것처럼 전문이 참고로 본 명세서에 포함된다.
상기 및 다른 요구를 충족시키기 위해서, 본 명세서에는 항체 서열, 예컨대, 동체 인간 항체를 가능하게 하는 중쇄 초가변 영역(HVR) 및 중쇄 가변 영역(예를 들어, VH 영역)이 개시된다. 이러한 서열은 높은 효력으로 표적에 결합할 수 있고/있거나 다수의 유용한 에피토프를 인식할 수 있고/있거나 낮은 서열 동일성(대략 60%의 서열 동일성 또는 그 미만)의 상이한 종에서 공유된 에피토프와 교차반응할 수 있는 고도로 유연성인 HVR 서열 루프를 갖는 항체가 허용되도록 설계되었다. 이롭게는, 이러한 항체 서열은 그럼에도 불구하고 다수의 유용한 항체를 함유하는 훨씬 더 작은 라이브러리 및/또는 주어진 라이브러리 크기에서 훨씬 더 넓은 다양성의 생성을 가능하게 한다. 이러한 라이브러리를 사용하여 광범위한 표적에 특이적이거나 일부 경우에 다수의 관심대상 표적에 대해서 교차 반응성인 새로운 관심대상 항체를 식별할 수 있다. 추가로, 새로 식별된 동적 단위를 사용하여 동적 항체 라이브러리를 설계 및 작제하여 작은 물리학적 라이브러리에서 항체 결합 부위의 다양한 입체구조 유연성을 얻기 위해서 신규 개념 및 방법을 본 명세서에 도입하고, 구현한다. 추가로, 이러한 항체(하기에 기재된 바와 같음)를 사용한 결과는 낮은 서열 동일성(예를 들어, 60% 내지 70% 미만)을 갖는 상이한 종으로부터의 주어진 항원 상의 입체구조 에피토프 및/또는 진화론적으로 보존된 부위를 표적으로 하는 이러한 라이브러리로부터 항체를 식별하는 능력을 강조한다.
따라서, 일 양상에서, 본 명세서에는 하나 이상의 HVR-H1 아미노산 서열 및/또는 이를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: 식 (I): X1TFX2X3YX4IHWV(서열번호 198)(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이며, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임); 식 (II): YSIX1SGX2X3WX4WI(서열번호 199)(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이며, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임); 및 식 (III): FSLSTX1GVX2VX3WI(서열번호 200)(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이며, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임). 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 하나 이상의 HVR-H2 아미노산 서열 및/또는 이를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되고, 여기서 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: 식 (IV): LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(서열번호 201)(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이며, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이며, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임); 식 (V): IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(서열번호 202)(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이며, 그리고 X3은 H 또는 Y임); 식 (VI): IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(서열번호 203)(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이며, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임); 식 (VII): VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(서열번호 204)(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이며, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임); 식 (VIII): IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(서열번호 205)(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이며, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임); 식 (IX): IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(서열번호 206)(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이며, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이며, 그리고 X5는 K 또는 N임); 및 식 (X): VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(서열번호 207)(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이며, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이며, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임). 일부 실시형태에서, HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: 식 (IV); 식 (VII); 식 (VIII); 식 (IX); 식 (XI): IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(서열번호 208)(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이며, 그리고 X3은 H 또는 Y임); 식 (XII): IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(서열번호 209)(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이며, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임); 및 (식 XII): VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(서열번호 210)(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이며, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이며, X5는 P 또는 S임). 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 하나 이상의 HVR-H3 아미노산 서열 및/또는 이를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 하나 이상의 HVR-L1 아미노산 서열 및/또는 이를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-L1은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 하나 이상의 HVR-L3 아미노산 서열 및/또는 이를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-L3은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 및 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 및 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 6, 10, 17, 29, 36 및 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하며, 여기서 HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1, 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2, 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4 중 적어도 2개(예를 들어, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 4개 모두)를 임의의 조합으로 포함한다. 일부 실시형태에서, FW-H3 서열은 서열번호 167의 R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 및 134로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 및 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 및 133으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하며, 여기서 HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1, 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2, 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4 중 적어도 2개(예를 들어, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 4개 모두)를 임의의 조합으로 포함한다. 일부 실시형태에서, FW-H3 서열은 서열번호 167의 R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 및 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 및 134로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 및 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 및 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 6, 10, 17, 29, 36 및 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 및 133으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는 약 6.5*104개 미만(예를 들어, 약 6.5*104개 미만, 약 5.5*104개 미만, 약 2.5*104개 미만, 약 1*104개 미만, 약 6700개 미만, 약 6660개 미만, 약 5000개 미만, 약 2500개 미만, 약 1000개 미만, 약 690개 미만, 약 500개 미만, 약 100개 미만, 약 50개 미만 등)의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)는 약 62272개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)는 약 60928개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)는 약 54656개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)는 약 6660개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)는 약 690개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 영역의 HVR-H1 및 HVR-H2 중 적어도 하나는 구조 결정 및/또는 컴퓨터 모델링에 의해서 검정되는 경우 다수의 입체구조를 채택한다.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하며, 여기서 HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1, 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2, 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4 중 적어도 2개(예를 들어, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 4개 모두)를 임의의 조합으로 포함한다. 일부 실시형태에서, FW-H3 서열은 서열번호 167의 R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 및 195로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는 전장 항체 중쇄를 암호화한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리는 항체 경쇄 가변 영역을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하되, 상기 HVR-L1은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고/하거나 HVR-L3은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 적어도 하나의 고유한 서열, 적어도 100개의 고유한 서열, 적어도 280개의 고유한 서열, 적어도 103개의 고유한 서열, 적어도 104개의 고유한 서열, 적어도 105개의 고유한 서열, 적어도 106개의 고유한 서열, 적어도 107개의 고유한 서열, 적어도 108개의 고유한 서열, 또는 적어도 약 109개의 고유한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역을 암호화하는 하나 이상의 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는 전장 항체 경쇄를 암호화한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 복수의 고유한 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)가 제공되며, 여기서 각각의 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 복수의 각각의 항체의 중쇄 가변 영역은 동일한 서열을 포함하고, 상기에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 중 임의의 것에 의해서 암호화된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 복수의 고유한 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 각각의 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 복수의 각각의 항체의 중쇄 가변 영역은 동일한 서열을 포함하고, 상기에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 중 임의의 것에 의해서 암호화된다.
일부 실시형태에서, 경쇄 가변 영역은 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하되, 상기 HVR-L1은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고/하거나 HVR-L3은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 항체의 경쇄 가변 영역은 적어도 하나의 고유한 서열, 적어도 100개의 고유한 서열, 적어도 280개의 고유한 서열, 적어도 103개의 고유한 서열, 적어도 104개의 고유한 서열, 적어도 105개의 고유한 서열, 적어도 106개의 고유한 서열, 적어도 107개의 고유한 서열, 적어도 108개의 고유한 서열, 또는 적어도 약 109개의 고유한 서열을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 중 임의의 것을 포함하는 벡터가 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 벡터를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 벡터 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 5개, 적어도 10개, 적어도 25개, 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 250개, 적어도 500개, 적어도 690개, 적어도 750개, 적어도 1000개, 적어도 2500개, 적어도 5000개, 적어도 6000개, 적어도 6500개 등)는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 벡터 중 적어도 2개는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 벡터 중 적어도 100개는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 벡터 중 적어도 500개는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 벡터 중 적어도 1000개는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 벡터 중 적어도 5000개는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 벡터 중 적어도 6500개는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 벡터를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 벡터 각각은 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 벡터는 발현 벡터이다. 일부 실시형태에서, 벡터는 디스플레이 벡터이다. 일부 실시형태에서, 벡터를 포함하는 라이브러리는 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 5개, 적어도 10, 적어도 25, 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 250개, 적어도 500개, 적어도 690개, 적어도 750개, 적어도 1000개, 적어도 2500개, 적어도 5000개, 적어도 6000개, 적어도 6500개 등)의 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 암호화하는 벡터를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 영역은 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하고, 여기서 HVR-L1은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고/하거나 HVR-L3은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 적어도 하나의 벡터는 적어도 하나의 고유한 서열, 적어도 100개의 고유한 서열, 적어도 280개의 고유한 서열, 적어도 103개의 고유한 서열, 적어도 104개의 고유한 서열, 적어도 105개의 고유한 서열, 적어도 106개의 고유한 서열, 적어도 107개의 고유한 서열, 적어도 108개의 고유한 서열, 또는 적어도 약 109개의 고유한 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 및/또는 벡터 중 임의의 것을 포함하는 세포가 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 세포의 집단을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 세포 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 5개, 적어도 10개, 적어도 100개, 적어도 103개, 적어도 104개, 적어도 105개, 적어도 106개, 적어도 107개, 적어도108개, 적어도 109개 등)는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 및/또는 벡터 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 세포 중 적어도 2개는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 및/또는 벡터를 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 세포 중 적어도 100개는 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 및/또는 벡터를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 세포의 집단을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 세포 각각은 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드 및/또는 벡터 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포는 박테리아, 효모 또는 포유동물 세포(예를 들어, 비인간 동물 세포 또는 단리된 인간 세포)이다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역이 제공되며, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 및 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 및 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 6, 10, 17, 29, 36 및 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하며, 여기서 HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1, 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2, 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4 중 적어도 2개(예를 들어, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 4개 모두)를 임의의 조합으로 포함한다. 일부 실시형태에서, FW-H3 서열은 서열번호 167의 R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역이 제공되며, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 중 여기서 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역이 제공되며, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 및 134로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 및 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 및 133으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하며, 여기서 HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1, 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2, 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4 중 적어도 2개(예를 들어, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 4개 모두)를 임의의 조합으로 포함한다. 일부 실시형태에서, FW-H3 서열은 서열번호 167의 R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역이 제공되며, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역이 제공되며, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 10개 등)는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 각각은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 식 (IV), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 및 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 및 134로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 및 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 및 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 6, 10, 17, 29, 36 및 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 및 133으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하며, 여기서 HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H1, 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H2, 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H3 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 FW-H4 중 적어도 2개(예를 들어, 적어도 2개, 적어도 3개 또는 4개 모두)를 임의의 조합으로 포함한다. 일부 실시형태에서, FW-H3 서열은 서열번호 167의 R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 및 195로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함한다.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역은 약 6.5*104개 미만(예를 들어, 약 6.5*104개 미만, 약 5.5*104개 미만, 약 2.5*104개 미만, 약 1*104개 미만, 약 6700개 미만, 약 6660개 미만, 약 5000개 미만, 약 2500개 미만, 약 1000개 미만, 약 690개 미만, 약 500개 미만, 약 100개 미만, 약 50개 미만 등)의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역은 약 62272개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역은 약 60928개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역은 약 54656개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역은 약 6660개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역은 약 690개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 영역의 HVR-H1 및 HVR-H2 중 적어도 하나는 구조 결정 및/또는 컴퓨터 모델링에 의해서 검정되는 경우 다수의 입체구조를 채택한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역 및 항체 경쇄 가변 영역이 제공되며, 여기서 항체 중쇄 가변 영역은 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 중 임의의 것이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역 및 항체 경쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 항체 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 5개, 적어도 10, 적어도 100 등)는 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 중 임의의 것이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역 및 항체 경쇄 가변 영역을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 항체 라이브러리 내의 중쇄 가변 영역 각각은 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 중 임의의 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하되, 상기 HVR-L1은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고/하거나 HVR-L3은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 경쇄 가변 영역은 적어도 하나의 고유한 서열, 적어도 100개의 고유한 서열, 적어도 280개의 고유한 서열, 적어도 103개의 고유한 서열, 적어도 104개의 고유한 서열, 적어도 105개의 고유한 서열, 적어도 106개의 고유한 서열, 적어도 107개의 고유한 서열, 적어도 108개의 고유한 서열, 또는 적어도 약 109개의 고유한 서열을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 도메인이 제공되며, 여기서 항원 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 도메인을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 항원 결합 도메인 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 5개, 적어도 10, 적어도 100 등)는 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 도메인을 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 항원 결합 도메인 각각은 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 도메인은 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역을 추가로 포함하며, 여기서 HVR-L1은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고/하거나 HVR-L3은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 도메인은 적어도 하나의 고유한 서열, 적어도 100개의 고유한 서열, 적어도 280개의 고유한 서열, 적어도 103개의 고유한 서열, 적어도 104개의 고유한 서열, 적어도 105개의 고유한 서열, 적어도 106개의 고유한 서열, 적어도 107개의 고유한 서열, 적어도 108개의 고유한 서열, 또는 적어도 약 109개의 고유한 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체가 제공되며, 여기서 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 항체 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 5개, 적어도 10, 적어도 100 등)는 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 항체를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 항체 각각은 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역을 추가로 포함하며, 여기서 HVR-L1은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고/하거나 HVR-L3은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체는 적어도 하나의 고유한 서열, 적어도 100개의 고유한 서열, 적어도 280개의 고유한 서열, 적어도 103개의 고유한 서열, 적어도 104개의 고유한 서열, 적어도 105개의 고유한 서열, 적어도 106개의 고유한 서열, 적어도 107개의 고유한 서열, 적어도 108개의 고유한 서열, 또는 적어도 약 109개의 고유한 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 약 6.5*104개 미만의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 약 5.5*104개 미만의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체는 약 62272개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체는 약 60928개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체는 약 54656개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체는 약 6660개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체는 약 690개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 영역의 HVR-H1 및 HVR-H2 중 적어도 하나는 구조 결정 및/또는 컴퓨터 모델링에 의해서 검정되는 경우 다수의 입체구조를 채택한다.
