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KR20150095809A - 암 치료용 조성물 및 방법 - Google Patents

암 치료용 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20150095809A
KR20150095809A KR1020157018521A KR20157018521A KR20150095809A KR 20150095809 A KR20150095809 A KR 20150095809A KR 1020157018521 A KR1020157018521 A KR 1020157018521A KR 20157018521 A KR20157018521 A KR 20157018521A KR 20150095809 A KR20150095809 A KR 20150095809A
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cancer
targeted
mol
liposomes
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KR1020157018521A
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빈 왕
모하마드 에프. 키아니
유엔 탕
Original Assignee
템플 유니버시티-오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션
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Publication date
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Abstract

화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀, 및 항혈관생성제(anti-angiogenic agent)를 포함하는 비-표적된 리포좀을 포함하는 암 치료용 조성물, 방법 및 키트가 제공된다. 일부 구현으로, 표적된 리포좀은 면역리포좀이다. 다른 구현으로, 면역리포좀은 Her-2/neu에 바인딩하며, 상기 조성물은 유방암 치료용이다.

Description

암 치료용 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATMENT OF CANCER}
2012년 12월 12일에 출원된 미국 임시 특허출원 제 61/736,230호의 출원일에 대한 우선권이 본 출원에서 주장된다. 상기 출원의 전체 공개 내용이 본 명세서에 참고문헌으로 편입된다.
본 발명은 암 치료용 조성물 및 방법에 관한 것이다.
암은 사망률의 주된 원인으로 여전히 남아있다. 특히, 유방암은 미국에서 여성에게 가장 일반적인 암이 되었으며, 2009년에는 192,570 건의 새로운 사례가 예측되었으며, 이는 미국 여성에서 암 사망의 두 번째 주된 원인이며, 일 년에 40,470 명의 사망자가 예측되었다(American, Cancer Society. (2009) Cancer Facts & Figures 2009 American Cancer Society). 유방암 치료에 있어서 수십 년간의 발달에도 불구하고, 유방암에 기인한 사망률은 미국에서 조금 감소했을 뿐이다. 초기 국소화된 유방암으로 초기에 진단된 환자의 2/3 이상이 결국 먼 말기 질병(distant, late-stage disease)으로 발달한다(Bonadonna, 등 (1995) N Engl J Med 332: 901-906). 5년 생존율은, 먼 전이 질병을 가진 여성에 대해 약 26% 및 재발 질병을 가진 여성에 대해 44%로 여전히 매우 저조하다(Giordano, 등 (2004) Cancer 100: 44-52).
화학 요법은 유방암을 포함한 많은 암에 대하여 치료의 표준으로 간주된다. 화학 요법은 종종 종양 크기를 감소시켜, 방사선 및 추가의 보조 화학 요법이 따르는 후속적인 수술을 가능케 한다. 그러나, 대부분의 현재의 항암제가 암종 세포와 정상 세포를 크게 구별하지 못하는 것을 고려하면, 이러한 화학 요법과 관련된 전신성 독성 및 부작용(Hassett, 등 (2006) J Natl Cancer Inst 98: 1108-1117)은 이의 치료 효과를 제한한다. 또한, 후천성 약물 저항성은 화학 요법의 치료 효과를 더욱 감소시킨다.
제1선의 화학 요법에 대한 유방암의 반응률은 고무적이지만, 다수의 환자들은 7-10개월 내에 종양 진전을 갖는다. 다양한 제제를 이용한 후속적인 화학 요법에 대한 반응은 20-30%로 떨어지며, 이는 만만찮은 암 화학 내성을 일으킨다(Bernard-Marty, 등 (2004) Oncologist 9, 617-32). 암 화학 내성 또는 화학 요법에 대한 저조한 반응을 설명하기 위해 다수의 메커니즘이 제시되었다. 가장 잘 연구된 내성 메커니즘은 치료 약물의 제거를 담당하는 약물 방출 펌프에서의 변화를 통해 중재된다(Trompier, 등 (2004) Cancer Res 6, 4950-6). 베라파밀 및 이의 유도체는 다중약물 내성 단백질 MRP1에 의해 글루타티온 압출을 통해 아포토시스를 촉발시킨다. 이러한 약물 방출 펌프를 극복하기 위한 한 가지 가능한 방법은 보다 높은 투여량의 화학 요법을 주는 것이다. 고 투여량 화학 요법으로 치료받은 환자들은 유방암 관련 이벤트를 현저히 덜 가짐에도 불구하고, 전체 생존율은 치료 독성 때문에 향상되지 않았다(Farquhar, 등 (2007) Cancer Treatment Reviews 33, 325-337; Farquhar, 등 (2005) Cochrane Database Syst Rev CD003139).
약물 운반 캐리어로서 리포좀은, 치료제의 생물학적 분배를 변형시키는 이의 능력에 기인하여, 지난 수십 년 동안 집중적으로 연구되었다. 리포좀은 반복된 주입에도 폐쇄된, 자가 조립된 이중층막이며, 무독성, 무용혈성, 무면역원성, 생체적합성/생분해성이다(Lian, 등 (2001) J Pharm Sci 90:667-680; Moghimi, 등 (2001) Pharmacol Rev 53: 283-318). 예를 들어, 독소루비신의 제형인 DOXIL과 같은 FDA 승인된 리포좀(Northfelt, 등 (1998) J. Clinical Oncology 16, 2445-2451; Ranson, 등 (1997) J Clin Oncol 15, 3185-3191; Gordon, 등 J(2001) Clin Oncol 19, 3312-3322; Al-Batran, 등 (2006) British Journal of Cancer 94, 1615-1620, Chia, 등 (2006) J Clin Oncol . 24, 2773-2778; Jones, 등 (2004) The Lancet Oncology 5, 575 -577)은 약물의 약물동력학 및 생물학적 분배를 효과적으로 조절할 수 있으며, 특정 조직이 회피되거나 표적화될 수 있다. 따라서, 독성 감소 및 효능 증가 모두를 통해, 치료 지수 증가가 달성될 수 있다(Maeda, 등 (2003) Int Immunopharmacol 3, 319-28).
약물은 내부의 트래핑된 수성 공간 내로, 또는 지질 막 내에 적재될 수 있다. ("스텔스(stralth)" 리포좀이라 불리는) 리포좀 표면 상에 친수성의 유연한 체인의 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG)을 이식하는 것은, 이들의 순환 라이프타임을 연장시켜 주는 것으로 나타났다(peg화 되지 않은 리포좀 단독에서는 수분인 것에 비해 10-50시간)(Lasic, 등 (1999) Curr Opin Mol Ther 1: 177-185; Lasic, (1996) Nature 380: 561-562).
리포좀의 순환 시간의 증가로, 종양 맥관 구조의 누설적이고(leaky) 불완전한 구조에 기인하여 증가된 투과성 및 보유 효과("EPR 효과")에 의해 보다 많은 리포좀이 종양 조직에 수동적으로 축적된다. 종양 조직에서의 축적 후, 이러한 긴 순환 리포좀은 간극(interstitial space)에 유지되며, 결국 디컴포지션 또는 디그레데이션에 의해 캡슐화된 약물을 간극으로 방출한다. 따라서, 리포좀은 전신 노출을 덜 받은 환자에게 화학 요법의 고 투여량을 운반할 수 있다. 그러나, 리포좀은 간극 내로 약물을 방출하고, 방출된 약물의 종양 세포 내로의 수송은 느린 프로세스이며, 이는 약물 유출 펌프가 세포들로부터 약물을 효과적으로 제거하도록 하며, 이에 따라 효과가 감소한다.
표적된 리포좀은 리간드 바인딩 효능을 증가시키기 위해 이들의 표면에 컨주게이티드된 표적 리간드를 갖는 긴 순환 리포좀이다. 면역리포좀은, 표적부가 항체 또는 항원-바인딩 능력을 갖는 항체 프래그먼트인 표적된 리포좀이다. 종양 조직 내에 면역리포좀의 축적은 또한 EPR 효과에 기초한다. 종양 조직 내에서의 축적 후, 긴 순환 리포좀과 다른 면역리포좀은 리간드-리셉터 상호작용을 통해 신속히 종양 세포에 바인딩하고 내면화되며, 캡슐화된 약물을 종양 세포에 방출한다. Mamot 등, Cancer Res 2005; 65: 11631-11638 참조. 리간드-리셉터 상호작용에 의해 종양 세포 내로 직접 운반된 고 투여량의 캡슐화된 약물은 암 약물 내성을 극복하는 능력을 증진시킨다.
인간 상피 성장 인자 리셉터-2(Her-2/neu)는 유방암 세포의 ~25% 내지 30%에서 발현되는 것으로 발견된다. 따라서, Her-2/neu 과발현 유방암의 치료를 위한 표적된 약물 운반을 달성하기에 유망한 운반 시스템으로서, 항-Her-2/neu 면역리포좀이 제안되었다. 예를 들어, Park 등 Clin Cancer Res . 2002 (4): 1172-81 참조.
질병 부위로 치료 약물의 표적된 운반은 치료 효능을 희생시키지 않고 화학 요법의 전신 노출을 잠재적으로 줄일 수 있다. 그러나, 단일 표적 운반 치료는, 정상 세포로부터 모든 암 세포를 분화시킬 수 있는 표적부가 없기 때문에 치료 효능에 있어서 제한을 갖는다. 예를 들어, 불과 ~25% 내지 30% 유방암 세포들만이 Her-2/neu 리셉터를 과발현한다.
약물 운반의 이러한 진보에도 불구하고, 암, 특히 유방암의 이질성은 치료 효능을 제한한다. 따라서, 전신성 독성 및 부작용을 감소시키고, 암 환자에서 약물 내성을 극복하는 보다 효과적인 치료 또는 운반 방법을 개발하는 것이 중대하게 요구된다.
보다 적은 전신성 독성으로 환자에게 고 투여량의 화학 치료제를 운반할 수 있는 치료제가 여전히 요구된다.
화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀, 및 항혈관생성제(anti-angiogenic agent)를 포함하는 비-표적된 리포좀을 포함하는 암 치료용 조성물이 제공된다.
일부 구현으로, 표적 리포좀은 면역리포좀이다. 다른 구현으로, 면역리포좀은 Her-2/neu에 바인딩한다. 다른 구현으로, 표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다. 바람직한 구현으로, 표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다.
일부 구현으로, 비-표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다. 바람직한 구현으로, 비-표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다.
일부 구현으로, 비-표적된 리포좀은 폴리에틸렌 글리콜에 컨주게이트된다. 다른 구현으로, 화학 치료제는 독소루비신, 카보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 도세탁셀, 엘로티닙, 에토포시드, 플루오로우라실, 겜시타빈, 이매티닙 메실레이트, 이리노테칸, 메토트렉세이트(methotrexate), 파클리탁셀, 소라피닙, 수니티닙, 토포테칸, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴이다. 바람직한 구현으로, 화학 치료제는 독소루비신이다. 다른 구현으로, 증감제는 베라파밀이다. 일부 구현으로, 항혈관생성제는 베바시주맵이다.
일부 구현으로, 암은 유방암, 심장암, 폐암, 소화기암, 비뇨생식관암, 간암, 골암, 신경계암, 부인성암, 혈액암, 피부암 또는 부신암이다.
화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀, 및 항혈관생성제를 포함하는 비-표적된 리포좀을 암 치료가 요구되는 대상자에게 투여하는 것을 포함하는, 암 치료 방법이 제공된다. 다른 구현으로, 면역리포좀은 Her-2/neu에 바인딩한다. 다른 구현으로, 표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다. 바람직한 구현으로, 표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다.
