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KR20180100624A - 증가된 nep 안정성을 갖는 제어 방출성 cnp 작용제 - Google Patents

증가된 nep 안정성을 갖는 제어 방출성 cnp 작용제 Download PDF

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KR20180100624A
KR20180100624A KR1020187022488A KR20187022488A KR20180100624A KR 20180100624 A KR20180100624 A KR 20180100624A KR 1020187022488 A KR1020187022488 A KR 1020187022488A KR 20187022488 A KR20187022488 A KR 20187022488A KR 20180100624 A KR20180100624 A KR 20180100624A
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Abstract

본 발명은 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 5배 이상 더 긴 분해 반감기를 갖는 제어 방출성 CNP 작용제, 상기 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물, 이들의 용도 및 치료 방법에 관한 것이다.

Description

증가된 NEP 안정성을 갖는 제어 방출성 CNP 작용제
본 발명은 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 5배 이상 더 긴 분해 반감기를 갖는 제어 방출성 CNP 작용제, 상기 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물, 이들의 용도 및 치료 방법에 관한 것이다.
연골무형성증(ACH)은 FGFR3의 기능 획득 돌연변이에 의해 야기된다. CNP의 그의 수용체인 나트륨이뇨-펩타이드 수용체 B(NPR-B)로의 결합은 FGFR3 하류 신호전달을 억제하며 따라서 CNP를 과발현하는 마우스 및 인간 양자에서 관찰되는 바와 같이 연골내 성장 및 골격 과도성장을 유발한다. 연골에서의 CNP의 과잉생산 또는 정맥내(iv) 주입을 통한 CNP의 지속적인 전달은 연골무형성증 마우스의 왜소증을 정상화시키며, 이는 과생리학적 수준의 CNP의 투여가 ACH를 치료하기 위한 전략임을 시사한다.
그러나 CNP-22의 짧은 반감기(iv 투여 후 2분)를 고려할 때, 치료제로서 CNP는 지속적인 주입이 필요할 수 있기 때문에 소아 집단에서 도전적이다. 더욱이, CNP는 피하 조직에서 광범위하게 불활성화되기 때문에, iv 주입이 필요하다.
문헌[Potter; FEBS Journal 278(2011) 1808-1817]은 CNP의 제거가 2개의 분해 경로인 수용체-매개 분해 및 세포외 프로테아제에 의한 분해에 의해 발생한다고 기술하고 있다. CNP는 중성 엔도펩티다아제 24.11(NEP)의 작용에 의해 분해되고, CNP에 결합하여 CNP를 CNP가 분해되는 리소좀 내에 침착시키는 나트륨이뇨 펩타이드 제거 수용체인 NPR-C에 의해 전신 순환으로부터 제거된다.
이러한 하나 또는 두 가지 제거 경로에 의한 분해의 감소는 CNP의 반감기를 연장시키는 역할을 할 것이다.
활성 부위 공동(active site cavity)의 크기 제한으로 인해 NEP는 바람직하게는 약 3 kDa보다 작은 기질을 인식한다. US 8,377,884 B2는 NEP 절단에 대한 내성을 증가시키기 위해 임의로 PEG 중합체에 영구적으로 접합된 CNP 변이체를 기재하고 있다. 그러나 심지어 0.6 kDa 정도로 작은 PEG를 야생형 CNP에 부가하는 것은 CNP 활성을 감소시키는 것으로 밝혀졌고, 약 2 또는 3 kDa보다 큰 PEG를 CNP 또는 이의 변이체에 부가하는 것은 크기 의존적 방식으로 CNP 기능적 활성을 감소시킨다. 따라서, NEP 분해를 감소시키기 위해 2 내지 3 kDa보다 큰 PEG 분자의 부착은 활성 손실을 수반하며, 이는 이러한 분자의 치료적 잠재성을 감소시킬 수 있다.
펩타이드의 활성에 부정적으로 영향을 미치는 것 외에도, PEG 또는 또 다른 거대분자를 CNP에 접합시키는 것은 또한 성장판으로의 효과적인 분포를 방지할 수 있다. 문헌[Farnum et al.(Anat Rec A Discov Mol Cell Evol Biol. 2006 January; 288(1): 91-103)]은 전신 맥관구조로부터 성장판으로의 분자의 분포가 크기 의존적이라는 것과, 소분자(최대 10 kDa)는 성장판에 분포될 수 있는 반면, 40 kDa 이상의 분자 크기는 성장판으로의 진입을 못하게 한다는 것을 입증하였다.
NEP 내성 CNP 분자를 생성하고 피하 투여를 가능하게 하는 상이한 접근법이 문헌[The American Journal of Human Genetics 91, 1108-1114]에 기재되어있다. BMN-111은 17개의 아미노산이 부가되어 39개의 아미노산 CNP 약리학적 유사체를 형성한 변형된 재조합 인간 C형 나트륨이뇨 펩타이드(CNP)이다. BMN-111은 성장판에서 CNP 약리학적 활성을 모방하고, 중성-엔도펩티다아제(NEP) 내성의 결과로서 연장된 반감기를 가져 매일 1회 피하(SC) 투여를 허용한다. BMN-111은 비자연적 발생 펩타이드이기 때문에, 천연 펩타이드에 비해 면역학적 반응을 유도할 위험이 증가하고, 문헌[Martz, "sFGFR for achondroplasia"(SciBx, Biocentury October 2013)]에 기재된 바와같이, BMN-111에 대한 면역학적 반응이 동물 연구에서 관찰되었고, 항체의 존재가 약물의 약리학적 활성에 영향을 미치지 않았다. 그러나 BMN-111은 단지 20분의 반감기를 가지며, 이는 매일 투약될 때, 유효한 약물 수준에 짧은 기간 노출되는 것과 관련이 있다.
유효한 약물 수준에 대한 노출을 증가시키기 위해, CNP 활성을 갖는 약물의 용량은 증가될 수 있다. 나트륨이뇨 펩타이드는 혈액량 및 혈압에 영향을 미칠 수 있는 호르몬 부류이므로, 용량 증가는 심혈관 유해 효과와 관련될 수 있다. 동물 및 사람에서 BMN-111의 연구는 용량이 증가함에 따라 동맥압이 떨어지고 심박수가 증가한다는 것을 입증하였다. 최대 15 μg/kg의 BMN-111의 용량은 건강한 지원자에서의 경미한 저혈압과 관련이 있었다. 따라서, 약물 노출을 증가시키기 위해 CNP 활성을 갖는 약물의 용량을 증가시키는 것은 용인될 수 없는 심혈관 부작용과 관련될 수 있다.
따라서 약물 노출을 증가시키기 위해 CNP 활성을 갖는 약물의 용량을 증가시키는 것은 저혈압과 같은 용인될 수 없는 심혈관 부작용과 관련될 수 있다.
요약하면, 보다 효과적이고 보다 안전한 CNP 치료가 필요하다.
따라서 본 발명의 목적은 전술한 단점을 적어도 부분적으로 극복하는 것이다.
이 목적은 제어 방출성 CNP 작용제로 달성되며, 여기에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 방출하며, 제어 방출성 CNP 작용제는 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 5배 이상 더 긴 분해 반감기를 갖는다.
제어 방출성 CNP 작용제의 사용이 CNP 작용제의 반감기를 증가시키는 NEP 분해에 대하여 효율적인 보호를 제공한다는 것을 놀랍게도 발견하였다. 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 또한 CNP 작용제를 방출하기 때문에, 상기 CNP 작용제는 그의 완전한 활성을 나타낼 수 있고 성장판에 대한 그의 접근은 제한되지 않는다.
본 발명 내에서, 하기와 같은 의미를 갖는 용어가 사용된다.
본원에서 사용된 바의 용어 "CNP 작용제"는 나트륨이뇨 펩타이드 수용체 B(NPR-B)를 활성화하며 CNP-22(서열 번호: 1)의 NPR-B 활성보다 최대 50배 더 높은 EC50을 갖는 모든 화합물을 의미한다.
제어 방출성 CNP 작용제 및 CNP 작용제와 관련하여 본원에서 사용된 바의 "EC50"은 반 - 최대 cGMP 생성이 유도되는 제어 방출성 CNP 작용제 및 CNP 작용제의 농도를 의미한다. 제어 방출성 CNP 작용제, 방출된 CNP 작용제 및 CNP-22의 EC50 형태의 NPR-B 활성은 이들의 세포 표면상에서 NPR-B를 발현하는 NIH-3T3(뮤린 배아 섬유모세포 세포주(Murine Embryo Fibroblast cell line)) 세포를 배양하고, 제어 방출성 CNP 작용제, 상응하는 방출된 CNP 작용제 또는 CNP-22를 갖는 세포를 각기 인큐베이션하며, 표준 cGMP 어세이로 이차 메신저 cGMP의 세포 내 생산을 결정하여 측정한다. 특히 어세이는 하기와 같이 수행된다:
(1) 내인성 NPR-B를 발현하는 뮤린 NIH-3T3 세포를 5% FBS 및 5 mM 글루타민을 갖는 DMEM F-12 배지에서 37℃ 및 5% CO2에서 배양하며;
(2) 각각의 어세이를 위해 50,000개의 세포는 IBMX를 갖는 둘베코 PBS에서 재현탁시키고, 각기 상이한 농도로 제어 방출성 CNP 작용제, 상응하는 방출된 CNP 작용제 또는 CNP-22와 함께 인큐베이션하며;
(3) 37℃ 및 5% CO2에서 30분간 인큐베이션한 후, 세포를 용해시키고, cGMP 수준을 결정하며;
(4) 결정된 cGMP 수준으로부터 EC50 값을 생성한다.
바람직하게는, 단계(2)에서 IBMX 농도는 0.5 mM이다.
단계(3)은 당업계에서 공지된 표준 절차인 cGMP 측정을 위한 임의의 어세이를 사용하여 수행될 수 있다. 바람직하게는 단계(3)은 cGMP TR-FRET 어세이로 수행되며, 더 바람직하게는 시스바이오(Cisbio), 카탈로그 번호 62GM2PEB의 cGMP TR-FRET 어세이로 수행된다.
이러한 실험 동안 제어 방출성 CNP 작용제는 방출된 CNP 작용제가 결과를 왜곡시킬 수 있는 일정량의 CNP 작용제를 방출하기 때문에, 제어 방출성 CNP 작용제의 NPR-B 활성에 대한 측정은 바람직하게는 CNP 작용제를 방출하지 않는 안정한 유사체의 형태로 이루어진다.
본원에서 사용된 바의 용어 "제어 방출성 CNP 작용제"는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하며 이것으로부터 하나 이상의 CNP 작용제가 적어도 6시간의 방출 반감기로 방출되는 임의의 화합물, 접합체, 결정 또는 혼합물을 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "CNP 작용제 당량"은 제어 방출성 CNP 작용제에 포함된 CNP 작용제의 몰 함량을 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "분해 반감기"는 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 모든 CNP 작용제 분자의 절반이 분해될 때까지 필요한 시간을 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "방출 반감기"는 모든 CNP 작용제 분자의 절반이 생리학적 조건하에서 제어 방출성 CNP 작용제로부터 방출될 때까지 필요한 시간을 의미한다.
t0-시점을 참조로 시간 경과에 따른 비소화된(non-digested) CNP 작용제(내부 표준 펜타플루오로페놀(PFP)로 정규화됨)의 감소를 모니터링하는 적합한 시험관 내 NEP 분해능 어세이는 하기와 같다 :
(1) 재조합 인간 NEP 및 내부 표준 PFP를 소화 완충액 중의 제어 방출성 CNP 작용제 및 방출된 CNP 작용제에 각기 첨가하고;
(2) 용액을 37℃에서 배양하며, 샘플은 상이한 시간 간격으로 채취하고 반응은 조합 환원 및 열 변성에 의해 정지시키며;
(3) 결과의 반응 생성물은 HPLC-MS를 사용하여 분석하고;
(4) 제어 방출성 CNP 작용제 및 방출된 CNP 작용제 모두의 반감기를 시간 경과에 따른 CNP 변이체 및 PFP의 HPLC-UV 피크 영역의 비율 변화를 통해 계산한다.
바람직하게는, 소화 완충액은 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 10 mM NaCl이다.
NEP 분해능 어세이에서의 분해 시간은 a) 소화 어세이에서 사용된 NEP 농도 및 b) 사용된 NEP 품질 및 로트의 단백질분해 활성에 영향을 받는 것으로 이해된다. 당업자는 적합한 소화 반감기 시간을 얻기 위해 어세이에서 사용된 NEP 농도를 조정할 수 있을 것이다.
바람직하게는 NEP(주문 번호 BML-SE532-0010)는 엔조 라이프 사이언스 게엠베하(Enzo Life Sciences GmbH, 독일, 뤠어라흐 소재)로부터 구입된다.
바람직하게는, 2.5 μg/mL의 최종 NEP 농도가 소화 어세이에서 사용된다.
본원에서 사용된 바의 용어 "CNP"는 연골 성장판 연골세포의 성장, 증식 및 분화를 조절하는 것을 특징으로 하는 모든 CNP 폴리펩타이드, 바람직하게는 포유동물 종, 더 바람직하게는 인간 및 포유동물 종, 더욱 바람직하게는 인간 및 뮤린 종으로부터의 모든 CNP 폴리펩타이드, 뿐만 아니라 이들의 변이체, 유사체, 상동체, 동족체, 및 유도체 및 이의 단편을 의미한다. 바람직하게는, 용어 "CNP"는 서열 번호: 24의 CNP 폴리펩타이드 뿐만 아니라 본질적으로 동일한 생물학적 활성을 나타내는, 즉, 연골 성장판 연골세포의 성장, 증식 및 분화를 조절하는, 그의 변이체, 동족체 및 유도체를 의미한다. 더 바람직하게는, 용어 "CNP"는 서열 번호: 24의 폴리펩타이드를 의미한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 20의 폴리펩타이드를 의미한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 21의 폴리펩타이드를 의미한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 22의 폴리펩타이드를 의미한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 23의 폴리펩타이드를 의미한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 30의 폴리펩타이드를 의미한다.
자연 발생 CNP-22(서열 번호: 1)는 하기 서열을 갖는다:
Figure pct00001
여기에서 위치 6 및 22에서 시스테인은 도1에서 도시된 바와 같이 이황화-가교를 통해 연결된다.
서열 번호: 24는 하기 서열을 갖는다:
Figure pct00002
여기에서 위치 22 및 38에서 시스테인은 이황화-가교를 통해 연결된다.
용어 "CNP"는 또한 참조로 본원에 통합된 WO 2009/067639 A2 및 WO 2010/135541 A2에 개시된 바와 같은 모든 CNP 변이체, 유사체, 상동체, 동족체 및 유도체 및 이의 단편을 포함한다.
이에 따라, 용어 "CNP"는 또한 바람직하게는 하기 펩타이드 서열을 의미한다:
서열 번호: 2(CNP-53):
Figure pct00003
서열 번호: 3(G-CNP-53):
Figure pct00004
서열 번호: 4(M-CNP-53):
Figure pct00005
서열 번호: 5(P-CNP-53):
Figure pct00006
서열 번호: 6(CNP-53 M48N):
Figure pct00007
서열 번호: 7(CNP-53 Δ15-31):
Figure pct00008
서열 번호: 8(CNP-52):
Figure pct00009
서열 번호: 9(CNP-51):
Figure pct00010
서열 번호: 10(CNP-50):
Figure pct00011
서열 번호: 11(CNP-49):
Figure pct00012
서열 번호: 12(CNP-48):
Figure pct00013
서열 번호: 13(CNP-47):
Figure pct00014
서열 번호: 14(CNP-46):
Figure pct00015
서열 번호: 15(CNP-45):
Figure pct00016
서열 번호: 16(CNP-44):
Figure pct00017
서열 번호: 17(CNP-44 Δ14-22):
Figure pct00018
서열 번호: 18(CNP-44 Δ15-22):
Figure pct00019
서열 번호: 19(CNP-43):
Figure pct00020
서열 번호: 20(CNP-42):
Figure pct00021
서열 번호: 21(CNP-41):
Figure pct00022
서열 번호: 22(CNP-40):
Figure pct00023
서열 번호: 23(CNP-39):
Figure pct00024
서열 번호: 24(CNP-38):
Figure pct00025
서열 번호: 25(CNP-37):
Figure pct00026
서열 번호: 26(CNP-37 Q1pQ, pQ = 피로글루타메이트):
Figure pct00027
서열 번호: 27(G-CNP-37):
Figure pct00028
서열 번호: 28 (P-CNP-37):
Figure pct00029
서열 번호: 29(M-CNP-37):
Figure pct00030
서열 번호: 30(PG-CNP-37):
Figure pct00031
서열 번호: 31(MG-CNP-37):
Figure pct00032
서열 번호: 32(CNP-37 M32N):
Figure pct00033
서열 번호: 33(G-CNP-37 M32N):
Figure pct00034
서열 번호: 34(G-CNP-37 K14Q):
Figure pct00035
서열 번호: 35(G-CNP-37 K14P):
Figure pct00036
서열 번호: 36(G-CNP-37 K14Q, Δ15):
Figure pct00037
서열 번호: 37(G-CNP-37 K14Q, K15Q):
Figure pct00038
서열 번호: 38(CNP-36):
Figure pct00039
서열 번호: 39(CNP-35):
Figure pct00040
서열 번호: 40(CNP-34):
Figure pct00041
서열 번호: 41(CNP-33):
Figure pct00042
서열 번호: 42(CNP-32):
Figure pct00043
서열 번호: 43(CNP-31):
Figure pct00044
서열 번호: 44(CNP-30):
Figure pct00045
서열 번호: 45(CNP-29):
Figure pct00046
서열 번호: 46(CNP-28):
Figure pct00047
서열 번호: 47(GHKSEVAHRF-CNP-28):
Figure pct00048
서열 번호: 48(CNP-27):
Figure pct00049
서열 번호: 49(CNP-27 K4Q, K5Q):
Figure pct00050
서열 번호: 50(CNP-27 K4R,K5R):
Figure pct00051
서열 번호: 51(CNP-27 K4P,K5R):
Figure pct00052
서열 번호: 52(CNP-27 K4S,K5S):
Figure pct00053
서열 번호: 53(CNP-27 K4P,K5R):
Figure pct00054
서열 번호: 54(CNP-27 K4R, K5R, K9R):
Figure pct00055
서열 번호: 55(CNP-27 K4R, K5R, K9R, M22N):
Figure pct00056
서열 번호: 56(P-CNP-27 K4R, K5R, K9R):
Figure pct00057
서열 번호: 57(M-CNP-27 K4R, K5R, K9R):
Figure pct00058
서열 번호: 58(HSA 단편-CNP-27):
Figure pct00059
서열 번호: 59(HSA 단편-CNP-27 M22N):
Figure pct00060
서열 번호: 60(M-HSA 단편-CNP-27):
Figure pct00061
서열 번호: 61(P-HSA 단편-CNP-27):
Figure pct00062
서열 번호: 62(CNP-26):
Figure pct00063
서열 번호: 63(CNP-25):
Figure pct00064
서열 번호: 64(CNP-24):
Figure pct00065
서열 번호: 65(CNP-23):
Figure pct00066
서열 번호: 66(R-CNP-22):
Figure pct00067
서열 번호: 67(ER-CNP-22):
Figure pct00068
서열 번호: 68(R-CNP-22 K4R):
Figure pct00069
서열 번호: 69(ER-CNP-22 4KR):
Figure pct00070
서열 번호: 70(RR-CNP-22):
Figure pct00071
서열 번호: 71(HRGP 단편-CNP-22):
Figure pct00072
서열 번호: 72(HRGP 단편-CNP-22):
Figure pct00073
서열 번호: 73(HRGP 단편-CNP-22):
Figure pct00074
서열 번호: 74(IgG1(Fc) 단편-CNP-22):
Figure pct00075
서열 번호: 75(HSA 단편-CNP-22):
Figure pct00076
서열 번호: 76(HSA 단편-CNP-22):
Figure pct00077
서열 번호: 77(오스테오크린 NPR C 억제제 단편-CNP22):
Figure pct00078
서열 번호: 78(FGF2 헤파린 결합 도메인 단편-CNP22):
Figure pct00079
서열 번호: 79(IgG1(Fc) 단편-CNP-22 K4R):
Figure pct00080
서열 번호: 80(HSA 단편-CNP-22 K4R):
Figure pct00081
서열 번호: 81(피브로넥틴 단편-CNP-22 K4R):
Figure pct00082
서열 번호: 82(피브로넥틴 단편-CNP-22 K4R):
Figure pct00083
서열 번호: 83(피브로넥틴 단편-CNP-22 K4R):
Figure pct00084
서열 번호: 84(아연 핑거 단편-CNP-22 K4R):
Figure pct00085
서열 번호: 85(CNP-21):
Figure pct00086
서열 번호: 86(CNP-20):
Figure pct00087
서열 번호: 87(CNP-19):
Figure pct00088
서열 번호: 88(CNP-18):
Figure pct00089
서열 번호: 89(CNP-17):
Figure pct00090
서열 번호: 90(BNP 단편-CNP-17-BNP 단편):
Figure pct00091
서열 번호: 91(CNP-38 L1G):
Figure pct00092
서열 번호: 92(Ac-CNP-37; Ac= 아세틸):
Figure pct00093
서열 번호: 24의 위치 22 및 38의 시스테인의 등가물도 또한 서열 번호: 2 내지 92의 이황화-가교를 통해 연결되는 것으로 이해된다.
더 바람직하게는, 용어 "CNP"는 서열 번호: 2, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 30, 32, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 91, 92의 서열을 의미한다. 더욱더 바람직하게는, 용어 "CNP"는 서열 번호: 23, 24, 25, 26, 38, 39, 91 및 92의 서열을 의미한다. 특히 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 24의 서열을 의미한다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 30의 서열을 의미한다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 20의 서열을 의미한다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 21의 서열을 의미한다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 22의 서열을 의미한다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 서열 번호: 23의 서열을 의미한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 용어 "CNP"는 하기 서열 번호: 93의 서열을 의미하며
Figure pct00094
,
여기에서 X1, X2, X3, X4, X5 및 X6은 서로 독립적으로 K, R, P, S 및 Q로 구성된 군으로부터 선택되며, 단 하나 이상의 X1, X2, X3, X4, X5 및 X6은 R, P, S 및 Q로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 X1, X2, X3, X4, X5 및 X6은 K 및 R로 구성된 군으로부터 선택되며, 단 하나 이상의 X1, X2, X3, X4, X5 및 X6은 R이고;
더욱더 바람직하게는 하기 서열 번호: 94의 서열을 의미하며
Figure pct00095
여기에서 X1, X2, X3 및 X4는 서로 독립적으로 K, R, P, S 및 Q로 구성된 군으로부터 선택되고, 단 하나 이상의 X1, X2, X3 및 X4는 R, P, S 및 Q로 구성된 군으로부터 선택되며; 바람직하게는 X1, X2, X3 및 X4는 K 및 R로부터 선택되고, 단 하나 이상의 X1, X2, X3 및 X4는 R이고;
가장 바람직하게는 하기 서열 번호: 95의 서열을 의미한다
Figure pct00096
여기에서 X1X2는 KR, RK, KP, PK, SS, RS, SR, QK, QR, KQ, RQ, RR 및 QQ로 구성된 군으로부터 선택된다.
서열 번호: 24의 위치 22 및 38의 시스테인의 등가물도 또한 서열 번호: 2 내지 95의 이황화-가교를 통해 연결되는 것으로 이해된다.
본 발명은 또한 탈아미드화 또는 탈아미드화 유사 반응(예컨대, 이성질체화)에 민감한 임의의 하나 이상, 최대 모든, 잔기가 탈아미드화 또는 탈아미드화 유사 반응을 통해 어느 정도까지, 전환된 잔기당 최대 100% 전환율까지, 다른 잔기(들)로 전환될 수 있는 CNP 변이체를 포함하는 것으로 이해된다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 하기인 CNP 변이체를 포함한다:
(1) 임의의 하나 이상, 최대 모든, 아스파라긴(Asn/N) 잔기가 전환된 잔기당 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 전환율까지 탈아미드화를 통해 아스파르트산 또는 아스파르테이트, 및/또는 이소아스파르트산 또는 이소아스파르테이트로 전환될 수 있거나; 또는
(2) 임의의 하나 이상, 최대 모든, 글루타민(Gln/Q) 잔기가 전환된 잔기당 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 전환율까지 탈아미드화를 통해 글루탐산 또는 글루타메이트, 및/또는 이소글루탐산 또는 이소글루타메이트로 전환될 수 있거나; 또는
(3) 임의의 하나 이상, 최대 모든, 아스파르트산 또는 아스파르테이트(Asp/D) 잔기가 전환된 잔기당 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 전환율까지 탈아미드화 유사 반응(이성질체화로도 또한 지칭됨)을 통해 이소아스파르트산 또는 이소아스파르테이트로 전환될 수 있거나; 또는
(4) 임의의 하나 이상, 최대 모든, 글루탐산 또는 글루타메이트(Glu/E) 잔기가 전환된 잔기당 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 전환율까지 탈아미드화 유사 반응(이성질체화로도 또한 지칭됨)을 통해 이소글루탐산 또는 이소글루타메이트로 전환될 수 있거나; 또는
(5) N-말단 글루타민(존재한다면)이 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 전환율까지 피로글루타메이트로 전환될 수 있거나; 또는
(6) 상기의 조합.
본원에서 사용된 바의, 용어 "CNP 폴리펩타이드 변이체"는 참조 CNP 폴리펩타이드와 상이한 동일한 종으로부터의 폴리펩타이드를 의미한다. 바람직하게는, 이러한 참조 CNP 폴리펩타이드 서열은 서열 번호: 24의 서열이다. 일반적으로, 참조 및 변이체의 아미노산 서열은 전체적으로 매우 유사하고 많은 영역에서 동일하도록 상이함이 제한된다. 바람직하게는, CNP 폴리펩타이드 변이체는 참조 CNP 폴리펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 24의 CNP 폴리펩타이드와 적어도 70%, 80%, 90%, 또는 95% 동일하다. 질의 아미노산 서열과 적어도, 예를 들어, 95% "동일한" 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드에 의해, 대상 폴리펩타이드의 아미노산 서열이 질의 아미노산 서열의 각 100개 아미노산 당 최대 5개의 아미노산 변경을 포함할 수 있다는 것을 제외하고, 대상 폴리펩타이드의 아미노산 서열이 질의 서열과 동일하다는 것이 의도된다. 참조 서열의 이러한 변경은 참조 아미노산 서열의 아미노(N-말단) 또는 카르복시 말단(C-말단) 위치에서 또는 참조 서열에서의 또는 참조 서열 내의 하나 이상의 인접한 기에서의 잔기 중에 개별적으로 산재된, 이들 말단 위치 사이의 임의의 위치에서 발생할 수 있다. 질의 서열은 참조 서열의 전체 아미노산 서열 또는 본원에 기재된 바의 특이적인 임의의 단편일 수 있다. 바람직하게는, 질의 서열은 서열 번호: 24의 서열이다.
이러한 CNP 폴리펩타이드 변이체는 자연 발생 변이체, 예컨대 염색체 또는 유기체 상의 주어진 유전자 자리를 점유하는 CNP의 몇 가지 대체 형태 중 하나에 의해 코딩된 자연 발생 대립유전자 변이체, 또는 단일 일차 전사체로부터 비롯되는 자연 발생 스플라이스 변이체에 의해 코딩된 동형(isoform)일 수 있다. 대안적으로, CNP 폴리펩타이드 변이체는 자연적으로 발생하는 것으로 알려지지 않고 본 기술분야에서 공지된 돌연변이유발 기술로 제조될 수 있는 변이체일 수 있다.
하나 이상의 아미노산이 생물학적 기능의 실질적인 손실 없이 생물활성 펩타이드 또는 단백질의 N-말단 또는 C-말단으로부터 결실될 수 있음이 당업계에 공지되어 있다. 이러한 N- 및/또는 C-말단 결실 역시 용어 CNP 폴리펩타이드 변이체에 포함된다.
또한, CNP 폴리펩타이드의 일부 아미노산 서열이 펩타이드의 구조 또는 기능의 유의한 효과 없이 달라질 수 있음이 본 기술분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 인식된다. 이러한 돌연변이는 활성에 거의 효과를 갖지 않도록 당업계에 공지된 일반적인 규칙에 따라 선택된 결실, 삽입, 역위, 반복, 및 치환을 포함한다. 예를 들어, 표현형적 침묵(silent) 아미노산 치환을 만드는 방법에 관한 지침은 그의 전체가 참조로 본원에 통합된 문헌[Bowie et al(1990), Science 247:1306-1310]에서 제공되며, 여기에서 저자는 변화에 대한 아미노산 서열의 내성을 연구하기 위한 2가지 주요 접근법이 있다는 것을 명시한다.
용어 CNP 폴리펩타이드는 또한 CNP 유사체, 상동체, 및/또는 종 동족체에 의해 코딩된 모든 CNP 폴리펩타이드를 포함한다. 본원에서 사용된 바의, 용어 "CNP 유사체"는 각 유기체에서 동일한 기능을 수행하지만 유기체의 조상(ancestor)이 공통으로 갖는 조상 구조로부터 기인하지 않은, 상이하고 관련되지 않은 유기체의 CNP를 의미한다. 대신에, 유사한 CNP는 개별적으로 발생한 다음, 이후에 동일하거나 유사한 기능을 수행하도록 진화하였다. 다시 말해서, 유사한 CNP 폴리펩타이드는 상당히 상이한 아미노산 서열을 갖지만 동일한 생물학적 활성을 수행하는, 즉 연골 성장판 연골세포의 성장, 증식 및 분화를 조절하는 폴리펩타이드이다.
본원에서 사용된 바의 용어 "CNP 상동체"는 서열이 조상 종에서의 공통된 상동성 CNP를 통해 서로 관련되지만 서로 상이하도록 진화한, 2개의 상이한 종 내의 CNP를 의미한다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "CNP 동족체"는 각 유기체에서 동일한 기능을 수행하고 유기체의 조상이 공통으로 갖는 조상 구조로부터 기인한, 상이한 유기체의 CNP를 의미한다. 다시 말해서, 상동성 CNP 폴리펩타이드는 동일한 생물학적 활성을 수행하는, 즉 연골 성장판 연골세포의 성장, 증식 및 분화를 조절하는, 상당히 유사한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이다. 바람직하게는, CNP 폴리펩타이드 동족체는 참조 CNP 폴리펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 24의 CNP 폴리펩타이드와 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일성을 나타내는 폴리펩타이드로 정의될 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 CNP 폴리펩타이드는, 예를 들어: (i) 아미노산 잔기 중 적어도 하나가 보존된 또는 비-보존된 아미노산 잔기, 바람직하게는 보존된 아미노산 잔기로 치환되고, 이러한 치환된 아미노산 잔기가 유전자 암호에 의해 코딩될 수 있거나 또는 코팅되지 않을 수 있는 것; 및/또는 (ii) 아미노산 잔기 중 적어도 하나가 치환기를 포함하는 것; 및/또는 (iii) CNP 폴리펩타이드가 또 다른 화합물, 예컨대 폴리펩타이드의 반감기를 증가시키는 화합물(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜)과 융합된 것; 및/또는 (iv) 부가적인 아미노산이 CNP 폴리펩타이드에 융합된 것, 예컨대 IgG Fc 융합 영역 펩타이드 또는 리더 또는 분비 서열 또는 상기 형태의 폴리펩타이드 또는 프리-단백질(pre-protein) 서열의 정제를 위해 사용되는 서열일 수 있다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "CNP 폴리펩타이드 단편"은 CNP 폴리펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 24의 폴리펩타이드의 아미노산 서열의 일부분의 인접 범위를 포함하는 임의의 펩타이드를 의미한다.
보다 구체적으로, CNP 폴리펩타이드 단편은 CNP 폴리펩타이드, 더 바람직하게는 서열 번호: 24의 폴리펩타이드의 적어도 6, 예컨대 적어도 8, 적어도 10 또는 적어도 17개의 연속적인 아미노산을 포함한다. CNP 폴리펩타이드 단편은 부가적으로 적어도 6개의 아미노산을 포함하는 CNP 폴리펩타이드의 아속(sub-genus)으로서 기재될 수 있으며, 여기에서 "적어도 6개"는 CNP 폴리펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 24의 폴리펩타이드의 C-말단 아미노산을 나타내는 정수와 6 사이의 임의의 정수로서 정의된다. 또한, 이들의 N-말단 및 C-말단 위치 면에서 더 특정되는, 전술한 바의 적어도 6개 아미노산 길이인 CNP 폴리펩타이드 단편의 종이 포함된다. 또한, 개별 종으로서 용어 "CNP 폴리펩타이드 단편"은 특히 N-말단 및 C-말단 위치에 의해 특정될 수 있는, 전술한 바의 적어도 6개 아미노산 길이의 모든 CNP 폴리펩타이드 단편이다. 즉, CNP 폴리펩타이드, 바람직하게는 서열 번호: 24의 CNP 폴리펩타이드의 임의의 주어진 아미노산 서열상에서 적어도 6개의 인접 아미노산 잔기 길이의 단편이 점유할 수 있는 N-말단 및 C-말단 위치의 모든 조합이 본 발명에 포함된다.
용어 "CNP"는 또한 전술한 바와 같은 서열을 갖지만, 예를 들어 뎁시펩타이드(depsipeptide)와 같이, 아미드 및 비아미드 연결, 예컨대 에스테르 연결 양자를 포함하는 백본을 갖는 폴리(아미노산) 접합체를 포함한다. 뎁시펩타이드는 백본이 아미드(펩타이드) 및 에스테르 결합 양자를 포함하는 아미노산 잔기의 사슬이다. 따라서, 본원에 사용된 바의 용어 "측쇄"는 아미노산 모이어티가 폴리펩타이드에서와 같이 아민 결합을 통해 연결된다면, 아미노산 모이어티의 알파-탄소에 부착된 모이어티를 의미하거나, 또는 예를 들어 뎁시펩타이드의 경우에서와 같이, 폴리(아미노산) 접합체의 백본에 부착된 임의의 탄소 원자-포함 모이어티를 의미한다. 바람직하게는, 용어 "CNP"는 아미드(펩타이드) 결합을 통해 형성된 백본을 갖는 폴리펩타이드를 의미한다.
용어 CNP가 CNP의 전술한 변이체, 유사체, 상동체, 동족체, 유도체 및 단편을 포함하므로, 참조 서열 내의 특정 위치에 대한 모든 참조도 또한 구체적으로 언급되지 않더라도 CNP 모이어티의 변이체, 유사체, 상동체, 동족체, 유도체 및 단편 내의 동등한 위치를 포함한다.
본원에 사용된 바의, 용어 "고리 모이어티"는 분자간 이황화 가교를 형성하는 2개의 시스테인 잔기 사이에 위치하거나 또는 화학적 링커를 통해 연결된 상동성 아미노산 잔기 사이에 위치하는 CNP 약물 또는 모이어티의 연속적인 아미노산 잔기의 구간(stretch)을 의미한다. 바람직하게는, 고리 모이어티는 분자간 이황화 가교를 형성하는 2개의 시스테인 잔기 사이에 위치한다 이러한 2개의 시스테인은 CNP-38의 서열(서열 번호: 24) 내의 위치 22 및 위치 38의 시스테인에 상응한다. 따라서, CNP 약물 또는 모이어티가 CNP-38의 서열을 갖는다면, 아미노산 23 내지 37은 상기 고리 모이어티 내에 위치한다.
CNP 모이어티의 길이와 관계없이, 야생형 CNP의 고리 모이어티의 서열은 FGLKLDRIGSMSGLG(서열 번호: 96)이다.
전술한 바와 같이, 용어 "CNP"는 상이한 수의 아미노산을 갖는 CNP 약물 또는 모이어티에 관한 것이다. 본 기술분야의 숙련자는 상이한 길이의 CNP 약물 또는 모이어티에서 동등한 아미노산의 위치가 다르다는 것을 이해하며, 숙련된 당업자는 더 긴, 더 짧은 및/또는 그렇지 않으면 변형된 CNP 형태에서 이황화 가교를 형성하는 2개의 시스테인을 확인하거나 또는 화학적 링커를 통해 서로 연결된 이들의 2개의 상동성 아미노산 잔기를 확인하는데 어려움이 없을 것이다.
용어 CNP는 CNP의 전술한 변이체, 유사체, 상동체, 동족체, 유도체 및 단편을 포함하므로, 용어 "고리 모이어티"는 또한 서열 번호: 96의 서열의 상응하는 변이체, 유사체, 상동체, 동족체, 유도체 및 단편을 포함한다. 따라서, 참조 서열 내의 특정 위치에 대한 모든 참조는 또한 명시적으로 언급되지 않음에도 불구하고 CNP 모이어티의 변이체, 유사체, 상동체, 동족체, 유도체 및 단편 내의 동등한 위치를 포함한다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "랜덤 코일"은 주위 온도, 및 pH 7.4에서 수성 완충액 중에서 수행된 원 편광이색 분광법(circular dichroism spectroscopy)에 의해 결정된 바와 같은 정의된 2차 및 3차 구조가 실질적으로 결여된 입체구조를 채택/소유/형성, 바람직하게는 소유하는 펩타이드 또는 단백질을 의미한다. 바람직하게는, 주위 온도는 약 20℃, 즉 18℃ 내지 22℃이며, 가장 바람직하게는 주위 온도는 20℃이다.
본원에서 사용된 바의 용어 "미셀"은 액체 콜로이드에 분산된 양친매성 분자의 응집체를 의미한다. 수용액에서 전형적인 미셀은 주변 용매로 향하는 계면활성제 분자의 친수성 모이어티와 안쪽으로 향하는 계면활성제 분자의 소수성 모이어티를 갖는 응집체를 형성하며, "정상 미셀(normal-phase micelle)"이라고도 지칭한다. "역 미셀(invers micelle)"은 안쪽으로 향하는 친수성 모이어티 및 주변 용매로 향하는 소수성 모이어티를 갖는다.
본원에서 사용된 바의 용어 "리포솜"은 하나 이상의 지질 이중층을 갖는 소포, 바람직하게는 구형 소포를 의미한다. 바람직하게는, 리포솜은 인지질, 더욱더 바람직하게는 포스파티딜콜린을 포함한다. 용어 "리포솜"은 다양한 구조 및 크기, 예를 들어, 100 내지 1000 nm의 평균 직경을 갖는 하나 초과의 동심원 지질 이중 층을 갖는 다중막 리포솜 소포(MLV: multilamellar liposome vesicle), 지질 이중층 및 25 내지 100 nm의 평균직경을 갖는 소형 단일막 리포솜 소포(SUV: small unilamellar liposome vesicle), 하나의 지질 이중층 및 약 1000 ㎛의 평균 직경을 갖는 대형 단일막 리포솜 소포(LUV: large unilamellar liposome vesicle) 및 하나의 지질 이중층 및 1 내지 100 ㎛의 평균 직경을 갖는 거대 단일막 소포(GUV: giant unilamellar vesicle)를 의미한다. 용어 "리포솜"은 또한 예를 들어 트랜스페로솜(transferosome) 및 에토솜(ethosome)과 같은 탄성 소포를 포함한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "아쿠아솜(aquasome)"은 적어도 3개의 층의 자기 조립 구조, 즉 약물 분자가 약물의 개질 또는 개질 없이 흡착되는 올리고머 필름으로 코팅된 고체상 나노결정질 코어를 포함하는 60 내지 300 nm의 직경을 갖는 구형 나노 입자를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "에토솜"은 수십 나노미터 내지 마이크로미터 범위의 크기를 갖는 비교적 높은 농도의 인지질 및 에탄올 및/또는 이소프로판올과 물을 포함하는 지질 소포를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "레시플렉스(LeciPlex)"는 소이 PC, 양이온제, 및 PEG 300, PEG 400, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르, 테트라히드로푸르푸릴 알콜 폴리에틸렌 글리콜 에테르 또는 2-피롤리돈 또는 N-메틸-2-피롤리돈과 같은 생체 적합성 용매를 포함하는 양으로 하전된 인지질 기재 소포성 시스템을 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "니오솜(niosome)"은 비이온 계면활성제를 포함하는 단일막 또는 다중막 소포를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "파마코솜(pharmacosome)"은 생물학적으로 활성인 모이어티에 공유 결합된 지질로부터의 초미세 소포성, 미셀 또는 육각형 응집체를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "프로니오솜(proniosome)"은 재수화 및 온화한 교반으로 니오솜을 생성하는 계면활성제 코팅된 캐리어의 건조 제제를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "폴리머솜(polymersome)"은 양친매성 합성 블록 공중합체로부터 형성된 멤브레인을 포함하며 임의로 그의 코어에 수용액을 포함할 수 있는 인공 구형 소포를 의미한다. 폴리머솜은 50 nm 에서 5 μm 이상 범위의 직경을 갖는다. 이 용어는 또한 특정 화학 물질이 소포의 안쪽 또는 바깥쪽으로 멤브레인을 통과할 수 있도록 하는 채널을 포함하도록 설계된 폴리머솜인 신토솜(syntosome)을 포함한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "스핑고솜(sphingosome)"은 수성 체적이 주로 천연 또는 합성 스핑고지질로 구성된 멤브레인형 지질 이중층으로 완전히 둘러싸인 동심원의 이중층 소포를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "트랜스페로솜(transferosome)"은 트랜스페로솜을 고도로 변형 가능하게 하는 고도로 만곡된 이중층의 형성을 용이하게 하는 통상적인 극성 및 적합한 에지 활성화 지질의 혼합물로부터 형성된 수성 코어를 포함하는 초가요성 지질 소포를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "우파솜(ufasome)"은 불포화 지방산을 포함하는 소포를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "압타머(aptamer)"는 특정 분자를 결합하는 올리고뉴클레오타이드 또는 펩타이드 분자를 의미한다. 용어 "압타머"는 DNA, RNA, XNA 및 펩타이드 압타머를 포함한다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "올리고뉴클레오타이드"는 최대 100개 염기의 짧은 핵산 중합체를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "폴리펩타이드"는 최대 50개의 아미노산 단량체를 포함하는 펩타이드를 의미한다. CNP 약물 및 CNP 모이어티에 대해서만 또한 50개 초과의 아미노산을 갖는 서열을 간략화를 위해 "폴리펩타이드"로 언급될 것이다.