상기 실시형태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시형태에서, 항체는 약 10-7 내지 약 10-11M의 평형 해리 상수(Kd)로 적어도 1개의 표적에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항체는 약 60℃ 내지 약 90℃의 융점(Tm)을 갖는다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 하나 이상(예를 들어, 하나 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상 등)의 본 개시내용의 HVR을 포함하는 폴리펩타이드(예를 들어, 스캐폴드 폴리펩타이드)가 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리펩타이드를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리펩타이드 중 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 5개, 적어도 10개, 적어도 25개, 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 250개, 적어도 500개, 적어도 750개, 적어도 1000개, 적어도 2500개, 적어도 5000개, 적어도 6000개, 적어도 6500개 등)는 하나 이상의 본 개시내용의 HVR을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 폴리펩타이드를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 폴리펩타이드 각각은 하나 이상의 본 개시내용의 HVR을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 HVR-H1 서열(예를 들어, 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식; 및 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158에 따른 HVR-H1)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 HVR-H2(예를 들어, 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (X), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 식; 및 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164에 따른 HVR-H2)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 HVR-H3 서열(예를 들어, 서열번호 223 내지 256)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 HVR-L1 서열(예를 들어, 서열번호 257 내지 264)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 HVR-L3 서열(예를 들어, 서열번호 265 내지 274)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 및/또는 HVR-L3 서열 중 2개 이상(예를 들어, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 또는 5개 모두)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 상기에 기재된 바와 같은 폴리펩타이드 중 임의의 것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 라이브러리가 제공된다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 표면 상에 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함하는 파지가 제공되며, 여기서 적어도 하나의 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 항체 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 바와 같은 항원 결합 도메인 중 임의의 것이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 파지의 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리에서 적어도 1개(예를 들어, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 5개, 적어도 10개, 적어도 25개, 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 250개, 적어도 500개, 적어도 750개, 적어도 1000개, 적어도 2500개, 적어도 5000개, 적어도 6000개, 적어도 6500개 등)의 파지는 본 명세서에 기재된 항체 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함하는, 표면 상의 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 적어도 하나의 파지는 본 명세서에 기재된 바와 같은 항원 결합 도메인 중 임의의 것을 포함하는, 표면 상의 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 파지를 포함하는 라이브러리가 제공되며, 여기서 라이브러리 내의 파지 각각은 본 명세서에 기재된 항체 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함하는, 표면 상의 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 바와 같은 항원 결합 도메인 중 임의의 것이다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 본 명세서에 기재된 항체 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 암호화하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 라이브러리 중 임의의 것)를 포함하는 비인간 동물이 제공된다. 일부 실시형태에서, 비인간 동물은 본 명세서에 기재된 항체 중 임의의 것을 암호화하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 비인간 동물은 포유동물(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 낙타 또는 비인간 영장류)이다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 본 명세서에 기재된 바와 같은 라이브러리의 폴리뉴클레오타이드 서열 중 임의의 것을 제공하고, 조립하는 단계를 포함하는 라이브러리의 제조 방법이 제공된다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 표적에 결합하는 폴리펩타이드에 대해서 스크리닝하는 방법이 제공되며, 이 방법은 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드를 포함하는 라이브러리(예를 들어, 항원 결합 도메인의 라이브러리, 항체의 라이브러리, 파지의 라이브러리 등) 중 임의의 것을 표적과 함께 인큐베이션시키는 단계, 및 표적에 결합하는 라이브러리로부터 하나 이상의 폴리펩타이드를 선택하는 단계를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 항체 라이브러리의 제조 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 다수의 입체구조를 갖는 서열을 포함하는 1개, 2개 또는 3개의 중쇄 HVR을 선택하는 단계; 및 (b) 폴리뉴클레오타이드 서열을 조립하여 복수의 항체 중쇄 가변 영역 서열을 암호화하는 합성 폴리뉴클레오타이드의 라이브러리를 생성시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 복수의 항체 중쇄 가변 영역 서열 중 적어도 하나는 본 명세서에 기재된 중쇄 가변 영역 서열 중 임의의 것이다. 일부 실시형태에서, 복수의 항체 중쇄 가변 영역 서열 각각은 본 명세서에 기재된 중쇄 가변 영역 서열 중 임의의 것이다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 폴리펩타이드(예를 들어, 중쇄 가변 영역, 항체 중쇄, 항체, 스캐폴드 폴리펩타이드 등)의 제조 방법이 제공되며, 이 방법은 상기에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리, 벡터 및/또는 벡터 라이브러리 중 임의의 것을 포함하는 세포를 배양하여 폴리펩타이드를 생산하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드를 배양된 세포로부터 수집하고, 추가로 정제시킨다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 2개의 항체 중쇄 가변 영역 및 2개의 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 이중특이적 항체의 제조 방법이 제공되며, 이 방법은, (a) 제1 항원에 결합하는 제1 항원 결합 도메인에 대해서 스크리닝하는 단계로서, 여기서 제1 항원 결합 도메인은 제1 항체 중쇄 가변 영역 및 제1 항체 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 제1 항체 중쇄 가변 영역은 본 명세서에 기재된 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함하는, 상기 스크리닝하는 단계; (b) 제2 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인에 대해서 스크리닝하는 단계로서, 제2 항원 결합 도메인은 제2 항체 중쇄 가변 영역 및 제2 항체 경쇄 가변 영역을 포함하되, 여기서 제2 항체 중쇄 가변 영역은 제1 항체 중쇄 가변 영역과 동일한 서열을 갖는, 상기 스크리닝하는 단계; 및 (c) 제1 항원 결합 도메인 및 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 이중특이적 항체를 생산하는 단계를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 (a) 제1 중쇄 가변 영역 및 제1 경쇄 가변 영역을 포함하는 제1 결합 도메인으로서, 여기서 제1 결합 도메인은 제1 표적에 결합하는, 상기 제1 결합 도메인; (b) 제2 중쇄 가변 영역 및 제2 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 결합 도메인으로서, 여기서 제2 결합 도메인은 제2 표적에 결합하고, 여기서 제2 중쇄 가변 영역은 제1 중쇄 가변 영역 서열과 동일한 서열을 갖는, 상기 제2 결합 도메인을 포함하되; 여기서 제1 중쇄 가변 영역 및 제2 중쇄 가변 영역 각각은 본 명세서에 기재된 중쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 항체는 제1 경쇄 및 제2 경쇄를 포함하고, 여기서 제1 경쇄는 제1 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 경쇄는 제2 경쇄 가변 영역을 포함하며, 제1 경쇄 및 제2 경쇄 각각 모두는 카파 CL 도메인(예를 들어, 인간 카파 CL 도메인)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 항체는 제1 경쇄 및 제2 경쇄를 포함하고, 여기서 제1 경쇄는 제1 경쇄 가변 영역을 포함하고, 제2 경쇄는 제2 경쇄 가변 영역을 포함하며, 제1 경쇄 및 제2 경쇄 각각 모두는 람다 CL 도메인(예를 들어, 인간 람다 CL 도메인)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 항체는 제1 경쇄 및 제2 경쇄를 포함하고, 여기서 제1 경쇄는 제1 경쇄 가변 영역 및 카파 CL 도메인(예를 들어, 인간 카파 CL 도메인)을 포함하고, 제2 경쇄는 제2 경쇄 가변 영역 및 람다 CL 도메인(예를 들어, 인간 람다 CL 도메인)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 항체는 제1 경쇄 및 제2 경쇄를 포함하고, 여기서 제1 경쇄는 제1 경쇄 가변 영역 및 람다 CL 도메인(예를 들어, 인간 람다 CL 도메인)을 포함하고, 제2 경쇄는 제2 경쇄 가변 영역 및 카파 CL 도메인(예를 들어, 인간 카파 CL 도메인)을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 본 명세서에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리, 벡터 및/또는 벡터 라이브러리(또는 임의의 세포 또는 이를 포함하는 세포의 집단) 중 임의의 것을 포함하는 키트가 제공된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역, 중쇄 가변 영역 라이브러리, 항원 결합 도메인, 항원 결합 도메인 라이브러리, 항체, 항체 라이브러리, 폴리펩타이드(예를 들어, 스캐폴드 폴리펩타이드), 폴리펩타이드 라이브러리, 파지 및/또는 파지 라이브러리 중 임의의 것을 포함하는 키트가 제공된다.
상기 및 본 명세서에 기재된 다양한 실시형태의 특성 중 하나, 일부 또는 모두는 조합되어 본 개시내용의 다른 실시형태를 형성할 수 있음을 이해해야 한다. 본 개시내용의 이들 및 다른 양상은 당업자에게 자명할 것이다. 본 개시내용의 이들 및 다른 실시형태는 하기의 상세한 설명에 의해서 추가로 기재된다.
도 1A는 VH 도메인의 아미노산에 대한 잔기 수에 의한 엔트로피 플롯을 나타낸 도면. 인간 항체의 113개의 VH 구조를 사용하여 엔트로피를 계산하였다.
도 1B는 동일한 VH 서열에 대한 상보성-결정 영역(CDR)의 카밧(Kabat) 정의와 비교한 예시적인 항체 중쇄 가변 도메인(VH) 서열(서열번호 197)에 대해서 본 명세서에 사용된 초가변 영역(HVR)의 정의를 나타낸 도면.
도 2A는 항원 TAGT-1 내지 TAGT-12에 대한 결합이 확인된 fab에 대한 친화도 측정치를 나타낸 도면.
도 2B는 항원 TAGT-1 내지 TAGT-12에 대한 결합이 확인된 fab에 대한 융점(Tm) 측정치를 나타낸 도면.
본 개시내용은 항체 중쇄(예를 들어, 동적 인간 항체의 중쇄)를 암호화하는 합성(예를 들어, 비자연 발생) 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 라이브러리를 제공한다. 이롭게는, 본 명세서에 개시된 항체 중쇄는 다수의 관심대상 기질에 대한 특이성 및 보다 효과적인 기질 결합을 위한 고도로 유연성인 루프를 생성시키도록 설계된 HVR 서열을 포함한다. 이들 HVR 서열은 기존 기술보다 더 넓은 에피토프 커버리지를 갖는 더 작은 항체 라이브러리의 생성을 가능하게 한다.
I. 일반 기술
본 명세서에 기재되거나 언급된 기술 및 절차는 일반적으로 당업자에 의해서 종래의 방법, 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)]에 기재된 널리 사용되는 방법을 사용하여 양호하게 이해되고, 공통적으로 사용된다.
II. 정의
본 개시내용을 상세하게 기재하기 전에, 본 개시내용은 특정 조성물 또는 생물학적 시스템에 제한되지 않고, 물론 달라질 수 있음을 이해해야 한다. 또한 이러한 용어는 단지 특정 실시형태를 기재하는 목적을 위한 것이며, 제한을 의도하지 않음을 이해해야 한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용되는 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 나타내지 않는 한 복수의 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "분자"에 대한 언급은 2개 이상의 그러한 분자의 조합물 등을 선택적으로 포함한다.
용어 "약"은 본 명세서에 사용되는 바와 같이 관련 기술 분야의 당업자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상의 오차 범위를 지칭한다. 본 명세서에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 실시형태를 포함한다(그리고 이를 기재한다).
본 명세서에 기재된 본 발명의 양상 및 실시형태는 양상 및 실시형태를 "포함하는 것", 이들로 "이루어진 것" 및 이들로 "본질적으로 이루어진 것"을 포함하는 것으로 이해된다.
용어 "항체"는 본 명세서에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 그것이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 구체적으로 단클론성 항체(전장 단클론성 항체 포함), 다클론성 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 항체 단편(예를 들어, 단일-쇄 가변 단편 또는 scFv)를 포괄한다.
기본 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 이종사량체 당단백질이다. VH와 VL이 함께 쌍을 이루는 것은 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 항체의 상이한 부류의 구조 및 특성에 대해서는 문헌[Basic and Clinical Immunology, 8th Ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6]을 참고하기 바란다.
임의의 척추동물종으로부터의 L 쇄는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로, 카파("κ") 및 람다(λ)라고 불리는 2개의 명확하게 구별되는 유형 중 하나에 배정될 수 있다. 중쇄(CH)의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 면역글로불린은 상이한 클래스 또는 아이소타입에 배정될 수 있다. 5개 부류의 면역글로불린이 존재한다: 각각 알파("α"), 델타("δ"), 엡실론("ε"), 감마("γ") 및 뮤("μ")로 지정된 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM γ 및 α 클래스는 CH 서열 및 기능에서의 비교적 미미한 차이를 기초로 서브클래스(아이소타입)로 추가로 나뉘고, 예를 들어, 인간은 하기 서브클래스를 발현한다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2. 면역글로불린의 상이한 클래스의 소단위 구조 및 3차원 구성은 널리 공지되어 있고, 일반적으로 예를 들어, 문헌[Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders Co., 2000)]에 기재되어 있다.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄의 가변 도메인은 "VH"로 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 도메인은 "VL"로 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 항체의 가장 가변적인 부분이고, 항원-결합 부위를 함유한다.
용어 "카밧에서와 같은 가변 도메인 잔기 넘버링" 또는 "카밧에서와 같은 아미노산 위치 넘버링" 및 이의 변형은 상기 카밧 등의 문헌에서의 항체의 편찬물의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해서 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 이것 내의 삽입에 상응하는 보다 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후의 단일 아미노산 삽입 (카밧에 따른 잔기 52a), 및 중쇄 FR 잔기 82 후의 삽입된 잔기(예를 들어, 카밧에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카밧 넘버링은 항체의 서열을 "표준" 카밧 넘버링된 서열과 상동성 영역에서 정렬함으로써 주어진 항체에 대해서 결정될 수 있다.
카밧 넘버링 시스템은 일반적으로 가변 도메인의 잔기(대략 경쇄의 잔기 1 내지 107 및 중쇄의 잔기 1 내지 113)를 지칭하는 경우 사용된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]). "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 인덱스"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 잔기를 지칭하는 경우 사용된다(예를 들어, 상기 문헌[Kabat et al.]에 보고된 EU 인덱스). "카밧에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다.
용어 "불변 도메인"은 면역글로불린의 다른 부분, 즉, 항원 결합 부위를 함유하는 가변 도메인에 비해서 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인(총괄적으로, CH) 및 경쇄의 CHL(또는 CL) 도메인을 함유한다.
용어 "전장 항체"(용어 "무손상" 항체 또는 "전체" 항체는 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용될 수 있음)는 항체 단편에 상반되는 바와 같은, 실질적으로 무손상 형태의 항체를 지칭할 수 있다. 유사하게, 용어 "전장 항체 중쇄"(용어 "무손상" 항체 중쇄 또는 "전체" 항체 중쇄는 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용될 수 있음)는 항체 중쇄 단편에 상반되는 바와 같은, 실질적으로 무손상 형태의 항체 중쇄를 지칭할 수 있다. 구체적으로 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 갖는 것을 포함한다. 불변 도메인은 네이티브 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 네이티브 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에, 무손상 항체는 하나 이상의 효과기 기능을 가질 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 획득된 항체를 지칭하고, 즉 이러한 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역후 변형(예를 들어, 이성질체화, 아마이드화)을 제외하고는 동일하다. 단클론성 항체는 고도로 특이적이고, 단일 항원 부위에 대해서 지향된다. 상이한 결정기(에피토프)에 대해서 지향되는 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론성 항체 제제와 상반되게, 각각의 단클론성 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해서 지향된다. 수식어 "단클론성"은 항체의 특징이 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 획득된 것임을 나타내며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산이 필요하다는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 개시내용에 따라서 사용될 단클론성 항체는 예를 들어, 하이브리도마 방법(예를 들어, 문헌[Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3):253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2d ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)]), 재조합 DNA 방법(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참고), 파지-디스플레이 기술(예를 들어, 문헌[Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 101(34):12467-472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004)] 참고), 및 인간 면역글로불린 유전자좌 또는 인간면역글로불린 서열을 암호화하는 유전자 중 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생산하는 기술(국제 특허 공개 제WO 1998/24893호; 제WO 1996/34096호; 제WO 1996/33735호; 제WO 1991/10741호; 문헌[Jakobovits et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)]; 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 및 제5,661,016호; 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14:845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14:826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)] 참고)을 비롯한, 다양한 기술에 의해서 제조될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "초가변 영역(HVR)"은 서열에서 초가변성이고/이거나 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 하기 6개의 HVR을 포함한다; VH에서 3개(H1, H2, H3), 및 VL에서 3개(L1, L2, L3)(예를 들어, 문헌[Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003)] 참고). 각각의 VH 및 VL은 하기 순서로 아미노 말단에서부터 카복시 말단으로 배열된 3개의 HVR 및 4개의 프레임워크(FW) 영역으로 구성된다: FW1-HVR1-FW2-HVR2-FW3-HVR3-FW4. 본 개시내용 전체에서, 중쇄의 3개의 HVR은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3으로 지칭된다. 본 개시내용 전체에서, 중쇄의 4개 프레임워크 영역은 FW-H1, FW-H2, FW-H3 및 FW-H4로 지칭된다. 비교를 위해서, (본 명세서에서 사용되는 바와 같은) HVR의 정의는 도 1B에 도시된 예시적인 항체 중쇄 가변 도메인에 대한 상보성-결정 영역(CDR)의 카밧 정의와 상반된다(Yvonne Chen et al. (1999) "Selection and Analysis of an Optimized Anti-VEGF Antibody: Crystal Structure of an Affinity-matured Fab in Complex with Antigen", J. Mol. Biol. 293, 865-881).
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "라이브러리"는 공유된 클래스를 갖는 2개 이상의 엔티티의 세트를 지칭한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 라이브러리는 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드의 세트를 지칭할 수 있다. 용어 "라이브러리"는 가장 넓은 의미로 본 명세서에서 사용되며, 구체적으로 조합될 수 있거나 조합될 수 없는 하위라이브러리를 포괄한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "고유한"은 그 세트의 다른 구성원과 상이한 세트의 구성원을 지칭한다. 예를 들어, 항체를 암호화하는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 암호화하는 라이브러리로부터의 고유한 항체는 라이브러리에 의해서 암호화된 다른 항체에 의해서 공유되지 않은 특정 서열을 갖는 항체를 지칭할 수 있다. 실질적으로, 라이브러리의 물리학적 실현의 "고유한" 구성원은 하나를 초과하는 카피에 존재할 수 있음을 이해해야 한다. 예를 들어, 라이브러리는 복수의 "고유한" 항체를 함유할 수 있고, "고유한" 항체 분자 중 하나 이상은 하나를 초과하는 카피에서 발생할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "다양성"은 다양성 및/또는 이종성을 지칭한다. 예를 들어, 라이브러리 내의 항체의 다양성은 라이브러리에 존재하는 고유한 서열을 갖는 다양한 항체를 지칭할 수 있다.
용어 "폴리펩타이드", "단백질", 및 "펩타이드"는 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용되고, 2개 이상의 아미노산의 중합체를 지칭할 수 있다.