암 치료 방법의 일부 구현으로, 비-표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다. 바람직한 구현으로, 비-표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다.
암 치료 방법의 일부 구현으로, 비-표적된 리포좀은 폴리에틸렌 글리콜에 컨주게이트된다. 다른 구현으로, 화학 치료제는 독소루비신, 카보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 도세탁셀, 엘로티닙, 에토포시드, 플루오로우라실, 겜시타빈, 이매티닙 메실레이트, 이리노테칸, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 소라피닙, 수니티닙, 토포테칸, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴이다. 바람직한 구현으로, 화학 치료제는 독소루비신이다. 다른 구현으로, 증감제는 베라파밀이다. 일부 구현으로, 항혈관생성제는 베바시주맵이다.
암 치료 방법의 일부 구현으로, 화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀은 상기 대상자에게 항혈관생성제를 포함하는 상기 비-표적된 리포좀과 동시에 투여된다. 암 치료 방법의 다른 구현으로, 화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀은 상기 대상자에게 항혈관생성제를 포함하는 상기 비-표적된 리포좀의 투여 전에 투여된다.
암 치료 방법의 일부 구현으로, 암은 유방암, 심장암, 폐암, 소화기암, 비뇨생식관암, 간암, 골암, 신경계암, 부인성암, 혈액암, 피부암 또는 부신암이다.
또한, 제 1 컴파트먼트에, 화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀을 포함하는 조성물, 및 제 2 컴파트먼트에 항혈관생성제를 포함하는 비-표적된 리포좀을 포함하는 조성물을 포함하는 키트가 제공된다. 일부 구현으로, 일부 구현으로, 표적 리포좀은 면역리포좀이다. 다른 구현으로, 면역리포좀은 Her-2/neu에 바인딩한다. 다른 구현으로, 표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다. 바람직한 구현으로, 표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다.
키트의 일부 구현으로, 비-표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다. 키트의 바람직한 구현으로, 비-표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함한다.
키트의 일부 구현으로, 비-표적된 리포좀은 폴리에틸렌 글리콜에 컨주게이트된다. 다른 구현으로, 화학 치료제는 독소루비신, 카보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 도세탁셀, 엘로티닙, 에토포시드, 플루오로우라실, 겜시타빈, 이매티닙 메실레이트, 이리노테칸, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 소라피닙, 수니티닙, 토포테칸, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴이다. 바람직한 구현으로, 화학 치료제는 독소루비신이다. 다른 구현으로, 증감제는 베라파밀이다. 일부 구현으로, 항혈관생성제는 베바시주맵이다.
도 1은 항원-코팅된 웰 플래이트 및 비-코팅된 웰 플래이트 상에서, 리포좀들과 항-Her-2/neu 항체에 컨주게이트된 면역리포좀들의 바인딩 능력을 비교한 것이다. 그룹들은 다음과 같이 표지된다. 컨트롤: 비-코팅된 웰 상에 있는 면역리포좀들. 리포좀들: 코팅된 웰 상에 있는 리포좀들. 면역리포좀들: 코팅된 웰 상에 있는 면역리포좀들. (n=4, *P<0.05).
도 2(a)는 시간(hours) 경과에 따른 리포좀으로부터 베바시주맵의 방출 프로필을 나타낸다.
도 2(b)는 시간(hours) 경과에 따른 면역리포좀으로부터 독소루비신의 방출 프로필을 나타낸다.
정의
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된, 단수형 "하나의(a 및 an)" 및 "상기 또는 그(the)"는 문맥상 명백히 달리 나타내지 않는 한 복수의 지시 대상들을 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "항체(antibody)"는 항원 상의 특정 에피토프에 특이적으로 바인딩할 수 있는 면역글로불린 분자를 칭한다. 항체는 천연 공급원으로부터 또는 재조합 공급원으로부터 유래된 손상되지 않은 면역글로불린일 수 있다. 항체는 전형적으로 면역글로불린 항체의 테트라머이다. 본 발명의 실행시 사용될 수 있는 항체는 예를 들어, 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, Fv, Fab 및 F(ab)2, 뿐만 아니라 단일 사슬 항체 및 인간화된 항체(Harlow 등, 1999, Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York; Harlow 등, 1989, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston 등, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird 등, 1988, Science 242:423-426)를 포함하는 다양한 형태로 존재할 수 있다. 용어 "항체"는 항원-바인딩 활성을 보유하는 항체 프래그먼트를 포함하는 것으로 의도된다.
"항혈관생성제(anti-angiogenic agent)"는, 세포외, 즉, 암 조직의 세포간 공간(간극)으로 운반될 경우에 혈관의 성장 또는 형성을 억제하는 물질을 의미한다.
"화학 치료제(chemotherapy agent)"는 암 치료에 유용한 물질을 의미한다. 화학 치료제는 치료 의도로 또는 생명 연장을 위해 또는 증상 완화를 위해 투여될 수 있다. 화학 치료제는 방사선 치료 또는 수술과 같은 다른 암 치료와 함께 투여될 수 있다.
본 명세서에 사용된, 용어 "치료하다(treat)" 및 "치료(treatment)"는 호환적으로 사용되며, 질병 발달의 지연 및/또는 발달하거나 발달할 것으로 예상되는 증상의 정도 감소를 나타내는 것을 의미한다. 상기 용어는 또한 기존 증상의 개선, 추가 증상의 예방, 및 증상의 근본적인 대사 원인의 개선 또는 예방을 포함한다.
본 명세서에 사용된, (치료의 대상자에서와 같이) "개체(individual)" 또는 "대상자(subject)"는 포유류와 비-포유류 모두를 포함하는 인간 및 비-인간 동물을 포함한다. 포유류는 예를 들어, 인간; 예를 들어, 유인원 및 원숭이와 같은 비-인간 영장류; 소; 말; 양; 및 염소를 포함한다. 비-포유류는 예를 들어, 어류 및 조류를 포함한다.
암 치료를 위한 제제의 양과 관련된 표현 "유효량(effective amount)"은 본 명세서에 기재된 조합에 사용된 경우에, 질병의 완전하거나 부분적인 차도의 상태를 유도하거나 또는 질병의 진행을 늦추는 조성물, 또는 활성 성분의 양을 칭한다.
본 명세서에 사용된 어구 "리포좀(liposimes)"은 미국 특허 제 4,753,788호에 기재되어 있는 바와 같은 유니라멜라 소포 또는 멀티라멜라 소포를 칭하며, 상기 문헌의 내용은 본 명세서에 참고문헌으로 편입된다.
본 명세서에 사용된 어구 "유니라멜라(unilamellar)"는 단일 폐쇄 수성 컴파트먼트를 형성하는 하나의 지질 이중층막을 포함하여 구성된 구 모양의 소포를 칭한다. 상기 이중층막은 지질의 2층; 내부층 및 외부층(리플릿(leaflet))을 포함하여 구성된다. 지질 분자의 외부층은, 이들의 친수성 머리부가 외부 수성 환경을 향하고, 아래쪽을 가리키는 이들의 소수성 꼬리들이 리포좀의 내부를 향하도록 배향된다. 지질의 내부층은 외부층 바로 아래에 놓이며, 지질은 이들의 머리들이 리포좀의 수성 내부를 향하고, 이들의 꼬리들이 지질의 외부층의 꼬리들을 향하도록 배향된다.
본 명세서에 사용된 어구 "멀티라멜라 리포좀(multilamellar liposimes)"은 하나 이상의 지질 이중층막을 포함하여 구성되며, 이 지질 이중층막은 하나 이상의 폐쇄된 수성 컴파트먼트를 형성하는 리포좀을 칭한다. 상기 막은 양파와 같이, 다양한 막들이 수성 컴파트먼트들에 의해 분리되도록 동심으로 배열된다.
본 명세서에 사용된 용어 "증감제(sensitizer)" 또는 "화학증감제(chemosensitizer)"는 화학 요법의 영향에 대하여 보다 많은 민감성을 종양 세포에 부여하는 어느 제제를 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서에 사용된 어구 "표적된 리포좀(targeted liposimes)"은 표적부(targeting moiety)가 부착된 리포좀을 칭한다. 표적부는 환자의 세포 상에 있는 표적에 바인딩한다. 바람직한 구현으로, 표적은 Her2/neu이며, 리포좀은 Her2/neu-표적된 리포좀이다.
본 명세서에 사용된 어구 "면역리포좀(immunoliposomes)"은 표적부가 항체 또는 항체 프래그먼트인 표적된 리포좀을 칭한다. 이러한 항체 프래그먼트는 이에 한정하는 것은 아니나 Fab 및 F(ab')2 프래그먼트를 포함한다.
개시된 물질의 조성물들 및 방법들과 관련하여 본 발명에서 예상되는 바와 같이, 일 견지로 본 발명의 구현은 그 안에 개시된 성분들 및/또는 단계들을 포함한다. 다른 견지로, 본 발명의 구현은 필수적으로 그 안에 개시된 성분들 및/또는 단계들로 구성된다. 다른 견지로, 본 발명의 구현은 그 안에 개시된 성분들 및/또는 단계들로 구성된다.
발명의 상세한 설명
세포외 약물로서, 항혈관생성제는 암 조직의 간극에 선택적으로 운반되며; 그리고 세포 내 치료제로서, 화학 치료제 및 화학 치료제에 대한 증감제는 원하지 않는 부작용을 회피하고 약물 내성을 극복하기 위해 적절한 리간드-리셉터 상호작용을 이용한 내면화에 의해 암 세포들의 내부에 선택적으로 운반된다. 항혈관생성제는 비-표적된 리포좀에 함유된다. 화학 치료제 및 이의 증감제는 표적된 리포좀에 함유된다. 면역리포좀에서, 암 세포의 표면에 고 특이적인 편입된 표적부는 약물 내성을 극복하기 위해 치료 약물 및 이의 증감제의 종양 세포 내로의 내면화를 촉진시킨다. 비-표적된 리포좀은 선택적으로 세포외 치료 약물, 즉, 항혈관생성제를 간극으로 선택적으로 운반하여, 세포-세포 커뮤니케이션을 방해함으로써 종양 성장을 저해한다. 이러한 병용 요법은 전신성 독성 및 부작용을 감소시킬 뿐만 아니라, 약물 내성도 감소시키도록 디자인된다. 이에 따라, 표적 및 비-표적된 리포좀 조성물에 운반되는, 3가지의 다른 종류의 화학 치료제들의 투여는, 이에 한정하는 것은 아니나 유방암을 포함하는 암 치료를 위한 개선된 플랫폼을 제공한다.
본 발명에 이용되는 리포좀은 자연 그대로의 유니라멜라 또는 멀티라멜라일 수 있으며, 후자는 하나 이상의 폐쇄된 수성 컴파트먼트를 형성한다.
본 발명의 조성물에 사용하기에 적절한 리포좀은 주로 소포-형성 지질을 포함하여 구성된 것들을 포함한다. 이러한 소포-형성 지질은 물에서 자발적으로 이중층 소포로 형성할 수 있는 것이다. 지질 이중층은 바람직하게 이의 주 성분으로서 적어도 인지질을 함유한다.
