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KR20100016274A - 반흔화에 있어서의 신규한 활성 기질 및 이들의 용도 - Google Patents

반흔화에 있어서의 신규한 활성 기질 및 이들의 용도 Download PDF

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KR20100016274A
KR20100016274A KR1020097023178A KR20097023178A KR20100016274A KR 20100016274 A KR20100016274 A KR 20100016274A KR 1020097023178 A KR1020097023178 A KR 1020097023178A KR 20097023178 A KR20097023178 A KR 20097023178A KR 20100016274 A KR20100016274 A KR 20100016274A
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라보라뚜와르 어르고
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Abstract

본 발명은 섬유모세포 증식 및/또는 분화와, 결과적으로 반흔화를 증진 및/또는 가속하기 위한 제제로서 공지된 화합물의 용도에 관한 것이다. 이 화합물은 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산 염 및 2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르의 공중합체이다. 이 화합물은 단독으로 또는 반흔화를 유도하거나 또는 가속화하기 위한 다른 활성 기질과 조합하여 사용될 수 있다. 이 화합물은, 단독으로 또는 다른 활성 기질과 조합하여, 국부적인 적용에 의해 상처 또는 그 주변 영역 상에 또는 점액성 멤브레인에 직접적으로 투여되어 질 수 있다. 이것은 또한 생체 외에서, 특히 피부 이식을 위한 세포의 발생을 위해 사용될 수 있다.

Description

반흔화에 있어서의 신규한 활성 기질 및 이들의 용도{Novel active ingredient in cicatrization and use thereof}
본 발명의 목적은 필수적으로 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산 염 및 2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르의 공중합체인 화합물의 신규한 용도이다.
더욱 자세하게는, 본 발명은 섬유모세포 증식 및/또는 분화를 증진 및/또는 가속하기 위한 제제로서 이 화합물의 용도에 관한 것으로, 특히 치료를 증진하기 위해 의도된 조성물의 제조 또는 대안적으로 피부 이식용 세포를 생성하기 위해 생체 외에서 사용되도록 의도된 조성물의 제조를 위해 이 화합물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 이 화합물을 단독으로 또는 다른 활성 기질과 조합하여 함유하는 상처 치료용 드레싱에 관한 것이다.
화상, 궤양, 신경병성 궤양, 정맥성 또는 동맥성 궤양, 당뇨성 궤양, 욕창, 물집, 삼출성 상처, 표면상의 표피성 손상을 포함하고, 만성 또는 민감성일 수 있 는 개도성 상처는 대부분의 상처를 나타낸다는 것이 공지되어 있다.
특성이든 또는 그의 근원이든 간에 상처를 치료하는 일차적인 목적의 하나는 이 상처를 덮는 것이다.
더욱이, 상처 치료는 자연적인 생물학적인 현상으로 인간과 동물의 조직은 여기에 특이적으로 치료 및 재생 과정의 수단에 의해 국소화된 손상을 치료할 수 있다는 것이 공지되어 있다.
일반적으로, 상처 치료는 다음 세 상태로 일어난다: 억제 상태(detersion phase), 그래뉼화 상태 및 상피화 상태로 이들 상태의 각각은 치료 과정이 정확한 시간상의 시퀀스에 따라 진행하도록 하는 특이적 세포질성의 활성에 의해 특징되어 진다.