본원에서 사용된 바의 용어 "단백질"은 50개 초과의 아미노산 잔기의 펩타이드를 의미한다. 바람직하게는 단백질은 최대 20000개의 아미노산 잔기, 예컨대 최대 15000개의 아미노산 잔기, 예컨대 최대 10000개의 아미노산 잔기, 예컨대 최대 5000개의 아미노산 잔기, 예컨대 최대 4000개의 아미노산 잔기, 예컨대 최대 3000개의 아미노산 잔기, 예컨대 최대 2000개의 아미노산 잔기, 예컨대 최대 1000개의 아미노산 잔기를 포함한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "소분자 약물" 및 "소분자 생물학적 활성 모이어티"는 1 kDa 이하, 예컨대 최대 900 kDa의 분자량을 갖는 유기 화합물인 약물 및 생물학적 활성 모이어티를 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "천연 생성물"은 1차 또는 2차 대사 경로에 의해 생성된 천연 원으로부터 단리된 정제된 유기 화합물을 의미한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "생리학적 조건"은 pH 7.4, 37℃에서의 수성 완충액을 의미한다.
본원에 사용된 바의 용어 "약제학적 조성물"은 예를 들어 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제와 같은 하나 이상의 활성 성분, 및 하나 이상의 부형제를 함유하는 조성물, 뿐만 아니라 상기 조성물의 임의의 2 이상의 성분의 조합, 복합체 형성 또는 응집으로부터, 또는 하나 이상의 성분의 해리로부터, 또는 하나 이상의 성분의 다른 유형의 반응 또는 상호작용으로부터 직접 또는 간접적으로 야기되는 임의의 생성물을 의미한다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 하나 이상의 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 혼합함으로써 제조된 임의의 조성물을 포함한다.
본원에 사용된 바의 용어 "액체 조성물"은 수용성 제어 방출성 CNP 작용제 및 하나 이상의 용매, 예컨대 물을 포함하는 혼합물을 의미한다.
용어 "현탁액 조성물"은 수불용성 제어 방출성 CNP 작용제 및 하나 이상의 용매, 예컨대 물을 포함하는 혼합물을 의미한다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "건조 조성물"은 약제학적 조성물이 건조 형태로 제공되는 것을 의미한다. 적합한 건조 방법은 분무 건조 및 동결 건조(lyophilization), 즉, 냉동 건조(freeze-drying)이다. 이러한 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제의 건조 조성물은 칼 피셔(Karl Fischer)에 따라 결정된, 최대 10%, 바람직하게는 5% 미만 및 더 바람직하게는 2% 미만의 잔류 수분 함량을 갖는다. 바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물은 동결건조에 의해 건조된다.
본원에서 사용된 바의 용어 "약물"은 질환의 치료, 치유, 예방, 또는 진단에 사용되거나 또는 신체적 또는 정신적 행복감을 향상시키는데 사용되는 물질을 의미한다. 약물이 또 다른 모이어티에 접합되는 경우, 약물로부터 비롯된 결과 생성물의 모이어티는 "생물학적 활성 모이어티"로 지칭된다.
본원에 사용된 바의 용어 "전구약물"은 생물학적 활성 모이어티와의 가역적 연결을 포함하는 링커 모이어티인 가역적 전구약물 링커 모이어티를 통해 특수화된 보호기에 가역적 및 공유적으로 연결된 생물학적 활성 모이어티를 의미하며, 상기 특수화된 보호기는 모 분자에서 바람직하지 않은 특성을 변경하거나 제거한다. 이것은 또한 약물에서의 바람직한 특성의 향상 및 바람직하지 않은 특성의 억제를 포함한다. 특수화된 무독성 보호기는 "캐리어"로 지칭된다. 전구약물은 가역적 및 공유적으로 결합된 생물학적 활성 모이어티를 그의 상응하는 약물의 형태로 방출한다. 다시 말해서, 전구약물은 가역적 전구약물 링커 모이어티를 통해 캐리어 모이어티에 공유적 및 가역적으로 접합된 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 접합체이며, 가역적 전구약물 링커 모이어티에 대한 캐리어의 공유 및 가역적 접합은 직접적으로 또는 스페이서를 통해서이다. 이러한 접합체는 이전에 접합된 생물학적 활성 모이어티를 유리 약물의 형태로 방출한다.
"생분해성 연결" 또는 "가역적 연결"은 1시간 내지 6개월, 바람직하게는 1시간 내지 4개월, 더욱더 바람직하게는 1시간 내지 3개월, 더욱더 바람직하게는 1시간 내지 2개월, 더욱더 바람직하게는 1시간 내지 1개월 범위의 반감기를 갖는, 생리학적 조건(pH 7.4, 37℃에서 수성 완충액) 하에서 효소의 부재하에, 가수분해적으로 분해가능한, 즉 절단가능한 연결이다. 따라서, 안정한 연결은, 6개월을 초과하는 생리학적 조건(pH 7.4, 37℃에서 수성 완충액) 하의 반감기를 갖는 연결이다.
따라서, "가역적 전구약물 링커 모이어티"는 가역적 연결을 통해, 생물학적 활성 모이어티, 예컨대 CNP 작용제 모이어티로 공유적으로 접합되고, 또한 캐리어 모이어티, 예컨대 -Z 또는 -Z'에 공유적으로 접합된 모이어티이며, 여기에서 상기 캐리어 모이어티에 대한 공유 접합은 직접적이거나 또는 스페이서 모이어티, 예컨대 -L2-를 통해서이다. 바람직하게는 -Z 또는 -Z'와 -L2- 사이의 연결은 안정한 연결이다.
본원에 사용된 바의, 용어 "흔적없는(traceless) 전구약물 링커"는 절단시 약물을 유리 형태로 방출하는 가역적 전구약물 링커를 의미한다. 본원에서 사용된 바의, 용어 약물의 "유리 형태"는 변형되지 않은, 약리학적 활성 형태의 약물을 의미한다.
본원에 사용된 바의, 용어 "부형제"는 치료제, 예컨대 약물 또는 전구약물과 함께 투여되는 희석제, 보조제, 또는 비히클을 의미한다. 이러한 약제학적 부형제는 멸균 액체, 예컨대 물 및 오일일 수 있으며, 이것으로 제한되는 것은 아니지만 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등을 포함하는, 페트롤륨, 동물, 식물 또는 합성 유래의 오일을 포함한다. 물은 약제학적 조성물이 경구 투여되는 경우 바람직한 부형제이다. 식염수 및 수성 덱스트로스는 약제학적 조성물이 정맥 내로 투여되는 경우 바람직한 부형제이다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액은 바람직하게는 주사 가능한 용액을 위한 액체 부형제로서 사용된다. 적합한 약제학적 부형제는 전분, 글루코오스, 락토오스, 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카겔, 스테아르산 나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 약제학적 조성물은 또한, 원하는 경우, 소량의 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등, 예를 들어, 아세테이트, 숙시네이트, 트리스, 카르보네이트, 포스페이트, HEPES(4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산), MES(2-(N-모르폴리노)에탄술폰산)을 함유할 수 있거나, 또는 트윈, 폴록사머, 폴록사민, CHAPS, 이게팔(Igepal), 또는 예를 들어, 글리신, 라이신, 또는 히스티딘과 같은 아미노산과 같은 세제를 함유할 수 있다. 이들 약제학적 조성물은 용액, 현탁액, 유화액, 정제, 환제, 캡슐, 분말, 지속 방출 제형 등의 형태일 수 있다. 약제학적 조성물은 전통적인 결합제 및 부형제, 예컨대 트리글리세라이드와 함께 좌제로서 제형화될 수 있다. 경구 제형은 표준 부형제, 예컨대 약제학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산 마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로오스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 환자에게 적절한 투여를 위한 형태를 제공하기 위해 적합한 양의 부형제와 함께, 치료적 유효량의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 함유할 것이다. 상기 제형은 투여 방식에 적합해야 한다.
본원에 사용된 바의, 용어 "시약"은 또 다른 화학적 화합물 또는 약물의 작용기와의 반응을 위해 하나 이상의 작용기를 포함하는 화학적 화합물을 의미한다. 작용기(예컨대, 1차 또는 2차 아민 또는 히드록실 작용기)를 포함하는 약물 역시 시약인 것으로 이해된다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "모이어티"는 상응하는 시약과 비교하여 하나 이상의 원자(들)이 결여된 분자의 부분을 의미한다. 예를 들어, 화학식 "H-X-H"의 시약이 또 다른 시약과 반응하여 반응 생성물의 일부가 되는 경우, 반응 생성물의 상응하는 모이어티는 구조 "H-X-" 또는 "-X-"를 갖는 반면, 각각의 "-"는 또 다른 모이어티로의 부착을 나타낸다. 따라서, 생물학적 활성 모이어티는 약물로서 전구약물부터 방출된다.
2개의 모이어티에 부착되거나 또는 모이어티에 개재되는 원자의 그룹의 서열 또는 화학적 구조가 제공되는 경우, 상기 서열 또는 화학적 구조는 달리 명시적으로 언급되지 않는 한 어느 한 방향으로 2개의 모이어티에 부착될 수 있는 것으로 이해된다. 예를 들어, 모이어티 "-C(O)N(R1)-"는 2개의 모이어티에 부착될 수 있거나 또는 "-C(O)N(R1)-" 또는 "-N(R1)C(O)-"로서 모이어티에 개재될 수 있다. 유사하게, 하기 모이어티:
Figure pct00097
는,
2개의 모이어티에 부착될 수 있거나 또는
Figure pct00098
로서 모이어티에 개재될 수 있다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "작용기"는 원자의 다른 기와 반응할 수 있는 원자의 기를 의미한다. 작용기는 이것으로 제한되는 것은 아니지만 하기 기를 포함한다: 카르복실산(-(C=O)OH), 일차 또는 이차 아민(-NH2, -NH-), 말레이미드, 티올(-SH), 술폰산(-(O=S=O)OH), 카르보네이트, 카르바메이트(-O(C=O)N<), 히드록실(-OH), 알데히드(-(C=O)H), 케톤(-(C=O)-), 히드라진(>N-N<), 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 인산(-O(P=O)OHOH), 포스폰산(-O(P=O)OHH), 할로아세틸, 알킬 할라이드, 아크릴로일, 아릴 플루오라이드, 히드록실아민, 디술피드, 술폰아미드, 황산, 비닐 술폰, 비닐 케톤, 디아조알칸, 옥시란, 및 아지리딘.
본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제가 하나 이상의 산성 또는 염기성기를 포함하는 경우, 본 발명은 또한 이들의 상응하는 약제학적으로 또는 독성학적으로 허용 가능한 염, 특히 이들의 약제학적으로 이용 가능한 염을 포함한다. 따라서, 산성기를 포함하는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는, 예를 들어, 알칼리 금속염, 알칼리 토금속염으로서 또는 암모늄염으로서, 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 이러한 염의 보다 정확한 예는 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘염 또는, 암모니아 또는 유기 아민, 예를 들어, 에틸아민, 에탄올아민, 트리에탄올아민 또는 아미노산과의 염을 포함한다. 하나 이상의 염기성 기, 즉, 양성자화될 수 있는 기를 포함하는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 무기 또는 유기산과의 이들의 부가염의 형태로 존재하고 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 적합한 산의 예는 염화수소, 브롬화수소, 인산, 황산, 질산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 나프탈렌디술폰산, 옥살산, 아세트산, 타르타르산, 락트산, 살리실산, 벤조산, 포름산, 프로피온산, 피발산, 디에틸아세트산, 말론산, 숙신산, 피멜산, 푸마르산, 말레산, 말산, 술파민산, 페닐프로피온산, 글루콘산, 아스코브산, 이소니코틴산, 시트르산, 아디프산, 및 본 기술분야의 숙련자에게 공지된 다른 산을 포함한다. 본 기술분야의 숙련자를 위해, 양전하의 암모늄 기 및 상기 염의 적절한 반대이온을 야기하는 아민기의 알킬화와 같이 염기성 기를 양이온으로 전환하기 위한 추가의 방법이 공지되어 있다. 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제가 산성 및 염기성 기를 동시에 포함한다면, 본 발명은 또한, 언급된 염 형태 외에도, 내부 염 또는 베타인(양쪽성이온)을 포함한다. 각각의 염은 본 기술분야의 숙련자에게 공지된 통상적인 방법에 의해, 예를 들어 이러한 전구약물을 용매 또는 분산제 중의 유기 또는 무기산과 접촉시킴으로써, 또는 다른 염을 이용한 음이온 교환 또는 양이온 교환에 의해, 수득될 수 있다. 본 발명은 또한 낮은 생리학적 적합성으로 인해, 직접 제약에서 사용하기에 적합하지는 않지만, 예를 들어 화학 반응을 위한 또는 약제학적으로 허용 가능한 염의 제조를 위한 중간체로서 사용될 수 있는 본 발명의 전구약물의 모든 염을 포함한다.
용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 환자에게 투여될 때 해를 입히지 않는 물질을 의미하고, 동물에서 사용하기 위해, 바람직하게는 인간에서 사용하기 위해, 바람직하게는 EMA(유럽) 및/또는 FDA(US)와 같은 관리 기관 및/또는 임의의 다른 국가 관리 기관에 의해 승인된 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바의 수치와 조합된 용어 "약"은 수치 +/- 상기 수치의 10% 이하, 더 바람직하게는 상기 수치의 8% 이하, 더욱더 바람직하게는 상기 수치의 5% 이하 및 가장 바람직하게는 상기 수치의 2% 이하의 범위를 나타내기 위해 사용된다. 예를 들어, 문구 "약 200"은 200 +/- 10%를 포함하는 범위, 즉, 180 내지 220을 포함하는 범위; 바람직하게는 200 +/- 8%, 즉, 184 내지 216을 포함하는 범위; 더욱더 바람직하게는 200 +/-5%를 포함하는 범위, 즉, 190 내지 210을 포함하는 범위; 및 가장 바람직하게는 200 +/- 2%, 즉, 196 내지 204를 포함하는 범위를 의미하기 위해 사용된다. "약 20%"로서 제공된 백분율은 "20% +/- 10%", 즉, 10 내지 30%를 포함하는 범위를 의미하는 것이 아니라, "약 20%"는 18 내지 22%를 포함하는 범위, 즉, 수치 20의 +/- 10%을 포함하는 범위를 의미한다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "중합체"는 선형, 환형, 분지형, 가교결합 또는 덴드리머 방식 또는 이의 조합으로 화학 결합에 의해 연결된 반복 구조 단위, 즉, 단량체를 포함하는 분자를 의미하며, 이는 합성 또는 생물학적 기원 또는 이들 양자의 조합일 수 있다. 중합체는 또한 하나 이상의 다른 화학 기 및/또는 모이어티, 예컨대, 하나 이상의 작용기를 포함할 수 있는 것으로 이해된다. 바람직하게는, 가용성 중합체는 적어도 0.5 kDa의 분자량, 예컨대, 적어도 1 kDa의 분자량, 적어도 2 kDa의 분자량, 적어도 3 kDa의 분자량 또는 적어도 5 kDa의 분자량를 갖는다. 중합체가 가용성인 경우, 그것은 바람직하게는 최대 1000 kDa, 예컨대 최대 750 kDa, 예컨대 최대 500 kDa, 예컨대 최대 300 kDa, 예컨대 최대 200 kDa, 예컨대 최대 100 kDa의 분자량을 갖는다. 히드로겔과 같은 불용성 중합체의 경우, 의미있는 분자량 범위가 제공될 수 없는 것으로 이해된다. 단백질은 또한 각각의 아미노산의 측쇄가 상이할지라도, 아미노산이 반복 구조 단위인 중합체인것으로 이해된다.
본원에서 사용된 바의 용어 "중합체성(polymeric)"은 하나 이상의 중합체 또는 중합체 모이어티를 포함하는 시약 또는 모이어티를 의미한다. 중합체성 시약 또는 모이어티는 임의로 또한 하나 이상의 다른 모이어티/모이어티들을 포함할 수 있으며, 이는 바람직하게는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:
· C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 및 테트랄리닐; 및
· 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 연결
Figure pct00099
여기에서
점선은 모이어티 또는 시약의 나머지 부분으로의 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 기술분야의 숙련자는 중합 반응으로부터 수득된 중합 생성물이 모두 동일한 분자량을 갖는 것이 아니라, 오히려 하나의 분자량 분포를 나타낸다는 것을 이해한다. 결과적으로, 본원에서 사용된 바의 분자량 범위, 분자량, 중합체 내의 단량체의 수의 범위 및 중합체 내의 단량체의 수는 단량체의 수 평균 분자량 및 수 평균, 즉, 중합체 또는 중합체성 모이어티의 분자량의 산술 평균 및 중합체 또는 중합체성 모이어티의 단량체의 수의 산술평균을 의미한다.
따라서, "x" 단량체 단위를 포함하는 중합체성 모이어티에서, "x"에 대해 주어진 임의의 정수는 따라서 단량체의 산술 평균 수에 상응한다. "x"에 대해 주어진 정수의 임의의 범위는 단량체의 산술 평균 수인 정수의 범위를 제공한다. "약 x"로서 주어진 "x"에 대한 정수는 단량체의 산술 평균 수가 x +/- 10%, 바람직하게는 x +/- 8%, 더 바람직하게는 x +/- 5% 및 가장 바람직하게는 x +/- 2%의 정수의 범위라는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바의, 용어 "수 평균 분자량"은 개별 중합체의 분자량의 통상적인 산술 평균을 의미한다.
본원에서 사용된 바의 캐리어와 관련된 용어 "수용성"은 이러한 캐리어가 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제의 일부인 경우, 이러한 수용성 캐리어를 포함하는 제어 방출성 CNP 작용제의 적어도 1 g이 20℃의 물 1 리터에 용해되어 균일한 용액을 형성할 수 있음을 의미한다. 따라서, 캐리어와 관련된 용어 "수불용성"은 이러한 캐리어가 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제의 일부인 경우, 이러한 수불용성 캐리어를 포함하는 제어 방출성 CNP 작용제의 1g 미만이 20℃의 물 1 리터에 용해되어 균일한 용액을 형성할 수 있음을 의미한다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "히드로겔"은 공유 화학 가교결합의 존재로 인해 불용성인, 동종중합체 또는 공중합체로 구성된 친수성 또는 양친매성 중합체성 네트워크를 의미한다. 가교결합은 네트워크 구조 및 물리적 완전성을 제공한다.
본원에서 사용된 바의 용어 "열겔화(thermogelling)"는 약 0℃ 내지 약 10℃ 범위의 저온에서는 약 0.1/초의 전단 속도에서 25℃에서의 500 cps 미만의 점도를 갖는 액체 또는 저점도 용액이지만, 약 30℃ 내지 약 40℃ 범위의 고온, 예컨대 약 37℃인 고온에서는 약 0.1/초의 전단 속도에서 25℃에서의 10000 cps 미만의 더 높은 점도 화합물인 화합물을 의미한다.
본원에 사용된 바의, 모이어티 또는 시약과 관련된 용어 "PEG 기반((PEG-based))"는 상기 모이어티 또는 시약이 PEG를 포함한다는 것을 의미한다. 바람직하게는, PEG 기반 모이어티 또는 시약은 적어도 10%(w/w) PEG, 예컨대 적어도 20%(w/w) PEG, 예컨대 적어도 30%(w/w) PEG, 예컨대 적어도 40%(w/w) PEG, 예컨대 적어도 50%(w/w), 예컨대 적어도 60(w/w) PEG, 예컨대 적어도 70%(w/w) PEG, 예컨대 적어도 80%(w/w) PEG, 예컨대 적어도 90%(w/w) PEG, 예컨대 적어도 95%(w/w) PEG를 포함한다. PEG 기반 모이어티 또는 시약의 나머지 중량 퍼센트는 바람직하게는 하기 모이어티 및 연결로부터 선택된 다른 모이어티이다:
· C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 및 테트랄리닐; 및
· 하기로 구성된 군으로부터 선택된 연결
Figure pct00100
여기에서
점선은 모이어티 또는 시약의 나머지 부분으로의 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 구성된 군으로부터 선택된다.
본원에서 사용된 바의, 모이어티 또는 시약과 관련된 용어 "적어도 X% PEG를 포함하는 PEG 기반"은 상기 모이어티 또는 시약이 적어도 X%(w/w) 에틸렌글리콜 단위(-CH2CH2O-)를 포함한다는 것을 의미하며, 에틸렌 글리콜 단위는 블록식(blockwise)으로, 교대로 배열될 수 있거나 또는 모이어티 또는 시약 내에 무작위로 분포될 수 있고, 바람직하게는 상기 모이어티 또는 시약의 모든 에틸렌 글리콜 단위는 하나의 블록에 존재하며; PEG 기반 모이어티 또는 시약의 나머지 중량 퍼센트는 바람직하게는 하기 모이어티 및 연결로부터 선택되는 다른 모이어티이다:
· C1-50 알킬, C2-50 알케닐, C2-50 알키닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 및 테트랄리닐; 및
· 하기로 구성된 군으로부터 선택된 연결
Figure pct00101
여기에서
점선은 모이어티 또는 시약의 나머지 부분으로의 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 구성된 군으로부터 선택된다.
용어 "적어도 X% 히알루론산을 포함하는 히알루론산 기반"은 이에 따라 사용된다.
본원에 사용된 바의 용어 "치환된"은 분자 또는 모이어티의 하나 이상의 -H 원자(들)이 "치환기"로 지칭되는 상이한 원자 또는 원자의 그룹에 의해 대체된다는 것을 의미한다.
바람직하게는, 하나 이상의 추가의 선택적인 치환기는 서로 독립적으로 할로겐, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)2N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO2, -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)2Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, 및 -OC(O)N(Rx3)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
-Rx1, -Rx1a, -Rx1b는 서로 독립적으로 -H, -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되며 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-; -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, 및 -OC(O)N(Rx3)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되고;
각각의 T0는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 및 8원 내지 11원 헤테로비시클릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며; 여기에서 각각의 T0은 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되고;
각각의 -Rx2는 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORx4, -ORx4, -C(O)Rx4, -C(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2N(Rx4Rx4a), -S(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2Rx4, -S(O)Rx4, -N(Rx4)S(O)2N(Rx4aRx4b), -SRx4, -N(Rx4Rx4a), -NO2, -OC(O)Rx4, -N(Rx4)C(O)Rx4a, -N(Rx4)S(O)2Rx4a, -N(Rx4)S(O)Rx4a, -N(Rx4)C(O)ORx4a, -N(Rx4)C(O)N(Rx4aRx4b), -OC(O)N(Rx4Rx4a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -Rx3, -Rx3a, -Rx4, -Rx4a, -Rx4b는 독립적으로 -H 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
더 바람직하게는, 하나 이상의 추가의 선택적인 치환기는 서로 독립적으로 할로겐, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)2N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO2, -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)2Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, C1-10 알킬, C2-10 알케닐, 및 C2-10 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 -T0, C1-10 알킬, C2-10 알케닐, 및 C2-10 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-10 알킬, C2-10 알케닐, 및 C2-10 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, 및 -OC(O)N(Rx3)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 -Rx1, -Rx1a, -Rx1b, -Rx3, -Rx3a는 독립적으로 -H, 할로겐, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 T0는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 및 8원 내지 11원 헤테로비시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 각각의 T0는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되고;
각각의 -Rx2는 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORx4, -ORx4, -C(O)Rx4, -C(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2N(Rx4Rx4a), -S(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2Rx4, -S(O)Rx4, -N(Rx4)S(O)2N(Rx4aRx4b), -SRx4, -N(Rx4Rx4a), -NO2, -OC(O)Rx4, -N(Rx4)C(O)Rx4a, -N(Rx4)S(O)2Rx4a, -N(Rx4)S(O)Rx4a, -N(Rx4)C(O)ORx4a, -N(Rx4)C(O)N(Rx4aRx4b), -OC(O)N(Rx4Rx4a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -Rx4, -Rx4a, -Rx4b는 독립적으로 -H, 할로겐, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며;
더욱더 바람직하게는, 하나 이상의 추가의 선택적인 치환기는 서로 독립적으로 할로겐, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)2N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO2, -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)2Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 -T0, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, 및 C2-6 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, 및 C2-6 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, 및 -OC(O)N(Rx3)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 -Rx1, -Rx1a, -Rx1b, -Rx2, -Rx3, -Rx3a는 독립적으로 -H, 할로겐, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 T0는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 및 8원 내지 11원 헤테로비시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 각각의 T0는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환된다.
바람직하게는, 임의로 치환된 분자의 최대 6개의 -H 원자는 독립적으로 치환기에 의해 대체되고, 예컨대, 5개의 -H 원자가 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 4개의 -H 원자가 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 3개의 -H 원자가 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 2개의 -H 원자가 독립적으로 치환기에 의해 대체되거나, 또는 1개의 -H 원자가 치환기에 의해 대체된다.
용어 "개재된(interrupted)"은 모이어티가 2개의 탄소 원자 사이에 삽입되거나 또는 - 삽입이 모이어티의 말단 중 하나에 있다면 - 탄소 또는 헤테로원자와 수소 원자 사이에, 바람직하게는 탄소와 수소 원자 사이에 삽입되는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바의, 용어 "C1-4 알킬"은 단독으로 또는 조합되어 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재한다면, 직쇄 또는 분지형 C1-4 알킬의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸이다. 분자의 2개의 모이어티가 C1-4 알킬에 의해 연결되는 경우, 이러한 C1-4 알킬기의 예는 -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)-, -C(CH3)2-이다. C1-4 알킬 탄소의 각각의 수소는 상기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 임의로 대체될 수 있다. 임의로, C1-4 알킬은 하기 정의된 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
본원에 사용된 바의, 용어 "C1-6 알킬"은 단독으로 또는 조합되어 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재한다면, 직쇄 및 분지형 C1-6 알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필이다. 분자의 2개의 모이어티가 C1-6 알킬기에 의해 연결되는 경우, 이러한 C1-6 알킬기의 예는 -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)- 및 -C(CH3)2-이다. C1-6 탄소의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 임의로 대체될 수 있다. 임의로, C1-6 알킬은 하기 정의된 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
따라서, "C1-10 알킬", "C1-20 알킬" 또는 "C1-50 알킬"은 각각 1 내지 10, 1 내지 20 또는 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 알킬 사슬을 의미하고, 여기에서 C1-10, C1-20 또는 C1-50 탄소의 각각의 수소 원자는 임의로 상기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 임의로, C1-10 또는 C1-50 알킬은 하기 정의된 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
본원에 사용된 바의, 용어 "C2-6 알케닐"은 단독으로 또는 조합되어 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재한다면, 예는 -CH=CH2, -CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH2, -CH=CHCH2-CH3 및 -CH=CH-CH=CH2이다. 분자의 2개의 모이어티가 C2-6 알케닐기에 의해 연결되는 경우, 이러한 C2-6 알케닐의 예는 -CH=CH-이다. C2-6 알케닐 모이어티의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 임의로 대체될 수 있다. 임의로, C2-6 알케닐은 하기 정의된 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
따라서, 용어 "C2-10 알케닐", "C2-20 알케닐" 또는 "C2-50 알케닐"은 단독으로 또는 조합되어 2 내지 10개, 2 내지 20개 또는 2 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. C2-10 알케닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알케닐기의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 임의로 대체될 수 있다. 임의로, C2-10 알케닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알케닐은 하기 정의된 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
본원에서 사용된 바의, 용어 "C2-6 알키닐"은 단독으로 또는 조합되어 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재한다면, 예는 -C≡CH, -CH2-C≡CH, CH2-CH2-C≡CH 및 CH2-C≡C-CH3이다. 분자의 2개의 모이어티가 알키닐기에 의해 연결되는 경우, 예는 -C≡C-이다. C2-6 알키닐기의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 임의로 대체될 수 있다. 임의로, 하나 이상의 이중 결합(들)이 존재할 수 있다. 임의로, C2-6 알키닐은 하기 정의된 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
따라서, 본원에 사용된 바의, 용어 "C2-10 알키닐", "C2-20 알키닐" 및 "C2-50 알키닐"은 단독으로 또는 조합되어 각기 2 내지 10, 2 내지 20 또는 2 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. C2-10 알키닐, C2-20 알키닐 또는 C2-50 알키닐기의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 임의로 대체될 수 있다. 임의로, 하나 이상의 이중 결합(들)이 존재할 수 있다. 임의로, C2-10 알키닐, C2-20 알키닐 또는 C2-50 알키닐은 하기 정의된 바와 같은 하나 이상의 모이어티에 의해 개재될 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, C1-4 알킬, C1-6 알킬, C1-10 알킬, C1-20 알킬, C1-50 알킬, C2-6 알케닐, C2-10 알케닐, C2-20 알케닐, C2-50 알케닐, C2-6 알키닐, C2-10 알키닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알키닐은 바람직하게는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 모이어티에 의해 임의로 개재될 수 있으며
Figure pct00102
여기에서
점선은 모이어티 또는 시약의 나머지 부분으로의 부착을 나타내고;
-R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 구성된 군으로부터 선택된다.
본원에 사용된 바의, 용어 "C3-10 시클로알킬"은 포화되거나 불포화될 수 있는 3개 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 시클릭 알킬 사슬, 예컨대, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헥세닐, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 시클로노닐 또는 시클로데실을 의미한다. C3-10 시클로알킬 탄소의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다. 용어 "C3-10 시클로알킬"은 또한 노르보르난 또는 노르보르넨과 같은 가교된 비사이클을 포함한다.
용어 "8원 내지 30원 카르보폴리시클릴" 또는 "8원 내지 30원 카르보폴리사이클"은 8 내지 30개의 고리 원자를 갖는 2 이상의 고리의 시클릭 모이어티를 의미하며, 여기에서 2개의 인접한 고리는 하나 이상의 고리 원자를 공유하며 이는 이중 결합의 최대 수를 함유할 수 있다(완전히, 부분적으로 또는 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리). 바람직하게는 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴은 2, 3, 4 또는 5개의 고리, 더 바람직하게는 2, 3 또는 4개의 고리의 시클릭 모이어티를 의미한다.
본원에 사용된 바의, 용어 "3원 내지 10원 헤테로시클릴" 또는 "3원 내지 10원 헤테로사이클"은 이중 결합의 최대 수까지 함유할 수 있는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는 고리(완전히, 부분적으로 또는 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리)를 의미하며, 여기에서 하나 이상의 고리 원자 내지 최대 4개의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2- 포함), 산소 및 질소(=N(O)- 포함)로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자에 의해 대체되고, 여기에서 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다. 3원 내지 10원 헤테로사이클의 예는 이것으로 제한되는 것은 아니지만 아지리딘, 옥시란, 티이란(thiirane), 아지린, 옥시렌, 티이렌, 아제티딘, 옥세탄, 티에탄, 푸란, 티오펜, 피롤, 피롤린, 이미다졸, 이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 옥사졸, 옥사졸린, 이속사졸, 이속사졸린, 티아졸, 티아졸린, 이소티아졸, 이소티아졸린, 티아디아졸, 티아디아졸린, 테트라히드로푸란, 테트라히드로티오펜, 피롤리딘, 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 옥사졸리딘, 이속사졸리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 티아디아졸리딘, 술포란, 피란, 디히드로피란, 테트라히드로피란, 이미다졸리딘, 피리딘, 피리다진, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 피페리딘, 모르폴린, 테트라졸, 트리아졸, 트리아졸리딘, 테트라졸리딘, 디아제판, 아제핀 및 호모피페라진을 포함한다. 3원 내지 10원 헤테로시클릴 또는 3원 내지 10원 헤테로시클릭기의 각각의 수소 원자는 하기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 대체될수 있다.
본원에 사용된 바의, 용어 "8원 내지 11원 헤테로비시클릴" 또는 "8원 내지 11원 헤테로비사이클"은 8 내지 11개의 고리 원자를 갖는 2개의 고리의 헤테로시클릭 모이어티를 의미하며, 여기에서 하나 이상의 고리 원자는 두 고리에 의해 공유되고, 이는 이중 결합의 최대 수까지 함유할 수 있고(완전히, 부분적으로 또는 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리), 여기에서 하나 이상의 고리 원자 내지 6개의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2- 포함), 산소 및 질소(=N(O)- 포함)로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자에 의해 대체되고, 여기에서 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다. 8원 내지 11원 헤테로비사이클의 예는 인돌, 인돌린, 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤족사졸, 벤즈이속사졸, 벤조티아졸, 벤즈이소티아졸, 벤즈이미다졸, 벤즈이미다졸린, 퀴놀린, 퀴나졸린, 디히드로퀴나졸린, 퀴놀린, 디히드로퀴놀린, 테트라히드로퀴놀린, 데카히드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 데카히드로이소퀴놀린, 테트라히드로이소퀴놀린, 디히드로이소퀴놀린, 벤즈아제핀, 푸린 및 프테리딘이다. 용어 8원 내지 11원 헤테로비사이클은 또한 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데칸과 같은 2개의 고리의 스피로 구조 또는 8-아자-비사이클로[3.2.1]옥탄과 같은 가교된 헤테로사이클을 포함한다. 8원 내지 11원 헤테로비시클릴 또는 8원 내지 11원 헤테로비사이클 탄소의 각각의 수소 원자는 하기 정의된 바와 같은 치환기에 의해 대체될 수 있다.
유사하게, 용어 "8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴" 또는 "8원 내지 30원 헤테로폴리사이클"은 8 내지 30개의 고리 원자를 갖는 2개를 초과하는 고리, 바람직하게는 3, 4 또는 5개의 고리의 헤테로시클릭 모이어티를 의미하며, 여기에서 2개의 인접한 고리는 하나 이상의 고리 원자를 공유하고, 이는 이중 결합의 최대 수까지 함유할 수 있으며(완전히, 부분적으로 또는 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리), 여기에서 하나 이상의 고리 원자 내지 10개의 고리 원자는 황(-S(O)-, -S(O)2- 포함), 산소 및 질소(=N(O)- 포함)의 군으로부터 선택된 헤테로원자에 의해 대체되고, 여기에서 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다.
하기 구조의 모이어티:
Figure pct00103
와 관련된 문구 "쌍 Rx/Ry는 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 C3-10 시클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로시클릴을 형성한다"는 Rx 및 Ry가 하기 구조를 형성하는 것을 의미하는 것으로 이해되고:
Figure pct00104
여기에서 R은 C3-10 시클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로시클릴이다.
또한, 하기 구조의 모이어티:
Figure pct00105
와 관련된 문구 "쌍 Rx/Ry는 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 고리 A를 형성한다"는 Rx 및 Ry가 하기 구조를 형성하는 것을 의미하는 것으로 이해된다:
Figure pct00106
본원에 사용된 바의, "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다. 할로겐은 플루오로 또는 클로로인 것이 일반적으로 바람직하다.
일반적으로, 용어 "포함하다" 또는 "포함하는"은 또한 "구성되다" 또는 "구성되는"을 포함한다.
본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 5배 이상 더 긴 분해 반감기를 갖는다. 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 적어도 10배 더 긴 분해 반감기를 갖는다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 적어도 15배 더 긴 분해 반감기를 갖는다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 적어도 20배 더 긴 분해 반감기를 갖는다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 적어도 25배 더 긴 분해 반감기를 갖는다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 적어도 30배 더 긴 분해 반감기를 갖는다.
본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 6시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 12시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 24시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 48시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 72시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 96시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 120시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 144시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 168시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다. 더욱더 바람직하게는 본 발명의 제어 방출성 CNP 작용제는 적어도 192시간의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출한다.
제어 방출성 CNP 작용제는 바람직하게는 소분자, 천연 생성물, 올리고뉴클레오타이드, 폴리펩타이드 및 단백질로 구성된 군으로부터 선택된 CNP 작용제를 포함한다.
한 실시양태에서 CNP 작용제는 소분자를 포함한다. 바람직하게는, CNP 작용제는 소분자이다.
또 다른 실시양태에서 CNP 작용제는 천연 생성물을 포함한다. 바람직하게는, CNP 작용제는 천연 생성물이다.
또 다른 실시양태에서 CNP 작용제는 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 바람직하게는, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 압타머, RNAi 및 siRNA로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, CNP 작용제는 올리고뉴클레오타이드이고, 더 바람직하게는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 압타머, RNAi 및 siRNA로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 작용제는 단백질을 포함한다. 바람직하게는, CNP 작용제는 단백질이다.
바람직한 실시양태에서 CNP 작용제는 폴리펩타이드를 포함한다. 더 바람직하게는 CNP 작용제는 폴리펩타이드이다. 바람직하게는 CNP 작용제는 CNP 분자 또는 모이어티를 포함한다. 더 바람직하게는 CNP 작용제는 CNP이다. 더욱더 바람직하게는 CNP 작용제는 서열 번호: 24, 서열 번호: 25 또는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP 분자 또는 모이어티를 포함한다. 더욱더 바람직하게는 CNP 작용제는 서열 번호: 24, 서열 번호: 25 또는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP이다. 한 실시양태에서 CNP 작용제는 서열 번호: 24의 서열을 갖는 CNP이다. 또 다른 실시양태에서 CNP 작용제는 서열 번호: 25의 서열을 갖는 CNP이다. 또 다른 실시양태에서 CNP 작용제는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP이다.
한 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 수불용성이다.
바람직하게는, 제어 방출성 CNP 작용제는 결정, 나노입자, 마이크로입자, 나노스피어 및 마이크로스피어로 구성된 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 결정이다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 나노입자이다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 마이크로입자이다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 나노스피어이다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 마이크로스피어이다.
한 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 소포이다. 바람직하게는, 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 이러한 소포는 미셀, 리포솜 또는 폴리머솜이다.
한 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 미셀이다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 리포솜이다. 바람직하게는, 이러한 리포솜은 아쿠아솜; 비이온 계면활성제 소포, 예컨대 니오솜 및 프로니오솜; 양이온 리포솜, 예컨대 레시플렉스; 트랜스페로솜; 에토솜; 우파솜; 스핑고솜; 및 파마코솜으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 폴리머솜이다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 수불용성 중합체 내에 비공유적으로 임베딩된 하나 이상의 CNP 작용제를 포함한다. 바람직하게는, 이러한 수불용성 중합체는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
바람직한 실시양태에서 제어 방출성 CNP는 폴리(락틱-코-글리콜산)(PLGA) 내에 비공유적으로 임베딩된 하나 이상의 CNP 작용제를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 수불용성 중합체에 공유적으로 및 가역적으로 접합된 하나 이상의 CNP 작용제를 포함한다. 바람직하게는 이러한 수불용성 중합체는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
바람직하게는 수불용성 중합체에 공유적으로 및 가역적으로 접합된 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 이러한 제어 방출성 CNP 작용제는 접합체 D-L을 포함하는 CNP 작용제 전구약물이고, 여기에서
-D는 CNP 작용제 모이어티이고;
-L은 가역적 전구약물 링커 모이어티 -L1-을 포함하며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z'로 치환되고 임의로 더 치환되며; 여기에서
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서 모이어티이고;
-Z'는 수불용성 캐리어 모이어티이다.
다수의 모이어티 -L2-L1-D가 수불용성 캐리어 -Z'에 연결되어 있음이 이해된다.
수불용성 캐리어 -Z'는 바람직하게는 히드로겔이다. 바람직하게는, 이러한 히드로겔은 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
캐리어 -Z'이 히드로겔이라면, 그것은 바람직하게는 PEG 또는 히알루론산을 포함하는 히드로겔이다. 가장 바람직하게는 이러한 히드로겔은 PEG를 포함한다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 이러한 히드로겔은 히알루론산을 포함한다.
더욱더 바람직하게는, 캐리어 -Z'는 그의 전체가 참조로 본원에 통합된 WO 2006/003014 A2, WO 2011/012715 A1 또는 WO 2014/056926 A1에 기재된 바와 같은 히드로겔이다.
또 다른 실시양태에서, -Z'는 중합체 사슬의 물리적 응집을 통해 형성된 중합체 네트워크이며, 상기 물리적 응집은 바람직하게는 수소 결합, 결정화, 나선 형성 또는 복합체형성에 의해 야기된다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체 네트워크는 열겔화 중합체이다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 수용성이다.
한 실시양태에서 CNP 작용제는 폴리펩타이드 또는 단백질이며 제어 방출성 CNP 작용제는 하나 이상의 추가의 폴리펩타이드 또는 단백질 모이어티에 융합된 이러한 폴리펩타이드 또는 단백질 CNP 작용제 모이어티를 포함하는 융합 단백질이다. 바람직하게는, CNP 작용제는 효소 절단을 통해 융합 단백질로부터 방출된다. 바람직하게는, 이러한 적어도 하나 이상의 추가의 폴리펩타이드 또는 단백질 모이어티는 참조로 본원에 통합된 US 2012/0035101 A1에 기재된 바와 같은 융모성 성선자극호르몬(chorionic gonadotropin)의 카르복실 말단 펩타이드; 알부민; 참조로 본원에 통합된 WO 2011123813 A2에 기재된 바와 같은 XTEN 서열; 참조로 본원에 통합된 WO 2011/144756 A1에 기재된 바와 같은 프롤린/알라닌 랜덤 코일 서열; 참조로 본원에 통합된 WO 2008/155134 A1 및 WO 2013/024049 A1에 기재된 바와 같은 프롤린/알라닌/세린 랜덤 코일 서열; 및 Fc 융합 단백질로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직한 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제는 하기 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 CNP 작용제 전구약물이다:
Figure pct00107
여기에서
-D는 CNP 작용제 모이어티이며;
-L1-은 가역적 전구약물 링커 모이어티이고;
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서 모이어티이며;
-Z은 수용성 캐리어 모이어티이고;
x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16으로 구성된 군으로부터 선택된 정수이며;
y는 1, 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택된 정수이다.
바람직하게는, 화학식(Ia)의 x는 1, 2, 3, 4, 6 및 8로 구성된 군으로부터 선택된 정수이다. 더 바람직하게는 화학식(Ia)의 x는 1, 2, 4, 및 6으로 구성된 군으로부터 선택된 정수이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(Ia)의 x는 1, 4 및 6으로 구성된 군으로부터 선택된 정수이고 가장 바람직하게는 화학식(Ia)의 x는 1이다.