"폴리뉴클레오타이드", 또는 "핵산"은 본 명세서에서 상호 교환 가능하게 사용되고, 임의의 길이의 뉴클레오타이드의 중합체를 지칭하고, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오타이드는 데옥시리보뉴클레오타이드, 리보뉴클레오타이드, 변형된 뉴클레오타이드 또는 염기 및/또는 이의 유사체 또는 DNA 또는 RNA 중합효소에 의해서 또는 합성 반응에 의해서 중합체 내에 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예컨대, 메틸화된 뉴클레오타이드 및 이의 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 중합체의 조립 전 또는 후에 뉴클레오타이드 구조에 대한 변형이 부여될 수 있다. 뉴클레오타이드의 서열은 비-뉴클레오타이드 성분에 의해서 개재될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 합성, 예컨대, 표지에 대한 접합 이후에 생성된 변형(들)을 포함할 수 있다. 다른 유형의 변형은 예를 들어, "캡", 자연 발생 뉴클레오타이드 중 하나 이상의 유사체로의 치환, 인터뉴클레오타이드 변형, 예를 들어, 비하전된 링키지를 갖는 것(예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트라이에스터, 포스포아미데이트, 카바메이트 등) 및 하전된 링키지를 갖는 것(예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로다이티오에이트 등), 펜던트 모이어티를 함유하는 것, 예를 들어, 단백질(예를 들어, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩타이드, ply-L-라이신 등), 인터칼레이터를 갖는 것(예를 들어, 아크리딘, 프소랄렌 등), 킬레이터를 함유하는 것(예를 들어, 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화 금속 등), 알킬레이터를 함유하는 것, 변형된 링키지를 갖는 것(예를 들어, 알파 애노머성 핵산 등), 뿐만 아니라 폴리뉴클레오타이드(들)의 비변형된 형태를 포함한다. 추가로, 당에 보통 존재하는 히드록실기 중 임의의 것은, 예를 들어, 포스포네이트기, 포스페이트기에 의해서 대체될 수 있거나, 표준 보호기에 의해서 보호될 수 있거나, 추가 뉴클레오타이드에 대한 추가 링키지를 제조하도록 활성화될 수 있거나, 고체 또는 반고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH는 포스포릴화될 수 있거나 또는 아민 또는 1 내지 20개의 탄소 원자의 유기 캡핑기 모이어티로 치환될 수 있다. 다른 하이드록실은 또한 표준 보호기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 또한 예를 들어, 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴-, 2'-플루오로- 또는 2'-아자이도-리보스, 탄소환식 당 유사체, α-애노머 당, 에피머 당, 예컨대, 아라비노스, 자일로스 또는 라익소스, 피라노스 당, 푸라노스 당, 세도헵툴로스, 비환식 유사체 및 염기성 뉴클레오사이드 유사체, 예컨대, 메틸 리보사이드를 비롯한 관련 기술 분야에 일반적으로 공지된 리보스 또는 데옥시리보스 당의 유사한 형태를 함유할 수 있다. 하나 이상의 포스포다이에스터 링키지는 대안적인 연결기에 의해서 대체될 수 있다. 이러한 대안적인 연결기는 포스페이트가 P(O)S("티오에이트"), P(S)S("다이티오에이트"), (O)NR2("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH2("폼아세탈")(식 중, 각각의 R 또는 R'는 독립적으로 H 또는 에터(-O-) 링키지를 선택적으로 함유하는 치환된 또는 비치환된 알킬(1-20 C), 아릴, 알켄일, 사이클로알킬, 사이클로알켄일 또는 아르알딜임)인 실시형태를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 폴리뉴클레오타이드 내의 모든 링키지가 동일할 필요는 없다. 상기 설명은 RNA 및 DNA를 비롯한, 본 명세서에서 언급되는 모든 폴리뉴클레오타이드에 적용된다.
세포(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드 또는 합성 폴리뉴클레오타이드의 라이브러리를 포함하는 세포 또는 세포의 집단)는 폴리뉴클레오타이드 삽입물의 포함을 위한 벡터(들)에 대한 수용자일 수 있거나 수용자인 개별 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하고, 자손은 자연, 우연 또는 의도적인 돌연변이로 인해서 본래 모 세포와 반드시 완전히 동일할(모폴로지 또는 게놈 DNA 상보성에서) 필요가 없을 수 있다. 숙주 세포는 폴리뉴클레오타이드(들)(예를 들어, 본 개시내용의 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 합성 폴리뉴클레오타이드)로 생체내에서 형질주입된 세포를 포함한다.
"비인간 동물"은 인간으로서 분류되지 않은 임의의 동물, 예컨대, 가축, 농장 동물, 또는 동물원 동물, 스포츠 동물, 애완 동물(예컨대, 개, 말, 고양이, 소 등), 뿐만 아니라 연구에 사용되는 동물을 지칭한다. 연구 동물은 비제한적으로 선충, 절지동물, 척추동물, 포유동물, 개구리, 설치류(예를 들어, 마우스 또는 래트), 어류(예를 들어, 제브라피쉬 또는 복어), 조류(예를 들어, 닭), 개, 고양이 및 비인간 영장류(예를 들어, 레서스 원숭이, 시노몰거스 원숭이, 침팬지 등)를 지칭할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 동물은 항체를 생산하는 것이다.
III. 항체 라이브러리 및 라이브러리의 생성
본 개시내용의 특정 양상은 예를 들어, 항체 중쇄 가변 영역(VH) 또는 경쇄 가변 영역(VL)을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 라이브러리에 관한 것이다. 본 개시내용의 라이브러리는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 함유할 수 있고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 본 명세서에 기재된 HVR-H1 및/또는 HVR-H2 중 임의의 것이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 라이브러리는 전형적인 항체 라이브러리보다 더 적은 수의 고유한 중쇄 HVR 서열 및/또는 고유한 VH 서열을 함유한다. 이롭게는, 이러한 라이브러리는 감소된 라이브러리 크기로 인해서 보다 효율적인 스크리닝을 또한 허용하면서, 다수의 관심대상 항원 중 하나 이상에 결합하는 항체의 식별을 위해서 충분한 다양성을 제공할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 라이브러리는 약 10000개 미만, 약 9000개 미만, 약 8000개 미만, 또는 약 7000개 미만의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 이들로 이루어진다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 라이브러리는 약 6600개 이하의 HVR-H1 서열과 HVR-H2 서열의 고유한 조합물을 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 이들로 이루어진다.
일부 실시형태에서, 라이브러리는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 함유하는데, 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 본 개시내용의 항체 중쇄 가변 영역(예를 들어, 본 개시내용의 HVR-H1 및 HVR-H2를 포함함)을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200). 일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207). 일부 실시형태에서, HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210). 일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 그리고 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207). 일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 그리고 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210). 일부 실시형태에서, 라이브러리의 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드는 벡터(예를 들어, 발현 벡터 또는 디스플레이 벡터) 내에 존재한다.
일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 15개, 적어도 20개, 적어도 25개, 적어도 30개, 적어도 35개, 적어도 40개, 적어도 45개, 적어도 50개, 적어도 55개, 적어도 60개, 적어도 65개, 적어도 70개, 적어도 75개, 적어도 80개, 적어도 85개, 적어도 90개, 적어도 95개, 적어도 100개, 적어도 110개, 적어도 120개, 적어도 130개, 적어도 140개, 적어도 150개, 적어도 160개, 적어도 170개, 적어도 180개, 적어도 190개, 적어도 200개, 적어도 225개, 적어도 250개, 적어도 500개, 적어도 1000개, 적어도 1250개, 적어도 1500개, 적어도 1750개, 적어도 2000개, 적어도 2250개, 적어도 2500개, 적어도 2750개, 적어도 3000개, 적어도 3250개, 적어도 3500개, 적어도 3750개, 적어도 4000개, 적어도 4250개, 적어도 4500개, 적어도 4750개, 적어도 5000개, 적어도 5250개, 적어도 5500개, 적어도 5750개, 적어도 6000개, 적어도 6250개, 또는 적어도 6500개는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고/하거나: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고/하거나: (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207); 폴리뉴클레오타이드 중 약 6.5*104개 미만(예를 들어, 약 6.5*104개 미만, 약 5.5*104개 미만, 약 2.5*104개 미만, 약 1*104개 미만, 약 6700개 미만, 약 6660개 미만, 약 5000개 미만, 약 2500개 미만, 약 1000개 미만, 약 690개 미만, 약 500개 미만, 약 100개 미만, 약 50개 미만 등), 62272개 이하, 60928개 이하, 54656개 이하, 또는 6660개 이하는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 그리고 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207). 일부 실시형태에서, 라이브러리의 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드는 벡터(예를 들어, 발현 벡터 또는 디스플레이 벡터) 내에 존재한다.
일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 15개, 적어도 20개, 적어도 25개, 적어도 30개, 적어도 35개, 적어도 40개, 적어도 45개, 적어도 50개, 적어도 55개, 적어도 60개, 적어도 65개, 적어도 70개, 적어도 75개, 적어도 80개, 적어도 85개, 적어도 90개, 적어도 95개, 적어도 100개, 적어도 110개, 적어도 120개, 적어도 130개, 적어도 140개, 적어도 150개, 적어도 160개, 적어도 170개, 적어도 180개, 적어도 190개, 적어도 200개, 적어도 225개, 적어도 250개, 적어도 500개, 적어도 1000개, 적어도 1250개, 적어도 1500개, 적어도 1750개, 적어도 2000개, 적어도 2250개, 적어도 2500개, 적어도 2750개, 적어도 3000개, 적어도 3250개, 적어도 3500개, 적어도 3750개, 적어도 4000개, 적어도 4250개, 적어도 4500개, 적어도 4750개, 적어도 5000개, 적어도 5250개, 적어도 5500개, 적어도 5750개, 적어도 6000개, 적어도 6250개, 또는 적어도 6500개는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고/하거나: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 및/또는 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고/하거나: (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210); 폴리뉴클레오타이드 중 약 6.5*104개 미만(예를 들어, 약 6.5*104개 미만, 약 5.5*104개 미만, 약 2.5*104개 미만, 약 1*104개 미만, 약 6700개 미만, 약 6660개 미만, 약 5000개 미만, 약 2500개 미만, 약 1000개 미만, 약 690개 미만, 약 500개 미만, 약 100개 미만, 약 50개 미만 등), 62272개 이하, 60928개 이하, 54656개 이하 또는 6660개 이하는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하며, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 그리고 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210). 일부 실시형태에서, 라이브러리의 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드는 벡터(예를 들어, 발현 벡터 또는 디스플레이 벡터) 내에 존재한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는, 식 X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는, 식 X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는, 식 YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 19)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는, 식 YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는, 식 FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리 내의 폴리뉴클레오타이드는, 식 FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (X), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 여기서 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 및 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 여기서 HVR-H2는 서열번호 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 및 134로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 및 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 여기서 HVR-H2는 서열번호 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 및 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 6, 10, 17, 29, 36 및 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 여기서 HVR-H2는 서열번호 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 및 133으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드 라이브러리는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화하고, 여기서 HVR-H3은 관련 기술 분야에 공지된 임의의 HVR-H3이다. 일부 실시형태에서, HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 중쇄 HVR 서열은 본 개시내용의 라이브러리 내의 임의의 조합물로 포함될 수 있다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3의 3개를 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2.
특정 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3의 3개를 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3의 3개를 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 표 1에 열거되어 있다. 일부 실시형태에서, HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 및 195로 이루어진 군으로부터 선택된 서열, 또는 서열번호 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 및 195로부터 선택된 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 하기 식에 따른 HVR 사이에 병치된 가변 영역 중쇄 프레임워크 서열을 추가로 포함한다: (FW-H1)-(HVR-H1)-(FW-H2)-(HVR-H2)-(FW-H3)-(HVR-H3)-(FW-H4). 일부 실시형태에서, 프레임워크 서열 중 1개, 2개, 3개 또는 4개는 하기와 같다:
FW-H1은 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG(서열번호 165)이고,
FW-H2는 RQAPGKGLEW(서열번호 166)이고,
FW-H3은 TISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC(서열번호 167)이고,
FW-H4는 WGQGTLVTVSS (서열번호 168)이다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 167의 R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 갖는 교호하는 FW-H3 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 프레임워크 서열 중 1개, 2개, 3개 또는 4개는 서열번호 165의 FW-H1, 서열번호 166의 FW-H2, 서열번호 167의 FW-H3(R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 가짐) 및 서열번호 168의 FW-H4이다.
일부 실시형태에서, 라이브러리는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 함유하는데, 폴리뉴클레오타이드 중 적어도 하나는 항체 경쇄 가변 영역(예를 들어, HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함함)을 암호화한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 및 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리는 항체 경쇄 가변 영역의 적어도 1개, 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 250개, 적어도 500개, 적어도 103개, 적어도 104개, 적어도 105개, 적어도 106개, 적어도 107개, 적어도 108개, 적어도 109개, 적어도 1010개, 적어도 1011개 또는 적어도 1012개의 고유한 서열을 암호화하는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리는 항체 경쇄 가변 영역의 적어도 103개의 고유한 서열을 암호화하는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리는 항체 경쇄 가변 영역의 적어도 105개의 고유한 서열을 암호화하는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리는 항체 경쇄 가변 영역의 적어도 109개의 고유한 서열을 암호화하는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 다른 실시형태에서, 라이브러리는 1개의 항체 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리는 항체 경쇄 가변 영역의 적어도 1 내지 103개의 고유한 서열을 암호화하는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 대리인 참조 번호 69540-3000100, 69540-2000140 및/또는 69540-2000100(이들의 개시내용은 각각 전문이 참고로 본 명세서에 포함됨) 하에 출원된 특허 출원(들)에서 발견되는 항체 경쇄 가변 영역 중 임의의 것이다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 대리인 참조 번호 69540-3000100, 69540-2000140 및/또는 69540-2000100(이들의 개시내용은 각각 전문이 참고로 본 명세서에 포함됨) 하에 출원된 특허 출원(들)에서 발견되는 HVR-L1, HVR-L2 및/또는 HVR-L3 서열 중 임의의 것을 포함한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리의 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상은 전장 항체 중쇄(들)를 암호화한다. 다른 실시형태에서, 라이브러리의 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상은 중쇄 Fab 단편(들)을 암호화한다. 일부 실시형태에서, 라이브러리의 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상은 단일-쇄 가변 단편(들)을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 라이브러리는 복수의 고유한 항체를 암호화하는 복수의 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 일부 실시형태에서, 각각의 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 복수의 각각의 항체의 중쇄 가변 영역은 동일한 서열을 포함하고, HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2 중 적어도 하나 또는 적어도 2개는 본 개시내용의 HVR-H1 서열(예를 들어, X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 및 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158), 및 본 개시내용의 HVR-H2 서열(예를 들어, LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210); 및 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 본 명세서에 기재된 중쇄 HVR 서열은 하나 이상의 경쇄 가변 영역(들)을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 개시내용의 라이브러리 내에 임의의 조합물로 포함될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 라이브러리는 본 개시내용의 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 암호화하는 하나 이상의 벡터를 포함한다.
추가로 본 명세서에는 예를 들어, 본 개시내용의 라이브러리의 폴리뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드(들))을 제공하고, 조립함으로써 라이브러리를 제조하는 방법이 제공된다. 추가로 본 명세서에는 예를 들어, 다수의 입체구조를 갖는 서열을 포함하는 1개, 2개 또는 3개의 중쇄 HVR(예를 들어, 본 개시내용의 1개 또는 2개의 중쇄 HVR)을 선택하고, 폴리뉴클레오타이드 서열을 조립하여 복수의 항체 중쇄 가변 영역 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 라이브러리(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드)를 생성시킴으로써 라이브러리를 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 영역 서열은 인간 항체 서열이다. 일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, HVR-H1 및/또는 HVR-H2는 본 개시내용의 HVR-H1 서열(예를 들어, X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 및 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158), 및 본 개시내용의 HVR-H2 서열(예를 들어, LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210); 및 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항체 중쇄 가변 영역의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 중 적어도 하나는 다수의 입체구조를 채택하다. 일부 실시형태에서, 다수의 입체구조는 구조 결정(예를 들어, X선 결정학 또는 NMR) 및/또는 컴퓨터 모델링을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 관련 기술 분야에 공지된 기술을 사용하여 검정 또는 검출될 수 있다.
항체 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역의 세트를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 경쇄 서열 또는 중쇄 서열의 일부 또는 전체의 발현을 위해서 임의의 적합한 벡터 내에 클로닝될 수 있다. 일부 실시형태에서, 벡터 내에 클로닝된 폴리뉴클레오타이드는 바이러스 코트 단백질의 전부 또는 일부에 융합되고, 입자 또는 세포의 표면 상에 디스플레이되는 경쇄 또는 중쇄 서열의 일부 또는 전체의 생산(즉, 융합 단백질을 생성함)을 가능하게 한다. 벡터의 몇몇 유형은 입수 가능하고, 본 개시내용, 예를 들어, 파지미드 벡터를 실시하는 데 사용될 수 있다. 파지미드 벡터는 일반적으로 당업자에게 공지된 바와 같은 프로모터, 신호 서열, 표현형결정 선택 유전자, 복제 기점 부위 및 다른 필수 성분을 비롯한 다양한 성분을 함유한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역의 세트를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 박테리아 디스플레이용의 박테리아 세포에서 또는 효모 디스플레이용의 효모 세포에서의 발현을 위해서 벡터 내에서 클로닝될 수 있다. 예시적인 벡터는 미국 특허 공개US20160145604호 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 벡터는 5'에서부터 3'로, 표면(예를 들어, 파지, 박테리아, 효모 또는 포유동물 세포의 표면) 상에 디스플레이될 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 제한 부위, 표면 상에 디스플레이될 수 있는 표면 펩타이드를 암호화하는 제2 폴리뉴클레오타이드 및 제2 제한 부위를 포함하는 디스플레이 벡터이다. 일부 실시형태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 파지 코트 단백질, 효모 외벽 단백질, 박테리아 외부막 단백질, 세포 표면 테더 도메인 또는 어댑터 또는 이들의 절두부 또는 유도체를 암호화한다. 특정 실시형태에서, 제2 폴리뉴클레오타이드는 사상성 파지 M13의 유전자 III, 또는 이들의 절두부 또는 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표면 펩타이드는 파지 디스플레이, 효모 디스플레이, 박테리아 디스플레이 또는 포유동물 디스플레이 또는 그 사이의 셔플링 디스플레이용이다. 일부 실시형태에서, 발현되는 경우, 아미노산 서열 및 표면 펩타이드는 표면 상의 융합 단백질로서 디스플레이된다. 일부 실시형태에서, 벡터는 제1 제한 부위에 대해서 5' 또는 제2 제한 부위에 대해서 3'에 융합 태그를 추가로 포함한다.