소포-형성 지질은 바람직하게 2개의 탄화수소 사슬, 전형적으로 아실 사슬, 및 극성이거나 비극성인 헤드기를 갖는 지질이다. 합성 소포-형성 지질 및 자연적으로 발생하는 소포-형성 지질은 예를 들어, 2개의 탄화수소 사슬이 전형적으로 약 14-22 탄소원자 길이이며, 다양한 불포화도를 갖는 인지질을 포함한다. 탄소 사슬이 다양한 포화도를 갖는 상기 지질 및 인지질은 상업적으로 구입하거나 공개된 방법에 따라 제조될 수 있다. 다른 적절한 지질은 당지질, 세레브로시드 및 콜레스테롤과 같은 스테롤을 포함한다.
예시적인 인지질은 포스파티딜콜린(레시틴), 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 및 포스파티딜이노시톨과 같은 글리세로인지질; 스핑고미엘린과 같은 스핑고인지질; 카디오리핀과 같은 천연 또는 합성 디포스파티딜 인지질, 및 이의 유도체들을 포함한다. 인지질은 당해 기술분야에 통상적으로 사용되는 방법에 의해 하이드로게네이티드될 수 있다(예, 하이드로게네이티드 소이빈 포스파티딜 콜린). 바람직한 인지질은 하이드로게네이티드 소이빈 포스파티딜 콜린(HSPC), 예를 들어, 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린과 같은 하이드로게네이티드 인지질이다. 리포좀은 이의 주 막 성분으로서 단일 인지질 또는 복수의 인지질을 함유할 수 있다.
또한, 리포좀은 상기 주 지질 성분 이외에 막 성분을 함유할 수 있다. 예를 들어, 리포좀은 인지질과, 그리고 지질 이중층으로의 안정한 편입이 가능하여 리포좀의 막을 형성하는, 상기 인지질 이외의 다른 지질 또는 이러한 지질의 유도체의 혼합물로부터 형성될 수 있다. 이러한 부가적인 지질의 예는 글리세로당지질, 스핑고당지질, 및 콜레스테롤과 같은 스테롤을 포함한다.
지질 이중층의 외부는 친수성 거대분자로 변형될 수 있다. 예로는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리글리세린, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리비닐 알코올, 스티렌-말레익 안하이드리드 얼터내이팅 코폴리머, 디비닐 에테르-말레익 안하이드리드 얼터내이팅 코폴리머, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐메틸에테르, 폴리비닐메틸옥사졸린, 폴리에틸옥사졸린, 폴리히드록시-프로필옥사졸린, 폴리히드록시프로필메타크릴아미드, 폴리우메타크릴아미드(polyumethacrylamide), 폴리디메틸아크릴아미드, 폴리히드록시프로필 메타크릴레이트, 폴리히드록시에틸 아크릴레이트, 히드록시메틸셀룰로즈, 히드록시에틸셀룰로즈, 폴리아스파타미드, 및 합성 폴리아미노산을 포함한다. 친수성 거대분자는 생체내에서 리포좀의 안정성을 증가 및 지연시킬 수 있다. 바람직한 친수성 거대분자는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리글리세린(PG) 및 폴리프로필렌 글리콜(PPG)이다. PEG는 전형적으로 500-10,000 달톤, 바람직하게 1,000-7,000 달톤, 그리고 보다 바람직하게 2,000-4,000 달톤의 분자량을 가질 수 있다.
친수성 거대분자부는 친수성 거대분자의 지질 유도체에 의해 리포좀막 내로 도입될 수 있다. 특정 구현으로, 친수성 거대분자의 지질 유도체의 지질부분은 예를 들어, 인지질을 포함할 수 있다. 인지질에 포함된 아실 사슬은 예를 들어, C14-C20 지방산과 같은 포화 지방산을 포함할 수 있다. 이러한 아실 사슬의 예는 디팔미토일, 디스테아로일 및 팔미토일 스테아로일을 포함한다.
친수성 거대분자의 지질 유도체의 인지질부분은 친수성 거대분자와 반응하여 친수성 거대분자의 지질 유도체를 형성할 수 있는 작용기를 포함할 수 있다. 친수성 거대분자와 반응적인 작용기를 갖는 인지질의 예는 포스파티딜 에탄올아민(아미노기), 포스파티딜글리세롤(히드록시기), 및 포스파티디딜세린(카르복시기)와 같은 아미노, 히드록실 및 카르복시기를 포함하는 인지질을 포함한다.
친수성 거대분자의 특정 지질 유도체는 인지질; 스테롤과 같은 부가적인 지질; 지방족 알코올; 지방족 아민; 글리세린 지방산 에스테르; 및 PEG, PG, 또는 PPG, 바람직하게는 PEG의 결합에 의해 형성될 수 있다. 이러한 바람직한 것 중 하나인 PEG-유도 인지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)](DSPE-PEG)이다. 일 구현으로, PEG는 약 2,000달톤의 분자량을 갖는다(DSPE-PEG2000). 바람직한 구현으로, 리포좀은 적어도 하나의 PEG-유도 인지질을 포함한다. 리포좀막 내에 PEG-유도 지질의 편입은 입체구조적으로 안정화된 리포좀("스텔스 리포좀(stealth liposimes)"의 형성을 일으키며, 이는 연장된 긴 순환 시간을 갖는다. 예, Lasic 등, Curr Opin Mol Ther 1:177-185(1999); Lasic, Nature 380:561-562(1996) 참조.
친수성 폴리머로 유도된 소포-형성 지질의 제조는 예를 들어, 미국 특허 제 5,395,619호에 기재되어 있다. 이러한 유도 지질의 전형적으로 1-20몰 퍼센트가 리포좀 제형에 포함되는, 이러한 유도 지질을 포함하는 리포좀의 제조가 또한 기재되어 있다(예, 미국 특허 제 5,013,556호 참조).
리포좀은 잘 알려진 방법에 따라 형성될 수 있으며, 이는 예를 들어, 미국 특허 제 8,241,663호에 요약되어 있다.
리포좀의 약물 로딩은, 예를 들어, 리포좀을 구성하는 지질층이 약물을 함유하는 수용액으로 수화되어, 이에 따라 리포좀 내에 약물을 로딩하는 방법에 의해, 또는 약물이 이온 구배에 따라 리포좀층을 통해 투과하여 리포좀 내로 로딩되도록, 이온 구배가 리포좀층의 내부와 외부 사이에 형성되는 방법(원격 로딩)에 의해 수행될 수 있다. 예, 미국 특허 제 5,192,549호 및 미국 특허 제 5,316,771호 참조.
상술한 물질들 및 방법들은 하나 이상의 항혈관생성제를 포함하는 비-표적 리포좀을 제조하기 위해 이용될 수 있다. 하나 이상의 화학 치료제 및 상기 화학 치료제(들)에 대한 하나 이상의 증감제를 포함하는 표적된 리포좀의 제조를 위해, 표적부를 포함하거나 이에 결합하기 위한 작용기를 함유하도록 리포좀 외부 표면이 적절히 형성되거나 유도된다면, 동일한 물질들 및 방법들이 이용될 수 있다. 표적된 리포좀이 면역리포좀인 경우에, 리포좀-형성 물질들은 항체나 항체 프래그먼트의 작용기 또는 항체나 항체 프래그먼트의 적절히 변형된 작용기에 연결될 수 있는 작용기를 포함하는 성분을 포함할 수 있다. 이러한 항체 프래그먼트는 이에 한정하는 것은 아니나 Fab 및 F(ab')2 프래그먼트를 포함한다.
예를 들어, 항체 또는 항체 프래그먼트와 같은 표적 리포좀 상의 표적부는, 바람직하게 조직 또는 세포의 표면 상에서 발견되는 표적 리간드에 바인딩하도록 선택된다. 바람직하게, 표적 리간드는 치료를 위해 표적된 암세포/조직에 의해 우선적으로 발현되거나 과발현되는 것이다. 일 구현으로, 치료받는 암은 유방암이며, 표적 리간드는 HER2(c-erB-2, new), 원발암 유전자 암호화된 성장 인자 리셉터이다. 다른 표적 리간드는 예를 들어, EGFR(HER1), HER3 및 HER4와 같은 암 관련 다른 성장 인자 리셉터를 포함한다. 다른 특정 암 관련 표적은 당해 기술분야에 알려져 있다.
일부 구현으로, 항체 또는 항체 프래그먼트는 예를 들어, PEG와 같은 친수성 폴리머 사슬의 유리 말단부(free distal end)에 공유결합되며, 이는 소포-형성 리피드에 결합되거나 매립된다. 선택된 지질에 선택된 친수성 폴리머를 결합시키고, 선택된 리간드, 특히 PEG와의 반응을 위해 폴리머의 유리, 미결합된 말단을 활성화하기 위해 광범위하게 다양한 기술이 존재한다. 예, Allen, 등, Biochemicia et Biophysica Acta , 1237:99-108 (1995); Zalipsky , Bioconjugate Chem ., 4(4):296-299 (1993); Zalipsky, 등, FEBS Lett, 353:71-74 (1994); Zalipsky, 등, Bioconjugate Chemistry, 6(6):705-708(1995); Zalipsky, in STEALTHL IPOSOMES(D. Lasic and F. Martin, Eds.) Chapter 9, CRC Press, Boca Raton, Fla.(1995).
일반적으로, 예를 들어, PEG와 같은 친수성 폴리머 사슬들은, 예를 들어, 광범위하게 다양한 리간드에 존재하는, 설프히드릴, 아미노기 및 (전형적으로 항체의 탄수화물 부분의 순한 산화로부터 유도되는) 알데히드 또는 케톤과 결합하기에 적절한 반응성 기를 함유하도록 작용화될 수 있다. 따라서, 일부 구현으로, 항체 또는 항체 프래그먼트는 리포좀 표면 상의 PEG 사슬의 말단부에 부착되어 링커를 통해 면역리포좀을 형성한다. 이러한 PEG-말단 반응성 기의 예는 (설프히드릴기와의 반응을 위한) 말레이미드, (일차 아민과의 반응을 위한) N-히드록시숙신이미드(NHS) 또는 NHS-카보네이트 에스테르), (알데히드 또는 케톤과의 반응을 위한) 히드라지드 또는 히드라진, (설프히드릴기와 우선적으로 반응적인) 요오드아세틸 및 (티올-반응성) 디티오피리딘을 포함한다. 이러한 기들로 PEG를 활성화하기 위한 합성 반응 스킴은 미국 특허 제 5,631,018호, 제 5,527,528호, 제 5,395,619호에 기재되어 있으며, 합성 반응 방법이 설명된 관련 섹션들은 명확히 본 명세서에 참고문헌으로 편입된다.
특정 구현으로, 면역리포좀은, 면역리포좀 상의 표적부로서 제공될 티올레이티드 항체/항체 프래그먼트와의 결합을 위해 PEG-말단 반응성 말레이미드를 포함한다. 말레이미드 작용화는, 소포-형성 지질에, 예를 들어, DSPE-PEG2000 말레이미드와 같이, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)-말레이미드]와 같은 적절히 말레이미드-작용화된 지질을 포함시킴으로써 달성될 수 있다.