바람직하게는, 화학식(Ib)의 y는 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택된 정수이며, 더욱더 바람직하게는 2, 3 또는 4로 구성된 군으로부터 선택된 정수이고 가장 바람직하게는 2 또는 3으로 구성된 군으로부터 선택된 정수이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ib)의 y는 1, 2 또는 3으로 구성된 군으로부터 선택된 정수이다. 한 바람직한 실시양태에서 화학식(Ib)의 y는 1이다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(Ib)의 y는 2이다.
바람직하게는 제어 방출성 CNP 작용제는 x = 1인 화학식(Ia)의 CNP 작용제 전구약물이다.
모이어티 -L1 -은 약물, 즉, CNP 작용제가 그의 유리 형태로 방출되는 가역적 전구약물 링커이며, 즉, -L1-은 흔적없는 전구약물 링커이다. 적합한 전구약물 링커는, 예를 들어 본원에서 참조로 통합된 WO 2005/099768 A2, WO 2006/136586 A2, WO 2011/089216 A1 및 WO 2013/024053 A1에 개시된 가역적 전구약물 링커 모이어티와 같이, 본 기술분야에 공지되어 있다.
또 다른 실시양태에서 -L1-은 본원에서 참조로 통합된 WO 2011/012722 A1, WO 2011/089214 A1, WO 2011/089215 A1, WO 2013/024052 A1 및 WO 2013/160340 A1에 기재된 바와 같은 가역적 전구약물 링커이다.
모이어티 -L1-은 임의의 유형의 연결을 통해 -D에 연결될 수 있으며, 단, 이는 가역적이다. 바람직하게는, -L1 -은 아미드, 에스테르, 카르바메이트, 아세탈, 아미날, 이민, 옥심, 히드라존, 디술피드 및 아실구아니딘으로 구성된 군으로부터 선택된 연결을 통해 -D에 연결된다. 더욱더 바람직하게는 -L1-은 아미드, 에스테르, 카르바메이트 및 아실구아니딘으로 구성된 군으로부터 선택된 연결을 통해 -D에 연결된다. 이들 연결은 그 자체로는 가역적이지 않을 수 있지만, -L1 -에 포함된 인접하는 기는 연결을 가역적으로 만들 수 있음이 이해된다.
바람직한 실시양태에서, 모이어티 -L1-은 아미드 연결을 통해 -D에 연결된다.
특히 바람직한 모이어티 -L1- 은 WO 2009/095479 A2에 개시되어 있다. 따라서, 한 바람직한 실시양태에서, 모이어티 -L1-은 하기 화학식(II)이며:
Figure pct00108
여기에서 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
-X-는 -C(R4R4a)-; -N(R4)-; -O-; -C(R4R4a)-C(R5R5a)-; -C(R5R5a)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-N(R6)-; -N(R6)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-O-; -O-C(R4R4a)-; 또는 -C(R7R7a)-이며;
X1은 C; 또는 S(O)이고;
-X2-는 -C(R8R8a)-; 또는 -C(R8R8a)-C(R9R9a)-이며;
=X3은 =O; =S; 또는 =N-CN이고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R4, -R4a, -R5, -R5a, -R6, -R8, -R8a, -R9, -R9a는 독립적으로 -H; 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며;
-R3, -R3a는 독립적으로 -H; 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고, 단 -R3, -R3a 중 하나 또는 양자가 -H가 아닌 경우 이들은 SP3-혼성 탄소 원자를 통해 부착되는 N에 연결되며;
-R7은 -N(R10R10a); 또는 -NR10-(C=O)-R11이고;
-R7a, -R10, -R10a, -R11은 서로 독립적으로 -H; 또는 C1-6 알킬이며;
임의로, 쌍 -R1a/-R4a, -R1a/-R5a, -R1a/-R7a, -R4a/-R5a, -R8a/-R9a 중 하나 이상은 화학 결합을 형성하고;
임의로, 쌍 -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R4/-R4a, -R5/-R5a, -R8/-R8a, -R9/-R9a 중 하나 이상은 이들이 부착되는 원자와 함께 연결되어 C3-10 시클로알킬; 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성하고;
임의로, 쌍 -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7a, -R4/-R5, -R4/-R6, -R8/-R9, -R2/-R3 중 하나 이상은 이들이 부착되는 원자와 함께 고리 A를 형성하며;
임의로, R3/R3a는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 연결되어 3원 내지 10원 헤테로사이클을 형성하고;
A는 페닐; 나프틸; 인데닐; 인다닐; 테트랄리닐; C3-10 시클로알킬; 3원 내지 10원 헤테로시클릴; 및 8원 내지 11원 헤테로비시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되며, 단 화학식(II)에서 별표로 표시된 수소는 -L2-Z 또는 -L2-Z' 또는 치환기에 의해 대체되지 않는다;
여기에서
-L2- 는 단일 화학 결합 또는 스페이서이고;
-Z은 수용성 캐리어이며;
-Z'는 수불용성 캐리어이다.
바람직하게는 화학식(II)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
한 실시양태에서 화학식(II)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
화학식(II)의 -R3/-R3a가 이들이 부착된 질소 원자와 함께 연결되어 3원 내지 10원 헤테로사이클을 형성한다면, 질소에 직접 부착된 원자가 SP3-혼성 탄소 원자인 이러한 3원 내지 10원 헤테로사이클만이 형성될수 있는 것으로 이해된다. 다시 말해서, 이들이 부착된 질소 원자와 함께 -R3/-R3a에 의해 형성된 이러한 3원 내지 10원 헤테로사이클은 하기 구조를 가지며:
Figure pct00109
점선은 -L1-의 나머지 부분으로의 부착을 나타내고;
고리는 하나 이상의 질소를 포함하는 3개 내지 10개의 원자를 포함하며;
R# 및 R##는 SP3-혼성 탄소 원자를 나타낸다.
또한, 3원 내지 10원 헤테로사이클은 더 치환될 수 있는 것으로 이해된다.
이들이 부착되는 질소 원자와 함께 화학식(II)의 -R3/-R3a에 의해 형성된 적합한 3원 내지 10원 헤테로사이클의 예시적인 실시양태는 하기이며:
Figure pct00110
여기에서
점선은 분자의 나머지 부분으로의 부착을 나타내고;
-R은 -H 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택된다.
화학식(II)의 -L1-은 임의로 더 치환될 수 있다. 일반적으로, 절단 원리가 영향을 받지 않는 한 임의의 치환기가 사용될 수 있고, 즉, 화학식(II)에서 별표로 표시된 수소가 대체되지 않으며 하기 화학식(II)의 모이어티의 질소가 1차, 2차 또는 3차 아민의 일부로 남아있는다, 즉, -R3 및 -R3a는 독립적으로 각기 -H이거나 또는 SP3-혼성 탄소 원자를 통해 -N<에 연결된다:
Figure pct00111
한 실시양태에서 화학식(II)의 -R1 또는 -R1a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R2 또는 -R2a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R3 또는 -R3a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R4는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R5 또는 -R5a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R6은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R7 또는 -R7a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R8 또는 -R8a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R9 또는 -R9a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
가장 바람직하게는 화학식(II)의 -R4는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
바람직하게는, 화학식(II)의 -X-는 -C(R4R4a)- 또는 -N(R4)-이다. 가장 바람직하게는, 화학식(II)의 -X-는 -C(R4R4a)-이다.
바람직하게는, 화학식(II)의 X1은 C이다.
바람직하게는, 화학식(II)의 =X3은 =O이다.
바람직하게는, 화학식(II)의 -X2-는 -C(R8R8a)-이다.
바람직하게는 화학식(II)의 -R8 및 -R8a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는 하나 이상의 화학식(II)의 -R8 및 -R8a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(II)의 -R8 및 -R8a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(II)의 -R1 및 -R1a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 하나 이상의 화학식(II)의 -R1 및 -R1a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(II)의 -R1 및 -R1a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(II)의 -R2 및 -R2a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 하나 이상의 화학식(II)의 -R2 및 -R2a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(II)의 -R2 및 -R2a 모두는 H이다.
바람직하게는, 화학식(II)의 -R3 및 -R3a는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 하나 이상의 화학식(II)의 -R3 및 -R3a는 메틸이다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(II)의 -R3 및 -R3a는 모두 -H이다. 동등하게 바람직한 또 다른 실시양태에서 화학식(II)의 -R3 및 -R3a는 모두 메틸이다.
바람직하게는, 화학식(II)의 -R3은 -H이고 화학식(II)의 -R3a는 메틸이다.
바람직하게는, 화학식(II)의 -R4 및 -R4a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 하나 이상의 화학식(II)의 -R4 및 -R4a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(II)의 -R4 및 -R4a 모두는 -H이다.
바람직하게는 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIa)이며:
Figure pct00112
여기에서 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R3, -R3a, -R4, -R4a 및 -X2-는 화학식(II)에서 정의된 바와 같이 사용되며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되며, 단 화학식(IIa)에서 별표로 표시된 수소는 -L2-Z 또는 -L2-Z' 또는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIa)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
바람직하게는 화학식(IIa)의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
바람직하게는, 화학식(IIa)의 -R1 및 -R1a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 하나 이상의 화학식(IIa)의 -R1 및 -R1a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIa)의 -R1 및 -R1a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(IIa)의 -R4 및 -R4a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 하나 이상의 화학식(IIa)의 -R4 및 -R4a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIa)의 -R4 및 -R4a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(IIa)의 -X2-는 -C(R8R8a)-이다.
바람직하게는 화학식(IIa)의 -R8 및 -R8a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는 하나 이상의 화학식(IIa)의 -R8 및 -R8a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIa)의 -R8 및 -R8a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(IIa)의 -R2 및 -R2a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 하나 이상의 화학식(IIa)의 -R2 및 -R2a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIa)의 -R2 및 -R2a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(IIa)의 -R3 및 -R3a는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 하나 이상의 화학식(IIa)의 -R3 및 -R3a는 메틸이다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(IIa)의 -R3 및 -R3a는 모두 -H이다. 동등하게 바람직한 또 다른 실시양태에서 화학식(IIa)의 -R3 및 -R3a는 모두 메틸이다.
바람직하게는, 화학식(IIa)의 -R3은 -H이고 화학식(IIa)의 -R3a는 메틸이다.
바람직하게는 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIb)이며:
Figure pct00113
여기에서 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
-R2, -R2a, -R3, -R3a, 및 -X2-는 화학식(II)에서 정의된 바와 같이 사용되며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되며, 단 화학식(IIb)에서 별표로 표시된 수소는 -L2-Z 또는 -L2-Z' 또는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIb)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
바람직하게는 화학식(IIb)의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
바람직하게는, 화학식(IIb)의 -X2-는 -C(R8R8a)-이다.
바람직하게는 화학식(IIb)의 -R8 및 -R8a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는 하나 이상의 화학식(IIb)의 -R8 및 -R8a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIb)의 -R8 및 -R8a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(IIb)의 -R2 및 -R2a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 하나 이상의 화학식(IIb)의 -R2 및 -R2a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIb)의 -R2 및 -R2a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(IIb)의 -R3 및 -R3a는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 하나 이상의 화학식(IIb)의 -R3 및 -R3a는 메틸이다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(IIb)의 -R3 및 -R3a는 모두 -H이다. 동등하게 바람직한 또 다른 실시양태에서 화학식(IIb)의 -R3 및 -R3a는 모두 메틸이다.
가장 바람직하게는, 화학식(IIb)의 -R3은 -H이고 화학식(IIb)의 -R3a는 메틸이다.
더욱더 바람직하게는 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIb')이며:
Figure pct00114
여기에서
점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -L2-로의 부착을 나타내며;
-R2, -R2a, -R3, -R3a, 및 -X2-는 화학식(II)에서 정의된 바와 같이 사용되며;
여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되고 단 화학식(IIb')에서 별표로 표시된 수소는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIb')의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
바람직하게는, 화학식(IIb')의 -X2-는 -C(R8R8a)-이다.
바람직하게는 화학식(IIb')의 -R8 및 -R8a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는 하나 이상의 화학식(IIb')의 -R8 및 -R8a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIb')의 -R8 및 -R8a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(IIb')의 -R2 및 -R2a는 독립적으로 -H, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 하나 이상의 화학식(IIb')의 -R2 및 -R2a는 -H이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIb')의 -R2 및 -R2a 모두는 -H이다.
바람직하게는, 화학식(IIb')의 -R3 및 -R3a는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 하나 이상의 화학식(IIb')의 -R3 및 -R3a는 메틸이다. 동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(IIb')의 -R3 및 -R3a는 모두 -H이다. 동등하게 바람직한 또 다른 실시양태에서 화학식(IIb')의 -R3 및 -R3a는 모두 메틸이다.
가장 바람직하게는, 화학식(IIb')의 -R3은 -H이고 화학식(IIb')의 -R3a는 메틸이다.
바람직하게는 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIc)이며:
Figure pct00115
여기에서 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되며 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되고, 단 화학식(IIc)에서 별표로 표시된 수소는 -L2-Z 또는 -L2-Z' 또는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIc)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
바람직하게는 화학식(IIc)의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIc-a)이며:
Figure pct00116
여기에서 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되며 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되고, 단 화학식(IIc-a)에서 별표로 표시된 수소는 -L2-Z 또는 -L2-Z' 또는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIc-a)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
바람직하게는 화학식(IIc-a)의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIc-b)이며:
Figure pct00117
여기에서 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되며 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되고, 단 화학식(IIc-b)에서 별표로 표시된 수소는 -L2-Z 또는 -L2-Z' 또는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIc-b)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
바람직하게는 화학식(IIc-b)의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
더욱더 바람직하게는 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIc-iv) 및 (IIc-v)로 구성된 군으로부터 선택되며:
Figure pct00118
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로의 부착을 나타내며;
-L1-은 임의로 더 치환되고 단 화학식(IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIc-iv) 및 (IIc-v)에서 별표로 표시된 수소는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIc-iv) 및 (IIc-v)의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
특히 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIc-ii)이며
Figure pct00119
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로의 부착을 나타낸다.
바람직하게는 화학식(IIc-ii)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
동등하게 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv') 및 (IIc-v')로 구성된 군으로부터 선택되며:
Figure pct00120
Figure pct00121
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로의 부착을 나타내며;
-L1-은 임의로 더 치환되고 단 화학식(IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv') 및 (IIc-v')에서 별표로 표시된 수소는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv') 및 (IIc-v')의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIc-ii')이며
Figure pct00122
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로의 부착을 나타낸다.
바람직하게는 화학식(IIc-ii')의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
동등하게 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-은 화학식(IIc-i''), (IIc-ii''), (IIc-iii'') 및 (IIc-iv'')로 구성된 군으로부터 선택되며:
Figure pct00123
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로의 부착을 나타내며;
-L1-은 임의로 더 치환되고 단 화학식(IIc-i''), (IIc-ii''), (IIc-iii'') 및 (IIc-iv'')에서 별표로 표시된 수소는 치환기에 의해 대체되지 않는다.
바람직하게는 화학식(IIc-i''), (IIc-ii''), (IIc-iii'') 및 (IIc-iv'')의 모이어티 -L1-은 더 치환되지 않는다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IIc-ii'')이며
Figure pct00124
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로의 부착을 나타낸다.
바람직하게는 화학식(IIc-ii')의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
화학식(II), (IIa), (IIb), (IIb'), (IIc), (IIc-a), (IIc-b), (IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIc-iv), (IIc-v), (IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv'), (IIc-v'), (IIc-i''), (IIc-ii''), (IIc-iii''), (IIc-iv'')의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 전술한 바와 같다.
또 다른 바람직한 모이어티 -L1-은 WO2016/020373A1에 개시되어 있다. 따라서, 또 다른 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-은 하기 화학식(III)이며:
Figure pct00125
여기에서
점선은 각각 아미드 또는 에스테르 연결 형성에 의한 CNP 모이어티인 -D의 1차 또는 2차 아민 또는 히드록실로의 부착을 나타내고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R3 및 -R3a는 서로 독립적으로 -H, -C(R8R8aR8b), -C(=O)R8, -C≡N, -C(=NR8)R8a, -CR8(=CR8aR8b), -C≡CR8 및 -T로 구성된 군으로부터 선택되며;
-R4, -R5 및 -R5a는 서로 독립적으로 -H, -C(R9R9aR9b) 및 -T로 구성된 군으로부터 선택되고;
a1 및 a2는 서로 독립적으로 0 또는 1이며;
각각의 -R6, -R6a, -R7, -R7a, -R8, -R8a, -R8b, -R9, -R9a, -R9b는 서로 독립적으로 -H, 할로겐, -CN, -COOR10, -OR10, -C(O)R10, -C(O)N(R10R10a), -S(O)2N(R10R10a), -S(O)N(R10R10a), -S(O)2R10, -S(O)R10, -N(R10)S(O)2N(R10aR10b), -SR10, -N(R10R10a), -NO2, -OC(O)R10, -N(R10)C(O)R10a, -N(R10)S(O)2R10a, -N(R10)S(O)R10a, -N(R10)C(O)OR10a, -N(R10)C(O)N(R10aR10b), -OC(O)N(R10R10a), -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 임의로 치환되며 여기에서 C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R12)-, -S(O)2N(R12)-, -S(O)N(R12)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R12)S(O)2N(R12a)-, -S-, -N(R12)-, -OC(OR12)(R12a)-, -N(R12)C(O)N(R12a)-, 및 -OC(O)N(R12)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되고;
각각의 -R10, -R10a, -R10b는 독립적으로 -H, -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11으로 임의로 치환되며, 여기에서 C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R12)-, -S(O)2N(R12)-, -S(O)N(R12)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R12)S(O)2N(R12a)-, -S-, -N(R12)-, -OC(OR12)(R12a)-, -N(R12)C(O)N(R12a)-, 및 -OC(O)N(R12)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되고;
각각의 T는 서로 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 및 8원 내지 11원 헤테로비시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 임의로 치환되며;
각각의 -R11은 서로 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR13, -OR13, -C(O)R13, -C(O)N(R13R13a), -S(O)2N(R13R13a), -S(O)N(R13R13a), -S(O)2R13, -S(O)R13, -N(R13)S(O)2N(R13aR13b), -SR13, -N(R13R13a), -NO2, -OC(O)R13, -N(R13)C(O)R13a, -N(R13)S(O)2R13a, -N(R13)S(O)R13a, -N(R13)C(O)OR13a, -N(R13)C(O)N(R13aR13b), -OC(O)N(R13R13a), 및 C1-6 알킬로부터 선택되고; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되며;
각각의 -R12, -R12a, -R13, -R13a, -R13b는 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되며;
임의로, 쌍 -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R3/-R3a, -R6/-R6a, -R7/-R7a 중 하나 이상은 이들이 부착된 원자와 함께 연결되어 C3-10 시클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로시클릴을 형성하고;
임의로, 쌍 -R1/-R2, -R1/-R3, -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7, -R2/-R3, -R2/-R4, -R2/-R5, -R2/-R6, -R2/-R7, -R3/-R4, -R3/-R5, -R3/-R6, -R3/-R7, -R4/-R5, -R4/-R6, -R4/-R7, -R5/-R6, -R5/-R7, -R6/-R7 중 하나 이상은 이들이 부착된 원자와 함께 연결되어 고리 A를 형성하며;
A는 페닐; 나프틸; 인데닐; 인다닐; 테트랄리닐; C3-10 시클로알킬; 3원 내지 10원 헤테로시클릴; 및 8원 내지 11원 헤테로비시클릴로 구성된 군으로부터 선택되고;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되며, 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되고;
여기에서
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서이며;
-Z은 수용성 캐리어이고;
-Z'는 수불용성 캐리어이다.
화학식(III)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 전술한 바와 같다.
바람직하게는 화학식(III)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
한 실시양태에서 화학식(III)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
-L1-에 대한 추가적인 바람직한 실시양태는 그의 전체가 참조로 본원에 통합된 EP1536334B1, WO2009/009712A1, WO2008/034122A1, WO2009/143412A2, WO2011/082368A2, 및 US8618124B2에 개시되어 있다.
-L1-에 대한 추가적인 바람직한 실시양태는 그의 전체가 참조로 본원에 통합된 US8946405B2 및 US8754190B2에 개시되어 있다. 따라서, 바람직한 모이어티 -L1-은 하기 화학식(IV)이며:
Figure pct00126
여기에서
점선은 CNP 작용제 모이어티인 -D로의 부착을 나타내고, 여기에서 부착은 -OH, -SH 및 -NH2로 구성된 군으로부터 선택된 -D의 작용기를 통해서이며;
m은 0 또는 1이고;
하나 이상의 또는 양자의 -R1 및 -R2는 서로 독립적으로 -CN, -NO2, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, -C(O)R3, -S(O)R3, -S(O)2R3, 및 -SR4로 구성된 군으로부터 선택되며,
하나 및 오직 하나의 -R1 및 -R2는 -H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴알킬, 및 임의로 치환된 헤테로아릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
-R3은 -H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR9 및 -N(R9)2로 구성된 군으로부터 선택되며;
-R4는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 및 임의로 치환된 헤테로아릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 독립적으로 -H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐알킬, 임의로 치환된 알키닐알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되며;
-R9는 -H 및 임의로 치환된 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
-Y-는 부재이며 -X-는 -O- 또는 -S-이거나; 또는
-Y-는 -N(Q)CH2-이고 -X-는 -O-이며;
Q는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
임의로, -R1 및 -R2는 연결되어 3원 내지 8원 고리를 형성할 수 있고;
임의로, 두 개의 -R9는 이들이 부착된 질소와 함께 헤테로시클릭 고리를 형성하며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되며 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되고;
여기에서
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서이며;
-Z은 수용성 캐리어이고;
-Z'는 수불용성 캐리어이다.
화학식(IV)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 전술한 바와 같다.
바람직하게는 화학식(IV)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
한 실시양태에서 화학식(IV)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
오직 화학식(IV)의 문맥에서, 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
여기에서 사용된 바의 용어 "알킬"은 1 내지 8개의 탄소, 또는 일부 실시양태에서, 1 내지 6개 또는 1 내지 4개의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 포화 탄화수소기를 포함한다.
용어 "알콕시"는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 시클로프로폭시, 시클로부톡시 등을 포함하는 산소에 결합된 알킬기를 포함한다.
용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 비방향족 불포화 탄화수소를 포함한다.
용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 비방향족 불포화 탄화수소를 포함한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸, 및 안트라세닐과 같은 기를 포함하는, 6 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. 용어 "헤테로아릴"은 하나 이상의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3개 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 하나 이상의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3 내지 7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리를 포함하고, 이는 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 등과 같은 기를 포함한다.
일부 경우, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 알킬렌 연결을 통해 분자의 나머지 부분에 결합될 수 있다. 이러한 상황하에서, 치환기는 알케닐알킬, 알키닐알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬로 지칭될 것이고, 이는 알킬렌 모이어티가 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티와 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로 아릴이 결합된 분자 사이에 있다는 것을 나타낸다.
용어 "할로겐"은 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 포함한다.
용어 "헤테로시클릭 고리"는 3 내지 7개의 탄소 원자 및 하나 이상의 N, O, 또는 S 원자를 포함하는 4 내지 8원의 방향족 또는 비방향족 고리를 의미한다. 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라히드로피라닐, 피롤리딘, 및 테트라히드로푸라닐, 뿐만 아니라 용어 "헤테로아릴"에 대하여 상기에서 제공된 예시적인 기이다.
고리계가 임의로 치환되는 경우, 적합한 치환기는 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 부가적인 고리로 구성된 군으로부터 선택되며, 각각은 임의로 더 치환된다. 상기를 포함하는, 임의의 기상의 선택적인 치환기는 할로, 니트로, 시아노, -OR, -SR, -NR2, -OCOR, -NRCOR, -COOR, -CONR2, -SOR, -SO2R, -SONR2, -SO2NR2를 포함하고, 여기에서 각각의 R은 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴이거나, 또는 이들이 부착된 원자와 함께 2개의 R 기는 고리를 형성한다.
-L1-에 대한 부가적인 바람직한 실시양태는 그의 전체가 참조로 본원에 통합된 WO2013/036857A1에 개시되어 있다. 따라서, 바람직한 화학식(V)의 모이어티 -L1-은 하기이며:
Figure pct00127
여기에서
점선은 CNP 작용제 모이어티인 -D로의 부착을 나타내고, 여기에서 부착은 -D의 아민 작용기를 통해서이며;
-R1은 임의로 치환된 C1-C6 선형, 분지형, 또는 시클릭 알킬; 임의로 치환된 아릴; 임의로 치환된 헤테로아릴; 알콕시; 및 -NR5 2로 구성된 군으로부터 선택되며;
-R2는 -H; 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 임의로 치환된 아릴; 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택되고;
-R3은 -H; 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 임의로 치환된 아릴; 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택되며;
-R4는 -H; 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 임의로 치환된 아릴; 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 서로 독립적으로 -H; 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 임의로 치환된 아릴; 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택되거나; 또는 함께 취하여진 경우 2개의 -R5는 시클로알킬 또는 시클로헤테로알킬일 수 있으며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고, 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되며;
여기에서
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서이고;
-Z은 수용성 캐리어이며;
-Z'는 수불용성 캐리어이다.
화학식(V)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 전술한 바와 같 다.
바람직하게는 화학식(V)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
한 실시양태에서 화학식(V)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
오직 화학식(V)의 문맥에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
"알킬", "알케닐", 및 "알키닐"은 1-8개의 탄소 또는 1-6개의 탄소 또는 1-4개의 탄소의 선형, 분지형 또는 시클릭 탄화수소 기를 포함하고 여기에서 알킬은 포화 탄화수소이고, 알케닐은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고, 알키닐은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 이들은 1-6개의 C를 포함한다.
"아릴"은 6-18개의 탄소, 바람직하게는 6-10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함하고, 이는 페닐, 나프틸, 및 안트라센과 같은 기를 포함한다. "헤테로아릴"은 하나 이상의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3-15개의 탄소, 바람직하게는 하나 이상의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 3-7개의 탄소를 포함하는 방향족 고리를 포함하고, 이는 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 등과 같은 기를 포함한다.
용어 "치환된"은 하나 이상의 수소 원자 대신에 하나 이상의 치환기를 포함하는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 또는 헤테로아릴기를 의미한다. 치환기는 일반적으로 F, Cl, Br, 및 I을 포함하는 할로겐; 선형, 분지형, 및 시클릭을 포함하는 저급 알킬; 플루오로알킬, 클로로알킬, 브로모알킬, 및 요오도알킬을 포함하는 저급 할로알킬; OH; 선형, 분지형, 및 시클릭을 포함하는 저급 알콕시; SH; 선형, 분지형 및 시클릭을 포함하는 저급 알킬티오; 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬실릴, 알콕시실릴, 및 아릴실릴을 포함하는 실릴; 니트로; 시아노; 카르보닐; 카르복실산, 카르복실릭 에스테르, 카르복실릭 아미드, 아미노카르보닐; 아미노아실; 카르바메이트; 우레아; 티오카르바메이트; 티오우레아; 케톤; 술폰; 술폰아미드; 페닐, 나프틸, 및 안트라세닐을 포함하는 아릴; 헤테로아릴, 예컨대 피롤, 이미다졸, 푸란, 티오펜, 옥사졸, 티아졸, 이속사졸, 이소티아졸, 티아디아졸, 트리아졸, 옥사디아졸, 및 테트라졸을 포함하는 5원 헤테로아릴, 피리딘, 피리미딘, 피라진을 포함하는 6원 헤테로아릴, 및 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤족사졸, 벤즈이미다졸, 인돌, 벤조티아졸, 벤즈이속사졸, 및 벤즈이소티아졸을 포함하는 융합된 헤테로아릴로부터 선택될 수 있다.
-L1-에 대한 추가의 바람직한 실시양태는 그의 전체가 참조로 본원에 통합된 US7585837B2에 개시되어 있다. 따라서, 바람직한 모이어티 -L1-은 하기 화학식(VI)이며:
Figure pct00128
여기에서
점선은 CNP 작용제 모이어티인 D-로의 부착을 나타내고, 여기에서 부착은 -D의 아민 작용기를 통해서이며;
R1 및 R2는 독립적으로 수소, 알킬, 알콕시, 알콕시알킬, 아릴, 알크아릴, 아르알킬, 할로겐, 니트로, -SO3H, -SO2NHR5, 아미노, 암모늄, 카르복실, PO3H2, 및 OPO3H2로 구성된 군으로부터 선택되고;
R3, R4, 및 R5는 독립적으로 수소, 알킬, 및 아릴로 구성된 군으로부터 선택되며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되며;
여기에서
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서이고;
-Z은 수용성 캐리어이며;
-Z'는 수불용성 캐리어이다.
화학식(VI)에 대한 적합한 치환기는 알킬(예컨대 C1-6 알킬), 알케닐(예컨대 C2-6 알케닐), 알키닐(예컨대 C2-6 알키닐), 아릴(예컨대 페닐), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로아릴(예컨대 방향족 4 내지 7원 헤테로사이클) 또는 할로겐 모이어티이다.
바람직하게는 화학식(VI)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
화학식(VI)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 전술한 바와 같다.
한 실시양태에서 화학식(VI)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
오직 화학식(VI)의 문맥에서, 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
용어 "알킬", "알콕시", "알콕시알킬", "아릴", "알크아릴" 및 "아르알킬"은 1-8개, 바람직하게는 1-4개의 탄소 원자의 알킬 라디칼, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필 및 부틸, 및 6-10개의 탄소원자의 아릴 라디칼, 예컨대 페닐 및 나프틸을 의미한다. 용어 "할로겐"은 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 포함한다.
-L1-에 대한 추가의 바람직한 실시양태는 그의 전체가 참조로 본원에 통합된 WO2002/089789A1에 개시되어 있다. 따라서, 바람직한 모이어티 -L1-은 하기 화학식(VII)이며:
Figure pct00129
여기에서
점선은 CNP 작용제 모이어티인 -D로의 부착을 나타내고, 여기에서 부착은 -D의 아민 작용기를 통해서이며;
L1은 이작용성(bifunctional) 연결 기이고,
Y1 및 Y2는 독립적으로 O, S 또는 NR7이며;
R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C3-12 분지형 알킬, C3-8 시클로알킬, C1-6 치환된 알킬, C3-8 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, C1-6 헤테로알킬, 치환된 C1-6 헤테로알킬, C1-6 알콕시, 페녹시, 및 C1-6 헤테로알콕시로 구성된 군으로부터 선택되고;
Ar은 화학식(VII)에 포함되는 경우 다중치환된 방향족 탄화수소 또는 다중치환된 헤테로시클릭 기를 형성하는 모이어티이며;
X는 표적 세포로 능동 수송되는 화학 결합 또는 모이어티, 소수성 모이어티, 또는 이의 조합이고,
y는 0 또는 1이며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되며;
여기에서
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서이며;
-Z은 수용성 캐리어이고;
-Z'는 수불용성 캐리어이다.
바람직하게는 화학식(VII)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
화학식(VII)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 전술한 바와 같다.
한 실시양태에서 화학식(VII)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
오직 화학식(VII)의 문맥에서 사용된 용어는 하기 의미를 갖는다:
용어 "알킬"은 예컨대, 알콕시, C3-8 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬 등을 포함하는 직쇄형, 분지형, 치환된 C1-12 알킬을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
용어 "치환된"은 작용기 또는 화합물 내에 함유된 하나 이상의 원자를 하나 이상의 상이한 원자로 부가하거나 대체하는 것을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
치환된 알킬은 카르복시알킬, 아미노알킬, 디알킬아미노, 히드록시알킬 및 메르캅토알킬을 포함하고; 치환된 시클로알킬은 4-클로로시클로헥실과 같은 모이어티를 포함하며; 아릴은 나프틸과 같은 모이어티를 포함하고; 치환된 아릴은 3-브로모-페닐과 같은 모이어티를 포함하며; 아르알킬은 톨루일과 같은 모이어티를 포함하고; 헤테로알킬은 에틸티오펜과 같은 모이어티를 포함하며; 치환된 헤테로알킬은 3-메톡시티오펜과 같은 모이어티를 포함하고; 알콕시는 메톡시와 같은 모이어티를 포함하며; 페녹시는 3-니트로페녹시와 같은 모이어티를 포함한다. 할로-는 플루오로, 클로로, 요오도 및 브로모를 포함하는 것으로 이해될 것이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 -L1-은 하기 화학식(VIII)의 하위구조를 포함하며
Figure pct00130
여기에서
별표로 표시된 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
표시가 없는 점선은 -L1-의 나머지 부분으로의 부착을 나타내며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되며 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되고;
여기에서
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서이며;
-Z은 수용성 캐리어이고;
-Z'는 수불용성 캐리어이다.
바람직하게는 화학식(VIII)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
화학식(VIII)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 전술한 바와 같다.
한 실시양태에서 화학식(VIII)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 -L1-은 하기 화학식(IX)의 하위구조를 포함하며
Figure pct00131
여기에서
별표로 표시된 점선은 카르바메이트 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
표시가 없는 점선은 -L1-의 나머지 부분으로의 부착을 나타내며;
여기에서 -L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되며 여기에서 -L1-은 임의로 더 치환되고;
여기에서
-L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서이며;
-Z은 수용성 캐리어이고;
-Z'는 수불용성 캐리어이다.
화학식(IX)의 -L1-의 선택적인 추가의 치환기는 바람직하게는 전술한 바와 같다.
바람직하게는 화학식(IX)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
한 실시양태에서 화학식(IX)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
바람직하게는 화학식(Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (IIb'), (IIc), (IIc-a), (IIc-b), (IIc-i), (IIc-ii), (IIc-iii), (IIc-iv), (IIc-v), (IIc-i'), (IIc-ii'), (IIc-iii'), (IIc-iv'), (IIc-v'), (IIc-i''), (IIc-ii''), (IIc-iii''), (IIc-iv''), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII) 및 (IX)의 -D는 CNP 모이어티이다. 모이어티 -D는 D-H의 임의의 작용기를 통해 -L1-에 연결될 수 있으며 바람직하게는 D-H의 아민 작용기를 통해 -L1-에 연결된다. 이것은 N-말단 아민 작용기 또는 라이신 측쇄에 의해, 즉 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 9, 11, 15, 16, 20 및 26의 라이신에 의해 제공된 아민 작용기일 수 있다.
놀랍게도, CNP 모이어티의 고리에 -L1-을 부착시키는 것은 N 말단 또는 CNP의 비고리 부분에서의 부착과 비교하여 NPR-B에 대한 CNP 전구약물의 친화도를 유의하게 감소시키며, NPR-B에 대한 감소된 친화도는 결국 저혈압과 같은 심혈관 부작용의 위험을 감소시키는 것으로 밝혀졌다.
따라서, -L1-은 바람직하게는 -D의 상기 고리 모이어티의 아미노산 잔기의 측쇄에 또는 -D의 상기 고리 모이어티의 백본에 접합된다. 더욱더 바람직하게는, -L1-은 -D의 상기 고리 모이어티의 아미노산 잔기의 측쇄에 공유 및 가역적으로 접합된다. -D가 서열 번호: 24의 서열을 갖는 CNP 모이어티라면, -L1-은 바람직하게는 상응하는 약물 D-H의 위치 26의 라이신에 의해 제공된 아민작용기에 접합된다.
모이어티 -L2-는 화학 결합 또는 스페이서 모이어티이다.
한 실시양태에서 -L2-는 화학 결합이다.
또 다른 실시양태에서 -L2-는 스페이서 모이어티이다.
모이어티 -L2-는 명시적으로 제외된 경우를 제외하고는 임의의 -H 존재를 대체함으로써 -L1-에 부착될 수 있다.
-L2-가 단일 화학 결합이 아닌 경우, -L2-는 바람직하게는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)-, 및 -OC(O)N(Ry3)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
-Ry1 및 -Ry1a는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)-, 및 -OC(O)N(Ry4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되며;
각각의 -Ry2는 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
-L2-가 단일 화학 결합이 아닌 경우, -L2-는 더욱더 바람직하게는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-,
-OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로부터 선택되고; 여기에서 -T-, C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고 여기에서 C1-20 알킬, C2-20 알케닐, 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)-, 및 -OC(O)N(Ry3)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
-Ry1 및 -Ry1a는 서로 독립적으로 -H, -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐, 및 C2-10 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐, 및 C2-10 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-10 알킬, C2-10 알케닐, 및 C2-10 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)-, 및 -OC(O)N(Ry4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고;
-Ry2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 서로 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
-L2-가 단일 화학 결합이 아닌 경우, -L2-는 더욱더 바람직하게는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)-, 및 -OC(O)N(Ry3)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
-Ry1 및 -Ry1a는 독립적으로 -H, -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐, 및 C2-10 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며;
각각의 T는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 -Ry2는 독립적으로 할로겐, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 서로 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
더욱더 바람직하게는, -L2-는 -O-, -T- 및 -C(O)N(Ry1)-으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재된 C1-20 알킬 사슬이고; C1-20 알킬 사슬은 -OH, -T 및 -C(O)N(Ry6Ry6a)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 임의로 치환되며; 여기에서 -Ry1, -Ry6, -Ry6a는 독립적으로 H 및 C1-4 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며 여기에서 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, -L2-는 14 g/mol 내지 750 g/mol 범위의 분자량을 갖는다.
바람직하게는, -L2-는 하기로부터 선택된 모이어티를 포함하며
Figure pct00132
Figure pct00133
여기에서
점선은 각기 -L2-, -L1-, -Z 및/또는 -Z'의 나머지 부분으로의 부착을 나타내고;
-R 및 -Ra는 서로 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 구성된 군으로부터 선택된다.
한 바람직한 실시양태에서 -L2-는 1 내지 20개 원자의 사슬 길이를 갖는다.
본원에서 사용된 바와 같이 모이어티 -L2-와 관련된 용어 "사슬 길이"는 -L1-과 -Z사이의 가장 짧은 연결에 존재하는 -L2-의 원자의 수를 의미한다.
바람직하게는, -L2-는 하기 화학식(i)이며
Figure pct00134
여기에서
별표로 표시된 점선은 -L1-으로의 부착을 나타내고;
표시가 없는 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타내며;
-R1은 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며;
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로 구성된 군으로부터 선택되며;
여기에서 화학식(i)의 모이어티는 임의로 더 치환된다.
바람직하게는 화학식(i)의 -R1은 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 화학식(i)의 -R1은 -H, 메틸, 에틸 및 프로필로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 화학식(i)의 -R1은 -H 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는 화학식(i)의 -R1은 메틸이다.
바람직하게는 화학식(i)의 n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 화학식(i)의 n은 0, 1, 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 화학식(i)의 n은 0, 1, 2 및 3으로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 화학식(i)의 n은 0 및 1로 구성된 군으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는 화학식(i)의 n은 0이다.
한 바람직한 실시양태에서 -L2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 모이어티이며
Figure pct00135
여기에서
별표로 표시된 점선은 -L1-으로의 부착을 나타내고;
표시가 없는 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타내며;
여기에서 모이어티 (ii), (iii), (iv), (v), (vi), (vii), (viii), (ix), (x), (xi), (xii), (xiii), (xiv), (xv), (xvi) 및 (xvii)은 임의로 더 치환된다.
바람직한 실시양태에서 -L2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택되며
Figure pct00136
여기에서
별표로 표시된 점선은 -L1-으로의 부착을 나타내고;
표시가 없는 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
더욱더 바람직한 -L2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택되며
Figure pct00137
여기에서
별표로 표시된 점선은 -L1-으로의 부착을 나타내고;
표시가 없는 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
더욱더 바람직하게는 -L2-는 하기 화학식(xvi)이며
Figure pct00138
여기에서
별표로 표시된 점선은 -L1-으로의 부착을 나타내고;
표시가 없는 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
한 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택되며
Figure pct00139
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
더욱더 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-는 하기 화학식(IId-ii)이며
Figure pct00140
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
가장 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-는 하기 화학식(IId-ii')이며
Figure pct00141
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택되며
Figure pct00142
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
더욱더 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-는 하기 화학식(IId-iia)이며
Figure pct00143
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
가장 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-는 하기 화학식(IId-iia')이며
Figure pct00144
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택되며
Figure pct00145
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
더욱더 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-은 하기 화학식(IId-iib)이며
Figure pct00146
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
가장 바람직한 실시양태에서 모이어티 -L1-L2-는 하기 화학식(IId-iib')이며
Figure pct00147
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 -Z 또는 -Z'로의 부착을 나타낸다.
바람직하게는, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 5 내지 200 kDa 범위의 분자량을 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 8 내지 100 kDa 범위, 더욱더 바람직하게는 10 내지 80 kDa 범위, 더욱더 바람직하게는 12 내지 60, 더욱더 바람직하게는 15 내지 40의 분자량을 갖고 가장 바람직하게는 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 약 20 kDa의 분자량을 갖는다. 동등하게 바람직한 또 다른 실시양태에서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 약 40 kDa의 분자량을 갖는다.
화학식(Ia) 또는 (Ib)의 캐리어 -Z은 C8-24 알킬 모이어티 또는 중합체를 포함한다. 바람직하게는, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 중합체, 바람직하게는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 지방산 유도체를 포함한다. 바람직한 지방산 유도체는 참조로 본원에 통합된 WO 2005/027978 A2 및 WO 2014/060512 A1에 개시된 것들이다.
한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 단백질을 포함한다. 바람직한 단백질은 참조로 본원에 통합된 US 2012/0035101 A1에 기재된 바와 같은 융모성 성선자극호르몬의 카르복실-말단 펩타이드; 알부민; 참조로 본원에 통합된 WO 2011123813 A2에 기재된 바와 같은 XTEN 서열; 참조로 본원에 통합된 WO 2011/144756 A1에 기재된 바와 같은 프롤린/알라닌 랜덤 코일 서열; 참조로 본원에 통합된 WO 2008/155134 A1 및 WO 2013/024049 A1에 기재된 바와 같은 프롤린/알라닌/세린 랜덤 코일 서열; 및 Fc 융합 단백질로 구성된 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 폴리사르코신이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 폴리(N-메틸글리신)을 포함한다.