억제 상태는 초기 염증성 현상의 발현으로 특징되어 진다. 외상에 바로 이어서, 혈액 및 림프로부터 유래하는 분비가 시작된다. 응집반응은 피브린의 상관적인 형성으로 방출된 트롬보키나제의 활성화에 의해 유도되어 진다. 대략 10여 분 후, 삼출이 시작되어, 상처의 감염 및 억제에 대해 방어를 제공한다. 대략적으로 4일 후, 부상은 증식 상태를 시작한다. 기관은 기질의 손실을 새로운 조직에 의해 대체하기 시작한다. 이를 위하여, 먼저 섬유아세포가 연결조직의 콜라겐 섬유의 전개를 위해 매트릭스로 작용하게 될 뮤코폴리사카라이드를 생성한다. 평균적으로, 6일째와 10일째의 사이에 분화 상태가 일어난다. 콜라겐 섬유 성숙이 시작된다. 상처는 특정 세포인, 미요피브로블라스트의 영향 하에서 수축한다. 그래뉼화 조직은 물을 점진적으로 고갈하고 그리고 증가적으로 보다 적은 도관을 포함하고 따라서 단단하 게 되어 진다. 그런 다음 이것은 차례로 상처 수축을 증가하는 상처 조직으로 전환되어 진다.
그 위에 섬유아세포가 중요한 역할을 하는 그래뉼화 상태로 알려진 제 이차 치료 상태의 과정으로 된다. 그래뉼화 상태는 대략적으로 3주 동안 지속되고, 그리고 정상의 치료 과정 동안에 상피화가 또한 형성되어 진다. 섬유아세포는 상처의 엣지, 모낭 및 땀샘으로부터 상처에서 다단복제 하여 케라티노사이트 전구체 작용한다. 3일 후, 섬유아세포는 콜라겐을 생성하고, 이 섬유는 이들이 지배하는 힘에 따라 배열되어 진다. 이들의 증식은 여러 가지 수의 인자에 의해 지배되어 진다. 일반적인 법칙으로서, 이 증식화 반응은 그래뉼화 조직이 기질이 손실을 대체하고 그리고 섬유아세포 증식화가 엣지의 준위로 상승하였을 때 간섭되어 진다.
섬유아세포는 치료 과정에 있어서 주요한 제제의 하나이다. 사실, 약 6일 차 주위에서 상처에 존재하는 섬유아세포의 절반 이상이 미요피브로블라스트로 전환한다. 이들 세포는 이들의 세포질 내에서, 상처의 수축을 유발하고 그리고 결과적으로 상처의 표면 영역에서의 감소와 그이고 이들의 폐쇄의 촉진화를 유발하는 수축성 근원섬유의 존재에 의해 특징되어 진다.
따라서, 이들 세포는 동공 상처에서 자발적인 폐쇄의 주요한 현상인 상처 수축에서 필수적인 역할을 한다. (수축성 단백질인 알파 평활근 액틴을 포함하는) 미요피브로블라스트의 40% 이상은 그래뉼화 조직에서 존재한다. 비록 이들의 소실을 촉발하는 신호가 완전히 이해되어 지지는 않지만, 상처가 치료될 때, 이들 세포는 사멸한다.
섬유아세포는 또한 세포 증식적 상태에서 키이 세포 역할을 한다. 섬유아세포는 콜라겐 타입 III를 분비하고 그런 다음 연속적으로 콜라겐 타입 I 및 헤파린 설페이트를 분비하며, 이는 피부 세포질 외 매트릭스의 기초적인 구성성분이고, 그러나 또한 히아룰론산, 콘드로이친 설페이트, 피브로넥틴 및 콜라게나제는 분비하지 않으며 이에 의해 상처의 폐쇄를 초래한다.
적은 상처 뿐 아니하 개도된 것에서도 상처의 치료과정은 수 시간, 수일 또는 수주 동안 지속되어 질 수 있고, 또는 궤양화의 경우와 같이 어떤 환경하에서는 더욱이 상처가 보다 더 장기간, 예를 들어 수 개월 또는 수년 동안 지속될 수 있다.
이것이 보다 짧거나 또는 장시간 동안 지속 되든 간에, 이 치료기간 동안 상처는 새로운 조직의 재생화가 개도된 것을 완전하게 덮을 때까지 어떠한 타입(병원성 유기물이나 외래 기질)의 침입의 대상이 되어 질 수 있다.