면역리포좀과 같은 표적된 리포좀은 약물-로딩된(즉, 화학 치료제 및 증감제로 로딩된) 소포를 적절한 조건 하에서 적절한 표적 리간드와 반응하도록 함으로써 제조될 수 있다. 면역리포좀을 제조하기 위해, 표적 리간드로서 사용되는 항체는 우선, 리포좀 성분과의 공유결합을 위하여 항체 상에서 적절한 반응성 기들을 생성하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 항체는 티올기가 도입되도록 pH 8.0에서 숙신이미딜 아세틸티오아세테이트(SATA) 또는 2-이미노티올란(트라우트 시약(Traut's reagent))으로 변형된다(Derksen 및 Scherphof, Biochimica et Biophysica Acta 814: 151-155, 1985). 그 다음, 티올레이티드 항체는, pH 6.5에서 리포좀의 DSPE-PEG2000 성분과 같은 말레이미드기와 결합된다. 특정 구현으로, 0.3mg/ml의 Ab-SH 농도를 사용하는 Ab-SH 대 말레이미드의 몰비는 1:40이다. 반응은 4℃에서 12시간 넘게 수행된 다음, 정지되고, 컨주게이트되지 않은 항체는 예를 들어, 30,000rpm에서 1시간 동안 초원심분리에 의해 리포좀으로부터 분리된다. 변형적으로, 항체-함유 리포좀은 예를 들어, 염수로 미리-평형화된 Sephadex CL-4B 컬럼을 사용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 유리 항체로부터 분리될 수 있다. 기존의 연구(Nallamothu 등, AAPS Pharm Sci Tech 7: E32, 2006; Pattillo 등, Pharm Res 22: 1117-1120, 2005.)는, 이러한 결과가 충분한 수의 항체들이 각 리포좀 파티클에 결합되어 파티클과 항원의 결합을 일으키는 것으로 나타났다. 1:40 비의 Ab-SH 대 말레이미드기가 항체 결합에 수용가능한 비이나, 1:10 내지 1:100의 범위 내 비와 같은 다른 비가 약물 운반을 최적화하는데 이용될 수 있다. 약물-로딩된 리포좀에 대한 항체 결합은, 항체 결합을 위한 막 성분으로서 DSPE-PEG2000을 포함하는 약물-로딩된 리포좀에 대한 재분류로 예시되나, 다른 막 성분이 항체 및 항체 프래그먼트의 공유결합을 위한 작용기를 제공하는데 있어서 DSPE-PEG2000을 대체할 수 있다.
일 구현으로, 비-표적된 리포좀으로서 사용될 수 있거나, 항체로 데코레이션되어 표적된 항체를 형성할 수 있는 예시적인 긴-순환 리포좀은, 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HPSC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG2000 말레이미드를 포함하여 구성된다. 일 구현으로, 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% DSPE-PEG2000 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함하여 구성된다. 리포좀을 형성하기 위해, 지질들은 혼합된다. 그 다음, 지질들은 진공 하에서 밤새 건조된다. 그 결과 형성된 지질 필름은 40℃ 탈이온수에서 재수화되어 소포를 형성한다. 그 다음, 지질들은 예를 들어, LipexTM 압출기(Vancouver, BC, Canada)를 이용하여 0.2미크론 필터(Nucleopore)로 10회 압출되어 196±3nm의 리포좀 직경을 생성한다(Scott 등, FASEB J. 23(10): 3361-3367, 2009).
표적된 리포좀은 화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함한다. 화학 치료제는 본 발명의 방법에 의해 치료되는 암을 치료하는데 사용될 수 있는 어떠한 화학 치료제일 수 있다.
표적된 리포좀에 이용될 수 있는 항암 치료제는 이에 한정하는 것은 아니나, 아시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아도젤레신; 알데슬루킨; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루에티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나아제; 아스펠린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스태트; 벤조데파; 비칼루타미드; 비산트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 디메실레이트; 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브리퀴나 소듐; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼러스테론; 카라세미드; 카베티머; 카보플라틴; 카머스틴; 카루비신 하이드로클로라이드; 카젤레신; 세테핑골; 클로람부실; 시롤마이신(cirolemycin); 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 시클로포스파미드; 시타라빈; 다카바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온(diaziquone); 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드로록시펜; 드로록시펜 시트레이트; 드로모스탄올론 프로피오네이트; 듀아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로미틴 하이드로클로라이드; 엘라스미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라머스틴; 에스트라머스틴 포스페이트 소듐; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록수리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로우라실; 플루오로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 소듐; 겜시타빈; 겜시타빈 하이드로클로라이드; 히드록시우레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 아이포스파미드; 일모포신; 인터루킨; 인터페론; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 루프로리드; 루프로라이드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 소듐; 로머스틴; 로속산트론; 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 메이탄신; 메클로레타민 하이드로클로라이드; 메게스트롤 아세테이트; 멜렌게스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 소듐; 메토프린; 메튜레데파; 미틴도미드; 미토카신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 미코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시수란; 파클리탁셀; 페가스파가아제; 펠리오마이신; 펜타머스틴; 페플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포피머 소듐; 포피로마이신; 프레드니머스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조퓨린; 리보프린; 로글레티미드; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 세머스틴; 심트라젠; 스파포세이트 소듐; 스파소마이신; 스피로게르마늄 하이드로클로라이드; 스피로머스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 설로페너르(sulofenur); 탈리소마이신; 테코갈란 소듐; 테가퍼(tegafur); 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포핀; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸린(tiazofurin); 티라파자민; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리서빈 포스페이트(tricirbine phosphate); 트리메트렉세이트; 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 투불로졸 하이드로클로라이드; 우라실 머스타드; 우레데파(uredepa); 바프레오타이드; 베테포핀 설페이트(verteporfin sulfate); 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈루로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 조루비신 하이드로클로라이드를 포함한다.
다른 항암 약물은 이에 한정하는 것은 아니나, 5-에티닐우라실; 아비레이테론(abiraterone); 아실펄벤(acylfulvene); 아데시페놀; ALL-TK 안타고니스트; 암바머스틴; 아미독스; 아미포스틴; 아미노레불린산(aminolevulinic acid); 암루비신; 암사크린; 아나그렐리드; 아나스트로졸; 안드로그라폴리드; 혈관형성 저해제; 안타고니스트 D; 안타고니스트 G; 안타렐릭스; 항-등쪽화 형성 단백질-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1); 항안드로겐; 항에스트로겐; 아피디콜린 글리시네이트; 아포토시스 유전자 조절제; 아포토시스 조절제; 아퓨린산; 아라-CDP-DL-PTBA; 아르기닌 디아미나아제; 아설라크린(asulacrine); 아타메스탄; 아트리머스틴; 악시나스태틴 1(axinastatin 1); 악시나스태틴 2; 악시나스태틴 3; 아자세트론; 아자톡신; 아자티로신; 바카틴 III 유도체(baccatin III derivatives); 발라놀; 바티매스태트(batimastat); BCR/ABL 안타고니스트; 벤조클로린; 벤조일스타우로스포린; 베타 락탐 유도체; 베타-알레틴; 베타클라마이신 B; 베툴린산; bFGF 저해제; 비스아지리디닐스퍼민; 비스나피드; 비스트라텐 A; 브레플래이트; 부도티탄; 부티오닌 설폭시민; 칼시포트리올; 칼포스틴 C; 캠프토테신 유도체; 카나리폭스 IL-2; 카페시타빈; 카복사미드-아미노-트리아졸; 카복시아미도트리아졸; 카제인 키나아제 저해제(ICOS); 카스타노스퍼민; 세로핀 B; 세트로렐릭스; 클로른스(chlorlns); 클로로퀴녹살린 설폰아미드; 시카프로스트; 시스-포피린; 클로미펜 유사체; 클로트리마졸; 콜리스마이신 A; 콜리스마이신 B; 콤브레타스태틴 A4; 콤브레타스태틴 유사체; 코나게닌(conagenin); 크램베시딘 816; 크리스나톨; 크립토피신 8; 크립토피신 A 유도체; 큐라신 A; 시클로펜트안트라퀴논; 시클로포스파미드; 시클로플라탐; 시페마이신; 시타라빈 옥포스페이트; 세포상해인자(cytolytic factor); 시토스태틴; 다클릭시맵(dacliximab); 디하이드로디뎀닌 B(dehydrodidemnin B); 데슬로레린; 덱사메타손; 덱시포스파미드; 덱스라족산; 덱스베라파밀; 디아지큐온; 디뎀닌 B; 디독스; 디에틸노스퍼민(diethylnorspermine); 디히드로-5-아자시티딘; 디히드로탁솔, 9-디옥사마이신; 디페닐 스피로머스틴; 도세탁셀; 도코사놀; 돌라세트론; 독시플루리딘; 독소루비신; 드로나비놀; 듀오카마이신 SA; 엡셀렌; 에코머스틴; 에딜포신; 에드레콜로맵; 에플로니틴(eflornithine); 엘레멘(elemene); 에미테퍼(emitefur); 에피루비신; 에프리스테라이드; 엘로티닙; 에스트로겐 아고니스트; 에스트로겐 안타고니스트; 엑세메스탄(exemestane); 파드로졸; 파자라빈; 필그라스팀(filgrastim); 피나스테라이드; 플라보피리돌; 플레젤라스틴; 플루아스테론; 플루다라빈; 플루오로다우노루니신 하이드로클로라이드(fluorodaunorunicin hydrochloride); 5-플루오로우라실; 포페니멕스(forfenimex); 포메스탄(formestane); 포스트리에신(fostriecin); 포트머스틴(fotemustine); 가돌리늄 텍사피린; 갈륨 니트레이트; 갈로시타빈; 가니렐릭스; 겔라티나아제 저해제; 글루타티온 저해제; 헵설팜; 헤레귤린(heregulin); 헥사메틸렌 비스아세트아미드; 하이퍼리신; 이반드론산; 