특히 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
한 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 하나의 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 2개의 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 3개의 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 4개의 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 5개의 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 6개의 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 7개의 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 8개의 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
바람직하게는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 적어도 25개의 아미노산 잔기 및 최대 2000개의 아미노산을 포함한다. 더욱더 바람직하게는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 적어도 30개의 아미노산 잔기 및 최대 1500개의 아미노산 잔기를 포함한다. 더욱더 바람직하게는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 적어도 50개의 아미노산 잔기 및 최대 500개의 아미노산 잔기를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 더욱더 바람직하게는 적어도 90%, 더욱더 바람직하게는 적어도 95%, 더욱더 바람직하게는 적어도 98% 및 가장 바람직하게는 적어도 99%가 알라닌 및 프롤린으로부터 선택된 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티의 아미노산 잔기의 총수의 적어도 10%, 그러나 75% 미만, 바람직하게는 65% 미만은 프롤린 잔기이다. 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 그의 전체가 참조로 본원에서 통합된 WO 2011/144756 A1에 기재되어 있다. 더욱더 바람직하게는 -Z은 참조로 본원에서 통합된 WO2011/144756에 개시된 바와 같은 서열 번호: 1, 서열 번호: 2, 서열 번호: 3, 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 서열 번호: 6, 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9, 서열 번호: 10, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17, 서열 번호: 51 및 서열 번호: 61로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 모이어티를 포함한다. 알라닌 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질을 포함하는 모이어티는 "PA" 또는 "PA 모이어티"로 지칭할 것이다.
따라서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 PA 모이어티를 포함한다.
동등하게 바람직한 실시양태에서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 더욱더 바람직하게는 적어도 90%, 더욱더 바람직하게는 적어도 95%, 더욱더 바람직하게는 적어도 98% 및 가장 바람직하게는 적어도 99%가 알라닌, 세린 및 프롤린으로부터 선택된 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티의 아미노산 잔기의 총수의 적어도 4%, 그러나 40% 미만은 프롤린 잔기이다. 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 그의 전체가 참조로 본원에서 통합된 WO 2008/155134 A1에 기재되어 있다. 더욱더 바람직하게는 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 참조로 본원에서 통합된 WO 2008/155134 A1에 개시된 바와 같은 서열 번호: 2, 서열 번호: 4, 서열 번호: 6, 서열 번호: 8, 서열 번호: 10, 서열 번호: 12, 서열 번호: 14, 서열 번호: 16, 서열 번호: 18, 서열 번호: 20, 서열 번호: 22, 서열 번호: 24, 서열 번호: 26, 서열 번호: 28, 서열 번호: 30, 서열 번호: 32, 서열 번호: 34, 서열 번호: 36, 서열 번호: 40, 서열 번호: 42, 서열 번호: 44, 서열 번호: 46, 서열 번호: 50, 서열 번호: 52, 서열 번호: 54 및 서열 번호: 56으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 모이어티를 포함한다. 알라닌, 세린 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하는 모이어티는 "PAS" 또는 "PAS 모이어티"로 지칭할 것이다.
따라서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 PAS 모이어티를 포함한다.
동등하게 바람직한 실시양태에서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 더욱더 바람직하게는 적어도 90%, 더욱더 바람직하게는 적어도 95%, 더욱더 바람직하게는 적어도 98% 및 가장 바람직하게는 적어도 99%가 알라닌, 글리신 및 프롤린으로부터 선택된 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다. 알라닌, 글리신 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하는 모이어티는 "PAG" 또는 "PAG 모이어티"로 지칭할 것이다.
따라서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 PAG 모이어티를 포함한다.
동등하게 바람직한 실시양태에서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 더욱더 바람직하게는 적어도 90%, 더욱더 바람직하게는 적어도 95%, 더욱더 바람직하게는 적어도 98% 및 가장 바람직하게는 적어도 99%가 프롤린 및 글리신으로부터 선택된 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다. 프롤린 및 글리신을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하는 모이어티는 "PG" 또는 "PG 모이어티"로 지칭할 것이다.
바람직하게는, 이러한 PG 모이어티는 하기 화학식(a-0)의 모이어티를 포함하며
[(Gly)p-Pro-(Gly)q]r(a-0);
여기에서
p는 0, 1, 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택되며;
q는 0, 1, 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택되고;
r은 10 내지 1000을 포함하는 범위의 정수이며;
단 하나 이상의 p 및 q는 적어도 1이다;
바람직하게는, 화학식(a-0)의 p는 1, 2 및 3으로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(a-0)의 q는 0, 1 및 2에서 선택된다.
더욱더 바람직하게는 PG 모이어티는 하기의 서열 번호: 97의 서열을 포함한다:
Figure pct00148
더욱더 바람직하게는, PG 모이어티는 하기 화학식(a-0-a)의 서열을 포함하며
Figure pct00149
여기에서
v는 1 내지 50을 포함하는 범위이다.
화학식(a-0-a)의 서열은 서열 번호: 97의 서열의 v 복제물을 포함하는 것으로 이해된다.
따라서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 PG 모이어티를 포함한다.
동등하게 바람직한 실시양태에서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 더욱더 바람직하게는 적어도 90%, 더욱더 바람직하게는 적어도 95%, 더욱더 바람직하게는 적어도 98% 및 가장 바람직하게는 적어도 99%가 알라닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타메이트 및 프롤린으로부터 선택된 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다. 바람직하게는, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 참조로 본원에서 통합된 WO 2010/091122 A1에서 기재된 것과 같다. 더욱더 바람직하게는 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 참조로 본원에서 통합된 WO2010/091122A1에 개시된 것과 같은 서열 번호: 182, 서열 번호: 183, 서열 번호: 184; 서열 번호: 185, 서열 번호: 186, 서열 번호: 187, 서열 번호: 188, 서열 번호: 189, 서열 번호: 190, 서열 번호: 191, 서열 번호: 192, 서열 번호: 193, 서열 번호: 194, 서열 번호: 195, 서열 번호: 196, 서열 번호: 197, 서열 번호: 198, 서열 번호: 199, 서열 번호: 200, 서열 번호: 201, 서열 번호: 202, 서열 번호: 203, 서열 번호: 204, 서열 번호: 205, 서열 번호: 206, 서열 번호: 207, 서열 번호: 208, 서열 번호: 209, 서열 번호: 210, 서열 번호: 211, 서열 번호: 212, 서열 번호: 213, 서열 번호: 214, 서열 번호: 215, 서열 번호: 216, 서열 번호: 217, 서열 번호: 218, 서열 번호: 219, 서열 번호: 220, 서열 번호: 221, 서열 번호: 759, 서열 번호: 760, 서열 번호: 761, 서열 번호: 762, 서열 번호: 763, 서열 번호: 764, 서열 번호: 765, 서열 번호: 766, 서열 번호: 767, 서열 번호: 768, 서열 번호: 769, 서열 번호: 770, 서열 번호: 771, 서열 번호: 772, 서열 번호: 773, 서열 번호: 774, 서열 번호: 775, 서열 번호: 776, 서열 번호: 777, 서열 번호: 778, 서열 번호: 779, 서열 번호: 1715, 서열 번호: 1716, 서열 번호: 1718, 서열 번호: 1719, 서열 번호: 1720, 서열 번호: 1721 및 서열 번호: 1722로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 모이어티를 포함한다. 알라닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타메이트 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하는 모이어티는 WO 2010/091122 A1에서의 그의 명칭에 따라 "XTEN" 또는 "XTEN 모이어티"로 언급될 것이다.
따라서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 XTEN 모이어티를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 히알루론산-기반 중합체이다.
한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 참조로 본원에서 통합된 WO 2013/024047 A1에 개시된 바와 같은 캐리어이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 참조로 본원에서 통합된 WO 2013/024048 A1에 개시된 바와 같은 캐리어이다.
또 다른 바람직한 구현예에서, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 PEG 기반 중합체이다. 더욱더 바람직하게는 -Z은 분지형 또는 다중 아암(multi-arm) PEG 기반 중합체이다.
바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 분지형 중합체이다. 한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 분지점을 갖는 분지형 중합체이다. 바람직하게는, 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 1, 2 또는 3개의 분지점을 갖는 분지형 중합체이다. 한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 1개의 분지점을 갖는 분지형 중합체이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 2개의 분지점을 갖는 분지형 중합체이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 3개의 분지점을 갖는 분지형 중합체이다.
분지점은 바람직하게는 -N<, -CH< 및 >C<로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 이러한 분지된 모이어티 -Z은 PEG 기재이다.
한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 이러한 분지된 모이어티 -Z은 5 kDa 내지 500 kDa를 포함하는 범위, 더 바람직하게는 10 kDa 내지 250 Da를 포함하는 범위, 더욱더 바람직하게는 10 kDa 내지 150 kDa를 포함하는 범위, 더욱더 바람직하게는 12 kDa 내지 100 kDa를 포함하는 범위 및 가장 바람직하게는 15 kDa 내지 80 kDa를 포함하는 범위의 분자량을 갖는다.
바람직하게는, 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z은 10 kDa 내지 80 kDa를 포함하는 범위의 분자량을 갖는다. 한 실시양태에서 분자량은 약 10 kDa이다. 또 다른 실시양태에서 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z의 분자량은 약 20 kDa이다. 또 다른 실시양태에서 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z의 분자량은 약 30 kDa이다. 또 다른 실시양태에서 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z의 분자량은 약 40 kDa이다. 또 다른 실시양태에서 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z의 분자량은 약 50 kDa이다. 또 다른 실시양태에서 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z의 분자량은 약 60 kDa이다. 또 다른 실시양태에서 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z의 분자량은 약 70 kDa이다. 또 다른 실시양태에서 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z의 분자량은 약 80 kDa이다. 가장 바람직하게는, 이러한 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 분지형 모이어티 -Z은 약 40 kDa의 분자량을 갖는다.
출원인은 모이어티 -L1-L2-Z의 N-말단 부착이 내부 부위에서의 부착보다 NEP 안정성과 관련하여 유의하게 더 효율적이라는 것과 NEP 안정성과 관련하여 가장 효율이 낮은 부착 부위가 CNP 모이어티의 고리 부분이라는 것을 발견하였다. 그러나 출원인은 놀랍게도 NEP 안정성과 관련하여 고리에의 부착의 이러한 단점이 적어도 10 kDa, 예컨대 적어도 12 kDa, 예컨대 적어도 15 kDa, 예컨대 적어도 18 kDa, 예컨대 적어도 20 kDa, 예컨대 적어도 24 kDa, 예컨대 적어도 25 kDa, 예컨대 적어도 27kDa, 예컨대 적어도 30 kDa의 분자량을 갖는 분지형 모이어티 -Z를 사용하여 보상될 수 있다는 것을 발견하였다. 바람직하게는, 이러한 분지형 모이어티 -Z은 500 kDa 이하, 바람직하게는 250 kDa 이하, 바람직하게는 200 kDa 이하, 바람직하게는 150 kDa 이하 및 가장 바람직하게는 100 kDa 이하의 분자량을 갖는다. 가장 바람직하게는 이러한 분지형 모이어티 -Z은 약 40 kDa의 분자량을 갖는다. 결과적으로, CNP 모이어티의 고리 부분에서 이러한 분지형 모이어티 -Z을 사용하는 것은 증가된 NEP-안정성을 유도할 뿐만 아니라, 고리에의 부착과 관련된 감소된 NPR-B 결합과 증가된 NEP-안정성을 조합한다.
놀랍게도, 고리 모이어티가 NPR-C 결합에 관여한다고 할지라도, 5 kDa 캐리어의 고리 모이어티에의 부착은 NPR-C 친화도에 유의한 효과를 갖지 않았다는 것이 발견되었다. 더욱이 놀랍게도 고리 모이어티에 부착된 4 x 10 kDa 캐리어, 즉 4개의 10 kDa 아암을 갖는 분지형 캐리어는 심지어 총 분자량이 동일할지라도 2 x 20 kDa 캐리어, 즉 2개의 20 kDa 아암을 갖는 분지형 캐리어보다 NPR-C 친화도를 감소시키는 데 더 효율적이라는 것을 발견하였다. 따라서 이는 고리 모이어티에 부착된 캐리어의 총 분자량뿐만 아니라 NPR-C 결합 친화도에 영향을 미치는 캐리어의 특정 분지 패턴이다.
이 발견은 또한 여전히 높은 NPR-C 친화도를 나타내는 상이한 분지 패턴을 갖는 4-아암 40 kDa 캐리어로 측정된 NPR-C 친화도에 의해 지지된다.
요약하면, CNP 모이어티에 근접한 제1 분지점을 갖는 고리 모이어티에 부착된 다중 분지형 캐리어, 예컨대 CNP 모이어티로부터 300개 미만의 원자, 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 200개의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 100개의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 50개 미만의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 25개 미만의 원자 및 가장 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 10개 미만의 원자로 NPR-C 친화도를 효율적으로 감소시킬 수 있다는 것이 놀랍게도 발견되었다.
더욱더 바람직하게는, 하나 이상의 추가의 분지점(들)은 CNP 모이어티로부터 500개 미만의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 300개의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 200개 미만의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 100개 미만의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 75개 미만의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 50개 미만의 원자, 더욱더 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 40개 미만의 원자 및 가장 바람직하게는 CNP 모이어티로부터 35개 미만의 원자 내에 위치한다.
또한, 이러한 분지 패턴은 CNP 모이어티의 생체 내 안정성, 즉 단백질 분해에 대한 보호에 유익하다는 것을 발견하였다. 놀랍게도, N-말단 분해는 4x10 kDa 캐리어와 비교하여 2x20 kDa 캐리어를 사용할 때 더 강하다는 것이 발견되었다. 마찬가지로, 상이한 분지 패턴을 갖는 4-아암 40 kDa 캐리어를 사용하는 것은 훨씬 강한 N-말단 분해를 나타냈다.
바람직하게는, -Z 또는 -Z'는 하기 모이어티를 포함한다:
Figure pct00150
동등하게 바람직한 실시양태에서 -Z 또는 -Z'는 아미드 결합을 포함한다.
한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 화학식(a)의 모이어티를 포함하고
Figure pct00151
여기에서
점선은 -L2-로의 부착 또는 -Z의 나머지 부분으로의 부착을 나타내며;
BPa는 -N<, -CR< 및 >C<로 구성된 군으로부터 선택된 분지점이고;
-R은 -H 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며;
BPa가 -N< 또는 -CR<이라면 a는 0이고 BPa가 >C<라면 a는 1이며;
-Sa-, -Sa'-, -Sa''- 및 -Sa'''-는 서로 독립적으로 화학 결합이거나 또는 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되며 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R2)-, -S(O)2N(R2)-, -S(O)N(R2)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R2)S(O)2N(R2a)-, -S-, -N(R2)-, -OC(OR2)(R2a)-, -N(R2)C(O)N(R2a)-, 및 -OC(O)N(R2)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 -T-는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 각각의 -T-는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고;
각각의 -R1은 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR3, -OR3, -C(O)R3, -C(O)N(R3R3a), -S(O)2N(R3R3a), -S(O)N(R3R3a), -S(O)2R3, -S(O)R3, -N(R3)S(O)2N(R3aR3b), -SR3, -N(R3R3a), -NO2, -OC(O)R3, -N(R3)C(O)R3a, -N(R3)S(O)2R3a, -N(R3)S(O)R3a, -N(R3)C(O)OR3a, -N(R3)C(O)N(R3aR3b), -OC(O)N(R3R3a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -R2, -R2a, -R3, -R3a 및 -R3b는 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
-Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 독립적으로 중합체성 모이어티이다.
임의로, 화학식(a)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
한 실시양태에서 화학식(a)의 BPa는 -N<이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 BPa는 -CR<이다. 바람직하게는, -R은 -H이다. 따라서, 화학식(a)의 a는 바람직하게는 0이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 BPa는 >C<이다.
한 실시양태에서 화학식(a)의 -Sa-는 화학 결합이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Sa-는 C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R4)-, -S(O)2N(R4)-, -S(O)N(R4)-, -S(O)2-, -S(O)-,
-N(R4)S(O)2N(R4a)-, -S-, -N(R4)-, -OC(OR4)(R4a)-, -N(R4)C(O)N(R4a)-, 및 -OC(O)N(R4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 화학기로 임의로 개재되고; 여기에서 -R4 및 -R4a는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는 화학식(a)의 -Sa-는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸로 구성된 군으로부터 선택되며, 이것은 -O-, -C(O)- 및 -C(O)N(R4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 화학기에 의해 임의로 개재된다.
한 실시양태에서 화학식(a)의 -Sa'-는 화학 결합이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Sa'-는 C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R4)-, -S(O)2N(R4)-, -S(O)N(R4)-, -S(O)2-, -S(O)-,
-N(R4)S(O)2N(R4a)-, -S-, -N(R4)-, -OC(OR4)(R4a)-, -N(R4)C(O)N(R4a)-, 및 -OC(O)N(R4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 화학기에 의해 임의로 개재되고; 여기에서 -R4 및 -R4a는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는 화학식(a)의 -Sa'-는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸로 구성된 군으로부터 선택되며, 이것은 -O-, -C(O)- 및 -C(O)N(R4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 화학기에 의해 임의로 개재된다.
한 실시양태에서 화학식(a)의 -Sa''-는 화학 결합이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Sa''-는 C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서 C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R4)-, -S(O)2N(R4)-, -S(O)N(R4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R4)S(O)2N(R4a)-, -S-, -N(R4)-, -OC(OR4)(R4a)-, -N(R4)C(O)N(R4a)-, 및 -OC(O)N(R4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 화학기에 의해 임의로 개재되며; 여기에서 -R4 및 -R4a는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는 화학식(a)의 -Sa''-는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸로 구성된 군으로부터 선택되며, 이것은 -O-, -C(O)- 및 -C(O)N(R4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 화학기에 의해 임의로 개재된다.
한 실시양태에서 화학식(a)의 -Sa'''-는 화학 결합이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Sa'''-는 C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서 C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R4)-, -S(O)2N(R4)-, -S(O)N(R4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R4)S(O)2N(R4a)-, -S-, -N(R4)-, -OC(OR4)(R4a)-, -N(R4)C(O)N(R4a)-, 및 -OC(O)N(R4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 화학기에 의해 임의로 개재되며; 여기에서 -R4 및 -R4a는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는 화학식(a)의 -Sa'''-는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸로 구성된 군으로부터 선택되며, 이것은 -O-, -C(O)- 및 -C(O)N(R4)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 화학기에 의해 임의로 개재된다.
바람직하게는, 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 독립적으로 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
바람직하게는, 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 독립적으로 5 kDa 내지 50 kDa를 포함하는 범위의 분자량, 더 바람직하게는 5 kDa 내지 40 kDa를 포함하는 범위의 분자량, 더욱더 바람직하게는 7.5 kDa 내지 35 kDa를 포함하는 범위, 더욱더 바람직하게는 7.5 kDa 내지 30 kDa 범위, 더욱더 바람직하게는 10 kDa 내지 30 kDa를 포함하는 범위를 갖는다.
한 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 약 5 kDa의 분자량을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 약 7.5kDa의 분자량을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 약 10 kDa의 분자량을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 약 12.5kDa의 분자량을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 약 15kDa의 분자량을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 약 20kDa의 분자량을 갖는다.
더 바람직하게는, 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 독립적으로 PEG 기반 모이어티를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 독립적으로 적어도 20% PEG, 더욱더 바람직하게는 적어도 30%, 더욱더 바람직하게는 적어도 40% PEG, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% PEG, 더욱더 바람직하게는 적어도 60% PEG, 더욱더 바람직하게는 적어도 70% PEG, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% PEG 및 가장 바람직하게는 적어도 90% PEG를 포함하는 PEG 기반 모이어티를 포함한다.
동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 독립적으로 단백질 모이어티, 더 바람직하게는 랜덤 코일 단백질 모이어티 및 가장 바람직하게는 PA, PAS, PAG, PG 및 XTEN 모이어티로 구성된 군으로부터 선택된 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함한다.
한 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 PA 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 PAS 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 PAG 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 PG 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(a)의 -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''는 XTEN 모이어티이다.
한 실시양태에서 -Z은 화학식(a)의 하나의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(a)의 2개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(a)의 3개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(a)의 4개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(a)의 5개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(a)의 6개의 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서 -Z은 화학식(a)의 2개의 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서 -Z은 하기 화학식(b)의 모이어티를 포함하며
Figure pct00152
여기에서
점선은 -L2-로의 부착 또는 -Z의 나머지 부분으로의 부착을 나타내며;
b1은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 구성된 군으로부터 선택되고;
b2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 구성된 군으로부터 선택되며;
b3은 150 내지 1000을 포함하는 범위; 바람직하게는 150 내지 500을 포함하는 범위; 및 가장 바람직하게는 200 내지 460을 포함하는 범위의 정수이고;
b4는 150 내지 1000을 포함하는 범위; 바람직하게는 150 내지 500을 포함하는 범위; 및 가장 바람직하게는 200 내지 460을 포함하는 범위의 정수이다.
임의로, 화학식(b)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
바람직하게는, 화학식(b)의 b3 및 b4는 동일한 정수이다.
한 바람직한 실시양태에서 b3 및 b4는 둘 다 200 내지 250 범위의 정수이고 가장 바람직하게는 화학식(b)의 b3 및 b4는 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 b3 및 b4는 둘 다 400 내지 500 범위의 정수이고 가장 바람직하게는 화학식(b)의 b3 및 b4는 약 450이다.
바람직하게는, 화학식(b)의 b1은 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는 화학식(b)의 b1은 1, 2 및 3으로 구성된 군으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는 화학식(b)의 b1은 2이다.
바람직하게는, 화학식(b)의 b2는 1, 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는 화학식(b)의 b2는 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는 화학식(b)의 b2는 3이다.
특히 바람직한 한 실시양태에서 화학식(b)의 b1은 2이고, 화학식(b)의 b2는 3이며, b3 및 b4는 둘 다 약 450이다.
또 다른 특히 바람직한 실시양태에서 화학식(b)의 b1은 2이고, 화학식(b)의 b2는 3이며, b3 및 b4는 둘 다 약 225이다.
한 실시양태에서 -Z은 화학식(b)의 하나의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(b)의 2개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(b)의 3개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(b)의 4개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(b)의 5개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(b)의 6개의 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서 -Z은 화학식(b)의 2개의 모이어티를 포함한다.
더욱더 바람직한 실시양태에서 -Z은 하기 화학식(c)의 모이어티를 포함하고
Figure pct00153
여기에서
점선은 -L2-로의 부착 또는 -Z의 나머지 부분으로의 부착을 나타내며;
c1 및 c2는 독립적으로 150 내지 500을 포함하는 범위; 바람직하게는 200 내지 460을 포함하는 범위의 정수이다.
임의로, 화학식(c)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
바람직하게는 화학식(c)의 c1 및 c2는 둘 다 동일한 정수이다.
한 바람직한 실시양태에서 화학식(c)의 c1 및 c2는 200 내지 250을 포함하는 범위이고 가장 바람직하게는 약 225이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서 화학식(c)의 c1 및 c2는 400 내지 500을 포함하는 범위이고 가장 바람직하게는 약 450이다.
바람직한 실시양태에서 모이어티 -Z은 적어도 10% PEG를 포함하는 분지형 PEG 기반 중합체이고, 하나의 분지점 및 2개의 PEG 기반 중합체 아암을 가지며, 약 40 kDa의 분자량을 갖는다. 따라서, 2개의 PEG 기반 중합체 아암 각각은 약 20 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직하게는 분지점은 -CH<이다.
한 실시양태에서 -Z은 화학식(c)의 하나의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(c)의 2개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(c)의 3개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(c)의 4개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(c)의 5개의 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 -Z은 화학식(c)의 6개의 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서 -Z은 화학식(c)의 2개의 모이어티를 포함한다.
한 바람직한 실시양태에서 모이어티 -Z은 하기 화학식(d)이고
Figure pct00154
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내고;
-Zb-는 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R2)-, -S(O)2N(R2)-, -S(O)N(R2)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R2)S(O)2N(R2a)-, -S-, -N(R2)-, -OC(OR2)(R2a)-, -N(R2)C(O)N(R2a)-, 및 -OC(O)N(R2)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 -T-는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 각각의 -T-는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고;
각각의 -R1은 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR3, -OR3, -C(O)R3, -C(O)N(R3R3a), -S(O)2N(R3R3a), -S(O)N(R3R3a), -S(O)2R3, -S(O)R3, -N(R3)S(O)2N(R3aR3b), -SR3, -N(R3R3a), -NO2, -OC(O)R3, -N(R3)C(O)R3a, -N(R3)S(O)2R3a, -N(R3)S(O)R3a, -N(R3)C(O)OR3a, -N(R3)C(O)N(R3aR3b), -OC(O)N(R3R3a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -R2, -R2a, -R3, -R3a 및 -R3b는 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
-Za는 하기이며
Figure pct00155
여기에서
BPa, -Sa-, -Sa'-, -Sa''-, -Sa'''-, -Pa ', -Pa '', -Pa ''' 및 a는 화학식(a)에서 정의된 바와 같이 사용된다.
임의로, 화학식(d)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
화학식(d)의 BPa, -Sa-, -Sa'-, -Sa''-, -Sa'''-, -Pa ', -Pa '', -Pa '''의 바람직한 실시양태는 화학식(a)에 대하여 상기 정의된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식(d)의 -Za는 화학식(b)이다. b1, b2, b3 및 b4의 바람직한 실시양태는 화학식(b)에 대하여 기재된 바와 같다.
더욱더 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 모이어티 -Z은 하기 화학식(e)이고
Figure pct00156
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내고;
e는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 및 15로 구성된 군으로부터 선택되며;
-Za는 하기이고
Figure pct00157
여기에서
b1, b2, b3 및 b4는 화학식(b)에 대하여 정의된 바와 같이 사용된다.
임의로, 화학식(e)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
화학식(e)의 b1, b2, b3 및 b4에 대한 바람직한 실시양태는 화학식(b)에 대하여 상기 정의된 바와 같다.
한 실시양태에서 화학식(e)의 e는 1이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 2이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 3이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 4이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 5이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 6이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 7이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 8이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 9이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 10이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 11이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 12이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 13이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 14이다. 또 다른 실시양태에서 화학식(e)의 e는 15이다.
바람직하게는 화학식(e)의 e는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 및 9로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는, 화학식(e)의 e는 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는 화학식(e)의 e는 5이다.
바람직하게는 화학식(e)의 e는 5이고, 화학식(e)의 b1은 2이며, 화학식(e)의 b2는 3이고 화학식(e)의 b3 및 b4는 둘 다 약 450이다.
동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 모이어티 -Z은 하기 화학식(e-i) 또는 (e-i')이며:
Figure pct00158
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내며,
e는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 및 15로 구성된 군으로부터 선택되고;
-Za는 하기이며
Figure pct00159
여기에서
b1, b2, b3 및 b4는 화학식(b)에 대하여 정의된 바와 같이 사용된다.
화학식(e-i) 및 (e-i')의 b1, b2, b3 및 b4에 대한 바람직한 실시양태는 상기에서 화학식(b)에 대하여 정의된 바와 같다.
화학식(e-i) 및 (e-i')의 e에 대한 바람직한 실시양태는 화학식(e)에 대하여 기재된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식(e-i) 및 (e-i')의 b1은 2이고, 화학식(e-i) 및 (e-i')의 b2는 3이며 화학식(e-i) 및 (e-i')의 b3 및 b4는 둘 다 약 450이다.
바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 및 (Ib)의 -Z은 화학식(e-i)이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 모이어티 -Z은 적어도 10% PEG를 포함하는 분지형 PEG 기반 중합체이고, 3개의 분지점 및 4개의 PEG 기반 중합체 아암을 가지며, 약 40 kDa의 분자량을 갖는다. 따라서, 4개의 PEG 기반 중합체 아암 각각은 약 10 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직하게는 3개의 분지점 각각은 -CH<이다.
바람직한 실시양태에서 모이어티 -Z은 하기 화학식(f)이며
Figure pct00160
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내며;
BPf는 -N<, -CR< 및 >C<로 구성된 군으로부터 선택된 분지점이고;
-R은 -H 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며;
f는 BPf 가 -N< 또는 -CR< 이라면 0이고 f는 BPf가 >C<라면 1이며;
-Sf-, -Sf '-, -Sf ''- 및 -Sf '''-는 독립적으로 화학 결합이거나 또는 독립적으로 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R2)-, -S(O)2N(R2)-, -S(O)N(R2)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R2)S(O)2N(R2a)-, -S-, -N(R2)-, -OC(OR2)(R2a)-, -N(R2)C(O)N(R2a)-, 및 -OC(O)N(R2)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 -T-는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 각각의 -T-는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되며;
각각의 R1은 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR3, -OR3, -C(O)R3, -C(O)N(R3R3a), -S(O)2N(R3R3a), -S(O)N(R3R3a), -S(O)2R3, -S(O)R3, -N(R3)S(O)2N(R3aR3b), -SR3, -N(R3R3a), -NO2, -OC(O)R3, -N(R3)C(O)R3a, -N(R3)S(O)2R3a, -N(R3)S(O)R3a, -N(R3)C(O)OR3a, -N(R3)C(O)N(R3aR3b), -OC(O)N(R3R3a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되며;
각각의 -R2, -R2a, -R3, -R3a 및 -R3b는 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되며;
-Za ', -Za '' 및 -Za '''는 독립적으로 하기이고
Figure pct00161
여기에서
BPa, -Sa-, -Sa'-, -Sa''-, -Sa'''-, -Pa ', -Pa '', -Pa ''' 및 a는 화학식(a)에 대하여 정의된 바와 같이 사용된다.
임의로, 화학식(f)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
화학식(f)의 BPa, -Sa-, -Sa'-, -Sa''-, -Sa'''-, -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''의 바람직한 실시양태는 화학식(a)에 대하여 상기에서 정의된 바와 같다.
바람직하게는 화학식(f)의 BPf는 -CR<이고 r은 0이다. 바람직하게는 -R은 -H이다.
바람직하게는 화학식(f)의 -Sf-는 화학 결합이다.
바람직하게는, 화학식(f)의 -Za ', -Za '' 및 -Za '''는 동일한 구조를 갖는다. 바람직하게는, 화학식(f)의 -Za', -Za'' 및 -Za'''는 화학식(b)이다.
b1, b2, b3 및 b4의 바람직한 실시양태는 화학식(b)에 대하여 기재된 바와 같다.
바람직하게는 화학식(f)의 -Sf-는 화학 결합이고, 화학식(f)의 BPa는 -R이 -H인 -CR<이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(f)의 -Sf-는 화학 결합이고, 화학식(f)의 BPa는 -R이 -H인 -CR<이며 화학식(f)의 -Za', -Za'' 및 -Za'''는 화학식(b)이다.
더욱더 바람직하게는 -Z은 하기 화학식(g)이고
Figure pct00162
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내며;
-Sg-, -Sg '- 및 -Sg ''-는 독립적으로 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R2)-, -S(O)2N(R2)-, -S(O)N(R2)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R2)S(O)2N(R2a)-, -S-, -N(R2)-, -OC(OR2)(R2a)-, -N(R2)C(O)N(R2a)-, 및 -OC(O)N(R2)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 -T-는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 각각의 -T-는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고;
각각의 R1은 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR3, -OR3, -C(O)R3, -C(O)N(R3R3a), -S(O)2N(R3R3a), -S(O)N(R3R3a), -S(O)2R3, -S(O)R3, -N(R3)S(O)2N(R3aR3b), -SR3, -N(R3R3a), -NO2, -OC(O)R3, -N(R3)C(O)R3a, -N(R3)S(O)2R3a, -N(R3)S(O)R3a, -N(R3)C(O)OR3a, -N(R3)C(O)N(R3aR3b), -OC(O)N(R3R3a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -R2, -R2a, -R3, -R3a 및 -R3b는 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
-Za 및 -Za '는 독립적으로 하기이며
Figure pct00163
여기에서
BPa, -Sa-, -Sa'-, -Sa''-, -Sa'''-, -Pa ', -Pa '', -Pa ''' 및 a는 화학식(a)에 대하여 정의된 바와 같이 사용된다.
임의로, 화학식(g)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
화학식(g)의 BPa, -Sa-, -Sa'-, -Sa''-, -Sa'''-, -Pa ', -Pa '' 및 -Pa ''의 바람직한 실시양태는 화학식(a)에 대하여 상기에서 정의된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식(g)의 -Sg-는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며, 이는 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고,
여기에서
-R1은 할로겐, 옥소(=O), -COOR3, -OR3, -C(O)R3, -C(O)N(R3R3a), -S(O)2N(R3R3a), -S(O)N(R3R3a), -S(O)2R3, -S(O)R3, -N(R3)S(O)2N(R3aR3b), -SR3, -N(R3R3a), -NO2, -OC(O)R3, -N(R3)C(O)R3a, -N(R3)S(O)2R3a, -N(R3)S(O)R3a, -N(R3)C(O)OR3a, -N(R3)C(O)N(R3aR3b), -OC(O)N(R3R3a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
-R3, -R3a 및 -R3b는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로부터 선택된다.
더욱더 바람직하게는 화학식(g)의 -Sg-는 C1-6 알킬로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(g)의 -Sg '-는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며, 이는 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고,
여기에서
-R1은 할로겐, 옥소(=O), -COOR3, -OR3, -C(O)R3, -C(O)N(R3R3a), -S(O)2N(R3R3a), -S(O)N(R3R3a), -S(O)2R3, -S(O)R3, -N(R3)S(O)2N(R3aR3b), -SR3, -N(R3R3a), -NO2, -OC(O)R3, -N(R3)C(O)R3a, -N(R3)S(O)2R3a, -N(R3)S(O)R3a, -N(R3)C(O)OR3a, -N(R3)C(O)N(R3aR3b), -OC(O)N(R3R3a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
-R3, -R3a 및 -R3b는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로부터 선택된다.
더욱더 바람직하게는 화학식(g)의 -Sg '-는 C1-6 알킬로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(g)의 -Sg ''-는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며, 이는 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고,
여기에서
-R1은 할로겐, 옥소(=O), -COOR3, -OR3, -C(O)R3, -C(O)N(R3R3a), -S(O)2N(R3R3a), -S(O)N(R3R3a), -S(O)2R3, -S(O)R3, -N(R3)S(O)2N(R3aR3b), -SR3, -N(R3R3a), -NO2, -OC(O)R3, -N(R3)C(O)R3a, -N(R3)S(O)2R3a, -N(R3)S(O)R3a, -N(R3)C(O)OR3a, -N(R3)C(O)N(R3aR3b), -OC(O)N(R3R3a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
-R3, -R3a 및 -R3b는 독립적으로 -H, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸로부터 선택된다.
더욱더 바람직하게는 화학식(g)의 -Sg ''-는 C1-6 알킬로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(g)의 -Za 및 -Za '는 동일한 구조를 갖는다. 바람직하게는, 화학식(g)의 -Za 및 -Za '는 화학식(b)이다.
대안적인 더욱더 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 하기 화학식(g-i)이고
Figure pct00164
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내며;
-Sg-, -Sg '- 및 -Sg ''-는 독립적으로 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되며 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐, 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R2)-, -S(O)2N(R2)-, -S(O)N(R2)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R2)S(O)2N(R2a)-, -S-, -N(R2)-, -OC(OR2)(R2a)-, -N(R2)C(O)N(R2a)-, 및 -OC(O)N(R2)-로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 개재되며;
각각의 -T-는 독립적으로 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 시클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로시클릴, 8원 내지 11원 헤테로비시클릴, 8원 내지 30원 카르보폴리시클릴, 및 8원 내지 30원 헤테로폴리시클릴로 구성된 군으로부터 선택되고; 여기에서 각각의 -T-는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R1으로 임의로 치환되고;
각각의 R1은 독립적으로 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR3, -OR3, -C(O)R3, -C(O)N(R3R3a), -S(O)2N(R3R3a), -S(O)N(R3R3a), -S(O)2R3, -S(O)R3, -N(R3)S(O)2N(R3aR3b), -SR3, -N(R3R3a), -NO2, -OC(O)R3, -N(R3)C(O)R3a, -N(R3)S(O)2R3a, -N(R3)S(O)R3a, -N(R3)C(O)OR3a, -N(R3)C(O)N(R3aR3b), -OC(O)N(R3R3a), 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고; 각각의 -R2, -R2a, -R3, -R3a 및 -R3b는 독립적으로 -H, 및 C1-6 알킬로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
-Ya1- 및 -Ya1 '- 는 하기이며
Figure pct00165
-Za 및 -Za '는 독립적으로 하기이고
Figure pct00166
여기에서
BPa, -Sa-, -Sa'-, -Sa''-, -Sa'''-, -Pa ', -Pa '', -Pa ''' 및 a는 화학식(a)에 대하여 정의된 바와 같이 사용된다.
임의로, 화학식(g-i)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
바람직하게는, 화학식(g-i)의 -Ya1- 및 -Ya1 '-는 둘 다
Figure pct00167
이고, 여기에서 별표로 표시된 점선은 각기 -Za 또는 -Za '로의 부착이다.
화학식(g-i)의 BPa, -Sa-, -Sa'-, -Sa''-, -Sa'''-, -Pa ', -Pa '' 및 -Pa '''의 바람직한 실시양태는 화학식(a)에 대하여 상기에서 정의된 바와 같다.
화학식(g-i)의 -Sg-, -Sg '- 및 -Sg ''-의 바람직한 실시양태는 화학식(g)에 대하여 정의된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식(g-i)의 -Za 및 -Za '는 동일한 구조를 갖는다. 바람직하게는, 화학식(g-i)의 -Za 및 -Za '는 화학식(b)이다. b1, b2, b3 및 b4에 대한 바람직한 실시양태는 화학식(b)에 대하여 기재된 바와 같다.
더욱더 바람직하게는 -Z은 하기 화학식(h)이며
Figure pct00168
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내며;
각각의 -Zc는 하기 모이어티이고
Figure pct00169
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 약 200 내지 250 범위의 정수이다.
임의로, 화학식(h)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
바람직하게는 화학식(h)의 c1은 둘다 동일하다.
바람직하게는 화학식(h)의 c1은 둘다 약 225이다.
더욱더 바람직하게는 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 하기 화학식(h-a)이고
Figure pct00170
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내며;
각각의 k는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고;
-Ya1- 및 -Ya1 '-는 하기이며
Figure pct00171
각각의 -Zc는 하기 모이어티이고
Figure pct00172
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 약 200 내지 250 범위의 정수이다.
임의로, 화학식(h-a)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
바람직하게는, 화학식(h-a)의 각각의 k는 독립적으로 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 화학식(h-a)의 k는 둘 다 동일하다.
바람직하게는 화학식(h-a)의 c1은 둘 다 동일하다.
바람직하게는 화학식(h-a)의 c1은 둘 다 약 225이다.
바람직하게는, 화학식(h-a)의 -Ya1- 및 -Ya1 '-는 둘 다
Figure pct00173
이고, 여기에서 별표로 표시된 점선은 -Zc로의 부착이다.
더욱더 바람직한 실시양태에서 모이어티 -Z은 하기 화학식(h-i)이고
Figure pct00174
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내며;
각각의 -Zc는 하기 모이어티이고
Figure pct00175
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
임의로, 화학식(h-i)의 모이어티는 하나 이상의 치환기로 치환된다.
바람직하게는 화학식(h-i)의 c1은 둘 다 동일하다.
바람직하게는 화학식(h-i)의 c1은 둘 다 약 225이다.
대안적인 더욱더 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 모이어티 -Z은 하기 화학식(h-ia)이고
Figure pct00176
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내며;
각각의 k는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고;
-Ya1- 및 -Ya1 '-는 하기이고
Figure pct00177
각각의 -Zc는 하기 모이어티이며
Figure pct00178
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(h-ia)의 각각의 k는 독립적으로 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 화학식(h-ia)의 k는 둘 다 동일하다.
바람직하게는 화학식(h-ia)의 c1은 둘 다 동일하다.
바람직하게는 화학식(h-ia)의 c1은 둘 다 약 225이다.
바람직하게는, 화학식(h-ia)의 -Ya1- 및 -Ya1 '-는 둘 다
Figure pct00179
이고, 여기에서 별표로 표시된 점선은 -Zc로의 부착이다.
동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(Ia) 또는 (Ib)의 -Z은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 모이어티를 포함하며
Figure pct00180
Figure pct00181
Figure pct00182
Figure pct00183
Figure pct00184
Figure pct00185
Figure pct00186
여기에서
점선은 -L2-로의 부착을 나타내고;
s1, s2, s3, s4, s5, s6, s7, s8, s9, s10, s11, s12, s13, s14 및 s15는 서로 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10으로부터 선택되며;
-Xd1, -Xd2, -Xd3 및 -Xd4는 서로 독립적으로 -OH, -SH 및 -NRg1Rg2로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 -OH이며;
-Xe1, -Xe2, -Xe3 및 -Xe4는 서로 독립적으로 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고;
-Rg1 및 -Rg2는 서로 독립적으로 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되며;
-Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9, -Xf10, -Xf11, -Xf12, -Xf13 및 -Xf14는 서로 독립적으로 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 -H이며;
-Yd1-, -Yd2-, -Yd3- 및 -Yd4-는 서로 독립적으로 하기로 구성된 군으로부터 선택되고
Figure pct00187
-Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4는 서로 독립적으로 단백질, 더 바람직하게는 랜덤 코일 단백질 및 가장 바람직하게는 PA, PAS, PAG, PG 및 XTEN으로 구성된 군으로부터 선택된 랜덤 코일 단백질이다.
한 바람직한 실시양태에서, 화학식(j-iv), (j-v) 및 (j-vi)의 -Yd1- 및 -Yd2- 와 화학식(j-vii)의 -Yd1-, -Yd2-, -Yd3- 및 -Yd4-는 하기이다
Figure pct00188
또 다른 바람직한 실시양태에서, 화학식(j-iv), (j-v) 및 (j-vi)의 -Yd1- 및 -Yd2-와 화학식(j-vii)의 -Yd1-, -Yd2-, -Yd3- 및 -Yd4-는 하기이고
Figure pct00189
여기에서 별표로 표시된 점선은 각기 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4 쪽으로 배향되며, 표시가 없는 점선은 -L2- 쪽으로 배향된다.