본 개시내용의 특정 양상은 본 명세서에 기재된 벡터(들)를 함유하는 세포의 집단에 관한 것이다. 본 명세서에 기재된 기술 또는 다른 적합한 기술에 의해서 생성된 폴리뉴클레오타이드에 의해서 암호화된 항체 경쇄 및/또는 중쇄를 발현시키고, 스크리닝하여 목적하는 구조 및/또는 활성을 갖는 항체를 식별할 수 있다. 항체의 발현은 예를 들어, 무세포 추출물(예를 들어, 리보솜 디스플레이), 파지 디스플레이, 원핵 세포(예를 들어, 박테리아 디스플레이) 또는 진핵 세포(예를 들어, 효모 디스플레이)를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포는 박테리아 세포, 효모 세포 또는 포유동물 세포이다. 박테리아 세포, 효모 세포 또는 포유동물 세포의 형질주입 방법은 관련 기술 분야에 공지되어 있고, 본 명세서에 인용된 문헌에 기재되어 있다. 이들 세포에서의 폴리펩타이드(예를 들어, 항체 쇄)의 (예를 들어, 본 개시내용의 라이브러리로부터의) 발현뿐만 아니라 관심대상 항체에 대한 스크리닝은 하기에 보다 상세하게 기재되어 있다.
대안적으로, 폴리뉴클레오타이드는 예컨대, 문헌[Pluckthun and Skerra. (Meth. Enzymol., 1989, 178: 476; Biotechnology, 1991, 9: 273)]에 기재된 것과 같은 이. 콜라이(E. coli) 발현 시스템에서 발현될 수 있다. 돌연변이체 단백질은 문헌[Better and Horwitz, Meth. Enzymol., 1989, 178: 476]에 기재된 바와 같이 배지 및/또는 세포질에서의 분비를 위해서 발현될 수 있다. 일부 실시형태에서, VH 및 VL을 암호화하는 단일 도메인은 각각 신호 서열, 예컨대, ompA, phoA 또는 pelB 신호 서열을 암호화하는 서열의 3' 단부에 부착된다(Lei et al., J. Bacteriol., 1987, 169: 4379). 이러한 유전자 융합체는 디시스트론(dicistronic) 작제물로 조립되어, 이것은 단일 벡터로부터 발현되고, 이. 콜라이의 원형질막주위 공간으로 분비될 수 있는데, 여기서 이것은 다시 접힐 것이고, 활성 형태로 회수될 수 있다(Skerra et al., Biotechnology, 1991, 9: 273). 예를 들어, 항체 중쇄 유전자는 항체 경쇄 유전자와 동시에 발현되어 항체 또는 항체 단편을 생산할 수 있다.
다른 실시형태에서, 항체 서열은 예를 들어, 미국 특허 제US20040072740호; 제US20030100023호; 및 제US20030036092호에 기재된 바와 같은 분비 신호 및 지질화 모이어티를 사용하여, 원핵생물, 예를 들어, 이. 콜라이의 막 표면 상에 발현된다.
대안적으로, 항체는 예를 들어, 문헌[Jeong et al., PNAS, 2007, 104: 8247]에 기재된 바와 같은 고정된 원형질막주위 발현(APEx 2-혼성 표면 디스플레이)에 의해서 또는 예를 들어, 문헌[Mazor et al., Nature Biotechnology, 2007, 25: 563]에 기재된 바와 같은 다른 고정 방법에 의해서 발현 및 스크리닝될 수 있다.
고등 진핵 세포, 예컨대, 포유동물 세포, 예를 들어 골수종 세포(예를 들어, NS/0 세포), 하이브리도마 세포, 중국 햄스터 난소(CHO), 및 인간 배아 신장(HEK) 세포가 또한 본 개시내용의 항체의 발현을 위해서 사용될 수 있다. 전형적으로, 포유동물 세포에서 발현된 항체는 배양 배지로 분비되거나 또는 세포의 표면 상에 발현되도록 설계된다. 항체 또는 항체 단편은 예를 들어, 무손상 항체 분자로서 또는 개별 VH 및 VL 단편, Fab 단편, 단일 도메인으로서 또는 단일 쇄(scFv)로서 생산될 수 있다.
다른 실시형태에서, 항체는 포유동물 세포 디스플레이를 사용하여 선택될 수 있다(Ho et al., PNAS, 2006, 103: 9637). 일부 실시형태에서, 상기에 기재되고 하기에 예시된 바와 같이 항체는 바이러스 코트 단백질의 전부 또는 일부에 융합되고, 예를 들어, 파지 디스플레이를 사용하여 입자 또는 세포의 표면 상에 디스플레이되는 경쇄 또는 중쇄 서열의 일부 또는 전체의 생산(즉, 융합 단백질을 생성함)을 가능하게 한다.
본 개시내용의 특정 양상은 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드 라이브러리를 포함하는 비인간 동물에 관한 것이다. 예를 들어, 본 개시내용의 비인간 동물은 본 개시내용의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 비제한적인 예에서, 본 개시내용의 중쇄 가변 영역 중 하나 이상을 발현하도록 변형된 중쇄 면역글로불린 유전자좌를 포함하는 트랜스제닉 마우스가 생성된다. 일부 실시형태에서, 트랜스제닉 동물(예를 들어, 마우스)은 폴리뉴클레오타이드에 의해서 암호화된 항체 또는 중쇄를 발현한다. 비인간 동물의 하나 이상의 면역글로불린 유전자좌를 변형시키기 위한 기술은 관련 기술 분야에 공지되어 있다(예를 들어, Xenomouse(상표명)를 생성시키기 위해서 사용되는 방법).
본 개시내용의 라이브러리로부터 유래된 항체의 스크리닝은 관련 기술 분야에 공지된 임의의 적절한 수단에 의해서 수행될 수 있다. 예를 들어, 결합 활성도는 표준 면역검정 및/또는 친화도 크로마토그래피에 의해서 평가될 수 있다. 촉매 기능, 예를 들어, 단백질 분해 기능에 대한 본 개시내용의 항체의 스크리닝은 표준 검정, 예를 들어, 헤모글로빈 혈소판 검정을 사용하여 달성될 수 있다. 표적에 대한 항체의 결합 친화도를 결정하는 방법은 다양한 널리 공지된 기술, 예를 들어, 표면 플라스몬 공명을 기초로 주어진 표적 또는 항원에 대한 결합 속도를 측정하는 BIACORE(상표명) 장비 또는 ForteBio Octet(등록상표) RED96 플랫폼(폴 라이프 사이언시스사(Pall Life Sciences))을 사용하는 하기에 예시된 바와 같은 생물층 간섭법(Bio-Layer Interferometry: BLI)을 사용하여 시험관내에서 검정될 수 있다. 생체내 검정은 다수의 동물 모델 중 임의의 것을 사용하고, 그 다음 적절한 경우 인간에서 시험하여 수행될 수 있다. 세포-기반의 생물학적 검정이 또한 고려된다. 항체 또는 항원 결합 단편은 기능성 활성도, 예를 들어, 길항제 또는 효능제 활성도를 위해서 추가로 선택될 수 있다. 예시적인 스크리닝 방법은 본 명세서에 기재되어 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, fab 단편(들)과 하나 이상의 표적(들) 간의 결합 친화도는 항원을 인간 IgG1-Fc 태그로 태그화하고, 항-hIgG-Fc 캡처(AHC) 바이오센서에 의해서 캡처함으로써 BLI에 의해서 측정된다. Fab은 CH1 도메인의 이의 C-말단에서 His6 태그로 태그화되고, 숙주 세포, 예컨대, 이. 콜라이에서 과발현되고, 예를 들어, Ni-NTA 수지를 사용하여 정제될 수 있다. 친화도는 예를 들어, 동적 완충제를 사용하여, 예를 들어, 5 내지 10㎍/㎖로 희석된 정제된 fab을 함유하는 웰 내에 침지된 AHC 센서(항-인간 IgG-Fc 포획 침지 및 판독 바이오센서)를 사용하여 측정될 수 있다.
표적 또는 항원 및/또는 기능성 검정에 대한 결합에 의해서 결합인자를 식별한 후, 핵산을 추출할 수 있다. 이어서 추출된 DNA를 직접 사용하여 이. 콜라이 숙주 세포를 형질전환시키거나 또는 대안적으로 암호 서열을 예를 들어, 적합한 프라이머를 사용하여 PCR을 사용하여 증폭시키고, 임의의 전형적인 서열결정 방법을 사용하여 서열결정될 수 있다. 결합부의 가변 도메인 DNA는 소화된 제한 효소일 수 있고, 이어서 단백질 발현을 위해서 벡터에 삽입될 수 있다.
IV. 항체 및 항체 생산
본 명세서에는 본 명세서에 기재된 라이브러리로부터 식별 및 선택된 항체가 제공된다. 본 개시내용의 특정 양상은 항체 경쇄 또는 중쇄 HVR, HVR을 포함하는 가변 영역 및/또는 이를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(들)에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, HVR 및/또는 가변 영역은 항체 단편, 전장 항체 또는 단일-쇄 가변단편(scFv)의 부분이다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200). 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207). 일부 실시형태에서, HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210). 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하며, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고: (식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 그리고 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207). 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하고(식 I) X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); (식 II) YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 (식 III) FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 그리고 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함한다: (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210).
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은, 식 X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은, 식 X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은, 식 YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은, 식 YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은, 식 FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 IV) LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); (식 V) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); (식 VI) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); (식 VII) VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); (식 VIII) IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); (식 IX) IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); 및 (식 X) VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은, 식 FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; 및 (식 XI) IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); (식 XII) IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 (식 XII) VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210)로 이루어진 군으로부터 선택된 식에 따른 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H1 및/또는 HVR-H2는 하기 표 1에 열거된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 HVR-H3은 관련 기술 분야에 공지된 임의의 HVR-H3이다. 일부 실시형태에서, HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 중쇄가 제공되며, 여기서 HVR-H1 및/또는 HVR-H2는 본 명세서에 기재된 HVR-H1 및/또는 HVR-H2 중 임의의 것이다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 본 개시내용의 임의의 HVR-H1 서열(예를 들어, X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 및 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 본 개시내용의 HVR-H2로부터 선택된 임의의 아미노산 서열(예를 들어, LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210); 및 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 중쇄가 제공되며, 여기서 HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 중쇄가 제공되며, 여기서 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 중쇄가 제공되며, 여기서 HVR-H1은 식 (I), 식 (II) 및 식 (III)으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 HVR-H2는 식 (IV), 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX), 식 (X), 식 (XI), 식 (XII) 및 식 (XIII)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 중쇄가 제공되며, 여기서 HVR-H1은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 여기서 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 1, 4, 5, 7, 8, 9, 11, 13, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 38, 40, 42, 43, 45, 47, 49, 50 및 51로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 여기서 HVR-H2는 서열번호 53, 60, 63, 65, 66, 67, 70, 82, 89, 93, 95, 105, 109, 110, 117, 121, 122, 123, 124, 128, 129, 130, 131, 132 및 134로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 2, 3, 14, 15, 30, 32, 35, 37, 39, 41, 44, 46 및 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 여기서 HVR-H2는 서열번호 55, 56, 59, 61, 62, 64, 68, 69, 71, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 72, 81, 83, 86, 90, 91, 99, 100, 103, 106, 107, 108, 112, 113, 116, 118, 126, 135 및 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열번호 6, 10, 17, 29, 36 및 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 여기서 HVR-H2는 서열번호 54, 57, 58, 80, 84, 85, 87, 88, 92, 94, 96, 97, 98, 101, 102, 104, 111, 114, 115, 119, 120, 125, 127 및 133으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 중쇄가 제공되며, 여기서 HVR-H1은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 HVR-H2는 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, HVR-H1은 서열 1 내지 52로부터 선택된 아미노산, 및 HVR-H2는 53 내지 136으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3의 3개를 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XI)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (IX)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (VIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (X)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 식 (II)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 식 (I)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 식 (III)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 식 (XIII)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2.
본 명세서에 기재된 중쇄 HVR 서열은 본 개시내용의 항체 중쇄 또는 중쇄 가변 영역의 임의의 조합물에 포함될 수 있다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 1 내지 52로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호 53 내지 136으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 및 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3의 3개를 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2. 일부 실시형태에서, HVR-H1 및 HVR-H2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3의 3개를 포함하고, 여기서 HVR-H1 및 HVR-H2는 표 1에 열거되어 있다. 일부 실시형태에서, HVR-H3은 서열번호 223 내지 256으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 및 195로부터 선택된 서열, 또는 서열번호 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193 및 195로부터 선택된 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 하기 식에 따른 HVR 사이에 병치된 가변 영역 중쇄 프레임워크 서열을 추가로 포함한다: (FW-H1)-(HVR-H1)-(FW-H2)-(HVR-H2)-(FW-H3)-(HVR-H3)-(FW-H4). 일부 실시형태에서, 프레임워크 서열 중 1개, 2개, 3개 또는 4개는 하기와 같다:
FW-H1은 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG(서열번호 165)이고,
FW-H2는 RQAPGKGLEW(서열번호 166)이고,
FW-H3은 TISRDNSKNTLYLQLNSLRAEDTAVYYC(서열번호 167)이고,
FW-H4는 WGQGTLVTVSS(서열번호 168)이다.