이다루비신; 요오독시펜(idoxifene); 이드라만톤; 일로마스태트; 이마티닙 메실레이트; 이미다조아크리돈(imidazoacridones); 이미퀴모드; 면역자극 펩타이드; 인슐린 유사 성장 인자-1 리셉터 저해제(insulin-like growth factor-1 receptor inhibitor); 인터페론 아고니스트; 인터페론; 인터루킨; 이오벤구안(iobenguane); 요오드독소루비신; 이포미놀(ipomeanol), 이리노테칸(irinotecan); 4-이로플락트(4-iroplact); 이르소글라딘(irsogladine); 이소벤가졸; 이소호모할리콘드린 B; 이타세트론; 자스플라키놀라이드(jasplakinolide); 카할라라이드 F(kahalalide F); 라멜라린-N 트리아세테이트; 란레오타이드; 레이나마이신; 레노그라스팀; 렌티난 설페이트; 렙톨스태틴; 루코보린; 백혈병 저해 인자; 루코사이트 알파 인터페론; 루코프로렐린; 레바미솔; 리아로졸; 친유성 이당류 펩타이드(lipophilic disaccharide peptide); 친유성 백금 화합물; 리소클린아미드 7(lissoclinamide 7); 로바플라틴; 롬브리신; 로메트렉솔(lometrexol); 로니다민; 로바스태틴; 록소리빈; 루로테칸(lurtotecan); 루테늄 텍사피린; 리소필린; 리틱 펩타이드(lytic peptide); 메이탄신(maitansine); 만노스태틴 A; 마리마스태트; 마스핀; 마트릴리신 저해제; 매트릭스 메탈로프로테이나아제 저해제; 메르바론(merbarone); 메테렐린; 메티오니나아제; 메토클로프라마이드; MIF 저해제; 미페프리스톤(mifepristone); 밀테포신; 미리모스팀; 비매칭 이중 가닥 RNA(mismatched double stranded RNA); 미토구아존; 미토락톨; 미토마이신 유사체; 미토나피드(mitonafide); 미톡산트론; 모파로텐; 몰그라모스팀; 모피다몰; 다중 약물 내성 유전자 인히비터; 머스타드 항암제; 미카퍼옥사이드 B(mycaperoxide B); 미리아포론; N-아세틸디날린; N-치환 벤즈아미드; 나파렐린; 나그레스팁; 나파빈; 나프테르핀; 나토그라스팀; 네다플라틴; 네모루비신; 네리드론산; 뉴트럴 엔도펩티다아제; 니루타미드; 니사마이신; 산화 질소 조절제; 니트록시드 항산화제; 니트룰린; O6-벤질구아닌; 옥트레오티드; 옥키세논; 오나프리스톤; 온단세트론; 온단세트론; 오라신; 구강 사이토카인 인듀서; 오마플라틴; 오사테론; 옥살리플라틴; 옥사우노마이신; 팔라우아민; 팔미토일리족신; 팔미드론산; 파낙시트리올; 파노미펜; 파라박틴, 파젤립틴; 페가스파가아제; 펠데신; 펜토산 폴리설페이트 소듐; 펜토스타틴; 펜트로졸; 퍼플루브론; 퍼포스파미드; 페릴릴 알코올; 펜아지노마이신; 페닐아세테이트; 포스파타아제 인히비터; 피시바닐; 필로카핀 하이드로클로라이드; 피라루비신; 피리트렉심; 플라세틴 A; 플라세틴 B; 플라스미노겐 액티베이터 인히비터; 프레드니손; 프로필 비스-아크리돈; 프로스타글란딘 J2; 프로테아좀 인히비터; 단백질 A-베이즈드 면역 조절제; 단백질 티로신 포스파타아제 인히비터; 퓨린 뉴클레오사이드 포스포릴라아제 인히비터; 퓨르퓨린; 피라졸아크리딘; raf 안타고니스트; 랄티트렉스드; 라모세트론; ras 파네실 단백질 트랜스퍼라아제 인히비터; ras 인히비터; ras-GAP 인히비터; 레텔립틴 디메틸레이티드; 리족신; 로히투킨(rohitukine); 로머티드(romurtide); 로퀴니멕스; 루빈기논 B1; 루복실; 사핑골; 사인토핀(saintopin); SarCNU; 사코피톨 A; 사그라모스팀; 세머스틴; 세네신스 유래 인히비터 I(senescence derived inhibitor I); 시조푸란; 소부족산; 소듐 보로캡테이트; 소듐 페닐아세테이트; 소라페닙; 솔베롤; 소네민(sonermin); 스파포스산(sparfosic acid); 스피카마이신 D; 스피로머스틴; 스플레노펩틴; 스폰지스태틴 1; 스쿠알라민; 스티피아미드; 설피노신; 수니티닙; 수퍼액티브 혈관작동성 장 펩티드 안타고니스트(superactive vasoactive intestinal peptide antagonist); 수라디스타(suradista); 수라민(suramin); 스와인소닌; 탈리머스틴; 타목시펜; 타목시펜 메티오디드; 타우로머스틴; 타자로텐; 테고갈란 소듐; 테가퍼(tegafur); 텔루라피릴륨; 테모포핀; 테모졸로미드; 테니포시드; 테트라클로로데카옥시드; 테트라조민; 탈리블라스틴; 티오코랄린; 트롬보포에틴; 트롬보포에틴 미메틱; 티말파신; 티모포에틴 리셉터 아고니스트; 티모트리난; 티로이드 자극 호르몬; 틴 에틸 에티오퓨르퓨린; 티라파자민; 티타노센 비클로라이드; 토포테칸; 톱센틴; 토레미펜; 전능성 줄기세포 인자(totipotent stem cell factor); 번역 인히비터; 트레티노인; 트리아세틸우리딘; 트리시리빈(triciribine); 트리메트렉세이트; 트립토렐린; 트로피세트론; 튜로스테라이드; 티로신 키나아제 인히비터; 트리포스틴; UBC 인히비터; 우베니멕스; 요생식동-유래(urogenital sinus-derived) 성장 저해 인자; 유로키나아제 리셉터 안타고니스트; 배프레오티드(vapreotide); 배리올린 B; 벨라레솔; 베라민; 버딘(verdins); 베테포핀(verteporfin); 비노렐빈(vinorelbine); 빈잘틴(vinxaltine); 비탁신(vitaxing); 보로졸; 자노테론; 제니플라틴; 질라스코브(zilascorb); 및 지노스타틴 스티말라머(zinostatin stimalamer)를 포함한다.
바람직한 화학 치료제는, 카보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 도세탁셀, 엘로티닙, 에토포시드, 5-플루오로우라실, 겜시타빈, 이매티닙 메실레이트, 이리노테칸, 메토트렉세이트(methotrexate), 파클리탁셀, 소라피닙, 수니티닙, 토포테칸, 빈크리스틴 및 빈블라스틴을 포함한다. 특정 구현으로, 화학 치료제는 안트라시클린-베이즈드 항암제이다. 이러한 제제는 예를 들어, 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신, 발루비신, 미톡산트론, 또는 이의 조합을 포함한다. 독소루비신이 특히 바람직하다.
화학 치료제에 대한 증감제는 화학 치료제의 효과를 증가시킬 수 있는 어떠한 증감제일 수 있다. 일 구현으로, 화학 치료제는, 다중약물 내성 단백질-1(MDR1) 인히비터, MDR-2 인히비터, 다중약물 내성 관련 단백질-1(MRP-1) 인히비터, 및 유방암 내성 단백질(BCRP) 인히비터와 같은 약물 내성에 대항하는 단백질 인히비터일 수 있다. 다른 증감제는 예를 들어, 시클로스포린 A, 베라파밀, 브리코다 및 레버산 및 이의 조합을 포함한다. 바람직한 구현으로, 화학 치료제에 대한 증감제는 베라파밀, 즉, (RS)-2-(3,4-디메톡시페닐)-5-{[2-(3,4-디메톡시페닐)에틸]-(메틸)아미노}-2-프로프-2-일펜탄니트릴)), 또는 이의 유도체이다. 베라파밀은 세포막의 유동성을 조절하고, 독소루비신의 효과를 증가시키는 내성 조절제이다.
바람직한 구현으로, 독소루비신과 같은 화학 치료제와 베라파밀과 같은 이의 증감제의 조합이, 화학적 내성을 극복하기 위해 표적된 리포좀에 의해 유방암 세포와 같은 암 세포로 선택적으로 운반된다.
본 발명의 비-표적된 리포좀은 항혈관생성제를 포함한다. 비-표적된 리포좀 내로의 로딩을 위한 항혈관생성제는 혈관생성 인자 또는 이의 리셉터의 혈관생성 활성을 차단하는 제제를 포함할 수 있다. 항혈관생성제는 자연적으로 발생하거나 비-자연적으로 발생하는 것일 수 있다. 예를 들어, 항혈관생성제는 VEGF-A에 대한 항체 또는 VEGF-A 리셉터; 항-PDGFR 인히비터(예, GleevecTM(이매티닙 메실레이트)); VEGF 리셉터 시그널링을 차단하는 소분자(예, PTK787/ZK2284, SU6668, SUTENTTM/SU11248(수니티닙 말레이트); 및 예를 들어, 국제특허출원 WO 2004/113304에 기재된 항혈관생성제들과 같은 혈관생성제에 대한 항체 또는 다른 안타고니스트를 포함할 수 있다. 항혈관생성제는 이에 한정하는 것은 아니나, 하기 제제들을 더 포함할 수 있다: VEGF-특이 안타고니스트, EGF 인히비터, EGFR 인히비터, ErbituxTM(세툭시맵(cetuximab), ImClone Systems, Inc., Branchburg, N.J.), VectibixTM(파니투무맵(panitumumab), Amgen, Thousand Oaks, Calif.), TIE2 인히비터, IGF1R 인히비터, COX-II(시클로옥시게나아제 II) 인히비터, MMP-2(매트릭스-메탈로프로테이나아제 2) 인히비터 및 MMP-9(매트릭스-메탈로프로테이나아제 9) 인히비터, CP-547,632(Pfizer Inc., N.Y., USA), Axitinib(Pfizer Inc., AG-013736), ZD-6474(AstraZeneca), AEE788(Novartis), AZD-2171), VEGF Trap(Regeneron/Aventis), Vatalanib(PTK-787, ZK-222584로도 알려짐; Novartis & Schering A G), Macugen(페갑타닙 옥타소듐(pegaptanib octasodium), NX-1838, EYE-001, Pfizer Inc./Gilead/Eyetech), IM862(Cytan Inc. of Kirkland, Wach., USA); 및 안지오자임(angiozyme), Ribozyme(Boulder, Colo.)의 합성 리보자임 및 Chiron(Emeryville, Calif.); 및 이의 조합. 다른 혈관형성 인히비터는 트롬보스폰딘 1, 트롬보스폰딘 2, 콜라겐 IV 및 콜라겐 XVIII를 포함한다. VEGF 인히비터는 미국 특허 제 6,534,524호 및 제 6,235,764호에 개시되어 있다. 또한, 항혈관형성제는, 예를 들어, 안지오스태틴 및 엔도스태틴과 같은 네이티브 혈관형성 인히비터를 포함한다. 예, Klagsbrun 및 D'Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39; Streit 및 Detmar(2003) Oncogene 22:3172-3179(예, 악성 흑색종에서 항혈관형성 치료를 열거한 표 3); Ferrara & Alitalo(1999) Nature Medicine 5(12): 1359-1364; Tonini 등(2003) Oncogene 22:6549-6556 (예, 알려진 항혈관형성 인자를 열거한 표 2); 및 Sato(2003) Int . J. Clin . Oncol . 8:200-206 (예, 임상시험에 사용된 항혈관형성제를 열거한 표 1) 참조.
바람직한 구현으로, 항혈관형성제는 "rhuMab VEGF" 또는 "AVASTINTM", (rhuMabVEGF, Avastin; Genetech)으로도 알려진 베바시주맵(bevacizumab)이며, 이는 VEGF에 특이적으로 바인딩하고, 이것이 리셉터에 바인딩하는 것으로부터 저해함으로써 혈관형성을 억제한다.
항혈관형성제는 종양 성장을 억제하기 위해 비-표적 리포좀에 의해 유방암 조직의 간극으로 선택적으로 운반된다.
상술한 다양한 리포좀 구현에서, 함유된 약학 제제, 즉, 화학 치료제, 증감제 또는 항혈관형성제는 리포좀의 내부 공간에, 리포좀의 지질 이중층 내에, 또는 양쪽 모두에 함유될 수 있다.
표적된 리포좀 및 비-표적된 리포좀은 상기 리포좀(들) 및 약학적으로 허용되는 캐리어 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물에 함유될 수 있다. 이러한 캐리어 및 희석제는 당해 기술분야에 잘 알려져 있다. 캐리어 또는 희석제는 예를 들어, 물(염수 또는 멸균수), 링거액, 인산완충용액, 덱스트로즈, 말토덱스트로즈액, 글리세롤 또는 에탄올일 수 있다.
표적된 리포좀 및/또는 비-표적된 리포좀을 포함하는 조성물은 비경구 투여와 같은 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 비경구 투여는 예를 들어, 정맥 내, 동맥 내, 피 내, 근육 내, 공동 내(복강, 관절 또는 눈), 직장, 복강 내, 피하, 국소 또는 직접 주입에 의한 것일 수 있다. 직접 주입은 종양 부위와 같은 질병 부위 내로 직접 주입하는 것을 포함할 수 있다. 리포좀은 정맥 내 투여될 수 있으며, 이에 따라 혈류에 의해 종양 부위와 같은 표적 부위로 이끌 수 있다.