바람직하게는, 화학식(j-i)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7 및 -Xf8 은 -H이고; 화학식(j-i)의 -Xd1 및 -Xd2 는 -OH이며; 화학식(j-i)의 -Xe1 및 -Xe2는 -H 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되고; 화학식(j-i)의 s1, s2, s3 및 s4는 2, 3, 4, 5 및 6으로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 화학식(j-i)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7 및 -Xf8은 -H이고; 화학식(j-i)의 -Xd1 및 -Xd2 는 -OH이며; 화학식(j-i)의 -Xe1 및 -Xe2는 -H이고; 화학식(j-i)의 s1, s2, s3 및 s4는 4이다.
바람직하게는, 화학식(j-ii)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3 및 -Xf4는 -H이며; 화학식(j-ii)의 -Xd1, -Xd2, -Xd3 및 -Xd2는 -OH이고; 화학식(j-ii)의 -Xe1, -Xe2, -Xe3 및 -Xe4는 -H 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되며; 화학식(j-ii)의 s1, s2, s3, s4 및 s5는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 화학식(j-ii)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3 및 -Xf4는 -H이고; 화학식(j-ii)의 -Xd1, -Xd2, -Xd3 및 -Xd2는 -OH이며; 화학식(j-ii)의 -Xe1, -Xe2, -Xe3 및 -Xe4는 -H이고; 화학식(j-ii)의 s1은 4이며 화학식(j-ii)의 s2, s3, s4 및 s5는 1이다.
바람직하게는, 화학식(j-iii)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9 및 -Xf10은 -H이고; 화학식(j-iii)의 -Xd1, -Xd2, -Xd3 및 -Xd4는 -OH이며; 화학식(j-iii)의 -Xe1, -Xe2, -Xe3 및 -Xe4는 -H 및 메틸로 구성된 군으로부터 선택되며; 화학식(j-iii)의 s1, s2 및 s3은 2, 3, 4, 5 및 6으로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱더 바람직하게는 화학식(j-iii)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9 및 -Xf10은 -H이고; 화학식(j-iii)의 -Xd1, -Xd2, -Xd3 및 -Xd4는 -OH이며; 화학식(j-iii)의 -Xe1, -Xe2, -Xe3 및 -Xe4은 -H이고; 화학식(j-iii)의 s1, s2 및 s3은 4이다.
바람직하게는, 화학식(j-iv)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5 및 -Xf6은 -H이고; 화학식(j-iv)의 s1, s2, s3, s4, s5, s6 및 s7은 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택되며; -Yd1- 및 -Yd2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다
Figure pct00190
더욱더 바람직한 실시양태에서 화학식(j-iv)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5 및 -Xf6은 -H이고; 화학식(j-iv)의 s1은 3이며, 화학식(j-iv)의 s2는 5이고, 화학식(j-iv)의 s3은 2이며, 화학식(j-iv)의 s4는 4이고, 화학식(j-iv)의 s5는 5이며, 화학식(j-iv)의 s6은 2이고 화학식(j-iv)의 s7은 4이며; 화학식(j-iv)의 -Yd1- 및 -Yd2-는 하기식이다
Figure pct00191
동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(j-iv)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5 및 -Xf6은 -H이고; 화학식(j-iv)의 s1은 3이며, 화학식(j-iv)의 s2는 5이고, 화학식(j-iv)의 s3은 2이며, 화학식(j-iv)의 s4는 4이고, 화학식(j-iv)의 s5는 5이며, 화학식(j-iv)의 s6은 2이고 화학식(j-iv)의 s7은 4이며; 화학식(j-iv)의 -Yd1- 및 -Yd2-는 하기이고
Figure pct00192
여기에서 별표로 표시된 점선은 각기 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4 쪽으로 배향되며, 표시가 없는 점선은 -L2- 쪽으로 배향된다.
바람직하게는, 화학식(j-v)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3 및 -Xf4는 -H이고; 화학식(j-v)의 s1, s2, s3, s4 및 s5는 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택되며; 화학식(j-v)의 -Yd1- 및 -Yd2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다
Figure pct00193
더욱더 바람직한 실시양태에서 화학식(j-v)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3 및 -Xf4는 -H이고; 화학식(j-v)의 s1은 3이며, 화학식(j-v)의 s2는 2이고, 화학식(j-v)의 s3은 1이며, 화학식(j-v)의 s4는 2이고, 화학식(j-v)의 s5는 1이며; 화학식(j-v)의 -Yd1- 및 -Yd2-는 하기식이다
Figure pct00194
동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(j-v)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3 및 -Xf4는 -H이고; 화학식(j-v)의 s1은 3이며, 화학식(j-v)의 s2는 2이고, 화학식(j-v)의 s3은 1이며, 화학식(j-v)의 s4는 2이고, 화학식(j-v)의 s5는 1이며; 화학식(j-v)의 -Yd1- 및 -Yd2-는 하기식이고
Figure pct00195
여기에서 별표로 표시된 점선은 각기 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4 쪽으로 배향되며, 표시가 없는 점선은 -L2- 쪽으로 배향된다.
바람직하게는, 화학식(j-vi)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9 및 -Xf10은 -H이고; 화학식(j-vi)의 s1, s2, s3, s4, s5, s6, s7, s8 및 s9는 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택되며; 화학식(j-vi)의 -Yd1- 및 -Yd2-는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다
Figure pct00196
더욱더 바람직한 실시양태에서 화학식(j-vi)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9 및 -Xf10은 -H이고; 화학식(j-vi)의 s1은 4이며, 화학식(j-vi)의 s2는 5이고, 화학식(j-vi)의 s3은 2이며, 화학식(j-vi)의 s4는 4이고, 화학식(j-vi)의 s5는 4이며, 화학식(j-vi)의 s6은 5이고, 화학식(j-vi)의 s7은 2이며, 화학식(j-vi)의 s8은 4이고 화학식(j-vi)의 s9는 4이며; 화학식(j-v)의 -Yd1- 및 -Yd2-는 하기이다
Figure pct00197
동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(j-vi)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9 및 -Xf10은 -H이며; 화학식(j-vi)의 s1은 4이고, 화학식(j-vi)의 s2는 5이며, 화학식(j-vi)의 s3은 2이고, 화학식(j-vi)의 s4는 4이며, 화학식(j-vi)의 s5는 4이고, 화학식(j-vi)의 s6은 5이고, 화학식(j-vi)의 s7은 2이며, 화학식(j-vi)의 s8은 4이고 화학식(j-vi)의 s9는 4이며; 화학식(j-v)의 -Yd1- 및 -Yd2-은 하기이고
Figure pct00198
여기에서 별표로 표시된 점선은 각기 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4 쪽으로 배향되며, 표시가 없는 점선은 -L2- 쪽으로 배향된다.
바람직하게는, 화학식(j-vii)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9, -Xf10, -Xf11, -Xf12, -Xf13 및 -Xf14는 -H이고; 화학식(j-vii)의 s1, s2, s3, s4, s5, s6, s7, s8, s9, s10, s11, s12, s13, s14 및 s15는 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택되며; 화학식(j-vii)의 -Yd1-, -Yd2-, -Yd3- 및 -Yd4-는 하기로구성된 군으로부터 선택된다
Figure pct00199
더욱더 바람직한 실시양태에서 화학식(j-vii)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9, -Xf10, -Xf11, -Xf12, -Xf13 및 -Xf14는 -H이고; -H이며; 화학식(j-vii)의 s1은 4이고, 화학식(j-vii)의 s2는 4이며, 화학식(j-vii)의 s3은 5이고, 화학식(j-vii)의 s4는 2이며, 화학식(j-vii)의 s5는 4이고, 화학식(j-vii)의 s6은 5이며, 화학식(j-vii)의 s7은 2이고, 화학식(j-vii)의 s8은 4이며, 화학식(j-vii)의 s9는 4이고, 화학식(j-vii)의 s10은 5이며, 화학식(j-vii)의 s11은 2이고, 화학식(j-vii)의 s12는 4이며, 화학식(j-vii)의 s13은 5이고, 화학식(j-vii)의 s14는 2이며 화학식(j-vii)의 s15는 4이고; 화학식(j-vii)의 -Yd1-, -Yd2-, -Yd3- 및 -Yd4-는 하기이다
Figure pct00200
동등하게 바람직한 실시양태에서 화학식(j-vii)의 -Xf1, -Xf2, -Xf3, -Xf4, -Xf5, -Xf6, -Xf7, -Xf8, -Xf9, -Xf10, -Xf11, -Xf12, -Xf13 및 -Xf14는 -H이고; -H 이며; 화학식(j-vii)의 s1은 4이고, 화학식(j-vii)의 s2는 4이며, 화학식(j-vii)의 s3은 5이고, 화학식(j-vii)의 s4는 2이며, 화학식(j-vii)의 s5는 4이고, 화학식(j-vii)의 s6은 5이며, 화학식(j-vii)의 s7은 2이고, 화학식(j-vii)의 s8은 4이며, 화학식(j-vii)의 s9는 4이고, 화학식(j-vii)의 s10은 5이며, 화학식(j-vii)의 s11은 2이고, 화학식(j-vii)의 s12는 4이며, 화학식(j-vii)의 s13은 5이고, 화학식(j-vii)의 s14는 2이며 화학식(j-vii)의 s15는 4이고; 화학식(j-vii)의 -Yd1-, -Yd2-, -Yd3- 및 -Yd4-는 하기이고
Figure pct00201
여기에서 별표로 표시된 점선은 각기 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4 쪽으로 배향되며, 표시가 없는 점선은 -L2- 쪽으로 배향된다.
바람직하게는 화학식(j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (j-v), (j-vi) 및 (j-vii)의 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4는 동일한 구조를 갖는다.
한 실시양태에서 화학식(j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (j-v), (j-vi) 및 (j-vii)의 Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4는 PA 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (j-v), (j-vi) 및 (j-vii)의 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4는 PAS 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (j-v), (j-vi) 및 (j-vii)의 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4는 PAG 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (j-v), (j-vi) 및 (j-vii)의 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4는 PG 모이어티이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(j-i), (j-ii), (j-iii), (j-iv), (j-v), (j-vi) 및 (j-vii)의 -Zd1, -Zd2, -Zd3 및 -Zd4는 XTEN 모이어티이다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 작용제 전구약물은 하기 화학식(IIe)이고
Figure pct00202
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00203
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIe)의 c1은 약 450이다.
동등하게 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 CNP 작용제 전구약물은 하기 화학식(IIe-i)이며
Figure pct00204
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00205
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIe-i)의 c1은 약 450이다.
동등하게 바람직한 또 다른 실시양태에서 본 발명의 CNP 작용제 전구약물은 하기 화학식(IIe-ii)이며
Figure pct00206
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00207
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIe-ii)의 c1은 약 450이다.
바람직하게는 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D는 CNP 모이어티이다, 즉 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 전구약물은 CNP 전구약물이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D는 서열 번호: 24, 서열 번호: 25 또는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP 모이어티이다. 가장 바람직하게는 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D는 서열 번호: 24의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP이다. 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D가 서열 번호: 20의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것도 또한 바람직하다. 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D가 서열 번호: 21의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것도 또한 바람직하다. 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D가 서열 번호: 22의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것도 또한 바람직하다. 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D가 서열 번호: 23의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것도 또한 바람직하다. 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D가 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것도 또한 바람직하다.
한 실시양태에서, 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D는 CNP의 N-말단 아민 작용기의 질소를 통해 -L1-에 부착된 CNP 모이어티이다.
바람직한 실시양태에서 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 -D는 CNP 모이어티의 라이신 측쇄의 아민 작용기에 의해 제공된 질소를 통해 -L1-에 부착된 CNP 모이어티이다.
한 실시양태에서 상기 라이신 측쇄는 CNP 모이어티가 서열 번호: 24 라면, 위치 22 및 38의 시스테인 잔기 사이의 이황화 가교에 의해 형성된 고리의 부분이 아니다.
따라서, 한 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 9의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 11의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 15의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 16의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIe), (IIe-i) 및(IIe-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 20의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
바람직한 실시양태에서 상기 라이신 측쇄는 CNP 모이어티가 서열 번호: 24 라면, 위치 22 및 38의 시스테인 잔기 사이에서 이황화 가교에 의해 형성된 고리의 부분이다.
따라서, 한 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIe), (IIe-i) 및 (IIe-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
전술한 시스테인 및 라이신의 위치는 CNP 모이어티의 길이에 따라 변하며 본 기술분야의 숙련자는 CNP 모이어티의 더 긴 또는 더 짧은 형태에서 상응하는 시스테인 및 라이신을 확인하는데 어려움이 없을 것으로 이해되며, 또한 예를 들어 일부 라이신이 더 짧은 CNP 모이어티에 존재하지 않을 수 있음을 이해한다. 또한, 예를 들어 부위 특이적 돌연변이유발(site-directed mutagenesis)의 결과로서 CNP 모이어티의 비-고리 형성부 및/또는 고리 형성부 내에 더 많은 라이신 잔기가 있을 수 있음이 이해된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, -D는 서열 번호: 24의 서열을 갖는 CNP 모이어티이며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 24의 서열을 가지며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 24의 서열을 가지며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 가지며 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 가지며 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 가지며 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 가지며 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 가지며 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 가지며 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 가지며 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 가지며 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 가지며 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIe-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 작용제 전구약물은 하기 화학식(IIf)이며
Figure pct00208
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내며
Figure pct00209
여기에서
각각의 -Za는 하기이고
Figure pct00210
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIf)의 각각의 c1은 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIf-i)이고
Figure pct00211
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내며
Figure pct00212
여기에서
각각의 -Za는 하기이고
Figure pct00213
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIf-i)의 각각의 c1은 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIf-ii)이고
Figure pct00214
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내며
Figure pct00215
여기에서
각각의 -Za는 하기이고
Figure pct00216
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIf-ii)의 각각의 c1은 약 225이다.
바람직하게는 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 -D는 CNP 모이어티이다, 즉 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 전구약물은 CNP 전구약물이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 -D는 서열 번호: 24, 서열 번호: 25 또는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP 모이어티이다. 가장 바람직하게는 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 -D는 서열 번호: 24의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP이다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 갖는다.
한 실시양태에서 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 -D는 CNP의 N-말단 아민 작용기의 질소를 통해 -L1-에 부착된 CNP 모이어티이다.
바람직한 실시양태에서 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 -D는 CNP 모이어티의 라이신 측쇄의 아민 작용기에 의해 제공된 질소를 통해 -L1-에 부착된 CNP 모이어티이다.
한 실시양태에서 상기 라이신 측쇄는 CNP 모이어티가 서열 번호: 24 라면, 위치 22 및 38의 시스테인 잔기 사이의 이황화 가교에 의해 형성된 고리의 부분이 아니다.
따라서, 한 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 9의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 11의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 15의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 16의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 20의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
바람직한 실시양태에서 상기 라이신 측쇄는 CNP 모이어티가 서열 번호: 24 라면, 위치 22 및 38의 시스테인 잔기 사이에서 이황화 가교에 의해 형성된 고리의 부분이다.
따라서, 한 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIf), (IIf-i) 및 (IIf-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
전술한 시스테인 및 라이신의 위치는 CNP 모이어티의 길이에 따라 변하며 본 기술분야의 숙련자는 CNP 모이어티의 더 긴 또는 더 짧은 형태에서 상응하는 시스테인 및 라이신을 확인하는데 어려움이 없을 것으로 이해되며, 또한 예를 들어 일부 라이신이 더 짧은 CNP 모이어티에 존재하지 않을 수 있음을 이해한다. 또한, 예를 들어 부위 특이적 돌연변이유발의 결과로서 CNP 모이어티의 비-고리 형성부 및/또는 고리 형성부 내에 더 많은 라이신 잔기가 있을 수 있음이 이해된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, -D는 서열 번호: 24의 서열을 갖는 CNP 모이어티이며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-i)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 24의 서열을 가지며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-ii)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 24의 서열을 가지며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, -D는 서열 번호: 20의 서열을 갖는 CNP 모이어티이며 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-i)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 가지며 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-ii)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 가지며 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, -D는 서열 번호: 21의 서열을 갖는 CNP 모이어티이며 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-i)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 가지며 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-ii)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 가지며 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, -D는 서열 번호: 22의 서열을 갖는 CNP 모이어티이며 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-i)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 가지며 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-ii)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 가지며 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, -D는 서열 번호: 23의 서열을 갖는 CNP 모이어티이며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-i)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-ii)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, -D는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP 모이어티이며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-i)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIf-ii)이며, 여기에서 c1은 약 225이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIf')이며
Figure pct00217
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내며
Figure pct00218
여기에서
각각의 Za는 하기이고
Figure pct00219
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIf')의 각각의 c1은 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIf-i')이고
Figure pct00220
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내며
Figure pct00221
여기에서
각각의 Za는 하기이며
Figure pct00222
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIf-i')의 각각의 c1은 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIf-ii')이고
Figure pct00223
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의한 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내며
Figure pct00224
여기에서
각각의 Za는 하기이고
Figure pct00225
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIf-ii')의 각각의 c1은 약 225이다.
동등하게 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 작용제 전구약물은 하기 화학식(IIea)이고
Figure pct00226
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내며;
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00227
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIea)의 c1은 약 450이다.
바람직하게는, 화학식(IIea)의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
동등하게 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 작용제 전구약물은 하기 화학식(IIea-i)이고
Figure pct00228
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내며;
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00229
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIea-i)의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(IIea-i)의 c1은 약 450이다.
동등하게 바람직한 또 다른 실시양태에서 본 발명의 CNP 작용제 전구약물은 하기 화학식(IIea-ii)이고
Figure pct00230
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 CNP 작용제 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내며;
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00231
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIea-ii)의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(IIea-ii)의 c1은 약 450이다.
바람직하게는 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 CNP 모이어티이다, 즉 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 전구약물은 CNP 전구약물이다. 더욱더 바람직하게는 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 서열 번호: 24, 서열 번호: 25 또는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP 모이어티이다. 가장 바람직하게는 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 서열 번호: 24의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP이다.
또한 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 서열 번호: 20의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것이 바람직하다.
또한 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 서열 번호: 21의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것이 바람직하다.
또한 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 서열 번호: 22의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것이 바람직하다.
또한 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 서열 번호: 23의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것이 바람직하다.
또한 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP 모이어티 CNP인 것이 바람직하다.
한 실시양태에서 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 CNP의 N-말단 아민 작용기의 질소를 통해 -L1-에 부착된 CNP 모이어티이다.
바람직한 실시양태에서 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 -D는 CNP 모이어티의 라이신 측쇄의 아민 작용기에 의해 제공된 질소를 통해 -L1-에 부착된 CNP 모이어티이다.
한 실시양태에서 상기 라이신 측쇄는 CNP 모이어티가 서열 번호: 24 라면, 위치 22 및 38의 시스테인 잔기 사이의 이황화 가교에 의해 형성된 고리의 부분이 아니다.
따라서, 한 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 9의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 11의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 15의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 16의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
또 다른 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 20의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
바람직한 실시양태에서 상기 라이신 측쇄는, CNP 모이어티가 서열 번호: 24 라면, 위치 22 및 38의 시스테인 잔기 사이의 이황화 가교에 의해 형성된 고리의 부분이다.
따라서, 한 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP가 서열 번호: 24의 서열을 갖는다면, 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 화학식(IIea), (IIea-i) 및 (IIea-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 연결된다.
전술한 시스테인 및 라이신의 위치는 CNP 모이어티의 길이에 따라 변하며 본 기술분야의 숙련자는 CNP 모이어티의 더 긴 또는 더 짧은 형태에서 상응하는 시스테인 및 라이신을 확인하는데 어려움이 없을 것으로 이해되며, 또한 예를 들어 일부 라이신이 더 짧은 CNP 모이어티에 존재하지 않을 수 있음을 이해한다. 또한, 예를 들어 부위 특이적 돌연변이유발의 결과로서 CNP 모이어티의 비-고리 형성부 및/또는 고리 형성부 내에 더 많은 라이신 잔기가 있을 수 있음이 이해된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, -D는 서열 번호: 24의 서열을 갖는 CNP 모이어티이며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 24의 서열을 가지며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 24의 서열을 가지며 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, -D는 서열 번호: 20의 서열을 갖는 CNP 모이어티이고 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 가지며 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 가지며 위치 30의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, -D는 서열 번호: 21의 서열을 갖는 CNP 모이어티이고 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 가지며 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 가지며 위치 29의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, -D는 서열 번호: 22의 서열을 갖는 CNP 모이어티이고 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 가지며 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 가지며 위치 28의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, -D는 서열 번호: 23의 서열을 갖는 CNP 모이어티이고 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, -D는 서열 번호: 30의 서열을 갖는 CNP 모이어티이고 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-i)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 화학식(IIea-ii)이며, 여기에서 c1은 약 450이고, CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 가지며 위치 27의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 아민 작용기를 통해 -L1-에 부착된다.
따라서, 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIea')이고
Figure pct00232
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내며;
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00233
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIea')의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(IIea')의 각각의 c1은 약 450이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIea-i')이고
Figure pct00234
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26에서 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내며;
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00235
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIea-i')의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(IIea-i')의 각각의 c1은 약 450이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIea-ii')이고
Figure pct00236
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내며;
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고;
별표로 표시된 점선은 하기 모이어티로의 부착을 나타내며
Figure pct00237
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 400 내지 500 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIea-ii')의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(IIea-ii')의 각각의 c1은 약 450이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIfa)이고
Figure pct00238
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 CNP 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내며;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내고
Figure pct00239
여기에서
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고
각각의 -Za는 하기이고
Figure pct00240
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIfa)의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(IIfa)의 각각의 c1은 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIfa-i)이고
Figure pct00241
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 CNP 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내며;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내고
Figure pct00242
여기에서
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고
각각의 -Za는 하기이며
Figure pct00243
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIfa-i)의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(IIfa-i)의 각각의 c1은 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIfa-ii)이고
Figure pct00244
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 CNP 모이어티인 -D의 질소로의 부착을 나타내며;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내고
Figure pct00245
여기에서
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고
각각의 -Za는 하기이며
Figure pct00246
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIfa-ii)의 각각의 c1은 약 225이다.
한 실시양태에서 화학식(IIfa), (IIfa-i) 및 (IIfa-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 25의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIfa), (IIfa-i) 및 (IIfa-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 30의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIfa), (IIfa-i) 및 (IIfa-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 20의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIfa), (IIfa-i) 및 (IIfa-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 21의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIfa), (IIfa-i) 및 (IIfa-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 22의 서열을 갖는다.
또 다른 실시양태에서 화학식(IIfa), (IIfa-i) 및 (IIfa-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 23의 서열을 갖는다.
바람직한 실시양태에서 화학식(IIfa), (IIfa-i) 및 (IIfa-ii)의 CNP 전구약물의 CNP 모이어티는 서열 번호: 24의 서열을 갖는다.
한 실시양태에서 CNP 모이어티는 CNP의 N-말단 아민 작용기의 질소를 통해 화학식(IIfa), (IIfa-i) 및 (IIfa-ii)의 CNP 전구약물 내의 -L1-에 부착된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIf a')이고
Figure pct00247
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내며;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내고
Figure pct00248
여기에서
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고
각각의 Za는 하기이며
Figure pct00249
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIfa')의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(IIfa')의 각각의 c1은 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIfa-i')이고
Figure pct00250
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내며;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내고
Figure pct00251
여기에서
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고
각각의 Za는 하기이며
Figure pct00252
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIfa-i')의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 화학식(IIfa-i')의 각각의 cl은 약 225이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서 본 발명의 CNP 전구약물은 하기 화학식(IIfa-ii')이고
Figure pct00253
여기에서
표시가 없는 점선은 아미드 결합 형성에 의해 서열 번호: 24의 CNP 모이어티의 위치 26의 라이신의 측쇄에 의해 제공된 질소로의 부착을 나타내며;
별표로 표시된 점선은 하기 구조를 갖는 -Z으로의 부착을 나타내고
Figure pct00254
여기에서
k는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 구성된 군으로부터 선택되고
각각의 Za는 하기이며
Figure pct00255
여기에서
각각의 c1은 독립적으로 200 내지 250 범위의 정수이다.
바람직하게는, 화학식(IIfa-ii')의 k는 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 화학식(IIfa-ii')의 각각의 cl은 약 225이다.
본 발명의 또 다른 양상은 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이다.
한 실시양태에서 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 약제학적 조성물은 액체 또는 현탁액 제형이다. 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제가 수불용성이라면 약제학적 조성물은 현탁액 제형인 것으로 이해된다.
또 다른 실시양태에서 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 약제학적 조성물은 건조 제형이다.
이러한 액체, 현탁액 또는 건조 약제학적 조성물은 하나 이상의 부형제를 포함한다. 비경구 제형에 사용되는 부형제는, 예를 들어, 완충제, 등장성 개질제(isotonicity modifier), 보존제, 안정화제, 흡착방지제, 산화방지제, 점도 증가제(viscosifier)/점도 향상제, 또는 다른 보조제로서 분류될 수 있다. 그러나, 일부 경우, 하나의 부형제는 이중 또는 삼중 기능을 가질 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 하나 이상의 부형제는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다.
(i) 완충액: pH를 원하는 범위로 유지하는 생리학적으로 허용되는 완충액, 예컨대 소듐 포스페이트, 비카르보네이트, 숙시네이트, 히스티딘, 시트레이트 및 아세테이트, 술페이트, 니트레이트, 클로라이드, 피루베이트; 제산제, 예컨대 Mg(OH)2 또는 ZnCO3가 또한 사용될 수 있다;
(ii) 등장성 개질제: 주사 데포(depot)에서의 삼투압 차이로 인한 세포 손상으로부터 비롯될 수 있는 통증을 최소화함; 글리세린 및 염화나트륨이 예이다; 유효 농도는 혈청에 대한 285-315 mOsmol/kg의 추정된 삼투압을 사용하여 삼투압 측정법에 의해 결정될 수 있다;
(iii) 보존제 및/또는 항균제: 다중용량 비경구 제형은 주사시 감염되는 환자의 위험을 최소화하는데 충분한 농도의 보존제의 첨가를 필요로 하며, 상응하는 규제 요건이 확립되었다; 전형적인 보존제는 m-크레졸, 페놀, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤, 클로로부탄올, 벤질 알콜, 페닐질산수은, 티메로솔, 소르브산, 칼륨 소르베이트, 벤조산, 클로로크레졸, 및 염화벤잘코늄을 포함한다;
(iv) 안정화제: 안정화는 단백질-안정화력의 강화, 변성 상태의 불안정화, 또는 단백질에 대한 부형제의 직접 결합에 의해 달성됨; 안정화제는 아미노산, 예컨대 알라닌, 아르기닌, 아스파트산, 글리신, 히스티딘, 라이신, 프롤린, 당류, 예컨대 글루코오스, 수크로오스, 트레할로오스, 폴리올, 예컨대 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, 염, 예컨대 인산칼륨, 황산나트륨, 킬레이트제, 예컨대 EDTA, 헥사포스페이트, 리간드, 예컨대 2가 금속 이온(아연, 칼슘 등), 다른 염 또는 유기 분자, 예컨대 페놀 유도체일 수 있다; 또한, 올리고머 또는 중합체, 예컨대 시클로덱스트린, 덱스트란, 덴드리머, PEG 또는 PVP 또는 프로타민 또는 HAS가 사용될 수 있다;
(v) 흡착방지제: 주로 이온성 또는 비이온 계면활성제 또는 다른 단백질 또는 가용성 중합체가 제형의 용기의 내부 표면을 코팅하거나 내부 표면에 경쟁적으로 흡착하는데 사용된다; 예컨대, 폴록사머(플루로닉 F-68), PEG 도데실 에테르(Brij 35), 폴리소르베이트 20 및 80, 덱스트란, 폴리에틸렌 글리콜, PEG-폴리히스티딘, BSA 및 HSA 및 젤라틴; 부형제의 선택된 농도 및 유형은 회피될 효과에 좌우되나 전형적으로 계면활성제의 단일층이 CMC 값 바로위의 계면에서 형성된다;
(vi) 산화방지제: 항산화제, 예컨대 아스코브산, 엑토인(ectoine), 메티오닌, 글루타티온, 모노티오글리세롤, 모린(morin), 폴리에틸렌이민(PEI), 프로필 갈레이트, 및 비타민 E; 킬레이트제, 예컨대 시트르산, EDTA, 헥사포스페이트, 및 티오글리콜산이 또한 사용될 수 있다;
(vii) 점도 증가제 또는 점도 향상제: 바이알 및 주사기에서 입자의 침강을 지연시키며, 입자의 혼합 및 재현탁을 용이하게 하고 현탁액을 주사하기 더 쉽게 만들기 위해(즉, 주사기 플런저 상에서의 적은 힘) 사용됨; 적합한 점도 증가제 또는 점도 향상제는, 예를 들어, 카르보머(carbomer) 점도 증가제, 예컨대 카르보폴(Carbopol) 940, 카르보폴 울트레즈(Carbopol Ultrez) 10, 셀룰로오스 유도체, 예컨대, 히드록시프로필메틸셀룰로오스(히프로멜로스, HPMC) 또는 디에틸아미노에틸 셀룰로오스(DEAE 또는 DEAE-C), 콜로이드성 규산마그네슘(비검(Veegum)) 또는 규산나트륨, 히드록시아파타이트 겔, 트리칼슘 포스페이트 겔, 크산탄, 카라기난, 예컨대 사티아 검(Satia gum) UTC 30, 지방족 폴리(히드록시산), 예컨대 폴리(D,L- 또는 L-락트산)(PLA) 및 폴리(글리콜산)(PGA) 및 이들의 공중합체(PLGA), D,L-락티드, 글리콜리드 및 카프로락톤의 삼원중합체(terpolymer), 폴록사머, 폴리(옥시에틸렌)-폴리(옥시프로필렌)-폴리(옥시에틸렌)의 삼블록(triblock)(예컨대, 플루로닉®)을 구성하기 위한 친수성 폴리(옥시에틸렌) 블록 및 소수성 폴리(옥시프로필렌) 블록, 폴리에테르에스테르 공중합체, 예컨대 폴리에틸렌글리콜 테레프탈레이트/폴리부틸렌 테레프탈레이트 공중합체, 수크로스 아세테이트 이소부티레이트(SAIB), 덱스트란 또는 이의 유도체, 덱스트란 및 PEG의 조합, 폴리디메틸실록산, 콜라겐, 키토산, 폴리비닐 알콜(PVA) 및 유도체, 폴리알킬이미드, 폴리(아크릴아미드-코-디알릴디메틸 암모늄(DADMA)), 폴리비닐피롤리돈(PVP), 글리코사미노글리칸(GAG), 예컨대 더마탄 술페이트, 콘드로이틴 술페이트, 케라탄 술페이트, 헤파린, 헤파란 술페이트, 히알루로난, 소수성 A-블록, 예컨대 폴리락티드(PLA) 또는 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLGA), 및 친수성 B-블록, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리비닐 피롤리돈으로 구성된 ABA 삼블록 또는 AB 블록 공중합체이다; 이러한 블록 공중합체뿐만 아니라 상술한 폴록사머는 가역적 열 겔화거동(투여를 용이하게 하기 위해 실온에서 유체 상태 및 주사 후 체온에서 졸-겔 전이 온도 초과에서의 겔상태)을 나타낼 수 있다;
(viii) 전착(spreading) 또는 확산제(diffusing agent): 간극공간에서 세포외 기질의 성분, 예컨대 이것으로 제한되는 것은 아니지만 결합 조직의 세포사이 공간에서 발견되는 다당류인 히알루론산의 가수 분해를 통해 결합 조직의 투과성을 변형한다; 전착제, 예컨대 이것으로 제한되는 것은 아니지만 히알루로니다아제는 세포외 기질의 점도를 일시적으로 감소시키고 주사된 약물의 확산을 촉진한다; 및
(ix) 다른 보조제: 예컨대 습윤제, 점도 개질제, 항생제, 히알루로니다아제; 산 및 염기, 예컨대 염산 및 수산화나트륨은 제조 동안 pH 조절에 필요한 보조제이다.
본 발명의 또 다른 양상은 제어 방출성 CNP 작용제 또는 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물의 의약으로서의 용도이다.
바람직하게는, 상기 의약은 연골무형성증, 연골형성저하증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 불완전 골형성증, 연골무발생증, 점상연골형성부전증, 동형접합 연골무형성증, 굴지 형성이상, 선천 치사성 저인산증, 주산기 치사형의 불완전 골형성증, 짧은 늑골 다지증 증후군, 지근 유형의 점상연골형성부전증, 얀센형 골간단 이형성증(Jansen-type metaphyseal dysplasia), 선천 척추골단 이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia congenita), 골형성발육부전(atelosteogenesis), 이영양성 형성이상, 선천성 짧은 대퇴골, 랑거형 전완부 이형성증(Langer-type mesomelic dysplasia), 니에버겔트형(Nievergelt-type) 전완부 이형성증, 로비노(Robinow) 증후군, 라인하르트(Reinhardt) 증후군, 선단이골증, 말초 이골증, 니스트(Kniest) 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 형성이상(acromesomelic dysplasia), 소지증, 모르키오(Morquio) 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증(metatrophic dysplasia), 척추골단골간단 이형성증, 신경섬유종증, 레지우스(Legius) 증후군, 레오파드(LEOPARD) 증후군, 누난(Noonan) 증후군, 유전성 치은 섬유종증, 신경섬유종증 1형, 레지우스 증후군, 심장얼굴피부 증후군, 코스텔로(Costello) 증후군, SHOX 결핍증, 특발성 저신장증, 성장 호르몬 결핍증, 골관절염, 쇄골두개골 이골증, 두개골유합증(예컨대, y케(Muenke) 증후군, 크루존(Crouzon) 증후군, 에이퍼트(Apert) 증후군, 잭슨-바이스(Jackson-Weiss) 증후군, 파이퍼(Pfeiffer) 증후군, 또는 크루존피부골격(Crouzonodermoskeletal) 증후군), 지증(dactyly), 단지증, 굴지증, 다지증, 합지증, 이상분절 형성이상, 골내연골종증, 섬유 이형성증, 유전성 다발성 외골종증, 저인산혈 구루병, 자페-리히텐슈타인(Jaffe-Lichtenstein) 증후군, 마르판(Marfan) 증후군, 맥쿤-올브라이트(McCune-Albright) 증후군, 골화석증 및 골반문증으로 구성된 군으로부터 선택된 질환의 치료에 사용된다.
또 다른 실시양태에서 상기 의약은 안과 장애, 예컨대 녹내장 및/또는 상승된 안압의 치료에 사용된다.
또 다른 실시양태에서 상기 의약은 FGFR3의 과활성화와 관련된 암질환, 예컨대, 다발성 골수종, 골수증식 증후군, 백혈병, 형질 세포 백혈병, 림프종, 교모세포종, 전립선암, 방광암, 또는 유선암(mammary cancer)의 치료에 사용된다.
또 다른 실시양태에서 상기 의약은 혈관 평활근 장애(vascular smooth muscle disorder), 바람직하게는 고혈압, 재협착증, 동맥경화증, 급성 비대상성 심부전(acute decompensated heart failure), 울혈성 심부전, 심장성 부종(cardiac edema), 신수종(nephredema), 간성 부종, 급성 신부전, 및 만성 신부전으로 구성된 군으로부터 선택된 혈관 평활근 장애의 치료에 사용된다.
또 다른 실시양태에서 상기 의약은 출혈성 쇼크의 치료에 사용된다.
바람직하게는 상기 의약은 성장 지연, 두개골 기형(skull deformity), 치과교정 결함(orthodontic defect), 경부 인대 압박(cervical cord compression), 척추관 협착증, 수두증, 만성 중이염으로 인한 청력 손실, 심혈관 질환, 신경 질환, 및 비만증으로 구성된 군으로부터 선택된 연골무형성증 표현형의 치료에 사용된다.
가장 바람직하게는 상기 의약은 연골무형성증의 치료에 사용된다.
본 발명의 또 다른 양상은 CNP 작용제로 치료될 수 있는 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 제어 방출성 CNP 작용제 또는 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물이다.
바람직하게는, 상기 질환은 연골무형성증, 연골형성저하증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 불완전 골형성증, 연골무발생증, 점상연골형성부전증, 동형접합 연골무형성증, 굴지 형성이상, 선천 치사성 저인산증, 주산기 치사형의 불완전 골형성증, 짧은 늑골 다지증 증후군, 지근 유형의 점상연골형성부전증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천 척추골단 이형성증, 골형성발육부전, 이영양성 형성이상, 선천성 짧은 대퇴골, 랑거형 전완부 이형성증, 니에버겔트 형 전완부 이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말초 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 형성이상, 소지증, 모르키오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 척추골단골간단 이형성증, 신경섬유종증, 레지우스 증후군, 레오파드 증후군, 누난 증후군, 유전성 치은 섬유종증, 신경섬유종증 1형, 레지우스 증후군, 심장얼굴피부 증후군, 코스텔로 증후군, SHOX 결핍증, 특발성 저신장증, 성장 호르몬 결핍증, 골관절염, 쇄골두개골 이골증, 두개골유합증(예컨대, ?케 증후군, 크루존 증후군, 에이퍼트 증후군, 잭슨-바이스 증후군, 파이퍼 증후군, 또는 크루존피부골격 증후군), 지증, 단지증, 굴지증, 다지증, 합지증, 이상분절 형성이상, 골내연골종증, 섬유 이형성증, 유전성 다발성 외골종증, 저인산혈 구루병, 자페-리히텐슈타인 증후군, 마르판 증후군, 맥쿤-올브라이트 증후군, 골화석증 및 골반문증으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서 질환은 안과 장애, 예컨대 녹내장 및/또는 상승된 안압이다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 암, 예컨대, 다발성 골수종, 골수증식 증후군, 백혈병, 형질 세포 백혈병, 림프종, 교모세포종, 전립선암, 방광암, 또는 유선암에서 FGFR3의 과활성화와 관련된다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 혈관 평활근 장애, 바람직하게는 고혈압, 재협착증, 동맥경화증, 급성 비대상성 심부전, 울혈성 심부전, 심장성 부종, 신수종, 간성 부종, 급성 신부전, 및 만성 신부전으로 구성된 군으로부터 선택된 혈관 평활근 장애이다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 출혈성 쇼크이다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 성장 지연, 두개골 기형, 치과교정 결함, 경부 인대 압박, 척추관 협착증, 수두증, 만성 중이염으로 인한 청력 손실, 심혈관 질환, 신경 질환, 및 비만증으로 구성된 군으로부터 선택된 연골무형성증 표현형이다.
가장 바람직하게는 상기 질환은 연골무형성증이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 치료 방법을 받고 있는 환자는 포유동물 환자, 바람직하게는 인간 환자이다. 한 실시양태에서 이러한 인간 환자는 성인이다. 바람직한 실시양태에서 인간 환자는 소아 환자이다.
본 발명의 또 다른 양상은 CNP로 치료될 수 있는 질환을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 제어 방출성 CNP 작용제 또는 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물의 용도이다.
바람직하게는, 상기 질환은 연골무형성증, 연골형성저하증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 불완전 골형성증, 연골무발생증, 점상연골형성부전증, 동형접합 연골무형성증, 굴지 형성이상, 선천 치사성 저인산증, 주산기 치사형의 불완전 골형성증, 짧은 늑골 다지증 증후군, 지근 유형의 점상연골형성부전증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천 척추골단 이형성증, 골형성발육부전, 이영양성 형성이상, 선천성 짧은 대퇴골, 랑거형 전완부 이형성증, 니에버겔트 형 전완부 이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말초 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 형성이상, 소지증, 모르키오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 척추골단골간단 이형성증, 신경섬유종증, 레지우스 증후군, 레오파드 증후군, 누난 증후군, 유전성 치은 섬유종증, 신경섬유종증 1형, 레지우스 증후군, 심장얼굴피부 증후군, 코스텔로 증후군, SHOX 결핍증, 특발성 저신장증, 성장 호르몬 결핍증, 골관절염, 쇄골두개골 이골증, 두개골유합증(예컨대, ?케 증후군, 크루존 증후군, 에이퍼트 증후군, 잭슨-바이스 증후군, 파이퍼 증후군, 또는 크루존피부골격 증후군), 지증, 단지증, 굴지증, 다지증, 합지증, 이상분절 형성이상, 골내연골종증, 섬유 이형성증, 유전성 다발성 외골종증, 저인산혈 구루병, 자페-리히텐슈타인 증후군, 마르판 증후군, 맥쿤-올브라이트 증후군, 골화석증 및 골반문증으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 안과 장애, 예컨대 녹내장 및/또는 상승된 안압이다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 암, 예컨대, 다발성 골수종, 골수증식 증후군, 백혈병, 형질 세포 백혈병, 림프종, 교모세포종, 전립선암, 방광암, 또는 유선암에서 FGFR3의 과활성화와 관련된다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 바람직하게는 고혈압, 재협착증, 동맥경화증, 급성 비대상성 심부전, 울혈성 심부전, 심장성 부종, 신수종, 간성 부종, 급성 신부전, 및 만성 신부전으로 구성된 군으로부터 선택된 혈관 평활근 장애이다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 출혈성 쇼크이다.
또 다른 실시양태에서 상기 질환은 성장 지연, 두개골 기형, 치과교정 결함, 경부 인대 압박, 척추관 협착증, 수두증, 만성 중이염으로 인한 청력 손실, 심혈관 질환, 신경 질환, 및 비만증으로 구성된 군으로부터 선택된 연골무형성증 표현형이다.
가장 바람직하게는 상기 질환은 연골무형성증이다.
한 실시양태에서 제어 방출성 CNP 작용제 또는 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물로 치료될 질환은 포유동물 환자, 바람직하게는 인간 환자에서 발생한다. 한 실시양태에서 이러한 인간 환자는 성인이다. 바람직한 실시양태에서 인간 환자는 소아 환자이다.
본 발명의 추가의 양상은 치료적 유효량의 제어 방출성 CNP 작용제 또는 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, CNP 작용제로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물 환자, 바람직하게는 인간 환자에서 치료, 제어, 지연 또는 예방하는 방법이다. 한 실시양태에서 인간 환자는 성인이다. 바람직한 실시양태에서 인간 환자는 소아 환자이다.