일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 167의 R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 갖는 교호하는 FW-H3 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 프레임워크 서열 중 1개, 2개, 3개 또는 4개는 서열번호 165의 FW-H1, 서열번호 166의 FW-H2, 서열번호 167의 FW-H3(R19에서 아르기닌 대 라이신 돌연변이를 가짐) 및 서열번호 168의 FW-H4이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체가 추가로 제공되며, 여기서 중쇄는 본 개시내용의 중쇄 가변 영역을 포함하고, 그리고 여기서 경쇄는 관련 기술 분야에 공지된 임의의 경쇄 가변 영역(예를 들어, HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함함)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄 가변 영역은 서열번호 257 내지 264로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 및 서열번호 265 내지 274로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄는 대리인 참조 번호 69540-3000100, 69540-2000140 및/또는 69540-2000100(이들의 개시내용은 각각 전문이 참고로 본 명세서에 포함됨) 하에 출원된 특허 출원(들)에서 발견되는 항체 경쇄 가변 영역 중 임의의 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 경쇄는 대리인 참조 번호 69540-3000100, 69540-2000140 및/또는 69540-2000100(이들의 개시내용은 각각 전문이 참고로 본 명세서에 포함됨) 하에 출원된 특허 출원(들)에서 발견되는 HVR-L1, HVR-L2 및/또는 HVR-L3 서열 중 임의의 것을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
항원을 특이적으로 인식하고, 이에 강하게 결합하는 능력을 갖는 IgG-유래된 스캐폴드, 예컨대, Fab 및 단일 쇄 Fv(scFv), 뿐만 아니라 안정화된 Fv 또는 scFv가 설계 및 제조되었다. 대안적인 단백질 스캐폴드 또는 비-IgG 유사 스캐폴드가 유사한 응용에 대해서 탐색되었다. 비-Ig 아키텍쳐를 갖는 몇몇 단백질 패밀리, 예컨대, 단백질 A, 피브로넥틴, 안키린 반복부, 아드넥틴, 어피바디, 안티칼린, DARPin, 조작된 쿠니츠(Kunitz) 저해제 또는 리포칼린, 환식 및 다환식 펩타이드는, 조합 조작 방법, 예컨대, 파지 디스플레이, 효모 디스플레이 또는 다른 분자 선택 기술과 조합된 부위-지향된 무작위 돌연변이생성을 사용함으로써 신규 결합 부위를 갖도록 할 수 있다. 이러한 신규의 대안적인 결합 시약은 총괄하여 조작된 단백질 스캐폴드로 지칭되며, 이는 동적 결합 모티프 또는 여기에 도입된 단위를 사용하여 규정된 표적에 대한 기존의 결합 부위를 변형시키거나 또는 새로운 결합 부위를 구현하기 위해서 강성의 자연 단백질 구조가 사용된다는 것을 나타낸다. 항체 또는 이의 재조합 단편과 비교할 때, 이러한 단백질 스캐폴드는 흔히 미생물 발현 시스템에서 증가된 안정성 및 높은 생산 효율을 비롯한 실질적인 이점을 제공한다. 이러한 신규 결합 단백질은 강한 표적-결합 활성도를 달성하기 위해서 생물분자 조작 과정에 의해서 획득되기 때문에, 이것은 또한 다른 목적하는 특성(예컨대, 안정성, 열 안정성, 프로테아제 내성 등)에 초점이 맞춰진 추가 선택 공정에 적용될 수 있다. 결론적으로, 조작된 단백질 스캐폴드는 생물공학 및 생물의학 연구에서의 다수의 응용, 특히 다중특이적 결합 모티프에 매력적이 되었다. 이로운 특성을 갖는 이러한 대안적인 결합 단백질을 생성시키려는 노력은 생물분자 구조 및 기능뿐만 아니라 임상 응용에 대한 접근법에 대해서 특별히 강조된 치료 용도에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 HVR을 포함하는 1종 이상의 폴리펩타이드(예를 들어, 스캐폴드 폴리펩타이드, 예컨대, IgG-유래된 스캐폴드 폴리펩타이드(예컨대, Fab, 단일 쇄 Fv 및 안정화된 Fv) 또는 비-IgG-유래된 스캐폴드 폴리펩타이드(예컨대, 단백질 A, 피브로넥틴, 안키린 반복부, 어드넥틴, 어피바디, 안티칼린, DARPin, 조작된 쿠니츠 저해제, 또는 리포칼린, 환식 및 다환식 펩타이드))가 추가로 제공된다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 개시내용의 임의의 HVR-H1 서열(예를 들어, X1TFX2X3YX4IHWV(식 중, X1은 F 또는 Y이고, X2는 S 또는 T이고, X3은 D, G, N 또는 S이고, 그리고 X4는 A, G 또는 W임)(서열번호 198); YSIX1SGX2X3WX4WI(식 중, X1은 S 또는 T이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 H 또는 Y이고, 그리고 X4는 A, D, G, N, S 또는 T임)(서열번호 199); 및 FSLSTX1GVX2VX3WI(식 중, X1은 G 또는 S이고, X2는 A 또는 G이고, 그리고 X3은 A, G, S 또는 T임)(서열번호 200); 및 서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 개시내용의 임의의 HVR-H2 서열(예를 들어, LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(식 중, X1은 L 또는 R이고, X2는 D 또는 Y이고, X3은 A, D, S 또는 Y이고, X4는 D 또는 G이고, X5는 R, S 또는 Y이고, 그리고 X6은 P 또는 T임)(서열번호 201); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D, E, S 또는 Y이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 202); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E, R, S 또는 Y이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 203); VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(식 중, X1은 A, G, S, V 또는 Y이고, X2는 A, D, S 또는 Y이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 S 또는 T임)(서열번호 204); IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 F 또는 R이고, X3은 D, G 또는 S이고, 그리고 X4는 K 또는 N임)(서열번호 205); IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(식 중, X1은 I, R 또는 W이고, X2는 S 또는 Y이고, X3은 G 또는 S이고, X4는 D, G 또는 S이고, 그리고 X5는 K 또는 N임)(서열번호 206); VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, X5는 D 또는 E이고, 그리고 X6은 P 또는 S임)(서열번호 207); IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(식 중, X1은 A, D 또는 E이고, X2는 S 또는 Y이고, 그리고 X3은 H 또는 Y임)(서열번호 208); IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(식 중, X1은 D, E 또는 S이고, X2는 H 또는 Y이고, X3은 N 또는 S이고, 그리고 X4는 N 또는 Y임)(서열번호 209); 및 VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(식 중, X1은 K 또는 R이고, X2는 A 또는 T이고, X3은 D 또는 Y이고, X4는 G 또는 Y이고, 그리고 X5는 P 또는 S임)(서열번호 210); 및 서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서의 임의의 HVR-H3 서열(예를 들어, 서열번호 223 내지 256)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 개시내용의 임의의 HVR-L1 서열(예를 들어, 서열번호 257 내지 264)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 개시내용의 임의의 HVR-L3 서열(예를 들어, 서열번호 265 내지 274)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 및/또는 HVR-L3 서열 중 2개 이상(예를 들어, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 또는 5개 모두)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 및/또는 HVR-L3 서열 중 2개를 포함하고, 여기서 이러한 2개는 HVR-H1 및 HVR-H2; HVR-H1 및 HVR-H3; HVR-H1 및 HVR-L1; HVR-H1 및 HVR-L3; HVR-H2 및 HVR-H3; HVR-H2 및 HVR-L1; HVR-H2 및 HVR-L3; HVR-H3 및 HVR-L1; HVR-H3 및 HVR-L3; 또는 HVR-L1 및 HVR-L3이다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 및/또는 HVR-L3 서열 중 3개를 포함하고, 여기서 이러한 3개는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3; HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-L1; HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-L3; HVR-H1, HVR-H3, 및 HVR-L1; HVR-H1, HVR-H3, 및 HVR-L3; HVR-H1, HVR-L1 및 HVR-L3; HVR-H2, HVR-H3, 및 HVR-L1; HVR-H2, HVR-H3, 및 HVR-L3; HVR-H2, HVR-L1, 및 HVR-L3; 또는 HVR-H3, HVR-L1, 및 HVR-L3이다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 및/또는 HVR-L3 서열 중 4개를 포함하고, 여기서 이러한 4개는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, 및 HVR-L1; HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, 및 HVR-L3; HVR-H1, HVR-H2, HVR-L1, 및 HVR-L3; HVR-H1, HVR-H3, HVR-L1, 및 HVR-L3; or HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, 및 HVR-L3이다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 본 명세서에 기재된 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 및/또는 HVR-L3 서열 중 5개를 포함하고, 여기서 5개는 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1 및 HVR-L3이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에는 본 개시내용의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 단편 또는 scFv가 추가로 제공된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항체 단편은 특정 결합 친화도로 적어도 1개의 표적(예를 들어, 표적 단백질 또는 에피토프) 또는 적어도 2개의 표적에 결합한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항체 단편은 약 10-7M 이하, 10-8M 이하, 10-9M 이하, 10-10M 이하, 또는 10-11M 이하의 평형 해리 상수(Kd)로 적어도 1개의 표적 또는 적어도 2개의 표적에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항체 단편은 약 10-7 내지 약 10-11M의 평형 해리 상수(Kd)로 적어도 1개의 표적 또는 적어도 2개의 표적에 결합한다. 결합 친화도를 결정하기 위한 예시적인 검정은 하기에 기재 및 예시되어 있다(예를 들어, 하기 실시예 4의 ForteBio 검정 참고).
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항체 단편은 적어도 60℃의 융점(Tm)을 갖는다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항체 단편은 약 60℃ 내지 약 90℃, 약 65℃ 내지 약 90℃, 약 70℃ 내지 약 90℃, 약 75℃ 내지 약 90℃, 약 80℃ 내지 약 90℃, 약 85℃ 내지 약 90℃ 또는 적어도 약 65℃, 적어도 약 70℃, 적어도 약 72℃, 적어도 약 75℃, 적어도 약 80℃ 또는 적어도 약 85℃의 Tm을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항체 단편은 약 60℃ 내지 약 90℃의 Tm을 갖는다. 항체 또는 항체 단편에 대한 Tm을 측정하는 다양한 방법은 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 항체 Tm을 결정하기 위한 예시적인 검정은 하기에 기재 및 예시되어 있다(예를 들어, 하기 실시예 4의 DSF 검정 참고).
본 개시내용의 항체는 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 기재된 바와 같은 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생산될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 항체를 암호화하는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 암호화할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시형태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 이러한 일 실시형태에서, 숙주 세포는 하기를 포함한다(예를 들어, 하기로 형질전환되었다): (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제2 벡터. 일부 실시형태에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들어, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 림프구 세포(예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 일부 실시형태에서, 항체의 제조 방법이 제공되는데, 여기서 이 방법은 상기에 제공된 바와 같은 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 배양하는 단계, 및 선택적으로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 항체의 재조합 생산을 위해서, 예를 들어, 상기에 기재된 바와 같은 항체를 암호화하는 핵산이 단리되고, 숙주 세포에서의 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해서 하나 이상의 벡터 내에 삽입된다. 이러한 핵산은 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용함으로써) 통상적인 절차를 사용하여 쉽게 단리 및 서열결정될 수 있다.
항체-암호화 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않은 경우, 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩타이드의 발현에 대해서는, 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호 및 제5,840,523호를 참고하기 바란다(또한 이. 콜라이에서의 항체 단편의 발현을 기술하는 문헌[Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254] 참고). 발현 이후에, 항체는 가용성 분획 중의 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고, 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물에 더하여, 진핵 미생물, 예컨대, 글리코실화 경로가 "인간화"되어, 부분적인 또는 완전 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 생산하는 진균 및 효모 균주를 비롯한, 사상성 진균 또는 효모가 항체-암호화 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다(문헌[Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), and Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)] 참고).
글리코실화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추 동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히 스포돕테라 프루기퍼다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질주입을 위해서, 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 다수의 바큘로바이러스 균주가 식별되어 있다.
식물 세포 배양물을 숙주로서 이용할 수도 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,959,177호, 제6,040,498호, 제6,420,548호, 제7,125,978호 및 제6,417,429호(트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 PLANTIBODIES(상표명) 기술을 기재함) 참고).
척추동물 세포가 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁물 중에서 성장하도록 개작된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40(COS-7)에 의해서 형질전환된 원숭이 신장 CV1 주; 인간 배아 신장 주(예를 들어, 문헌[Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 아기 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리 세포(예를 들어, 문헌[Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK; 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유선 종양(MMT 060562); 예를 들어, 문헌[Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 예컨대, DHFR- CHO 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대, Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토에 대해서는 문헌[Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참고하기 바란다.
동일한/공통/단일 중쇄를 갖는 이중특이적 항체
본 명세서에는 본 개시내용의 동일한 중쇄 가변 영역을 갖는(예를 들어, 상이한 결합 특이성을 갖는 2개의 경쇄 가변 영역 및 2개의 동일한 중쇄 가변 영역을 갖는) 이중특이적 항체가 추가로 제공된다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 항체는 2개의 상이한 경쇄를 포함하며, 여기서 제1 경쇄는 카파 CL 도메인(예를 들어, 인간 카파 CL 도메인)을 포함하고, 그리고 제2 경쇄는 람다 CL 도메인(예를 들어, 인간 람다 CL 도메인)을 포함한다. 카파 CL 도메인 및 람다 CL 도메인을 포함하는 이중특이적 항체의 제조 방법 및/또는 정제 방법은 관련 기술 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Fischer et al. (2015), Nat. Commun. 6:6113]; 미국 특허 제US20140179547호 참고). 예를 들어, a) 2개의 동일한 중쇄 가변 영역(예를 들어, 본 명세서에 기재된 중쇄 가변 영역 중 임의의 하나), b) 제1 경쇄 가변 영역 및 카파 CL 도메인을 포함하는 제1 경쇄, 및 c) 제2 경쇄 가변 영역 및 람다 CL 도메인을 포함하는 제2 경쇄(예를 들어, 카파 CL 도메인을 포함하는 제2 경쇄의 불변 영역이 람다 CL 도메인으로 교체됨)를 포함하는 이중특이적 항체를 작제하고 발현시킬 수 있다(예를 들어, 하나 이상의 발현 벡터 내에서 클로닝시키고, 하나 이상의 적합한 숙주 세포에서 발현시킬 수 있다). 이러한 방식으로 작제된 생성된 이중특이적 IgG(예를 들어, 카파 및 람다 CL 도메인 둘 다를 포함함)를 하기 단계를 사용하여 정제시킬 수 있다: 먼저, 전체 IgG를 단백질 A 또는 IgG-CH1 Capture Select 친화도 크로마토그래피를 사용하여 배양물 상청액으로부터 회수하여, 유리 경쇄 및 다른 오염물을 제거하고; 다음으로, 카파 CL 도메인을 함유하는 IgG를 KappaSelect 친화도 수지를 사용하여 포획하고, 람다 CL 도메인 만을 함유하는 경쇄를 갖는 단일특이적 IgG를 칼럼 통과액으로 제거하고; 마지막으로 순수한 이중특이적 카파-람다 바디를 LambdaFabSelect 친화도 수지를 사용하여 회수하고, 수지에 결합하지 않은 카파 CL 도메인 만을 함유하는 경쇄를 갖는 단일특이적 IgG로부터 분리시킨다. 대안적으로, 이중특이적 공통 중쇄 IgG(예를 들어, 상기에 기재된 바와 같음)를 단백질 A에 의해서 정제시키고, 상이한 경쇄의 하나 이상의 생물물리학적 특성(예컨대, 상이한 분자량, 상이한 등전점(pI) 등)의 차이에 기초하여 각각의 경쇄 CL 도메인에 특이적인 수지를 사용하여 분할시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 이중특이적 항체는 2개의 항체 경쇄 가변 영역 및 2개의 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 이중특이적 항체는 제1 표적 또는 항원에 결합하고, 제1 항체 경쇄 가변 영역 및 제1 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 결합 도메인; 및 제2 표적 또는 항원에 결합하고, 제2 항체 경쇄 가변 영역 및 제2 항체 중쇄 가변 영역을 포함하는 제2 결합 도메인을 포함하며; 여기서 제2 항체 중쇄 가변 영역은 제1 항체 중쇄 가변 영역 서열과 동일한 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인은 상이한 표적 생물분자에 결합한다. 일부 실시형태에서, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인은 동일한 생물분자 상의 상이한 에피토프에 결합한다. 일부 실시형태에서, 제1 항체 중쇄 가변 영역은 제1 중쇄 가변 영역 및 제1 중쇄 불변 영역(예를 들어, CH1, 힌지, CH2 및 CH3을 포함함)을 포함하는 제1 항체 중쇄의 부분이다. 일부 실시형태에서, 제2 항체 중쇄 가변 영역은 제2 중쇄 가변 영역 및 제2 중쇄 불변 영역(예를 들어, CH1, 힌지, CH2 및 CH3을 포함함)을 포함하는 제2 항체 중쇄의 부분이다. 일부 실시형태에서, 제1 항체 경쇄 가변 영역은 제1 경쇄 가변 영역 및 제1 경쇄 불변 영역을 포함하는 제1 항체 경쇄의 부분이다. 일부 실시형태에서, 제2 항체 경쇄 가변 영역은 제2 경쇄 가변 영역 및 제2 경쇄 불변 영역을 포함하는 제2 항체 경쇄의 부분이다. 일부 실시형태에서, 제1 항체 중쇄 및 제2 항체 중쇄는 본 개시내용의 중쇄와 동일한 서열을 갖는다.
본 명세서에는 본 개시내용의 동일한 중쇄 가변 영역을 갖는(예를 들어, 상이한 결합 특이성을 갖는 2개의 경쇄 가변 영역 및 2개의 동일한 중쇄 가변 영역을 갖는) 이중특이적 항체의 제조 방법이 추가로 제공된다. 일부 실시형태에서, 방법은 (a) 제1 항원에 결합하고, 본 개시내용의 제1 항체 경쇄 가변 영역 및 제1 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 항원 결합 도메인을 선택하는 단계; (b) 제2 항원에 결합하고, 본 개시내용의 제2 항체 경쇄 가변 영역 및 본 개시내용의 제2 중쇄 가변 영역을 포함하는 제2 항원 결합 도메인(여기서 제2 항체 중쇄 가변 영역은 제1 항체 중쇄 가변 영역 서열과 동일한 서열을 가짐)을 선택하는 단계; 및 (c) 제1 항체 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 제2 항체 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 제1 항체 중쇄 가변 영역 서열의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 제2 항체 중쇄 가변 영역 서열의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 이중특이적 항체를 생산하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 중쇄 가변 영역은 본 개시내용의 라이브러리로부터의 폴리뉴클레오타이드에 의해서 암호화된다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 이중특이적 항체는 추가 특이성을 가질 수 있다. 예를 들어, 이중특이적 항체의 항원 또는 표적 결합 부위 중 하나는 하나를 초과하는 표적에 특이적으로 결합할 수 있다.
이중특이적 항체의 제조/생성 방법은 관련 기술 분야에 공지되어 있다. 전장 이중특이적 항체의 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동 발현을 기반으로 할 수 있는데, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다(Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 배분으로 인해서, 이러한 하이브리도마(쿼드로마)는 단지 하나만 올바른 이중특이적 구조를 갖는 10종의 상이한 항체의 가능한 혼합물을 생산한다. 보통 친화도 크로마토그래피 단계에 의해서 수행되는 올바른 분자의 정제는 보다 다루기 어렵고, 산물 수율이 낮다. 유사한 절차는 국제 특허 공개 제WO 93/08829호 및 문헌[Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다.