일 구현으로, 표적된 리포좀과 비-표적된 리포좀의 조합이 동시-제형화되며(co-formulated), 단일 약학 조성물 또는 투여 형태의 일부로서 사용된다. 상기 조성물은 어느 경로에 의해 그리고 환자에서 원하는 치료 효과를 유발하기에 충분한 어느 스케쥴에 따라 투여될 수 있다.
변형적으로, 다른 구현에 따르면, 표적된 리포좀 및 비-표적된 리포좀은 둘 이상의 별도의 조성물로서 제형화되고 투여될 수 있다. 별도의 조성물은, 투여 요법이 환자에서 원하는 치료 효과를 유발하기에 충분하다면, 동일하거나 다른 경로에 의해 투여되고, 동시에 또는 다른 시기에 투여되고, 그리고 동일한 스케쥴 또는 다른 스케쥴에 따라 투여될 수 있다. 표적된 리포좀 및 비-표적된 리포좀 조성물이 연속적인 방식으로 투여되는 경우에, 두 조성물의 투여에 끼워 넣는 것이 실용적임이 입증될 수 있으며, 여기서 예를 들어, 0.1-48시간 기간과 같은 시간 간격으로 조성물의 투여가 분리된다.
치료 이득을 얻기 위해 투여되는 리포좀 제형의 양은, 물론, 함유된 약물(들)의 특성, 리포좀의 약물 로딩 정도 및 각 환자의 특정 환경에 의해 정해질 것이다. 이러한 환경은 환자의 키, 체중, 나이 및 성별, 질병의 특성 및 단계, 질병의 공격성 및 투여 경로를 포함한다. 화학 치료제 및 항혈관형성제에 대한, 적절한 투여량의 결정을 위한 출발점은 제제가 안전한 것으로 그리고 단독이나 다른 화학 치료제와의 조합으로 효과적인 것으로 발견된 투여량이다. 시중의 약물에 있어서, 적절한 투여량 및 투여 프로토콜은 제조자에 의해 권장되며, 예를 들어, Physician's Desk Reference, 58th Edition(Thomson Healthcare, 2004), 또는 60th Edition(Thomson Healthcare, 2006)에 공개되어 있으며, 이 문헌의 전체 공개내용은 본 명세서에 참고문헌으로 편입된다.
상기 조성물은 이에 한정하는 것은 아니나, 하기를 포함하는 광범위한 범위의 종양 타입을 치료하는데 유용한 것으로 믿어진다: 난소암, 자궁경부암, 유방암, 전립선암, 고환암, 폐암, 신장암, 결장암, 피부암, 뇌암, 및 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병 및 만성 림프성 백혈병을 포함하는 백혈병과 같은 혈액성 악성 종양으로부터 발생할 수 있는 종양들.
보다 구체적으로, 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법에 의해 치료될 수 있는 암은, 이에 한정하는 것은 아니나, 다음을 포함한다:
예를 들어, 혈관 육종, 섬유 육종, 횡문근육종 및 지방 육종과 같은 육종, 점액종, 횡문근종, 섬유종, 지방종 및 기형종을 포함하는 심장암;
예를 들어, 편평상피 세포, 미분화 소세포, 미분화 대세포 및 선암과 같은 기관지원성암종, 치경음(alveolar) 및 세기관지성 암종, 기관지 선종, 육종, 림프종, 연골종성 과오종(chondromatous hamartoma), 및 중피종을 포함하는 폐암;
예를 들어, 편평상피 세포암종, 선암, 평활근육종 및 림프종과 같은 식도암, 예를 들어, 도관 선암, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트린종, 카르시노이드 종양, 및 비포마(vipoma)와 같은 췌장암; 예를 들어, 선암, 림프종, 카르시노이드 종양, 카포시 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경 섬유종, 및 섬유종과 같은 소장암, 예를 들어, 선암, 관상선종, 융모선종, 과오종 및 평활근종과 같은 대장암을 포함하는 소화관암,
예를 들어, 선암, 빌름스 종양(Wilm's tumor)(신아세포종(nephroblastoma)), 림프종 및 백혈병과 같은 신장암; 예를 들어, 편평세포암종, 이행세포암종, 및 선암과 같은 방광 및 요도의 암, 예를 들어, 이행세포암종 및 육종과 같은 전립선암, 예를 들어, 정상피종, 기형종, 배종양, 기형암종, 융모암종, 육종, 간질세포암종(interstitial cell carcinoma), 섬유종, 섬유선종, 유선종성 종양 및 지방종과 같은 고환암을 포함하는 비뇨생식관암;
예를 들어, 간세포암종(hepatocellular carcinom), 담관암종, 간모세포종, 혈관육종 및 혈관종과 같은 간세포암을 포함하는 간암;
예를 들어, 골육종(osteogenic sarcoma, osteosarcoma), 섬유육종, 악성섬유조직구종(malignant fibrous histiocytoma), 연골육종, 유윙육종(Ewing's sarcoma), 악성 림프종(망상세포성 육종(reticulum cell sarcoma)), 다발성 골수종, 악성 거대세포 종양 척색종(malignant giant cell tumor chordoma), 골연골종(오스테오카르틸라지너스 외골증(osteocartilaginous exostoses)), 양성 연골종, 연골 모세포종, 연골점액양섬유종(chondromyxofibroma), 유골골종 및 거대세포 종양을 포함하는 골암;
예를 들어, 골종, 혈관종, 육아종, 황색종 및 변형성 골염과 같은 두개골암, 예를 들어, 수막종, 수막육종(meningiosarcoma), 및 신경교종증과 같은 뇌막암, 예를 들어, 성상세포종, 수아세포종, 신경교종, 상의세포종, 배세포종(송과체종(pinealoma)), 다형성 교아종, 핍지교종, 쉬반종(schwannoma), 망막아종, 및 선천성 종양과 같은 뇌암, 및 예를 들어, 신경섬유종, 수막종, 신경교종 및 육종과 같은 척수암을 포함하는 신경계암;
예를 들어, 자궁내막 종양과 같은 자궁암, 예를 들어, 경부암 및 종양전 자궁경부 이형상피증(pre-tumor cervical dysplasia)와 같은 자궁경부암, 예를 들어, 혈청 낭종암, 점액성 낭종암, 미분류 암종, 상피내암종, 선암, 섬유육종 및 흑색종을 포함하는 난소암종과 같은 난소암, 예를 들어, 투명 세포암종(clear cell carcinoma), 편평세포암종, 포도상 육종(botryoid sarcoma), 및 배아 횡문근육종(embryonal rhabdomyosarcoma)과 같은 질암, 및 예를 들어, 암종과 같은 난관암을 포함하는 부인암(gynecological cancers);
예를 들어, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 골수증식 질환, 다발성 골수종 및 골수형성 이상 증후군(myelodysplastic syndrome), 호즈킨스 림프종, 비-호즈킨스 림프종(악성 림프종) 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia)과 같은 혈액의 암(cancers of the blood)을 포함하는, 종양 조직의 형성을 일으키는 혈액암(hematologic cancers);
예를 들어, 악성 흑색종, 기저 세포암, 편평세포암종, 카포시 육종, 점 이형성 네비(moles dysplastic nevi), 지방종, 혈관종, 피부섬유종, 켈로이드, 건선을 포함하는 피부암; 및
예를 들어, 신경아세포종을 포함하는 부신암.
암은 전이성이거나 또는 전이성이 아닐 수 있는 고형 종양을 포함할 수 있다. 또한, 암은 백혈병에서와 같이 확산 조직으로서 발생할 수 있다. 따라서, 여기서 제공된 용어 "종양 세포(tumor cell)"는 상기 확인된 질병들 중 어느 하나에 의해 고통받는 세포를 포함한다.
리포좀 조성물은 하나 이상의 조성물로 채워진 하나 이상의 용기 또는 컴파트먼트를 포함하는 약학 팩 또는 키트로 제공될 수 있다. 선택적으로, 약제 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 처방된 형태의 공지사항이 이러한 용기(들)과 관련되며, 이러한 공지사항은 인간 투여용으로서 제조 기관, 사용 또는 판매의 승인을 반영한다. 또한, 선택적으로 이러한 용기(들)과 함께 본 발명의 방법을 수행하기 위한 설명이 포함된다.
일 구현으로, 키트는, 제 1 컴파트먼트에, 화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀을 포함하는 조성물을, 그리고 제 2 컴파트먼트에, 항혈관생성제를 포함하는 비-표적된 리포좀을 포함하는 조성물을 포함한다.
설명 재료는 상기 방법을 유용성을 알리기 위해 사용될 수 있는 공개물, 도표 또는 어느 다른 매체의 표현을 포함할 수 있다. 포장 삽입물은 예를 들어, 종이, 판지, 필름과 같은 어느 물리적 매체에 수용된 텍스트를 포함하거나, 또는 디스켓, 칩, 메모리 스틱 또는 다른 전자 저장 형태와 같은 전자 매체에 수용될 수 있다. 본 발명의 키트의 설명 재료는 예를 들어, 키트의 다른 내용물을 함유하는 용기에 부착되거나, 또는 키트를 함유하는 용기와 함께 적재될 수 있다.
변형적으로, 설명 재료는 설명 재료 및 키트의 내용물이 수령인에 의해 협조적으로 사용될 목적으로 용기로부터 별도로 적재될 수 있다.
발명의 실시를 이하 비제한적인 실시예에 의해 설명한다.
실시예
실시예 1
리포좀 및 항- Her -2/ neu 항체에 컨주게이트된 면역리포좀의 제조; Her -2/ neu 항원에 대한 바인딩의 검출
A. 리포좀 제조
50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 45몰% 콜레스테롤, 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 2몰% DSPE-PEG-말레이미드(Avanti, Alabaster, AL)로 구성된 리포좀을 다음과 같이 제조하였다. 이들을 혼합한 후, 지질을 진공 하에 밤새 건조한 다음, 그 지질을 40℃ 탈이온수에 재수화하여 소포를 형성하였다. 지질을 0.2미크론 필터(Nucleopore)를 이용하여 10회 압출하여(Lipex, Vancouver, BC, Canada) 직경 196±3nm를 갖는 리포좀을 생성하였다.
B. 면역리포좀 제조
표적 리간드가 항-Her-2/neu 항체인 면역리포좀을 또한 제조하였다. Her-2/neu에 대한 마우스 모노클로날 항체(Thermo Scientific, Fremont, CA)를 HSPC 내의 DSPE-PEG(2000)-말레이미드 및 상기 A에서 제조된 콜레스테롤-기반 리포좀에 다음과 같이 공유결합시켰다.
항체를 pH 8.0에서 숙신이미딜 아세틸티오아세테이트(SATA) 또는 2-이미노티올란(Traut's reagent)으로 일차 변형하여 티올기를 도입하였다. 그 다음, 티올레이트드 항체를 pH 6.5에서 리포좀의 DSPE-PEG2000 성분 상의 말레이미드기와 결합시켰다. Ab-SH 대 말레이미드의 몰비는 0.3mg/ml의 Ab-SH를 이용하여 1:40이었다. 4℃에서 12시간 이상 동안 수행한 반응을 정지시켰다. 컨주게이트되지 않은 항체는 30,000rpm에서 1시간 동안 초원심분리에 의해 리포좀으로부터 분리되었다. 항체 결합 후, 리포좀 크기는 동적 광산란법에 의해 측정시 196.8±2.7nm 내지 202.8±3.8nm로 성장하였다.