어떠한 침입을 방지하기 위해, 상처는 손상된 영역의 부위에 병원성 기질의 도입을 가능하게 할 수 있는 어떠한 오염물질(먼지, 분진 등)을 제거하기 위해 통상적으로 처리되어 진다. 이 영역에서의 조직의 창상 세정 및 감염방지가 연속적으로 수행되어 진다. 어떤 경우에 있어서, 상처 봉합을 용이하게 하기 위해 다수의 봉합술이 또한 개입되어 질 수 있다. 일단 이들 단계가 수행되어 지면, 상처는 치료에 양호한 환경이 유지되어 진다. 이를 수행하기 위해, 다양한 타입의 드레싱이 병원체의 도입 및/또는 이들의 증식을 방지하기 위해 사용되어 진다.
따라서, 상처를 치료할 때, 예를 들어 미생물이나 외래 기질에 의해 상처의 침입 그리고 결과적으로 상처의 감염을 방지하기 위해 상처-폐쇄 현상을 증진하는 것이 중요하다. 결과적으로, 상처 치료 과정을 유도하거나 또는 증진하기 위한 수단을 가지는 것이 필요하다.
상처 치료를 유도하거나 또는 촉진하기 위해, 다수의 활성 제제가 투여되어 질 수 있다. 이들 활성 제제는 다양한 준위로 그리고 다양한 치료 상태에서 작용할 수 있다. 이들은 치료되어 지는 상처의 단계와 타입에 따라 다르다. 이들 활성 제제는, 예를 들어 섬유아세포 및/ 또는 케라티노사이트 성장 인자(기초적 섬유아세포 성장 인자와 같은 것) 또는 가 성장 인자(만노스-6-포스페이트와 같은 것), 글리코스아미노글리칸(히아룰론산, 콜라겐 등과 같은 것), 호르몬류(에스트라디올, DHEA 등과 같은 것), 다당류(덱스트란과 같은 것) 등일 수 있다.
2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르 및 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산의 염의 공중합체인 화합물의 수단에 의해 섬유아세포 증식 및/또는 분화를 증진하고 및/또는 가속화하고, 그리고 결과적으로 치료를 증진하는 것이 또한 가능하다는 것이 전혀 놀랍게도 그리고 전혀 기대 외로 밝혀 졌다.
바람직하기로는, 상기 언급된 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산 염은 소디움 염이다.
이 공중합체는 특히 그 유화-안정화 특성과 그의 양호한 두께화 능력에 기인하여 화장품과 같은 영역에서 공지된 화합물이다.
이러한 제품은, 예를 들어 상표명 "Sepinov EMT 10ⓡ"으로 주식회사 "SEPPIC"에 의해 시판되고 있다.
따라서, 제일 측면에 따르면, 본 발명의 목적은 생체 내에서 또는 생체 외에서 섬유아세포 증식을 증진하고 및/또는 가속화하기 위한 조성물의 조제를 위해, 그리고 특히 치료를 증진하기 위한 조성물의 조제를 위해 2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르 및 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산의 염의 공중합체의 용도이다.
상기 언급된 공중합체는 생체 내에서 또는 생체 외에서 사용되어 질 수 있다.
생체 외에서의 적용의 예로서는, 섬유아세포 증식을 증진하기 위한 배양 배지의 조제에 이 화합물의 사용을 언급할 수 있다. 이 사용은 자가적인 피부 또는 피부-상피 시트 이식에 유용한 것으로 입증될 수 있다. 이것은 이러한 종류의 이식에 있어서, 세포 배양 기술이 환자로부터 취해진 적은 샘플로부터 피부의 충분한 표면 영역을 얻기 위하여 사용되어 지기 때문이다. 본 발명에 따른 공중합체의 사용은 섬유아세포 증식을 가속하는 것을 가능하게 하고, 그리고 따라서 이 타입의 치료에 유용한 것으로 입증되어 질 수 있다.
그 생체 내의 적용의 내용에 있어서, 상기 언급된 공중합체는 이것이 상처 위에 그리고 그 주위 영역에 직접적으로 적용되거나 또는 유익하기로는 국부적인 적용에 의해 점액성 멤브레인 상에 적용될 수 있는 조성물의 조제를 위하여 사용되어 질 수 있다. 바람직하기로는, 이 공중합체는 드레싱에 합체되어 질 수 있다.