V. 키트
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드의 라이브러리를 포함하는 키트가 제공된다. 일부 실시형태에서, 키트는 발현, 변형, 스크리닝 또는 예를 들어, 항체 HVR 또는 관심대상 가변 영역을 식별하기 위해서 라이브러리를 달리 사용하는 것에 대한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 예를 들어, 저장, 전달, 형질주입 또는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 합성 폴리뉴클레오타이드) 중 하나 이상을 사용하는 다른 것을 위해서 1종 이상의 완충제를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상을 저장하기 위한 하나 이상의 용기를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 예를 들어, 숙주 세포에 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상을 형질주입하기 위한, 하나 이상의 벡터를 추가로 포함한다.
실시예
본 개시내용은 하기 실시예를 참고로 보다 완전히 이해될 것이다. 그러나 실시예는 본 개시내용의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 명세서에 기재된 실시예 및 실시형태는 단지 예시의 목적을 위해서이며, 이에 비추에 다양한 변형 또는 변경이 당업자에게 제안되고, 본 출원의 사상 및 범위 및 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함될 것이라는 것이 이해된다.
실시예 1: 초가변 영역에 대한 동적 모티프의 최소 세트의 식별
구조적 수준에서 항체 가변 도메인의 가변성을 이해하기 위해서, 알고리즘을 개발하여 항체 가변 도메인에 대한 기하학적 정렬을 맵핑하였고, 추가로 기하학적 정렬에 기초하여 구조 및 서열 엔트로피를 계산하였다. 이러한 접근법을 취하는 것은, 동적 단위로부터의 입체구조 다양성과 커플링된 양호하게 확립된 V(D)J 재조합 과정에 의해서 결정될 항체 다양성의 전통적인 이론(Linus Pauling에 의한 주형-지시된 입체구조 선택; 예를 들어, 문헌[James, L. and Tawfik, D. "Conformational diversity and protein evolution - a 60-year-old hypothesis revisited", Trends Biochem Sci. 2003 Jul;28(7):361-8] 참고)을 조합하여 항체 결합 부위의 선택 및 채택에 의한 거의 무한대의 에피토프 공간을 샘플링하는 것을 가능하게 한다. 예로서, 이러한 알고리즘을 사용하여 인간 항체 가변 중쇄 도메인의 113개의 고분해능 결정 구조의 구조 및 서열 가변성을 분석하였다. 엔트로피를 계산하였고, 가변 중쇄 도메인의 모든 위치에 대해서 플로팅하였다(도 1A; 두꺼운 선의 구조 엔트로피, 점선의 서열 엔트로피). 기하학적 정렬에 기초하여 구조 엔트로피 및 서열 엔트로피를 계산함으로써 얻은 결과를 사용하여 초가변(HVR) 영역을 배치하고, 이들 가변 영역 상의 중요한 위치를 식별하였다. 비교를 위해서, HVR(상기에 기재된 바와 같은 방법에 의해서 정의된 바와 같음) 및 CDR(카밧에 의해서 정의된 바와 같음)을 예시적인 항체 중쇄 가변 도메인 서열에 대해서 식별하였다(도 1B).
흥미롭게도, 구조적 정렬에 의해서 평가된 바와 같은 가변성은 일반적으로 서열 정렬에서 관찰된 가변성보다 더 낮았다. 가변성은 일반적으로 구조적 정렬에 의해서 평가되는 경우 더 낮았지만, 극적인 구조적 변화를 갖는 다수의 부위/영역이 존재하였는데, 이는 이러한 가변성 부위가 항체 기능에 중요한 역할을 할 수 있음을 시사한다. 추가로, 이러한 초가변 영역 중 일부는 다수의 입체구조를 갖는 높은 유연성을 나타내었다. 고도로 가변성인 잔기의 영역의 식별은 새로운 항체 설계에서 활용될 수 있는 항체 가변 도메인의 보존 및 가변성의 보다 포괄적인 그림을 제공하였다. 동적 모티프의 식별은 감소된 수의 아미노산 서열을 사용하여 다양한 구조적 다양성을 포괄하는 것을 가능하게 한다. 항체 설계에 대한 이러한 접근법의 놀라운 이점은, 보다 제한된 수의 동적 모티프를 가변 영역에서 사용하여 광범위한 항체 구조 다양성을 포괄하고, 관심대상의 다수의 항원에 대한 결합이 가능할 수 있는 이러한 항체에서 넓은 유연성을 제공할 수 있다는 것이었다. 이와 같이, 불변 잔기에 대해서 단일 인간 생식계열 또는 생식계열-유래된 서열을 사용하여 동적 중쇄 라이브러리를 작제하였지만, (106, 1010 또는 그 초과와 비교할 때) 제한된 수의 동적 모티프를 초가변 영역 HVR_H1 및 HVR_H2에서 사용하여 이러한 두 영역에서 식별된 광범위한 구조적 가변성을 얻었다.
실시예 2: 공통 중쇄 라이브러리의 작제
중쇄 라이브러리의 작제
중쇄 라이브러리의 작제를 시작하기 위해서, 표 2에 나타낸 식에 기초하여 가변 영역 HVR-H1에 대해서 3개의 군의 축퇴 올리고를 작제하여, 112개의 고유한 HVR-H1 서열을 생성하였다. 표 2에 나타낸 식에 기초하여 가변 영역 HVR-H2에 대해서 7개의 군의 축퇴 올리고를 작제하여, 565개의 고유한 HVR-H2 서열을 생성하였다. 합성된 축퇴 올리고를 하기 프로토콜을 통해서 이중 가닥 DNA로 전환시켰다: 0.75㎕의 0.2μM 주형 올리고를 10㎕의 5x PrimeSTAR 완충제, 4㎕의 dNTP 혼합물, 1㎕의 100μM 정방향 프라이머, 1㎕의 100μM 역방향 프라이머, 0.5㎕의 PrimeSTAR HS DNA 중합효소(2.5U/㎕) 및 33㎕의 물과 혼합하였다. PCR 용액을 96℃에서 5분 동안 예열시키고, 이어서 14회 주기(15초 동안 96℃, 15초 동안 60℃, 6초 동안 72℃)를 수행하였고, 그 다음 3분 동안 72℃에서 연장시켰다. VH_vr1을 프라이머 쌍 F_1999(CGTTTGTCCTGTGCAGCTTCCGG)(서열번호 211) 및 R_1999(CGAGGCCCTTACCCGGGGCCTGACG)(서열번호 212)를 사용하여 증폭시키고, VH_vr2를 프라이머 쌍 F_2003(CCGGGTAAGGGCCTCGAGTGG)(서열번호 213) 및 R_2003(GAGCACGTCCGTTCGAATTGTCGCGACTTATAG)(서열번호 214)를 사용하여 증폭시켰다.
이중 가닥 VH_vr1 및 VH_vr2를 5' 또는 3' 단부에서 중첩 서열을 통해서 함께 연결시켰다. 사용된 프로토콜을 하기와 같다: 20ng의 VH_vr1 및 20ng의 VH_vr2 주형을 10㎕의 5x PrimeSTAR 완충제, 4㎕의 dNTP 혼합물, 1㎕의 100μM F_1999 프라이머, 1㎕의 100μM R_2003 프라이머, 0.5㎕의 PrimeSTAR HS DNA 중합효소(2.5U/㎕) 및 물(최대 50㎕)과 혼합하고, 혼합물을 96℃에서 5분 동안 예열시키고, 이어서 14회 주기(15초 동안 96℃, 15초 동안 60℃, 10초 동안 72℃)를 수행하였고, 그 다음 3분 동안 72℃에서 연장시켰다. 이어서, 이러한 PCR 단편을 겔 전기영동(GENEray 겔 추출 키트)를 통해서 정제시키고, BspEI 및 BstBI(써모 사이언티픽사(Thermo Scientific))로 소화시키고, 그 다음 동일한 2개의 효소로 소화된 필터 벡터 FTV014 내에서 클로닝시켰다. 결찰 혼합물을 전기천공법에 의해서 DH10B 세포 내에서 형질전환시키고, 계산된 다양성이 10배를 초과하는 집락의 수를 플라스미드 제조를 위해서 수집하였다. 정제된 플라스미드는 라이브러리 VH-vr12를 구성하였다.
105에 근접하는 서열 다양성을 갖는 VH_vr3을 암호화하는 수 백 개의 축퇴 올리고를 설계 및 합성하고, 하기 프로토콜에 따라서 이중 가닥 DNA로 전환시켰다: 0.75㎕의 0.2μM 주형 올리고를 10㎕의 5x PrimeSTAR 완충제, 4㎕의 dNTP 혼합물, 1㎕의 100μM 정방향 프라이머, 1㎕의 100μM 역방향 프라이머, 0.5㎕의 PrimeSTAR HS DNA 중합효소(2.5U/㎕) 및 33㎕의 물과 혼합하였다. PCR 용액을 96℃에서 5분 동안 예열시키고, 이어서 14회 주기(15초 동안 96℃, 15초 동안 60℃, 6초 동안 72℃)를 수행하였고, 그 다음 3분 동안 72℃에서 연장시켰다. 정방향 프라이머는 S1089(ACAACTGAACAGCTTAAGAGCTGAGGACACTGCCGTCTATTATTG)(서열번호 215)였고, 역방향 프라이머는 S1090(GAGGAGACGGTGACTAGTGTTCCTTGACCCCA)(서열번호 216)이었다. 이어서, 생성된 합성된 DNA를 겔 전기영동(GENEray 겔 추출 키트)를 통해서 정제시키고, AflII 및 SpeI(써모 사이언티픽사)로 소화시키고, 그 다음 동일한 2개의 제한 효소로 소화된 필터 벡터 FTV012 내에서 클로닝시켰다. 결찰 혼합물을 전기천공법에 의해서 DH10B 세포 내에서 형질전환시키고, 계산된 다양성이 10배를 초과하는 집락의 수를 플라스미드 제조를 위해서 수집하였다. 정제된 플라스미드는 라이브러리 VH-vr3을 구성하였다.
전장 VH 라이브러리를 조립하기 위해서, 정제된 VH-vr3 라이브러리 플라스미드 혼합물을 AflII 및 SpeI(NEB)로 소화시키고, vr3-암호화 단편을 겔 전기영동(GENEray 겔 추출 키트)을 통해서 정제시키고, 동일한 2개의 제한 효소로 소화된 VH-vr12 라이브러리 플라스미드 혼합물 내에서 클로닝시켰다. 결찰 산물은 탈염시키고(QIAquick(등록상표) PCR 정제 키트(퀴아젠사)), 그 다음 롤링 서클 증폭(rolling circle amplification: RCA)을 수행하였다. RCA를 하기와 같이 수행하였다: 40ng의 결찰 산물을 10㎕의 10x NEBuffer 4, 50㎕의 100μM pd(N)8 및 물(최대 88.5㎕)과 혼합하고, 3분 동안 95℃까지 가열시키고, 사이클마다 1℃만큼 감소시키면서 65회 사이클(사이클당 30초) 동안 어닐링시켰다. 10㎕의 10mM dNTP 믹스, 1㎕의 100 x BSA 및 0.5㎕의 Phi29 DNA 중합효소를 첨가한 후 어닐링된 반응물을 30℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. RCA 산물을 먼저 NotI로 소화시키고, DNA 단편을 (QIAquick(등록상표) PCR 정제 키트)로 정제시키고, XhoI로 추가로 소화시켰다. 이어서, 소화된 산물을 T4 DNA 리가제(써모 사이언티픽사)로 결찰시켰다. 에탄올 침전을 통한 정제 후, 결찰 산물을 전기천공법에 의해서 DH10B 세포 내에서 형질전환시켰다. 정제된 플라스미드는 라이브러리 VH-vr123을 구성하였다. 이러한 작제물 각각은 동일한 프레임워크 영역, 즉 FW-H1(서열번호 165), FW-H2(서열번호 166), FW-H3(서열번호 167) 및 FW-H4(서열번호 168)를 공유하였다.
2개의 중쇄 라이브러리에 대한 플라스미드의 상기에 언급된 혼합물을 PvuI 및 Acc65I로 소화시키고, 동일한 2개의 제한 효소로 또한 소화된 파지미드 벡터 Fad40 내에 결찰시켰다. 결찰 혼합물을 DH10B 세포 내에서 형질전환시키고, 생성된 라이브러리를 정제시키고, 정량하고, 완전 파지미드 라이브러리의 조립을 위해서 저장하였다.
VL 라이브러리의 작제
경쇄 라이브러리의 작제를 시작하기 위해서, 18개 군의 축퇴 올리고 및 5개의 정의된 올리고를 각각 가변 영역 VL_vr1 및 VL_vr2에 대해서 설계하였다. 이것을 하기 프로토콜을 통해서 이중 가닥 DNA로 전환시켰다: 0.75㎕의 0.2μM 주형 올리고를 10㎕의 5x PrimeSTAR 완충제, 4㎕의 dNTP 혼합물, 1㎕의 100μM 정방향 프라이머, 1㎕의 100μM 역방향 프라이머, 0.5㎕의 PrimeSTAR HS DNA 중합효소(2.5U/㎕) 및 33㎕의 물과 혼합하였다. PCR 용액을 96℃에서 5분 동안 예열시키고, 이어서 14회 주기(15초 동안 96℃, 15초 동안 60℃, 6초 동안 72℃)를 수행하였고, 그 다음 3분 동안 72℃에서 연장시켰다. VL_vr1을 프라이머 쌍 F_2898(TACTTATGTAGGCGATCGGGTCACCATCACCTGC)(서열번호 217) 및 R_2898(CGGAGCTTTTCCTGGTTTCTGTTGATAC)(서열번호 218)을 사용하여 증폭시키고, VL_vr2를 프라이머 쌍 F_2013(GAAACCAGGAAAAGCTCCGAAG)(서열번호 219) 및 R_2013(CGTCCCGGAACCGGATCCAGAGAAGCGAG)(서열번호 220)을 사용하여 증폭시켰다.
이중 가닥 VL_vr1 및 VL_vr2를 5' 또는 3' 단부에서 중첩 서열을 통해서 함께 연결시켰다. 사용된 프로토콜을 하기와 같다: 20ng의 VL_vr1 및 20ng의 VL_vr2 주형을 10㎕의 5x PrimeSTAR 완충제, 4㎕의 dNTP 혼합물, 1㎕의 100μM F_2898 프라이머, 1㎕의 100μM R_2013 프라이머, 0.5㎕의 PrimeSTAR HS DNA 중합효소(2.5U/㎕) 및 물(최대 50㎕)과 혼합하고, 혼합물을 96℃에서 5분 동안 예열시키고, 이어서 14회 주기(15초 동안 96℃, 15초 동안 60℃, 10초 동안 72℃)를 수행하였고, 그 다음 3분 동안 72℃에서 연장시켰다. 이어서, 이러한 PCR 단편을 겔 전기영동(GENEray Gel Extraction 키트)를 통해서 정제시키고, PvuI 및 BamHI(써모 사이언티픽사)로 소화시키고, 그 다음 동일한 2개의 효소로 소화된 필터 벡터 FTV015 내에서 클로닝시켰다. 결찰 혼합물을 전기천공법에 의해서 DH10B 세포 내에서 형질전환시키고, 계산된 다양성이 10배를 초과하는 집락의 수를 플라스미드 제조를 위해서 수집하였다. 정제된 플라스미드는 라이브러리 VL-vr12를 구성하였다.
VL_vr3을 암호화하는 22개 군의 축퇴 올리고를 설계 및 합성하고, 하기 프로토콜을 통해서, 이중 가닥 DNA로 전환시켰다: 0.75㎕의 0.2μM 주형 올리고를 10㎕의 5x PrimeSTAR 완충제, 4㎕의 dNTP 혼합물, 1㎕의 100μM 정방향 프라이머 F2929(ACCATCAGCAGTCTGCAGCCGGAAGACTTCGCAAC)(서열번호 221), 1㎕의 100μM 역방향 프라이머 R2929(GATCTCCACCTTGGTACCCTGTCCGAA)(서열번호 222), 0.5㎕의 PrimeSTAR HS DNA 중합효소(2.5U/㎕) 및 33㎕의 물과 혼합하였다. PCR 용액을 96℃에서 5분 동안 예열시키고, 이어서 14회 주기(15초 동안 96℃, 15초 동안 60℃, 6초 동안 72℃)를 수행하였고, 그 다음 3분 동안 72℃에서 연장시켰다. 이어서, VL_vr3을 암호화하는 이중 가닥 DNA를 겔 전기영동(GENEray Gel Extraction 키트)를 통해서 정제시키고, PstI 및 Acc65I(써모 사이언티픽사)로 소화시키고, 그 다음 동일한 2개의 제한 효소로 소화된 필터 벡터 FTV013 내에서 클로닝시켰다. 결찰 혼합물을 전기천공법에 의해서 DH10B 세포 내에서 형질전환시키고, 계산된 다양성이 10배를 초과하는 집락의 수를 플라스미드 제조를 위해서 수집하였다. 정제된 플라스미드는 라이브러리 VL-vr3을 구성하였다.