리포좀 및 면역리포좀 모두의 Her-2/neu에 대한 바인딩 능력을 시험관 내 세팅에서 평가하였다. 간략히, 리포좀 및 면역리포좀 모두 형광 염료(카르복시플루오르세인)(Avanti, Alabaster, AL)로 표지하였다. 96 웰 플레이트를 Her-2/neu 항원(Thermo Scientific, Fremont CA)로 코팅하였다. 면역리포좀 또는 리포좀을 상기 플레이트 상에서 배양하였다. 수회 세정한 후, 형광 강도를 IVIS 50 광학 이미지 시스템(Xenogen Corp.)을 이용하여 측정하였다.
Her-2/neu 항원 코팅된 웰에서, 면역리포좀은 리포좀에 비해 형광 강도에 있어서 현저한 증가(100 배)를 보여주었다(도 1). 다수의 면역리포좀이 Her-2/neu 코팅된 웰에 부착된 반면에, 비-코팅된 웰에서는 부착이 거의 없었다(도 1, "컨트롤(Control)"). 이러한 결과는 항-Her-2/neu 항체에 컨주게이트된 면역리포좀이 이들의 표적 Her-2/neu 항원에 바인딩할 수 있다는 것을 증명한다. 또한, 이러한 결과는 면역리포좀이 Her-2/neu을 과발현하는 암세포에 선택적으로 표적될 수 있음을 증명한다.
실시예 2
면역리포좀 표면 상에서 항체 결합 효율 및 항체 밀도의 검출
용리 프로필의 분석은 항체 결합 효율의 검출을 가능케 한다. 지질 농도 및 mAb 대 리포좀의 결합 효율은 각각, 포스포러스 어세이(phosphorous assay)(Fiske 등(1925) J Biol Chem 66: 375-400) 및 BCA 단백질 어세이 키트(Pierce)에 의해 평가된다. 결합 효율은 단백질:인지질의 비로부터 산출된다. 리포좀 당 mAb의 평균 수는 상기 값을 이용하여 산출된다. 인지질 mmol 당 mAb mg을 리포좀 당 컨주게이트된 mAb 분자의 수로 전환하는 것은 200nm 리포좀이 통상적인 인지질을 ~200,000분자로 함유하며(Hansen 등(1995) Biochim Biophys Acta 1239: 133-144) 그리고 HSPC 지질에 대한 양의 반을 함유하는 추정에 기초한다.
실시예 3
약물- 로딩된 리포좀 / 면역리포좀의 제조: 약물 방출 프로필
약물(리포좀에 대해서는 베바시주맵(bevacizumab), 그리고 면역리포좀에 대해서는 독소루비신(doxorubicin) 및 베라파밀(verapamil))은 Scott 등(2009) FASEB J, 23(10), 3361-336728에 기재된 탈수-재수화법에 의해 리포좀 내로 캡슐화되었다. 간략히, 리포좀을 진공 하에서 밤새 동결 건조하였다. 리포좀을 40℃에서 약물을 함유하는 1mL의 Tris 버퍼(pH 7.4)에서 재수화하고, 소포가 완전히 재형성될 때까지 보텍싱한 다음, 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 포집되지 않은 약물은 Sephadex G-50 컬럼을 통해 희석 시료를 통과시킴으로써 리포좀으로부터 분리되었다.
리포좀으로부터 베바시주맵의 방출 프로필은 직접 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA)에 의해 획득되었다. 그 결과를 도 2(a)에 나타내었다(x축 = 시간(hours)). 독소루비신의 방출 프로필은 488nm에서 이의 흡수에 의해 산출되었다. 그 결과를 도 2(b)에 나타내었다(x축 = 시간(hours)).
실시예 4
약물 로딩의 검출
소포를 함유하는 용리액은 하기 방법에 의해 약물 및 인지질에 대해 분석될 수 있다. 지질 함량은 비색법(Fiske 등, 상기 참조)에 의해 평가된다. 약물 함량의 고감도 측정을 위해, 시료를 HPLC 또는 모세 전기영동을 통해 통과시킨 다음, 질량분석한다. 편입된 총 약물은 우선 소포들을 파열한 다음, 용액 내 유리 약물의 검출에 의해 산출된다. 소포의 용적 및 소포의 수를 안다면, 약물의 총 로딩을 검출할 수 있다. 트래핑 효율은 유리 약물의 분리 후 약물/인지질 비를 분리 후 약물/인지질 비로 나눈 것으로 산출된다.
실시예 5
리포좀 / 면역리포좀의 특성화
소포 크기 및 크기 분포는 Malvern Zetasizer 1000HAS 분광계(Malvern Instruments, Malvern Wores, UK)를 이용하여 광자산란법에 의해 검출될 수 있다. 광원은 10mW He-Ne 레이저(633nm)이며, 산란광은 애벌란시 포토 다이오드(avalanche photodiode) 검출기를 이용하여 직각에서 측정된다. 이 기기는 10mM NaCl에서 라텍스 비드(100 또는 200nm)를 이용하여 보정된다. 측정 전에 용액을 0.22㎛ 주사기 필터로 여과하고 탈가스한다. 매우 희석된 용액이 사용되기 때문에, 굴절률 및 점도에 대한 값은 유체역학적 직경의 산출을 위한 물의 값과 동일하게 설정된다. 데이터는 z-평균 크기 및 다분산성을 산출하는 Contin 알고리즘(Malvern Instruments)을 이용하여 분석된다. 전자는 소포의 평균 유체역학적 직경이며, 한편, 후자는 소포 크기 분포의 폭의 측정값이다.
실시예 6
시험관 내 및 생체 내에서 리포좀 / 면역리포좀의 검출
리포좀/면역리포좀의 검출은 다음과 같이 시험관 내 또는 생체 내에서 수행될 수 있다. 수용성 방사성 표지가 약물 대신에 (또는 약물과 함께) 리포좀/면역리포좀 내로 로딩된다. 시험관 내 또는 생체 내에서 리포좀/면역리포좀 수준을 정량화하기 위해 콜레스테릴 (4-14C)올레이트, 125I-표지된 항체 또는 111In-DTPA와 같은 방사성 트레이서가 리포좀/면역리포좀 제형에 포함된다(Ogihara-Umeda 등(1996) J Nucl Med 37:326-332). 콜레스테릴 (4-14C)올레이트는 리포좀/면역리포좀과 다른 막성 파티클(membraneous particles) 사이에 이온교환이 불가능하므로 콜레스테릴 (4-14C)올레이트가 사용된다. 변형적으로, 콜레스테릴 BODIPY 576/589 또는 카르복시플루오르세인 485/535와 같은 발색 원소가, 형광 분광법을 이용한 리포좀/면역리포좀 국소화를 모니터하기 위한 "빌트-인(built-in)" 방법을 제공한다.
실시예 7
유방암 세포주에 대한 시험관 내 치료 효능의 평가
운반 시스템의 바인딩 효율 및 치료 효능을 시험하기 위해, 항암 약물을 함유하는 리포좀 및 면역리포좀을 다양한 방사성 표지로 표지한 다음, Her-2/neu 양성 인간 유방암 세포주(BT474)와 함께 배양한다. 바인딩 효율은, 리포좀으로부터의 방사성 표지 신호를 면역리포좀으로부터의 방사성 신호와 비교함으로써 획득된다. 병용 요법으로부터 획득된 치료 효능은 유리 약물 및 각 운반 시스템 단독으로 달성된 효능과 비교된다. 면역리포좀의 세포 내 이입 흡수 및 약물 방출 능력을 조사하기 위해 이중 방사성 표지된 면역리포좀을 BT474와 함께 배양한다.
리포좀 / 면역리포좀 바인딩 및 흡수
Her-2/neu 양성 BT474 인간 유방암 세포주가 임상적으로 관련된 시험관 내 모델로서 사용된다. 공개된 방법(Nallamothu 등(2006) AAPS Pharm Sci Tech 7: E32)에 따라, 면역리포좀 및 리포좀의 운명은 항체 성분 상에 125I로 표지된 면역리포좀 및 리포좀의 친수성 코어에 트래핑된 방사성 표지(111In-DTPA와 같은)로 표지된 리포좀에 따라 모니터된다. 24-웰 배양 플레이트에서 BT474 세포는 다양한 배양 시간(0-24시간) 동안 방사성 표지된 리포좀 및/또는 면역리포좀과 함께 배양된 후에, 세포들은 바인딩되지 않은 물질을 제거하기 위해 세정된다. 배양 시간의 마지막에, 세포 생존도를 측정한다. 미처리된 BT-474 세포들 및 유리 약물로 처리된 세포들은 컨트롤로서 제공된다. 세포들은 기계적 스크래핑, 원심분리 및 후속적인 PBS를 이용한 세포 펠렛의 세정에 의해 수거된다. 세포 흡수도는 세포 펠렛에서의 방사능 대 상층물에서의 방사능의 비로부터 검출된다(Koning 등(1999) Biochim Biophys Acta 1420: 153-167). 제거불가능한 표지는 세포들을 산 세정으로 처리한 후에 세포 펠렛에서 검출된다(Geissler 등(1992) Cancer Res 52: 2907-2915). 세포 펠렛에서 방사능은 BSA 스탠다드를 이용한 단백질 어세이에 의해 검출되는 세포 단백질의 양에 대해 표준화된다(Koning 등(2002) Cancer Detect Prev 26: 299-307).
이중 방사성 표지 실험
보다 상세히 세포들에 의한 면역리포좀의 흡수 및 프로세싱을 조사하기 위해, 이중 방사성 표지된 면역리포좀을 사용한다. 면역리포좀 소포 111In-DTPA 내로 로딩된 친수성 방사성 표지의 운명은 표적 항체 상의 방사성 표지(125I)의 운명과 비교된다. 이는 세포들의 내부로의 약물 페이로드(payloads) 방출에 대한 정보를 제공한다. 면역리포좀의 친수성 내용물이 세포 내로 방출될 경우에, 111In은 세포 내부에 보유되어야 하며, 한편, 111In이 세포 외로 방출될 경우에는 이는 세포로 들어가지 않아야 한다(Franano 등(1994) Nucl Med Bio1 21: 1023-1034). 리간드-리셉터 반응 매개된 내재화에 의해 면역리포좀이 세포들에 들어가기 전에, 약물 페이로드가 세포 외로 다소 방출될 수 있는 것이 상상될 수 있다. 111In 및 125I 방사능은 개별 에너지 윈도우(separate energy window)를 카운트함으로써 또는 111In의 붕괴 후 보다 오래-생존한 125I에 대한 시료들을 다시 카운트함으로써 구별될 수 있다. 세포 내 카운트를 비교하는 것은, 면역리포좀이 인도사이토즈화될 때까지 소포의 내용물을 보유하는지를 나타낸다. 이러한 조사를 위해, 항체들은 N-숙신이미딜 4-구아니딘오메틸-3-[125I]-요오드벤조에이트와 같은 125I-표지된 아실레이트제로 표지된다. 실험 기간 중에 항체들의 세포 내 분해의 이벤트시, 표지된 이화 생성물(catabolites)이 차지(charge)되고, 이에 따라 세포 내에 보유될 것이다(Vaidyanathan 등(2001) Bioconjug Chem 12: 428-438). 이러한 표지 기술은 당해 기술분야에 알려져 있다. 예, Knight 등(1996) J Nucl Med 37: 476-482 및 Knight 등(1998) Thromb Haemost 80: 845-851 참조. 111In 표지의 불안정성이 문제를 제공할 경우에, DOTA와 같은 금속 킬레이터가 사용된다(Lewis 등(1994) Bioconjug Chem 5: 565-576; McQuade 등(2004) Bioconjug Chem 15: 988-996). 면역리포좀의 종양 세포 내로의 내재화를 조사하기 위한 다른 방안으로, 공초점 현미경(co-focal microscopy)을 이용하여 함께 형광 표지하는 것이 사용된다.