바람직하게는, CNP로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환은 연골무형성증, 연골형성저하증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 불완전 골형성증, 연골무발생증, 점상연골형성부전증, 동형접합 연골무형성증, 굴지 형성이상, 선천 치사성 저인산증, 주산기 치사형의 불완전 골형성증, 짧은 늑골 다지증 증후군, 지근 유형의 점상연골형성부전증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천 척추골단 이형성증, 골형성발육부전, 이영양성 형성이상, 선천성 짧은 대퇴골, 랑거형 전완부 이형성증, 니에버겔트 형 전완부 이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말초 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 형성이상, 소지증, 모르키오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 척추골단골간단 이형성증, 신경섬유종증, 레지우스 증후군, 레오파드 증후군, 누난 증후군, 유전성 치은 섬유종증, 신경섬유종증 1형, 레지우스 증후군, 심장얼굴피부 증후군, 코스텔로 증후군, SHOX 결핍증, 특발성 저신장증, 성장 호르몬 결핍증, 골관절염, 쇄골두개골 이골증, 두개골유합증(예컨대, ?케 증후군, 크루존 증후군, 에이퍼트 증후군, 잭슨-바이스 증후군, 파이퍼 증후군, 또는 크루존피부골격 증후군), 지증, 단지증, 굴지증, 다지증, 합지증, 이상분절 형성이상, 골내연골종증, 섬유 이형성증, 유전성 다발성 외골종증, 저인산혈 구루병, 자페-리히텐슈타인 증후군, 마르판 증후군, 맥쿤-올브라이트 증후군, 골화석증 및 골반문증으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서 CNP로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환은 안과 장애, 예컨대 녹내장 및/또는 상승된 안압이다.
또 다른 실시양태에서 CNP로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환은 암, 예컨대, 다발성 골수종, 골수증식 증후군, 백혈병, 형질 세포 백혈병, 림프종, 교모세포종, 전립선암, 방광암, 또는 유선암에서 FGFR3의 과활성화와 관련된다.
또 다른 실시양태에서 CNP로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환은 바람직하게는 고혈압, 재협착증, 동맥경화증, 급성 비대상성 심부전, 울혈성 심부전, 심장성 부종, 신수종, 간성 부종, 급성 신부전, 및 만성 신부전으로 구성된 군으로부터 선택된 혈관 평활근 장애이다.
또 다른 실시양태에서 CNP로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환은 출혈성 쇼크이다.
또 다른 실시양태에서 CNP로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환은 성장 지연, 두개골 기형, 치과교정 결함, 경부 인대 압박, 척추관 협착증, 수두증, 만성 중이염으로 인한 청력 손실, 심혈관 질환, 신경 질환, 및 비만증으로 구성된 군으로부터 선택된 연골무형성증 표현형이다.
가장 바람직하게는 CNP로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환은 연골무형성증이다.
본 발명의 부가적인 양상은 제어 방출성 CNP 작용제 또는 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 방법으로서, 이 방법은 제어 방출성 CNP 작용제 또는 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물을 국소, 장관내(enteral) 또는 비경구 투여를 통해 그리고 외용, 주사 또는 주입, 예컨대 관절내, 관절주위, 피내, 피하, 근육내, 정맥내, 골내, 복강내, 경막내, 피막내, 안와내, 유리체내, 고실내, 방광내, 심장내, 기관경유(transtracheal), 표피하(subcuticular), 피막하(subcapsular), 지주막하(subarachnoid), 척수내, 심실내, 흉골내 주사 및 주입, 뇌 조직 또는 뇌액으로 본 발명의 전달 등을 허용하는 이식된 장치(예컨대, 옴마야 저장소(Ommaya Reservoir))를 통한 뇌로의 직접 전달, 직접적인 뇌실내(intracerebroventricular) 주사 또는 주입, 뇌 또는 뇌 관련 영역 내로의 주사 또는 주입, 맥락하 공간 내로의 주사, 안구뒤(retro-orbital) 주사 및 점안의 방법에 의해, 바람직하게는 피하 주사를 통해 투여하는 단계를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 피하 주사를 통한 연골무형성증의 치료에 사용하기 위한 제어 방출성 CNP 작용제 또는 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
추가의 양상에서 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제 또는 약제학적으로 허용 가능한 이의 염을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이며, 여기에서 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물을 포함한다.
하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 그의 유리 형태(즉 유리 약물의 형태), 안정한 접합체의 형태 또는 제어 방출성 화합물의 형태일 수 있다.
한 실시양태에서, 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 그의 유리 형태의 약물이다, 즉 본 발명의 약제학적 조성물은 하나 이상의 제어 방출성 CNP 작용제 및 하나 이상의 추가의 약물을 포함한다.
바람직하게는, 하나 이상의 추가의 약물은 항히스타민제; 인간 항-FGFR3 항체; 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3; 티로신 키나제 억제제; 스타틴; CNP 작용제; 성장 호르몬; IGF-1; ANP; BNP; 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제; 및 NPR-C의 억제제로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직한 항히스타민제는 메클로진이다.
바람직한 티로신 키나아제 억제제 NVP-BGJ398이다.
바람직한 스타틴은 로수바스타틴이다.
하나 이상의 추가의 약물을 위한 바람직한 CNP 작용제는 보소리타이드이다.
펩티다아제 및 프로테아제의 바람직한 억제제는 NEP 및 푸린 억제제이다.
NEP에 대한 바람직한 억제제는 티오르판 및 칸독사트릴이다.
NPR-C의 바람직한 억제제는 서열 번호: 98(FGIPMDRIGRNPR) 및 항체 B701의 단편이다.
티로신 키나아제의 바람직한 억제제는 참조로 본원에서 통합된 U.S. 특허 6329375 및 6344459에 개시된 것과 같다.
한 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 항히스타민제이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 인간 항-FGFR3 항체이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3(sFGFR3)이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 티로신 키나아제 억제제이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 스타틴이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 성장 호르몬이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 CNP 작용제이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 IGF-1이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 ANP이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 BNP이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제이다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 약물은 NPR-C의 억제제이다.
또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 안정한 접합체의 형태이다.
한 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 직접적으로 또는 스페이서 모이어티를 통해 중합체성 모이어티, 바람직하게는 수용성 중합체성 모이어티로의 안정한 연결을 통해 공유적으로 접합된 하나 이상의 생물학적 활성 모이어티를 포함한다,
바람직하게는, 이러한 중합체성 모이어티, 더욱더 바람직하게는 수용성 중합체성 모이어티는, 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 알부민-결합 모이어티로의 안정한 연결을 통해 공유적으로 접합된다. 바람직하게는, 상기 알부민-결합 모이어티는 C8-24 알킬 모이어티 또는 지방산 유도체이다. 바람직한 지방산 유도체는 참조로 본원에서 통합된 WO 2005/027978 A2 및 WO 2014/060512 A1에 개시된 것들이다.
바람직하게는, 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 항히스타민제; 인간 항-FGFR3 항체; 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3(sFGFR3); 티로신 키나아제 억제제; 스타틴; CNP 작용제; 성장 호르몬; IGF-1; ANP; BNP; 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제; 및 NPR-C의 억제제로 구성된 군으로부터 선택된 생물학적 활성 모이어티를 포함한다.
바람직한 항히스타민제는 메클로진이다.
바람직한 티로신 키나아제 억제제는 NVP-BGJ398이다.
바람직한 스타틴은 로수바스타틴이다.
하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티를 위한 바람직한 CNP 작용제는 보소리타이드이다.
바람직한 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제는 NEP 및 푸린 억제제이다.
NEP를 위한 바람직한 억제제는 티오르판 및 칸독사트릴이다.
바람직한 NPR-C의 억제제는 서열 번호: 98(FGIPMDRIGRNPR) 및 항체 B701의 단편이다.
티로신 키나아제의 바람직한 억제제는 참조로 본원에서 통합된 U.S. 특허6329375 및 6344459에서 개시된 것과 같다.
한 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 항히스타민제 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 인간 항-FGFR3 항체 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3(sFGFR3) 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 티로신 키나아제 억제제 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 스타틴 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 성장 호르몬 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 CNP 작용제 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 IGF-1 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 ANP 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 BNP 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 안정한 접합체 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 NPR-C의 억제제 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 제어 방출성 화합물의 형태이다.
바람직하게는, 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 항히스타민제; 인간 항-FGFR3 항체; 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3; 스타틴; CNP 작용제; 성장 호르몬; IGF-1; ANP; BNP; 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제; 티로신 키나아제의 억제제; 및 NPR-C의 억제제로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물을 포함한다.
바람직한 항히스타민제는 메클로진이다.
바람직한 티로신 키나아제 억제제는 NVP-BGJ398이다.
바람직한 스타틴은 로수바스타틴이다.
하나 이상의 추가의 약물을 위한 바람직한 CNP 작용제는 보소리타이드이다.
바람직한 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제는 NEP 및 푸린 억제제이다.
NEP를 위한 바람직한 억제제는 티오르판 및 칸독사트릴이다.
바람직한 NPR-C의 억제제는 서열 번호: 98(FGIPMDRIGRNPR) 및 항체 B701의 단편이다.
티로신 키나아제의 바람직한 억제제는 참조로 본원에서 통합된 U.S. 특허 6329375 및 6344459에 개시된 것과 같다.
한 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 항히스타민제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 인간 항-FGFR3 항체 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3(sFGFR3) 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 티로신 키나아제 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 스타틴 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 성장 호르몬 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 CNP 작용제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 IGF-1 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 ANP 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 BNP 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 NPR-C의 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
한 실시양태에서 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 수불용성이다.
바람직하게는, 이러한 수불용성 제어 방출성 화합물은 결정, 나노입자, 마이크로입자, 나노스피어 및 마이크로스피어로 구성된 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 결정이다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 나노입자이다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 마이크로입자이다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 나노스피어이다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 마이크로스피어이다.
한 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 소포이다. 바람직하게는, 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 이러한 소포는 미셀, 리포솜 또는 폴리머솜이다.
한 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 미셀이다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 리포솜이다. 바람직하게는, 이러한 리포솜은 아쿠아솜; 비이온 계면활성제 소포, 예컨대 니오솜 및 프로니오솜; 양이온성 리포솜, 예컨대 레시플렉스; 트랜스페로솜; 에토솜; 우파솜; 스핑고솜; 및 파마코솜으로 구성된 군으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함하는 폴리머솜이다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 수불용성 중합체 내에 비-공유적으로 임베딩된 하나 이상의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물을 포함한다. 바람직하게는, 이러한 수불용성 중합체는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
바람직한 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 폴리(락틱-코-글리콜산)(PLGA) 내에서 비공유적으로 임베딩된 하나 이상의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 수불용성 중합체에 공유적으로 및 가역적으로 접합된 하나 이상의 생물학적 활성 모이어티를 포함한다. 바람직하게는 이러한 수불용성 중합체는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
바람직하게는, 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 항히스타민제; 인간 항-FGFR3 항체; 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3; 티로신 키나아제 억제제; 스타틴; CNP 작용제; 성장 호르몬; IGF-1; ANP; BNP; 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제; 및 NPR-C의 억제제로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물을 포함한다.
바람직한 항히스타민제는 메클로진이다.
바람직한 티로신 키나아제 억제제는 NVP-BGJ398이다.
바람직한 스타틴은 로수바스타틴이다.
하나 이상의 추가의 약물을 위한 바람직한 CNP 작용제는 보소리타이드이다.
바람직한 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제는 NEP 및 푸린 억제제이다.
NEP를 위한 바람직한 억제제는 티오르판 및 칸독사트릴이다.
바람직한 NPR-C의 억제제는 서열 번호: 98(FGIPMDRIGRNPR) 및 항체 B701의 단편이다.
티로신 키나아제의 바람직한 억제제는 참조로 본원에서 통합된 U.S. 특허 6329375 및 6344459에서 개시된 것과 같다.
한 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 항히스타민제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 인간 항-FGFR3 항체 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3(sFGFR3) 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 티로신 키나아제 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 스타틴 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 성장 호르몬 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 CNP 작용제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 IGF-1 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 ANP 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 BNP 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수불용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 NPR-C의 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 수용성이다.
한 실시양태에서 수용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 직접적으로 또는 스페이서 모이어티를 통해 수용성 중합체성 모이어티로의 가역적 연결을 통해 공유적으로 접합된 하나 이상의 생물학적 활성 모이어티를 포함한다.
바람직하게는, 이러한 수용성 중합체성 모이어티는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포릴 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(언하이드라이드), 폴리(아스파르트아미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카르보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥시드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(히드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(히드록시에틸-옥사졸린), 폴리(히드록시메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(히드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(히드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카르보네이트), 폴리(락트산), 폴리(락틱-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알콜), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로오스, 카르보메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 히드록시알킬 전분, 히드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란, 및 이의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 화합물 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 알부민-결합 모이어티로의 안정한 연결을 통해 공유적으로 접합된다. 바람직하게는, 상기 알부민-결합 모이어티는 C8-24 알킬 모이어티 또는 지방산 유도체이다. 바람직한 지방산 유도체는 참조로 본원에서 통합된 WO 2005/027978 A2 및 WO 2014/060512 A1에 개시된 것들이다.
바람직하게는, 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티는 항히스타민제; 인간 항-FGFR3 항체; 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3; 티로신 키나아제 억제제; 스타틴; CNP 작용제; 성장 호르몬; IGF-1; ANP; BNP; 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제; 및 NPR-C의 억제제로 구성된 군으로부터 선택된 생물학적 활성 모이어티를 포함한다.
바람직한 항히스타민제는 메클로진이다.
바람직한 티로신 키나아제 억제제는 NVP-BGJ398이다.
바람직한 스타틴은 로수바스타틴이다.
하나 이상의 추가의 약물을 위한 바람직한 CNP 작용제는 보소리타이드이다.
바람직한 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제는 NEP 및 푸린 억제제이다.
NEP를 위한 바람직한 억제제는 티오르판 및 칸독사트릴이다.
바람직한 NPR-C의 억제제는 서열 번호: 98(FGIPMDRIGRNPR) 및 항체 B701의 단편이다.
티로신 키나아제의 바람직한 억제제는 참조로 본원에서 통합된 U.S. 특허6329375 및 6344459에서 개시된 것과 같다.
한 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 항히스타민제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 인간 항-FGFR3 항체 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 가용성 형태의 인간 섬유모세포 성장 인자 수용체 3(sFGFR3) 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 티로신 키나아제 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 스타틴 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 성장 호르몬 모이어티 또는 약물을 포함한다. 바람직한 수용성 제어 방출성 성장 호르몬 화합물은 WO2016/079114A1의 실시예 2의 화합물 2이다. 따라서, 바람직한 수용성 제어 방출성 성장 호르몬 화합물은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00256
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 CNP 작용제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 IGF-1 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 ANP 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 BNP 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 펩티다아제 및 프로테아제의 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 수용성 제어 방출성 형태의 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 모이어티 또는 약물은 NPR-C의 억제제 모이어티 또는 약물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양상은 의약으로서 사용되는 본 발명의 약제학적 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양상은 성장 자극으로부터 이익을 얻는 장애를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 약제학적 조성물이다.
바람직하게는, 환자는 포유동물 환자, 더 바람직하게는 인간 환자이다.
바람직하게는, 성장 자극으로부터 이익을 얻는 이러한 장애는 연골무형성증, 연골형성저하증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 불완전 골형성증, 연골무발생증, 점상연골형성부전증, 동형접합 연골무형성증, 굴지 형성이상, 선천 치사성 저인산증, 주산기 치사형의 불완전 골형성증, 짧은 늑골 다지증 증후군, 지근 유형의 점상연골형성부전증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천 척추골단 이형성증, 골형성발육부전, 이영양성 형성이상, 선천성 짧은 대퇴골, 랑거형 전완부 이형성증, 니에버겔트 형 전완부 이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말초 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 형성이상, 소지증, 모르키오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 및 척추골단골간단 이형성증을 포함하는 군으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는, 성장 자극으로부터 이익을 얻는 장애는 연골무형성증이다.
본 발명의 또 다른 양상은 본 발명의 약제학적 조성물의 투여에 의한 성장 자극으로부터 이익을 얻는 장애를 앓는 환자의 치료 방법이다.
바람직하게는, 환자는 포유동물 환자, 더 바람직하게는 인간 환자이다.
바람직하게는, 성장 자극으로부터 이익을 얻는 이러한 장애는 연골무형성증, 연골형성저하증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 불완전 골형성증, 연골무발생증, 점상연골형성부전증, 동형접합 연골무형성증, 굴지 형성이상, 선천 치사성 저인산증, 주산기 치사형의 불완전 골형성증, 짧은 늑골 다지증 증후군, 지근 유형의 점상연골형성부전증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천 척추골단 이형성증, 골형성발육부전, 이영양성 형성이상, 선천성 짧은 대퇴골, 랑거형 전완부 이형성증, 니에버겔트 형 전완부 이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말초 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 형성이상, 소지증, 모르키오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 및 척추골단골간단 이형성증을 포함하는 군으로부터 선택된다. 가장 바람직하게는, 성장 자극으로부터 이익을 얻는 장애는 연골무형성증이다.
CNP 작용제가 폴리펩타이드라면, 이러한 폴리펩타이드는 예컨대 문헌[Boc chemistry(R. B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85(14): 2149-2154(1963))]에 의한 표준 고체상 펩타이드 합성 방법으로 제조될 수 있다. 대안적으로, Fmoc(플루오레닐메톡시카르보닐)화학을 사용할 수 있다.
슈도프롤린 또는 다른 디펩타이드 빌딩 블록, 단편 결합 및 기타의 사용을 포함하는 당업계에 공지된 방법을 순도 및/또는 수율을 개선시키기 위해 사용할 수 있다(J.Wade et al., Lett. Pept. Sci., 7(2):107-122(2000); Y.Fujiwara et al., Chem. Pharm.Bull., 44(7):1326-1331(1996); P. Cherkupally et al., Eur. J. Org. Chem., 6372-6378(2013)).
대안적으로, CNP 작용제가 폴리펩타이드라면, 이러한 폴리펩타이드는 재조합 합성 공정에 의해 생산될 수 있다.
도 1: 서열 번호: 1에 따른 CNP의 구조.
실시예
물질 및 방법
CNP 서열번호: 1을 바켐 아게(Bachem AG, 스위스, 부벤도르프 소재)(CNP-22, 인간, 카탈로그 번호 H-1296)로부터 수득하였다. CNP-34 서열번호: 40 및 CNP-38 서열번호: 24를 카슬로 에이피에스(CASLO ApS, 덴마크, 콩겐스 링비 소재)로부터 수득하였다.
Lys26의 Boc 보호된 N-말단 및 ivDde 보호된 측쇄를 갖는 CTC 수지상의 측쇄 보호된 CNP-38(Fmoc-전략에 의해 합성됨)을 카슬로 에이피에스(덴마크, 콩겐스 링비 소재)로부터 수득하였다.
Lys12, Lys16 또는 Lys22의 Boc 보호된 N-말단 및 ivDde 보호된 측쇄를 갖는 TCP 텐타겔(tentagel) 수지상의 측쇄 보호된 CNP-34(Fmoc-전략에 의해 합성됨)를 펩타이드 스페셜티 레이보러토리스 게엠베하(Peptide Specialty Laboratories GmbH, 독일, 하이델베르그 소재)로부터 수득하였다. 유리 N-말단을 갖는 TCP 텐타겔 수지상의 측쇄 보호된 CNP-38(Fmoc-전략에 의해 합성됨)을 펩타이드 스페셜티 레이보러토리스 게엠베하(독일, 하이델베르그 소재)로부터 수득하였다.
메톡시 PEG 아민 5 kDa를 라프 폴리메르 게엠베하(Rapp Polymere GmbH, 독일, 투빈겐소재)로부터 수득하였다. 이 연구에 사용된 모든 다른 PEG는 노프 유럽 엔.브이.(NOF Europe N.V., 벨기에, 그로벤동크 소재)로부터 획득하였다.
FmocN-Me-Asp(OtBu)-OH를 바켐 아게(스위스, 부벤도르프 소재)로부터 수득하였다. S-트리틸-6-메르캅토헥산산을 폴리펩타이드(Polypeptide, 프랑스, 스트라스버그 소재)로부터 구입하였다. HATU를 머크 바이오사이언스 게엠베하(Merck Biosciences GmbH, 독일, 슈발바흐/타우누스(Schwalbach/Ts) 소재)로부터 수득하였다.
2,4-디메틸벤질 알콜을 에이비씨알 게엠베하(abcr GmbH, 독일, 칼스루에 소재)로부터 수득하였다.
Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH를 펩타이드 인터네셔널사(Peptide International Inc, 미국, 켄터키주 루이빌소재)로부터 수득하였다.
중성 엔도펩티다아제(NEP: Neutral Endopeptidase)를 엔조 라이프 사이언스 게엠베하(Enzo Life Sciences GmbH, 독일, 뤠어라흐 소재)로부터 수득하였다.
다른 모든 화학약품 및 시약을 시그마 알드리치 게엠베하(Sigma Aldrich GmbH, 독일, 타우프키르첸 소재)로부터 구입하였다.
폴리에틸렌 프릿(frit)이 장착된 주사기(MultiSynTech GmbH, 독일 비텐 소재)를 반응 용기로서 또는 펩타이드 수지의 세척 단계를 위해 사용하였다.
수지상의 측쇄 보호된 CNP로부터 ivDde 보호기를 제거하기 위한 일반적인 절차
수지를 30분 동안 DMF에서 미리 팽윤시키고 용매를 버렸다. 수지를 8x15분 동안 DMF/히드라진 수화물 4/1(v/v, 25 mL/g 수지)과 함께 인큐베이션하여 ivDde기를 제거하였다. 각 단계 동안 신선한 DMF/히드라진 수화물 용액을 사용하였다. 마지막으로, 수지를 DMF(10 x), DCM(10 x)로 세척하고 진공에서 건조시켰다.
RP- HPLC 정제
분취용 RP-HPLC를 위해, 하기 컬럼이 장착된 워터스(Waters) 600 컨트롤러 및 2487 이중 흡광도 검출기를 사용하였다: 워터스 XBridgeTM BEH300 Prep C18 5 μm, 150 x 10 mm, 유속 6 mL/분, 또는 워터스 XBridgeTM BEH300 Prep C18 10 μm, 150 x 30 mm, 유속 40 mL/분. 용매 시스템 A(0.1% TFA v/v 또는 0.01% 농축 HCl v/v을 함유하는 물) 및 용매 시스템 B(0.1% TFA v/v 또는 0.01% 농축 HCl v/v을 함유하는 아세토니트릴)의 선형 구배를 사용하였다.
생성물을 함유하는 HPLC 분획을 모으고 달리 언급되지 않는 한 동결건조시켰다.
플래쉬 크로마토그래피
플래쉬 크로마토그래피 정제를 바이오타지 KP-Sil 실리카 카트리지 및 용리액으로서 n-헵탄 및 에틸아세테이트를 사용하여, 바이오타지 에이비(Biotage AB, 스웨덴 소재)로부터의 이소렐라 원 시스템(Isolera One system) 상에서 수행하였다. 생성물을 254　nm에서 검출하였다.
분석 방법
분석용 초고성능 LC(UPLC)-MS를 써모 사이엔티픽(Thermo Scientific)의 LTQ 오비트랩 디스커버리(Orbitrap Discovery) 질량 분석기에 결합되거나 워터스 마이크로매스(Micromass) ZQ에 결합된 워터스 BEH300 C18 컬럼(2.1x50　mm, 1.7　μm 입자 크기, 유속: 0.25 mL/분; 용매 A: 0.04% TFA(v/v)를 함유하는 물, 용매 B: 0.05% TFA(v/v)를 함유하는 아세토니트릴)이 장착된 워터스 액큐이티 시스템(Acquity system) 상에서 수행하였다.
크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 달리 언급되지 않는 한 0.45 μm 입구 필터가 장착된 수퍼덱스(Superdex) 200 5/150 GL 컬럼(Amersham Bioscience/GE Healthcare)이 장착된 아머샴 바이오사이언스 AEKTA베이직 시스템을 사용하여 수행하였다. 20 mM 인산나트륨, 140 mM NaCl, pH 7.4를 이동상으로서 사용하였다.
-D로의 -L1- 부착의 가역적 특성으로 인해, NEP-안정성 및 수용체 친화도를 본 발명의 CNP 전구약물의 안정한 유사체를 사용하여 측정하였다, 즉, -D로의 -Z의 가역적 부착 대신에 안정한 부착을 갖는 본 발명의 CNP 전구약물과 유사한 구조체를 사용하여 측정하였다.
이것은 본 발명의 CNP 전구약물이 실험 과정에서 CNP를 방출하고 상기 방출된 CNP가 결과에 영향을 미쳤을 것이기 때문에 필요하였다.
혈장 총 CNP -38 농도의 정량화
혈장 총 CNP-38 농도(접합 및 방출된 CNP-38)를 트립신 소화 후 N-말단 서명(signature) 펩타이드(서열: LQEHPNAR) 및 C-말단 서명 펩타이드(서열: IGSMSGLGC)의 정량화에 의해 결정하였다.
LC-MS 분석을 ESI 프로브를 통해 애질런트(Agilent) 6550 iFunnel Q-TOF 질량 분석기에 결합된 애질런트 1290 UPLC를 사용하여 수행하였다. 크로마토그래피를 0.25 mL/분(T = 25℃)의 유속에서 프리-필터(pre-filter)를 갖는 워터스 액퀴이티 BEH300 C18 분석 컬럼(50 x 2.1 mm I.D., 1.7 μm 입자 크기) 상에서 수행하였다. 0.2% 포름산(v/v)을 함유하는 물(UPLC 등급)을 이동상 A로서 사용하였고, 0.2% 포름산을 갖는 아세토니트릴(UPLC 등급)을 이동상 B로서 사용하였다. 구배 시스템은 3.0분 동안 0.1% B의 초기 파라미터에서의 짧은 등용매 단계에 이어 17분 이내에 0.1% B에서 16% B로의 선형 증가를 포함하였다. 질량 분석을 이온 m/z 482.75 [M+2H]2+(N-말단) 및 m/z 824.36 [M+H]1+(C-말단)을 모니터링하는 단일 이온 모니터링(SIM) 모드에서 수행하였다. 내부 표준으로서, 중수소화된 CNP-38 펩타이드를 사용하였다.
공시료(blank) 혈장에서의 CNP-38 접합체의 보정 표준을 하기와 같이 제조하였다: 해동된 Li-헤파린 시노몰구스 혈장을 먼저 균질화한 다음, 5분간 원심분리하였다. CNP-38 접합체 제형을 DMSO 중의 10 μg/mL(접합체 CNP-38 당량)의 작업 용액으로 희석하고 9.3 ng/100 μL(접합체 CNP-38 당량) 내지 139.5 ng/100 μL(접합체 CNP-38 당량)의 농도로 공시료 혈장에 스파이크하였다. 이들 용액을 보정 곡선을 생성하는데 사용하였다. 보정 곡선을 두 가지 서명 펩타이드(N- 및 C-말단)에 대해 1/x2로 가중치를 주었다. 품질 대조를 위해, 3개의 품질 대조 샘플을 116.2 ng/100 μL(높은 QC, 접합체 CNP-38 당량), 69.75 ng/100 μL(중간 QC, 접합체 CNP-38 당량) 및 23.25 ng /100 μL(낮은 QC, 접합체 CNP-38 당량)의 함량을 갖도록 제조하였다.
샘플 제조를 위해, 100 μL의 혈장 샘플에 300 μL의 예냉된(0℃) 메탄올을 첨가하여 단백질 침전을 수행하였다. 200 μL의 상청액을 새로운 웰 플레이트로 옮기고 증발 건조 시켰다(35℃에서 완만한 질소 흐름하에). 100 μL의 재구성 용매(써모 소화 완충액, 주문 번호 60109-101, 써모 피셔 사이엔티픽 게엠베하, 독일,드라이아이히 소재)를 사용하여 잔류물을 용해시켰다. 20 μg의 트립신(주문 번호 V5111, 프로메가 게엠베하, 독일, 만하임 소재)를 20 μL의 10 mM 아세트산에 용해시켰다. 2 μL의 트립신 용액을 각각의 공동에 첨가하였다.
37℃(수조)에서 4시간 인큐베이션 후, 5 μL의 0.5 M TCEP 용액을 각각의 공동에 첨가하고 96℃에서 5분간 다시 인큐베이션하였다. 샘플을 실온으로 냉각한 후, 3 μL 아세토니트릴을 첨가하였다. 용출액을 바이알로 옮겼다. 10 μL를 UPLC-MS 시스템에 주입하였다.
실시예 1
링커 시약 1f의 합성
링커 시약 1f를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00257
MeOH(20 mL) 중의 N-메틸-N-Boc-에틸렌디아민(2 g, 11.48 mmol) 및 NaCNBH3(819 mg, 12.63 mmol)의 용액에 2,4,6-트리메톡시벤즈알데히드(2.08 g, 10.61 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 90분간 교반하고, 3M HCl(4　mL)로 산성화시키며, 15분간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액(200 mL)에 첨가하고, CH2Cl2로 5회 추출하였다. 조합된 유기 상을 Na2SO4상에서 건조시키고 용매를 감압하에 증발시켰다. 생성된 N-메틸-N-Boc-N'-Tmob-에틸렌디아민 1a를 진공에서 건조시키고, 추가의 정제 없이 다음 반응 단계에서 사용하였다.
수율: 3.76 g(11.48　mmol, 89 % 순도, 1a : 이중 Tmob 보호된 생성물 = 8 :1)
MS: m/z 355.22 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량(calculated monoisotopic mass) = 354.21).
CH2Cl2(24 mL) 중의 1a(2 g, 5.65 mmol)의 용액에 COMU(4.84 g, 11.3 mmol), N-Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH(2.08 g, 4.52 mmol) 및 2,4,6-콜리딘(2.65 mL, 20.34 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, CH2Cl2(250 mL)로 희석하며 0.1 M H2SO4(100 mL)로 3회 및 염수(100 mL)로 3회 세척하였다. 수성상을 CH2Cl2(100 mL)로 재추출하였다. 조합된 유기 상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하며, 잔류물을 24 mL의 부피로 농축하였다. 1b를 플래쉬 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.
수율: 5.31 g(148 %, 6.66　mmol)
MS: m/z 796.38 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 = 795.37).
THF(60 mL) 중의 1b(5.31 g, N-Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH 대비 최대 4.52 mmol)의 용액에, DBU(1.8 mL, 3% v/v)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 12분간 교반하고, CH2Cl2(400 mL)로 희석하며, 0.1 M H2SO4(150 mL)로 3회 및 염수(150 mL)로 3회 세척하였다. 수성상을 CH2Cl2(100 mL)로 재추출하였다. 조합된 유기 상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하였다. 1c를 용매의 증발시에 단리하고, 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
MS: m/z 574.31 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 = 573.30).
1c(5.31 g, 4.52 mmol, 조생성물)를 아세토니트릴(26 mL) 및 COMU(3.87 g, 9.04 mmol)에 용해시키고, 6-트리틸메르캅토헥산산(2.12 g, 5.42 mmol) 및 2,4,6-콜리딘(2.35 mL, 18.08 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, CH2Cl2(400 mL)로 희석하며, 0.1　M H2SO4(100 mL)로 3회 및 염수(100 mL)로 3회 세척하였다. 수성상을 CH2Cl2(100 mL)로 재추출하였다. 조합된 유기 상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하며, 1d를 용매의 증발시에 단리하였다. 생성물 1d를 플래쉬 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.
수율: 2.63 g(62 %, 94 % 순도)
MS: m/z 856.41 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 = 855.41).
i-PrOH(33 mL) 및 H2O(11 mL) 중의 1d(2.63　g, 278　mmol)의 용액에 LiOH(267 mg, 11.12 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 70분 동안 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(200 mL)로 희석하고, 0.1 M H2SO4(50mL)로 3회 및 염수(50 mL)로 3회 세척하였다. 수성상을 CH2Cl2(100 mL)로 재추출하였다. 조합된 유기 상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하며, 1e를 용매의 증발시에 단리하였다. 1e를 플래쉬 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.
수율: 2.1　g(88 %)
MS: m/z 878.4 = [M+Na]+,(계산된 단동위 질량 = 855.40).
무수 DCM(4　mL) 중의 1e(170　mg, 0.198　mmol)의 용액에 DCC(123　mg, 0.59 mmol), 및 촉매량의 DMAP를 첨가하였다. 5분 후, N-히드록시-숙신이미드(114 mg, 099 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 용매를 진공에서 제거하며, 잔류물을 90% 아세토니트릴 및 0.1% TFA(3.4 mL)에 용해시켰다. 조 혼합물을 RP-HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 0.5 M pH 7.4 포스페이트 완충액으로 중화시키고, 농축시켰다. 생성된 수성상을 DCM으로 추출하고, 1f를 용매의 증발시에 단리하였다.
수율: 154 mg(81%)
MS: m/z 953.4 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 = 952.43).
실시예 2
N εΚ4 / εΚ10 - CNP 모노-링커 티올 2, N εΚ4 - CNP 모노-링커 티올 2c 및 N εΚ10 - CNP 모노-링커 티올 2d의 합성
Figure pct00258
CNP-22(5.2　μmol)를 0.6　mL DMSO에 용해시켜 NεΚ4 / εΚ10-CNP 모노-링커 티올(Lys4 또는 Lys10의 측쇄 아미노기에서 접합된 링커를 갖는 위치이성질체(regioisomer)의 혼합물) 2를 제조한다. 테트라부틸-암모늄히드록시드 수화물을 이용하여 pH 8.5로 조정된 0.15 mL 0.375 M 보레이트 완충액, 60 μL DIPEA 및 0.34　mL의 DMSO 중의 1f(6.1 mg, 7.1　μmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한다. 반응 혼합물을 2 mL 아세토니트릴/물 1/1(v/v) 및 200 μL AcOH로 희석하고, 보호된 NεK4 / εK10-CNP 모노-링커 접합체를 RP-HPLC에 의해 반응 혼합물로부터 단리 한다.
최적화된 RP-HPLC 구배가 NεK4-CNP 모노-링커 티올 2a 및 NεK10-CNP 모노-링커 티올 2b의 단리를 위해 사용될 수 있다.
보호기의 제거는 동결건조된 생성물 분획을 실온에서 1시간 동안 0.6　mL의 90/10/2/2(v/v/v/v) HFIP/TFA/TES/물로 처리함으로써 영향을 받는다. 탈보호된 Nε K4/εK10-CNP 모노-링커 티올 2를 RP-HPLC로 정제한다. 생성물의 동일성 및 순도를 ESI-LCMS로 결정한다.
탈보호된 NεK4-CNP 모노-링커 티올 2c 및 NεK10-CNP 모노-링커 티올 2d는 각기 2a 및 2b로부터 유사하게 수득될 수 있다.
실시예 3
N αG1 - CNP 모노-링커 티올 3의 합성
Figure pct00259
CNP-22(5.2　μmol)를 0.6　mL DMSO에 용해시켜 NαG1-CNP 모노-링커 티올 3을 제조한다. 0.25 mL 0.5 M 포스페이트 완충액 pH 7.4 및 0.34　mL의 DMSO 중의 1f(6.1 mg, 7.1　μmol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 수 시간 교반한다. 반응 혼합물을 2 mL 아세토니트릴/물 1/1(v/v) 및 200 μL AcOH로 희석하고 보호된 NαG1-CNP 모노-링커 티올을 RP-HPLC에 의해 반응 혼합물로부터 단리 한다.
보호기의 제거는 동결 건조된 생성물 분획을 실온에서 1시간 동안 0.6　mL의 90/10/2/2(v/v/v/v) HFIP/TFA/TES/물로 처리함으로써 영향을 받는다. 탈보호된 Nα G1-CNP 모노-링커 티올 3을 RP-HPLC로 정제한다. 생성물의 동일성 및 순도는 ESI-LCMS로 결정한다.
실시예 4
CNP 모노-링커 티올 2c, 2d 및 3의 페길화
Figure pct00260
1 μmol CNP 모노-링커 티올 2c를 0.5 mL 아세토니트릴/0.2 M 숙시네이트 완충액 pH 3.8 1/1(v/v)에 용해시킨다. 1.2 μmol의 선형 40 kDa PEG-말레이미드를 첨가하고 혼합물을 실온에서 교반한다. 20 μL AcOH를 첨가하여 반응물을 ?칭하고 CNP 접합체 4를 분취용 RP-HPLC로 정제한다.
CNP 접합체 5 및 6을 1 μmol CNP 모노-링커 티올 2d 및 3으로부터 유사하게 제조한다.
CNP 함량을 산성 조건하에 총 가수분해 후 정량적 아미노산 분석에 의해 결정한다.
실시예 5
시험관 내 방출 동역학
CNP 접합체 4, 5 및 6을 대략 2 mg/mL의 농도로 60 mM 인산나트륨, 3 mM EDTA, 0.01% 트윈-20, pH 7.4에 용해시키고, 멸균 여과한다. 혼합물을 37℃에서 인큐베이션한다. 시점에서, 분취량을 회수하여 RP-HPLC 및 ESI-MS에 의해 분석한다. 유리된 CNP와 관련이 있는 UV-신호를 통합하고 인큐베이션 시간에 대해 플롯팅한다.
곡선-피팅 소프트웨어를 적용하여 상응하는 방출의 하프타임(halftime)을 추정한다.
실시예 6
랫트에서 약동학 및 cGMP 생산
등몰 용량의 CNP-22, CNP 접합체 4, 5 또는 6을 정상 랫트에 iv 및 sc로 주사한다. 시간 경과에 따른 혈장 CNP 및 cGMP 수준을 문헌(US 특허 8,377,884 B2)에 기재된 바와 같이 결정한다.
실시예 7
Dmb 보호된 6- 메르캅토헥산산 7의 합성
화합물 7을 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00261
트리플루오로아세트산(20 mL) 중의 6-메르캅토헥산산(7.10 g, 47.90 mmol)의 용액에 2,4-디메틸벤질 알콜(13.5 g, 95.80 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 60분 동안 교반한 다음, 트리플루오로아세트산을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 95.8 mL LiOH(3 M) 및 THF(81 mL)의 혼합물에 용해시키고 실온에서 60분 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 수성 잔류물을 EtOAc(200 mL)로 3회 추출하였다. 조합된 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 7을 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 2.27 g(8.52　mmol, 18 %)
MS: m/z 267.01 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 = 266.13).
실시예 8
링커 시약 8c의 합성
링커 시약 8c를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00262
이소프로판올(401 mL) 중의 1b(21.6 g, 27.18 mmol)의 용액에 물(130 mL) 및 LiOH(3.90　g, 163.06 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 톨루엔(300 mL)으로 희석하고 0.1 M HCl(200 mL)로 3회 세척하였다. 조합된 수성상을 톨루엔(100 mL)으로 3회 세척하였다. 수성상을 4M NaOH(4　mL)를 이용하여 pH 8.5로 염기성화하고, CH2Cl2(200 mL)로 8회 추출하였다. 조합된 CH2Cl2 상을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 8b를 용매의 증발시에 단리하고, 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
수율: 11.89 g(24.59　mmol, 90 %)
MS: m/z 484.16 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 = 483.26).
THF(10　mL) 중의 7(293 mg, 1.10 mmol) 및 PyBOP(572 mg, 1.10 mmol)의 용액에 N2-분위기하에 DIEA(0.52 mL, 3.00 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 60분 동안 교반하였다. THF(2 mL) 중의 8b(484 mg, 1.00 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응물을 60분 동안 더 교반하였다. 반응물을 2M 시트르산 용액(10 mL)으로 ?칭하고 THF를 진공에서 제거하였다. 그 후, 생성된 수성상을 EtOAc(15　mL)로 2회 추출하고, 조합된 유기층을 물(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하며, MgSO4 상에서 건조시켰다. 용매를 진공에서 제거하고, 8c를 RP HPLC로 정제하였다.
수율: 330 mg(0.451 mmol, 45 %)
MS: m/z 732.34 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 = 731.38).
실시예 9
링커 시약 9의 합성
링커 시약 9를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00263
디옥산(20 mL) 중의 8b(2.00 g, 4.14 mmol) 및 Fmoc-Cl(1.07　g, 4.14 mmol)의 용액에 1　M Na2CO3 용액(20 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하였다. 물(100 mL) 및 디에틸 에테르(100 mL)를 첨가하고, 수성상을 디에틸 에테르(100 mL)로 2회 추출하였다. 수성상을 농축 HCl로 pH 1까지 산성화하고, 다시 디에틸 에테르로 3회 추출하였다. 조합된 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 9를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
수율: 2.63 g(3.73　mmol, 90 %)
MS: m/z 728.32 = [M+Na]+,(계산된 단동위 질량 = 705.33).
실시예 10
가역적 Lys26 CNP -38 PEG2x20 kDa 접합체 10f의 합성
접합체 10f를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00264
Figure pct00265
Figure pct00266
Lys26의 Boc 보호된 N-말단 및 ivDde 보호된 측쇄를 갖는 CTC 수지상의 측쇄 보호된 2.00 g(0.21 mmol)의 CNP-38을 물질 및 방법에서 제공된 절차에 따라 ivDde를 탈보호시켜 10a를 수득하였다. DMF(5 mL) 중의 링커 시약 8c(336 mg, 046 mmol), PyBOP(239 mg, 0.46 mmol) 및 DIEA(182 μL, 1.04 mmol)의 용액을 실온에서 10분 동안 인큐베이션하고, 그 후 수지 10a에 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2시간 동안 흔들었다. 수지를 DMF(10 mL)로 10회 및 DCM(10 mL)으로 10회 세척하고, 진공에서 15분 동안 건조하였다. 수지를 15 mL 예냉된(-18℃) 절단 칵테일 68.5/10/10/5/3.5/1(v/w/v/v/v/v) TFA/DTT/티오아니솔/페놀/물/TIPS로 처리하여 수지로부터의 펩타이드의 절단 및 보호기의 제거를 달성하였다. 혼합물을 실온까지 가온시키고 60분 동안 진탕하였다. 수지를 여과 제거하고 조(crude) 10c를 예냉된 디에틸 에테르(-18℃) 내에서 침전시켰다. 침전물을 ACN/물에 용해시키고 RP-HPLC로 정제하였다. 조합된 HPLC 분획을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
MS: m/z 1124.60 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1124.59).