전장 VL 라이브러리를 조립하기 위해서, 정제된 VL-vr3 라이브러리 플라스미드 혼합물을 PstI alc Acc65I(NEB)로 소화시키고, vr3-암호화 단편을 젤 전기영동(GENEray Gel Extraction 키트)을 통해서 정제시키고, 그 다음 동일한 2개의 제한 효소로 소화된 VL-vr12 라이브러리 플라스미드 혼합물 내에서 클로닝시켰다. 결찰 산물을 전기천공법에 의해서 DH10B 세포 내에서 형질전환시키고, 계산된 다양성이 10배를 초과하는 집락의 수를 플라스미드 제조를 위해서 수집하였다. 정제된 플라스미드는 라이브러리 VL-vr123을 구성하였다. 이어서 라이브러리 플라스미드 VL-vr123으로부터의 vr123 삽입물을 제한 효소 PvuI 및 Acc65I를 사용하여, 파지미드 벡터 Fad40로 옮겼다. Fad40-vr123을 함유하는 라이브러리의 크기는 4*107에 도달하였다.
완전한 동적 라이브러리의 작제
동적 라이브러리는 VH-vr123 라이브러리로부터 유래된 중쇄 라이브러리 및 Fad40-vr123 라이브러리로부터 유래된 경쇄 라이브러리로 구성되었다. VH-vr123 라이브러리 플라스미드 및 Fad40-vr123 라이브러리 플라스미드 둘 다를 BspEI 및 SpeI(써모 사이언티픽사)로 소화시켰다. VH-vr123 라이브러리로부터 유래된 중쇄를 암호화하는 DNA 단편을 Fad40-vr123 라이브러리로부터 유래된 벡터 골격 내에 클로닝시켰다. 결찰 산물은 탈염시키고(QIAquick(등록상표) PCR 정제 키트(퀴아젠사)), 그 다음 롤링 서클 증폭(RCA)을 수행하였다. RCA를 하기와 같이 수행하였다: 40ng의 결찰 산물을 10㎕의 10x NEBuffer 4, 50㎕의 100μM pd(N)8 및 물(최대 88.5㎕)과 혼합하고, 3분 동안 95℃까지 가열시키고, 사이클마다 1℃만큼 감소시키면서 65회 사이클(사이클당 30초) 동안 어닐링시켰다. 10㎕의 10mM dNTP 믹스, 1㎕의 100 x BSA 및 0.5㎕의 Phi29 DNA 중합효소를 첨가한 후 어닐링된 반응물을 30℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. RCA 산물을 먼저 NotI로 소화시키고, DNA 단편을 (QIAquick(등록상표) PCR 정제 키트)로 정제시키고, Acc65I로 추가로 소화시켰다. 이어서, 소화된 산물을 T4 DNA 리가제(써모 사이언티픽사)로 결찰시켰다. 에탄올 침전을 통한 정제 후, 결찰 산물을 전기천공법에 의해서 ER2738 세포 내에서 형질전환시켰다. 1.4*1010 집락의 총 수를 플레이트(2xYT, 1% 글루코스, 100㎍/㎖의 암피실린)로부터 수집하여 DPL6 라이브러리를 제조하였다.
실시예 3: 관심대상 항체를 단리시키기 위한 공통 중쇄 라이브러리의 스크리닝
*동적 라이브러리 파지미드 입자의 제조
항원 패닝(antigen panning)을 위한 동적 라이브러리 파지미드 입자를 제조하기 위해서, 동적 라이브러리(상기 실시예 2에 기재됨)를 보유하는 5.0리터의 ER2738 세포를 2xYT, 2%의 글루코스, 100㎍/㎖의 암피실린 및 12.5㎍/㎖의 테트라사이클린을 함유하는 배지 중에서 0.1의 시작 OD600에서 접종시켰다. 배양물이 0.6 내지 0.8의 OD600에 도달될 때까지, 250rpm에서 진탕하면서, 배양물을 37℃에서 성장시켰다. 이어서, 세포를 10의 감염다중도(multiplicity of infection: MOI)로 30분 동안 37℃에서 M13KO7 헬퍼 파지로 감염시켰다. 감염된 ER2738 세포를 2xYT, 100㎍/㎖의 암피실린 및 50㎍/㎖의 카나마이신을 함유하는 3.2리터의 배지 중에서 22℃에서 밤새 성장시켰다. 이어서, 배양물 상청액을 10,000rpm에서 15분 동안 원심분리시킴으로써 수거하고, 0.45㎛ 저결합 막 필터(코닝사)를 통해서 여과시켰다. 이어서, 파지미드 입자를 PEG/NaCl을 사용하여 여과된 상청액으로부터 침전시키고, PBS 중에 재현탁시켰다. 추가 라운드의 PEG/NaCl 침전, 그 다음 PBS 중의 재현탁을 수행하였다. OD268 측정(OD268에서의 1을 대략 1*1013개 파지 입자/㎖인 것으로 가정)에 의해서 파지 역가를 결정하고, 플라크 검정에 의해서 확인하였다. 라이브러리 파지미드 입자를 20% 글리세롤 중에서 -80℃에서 저장하였다.
파지 라이브러리 패닝
1 내지 30㎍/㎖의 농도의 항원 단백질을 밤새 4℃에서 Maxisorp 스트립(써모 사이언티픽사, 카탈로그 번호 446469) 상에 코팅시켰다. 항원의 다중 웰을 각각의 라이브러리에 대해서 제조하였다. 코팅된 웰을 먼저 PBS 중의 5% 우유로 1 내지 2시간 동안 실온에서 차단시키고, PBS로 세척하였다.　 이어서 1,100㎕/웰의 파지미드 입자 용액(전형적으로 2% 우유-PBS 중의 1 내지 5*1012개 파지)을 4개의 평행 웰에 첨가하고, 1 내지 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 웰을 증가하는(0.1%에서 0.3%로) Tween 20의 농도를 갖는 PBS로 수 회 세척하고, 마지막으로 PBS 단독으로 세척하였다. 결합된 파지미드 입자를 100㎕의 0.2M 글리신-HCl을 갖는 웰로부터　10분 동안 실온에서 용리시켰다. 용리된 파지를 18㎕의 1M Tris-HCl(pH 9.1)로 즉시 중화시켰다.
대안적으로, 제조사의 설명서에 따라서 Dynabead(M280, 스트렙타비딘, 인비트로젠사(Invitrogen), 카탈로그 번호 60210)를 사용하여 KingFisher(써모 사이언티픽사)를 통해서 파지미드 라이브러리 패닝을 수행하였다. 300㎕의 Dynabead를 PBS로 세척하고, 바이오틴일화된 항-인간 Fc와 함께 20분 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 이어서 비드를 PBS 중의 5% BSA로 1시간 동안 실온에서 차단시켰다. 실온에서의 1시간 인큐베이션에 의해서 Fc-융합 항원(70 내지 100pmol)을 포획하였다. 이어서 비드를 PBS로 1회 세척하고, 1㎖의 파지 라이브러리 용액(전형적으로 5% BSA-PBS 중의 5*1012 내지 1*1013개 파지 입자)과 함께 1 내지 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서 비드를 PBS/Tween(0.1% 내지 0.3%) 및 PBS로 수 회 세척하고, 결합된 파지를 100㎕의 0.2M 글리신-HCl을 갖는 비드로부터　10분 동안 실온에서 용리시켰다. 용리된 파지를 18㎕의 1M Tris-HCl(pH 9.1)로 즉시 중화시켰다. 총 3 내지 4 라운드의 패닝을 항원 각각에 대해서 수행하였고, 10배 초과 과량의 정제된 인간 Fc를 포함시켜 배경 결합을 감소시켰다.
시험된 항원 중 일부의 경우, 2㎖의 항원(10 내지 30㎍/㎖)을 사용하여 밤새 4℃에서 면역-튜브를 코팅시켰다. 차단, 세척 및 용리 용액의 부피는 이에 따라서 증가되었다.
풍부해진 파지의 증폭
용리된 풍부해진 파지 풀을 하기와 같이 추가로 증폭시켰다: ER2738 세포를 용리된 파지미드 입자로 37℃에서 30분 동안 감염시켰다. 이어서 감염된 세포를 2%의 글루코스, 100㎍/㎖의 암피실린 및 12.5㎍/㎖의 테트라사이클린을 갖는 2xYT 아가 플레이트 상에 플레이팅하였다. 집락을 플레이트로부터 수거하고, 100㎖의 2% 글루코스, 100㎍/㎖의 암피실린 및 12.5㎍/㎖의 테트라사이클린 중에서 성장시키고, M13KO7 헬퍼 파지로 감염시켰다. 증폭된 파지를 정제시키고, 상기에 기재된 공정에 의해서 정량하였다. 보통, 최종 라운드의 패닝 이후에 용리된 파지를 사용하여 ER2738 세포를 감염시키고, 생성된 ER2738 집락을 상청액 ELISA 스크리닝 검정을 위해서 취하였다.
상청액 샌드위치 Elisa 검정
민감성 샌드위치 Elisa 검정을 개발하여 박테리아 상청액 중에 존재하는 Fab를 측정하였다. 마이크로플레이트를 다클론성 항-인간 IgG(Fab 특이적)(Sigma I5260)로 코팅하여 박테리아 상청액 중에 존재하는 Fab를 포획하였고, 이어서 HRP 표지된 염소 항-인간 Fc를 사용하여 포획된 Fab의 양을 검출하였다. 각각의 웰의 A450을 측정하여 Fab 결합 활성도를 결정하였다. ELISA 신호가 배경의 적어도 2배인 것으로서 일차 히트(primary hit)를 정의하였고, 이것을 하기 실시예(실시예 4)에서 추가로 특징규명하였다.
12개의 인간 표적(TAGT-1, TAGT-2, TAGT-3, TAGT-4, TAGT-5, TAGT-6, TAGT-7, TAGT-8H, TAGT-9, TAGT-10H, TAGT-11 및 TAGT-12), 뿐만 아니라 2개의 상응하는 마우스 표적(TAGT-8M 및 TAGT-10M)을 작제된 라이브러리와 함께 스크리닝하였다. 이들 14개의 항원을 사용하여, 높은 친화도를 갖는 총 690개의 고유한 양성 히트를 식별하였다. 변이체 군 대부분(표 2)은 상이한 표적 항원에 결합하는 항체를 형성할 수 있거나, 또는 두 종 사이에 교차 반응성이었다(예를 들어, TAGT-8H 및 TAGT-8M에 결합하였다). 확인된 결합기로부터의 변이체 군은 표 2에 나타낸 설계된 변이체 군의 하위세트였다. 설계된 변이체 대부분은 또한 확인된 결합기에 존재하였다(표 3)(표 2의 설계된 식 대 표 3으로부터의 양성 히트로부터의 식 참고).
실시예 4: 시험관내에서의 항체의 특징규명
CH1 도메인의 C-말단을 His6 태그로 태그화시킨 상기 실시예 3에서 식별된 일차 히트에 상응하는 Fab를 이. 콜라이에서 과발현시키고, 제조사에 설명서에 따라서 Ni-NTA 수지(써모 피셔 사이언티픽사(Thermo Fisher Scientific))를 통해서 정제시켰다. 이의 친화도를 ForteBio Octet RED96 시스템에 의해서 측정하였다. 간략하면, AHC 센서(항-인간 IgG-Fc 포획 침지 및 판독 바이오 센서)를 사용하여 항원 Fc-His 융합 단백질(시노 바이올로지컬사(Sino Biological) #10039-H03H)을 포획하였고, 동적 완충제를 사용하여 5 내지 10㎍/㎖로 희석된 정제된 Fab를 함유하는 웰에 침지시켰다(문헌[ForteBio, Anti-human IgG Capture (AHC) Biosensors, Product Insert 41-0072-PD (2008); Yang et al. (2016), Anal. Biochem. 508:78-96] 참고). 획득된 ForteBio 데이터를 데이터 획득 소프트웨어(Data Acquisition software) 7.1을 사용하여 처리하고, 동적 데이터를 1:1 랑그뮈어 결합 모델(Langmuir binding model)에 피팅하였다. 시차 주사 형광측정법(Differential Scanning Fluorimetry: DSF) 검정에 의해서 Fab 융점을 측정하였다. 간략하면, qPCR 기기(실시간 PCR)를 사용하여 온도 및 형광 모니터링을 수행하였다. SYPRO(등록상표) 오렌지를 PBS 완충제를 사용하여 5000x 스톡 50배 내지 100x로 희석시키고; 16㎕의 각각의 Fab(약 0.5㎎/㎖)를 96웰 마이크로플레이트 내의 각각의 웰에 첨가하고, 4㎕의 100x SYPRO(등록상표) 오렌지와 혼합하였다. LightCycler(등록상표)480 시스템을 사용하여 형광 강도를 측정하였다. 여기 파장을 483㎚로 설정하고, 방출 파장을 568㎚로 설정하였다. 온도를 분당 1.2 내지 1.3℃의 증분으로 25℃에서 90℃로 상승시켰고, 각각의 측정 온도에서 15초의 평형 시간을 적용하였다. LightCycler(등록상표)480 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다. 소수성 노출의 중위점, Tm을 제1 형광 전이의 제1 유도체의 최대 값에 상응하는 온도로서 정의하였다(또한 문헌[Lavinder et al. (2009), J. Am. Chem. Soc.131: 3794-3795; Ericsson et al. (2006), Analytical Biochemistry 357: 289-298; Phillips and Hernandez de la Pena (2011), Current Protocols in Mol. Biol. 94: 10.28.1-10.28.15] 참고).
12개의 인간 표적 항원(TAGT-1, TAGT-2, TAGT-3, TAGT-4, TAGT-5, TAGT-6, TAGT-7, TAGT-8H, TAGT-9, TAGT-10H, TAGT-11 및 TAGT-12)은 26% 미만의 서열 동일성을 공유하는 관련이 없는 단백질이었다. 인간 항원 TAGT-8H와 마우스 항원 TAGT-8M 간의 서열 동일성은 70%인 반면, 인간 항원 TAGT-10H와 마우스 항원 TAGT-10M 간의 서열 동일성은 60%였다. 높은 친화도로 14개의 상이한 항원을 표적으로 하는 다수의 항체를 동적 라이브러리로부터 성공적으로 식별 및 선택하였다. 대부분의 결합기의 친화도는 나노몰 범위였고, 일부는 심지어는 나노몰 미만의 범위에 도달하였다(도 2A). 또한, 확인된 결합기는 양호한 안정성을 나타내었고, Tm 범위를 도 2B에 나타낸다.
실시예 5: 동적 중쇄 라이브러리의 응용
중쇄 라이브러리의 견고성 및 유연성을 추가로 조사하기 위해서, 중쇄를 107에서 280까지로 다양한 다양성을 갖는 상이한 경쇄 라이브러리와 단일 경쇄(즉, 공통 경쇄)까지 짝지움으로써 라이브러리를 상기 실시예 4에 기재된 14개의 표적 항원에 대해서 모두 단일 경쇄에 스크리닝하였다. 경쇄 자체의 유연성 및/또는 동적 다양성을 탐색하면서, 각각의 짝지움 파트너(예를 들어, 107 내지 280, 20 및 단일 경쇄까지 범위의 다양성을 갖는 경쇄 라이브러리 및 단일 경쇄)의 물리적 크기를 트리밍함으로써 중쇄 라이브러리 및 경쇄 라이브러리 둘 다에서의 다양성 설계의 한계를 탐색하였다. 다양한 항체 히트/리드를 공지된 도전적인 표적 항원에 대해서 생성시키고 조작하는 경우, 동적 중쇄 라이브러리와 짝을 이루는 이들 동적 경쇄 라이브러리의 능력은 라이브러리 설계에 대한 강력한 합리성을 제공하였다. 높은 친화도를 갖는 양성 히트를 시험된 라이브러리 각각으로부터 식별하였고, 총 690개의 고유한 양성 히트를 측정하고, 친화도 데이터로 확인하였다(표 4). 상이한 표적, 뿐만 아니라 이의 에피토프 변이(인간 및 대략 60%의 서열 동일성을 갖는 뮤린 표적과의 교차 종 반응성에 의해서 나타나는 바와 같은, 두 종 간의 에피토프 인식의 미미한 차이를 포함하지만 이에 제한되지 않음)에 결합하는 능력을 조사하였다. HVR-H1_1, HVR-H1_2 또는 HVRH-1_3, 및 HVR-H2_1, HVR-H2_2 또는 HVRH-2_3, HVR-H2_4, HVR-H_5, HVRH-2_6 또는 HVR-H2_7의 각각의 조합물을 사용하는 양성 히트를 관찰하였다. 이러한 결과는, 항체 (및/또는 대안적인 단백질) 스캐폴드 상에 이식되거나 이것 내에서 설계될 때, 치료, 진단 및/또는 연구 시약에 대한 광범위한 표적을 인식하는 항체 및 단백질 라이브러리를 제조하기 위해서 이러한 동적 초가변 영역 단위를 사용하는 기회 및 가능성을 나타낸다. 항체 (및/또는 비-항체) 스캐폴드의 설계 및 작제에서의 이러한 중쇄 초가변 영역 단위의 동적 특성은, 넓은 다양성(예를 들어, 107 내지 280 범위, 단일 고유한 서열까지)을 갖는 경쇄 라이브러리와 짝을 이루는 경우, 치료, 진단 및/또는 연구 설정에 유용한 신규한 결합 시약을 생성시키기 위한 동적 항체 설계 개념의 강력한 검증이다.