실시예 8
생체 내에서 병용 치료의 생물학적 분배 및 치료 효능
리포좀-베이즈드 치료 조성물의 생물학적 분배 및 생체 내 효능은 이종 이식 종양 마우스 모델에서 증명된다. 4-6주령의 (폐경 후 유방암을 자극하는)무흉선 누드 난소 절제된(OVX) 마우스(NCI, Frederick, MD)에 에스트라디올(Estradiol) 펠렛이 보충된 BT-474 이종이식편을 이식하여 종양 성장을 촉진하였다(Patel 등(2007) Br JC ancer 96, (8), 1204-15; Baselga 등(1998) Cancer Res 58(13):2825-31). 마우스의 무게를 재고, 종양을 매일 측정하였다. 종양의 평균 기하학적 용적은 미터법 캘리버로 구형 물체로서 평가된다. 종양 이종이식이 확립되고, 150-400㎣ 용적이 되면, 마우스를 무작위로 처리군으로 배정한다.
항암 약물을 함유하는 리포좀 및 면역리포좀을 마우스에 정맥 내 주사하였다. 병용 치료로부터 획득된 결과는 각 운반 시스템 단독을 이용하여 획득된 결과와 비교된다. 치료는 종양이 0.4-0.7㎣(소) 또는 0.8-1.1㎣(대)의 기하학적 용적에 도달할 경우에 시작되었다. 치료에 대한 종양 크기 및 성장 지연은, 치료받은 종양이 컨트롤의 것과 동일한 용적에 도달하는데 걸리는 시간의 차이로 평가되며; 이러한 평가는 최대 치료 후 2개월 또는 종양 무게가 체중의 10%에 이를 때까지 계속되며, 이 시기에 동물은 희생되어야 한다. 치료받은 동물들의 종양 조직 및 정상 조직에서의 병리학적 변화를 독립적으로 평가한다.
리포좀/면역리포좀은 리포터 작용기를 함유할 수 있다. 리포터 작용기는 형광 태그, 방사성 핵종 태그, 또는 다른 태그를 포함할 수 있다. 형광-태그된 면역리포좀의 생물학적 분배는 비-침습성의, 실시간 생체 내 형광 이미징을 이용하여 정량화된다.
예를 들어, 생물학적 분배 조사는 BT-474 이종이식을 갖는 마우스에서 수행되며, 종양을 갖지 않은 마우스와 비교된다. 운반 시스템 내에 Cy5.5 이미징제의 존재는 형광의 실시간 모니터링 및 정량화를 가능케 한다. 리포좀 제형은 측면 꼬리 정맥을 통해 투여되며, 다양한 시점에(0-48시간) IVIS 50 System(Xenogen Corporation)을 이용하여 이미지화된다. Cy5.5로부터 형광은 Ex/Em 745/820nm(4초 노출시간)에서 검출된다. 종양 및 다른 장기(간, 신장 및 심장) 축적은 관심있는 부위에서 형광 카운트로부터 정량화된다. 종양 축적이 관찰되는 경우에, 그 시점에 선택된 마우스들을 마취시키고(케타민/자일라진), 혈액 시료를 꼬리 절개로부터 수집하고 무게를 잰다. 그 다음, 5ml의 염수를 좌심실에 주사하고, 우심실을 잘라내어 그 장기로부터 남은 혈액을 씻어낸다. 뇌, 심장, 신장, 간, 폐, 비장, 눈 및 종양뿐만 아니라 종양과 인접한 피부 및 정상 근육을 제거하고, 무게를 재고, 형광 및 공초점 현미경에 의해 모니터한다.
형광 표지를 이용한 생물학적 분배 조사를 입증하기 위한 방사성 표지
형광 표지에 대한 대체 방안으로서, (리포좀 및 면역리포좀 모두) 소포에 캡슐화된 방사성 표지된 화합물을 사용하여 생체 내에서 운반 시스템의 운명을 검출한다. 이러한 기술은 잘 확립되어 있다. 예, Nallamothu 등(2006) AAPS Pharm Sci Tech 7: E32; Knight 등(1996) J Nucl Med 37: 476-482; Knight LC 등(1998) Thromb Haemost 80: 845-851, McQuade 등(2004) Bioconjug Chem 15: 988-996; Knight 등(1987) Biochim Biophys Acta 924: 45-53; Knight 등(1988) J Nucl Med 29: 494-502; McQuade 등(2003) Q J Nucl Med 47: 209-220; Na1lamothu 등(2006) PDA J Pharm Sci Tech 60: 144-155 참조.
동물들의 무게를 재고, 방사성 표지된 운반 시스템을 각 동물에 정맥 내 주사한다. 주사 후 (상기 형광 조사에 의해 검출된) 적절한 시기에, 동물들을 안락사시키고; 종양 조직 및 장기들을 수집한다. 각 조직으로부터 얻은 시료들을 카운팅 바이얼에 넣고, 무게를 잰다. 모든 시료들을 투여된 투여량의 기준과 함께 Wallac Wizard 감마 카운터에서 카운트한다. 각 조직에서 리포좀/면역리포좀의 농도는 투여된 투여량의 퍼센트로 표현될 수 있다.
본 명세서에 인용된 각각의 모든 특허, 특허 출원, 공개물 및 GenBank 기록의 공개 내용은 이들 전체가 본 명세서에 참고문헌으로 편입된다.
당해 기술분야의 통상의 기술자는, 본 발명이 상기 언급된 목적을 수행하고, 목표 및 이점뿐만 아니라, 그 안에 내재된 것들을 획득하도록 잘 적응된다는 것을 쉽게 알 것이다. 본 발명은 특정 구현을 참고로 하여 기재되었으나, 본 발명의 다른 구현 및 변형이, 본 발명의 실행시 사용되는 참된 정신 및 견지를 벗어나지 않고 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 고안될 수 있다는 것은 분명하다. 첨부된 청구범위는 이러한 모든 구현들 및 등가의 변형들을 포함하도록 해석되는 것으로 의도된다.

Claims (41)

  1. 화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀, 및 항혈관생성제(anti-angiogenic agent)를 포함하는 비-표적된 리포좀을 포함하는 암 치료용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 면역리포좀인 암 치료용 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 면역리포좀은 Her-2/neu에 바인딩하는 암 치료용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 암 치료용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 암 치료용 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 암 치료용 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 암 치료용 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 폴리에틸렌 글리콜에 컨주게이트되는 암 치료용 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 화학 치료제는 독소루비신, 카보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 도세탁셀, 엘로티닙, 에토포시드, 플루오로우라실, 겜시타빈, 이매티닙 메실레이트, 이리노테칸, 메토트렉세이트(methotrexate), 파클리탁셀, 소라피닙, 수니티닙, 토포테칸, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴인 암 치료용 조성물.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 증감제는 베라파밀인 암 치료용 조성물.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 항혈관생성제는 베바시주맵인 암 치료용 조성물.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 화학 치료제는 독소루비신이며, 상기 증감제는 베라파밀이며, 상기 항혈관생성제는 베바시주맵이며, 그리고 상기 표적된 리포좀은 Her-2/neu에 바인딩하는 암 치료용 조성물.
  13. 화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀, 및 항혈관생성제를 포함하는 비-표적된 리포좀을 암 치료가 요구되는 대상자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 면역리포좀인 암 치료 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 면역리포좀은 Her-2/neu에 바인딩하는 암 치료 방법.
  16. 제13항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 암 치료 방법.
  17. 제13항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 암 치료 방법.
  18. 제13항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 암 치료 방법.
  19. 제13항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 암 치료 방법.
  20. 제13항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 폴리에틸렌 글리콜에 컨주게이트되는 암 치료 방법.
  21. 제13항에 있어서,
    상기 화학 치료제는 독소루비신, 카보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 도세탁셀, 엘로티닙, 에토포시드, 플루오로우라실, 겜시타빈, 이매티닙 메실레이트, 이리노테칸, 메토트렉세이트(methotrexate), 파클리탁셀, 소라피닙, 수니티닙, 토포테칸, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴인 암 치료 방법.
  22. 제13항에 있어서,
    상기 증감제는 베라파밀인 암 치료 방법.
  23. 제13항에 있어서,
    상기 항혈관생성제는 베바시주맵인 암 치료 방법.
  24. 제13항에 있어서,
    상기 화학 치료제는 독소루비신이며, 상기 증감제는 베라파밀이며, 상기 항혈관생성제는 베바시주맵이며, 그리고 상기 표적된 리포좀은 Her-2/neu에 바인딩하는 암 치료 방법.
  25. 제13항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 상기 비-표적된 리포좀과 동시에 상기 대상자에게 투여되는 암 치료 방법.
  26. 제13항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 상기 비-표적된 리포좀의 투여 전에 상기 대상자에게 투여되는 암 치료 방법.
  27. 제13항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 상기 비-표적된 리포좀의 투여 후에 상기 대상자에게 투여되는 암 치료 방법.
  28. 제13항에 있어서,
    상기 암은 유방암, 심장암, 폐암, 소화기암, 비뇨생식관암, 간암, 골암, 신경계암, 부인성암, 혈액암, 피부암 또는 부신암인 암 치료 방법.
  29. 제28항에 있어서,
    상기 암은 유방암인 암 치료 방법.
  30. 제 1 컴파트먼트에, 화학 치료제 및 상기 화학 치료제에 대한 증감제를 포함하는 표적된 리포좀을 포함하는 조성물, 및 제 2 컴파트먼트에 항혈관생성제를 포함하는 비-표적된 리포좀을 포함하는 조성물을 포함하는 키트.
  31. 제30항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 면역리포좀인 키트.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 면역리포좀은 Her-2/neu에 바인딩하는 키트.
  33. 제30항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 키트.
  34. 제30항에 있어서,
    상기 표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 키트.
  35. 제30항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 콜레스테롤, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 키트.
  36. 제35항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 약 50몰% 하이드로게네이티드 소이 L-α-포스파티딜콜린(HSPC), 약 45몰% 콜레스테롤, 약 3몰% 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[(폴리에틸렌 글리콜)2000](DSPE-PEG2000) 및 약 2몰% DSPE-PEG-말레이미드를 포함하는 키트.
  37. 제30항에 있어서,
    상기 비-표적된 리포좀은 폴리에틸렌 글리콜에 컨주게이트되는 키트.
  38. 제30항에 있어서,
    상기 화학 치료제는 독소루비신, 카보플라틴, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 도세탁셀, 엘로티닙, 에토포시드, 플루오로우라실, 겜시타빈, 이매티닙 메실레이트, 이리노테칸, 메토트렉세이트(methotrexate), 파클리탁셀, 소라피닙, 수니티닙, 토포테칸, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴인 키트.
  39. 제30항에 있어서,
    상기 증감제는 베라파밀인 키트.
  40. 제30항에 있어서,
    상기 항혈관생성제는 베바시주맵인 키트.
  41. 제40항에 있어서,
    상기 화학 치료제는 독소루비신이며, 상기 증감제는 베라파밀이며, 상기 항혈관생성제는 베바시주맵이며, 그리고 상기 표적된 리포좀은 Her-2/neu에 바인딩하는 키트.
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