10c(250 mL)의 조합된 HPLC 분획에, 40 mL의 0.5M 시트르산 완충액(pH = 5.00) 및 1/1(v/v) 아세토니트릴/물 중의 2,2'-디티오비스(피리딘-N-옥시드) 용액의 0.01 M 용액 7 mL를 첨가하였다. 실온에서 5분 동안 인큐베이션 후, 반응을 완료시켰다. 혼합물을 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 500 mL 물로 희석하고, AcOH(20 mL)를 이용하여 대략 pH 2로 산성화하였다. 10d를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 101 mg(17.3　μmol, 9 % ) CNP-38-링커-Dmb * 10 TFA
MS: m/z 1124.10 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량= 1124.09).
30 mL 예냉된(-18℃) 절단 칵테일 100/5/3/2/1(v/v/w/v/v) TFA/MSA/DTT/물/티오아니솔을 10d(101 mg, 17.3 μmol)에 첨가하고 0℃에서 3시간 동안 교반함으로써 Dmb 보호기의 절단을 달성하였다. 조 10e를 예냉된(-18℃) 디에틸 에테르 내에서 침전시켰다. 임의의 TFA 에스테르를 가수분해하기 위해 침전물을 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 물에 용해시키고 10분 동안 인큐베이션하였다. 10e를 RP-HPLC로 정제하였다. 생성물 분획을 조합하고 동결 건조하였다.
수율: 46 mg(8.34　μmol, 48 %) CNP-38-링커-티올 * 10 TFA
MS: m/z 1094.58 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1094.57).
0.1% TFA(v/v)를 함유하는 1.15 mL 물 중의 10e(46 mg, 8.43 μmol)의 용액에 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 4.35 mL 물 중의 PEG 2x20 kDa 말레이미드(Sunbright GL2-400MA, 870 mg, 2175 μmol)의 용액을 첨가하고 이어서, 0.5M 락트산 완충액(1.07 mL, pH = 4.20)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 접합체 10f를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 233 mg(5.21　μmol, 62 %) 접합체 10f * 10 HCl
실시예 11
가역적 Lys26 CNP -38 PEG4x10 kDa 접합체 접합체 11i의 합성
접합체 11i를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00267
Figure pct00268
Figure pct00269
DMF(9 mL) 중의 9(353 mg, 0.50 mmol) 및 PyBOP(260 mg, 0.50 mmol)의 용액에 DIEA(105 μL, 0.60 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 Lys26-측쇄 탈보호된 CNP-38 수지 10a(2.00 g, 0.21 mmol) 위에 올리고, 수지 11a를 수득하기 위해 현탁액을 실온에서 2시간 동안 흔들었다. 수지를 DMF(7 mL)로 10회 세척하였다. 11a의 Fmoc 보호기의 절단을 DMF(47 mL) 중의 HOBt(0.68 g, 5.03 mmol) 및 피페라진(3.00 g, 34.83 mmol)의 용액으로 수행하였다. 따라서, 수지를 각각의 시간의 실온에서 15분 동안 10 mL의 절단 혼합물과 함께 5회 인큐베이션하였다. 그 후, 수지를 DMF(7 mL)로 7회 세척하였다.
DMF(9 mL) 중의 Fmoc-Lys(Fmoc)-OH(449 mg, 0.76 mmol), COMU(325 mg, 0.76 mmol) 및 DIEA(165 μL, 0.95 mmol)의 용액을 제조하고, 수지 위에 올렸다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 흔들었다. 새롭게 제조된 결합 혼합물로 각각 1시간 동안 절차를 2회 반복하였다. 수지를 DMF(7 mL)로 10회 세척하고, 잔류하는 유리 아미노기를 8 mL 1/1/2(v/v/v) Ac2O/피리딘/DMF로 캡핑(capping)하였다.
11c의 Fmoc 보호기의 절단을 DMF(47 mL) 중의 HOBt(0.68 g, 5.03 mmol), 피페라진(3.00 g, 34.83 mmol)의 용액으로 수행하였다. 따라서, 수지를 각각의 시간에 실온에서 15분 동안 10 mL의 절단 혼합물과 함께 5회 인큐베이션하였다. 수지를 DMF(7 mL)로 7회 세척하였다.
DMF(9 mL) 중의 7(266 mg, 1.00 mmol) 및 PyBOP(520 mg, 1.00 mmol)의 용액에 DIEA(209 μL, 1.20 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 수지 위에 올리고 실온에서 2시간 동안 흔들었다. 수지를 DMF(7 mL)로 7회 세척하여 수지 11e를 수득하였다. 수지를 15 mL 예냉된(-18℃) 절단 칵테일 68.5/10/10/5/3.5/1(v/w/v/v/v/v) TFA/DTT/티오아니솔/페놀/물/TIPS로 처리함으로써 수지로부터의 펩타이드의 절단 및 보호기의 제거를 달성하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 3시간 동안 실온에서 진탕하였다. 수지를 여과 제거하고 조 11f를 예냉된(-18℃) 디에틸 에테르 내에서 침전시키고, RP-HPLC로 정제하였다. 조합된 HPLC 분획을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
MS: m/z 1218.66 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1218.65).
11f(1 L)의 조합된 HPLC 생성물 분획에, 9/1(v/v) 아세토니트릴/물 중의 160 mL의 0.5 M 시트르산 완충액(pH = 5.00) 및 100 mL의 50 mM 2,2'-디티오비스(피리딘-N-옥시드) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 후 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 1L의 물로 희석하였다. 11g를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 64.3 mg(10.7　μmol, 6 % ) CNP-38-링커-DMB * 10 TFA
MS: m/z 1218.15 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량= 1218.14).
45 mL의 예냉된(-18℃) 절단 칵테일 100/5/3/2/1(v/v/w/v/v) TFA/MSA/DTT/물/티오아니솔을 11g(61.8 mg, 10.3 μmol)에 첨가하고, 그 후 0℃에서 4시간 동안 교반하여 Dmb 보호기의 절단을 달성하였다. 조 11h를 예냉된(-18℃) 에테르에서 침전시켰다. 임의의 TFA 에스테르를 가수분해하기 위해 침전물을 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 1/1(v/v) 아세토니트릴/물의 용액에 용해시키고 실온에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 11h를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 38.4 mg(6.65　μmol, 65 %) CNP-38-링커-티올 * 10 TFA
MS: m/z 1159.11 = [M+4H]4+,([M+4H]4+ 에 대한 계산된 단동위 질량= 1159.10).
0.1% TFA(v/v)를 함유하는 1 mL 물 중의 11h(34.6 mg, 5.99 μmol)의 용액에 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 6.1 mL 물 중의 PEG 2x10 kDa 말레이미드(Sunbright GL2-200MA, 1.12 g, 56.03 μmol)의 용액을 첨가하고 이어서, 0.5 M 락트산 완충액(1.46 mL, pH = 4.00)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 접합체 11i를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 227 mg(4.96　μmol, 83 %) 접합체 11i * 10 HCl
실시예 12
영구적 Lys26 CNP -38 PEG4x10 kDa 접합체 12g의 합성
접합체 12g를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00270
Figure pct00271
DMF(4.6 mL) 중의 Fmoc-Lys(Fmoc)-OH(365 mg, 0.62 mmol) 및 PyBOP(322 mg, 0.62 mmol)의 용액에 DIEA(0.11 mL, 0.62 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 수지 10a(2.0 g, 0.21 mmol) 위에 올렸다. 현탁액을 실온에서 2시간 동안 흔들었다. 수지를 DMF(7 mL)로 10회 세척하였다. 12a의 Fmoc 보호기의 절단을 DMF(94 mL) 중의 HOBt(1.35 g, 9.99 mmol), 피페라진(6.00 g, 69.66 mmol)의 용액으로 수행하였다. 따라서, 수지를 각각의 시간 실온에서 15분 동안 절단 혼합물과 함께 5회 인큐베이션하여, 수지 12b를 수득하였다. 그 후 수지를 DMF(7 mL)로 7회 세척하였다.
DMF(6.5 mL) 중의 7(283 mg, 1.06 mmol) 및 PyBOP(552 mg, 1.06 mmol)의 용액에, DIEA(185 μL, 1.06 mmol)를 첨가하고 혼합물을 수지 12b(2.07 g, 0.10　mmol/g, 0.21 mmol) 위에 올렸다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 흔들었다. 그 후, 수지를 DMF(7 mL) 및 CH2Cl2(7 mL)로 각기 10회 세척하고 진공에서 건조시켰다.
수지를 15 mL 예냉된(-18℃) 절단 칵테일 68.5/10/10/5/3.5/1(v/w/v/v/v/v) TFA/DTT/티오아니솔/페놀/물/TIPS로 처리함으로써 수지로부터의 펩타이드의 절단 및 보호기의 제거를 달성하였다. 혼합물을 실온으로 가온시키고, 2.5시간 동안 진탕하였다. 수지를 여과로 제거하고 조 12d를 예냉된 디에틸 에테르(-18℃) 내에서 침전시키고 RP-HPLC로 정제하였다. 조합된 HPLC 분획을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
MS: m/z 1172.37 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1172.37).
12d의 조합된 HPLC 생성물 분획(390 mL)에, 1/1(v/v) 아세토니트릴/물 중의 58.5 mL의 0.5 M 시트르산 완충액(pH = 5.00) 및 8.9 mL의 10 mM 2,2'-디티오비스(피리딘-N-옥시드) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고 그 후 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 400 mL의 물로 희석하였다. 12e를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 100 mg(17.5　μmol, 6단계 동안 8 %) CNP-38-링커-Dmb * 9 TFA
MS: m/z 1171.87 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1171.86).
65 mL 예냉된(-18℃) 절단 칵테일 100/5/3/2/1(v/v/w/v/v) TFA/MSA/DTT/물/티오아니솔을 12e(100 mg, 17.5 μmol)에 첨가하고 0℃에서 3.5시간 동안 교반함으로써 Dmb 보호기의 절단을 달성하였다. 조 12f를 예냉된(-18℃) 디에틸 에테르 내에서 침전시켰다. 임의의 TFA 에스테르를 가수분해하기 위해 침전물을 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 물에 용해시키고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 12f를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 43.4 mg(7.92　μmol, 45 %) CNP-38-링커-티올 * 9TFA
MS: m/z 1112.83 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1112.82).
0.1% TFA(v/v)를 함유하는 1 mL 물 중의 12f(39.6 mg, 7.22 μmol)의 용액에 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 6.16 mL 물 중의 PEG 2x10 kDa 말레이미드(Sunbright GL2-200MA, 1.22 g, 59.94 μmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 0.5 M 락트산 완충액(1.41 mL, pH = 4.20)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 접합체 12g를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 204 mg(4.48　μmol, 57 %) 접합체 12g * 9 HCl
실시예 13
PEG5kDa 티올 13c의 합성
PEG5kDa 티올 13c를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00272
DCM(1.00 mL) 중의 13b(58.6 mg, 0.15 mmol), HOBt(22.9 mg, 0.15 mmol) 및 EDC 히드로클로라이드(28.8 mg, 0.15 mmol)의 용액에, 2,4,6-콜리딘(121 mg, 1.00 mmol)을 첨가하였다. 그 후, DCM(4.00 mL) 중의 메톡시 PEG 아민 5 kDa 13a(500 mg, 0.10 mmol)의 용액을 첨가하고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 혼합물을 ACN/물에 용해시키고 RP-HPLC로 정제하였다. 용매의 양을 진공에서 감소시키고 수성 잔류물을 DCM(1 x 100 mL, 2 x 50 mL)으로 추출하였다. 조합된 유기층을 진공에서 20 mL로 감소시켰다. TFA(1.6 mL) 및 TES(3.5 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4.5시간 동안 교반하였다. 13c를 디에틸 에테르 내에서 침전시키고, -20℃에서 밤새 보관하며, 여과하고 진공에서 건조시켰다.
수율: 372 mg(72　μmol, 72 %)
실시예 14
영구적 N-말단 CNP -34 PEG 5 kDa 접합체 14e의 합성
접합체 14e를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00273
유리 N-말단 14a를 갖는 TCP 텐타겔 수지상의 측쇄 보호된 CNP-34(0.78 g, 70 μmol)를 30분 동안 DMF에서 미리 팽윤시켰다. DMF(6 mL) 중의 말레이미도 헥산산(85.3 mg, 0.40 mmol), DIC(50.9 mg, 0.40 mmol) 및 Oxyma(57.4 mL, 0.40 mmol)의 용액을 수지 위에 올리고 혼합물을 실온에서 30분 동안 흔들었다. 그 후 새롭게 제조된 결합 용액으로 결합을 1회 반복하였다. 수지를 DMF 및 CH2Cl2로 각각 10회 세척하고, 진공에서 건조시켜 14b를 수득하였다.
수지를 6 mL 절단 칵테일 100/3/2/1(v/v/v/v) TFA/TES/물/티오아니솔로 실온에서 1.5시간 동안 처리함으로써 수지로부터의 펩타이드의 절단 및 보호기의 제거를 달성하였다. 조 펩타이드를 예냉된(-18℃) 디에틸 에테르 내에서 침전시켰다.
MS: m/z 937.77 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 937.74).
침전물을 15 mL TFA에 용해시켰다. 5 mL TFA 중의 디페닐술폭시드(68.06 mg, 0.34 mmol) 및 아니솔(0.18 mL, 1.68 mmol)의 용액을 첨가하였다. 트리클로로메틸실란(0.47 mL, 4.17 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 플루오르화 암모늄(0.38 g, 10.3 mmol)을 첨가하고, 용액을 2분 동안 더 진탕하였다. 조 물질을 예냉된(-18℃) 디에틸 에테르 내에서 침전시키고, RP-HPLC로 정제하여 14d를 수득하였다.
수율: 8.30 mg(1.78　μmol, 82 % 순도, 3단계 동안 1.4 %) CNP-34-Malhx * 8 TFA
MS: m/z 937.26 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 937.23).
0.1% TFA(v/v)를 함유하는 200 μL 1/1(v/v) 아세토니트릴/물 중의 14d(7.34 mg, 1.57 μmol)의 용액에 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 200 μL 물 중의 13c(20 mg, 3.90 μmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 200 μL 0.5 M 아세테이트 완충액(pH = 5.00)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 접합체 14e를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 9.92 mg(1.01　μmol, 57 %) 접합체 14e * 8 TFA
실시예 15
영구적 N-말단 CNP -38 PEG 5kDa 접합체 15e의 합성
접합체 15e를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00274
Figure pct00275
15e
유리 N-말단 15a를 갖는 TCP 텐타겔 수지상의 측쇄 보호된 CNP-38(1.34 g, 0.12 mmol)을 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14d에 대하여 기재된 바와 같이 화합물 15d를 합성하였다.
수율: 15.6 mg(2.94　μmol, 6.6 %) CNP-38-Malhx * 9 TFA
MS: m/z 1064.05 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1064.04).
15d(8.34 g, 1.58 mmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14e에 대하여 기재된 바와 같이 접합체 15e를 합성하였다.
수율: 9.47 mg(0.91　μmol, 31 %) 접합체 15e * 9 TFA
실시예 16
영구적 Lys12 CNP -34 PEG 5 kDa 접합체 16e의 합성
접합체 16e를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00276
Figure pct00277
Lys12의 Boc 보호된 N-말단 및 ivDde 보호된 측쇄를 갖는 TCP 텐타겔 수지상의 측쇄 보호된 1.00 g(0.10 mmol)의 CNP-34를 물질 및 방법에서 제공된 절차에 따라 ivDde를 탈보호시켜 16a를 수득하였다.
수지 16a(1.00 g, 0.10 mmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14d에 대하여 기재된 바와 같이 화합물 16d를 합성하였다.
수율: 17.0 mg(3.65　μmol, 3.7 %) CNP-34-Lys12-Malhx * 8 TFA
MS: m/z 937.25 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 937.23).
16d(17 mg, 3.65 μmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14e에 대하여 기재된 바와 같이 접합체 16e를 합성하였다.
수율: 12.2 mg(1.25　μmol, 34 %) 접합체 16e * 8 TFA
실시예 17
영구적 Lys16 CNP -34 PEG 5 kDa 접합체 17e의 합성
접합체 17e를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00278
Lys16의 Boc 보호된 N-말단 및 ivDde 보호된 측쇄를 갖는 TCP 텐타겔 수지상의 측쇄 보호된 0.78 g(0.07 mmol)의 CNP-34를 물질 및 방법에서 제공된 절차에 따라 ivDde를 탈보호시켜 17a를 수득하였다.
수지 17a(0.78 g, 0.13 mmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14d에 대하여 기재된 바와 같이 화합물 17d를 합성하였다.
수율: 5.39 mg(1.16　μmol, 1.7 %) CNP-34-Lys16-Malhx * 8 TFA
MS: m/z 937.26 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 937.23).
17d(5.39 mg, 1.16 μmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14e에 대해 기재된 바와 같이 접합체 17e를 합성하였다.
수율: 10.7 mg(1.09　μmol, 94 %) 접합체 17e * 8 TFA
실시예 18
영구적 Lys22 CNP -34 PEG 5 kDa 접합체 18e의 합성
접합체 18e를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00279
Lys22의 Boc 보호된 N-말단 및 ivDde 보호된 측쇄를 갖는 TCP 텐타겔 수지상의 측쇄 보호된 1.07 g(0.11 mmol)의 CNP-34를 물질 및 방법에서 제공된 절차에 따라 ivDde를 탈보호시켜 18a를 수득하였다.
수지 18a(1.07 g, 0.11 mmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14d에 대해 기재된 바와 같이 화합물 18d를 합성하였다.
수율: 5.20 mg(1.12　μmol, 1.0 %) CNP-34-Lys22-Malhx * 8 TFA
MS: m/z 937.26 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 937.23).
18d(5.2 mg, 1.12 μmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14e에 대하여 기재된 바와 같이 접합체 18e를 합성하였다.
수율: 4.20 mg(0.43　μmol, 38 %) 접합체 18e * 8 TFA
실시예 19
영구적 Lys26 CNP -38 PEG 5 kDa 접합체 19e의 합성
접합체 19e를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00280
Lys26의 Boc 보호된 N-말단 및 ivDde 보호된 측쇄를 갖는 TCP 텐타겔 수지상의 측쇄 보호된 CNP-38(0.865 g, 0.10 mmol)을 물질 및 방법에서 제공된 절차에 따라 ivDde를 탈보호시켜 19a를 수득하였다.
수지 19a(0.865 g, 0.10 mmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14d에 대하여 기재된 바와 같이 화합물 19d를 합성하였다.
수율: 10.3 mg(1.95　μmol, 2.0 %) CNP-38-Lys26-Malhx * 9 TFA
MS: m/z 1064.05 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1064.04).
19d(4.70 mg, 1.10 μmol)를 출발 물질로서 사용하였다는 것을 제외하고, 14e에 대하여 기재된 바와 같이 접합체 19e를 합성하였다.
수율: 3.20 mg(0.31　μmol, 28 %) 접합체 19e * 9 TFA
실시예 20
시험관 내 방출 동역학
CNP 접합체 10f 및 11i를 대략 1 mg 접합체/mL의 농도로 3 mM EDTA 및 10 mM 메티오닌, pH 7.4를 함유하는 PBS 완충액에서 용해시켰다. 용액을 멸균 여과하고, 37℃에서 인큐베이션하였다. 시점에서 분취량을 회수하고 RP-HPLC 및 ESI-MS로 분석하였다. 유리된 CNP와 관련이 있는 UV-신호를 통합하고 인큐베이션 시간에 대해 플롯팅하였다.
곡선-피팅 소프트웨어를 적용하여 상응하는 방출의 하프타임을 추정하였다.
결과:
접합체 10f의 경우, 8.5일(± 1일)의 방출 반감기 시간을 얻었다.
접합체 11i의 경우, 9.5일(± 1.5일)의 방출 반감기 시간을 얻었다.
실시예 21
시험관 내에서 중성 엔도펩티다아제에 의한 CNP 변이체의 소화
중성 엔도펩티다아제(NEP)의 존재하에 상이한 페길화(PEGylation) 부위 및 PEG 분자를 사용하여 상이한 펩타이드 사슬 길이 및 페길화를 포함하는 다양한 CNP 변이체의 시험관 내 안정성을 결정하기 위해, NEP 소화 어세이를 확립하였다. 본 어세이는 t0-시점 대비 시간 경과에 따른 비소화된 CNP 변이체(내부 표준 PFP로 정규화됨)의 감소를 모니터링 하였다.
상세하게는, 재조합 인간 NEP(2.5 μg/mL 최종 농도) 및 표준 펜타플루오로페놀(PFP; 40 μg/mL 최종 농도)을 소화 완충액(50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 10 mM NaCl) 중의 CNP 변이체(100 μg CNP 당량/mL)에 첨가하였다. 용액을 최대 4일 동안 37℃ 및 500 rpm에서 인큐베이션하였다. 샘플을 상이한 시간 간격으로 채취하였다. TCEP(트리스(2-카르복시에틸)포스핀; 25 mM 최종 농도)를 첨가하고 혼합물을 5분 동안 95℃, 500 rpm에서 인큐베이션하는 조합 환원 및 열 변성에 의해 상기 반응을 정지시켰다. 생성된 반응 생성물을 HPLC-MS를 사용하여 할당하였다. 각각의 CNP 변이체의 반감기를 시간 경과에 따른 CNP 및 PFP의 HPLC-UV 피크 영역의 비율 변화를 통해 계산하였다. 프로테아제 활성의 편차를 보상하기 위해, CNP-38 또는 CNP-34 소화를 기준으로서 모든 배치(batch) 측정에서 수행하였다.
표 1은 상이한 길이이며, 상이한 측쇄에 부착된 다양한 PEG를 분자를 갖는, 다양한 CNP 변이체의 시험관 내 NEP 절단 어세이를 근거로한 반감기를 열거한다.
Figure pct00281
1) 실험 간의 NEP 촉매 활성의 편차로 인해, 모든 CNP-34 반감기 측정(4.15시간)의 평균이 형성되었고, CNP-34 접합체의 반감기 측정은 조정된 t1/ 2을 계산하기 위해 계수를 사용하여 이 평균에 대해 정규화되었다.
2) 실험 간의 NEP 촉매 활성의 편차로 인해, 모든 CNP-38 반감기 측정(12.10시간)의 평균이 형성되었고, CNP-38 접합체의 반감기 측정은 조정된 t1/ 2을 계산하기 위해 계수를 사용하여 이 평균에 대해 정규화되었다.
NEP에 대한 내성의 순위는 하기와 같다: 더 긴 CNP-변이체(CNP-38)는 더 짧은 CNP 변이체(CNP-34)보다 더 안정하며, 이는 결국 더 짧은 CNP-22보다 더 안정하다. PEG-부착 부위의 순서는 하기와 같다: N-말단 > 고리 옆 > 고리. 따라서, N-말단 PEG 부착은 시험된 접합체에 대하여 NEP를 이용한 단백질분해 소화에 대해 가장 높은 안정성을 부여한다. Lys26에서 페길화된 CNP-38의 안정성은 PEG 크기가 증가함에 따라 증가될 수 있다.
실시예 22
CNP 변이체를 갖는 NIH -3T3 세포에서 기능적 cGMP 자극
CNP 변이체의 기능적 활성을 NIH-3T3 세포(뮤린 배아 섬유모세포 세포주)를 이용한 세포 기반 어세이에서 결정하였다. 이들 세포는 세포 표면상에서 NPR-B 수용체를 내인성으로 발현한다. NPR-B 수용체를 CNP로 자극하는 것은 이차 메신저 cGMP의 세포 내 생산을 야기하며, 이는 상업적으로 이용 가능한 cGMP 어세이로 검출된다. NIH-3T3 세포를 37℃ 및 5% CO2에서 5% FBS 및 5 mM 글루타민을 갖는 DMEM F-12 배지에서 일상적으로 배양하였다. 각각의 어세이를 위해, 50,000개의 세포를 자극 완충액(IBMX를 갖는 둘베코 PBS)에 재현탁시키고, 상이한 농도에서 CNP 변이체와 함께 인큐베이션하였다. CNP(0.2% BSA를 갖는 PBS 내에서 희석됨). 37℃ 및 5% CO2에서 30분 인큐베이션 후, 세포를 용해시키고, cGMP 수준을 상업적으로 이용 가능한 cGMP TR-FRET 어세이(Cisbio, cGMP 키트, 카탈로그 번호 62GM2PEB)를 이용하여 결정하였다. 페길화된 CNP 변이체를 항상 동일한 실험 배치 내의 비페길화된 형태와 비교하여 특징지었다. 가능하다면, 잔류 활성을 생성된 용량-반응 곡선(공통 기울기를 갖는 제한된 모델)의 상대 EC50-파라미터를 통해 평가하였다.
Figure pct00282
시험된 PEG 부착 부위와 비교하여, Lys26(고리-라이신)에서의 부착은 가장 높은 기능적 활성 감소를 나타내었으며, 한편 N-말단 부착은 상대적으로 높은 잔류 기능적 활성 값을 나타내었다. PEG 크기의 증가는 CNP 분자의 더 우수한 차폐(shielding) 및 더 낮은 잔류 기능적 활성을 초래하였다.
실시예 23
매일 피하 볼루스 주사 또는 지속적인 피하 주입에 의한 CNP -38을 이용한 5주 처리후 FVB 마우스에서의 성장 연구
CNP-38의 매일 피하 볼루스 주사 대 지속적인 피하 주입이 동물 성장에 미치는 효과를 시험하기 위해 본 연구를 수행하였다. 21 내지 22일령의 야생형 FVB 수컷 마우스(n=9/군)에게 35일간 견갑골 부위에 매일 피하 볼루스 주사 또는 지속적인 피하 주입에 의해 50 nmol/kg/d CNP-38 또는 비히클(5% 수크로오스 및 1% 벤질 알콜을 함유하는 30 mM 아세테이트 pH 4)을 제공하였다. 지속적인 주입은 알제트(Alzet) 삼투압 펌프 모델 1002에 의해 1-2주 동안 적용한 다음, 모델 1004에의해 3-5주 동안 적용하였다. 펌프 내의 CNP-38 농도를 연구 7일(펌프 모델 1002) 또는 연구 25일(펌프 모델 1004)에 평균 동물 체중에 대해 조정하였다. 성장을 35일에 총 신체 길이 측정 및 우측 대퇴골 및 경골의 X선 측정에 의해 결정하였다.
매일 피하 볼루스 주사에 의해 처리된 동물의 결과: 35일에, 비히클 처리된 동물과 비교하여, CNP-38 처리된 동물의 총 신체 길이는 110.2%였고, 우측 대퇴골 길이는 105.6%였으며, 우측 경골 길이는 104.0%였다.
지속적인 피하 주입에 의해 처리된 동물의 결과: 35일에, 비히클 처리된 동물과 비교하여, CNP-38 처리된 동물의 총 신체 길이는 121.7%였고, 우측 대퇴골 길이는 107.5%였으며, 우측 경골 길이는 112.2%였다.
CNP-38의 지속적인 피하 주입 또는 관련된 저속 방출 제형(예컨대, 저속 방출하는 CNP-38 전구약물)은 부속(appendicular) 및 중축(axial) 골격에서의 성장을 유도하는데 있어 매일 피하 볼루스 주사보다 적어도 더 효과적인 것으로 결론지었다.
실시예 24
시노몰구스 원숭이에서 영구적 Lys26 CNP -38 PEG4x10 kDa 접합체 12g의 약동학 연구
시노몰구스 원숭이에서 저속 방출 CNP-38 전구약물에 대한 모델 화합물로서 12g의 적합성을 보여주기 위해 본 연구를 수행하였다. 수컷 시노몰구스 원숭이(2-4 연령, 3.5-4.1 kg)는 0.146 mg CNP-38 eq/kg 용량으로 12g를 단일 정맥 내(n = 3마리 동물) 또는 단일 피하(n = 2마리 동물) 투여로 수여 받았다. 혈액 샘플을 투약 후 168시간까지 수집하였고, 혈장이 생성되었다. 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 트립신 소화 후 N-말단 서명 펩타이드(서열: LQEHPNAR) 및 C-말단 서명 펩타이드(서열: IGSMSGLGC)의 정량화에 의해 혈장 총 CNP-38 농도를 결정하였다.
결과: 용량 투여는 투여 동안 및 투여 후에 눈에 띄는 불쾌한 징후 없이 잘 용납되었다. 연구 내내 어느 시점에도 용량 부위 반응이 관찰되지 않았다. 정맥 내 주사 후, CNP-38 tmax가 15분(분석된 가장 빠른 시점)에서 관찰되었고, 이어서 대략 24시간의 반감기로 CNP-38 함량이 저속 붕괴하였다. 피하 주사 후, CNP-38 농도는 48시간의 tmax에서 최고였다. 168시간에, CNP-38 농도는 여전히 cmax의 약 50% 정도로 높았다. 생체이용률은 약 50%였다.
유사한 PK 곡선이 투약 후 168시간까지 N- 및 C-말단 서명 펩타이드에 대해 수득되었으며, 이는 접합체 내에 온전한 CNP-38이 존재한다는 것을 나타낸다.
며칠 동안 양호한 오래 지속되는 PK 및 접합체에서의 CNP-38의 안정성은 피하 주사 후 저속 방출하는 CNP-38 전구약물로서 영구적 모델 화합물 Lys26 CNP-38 PEG 4x10 kDa 접합체 12g의 적합성을 나타낸다. 일시적으로 Lys26 연결된 CNP-38(예컨대, 11i)을 갖는 유사한 접합체는 며칠 동안 방출된 생물활성 CNP-38의 오래 지속되는 수준을 제공하는 적합한 CNP-38 전구약물인 것으로 결론내릴 수 있다.
실시예 25
시노몰구스 원숭이에서 일시적인 접합체 10f 및 11i의 약동학 연구
시노몰구스 원숭이에서 저속 방출 CNP-38 전구약물로서 10f 및 11i의 적합성을 보여주기 위해 본 연구를 수행하였다. 수컷 시노몰구스 원숭이(2-4 연령, 3-5 kg)는 0.146 mg CNP-38 eq/kg 용량으로 화합물 10f를 단일 피하 투여(n = 3마리 동물) 또는 11i를 단일 피하 투여(n = 3마리 동물)로 수여 받았다. 혈액 샘플을 투약 후 168시간까지 수집하였고, 혈장이 생성되었다. 총 CNP-38 함량의 혈장 수준을 실시예 24에 기재된 바와 같이 분석하였다. 유리 CNP-38의 혈장 함량을 분석하기 위해, 혈액 샘플은 회수 후 20 부피%의 0.5 M 소듐 시트레이트 완충액 pH 4를 첨가함으로써 산성화되어 접합체로부터 추가적인 CNP-38 방출을 정지시켰다. 혈장 내의 유리 CNP-38 수준은, 예컨대, 문헌(US 특허 8,377,884 B2)에 기재된 바와 같이 CNP의 고리 영역에 결합하는 CNP 항체를 사용한 ELISA에 의해, 또는 LC-MS/MS에 의해 결정될 수 있다.
결과: 용량 투여는 투여 동안 및 투여 후에 눈에 띄는 불쾌한 징후 없이 잘 용납되었다. 연구 내내 어느 시점에도 용량 부위 반응이 관찰되지 않았다. 용량 투여 후 총 CNP-38 tmax가 화합물 10f에 대하여 12시간에서 관찰되었고 화합물 11i에 대하여 24시간에서 관찰되었다. 총 CNP-38 혈장 수준은 화합물 10f에 대하여 120 시간 후 LOQ(100 ng/mL, C-말단 펩타이드) 미만이었고, 한편 혈장 수준은 화합물 11i에 대하여 168시간 후(C-말단 펩타이드) 여전히 약 Cmax의 30 % 만큼 높았다. 화합물 11i에 대하여 3-4일의 유사한 최종 반감기가 C-말단 및 N-말단 펩타이드에 대하여 발견되었으며, 이는 접합체 내에 온전한 CNP-38이 존재한다는 것을 나타낸다.
결론: 며칠 동안 양호한 오래 지속되는 PK 및 접합체 11i에서의 CNP-38의 안정성은 며칠 동안 방출된 생물활성 CNP-38의 오래 지속되는 수준을 제공하기 위한 CNP-38 전구약물로서의 이의 적합성을 나타낸다.
실시예 27
플루오레세인 표지된 CNP -38 27d의 합성 및 NPR -C 친화도 어세이
화합물 27d를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00283
Figure pct00284
유리 N-말단 27a를 갖는 TCP 텐타겔 수지상의 측쇄 보호된 CNP-38(0.50 g, 35.4 μmol)를 30분 동안 DMF에서 미리 팽윤시켰다. DMF(1.6 mL) 중의 5(6)-카르복시플루오레세인-N-숙신이미딜 에스테르(41.9 mg, 88.5 μmol) 및 DIEA(30.9 μL, 177 μmol)의 용액을 수지 위에 올리고 혼합물을 실온에서 밤새 흔들었다. 수지를 DMF 및 CH2Cl2로 각각 10회 세척하고, 진공에서 건조시켜 27b를 수득하였다.
수지를 7 mL 절단 칵테일 100/3/3/2/1(v/w/v/v/v) TFA/DTT/TES/물/티오아니솔로 실온에서 1시간 동안 처리함으로써 수지로부터의 펩타이드의 절단 및 보호기의 제거를 달성하였다. 수지를 여과 제거하고 조 27c를 예냉된(-18℃) 디에틸 에테르 내에서 침전시키고 RP-HPLC로 정제하여 27c를 수득하였다. 조합된 HPLC 분획은 다음 단계에서 직접 사용하였다.
MS: m/z 1105.80 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1105.81).
27c의 조합된 HPLC 생성물 분획(115 mL)에, 1/1(v/v) 아세토니트릴/물 중의 30 mL의 0.5 M 시트르산 완충액(pH = 5.00) 및 8 mL의 10 mM 2,2'-디티오비스(피리딘-N-옥시드) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 60분 동안 교반하고 그 후 0.1% TFA(v/v)를 함유하는 350 mL의 물로 희석하였다. 27d를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 16.1 mg(2.90　μmol, 3단계 동안 8.2 %) 표지된 CNP-38 * 10 TFA
MS: m/z 1105.30 = [M+4H]4+,([M+4H]4+에 대한 계산된 단동위 질량 = 1105.30).
NPR-C 친화도 어세이를 위해, NPR-C 발현 Hek293 세포주가 개발되었다. 구성 수용체 발현을 위해 NPR-C 서열(BC131540)의 코딩 영역을 CMV 프로모터 하에서 렌티바이러스 벡터 내로 클로닝 하였다. 푸로마이신 내성을 위한 벡터 상에 위치한 바이시스트로닉 엘리먼트를 진핵 세포 선별 마커로 사용하였다. 형질 도입 후, 부모 Hek293 세포와 비교하여 수용체 mRNA-발현을 확인하기 위하여 안정적으로 성장하는 세포 풀(pool)은 qRT-PCR을 수행하였다. NPR-C 발현 세포 풀을 CNP 샘플 시험을 위한 마스터 세포 뱅크로 확장 및 동결하였다.
어세이를 위해, 성장 세포를 셀 플라스크 바닥에서 트립신 처리하고, 카운트하며, 96-웰 플레이트(1.5 x 105/웰)에 시딩하고 원심 분리 하였다. 상청액은 버렸다. CNP 표준 및 샘플을 PBS 0.2 % BSA에서 9단계에 걸쳐 연속적으로 희석하고 마이크로 플레이트에 이중으로 옮기고 세포와 혼합하였다. 실온에서 30분 인큐베이션 후, 플루오레세인 표지된 CNP 27d를 일정한 농도로 각각의 웰에 첨가하고, 세포를 실온에서 추가로 45분 동안 인큐베이션하였다. 후속하여, FITC 채널(FL1, Beckman Coulter FC500MPL)의 평균 형광 강도를 판독 값으로 사용하는 유동 세포 계수법으로 세포를 분석하였다.
표준 곡선 및 샘플 곡선은 효능 및/또는 IC50 계산을 위해 4PL 핏을 사용하는 분석 소프트웨어(PLA 2.0)에서 생성되었다.
Figure pct00285
실시예 29
Asn -링커 시약 29b의 합성
Asn-링커 시약 29b를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00286
이소프로판올(238 mL) 중의 1b(12.85 g, 16.14 mmol)의 용액에, H2O(77.5 mL) 및 LiOH(2.32 g, 96.87 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 톨루엔(300 mL)으로 희석하였다. 상을 분리하고 유기 상은 0.1 M HCl(200 mL)로 3회 세척하였다. 상을 다시 분리하였다. 수성 상을 톨루엔(100 mL)으로 3회 추출하였다. 생성물을 산성 수성 상에서 발견하였고, 이 상의 pH 값은 4N NaOH를 첨가하여 pH 8.5로 조정하였다. 그 후, 수성 상을 CH2Cl2(200 mL)로 3회 추출하였다. 유기 상을 염수(50 mL)로 세척, Na2SO4 상에서 건조, 및 여과하였다. 29a를 용매의 증발시에 단리하고 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
수율: 6.46 g(13.36　mmol, 83%)
MS: m/z 484.06 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 =483.26).
THF(70 mL) 중의 6-말레이미도헥산산(1.73 g, 8.19 mmol)의 용액에 PyBOP(4.26　g, 8.19 mmol) 및 DIEA(3.89 mL, 22.33 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 후, 29a(3.60 g, 7.44 mmol)를 THF(10 mL)에 용해시키고 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 메틸-tert-부틸에테르(300 mL)를 첨가하였다. 유기 상을 0.1M HCl 용액(200 mL)으로 2회 세척하였다. 조합된 수성 상을 메틸-tert-부틸에테르(200　mL)로 2회 추출하였다. 조합된 유기 상을 염수(150 mL)로 세척, Na2SO4 상에서 건조 및 여과하였다. 용매를 진공에서 증발시켰다. 29b는 플래쉬 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.
수율: 3.34 g(4.94　mmol, 66%)
MS: m/z 677.34 = [M+H]+,(계산된 단동위 질량 =676.33).
실시예 30
4- 아암 - 티올 - PEG 40kDa 30c의 합성
4-아암-티올 PEG 30c를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00287
CH2Cl2(5 mL) 중의 6-트리틸메르캅토-헥산산(111.72 mg, 286.02 μmol), HOBt(43.81 mg, 286.06 μmol) 및 EDC*HCl(54.84 mg, 286.06 μmol)의 용액에 2,4,6-콜리딘(251 μL, 1.91 mmol)을 첨가하였다. 그 후, 이 용액을 CH2Cl2(10 mL) 중의 4-아암 아미노 PEG 40 kDa(NOF, Sunbright PTE-400PA, 1.30 g, 31.78 μmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 용매를 증발시켰다(수조 30℃). 30b를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 650.5 mg(48%).
절단 칵테일(DTT 500　mg/TFA 500 μL/물 500 μL, TES 2.5 mL/HFIP 5.0 mL/CH2Cl2 25.0 mL)을 30b(500 mg, 11.79 μmol)에 첨가하고 실온에서 30분간 인큐베이션하여 Trt 보호기의 절단을 달성하였다. 예냉된(-18℃) 디에틸 에테르 내에서 침전 후 30c를 수득하였다.
수율: 401.3 mg(82%; 93.3% 순도).
실시예 31
접합체 31d의 합성
접합체 31d를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00288
Figure pct00289
DMF(42.5 mL) 중의 링커 시약 29b(3.82　g, 5.64 mmol), OxymaPure(802 mg, 5.64 mmol) 및 DIC(868 μL, 5.64 mmol)의 용액을 수지 10a(18 g, 1.85 mmol)에 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 100분 동안 흔들어 수지 31a를 수득하였다. 수지를 DMF(10 mL)로 10회 및 DCM(10 mL)으로 10회 세척하고, 진공에서 15분 동안 건조시켰다. 수지를 135 mL 절단 칵테일 100/3/2/1(v/v/v/v) TFA/TES/물/티오아니솔로 처리하여 수지로부터의 펩타이드의 절단 및 보호기의 제거를 달성하였다. 혼합물을 실온에서 60분 동안 진탕하였다. 조 31b를 예냉된 디에틸 에테르(-18℃) 내에서 침전시켰다.
침전물을 TFA(423 mL)에 용해시켰다. 이 용액에, TFA(40 mL) 중의 디페닐 술폭시드(1.87 g, 9.25 mmol) 및 아니솔(5.05 mL, 46.25 mmol)의 용액을 첨가하였다. 그 후 트리클로로메틸실란(13.3 mL, 114.7 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물은 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, 플루오르화 암모늄(10.96 g, 296 mmol)을 첨가하고, 용액을 2분 동안 실온의 수조에서 교반하였다. 조 31c를 예냉된 디에틸 에테르(-18℃) 내에서 침전시키고, RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 187 mg(34.2　μmol, 16%) CNP-38-링커 * 9 TFA
MS: m/z 1110.33 = [M+4H]4+,([M+4H]4+ = 1110.33에 대하여 계산된 단동위 질량).
0.1　%　TFA(v/v)를 함유하는 4.40 mL MeCN/H2O(1:1) 중의 31c(88.0 mg, 16.1 μmol)의 용액에 0.1% TFA 및 1 mM EDTA를 함유하는 1.45 mL 물 중의 4-아암-티올-PEG 40kDa 30c(107.35 mg, 2.59 μmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 3 mM EDTA를 함유하는 0.5 M 포스페이트 완충액(1.46 mL, pH 6.0)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 접합체　31d를 RP-HPLC로 정제하였다.
수율: 129 mg(2.09　μmol, 80 %) 접합체 16d * 36 TFA
실시예 32
Dmb 보호된 6- 메르캅토헥산산 7의 대안적 합성
Dmb-보호된 메르캅토 헥산산 7을 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00290
Figure pct00291
EtOH(1.0 L) 중의 6-브로모헥산산(100 g, 0.513 mol)의 용액에 티오우레아(47 g, 0.615　mol)를 한 번에 20℃에서 첨가하였다. 그 후, 현탁액을 78℃까지 가열하고(투명한 용액이 형성되었음) 12시간 동안 교반하였다. H2O(1.0 L) 중의 NaOH(62 g, 1.54　mol)의 용액을 정압 깔때기를 사용하여 적가하였다. 그 후 환류를 추가로 2시간 동안 계속 하였다. 반응 혼합물을 H2O(1 L)에 붓고 EtOAc(1 L)로 추출하였다. 수성 상을 pH = 2로 농축 HCl을 사용하여 산성화한 후 EtOAc(500 mL)로 3회 추출하였다. 조합된 유기 상을 염수(400 mL)로 세척하였다. 그 후 조합된 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조, 여과하고 용매는 45℃에서 감압하에 증발시켰다. 6-메르캅토헥산산을 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
수율: 62 g(조 생성물)
1H-NMR(400 MHz, CDCl3):
δ = 2.50 - 2.55(q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.36(t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.66 - 1.61(m, 4H), 1.41 - 1.49(m, 2H), 1.34(t, J = 7.6 Hz, 1H) ppm.