일반적으로, 상기 언급된 공중합체는 단독으로 사용되거나 또는, 예를 들어 항미생물 제제 또는 통증 완화제와 같은 치료를 유도하거나 또는 가속화할 수 있는 또는 상처 치료에 바람직한 역할을 할 수 있는 다른 활성 기질과 조합하여 사용되어 질 수 있다. 이러한 활성 제제의 조합은 상처의 조합된 의료적 치료를 가능하게 한다. 본 발명의 내용에서 사용되어 질 수 있는 활성 기질 중에서는, 예를 들어, 살균제 또는 정균제제(클로라민, 클로로헥시딘, 실버 염, 아연 염, 메트로니다졸, 네오마이신 등), 치료를 증진하기 위한 제제(호르몬류, 펩티드류 등), 상처 억제를 증진하기 위한 효소(펩신, 트립신 등), 프로테아제 또는 메탈로프로테아제 저해제, 통증 완화제 또는 국부 마취제(리도카인, 신코카인) 또는 비스테로이드성 항-염증성 약물(이부프로펜, 케토프로펜, 페노프로펜, 디클로페낙)을 언급할 수 있다.
바람직하기로는, 상기 언급된 공중합체는 설페이트화 사카라이드 또는 설페이트화 사카라이드 염 또는 복합체와 조합하여 사용될 수 있다. 이 설페이트화 사카라이드는, 예를 들어 Na, K, Ca, Mg, Ba, Al, Zn, Cu, Zr, Ti, Mn 또는 Os와 같은 금속과 또는 아미노산과 같은 유기 염기와 염의 형태로 또는 복합체의 형태인 슈크로스 옥타설페이트일 수 있다. 특히 바람직한 결과는 상기 언급된 공중합체가 치료 과정에 있어서 그의 작용에 대해 알려진 활성 성분인 포타슘 슈크로스 옥타설페이트와 조합하여 사용되어 질 때 얻어진다.
실험실 내에서 증식 연구는 기대 외로 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산 염과 2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르의 공중합체가 아주 낮은 복용량에서 섬유아세포 증식에 활성을 나타내는 것을 밝혀내는 것을 가능하게 한다. 특이적으로, 이러한 활성은 공중합체가 배양 배지에 0.00064　mg/mL의 농도로 존재할 때 관찰되어 진다.
특히 유익하기로는, 상기 언급된 공중합체는 또한 몇 일에 걸쳐 활성을 나타내는 것이 또한 밝혀 졌다. 생체 내에서 수행되어 진 실험은 배양 배지에서 상기 공중합체의 합체 72시간 후 섬유아세포 증식에 대한 활성을 검출하는 것을 가능하게 하였다. 이것은 특히 공중합체가 드레싱에 합체되어 질 때 유익하다. 특이적으로, 같은 드레싱은 이것이 교환되어 질 필요없이 동일한 시간 잔여 활성에 있는 동안 몇 일 동안 사용되어 질 수 있을 것이다.
일반적으로, 본 발명의 내용으로 사용된 공중합체는, 예를 들어 특히 용액, 크림, 젤, 매스, 특히 엘라스토머 매스, 또는 드레싱과 같은 어떤 종류의 조성에 합체되어 질 수 있다. 공중합체는 컴프레스 안에 합체되어 질 수 있다. 용어 "컴프레스"는 가능하기로는 비흡수성 부직포(폴리에스테르 섬유와 같은 것)와 조합된 흡수성 부직포(예를 들어, 점성에 기재된 것) 일 수 있는, 예를 들어 직물과 같은 드레싱에서 통상적으로 사용된 어떤 종류의 흡수성 물질을 의미하는 것으로 의도된다. 이것은 또한 초흡수성 섬유(Toyobo co, Ltd에 의해 시판되는 Lansealⓡ Fibres와 같은 것) 또는 폴리우레탄 포옴을 포함할 수 있다.