이러한 HVR-H1 및 2 서열이 상이한 HVR-H3 및 VL 서열과 짝을 이루는 경우 상이한 표적 항원에 결합할 수 있는 동일한 HVR-H1 및 HVR-H2 서열을 함유하는 히트를 발견하였다. 예를 들어, 히트 ID 4029, 7097 및 5906은 동일한 HVR-H1 및 HVR-H2 조합물(HVR-H1_2 및 HVR-H2_4)을 함유하였지만, 상이한 HVR-H3 및 VL 서열과 짝을 이뤘고, 3개의 상이한 표적 항원(각각 TAGT-8, TAGT-6 및 TAGT-12)에 결합하였다. 히트 7040 및 5924는 동일한 HVR-H1 및 HVR-H2 조합물(HVR-H1_2 및 HVR-H2_6)을 함유하였지만, 상이한 HVR-H3 및 VL 서열과 짝을 이뤘고, 2개의 상이한 표적 항원(각각 TAGT-8 및 TAGT-12)에 결합하였다.
하기 표 5는 라이브러리 분석 동안 식별된 HVR-H1 및 HVR-H2에 결합된 표적의 수 및 서열 사용을 나타낸다. 이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 주어진 초가변 영역을 포함하는 항체에 의해서 결합된 다수의 항원은 특정 초가변 영역의 높은 유연성 정도를 나타낼 수 있고, 주어진 초가변 영역의 높은 분절 사용은 초가변 영역(및 주변 폴리펩타이드 서열)의 견고한 접힘을 나타낼 수 있다고 생각된다.
하기 표 6은 라이브러리 분석 동안 식별된 HVR-H1 및 HVR-H2 조합물에 결합된 항원의 수 및 서열 사용을 나타낸다.
상기에 기재된 공유한 항체 히트 중 1 초과로 보이는 74개의 HVR-H1 서열(서열번호 1 내지 52 및 137 내지 158, 표 1) 및 90개의 HVR-H2 서열(서열번호 53 내지 136 및 159 내지 164, 표 1)을 식별하였다. 다양한 HVR-H3과 가변 경쇄 도메인을 조합하는 경우, 이러한 HVR은 다수의 항원에 결합하는 항체를 형성할 수 있었다. 기재된 고유한 항체 히트 중 1 초과로 보이는 추가의 65개의 신규 HVR-H1 및 HVR-H2 서열 조합물을 식별하였다. 하기 표 7은 이러한 새로운 HVR 서열을 사용한 라이브러리 분석 동안 결합된 항원의 수 및 HVR-H1 및 HVR-H2 사용을 나타낸다.
하기 표 8은 신규 HVR-H1 및 HVR-H2 서열의 조합물에 결합된 항원의 수 및 사용을 나타낸다.
표 9는 제시된 신규 HVR-H1 및 HVR-H2 서열을 사용한 고유한 히트에 대한 친화도 데이터를 나타낸다.
서열번호 16을 포함하는 HVR-H1을 8개의 고유한 히트에서 사용하였다. 다른 HVR의 상이한 서열을 제외하고는, 이러한 동일한 HVR-H1 서열을 사용하면, 그러한 8개의 히트는 5개의 상이한 표적 항원에 결합할 수 있었다. 각각 TAGT-8, TAGT-12 및 TAGT-6에 결합한 예시적인 히트 ID 4034, 6010 및 7183은 서열번호 16을 포함하는 HVR-H1을 함유하였다.
서열번호 63을 포함하는 HVR-H2를 40개의 고유한 히트에서 사용하였다. 다른 HVR의 상이한 서열을 제외하고는, 이러한 동일한 HVR-H2 서열을 사용하면, 그러한 40개의 히트는 7개의 상이한 표적 항원에 결합할 수 있었다. 각각 TAGT-8, TAGT-12 및 TAGT-6에 결합한 예시적인 히트 ID 4036, 5115 및 5404는 서열번호 63을 포함하는 HVR-H2를 함유하였다.
예시적인 히트 ID 3757 및 5103은 동일한 HVR-H1 및 HVR-H2 서열(서열번호 1 및 122)을 비롯한 동일한 중쇄 가변 영역을 함유하였지만, 상이한 가변 경쇄 도메인과 조합되는 경우, 그것은 2개의 상이한 표적 항원(각각 TAGT-6 및 TAGT-10)에 결합하였다. 이러한 동일한 HVR-H1 및 HVR-H2 서열을 갖는 2개의 추가 히트는 또 다른 표적 항원, TAGT-11에 결합할 수 있다.
서열번호 31 및 124의 HVR-H1 및 HVR-H2 서열을 함유하는 예시적인 히트 ID 4027는 2개의 상이한 종으로부터의 동일한 항원(TAGT-8H 및 TAGT-8M)에 결합할 수 있었다. 이러한 동일한 HVR-H1 및 HVR-H2 서열을 갖는 몇몇 다른 히트는 종 교차 반응성을 나타내었다.
구조 및 서열 가변성에 기초하여 항체의 재정의된 초가변 영역의 동적 모티프를 식별하기 위해서 사용되는 신규 방법은 VH 성분이 짝을 이루는 VL 분절에 따라서 동일한 또는 다수의 상이한 표적에 결합할 수 있는 제한된 수의 VH 성분의 설계로 이어졌다. 본 명세서에 기재된 데이터 및 항체는, 전체 세트 또는 하위세트로서 사용되는 중쇄 라이브러리가 항체 발견을 위한 VH 성분으로서 작용하기에 충분히 강력함을 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> ADAGENE INC. <120> DYNAMIC HUMAN HEAVY CHAIN ANTIBODY LIBRARIES <130> WO/2019/036842 <140> PCT/CN2017/098299 <141> 2017-08-21 <160> 274 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H1 sequence 1 <400> 1 Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Gly Ile His Trp Val 1 5 10 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H1 sequence 2 <400> 2 Phe Thr Phe Thr Gly Tyr Ala Ile His Trp Val 1 5 10 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H1 sequence 3 <400> 3 Phe Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Ile His Trp Val 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H1 sequence 4 <400> 4 Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Ala Ile His Trp Val 1 5 10 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H1 sequence 5 <400> 5 Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Ile His Trp Val 1 5 10 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> 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sequence 9 <400> 61 Leu Ala Arg Ile Asp Trp Asp Gly Asp Lys Tyr Tyr Ser Thr Ser Leu 1 5 10 15 Lys Ser Arg Leu 20 <210> 62 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H2 sequence 10 <400> 62 Ile Gly Asp Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu 1 5 10 15 Lys Ser Arg Val 20 <210> 63 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H2 sequence 11 <400> 63 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu 1 5 10 15 Lys Ser Arg Val 20 <210> 64 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H2 sequence 12 <400> 64 Ile Gly Glu Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu 1 5 10 15 Lys Ser Arg Val 20 <210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H2 sequence 13 <400> 65 Ile Gly Ser Ile Tyr His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 1 5 10 15 Lys Ser Arg Val 20 <210> 66 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Designed HVR-H2 sequence 14 <400> 66 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Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 176 <211> 108 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 7040 - VL <400> 176 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 177 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hit ID 5924 - VH <400> 177 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr His Trp Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Ile Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys 50 55 60 Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Ala Gly Val His Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 178 <211> 108 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 5924 - VL <400> 178 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 179 <211> 123 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hit ID 4034 - VH <400> 179 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Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln Gly Thr His Phe Pro Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 181 <211> 118 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hit ID 6010 - VH <400> 181 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 His Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Trp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys 50 55 60 Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 182 <211> 108 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 6010 - VL <400> 182 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 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105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 184 <211> 108 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 7183 - VL <400> 184 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 185 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hit ID 4036 - VH <400> 185 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Arg Tyr Gly Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 186 <211> 112 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 4036 - VL <400> 186 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Tyr 20 25 30 Gly Lys Ser Phe Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr 85 90 95 Arg Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 187 <211> 117 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hit ID 5115 - VH <400> 187 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 His Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Ser Tyr Tyr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 188 <211> 108 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 5115 - VL <400> 188 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 189 <211> 119 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hit ID 5404 - VH <400> 189 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr His Trp Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 190 <211> 107 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 5404 - VL <400> 190 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Ser Val 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Thr His Asp Pro Val Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 191 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hit ID 3757 - VH <400> 191 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Pro Ser Gly Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Tyr Tyr Gly Val Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly 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Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Tyr Tyr Gly Val Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 194 <211> 108 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 5103 - VL <400> 194 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 195 <211> 117 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hit ID 4027 - VH <400> 195 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 His His Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Trp Ile Ser Pro Ser Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys 50 55 60 Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Phe Asp Gly Phe His Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 196 <211> 112 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HIT ID 4027 - VL <400> 196 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Phe Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Leu Pro Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr 85 90 95 Ser Trp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 197 <211> 117 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> VH in FIG. 1B <400> 197 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Gly Ala Gly Asp Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Asp Tyr Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 198 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (I) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 198 Xaa Thr Phe Xaa Xaa Tyr Xaa Ile His Trp Val 1 5 10 <210> 199 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (II) <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (7)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 199 Tyr Ser Ile Xaa Ser Gly Xaa Xaa Trp Xaa Trp Ile 1 5 10 <210> 200 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (III) <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 200 Phe Ser Leu Ser Thr Xaa Gly Val Xaa Val Xaa Trp Ile 1 5 10 <210> 201 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (IV) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (7)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 201 Leu Ala Xaa Ile Xaa Trp Xaa Xaa Asp Lys Xaa Tyr Ser Xaa Ser Leu 1 5 10 15 Lys Ser Arg Leu 20 <210> 202 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (V) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 202 Ile Gly Xaa Ile Xaa Xaa Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu 1 5 10 15 Lys Ser Arg Val 20 <210> 203 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (VI) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 203 Ile Gly Xaa Ile Tyr Xaa Ser Gly Xaa Thr Xaa Tyr Asn Pro Ser Leu 1 5 10 15 Lys Ser Arg Val 20 <210> 204 <211> 21 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (VII) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (9)..(10) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 204 Val Ser Xaa Ile Ser Gly Xaa Gly Xaa Xaa Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly Arg Phe 20 <210> 205 <211> 21 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (VIII) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 205 Ile Gly Xaa Ile Asn Pro Asn Xaa Gly Xaa Thr Xaa Tyr Ala Gln Lys 1 5 10 15 Phe Gln Gly Arg Val 20 <210> 206 <211> 21 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (IX) <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 206 Ile Gly Xaa Ile Xaa Pro Ser Xaa Gly Xaa Thr Xaa Tyr Ala Gln Lys 1 5 10 15 Phe Gln Gly Arg Val 20 <210> 207 <211> 23 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Formula (X) <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(14) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 207 Val Gly Arg Ile Xaa Ser Lys Xaa Xaa Gly Xaa Thr Thr Xaa Tyr Ala 1 5 10 15 Ala Xaa Val Lys Gly Arg Phe 20 <210> 208 <211> 20 <212> PRT <213> artificial sequence 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can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 210 Val Gly Arg Ile Xaa Ser Lys Xaa Xaa Gly Xaa Thr Thr Glu Tyr Ala 1 5 10 15 Ala Xaa Val Lys Gly Arg Phe 20 <210> 211 <211> 23 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> Primer F_1999 <400> 211 cgtttgtcct gtgcagcttc cgg 23 <210> 212 <211> 25 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> Primer R_1999 <400> 212 cgaggccctt acccggggcc tgacg 25 <210> 213 <211> 21 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> Primer F_2003 <400> 213 ccgggtaagg gcctcgagtg g 21 <210> 214 <211> 33 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> Primer R_2003 <400> 214 gagcacgtcc gttcgaattg tcgcgactta tag 33 <210> 215 <211> 45 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> 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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4701386A1 (en) 2024-08-20 2026-02-25 LG Display Co., Ltd. Display device

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111511762B (zh) 2017-08-21 2025-05-06 天演药业公司 抗cd137分子及其用途
JP7324744B2 (ja) 2017-08-21 2023-08-10 アダジーン インコーポレイテッド ダイナミックヒト抗体軽鎖ライブラリー
CA3072143A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Adagene Inc. Dynamic human heavy chain antibody libraries
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
WO2019148444A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Anti-ctla4 antibodies and methods of making and using the same
JP2023508189A (ja) * 2019-12-24 2023-03-01 アダジーン（スージョウ）リミテッド 抗ｃｓｆ１ｒ分子及びその使用
US11834512B2 (en) 2020-05-04 2023-12-05 The Regents Of The University Of California Inhibiting anti-ENPP1 antibodies
US20230374162A1 (en) * 2020-10-07 2023-11-23 Amgen Inc. Rational selection of building blocks for the assembly of multispecific antibodies
WO2023193239A1 (en) * 2022-04-08 2023-10-12 Peter Peizhi Luo Anti-cd28 antibodies and methods of use thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04211395A (ja) * 1990-02-01 1992-08-03 Behringwerke Ag 合成ヒト抗体の遺伝子バンクの製造および使用
JP2013534130A (ja) * 2010-07-16 2013-09-02 アディマブ， エルエルシー 抗体ライブラリー
WO2016062989A1 (en) * 2014-10-22 2016-04-28 Crescendo Biologics Limited Human vh domain scaffolds

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
ES2087997T3 (es) 1990-01-12 1996-08-01 Cell Genesys Inc Generacion de anticuerpos xenogenicos.
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US20030036092A1 (en) 1991-11-15 2003-02-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Directed evolution of enzymes and antibodies
US5866344A (en) 1991-11-15 1999-02-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody selection methods using cell surface expressed libraries
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
EP2305027B1 (en) 1996-12-03 2014-07-02 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
DE60022369T2 (de) 1999-10-04 2006-05-18 Medicago Inc., Sainte Foy Verfahren zur regulation der transkription von fremden genen in gegenwart von stickstoff
DE60224720D1 (en) * 2001-11-22 2008-03-06 Univ Keio Re
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
US8052974B2 (en) 2005-05-12 2011-11-08 Crucell Holland B.V. Host cell specific binding molecules capable of neutralizing viruses and uses thereof
EP1957531B1 (en) 2005-11-07 2016-04-13 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
SI2274008T1 (sl) 2008-03-27 2014-08-29 Zymogenetics, Inc. Sestavki in metode za zaviranje PDGFRBETA in VEGF-A
RU2608640C2 (ru) 2010-08-16 2017-01-23 Новиммун С.А. Способы получения мультиспецифичных и мультивалентных антител
CN105247050B (zh) 2013-03-14 2020-06-16 天演药业 用于文库构建、亲和力结合剂筛选和其表达的整合系统
CN103603057B (zh) 2013-07-03 2016-01-06 深圳大学 基于可感染病毒颗粒型抗体重链库/轻链库的抗体筛选和制备方法
EP4477269A3 (en) 2015-09-20 2025-03-19 The United States of America, as Represented By the Secretary, Department of Health and Human Services Monoclonal antibodies specific for fibroblast growth factor receptor 4 (fgfr4) and methods of their use
CA3072143A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Adagene Inc. Dynamic human heavy chain antibody libraries
JP7324744B2 (ja) 2017-08-21 2023-08-10 アダジーン インコーポレイテッド ダイナミックヒト抗体軽鎖ライブラリー

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04211395A (ja) * 1990-02-01 1992-08-03 Behringwerke Ag 合成ヒト抗体の遺伝子バンクの製造および使用
JP2013534130A (ja) * 2010-07-16 2013-09-02 アディマブ， エルエルシー 抗体ライブラリー
WO2016062989A1 (en) * 2014-10-22 2016-04-28 Crescendo Biologics Limited Human vh domain scaffolds

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chingwei V. Lee et al., ‘High-affinity Human Antibodies from Phage-displayed Synthetic Fab Libraries with a Single Framework Scaffold’, J. Mol. Biol, Vol. 340, pp. 1073-1093, 2004.* *
Sachdev S. Sidhu et al., ‘Phage-displayed Antibody Libraries of Synthetic Heavy Chain Complementarity Determining Regions’, J. Mol. Biol., Vol. 338, pp. 299-310, 2004.* *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4701386A1 (en) 2024-08-20 2026-02-25 LG Display Co., Ltd. Display device

Also Published As

Publication number Publication date
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AU2017428737A1 (en) 2020-03-05

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