6-메르캅토헥산산(27.0 g, 0.182 mol)을 무수 THF(540 mL)가 있는 1 L 3목 바닥 플라스크에 충전하였다. 용액을 냉동 펌프 해동 기술(freeze-pump-thaw technique)로 탈기시키고 그 후 외부 빙욕(ice bath)을 사용하여 0℃로 냉각시켰다. NaH(18.2, 455.4 mmol, 4.16 mL, 60% 순도)를 0℃에서 30분에 걸쳐 스푼 호른(spoon horn)으로 첨가하였다. 그 후, 2,6-디메틸벤질클로라이드(28.2 g, 0.182　mol)를 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃까지 가온하고 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(540 mL)에 붓고 MTBE(540 mL)로 2회 추출하였다. 그 후 수성 상을 pH = 2로 농축 HCl을 사용하여 산성화한 후 MTBE(500 mL)로 3회 추출하였다. 조합된 유기 상을 염수(500 mL)로 세척, Na2SO4 상에서 건조 및 여과하였다. 45℃에서 감압하에 용매의 증발 시 황색 오일로서 7을 단리하였다.
수율: 41.5 g(0.16 mol, 85%)
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6):
δ = 11.99(s, 1 H), 7.05 - 7.07(d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.97(s, 1H), 6.91 - 6.92(d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.66(s, 2H), 2.38 - 2.39(m, 2H), 2.29(s, 3H), 2.23(s, 3H), 2.16 - 2.19(m, 2H), 1.40 - 1.55(m, 4H), 1.22 - 1.38(m, 2H) ppm
MS(neg. 모드): m/z 265.0 = [M-H]-,(계산된 단동위 질량 =265.13).
실시예 33
링커 시약 33c의 합성
링커 시약 33c를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00292
4개의 반응을 동시에 수행하였다. CH2Cl2(300 mL) 중의 화합물 1b(60 g, 75 mmol)의 용액에 피페리딘(58　g, 0.68 mol, 67 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 동시에 수행된 4개의 반응물을 워크 업을 위해 조합하였다. 반응 혼합물을 H2O(500 mL)로 희석하고 0.5 N HCl 용액을 사용하여 pH = 3 ~ 4로 조정하였다. 유기 상을 분리하고 수성 상은 CH2Cl2(800 mL)로 추출하였다. 조합된 유기 상을 염수(400 mL) 및 5% 포화 NaHCO3 용액(400 mL)을 사용하여 차례로 세척하였다. 그 후, 조합된 유기 상을 Na2SO4상에서 건조, 여과하고 용매는 진공에서 증발시켰다. 33a를 DCM/MeOH(20/1 내지 4/1)를 사용하여 실리카(100-200 메쉬) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다.
수율: 150 g(87%)
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6):
δ = 7.34 - 7.38(m, 4H), 6.25 - 7.29(m, 2H), 5.08 - 5.19(m, 2H), 4.60 - 4.68(m, 1H), 4.32 - 4.40(m, 2H), 3.73 - 3.79(m, 9H), 3.10 - 3.27(m, 3H), 2.65 - 3.05(m, 8H), 1.36(s, 9H) ppm.
2개의 반응을 동시에 수행하였다. MeCN(850 mL) 중의 Fmoc-L-Lys(Fmoc)-OH(79 g, 0.13 mol), 33a(70 g, 0.12 mol), 4-에틸-모르폴린(70 g, 0.61 mol, 77 mL)의 용액에 30분에 걸쳐 T3P(EtOAc 중 50%; 140 g, 0.22 mol)를 적가하였다. 첨가 후 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 동시에 수행된 2개의 반응물을 워크 업을 위해 조합하였다. 반응 혼합물을 H2O/CH2Cl2(1:1, 2 L)로 희석하고 그 후 0.5 N HCl 용액을 사용하여 pH = 3 ~ 4로 조정하였다. 유기 상을 분리하고 수성 상은 CH2Cl2(1 L)로 추출하였다. 조합된 유기 상을 염수(800 mL) 및 5% 포화 NaHCO3 용액(800 mL)을 사용하여 차례로 세척하였다. 그 후, 조합된 유기 상을 Na2SO4상에서 건조, 여과하고 용매는 진공에서 증발시켰다. 33b를 페트롤륨 에테르/에틸 아세테이트(5/1 내지 1/1)를 사용하여 실리카(100-200 메쉬) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다.
수율: 160 g(57%)
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6):
δ = 7.80 - 7.90(m, 4H), 7.61 - 7.68(m, 5H), 7.20 - 7.40(m, 14H), 6.14 - 6.28(m, 3H), 5.01 - 5.07(m, 2H), 4.15 - 4.36(m, 8H), 3.71 - 3.77(m, 9H), 2.80 - 3.53(m, 9H), 2.66 - 2.75 (m, 4H), 2.36 - 2.39(m, 1H), 1.52 - 1.55(m, 2H), 0.88 - 1.19(m, 13H) ppm.
2개의 반응을 동시에 수행하였다. MeOH(1.2 L) 중의 33b(60 g, 52 mmol)의 용액에 2 L 수소 첨가 병 내에 있는 10% Pd/C(18 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 탈기하고 H2로 3회 퍼징 후 2.5시간 동안 H2-분위기(45 psi)하에서 25℃에서 교반하였다. 동시에 수행된 2개의 반응물을 워크 업을 위해 조합하였다. 반응 혼합물을 규조토로 여과하고 여액을 진공하에 농축시켜 조 33c를 수득하였다. 33c를 DCM/MeOH(200/1 내지 100/3)를 사용하여 실리카(100-200 메쉬) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다.
수율: 70 g(63%)
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6):
δ = 12.15(s, 1H), 7.87 - 7.89(m, 4H), 7.50 - 7.70(m, 5H), 7.31 - 7.40(m, 9H), 6.20 - 6.23(m, 2H), 4.13 - 4.36(m, 10H), 3.70 - 3.77(m, 9H), 2.62 - 3.10(m, 12H), 2.30 - 2.34(m, 1H), 2.14 - 2.18(m, 1H), 1.50 - 1.58(m, 2H), 1.25 - 1.34(m, 13H) ppm
MS: m/z 1056.4= [M+H]+,(계산된 단동위 질량 =1056.50).
실시예 34
11c의 대안적 합성
화합물 11c를 하기 반응식에 따라 합성하였다:
Figure pct00293
DMF(24.0 mL) 중의 링커 시약 33c(3.21　g, 3.04 mmol), PyBOP(1.58 g, 3.04 mmol) 및 DIPEA(848 mL, 4.86 mmol)의 용액을 실온에서 5분 동안 인큐베이션한 후, 수지 10a(12 g, 1.21 mmol)를 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2.5시간 동안 흔들었다. 수지를 DMF(10 mL)로 10회 및 DCM(10 mL)으로 10회 세척하고 60분 동안 진공에서 건조시켰다.
실시예 35
CNP -38 및 접합체 11i: 의식이 있는 마우스에서 심혈관 효과의 평가(피하 투여)
본 연구의 목적은 원격 측정 마우스에서 혈역학 부작용(혈압 감소)을 유발하는 CNP-38 투약 수준과 동등한 투약 수준에서 11i의 혈역학 부작용을 평가하는 것이었다.
경동맥에 TA11PA-C10 원격 측정 전송기(Data Sciences International(DSI))를 사용하여 수컷 Crl:CD1(ICR) 마우스(투약 시작시 8-13 범위의 주령 및 27.3-35.6g 범위의 체중)에게 외과적으로 이식하였다. 전송기의 바디는 마우스의 외측 옆구리(lateral flank)에 피하로 위치시켰다. 마우스를 투약 간격 사이에 적어도 72시간 동안 라틴 정방 교차 설계(latin square crossover design)로 피하 투약하였다. 1) 비히클(10mM 숙시네이트, 46.0 g/L 만니톨, pH 4.00), 2) CNP-38(800 μg CNP-38/kg, 10mM 숙시네이트, 46.0 g/L 만니톨, pH 4.00) 또는 3) 11i(800 μg CNP-38 eq/kg, 10mM 숙시네이트, 46.0 g/L 만니톨, pH 4.00)을 마우스에게 투약하였다. 적어도 4 마리의 마우스가 각각의 투약 수준에 포함되었다. DSITM 폰마(Ponemah) 데이터 수집 및 분석 시스템과 연결된 디지털 데이터 캡처 시스템을 사용하여 혈압(수축기(SAP), 확장기(DAP) 및 평균(MAP) 및 심박수(HR, 혈압으로부터 유래)을 기록하였다. 캡처 시스템은 마우스가 개별 케이지에 있는 동안 심혈관 파라미터의 기록을 허용하였다. 각각의 시험 세션 당일에 동물의 무게를 측정하고 투약하기 전에 적어도 60분 동안 투약 전(predose) 기록을 수행하였다. 각각의 마우스를 홈 케이지로 돌아오게하고 심혈관 파라미터를 투약 후(postdose) 대략 48시간 동안 기록하였다. 혈압 및 HR을 하기 시점에서 보고하였다: -30, -20, -10, 5, 15 및 30분 투약 후 및 1, 2, 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42 및 48시간 투약 후. 각각의 시점은 그 시점 이전의 5분 기록의 평균값으로 제시되었다. 모니터링 기간은 Tmax 전후 모두에서 시험 항목에 대한 노출을 커버하기 위해 선택되었다.
결과: 투약 전 값과 비교하여, 비히클 투약된 동물은 5, 15 및 30분 투약 후 샘플링 시점에서 MAP가 증가하였다. 이것은 취급 및 투약으로 인한 정상적인 생리학적 반응으로 간주 되었다. MAP의 동일한 생리학적 증가가 5, 15 및 30분 투약 후 샘플링 시점 투약 전에 11i가 투약된 동물에서 관측되었다. CNP-38을 투약한 4마리의 동물 중 3마리에서 MAP의 생리학적 증가는 분명하지 않았다. 이와는 반대로, CNP-38 투약된 4마리의 동물 중 3마리는 5, 15, 및 30분 투약 후 샘플링 시점에서 MAP의 유의한 감소를 나타내었다. 나머지 10개의 시점 동안, 비히클, CNP-38 및 11i를 투약한 동물 간에 MAP의 차이는 없었다.
MAP(mmHg) 투약 전 내지 30분 투약 후(평균 ±SD)
Figure pct00294
모든 투약 수준에 대해 SAP 및 DAP에서 유사한 경향이 관측되었다. HR은 CNP-38 또는 11i를 사용한 치료에 영향을 받지 않았다.
결론적으로, 11i의 피하 투여는 동등한 용량의 CNP-38에서 관측되는 것처럼 혈압을 감소시키지 않았다.
실시예 36
시노몰구스 원숭이에서 피하 단일 용량 투여 후 CNP -38의 약동학 프로파일
본 연구는 시노몰구스 원숭이에서 피하(s.c.) 투여 후 CNP-38의 약동학을 시험하기 위해 수행되었다. 3마리의 수컷 원숭이(2-4 연령, 3-5kg)는 40μg/kg의 용량으로 CNP-38을 단일 s.c. 주사로 수여 받았다. 혈액 샘플을 투약 5, 10, 15, 30, 45분 및 1, 2, 4, 8시간에서 수집하였다.
방법: 상업적으로 이용 가능한 경쟁적 방사면역-어세이(RK-012-03, Phoenix Pharmaceuticals, 캘리포니아주 소재)를 사용하여 CNP의 혈장 수준을 분석하였다. 어세이를 필수적으로 제조자에 의해 기재된 바와 같이 적용하였다. 어세이는 125I 표지된 CNP(키트에 공급됨) 및 비표지된 CNP(연구 샘플 또는 보정 물질(calibrant)로 부터의) 간의 항 CNP 항체에 대한 경쟁적 결합을 기반으로 한다. 샘플에서 CNP의 농도가 증가하면, 항체에 결합할 수 있는 125I 표지된 CNP의 양은 감소한다. 펩타이드 농도의 함수로서 결합된 125I 표지된 CNP의 양을 측정함으로써, 샘플 중 펩타이드 농도를 결정할 수 있는 보정 곡선을 구성하는 것이 가능하다.
제공된 어세이 프로토콜을 약간 변경하였다. 이들 변경은 어세이 실행 간에 일관성을 확보하기 위해 인-하우스 CNP 보정 물질 및 QC 샘플을 사용하는 것이 포함되어있다. 어세이 기간을 단축하기 위해, 항체와의 샘플의 초기 인큐베이션을 실온에서 5시간 동안(4℃에서 16-24시간 대신에) 수행하였다. 원숭이 혈장에서의 기질 효과로 인해 최소 요구 희석이 1:10으로 설정되어, 150-1080 pg/mL CNP의 어세이 범위를 얻었다.
결과: 시노몰구스 원숭이에 대한 CNP-38의 투여는 잘 용납되었다. s.c. 주사 후, CNP-38 중앙값 Tmax가 대략 7분의 평균 반감기로, 10분에서 관찰되었다.
Figure pct00295
실시예 37
시노몰구스 원숭이에서 피하 단일 용량 투여 후 접합체 11i의 약동학 프로파일
본 연구는 시노몰구스 원숭이에서 s.c. 투여 후 11i의 약동학을 조사하기 위해 수행되었다. 4마리의 수컷 동물(2-4 연령, 3-5kg)은 40 μg CNP-38 eq/kg의 용량으로 11i를 단일 s.c. 주사로 수여 받았다. 혈액 샘플을 투약 후 168시간까지 수집하였고 혈장이 생성되었다(Li헤파린). 총 CNP-38 농도를 LC-MS/MS로 결정하였다.
방법: 용어 "총 CNP-38"은 유리 CNP-38 및 CNP-38 접합체에 결합된 CNP-38 양자의 조합을 의미한다. 혈장 총 CNP-38 농도를 트립신 소화 및 이황화 가교 감소 후에 C-말단 서명 펩타이드(서열: IGSMSGLGC)의 정량화로 결정하였다.
LC-MS 분석은 ESI 프로브를 통해 애질런트 6460 트리플 쿼드(Triple Quad) 질량 분석기에 결합된 애질런트 1290 UPLC를 사용하여 수행되었다. 크로마토그래피를 0.5 mL/분(T = 45℃)의 유속에서 프리-필터를 갖는 워터스 액퀴이티 BEH C18 분석 컬럼(50 x 1.0 mm I.D., 1.7 μm 입자 크기, 130 Å) 상에서 수행하였다. 0.1 % 포름산(v/v)을 함유하는 물(초순수 ≤ 500 ppt 나트륨 등급)을 이동상 A로서 사용하였고, 0.1% 포름산을 갖는 아세토니트릴(ULC/MS 등급)을 이동상 B로서 사용하였다. 구배 시스템은 0.5분 동안 0.1% B의 초기 파라미터에서의 짧은 등용매 단계에 이어 1.5분 이내에 0.1% B에서 30% B로의 선형 증가를 포함하였다. 질량 분석은 이온화 m/z 824.5 [M+H]1+ 내지 515.2의 반응을 모니터링하는 다중 반응 모니터링(MRM) 모드에서 수행하였다. 내부 표준으로서, 중수소화된 CNP-38 접합체를 사용하였다.
공시료 혈장에서의 CNP-38 접합체의 보정 표준을 하기와 같이 제조하였다: 해동된 Li-헤파린 시노몰구스 혈장을 먼저 균질화한 다음, 5분간 원심분리하였다. CNP-38 접합체 제형을 50% 메탄올/50% 물/0.1 % 포름산(v/v/v) 내에서 0.103 내지 51.28 μg/mL(CNP-38 당량)을 함유하는 8가지 상이한 보정 작업 용액으로 희석하였다. 작업 용액을 10.3 ng/ mL(CNP-38 당량) 내지 5128 ng/mL(CNP-38 당량)의 농도로 공시료 혈장에 스파이크하였다. 상기 표준을 보정 곡선을 생성하는데 사용하였다. 가중된(1/x2) 선형 회귀를 사용하여 내부 표준 피크 면적비에 대한 분석물을 근거로 보정 곡선을 생성하고 보정 곡선에 대한 역 계산에 의해 샘플 농도를 결정하였다.
샘플 제조를 위해, 50 μL의 혈장 샘플 및 10 μL의 내부 표준 용액(50% 메탄올/50% 물/0.1 % 포름산(v/v/v) 중 2.8 μg/mL CNP-38 당량)에 200 μL의 예냉된(0℃) 아세토니트릴을 첨가하여 단백질 침전을 수행하였다. 200 μL의 상청액을 새로운 웰 플레이트로 옮기고 증발 건조 시켰다(35℃에서 완만한 질소 흐름 하에). 용매를 재구성하기 위해 100 μg의 트립신(주문 번호 V5111, 프로메가 게엠베하, 독일, 만하임 소재)을 100 μL의 10 mM 아세트산에 용해시켰다. 2.5 mL 트리스 완충액 및 500 μL 메탄올을 첨가하였다. 50 μL의 생성된 재구성 용매를 웰 플레이트의 각각의 공동에 첨가하였다. 37℃(써모탑(ThermoTop)이 있는 에펜도르프 써모믹서(Eppendorf Thermo Mixer))에서 3시간 인큐베이션 후, 5 μL의 0.5 M TCEP 용액을 각각의 공동에 첨가하고 37℃에서 30분 동안 다시 인큐베이션하였다. 샘플을 실온으로 냉각한 후, 물 중의 2 μL 60% 포름산을 첨가하였다. 10 μL를 UHPLC-MS 시스템에 주입하였다. 결과: 시노몰구스 원숭이에 대한 11i의 투여는 잘 용납되었다. s.c. 주사 후, 11i 중앙값 Tmax는 36시간이었으며 평균 반감기 시간은 107시간이었다.
Figure pct00296
실시예 38
방출된 CNP를 갖는 NIH -3T3 세포에서의 기능적 cGMP 자극
11i를 실시예 20에서 기재된 바와 같이 생리학적 조건(1 mg CNP-38 당량/mL)하에 인큐베이션하였다. 7일 후, 방출된 CNP-38을 RP-HPLC로 단리하고 실시예 22에 기재된 바와 같이 생체활성에 대하여 분석하였다.
Figure pct00297
실시예 39
11h의 대안적 합성
Figure pct00298
화합물 11h의 대안적 합성: 39a는 물질 및 방법에 기재된 바와 같이 고체상 합성에 의해 합성된다. 고리 라이신 측쇄에 대한 보호기 PG1 및 시스테인 측쇄에 대한 보호기 PG2는 Mmt이다. 요오드 처리에 의한 온화한 수지 절단 및 디술피드 형성은 화합물 39c를 제공한다. 링커 분자 39d의 결합 및 전체적인 탈 보호 후, 11h를 RP-HPLC로 정제하였다.
약어:
ACH 연골무형성증
ACN 아세토니트릴
AcOH 아세트산
AUCtlast 마지막으로 정량화할 수 있는 시점까지의 곡선 아래 영역
Bn 벤질
Boc tert-부틸옥시카르보닐
BSA 소 혈청 알부민
cGMP 시클릭 구아노신 모노포스페이트
Cmax 최대 농도
CMV 거대세포바이러스
CNP C형 나트륨이뇨 펩타이드
COMU (1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-
모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트
conc. 농축된
d 일
CTC 클로로트리틸클로라이드 폴리스티롤
DAP 확장기 동맥압
DBU 1,3-디아자비시클로[5.4.0]운데센
DCC N,N'-디시클로헥실카르보디이미드
DCM 디클로로메탄
DIC N,N'-디이소프로필카르보디이미드
DIEA N,N-디이소프로필에틸아민
DIPEA N,N-디이소프로필에틸아민
DMAP 디메틸아미노-피리딘
DMEM 둘베코 변형 이글 배지
Dmb 2,4-디메틸벤질
DMEM 둘베코 변형 이글 배지
DMF N,N-디메틸포름아미드
DMSO 디메틸술폭시드
DTT 디티오트레이톨
EC50 반수 최대 유효 농도(half maximal effective concentration)
EDC 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드
EDTA 에틸렌디아민테트라아세트산
ELISA 효소 결합 면역흡착 어세이
eq 화학양론적 당량
ESI-MS 전자분무 이온화 질량 분광법
Et 에틸
EtOAc 에틸 아세테이트
EtOH 에탄올
FBS 소 태아 혈청
FGFR3 섬유모세포 성장 인자 수용체 3
FITC 플루오레세인 이소티오시아네이트
Fmoc 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐
h 시간
HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄
헥사플루오로포스페이트
HCH 연골형성저하증
HFIP 헥사플루오로이소프로판올
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
HOBt N-히드록시벤조트리아졸
HR 심박수
IBMX 3-이소부틸-1-메틸크산틴
iPrOH 2-프로판올
iv 정맥내
ivDde 4,4-디메틸-2,6-디옥소시클로헥스-1-일리덴)-3-메틸부틸
LC 액체 크로마토그래피
LTQ 선형 트랩 사중극자
Mal 3-말레이미도 프로필
MAP 평균 동맥압
Me 메틸
MeOH 메탄올
min 분
Mmt 모노메톡시트리틸
MS 질량 스펙트럼/질량 분광법
MSA 메탄술폰산
MTBE 메틸-tert-부틸에테르
Mtt 메틸트리틸
MW 분자량
m/z 질량 대 전하 비
NEP 중성 엔도펩티다아제
NHS N-히드록시 숙신이미드
NPR 나트륨이뇨 펩타이드 수용체
OtBu tert-부틸옥시
PBS 포스페이트 완충 염수
PEG 폴리(에틸렌 글리콜)
PFP 펜타플루오로페놀
pH 수소이온농도의 지수(potentia Hydrogenii)
Pr 프로필
PyBOP 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄
헥사플루오로포스페이트
Q-TOF 사중극자 비행시간(quadrupole time-of-flight)
qRT-PCR 정량적 실시간 중합효소 연쇄 반응
RP-HPLC 역상 고성능 액체 크로마토그래피
rpm 분당 회전수
rt 실온
SIM 단일 이온 모니터링
SAP 수축기 동맥압
SEC 크기 배제 크로마토그래피
sc 피하
Su 숙신이미딜
T3P 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스포리난-2,4,6-
트리옥시드
TCEP 트리스(2-카르복시에틸)포스핀
TCP 트리틸클로라이드 폴리스티로
TD 치사성 이형성증
TES 트리에틸실란
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
TIPS 트리이소프로필실란
Tmax 최대 농도의 시간
TMEDA N,N,N'N'-테트라메틸에틸렌 디아민
Tmob 2,4,6-트리메톡시벤질
TR-FRET 시간분해 형광 에너지 전달
(time-resolved fluorescence energy transfer)
Trt 트리페닐메틸, 트리틸
UPLC 초고성능 액체 크로마토그래피
UV 자외선
vs. 대
ZQ 단일 사중극자
SEQUENCE LISTING <110> Ascendis Pharma A/S <120> Controlled-release CNP agonists with increased NEP stability <130> CPX70164PC <160> 98 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> DISULFID <222> (6)..(22) <400> 1 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 1 5 10 15 Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 2 <211> 53 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> DISULFID <222> (37)..(53) <400> 2 Asp Leu Arg Val Asp Thr Lys Ser Arg Ala Ala Trp Ala Arg Leu Leu 1 5 10 15 Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys Gly 20 25 30 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 35 40 45 Ser Gly Leu Gly Cys 50 <210> 3 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G-CNP-53 <220> <221> DISULFID <222> (38)..(54) <400> 3 Gly Asp Leu Arg Val Asp Thr Lys Ser Arg Ala Ala Trp Ala Arg Leu 1 5 10 15 Leu Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys 20 25 30 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 35 40 45 Met Ser Gly Leu Gly Cys 50 <210> 4 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M-CNP-53 <220> <221> DISULFID <222> (38)..(54) <400> 4 Met Asp Leu Arg Val Asp Thr Lys Ser Arg Ala Ala Trp Ala Arg Leu 1 5 10 15 Leu Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys 20 25 30 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 35 40 45 Met Ser Gly Leu Gly Cys 50 <210> 5 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P-CNP-53 <220> <221> DISULFID <222> (38)..(54) <400> 5 Pro Asp Leu Arg Val Asp Thr Lys Ser Arg Ala Ala Trp Ala Arg Leu 1 5 10 15 Leu Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys 20 25 30 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 35 40 45 Met Ser Gly Leu Gly Cys 50 <210> 6 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-53 M48N <220> <221> DISULFID <222> (37)..(53) <400> 6 Asp Leu Arg Val Asp Thr Lys Ser Arg Ala Ala Trp Ala Arg Leu Leu 1 5 10 15 Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys Gly 20 25 30 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Asn 35 40 45 Ser Gly Leu Gly Cys 50 <210> 7 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-53 with deletion of amino acids 15-31 <220> <221> DISULFID <222> (20)..(36) <400> 7 Asp Leu Arg Val Asp Thr Lys Ser Arg Ala Ala Trp Ala Arg Gly Leu 1 5 10 15 Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser 20 25 30 Gly Leu Gly Cys 35 <210> 8 <211> 52 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-52 <220> <221> DISULFID <222> (36)..(52) <400> 8 Leu Arg Val Asp Thr Lys Ser Arg Ala Ala Trp Ala Arg Leu Leu Gln 1 5 10 15 Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys Gly Leu 20 25 30 Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser 35 40 45 Gly Leu Gly Cys 50 <210> 9 <211> 51 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-51 <220> <221> DISULFID <222> (35)..(51) <400> 9 Arg Val Asp Thr Lys Ser Arg Ala Ala Trp Ala Arg 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53 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GAN-CNP-27 K4P, K5R <220> <221> DISULFID <222> (14)..(30) <400> 53 Gly Ala Asn Gly Ala Asn Pro Arg Gly Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly 1 5 10 15 Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 25 30 <210> 54 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-27 K4R, K5R, K9R <220> <221> DISULFID <222> (11)..(27) <400> 54 Gly Ala Asn Arg Arg Gly Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu 1 5 10 15 Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 25 <210> 55 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-27 K4R, K5R, K9R, M22N <220> <221> DISULFID <222> (11)..(27) <400> 55 Gly Ala Asn Arg Arg Gly Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu 1 5 10 15 Asp Arg Ile Gly Ser Asn Ser Gly Leu Gly Cys 20 25 <210> 56 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P-CNP-27 K4R, K5R, K9R <220> <221> DISULFID <222> (12)..(28) <400> 56 Pro Gly Ala Asn Arg Arg Gly Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys 1 5 10 15 Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 25 <210> 57 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M-CNP-27 K4R, K5R, K9R <220> <221> DISULFID <222> (12)..(28) <400> 57 Met Gly Ala Asn Arg Arg Gly Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys 1 5 10 15 Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 25 <210> 58 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human Serum Albumine Fragment - CNP-27 <220> <221> DISULFID <222> (22)..(38) <400> 58 Gly His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Gly Ala Asn Lys Lys 1 5 10 15 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 20 25 30 Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 59 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human Serum Albumine Fragment - CNP-27 M22N <220> <221> DISULFID <222> (22)..(38) <400> 59 Gly His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Gly Ala Asn Lys Lys 1 5 10 15 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 20 25 30 Asn Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 60 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> methionine - Human Serum Albumine Fragment - CNP-27 <220> <221> DISULFID <222> (23)..(39) <400> 60 Met Gly His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Gly Ala Asn Lys 1 5 10 15 Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly 20 25 30 Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 61 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> proline - Human Serum Albumine Fragment - CNP-27 <220> <221> DISULFID <222> (23)..(39) <400> 61 Pro Gly His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Gly Ala Asn Lys 1 5 10 15 Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly 20 25 30 Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 62 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-26 <220> <221> DISULFID <222> (10)..(26) <400> 62 Ala Asn Lys Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp 1 5 10 15 Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 25 <210> 63 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-25 <220> <221> DISULFID <222> (9)..(25) <400> 63 Asn Lys Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg 1 5 10 15 Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 25 <210> 64 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-24 <220> <221> DISULFID <222> (8)..(24) <400> 64 Lys Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile 1 5 10 15 Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 65 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-23 <220> <221> DISULFID <222> (7)..(23) <400> 65 Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly 1 5 10 15 Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 66 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> R-CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (7)..(23) <400> 66 Arg Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly 1 5 10 15 Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 67 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ER-CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (8)..(24) <400> 67 Glu Arg Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile 1 5 10 15 Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 68 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> R-CNP-22 K4R <220> <221> DISULFID <222> (7)..(23) <400> 68 Arg Gly Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly 1 5 10 15 Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 69 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ER-CNP-22 4KR <220> <221> DISULFID <222> (8)..(24) <400> 69 Glu Arg Gly Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile 1 5 10 15 Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 70 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RR-CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (8)..(24) <400> 70 Arg Arg Gly Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile 1 5 10 15 Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 71 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HRGP fragment - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 71 Gly His His Ser His Glu Gln His Pro His Gly Ala Asn Gln Gln Gly 1 5 10 15 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 72 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HRGP fragment - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (22)..(38) <400> 72 Gly Ala His His Pro His Glu His Asp Thr His Gly Ala Asn Gln Gln 1 5 10 15 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 20 25 30 Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 73 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HRGP fragment - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 73 Gly His His Ser His Glu Gln His Pro His Gly Ala Asn Pro Arg Gly 1 5 10 15 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 74 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG1(FC) fragment - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (20)..(36) <400> 74 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gly Leu 1 5 10 15 Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser 20 25 30 Gly Leu Gly Cys 35 <210> 75 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human Serum Albumine - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (23)..(39) <400> 75 Gly Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Gly Ala Asn Pro 1 5 10 15 Arg Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly 20 25 30 Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 76 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human Serum Albumine - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 76 Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Gly 1 5 10 15 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 77 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> osteocrin NPR C inhibitor fragment - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (19)..(35) <400> 77 Phe Gly Ile Pro Met Asp Arg Ile Gly Arg Asn Pro Arg Gly Leu Ser 1 5 10 15 Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly 20 25 30 Leu Gly Cys 35 <210> 78 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FGF2 heparin-binding domain fragment - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (24)..(40) <400> 78 Gly Lys Arg Thr Gly Gln Tyr Lys Leu Gly Ser Lys Thr Gly Pro Gly 1 5 10 15 Pro Lys Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile 20 25 30 Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 40 <210> 79 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgG1(FC) fragment - CNP-22 K4R <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 79 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Gly Ala Asn Gln Gln Gly 1 5 10 15 Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 80 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human Serum Albumine fragment - CNP-22 K4R <220> <221> DISULFID <222> (20)..(36) <400> 80 Gly Val Pro Gln Val Ser Thr Ser Thr Gly Ala Asn Gln Gln Gly Leu 1 5 10 15 Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser 20 25 30 Gly Leu Gly Cys 35 <210> 81 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fibronectin fragment - CNP-22 <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 81 Gly Gln Pro Ser Ser Ser Ser Gln Ser Thr Gly Ala Asn Gln Gln Gly 1 5 10 15 Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 82 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fibronectin fragment - CNP-22 K4R <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 82 Gly Gln Thr His Ser Ser Gly Thr Gln Ser Gly Ala Asn Gln Gln Gly 1 5 10 15 Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 83 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fibronectin fragment - CNP-22 K4R <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 83 Gly Ser Thr Gly Gln Trp His Ser Glu Ser Gly Ala Asn Gln Gln Gly 1 5 10 15 Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 84 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> zinc finger fragment - CNP-22 K4R <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 84 Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ala Asn Gln Gln Gly 1 5 10 15 Leu Ser Arg Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 85 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-21 <220> <221> DISULFID <222> (5)..(21) <400> 85 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 1 5 10 15 Ser Gly Leu Gly Cys 20 <210> 86 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-20 <220> <221> DISULFID <222> (4)..(20) <400> 86 Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser 1 5 10 15 Gly Leu Gly Cys 20 <210> 87 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-19 <220> <221> DISULFID <222> (3)..(19) <400> 87 Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly 1 5 10 15 Leu Gly Cys <210> 88 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-18 <220> <221> DISULFID <222> (2)..(18) <400> 88 Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu 1 5 10 15 Gly Cys <210> 89 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-17 <220> <221> DISULFID <222> (1)..(17) <400> 89 Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly 1 5 10 15 Cys <210> 90 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BNP fragment - CNP-17 - BNP- fragment <220> <221> DISULFID <222> (10)..(26) <400> 90 Ser Pro Lys Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp 1 5 10 15 Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg Arg His 20 25 30 <210> 91 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-38 L1G <220> <221> DISULFID <222> (22)..(38) <400> 91 Gly Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys 1 5 10 15 Gly Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser 20 25 30 Met Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 92 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ac-CNP-37 <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> ACETYLATION <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 92 Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Lys Lys Gly 1 5 10 15 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 93 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CNP-37, Xaa = K or R, with the provision that at least one Xaa is R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa = Lys, Arg, Pro, Ser or Gln, with the provision that at least one of amino acids 8, 10, 14, 15, 19 or 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa = Lys, Arg, Pro, Ser or Gln, with the provision that at least one of amino acids 8, 10, 14, 15, 19 or 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Xaa = Lys, Arg, Pro, Ser or Gln, with the provision that at least one of amino acids 8, 10, 14, 15, 19 or 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa = Lys, Arg, Pro, Ser or Gln, with the provision that at least one of amino acids 8, 10, 14, 15, 19 or 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa = Lys, Arg, Pro, Ser or Gln, with the provision that at least one of amino acids 8, 10, 14, 15, 19 or 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> Xaa = Lys, Arg, Pro, Ser or Gln, with the provision that at least one of amino acids 8, 10, 14, 15, 19 or 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <400> 93 Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Xaa Tyr Xaa Gly Ala Asn Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 Leu Ser Xaa Gly Cys Phe Gly Leu Xaa Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 94 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated CNP-37 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X is selected from the group consising of Lys, Arg, Pro, Ser and Gln, with the provision that at least one of the amino acids at position 14, 15, 19 and 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X is selected from the group consising of Lys, Arg, Pro, Ser and Gln, with the provision that at least one of the amino acids at position 14, 15, 19 and 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X is selected from the group consising of Lys, Arg, Pro, Ser and Gln, with the provision that at least one of the amino acids at position 14, 15, 19 and 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X is selected from the group consising of Lys, Arg, Pro, Ser and Gln, with the provision that at least one of the amino acids at position 14, 15, 19 and 25 is selected from the group consisting of Arg, Pro, Ser and Gln <400> 94 Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 Leu Ser Xaa Gly Cys Phe Gly Leu Xaa Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 95 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated CNP-37 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(15) <223> Xaa Xaa is selected from the group consisting of Lys Arg, Arg Lys, Lys Pro, Pro Lys, Ser Ser, Arg Ser, Ser Arg, Gln Lys, Gln Arg, Lys Gln, Arg Gln, Arg Arg and Gln Gln <220> <221> DISULFID <222> (21)..(37) <400> 95 Gln Glu His Pro Asn Ala Arg Lys Tyr Lys Gly Ala Asn Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 Leu Ser Lys Gly Cys Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Cys 35 <210> 96 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Phe Gly Leu Lys Leu Asp Arg Ile Gly Ser Met Ser Gly Leu Gly 1 5 10 15 <210> 97 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial random coil <400> 97 Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Pro Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Pro 1 5 10 15 Gly Gly Pro Gly 20 <210> 98 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> NPR-C inhibitor <400> 98 Phe Gly Ile Pro Met Asp Arg Ile Gly Arg Asn Pro Arg 1 5 10

Claims (19)

  1. 하나 이상의 CNP 작용제를 방출하며, 상응하는 방출된 CNP 작용제보다 시험관 내 NEP 분해능 어세이에서 5배 이상 더 긴 분해 반감기를 갖는 제어 방출성 CNP 작용제.
  2. 제1항에 있어서, 6시간 이상의 방출 반감기를 갖는 생리학적 조건하에서 하나 이상의 CNP 작용제를 방출하는 제어 방출성 CNP 작용제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 바람직하게는 소분자, 천연 생성물, 올리고뉴클레오타이드, 폴리펩타이드 및 단백질로 구성된 군으로부터 선택되는 CNP 작용제를 포함하는 제어 방출성 CNP 작용제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, CNP 작용제가 폴리펩타이드인 제어 방출성 CNP 작용제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, CNP 작용제가 CNP인 제어 방출성 CNP 작용제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 제어 방출성 CNP 작용제가 수불용성인 제어 방출성 CNP 작용제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 결정, 나노입자, 마이크로입자, 나노스피어 및 마이크로스피어로 구성된 군으로부터 선택되는 제어 방출성 CNP 작용제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제어 방출성 작용제가 하나 이상의 CNP 작용제를 포함하는 소포이고 상기 소포는 미셀(micelle), 리포솜 또는 폴리머솜인 제어 방출성 CNP 작용제.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 제어 방출성 CNP 작용제가 수용성인 제어 방출성 CNP 작용제.
  10. 제1항 내지 제5항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제어 방출성 CNP 작용제가 하기 화학식(Ia) 또는 화학식(Ib)의 CNP 작용제 전구약물인 제어 방출성 CNP 작용제:
    Figure pct00299

    Figure pct00300

    상기 식에서,
    -D는 CNP 작용제 모이어티이며;
    -L1-은 가역적 전구약물 링커 모이어티이며;
    -L2-는 단일 화학 결합 또는 스페이서 모이어티이며;
    -Z은 수용성 캐리어 모이어티이고;
    x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16으로 구성된 군으로부터 선택되는 정수이며;
    y는 1, 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택된 정수이다.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 제어 방출성 CNP 작용제 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  12. 의약으로 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 제어 방출성 CNP 작용제 또는 제11항의 약제학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 의약이 연골무형성증의 치료에 사용되는 제어 방출성 CNP 작용제 또는 약제학적 조성물.
  14. CNP로 치료될 수 있는 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 제어 방출성 CNP 작용제 또는 제11항의 약제학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서, CNP로 치료될 수 있는 질환이 연골무형성증, 연골형성저하증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 불완전 골형성증, 연골무발생증, 점상연골형성부전증, 동형접합 연골무형성증, 굴지 형성이상, 선천 치사성 저인산증, 주산기 치사형의 불완전 골형성증, 짧은 늑골 다지증 증후군, 지근 유형의 점상연골형성부전증, 얀센형 골간단 이형성증(Jansen-type metaphyseal dysplasia), 선천 척추골단 이형성증(spondyloepiphyseal dysplasia congenita), 골형성발육부전(atelosteogenesis), 이영양성 형성이상, 선천성 짧은 대퇴골, 랑거형 전완부 이형성증(Langer-type mesomelic dysplasia), 니에버겔트형(Nievergelt-type) 전완부 이형성증, 로비노(Robinow) 증후군, 라인하르트(Reinhardt) 증후군, 선단이골증, 말초 이골증, 니스트(Kniest) 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 형성이상(acromesomelic dysplasia), 소지증, 모르키오(Morquio) 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증(metatrophic dysplasia), 척추골단골간단 이형성증, 신경섬유종증, 레지우스(Legius) 증후군, 레오파드(LEOPARD) 증후군, 누난(Noonan) 증후군, 유전성 치은 섬유종증, 신경섬유종증 1형, 레지우스 증후군, 심장얼굴피부 증후군, 코스텔로(Costello) 증후군, SHOX 결핍증, 특발성 저신장증, 성장 호르몬 결핍증, 골관절염, 쇄골두개골 이골증, 두개골유합증, 지증(dactyly), 단지증, 굴지증, 다지증, 합지증, 이상분절 형성이상, 골내연골종증, 섬유 이형성증, 유전성 다발성 외골종증, 저인산혈 구루병, 자페-리히텐슈타인(Jaffe-Lichtenstein) 증후군, 마르판(Marfan) 증후군, 맥쿤-올브라이트(McCune-Albright) 증후군, 골화석증 및 골반문증으로 구성된 군으로부터 선택되는 제어 방출성 CNP 작용제 또는 약제학적 조성물.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, CNP로 치료될 수 있는 질환이 연골무형성증인 제어 방출성 CNP 작용제 또는 약제학적 조성물.
  17. CNP 작용제로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물 환자에서 치료, 제어, 지연 또는 예방하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 제어 방출성 CNP 작용제 또는 제11항의 약제학적 조성물을 CNP 작용제로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, CNP로 치료될 수 있는 하나 이상의 질환이 연골무형성증, 연골형성저하증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 불완전 골형성증, 연골무발생증, 점상연골형성부전증, 동형접합 연골무형성증, 굴지 형성이상, 선천 치사성 저인산증, 주산기 치사형의 불완전 골형성증, 짧은 늑골 다지증 증후군, 지근 유형의 점상연골형성부전증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천 척추골단 이형성증, 골형성발육부전, 이영양성 형성이상, 선천성 짧은 대퇴골, 랑거형 전완부 이형성증, 니에버겔트 형 전완부 이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말초 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 형성이상, 소지증, 모르키오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 척추골단골간단 이형성증, 신경섬유종증, 레지우스 증후군, 레오파드 증후군, 누난 증후군, 유전성 치은 섬유종증, 신경섬유종증 1형, 레지우스 증후군, 심장얼굴피부 증후군, 코스텔로 증후군, SHOX 결핍증, 특발성 저신장증, 성장 호르몬 결핍증, 골관절염, 쇄골두개골 이골증, 두개골유합증(예컨대, ?케 증후군, 크루존(Crouzon) 증후군, 에이퍼트(Apert) 증후군, 잭슨-바이스(Jackson-Weiss) 증후군, 파이퍼(Pfeiffer) 증후군, 또는 크루존피부골격(Crouzonodermoskeletal) 증후군), 지증, 단지증, 굴지증, 다지증, 합지증, 이상분절 형성이상, 골내연골종증, 섬유 이형성증, 유전성 다발성 외골종증, 저인산혈 구루병, 자페-리히텐슈타인 증후군, 마르판 증후군, 맥쿤-올브라이트 증후군, 골화석증 및 골반문증으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 질환이 연골무형성증인 방법.
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