특히, 이 공중합체는 드레싱을 구성하는 총량으로 존재할 수 있고 또는 드레싱의 별도의 층으로 존재할 수 있고, 또는 대안적으로, 상처를 치료하기 위해 상처와 접촉을 이루도록 의도된, 드레싱의 표면을 덮는 도포층으로 존재할 수 있다.
용어 "드레싱"은 여기에서는 어떠한 종류의 공지된 드레싱, 바람직하기로는 계면 드레싱을 커버하는 것으로 의도된다. 이러한 드레싱은, 예를 들어 상표명 "Tulle Grasⓡ"(Solvay Pharma 사 제), Physiotulleⓡ(Coloplast사 제) 또는 Urgotulⓡ(Laboratoires Urgo사 제)으로 시판되고 있고 그리고 특허 EP　1　143　895호에 기술되어 있다.
이들 계면 드레싱은 일반적으로 메쉬의 형태이거나 또는 통상적으로는 엘라스토머 매스인 매스로 도포된 네팅(netting; 그물 세공)의 형태이다. 이들은 또한 드레싱이 적용되어 지는 상처의 타입에 의존하여 통공을 가질 수 있거나 또는 가지지 않을 수 있는 시트의 형태를 갖는, 웹 또는 네팅이 없이 매스로 구성될 수 있다(통공을 갖는 시트는 바람직하기로는 매스가 단지 약하거나 또는 흡수 능력이 없는 경우 삼출성 상처에 사용되어 질 것이고, 구멍은 따라서 상처의 삼출물을 제거하는 것을 가능하게 한다).
본 발명은 또한 상기 언급된 공중합체가 그 안에 합체되어 진 하이드로콜로이드류 상에 또는 하이드로겔류 상에 기재된 드레싱의 제조를 위해 적용을 밝힌다. 공지된 하이드로콜로이드-기재 드레싱은, 예를 들어 상표명 "Algoplaqueⓡ"(Laboratoires Urgo사 제), "Duodermⓡ"(Convatec사 제) 및 "Comfeelⓡ"(Coloplast사 제)으로 시판되고 있다. 이러한 드레싱은 다음의 특허 출원에 기술되어 있다: FR　2　392　076, FR　2　495　473 및 WO　98/10801 및 EP　264　299.
본 발명의 내용으로 사용된 공중합체는, 예를 들어 특허출원 WO　2006/007844호에 기술된 바와 같이, 상처와 접촉을 하도록 의도된 표면 상에 이 공중합체가 증착됨에 의해 컴프레스 또는 포옴과 같은 흡수성 요소에 합체되어 질 수 있다.
본 발명은 또한 포옴 또는 컴프레스와 같은 흡수성 층과 복합된 계면 드레싱의 조제 또는 흡수성 포옴과 복합된 하이드로콜로이드의 제조에 대한 적용을 밝힌다. 이러한 드레싱은 공지되어 있고 그리고, 예를 들어 상표명 "UrgotulDuoⓡ" 및 "Cellosorbⓡ"(Laboratoires Urgo사 제)로 시판되고 있다. 이러한 드레싱에 있어서, 상기 언급된 공중합체는 매스 및/또는 흡수성 층 안으로 합체되어 질 수 있다.
본 발명의 내용으로 사용된 바람직한 계면 드레싱은, 예를 들어 폴리(스틸렌-올레핀-스틸렌) 블럭 공중합체류에서 선택되어 진 하나 또는 그 이상의 엘라스토머류로부터 구성된 엘라스토머 매스 그리고 가소제, 태킹화 수지 및 필요하다면 항산화제로부터 선택되어 진 하나 또는 그 이상의 화합물로 구성되어 진다.
이러한 엘라스토머 매스는 이 기술 분야의 통상인에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어 1995년 4월에 에 Donatas Satas의해 출판된 "Advances in Pressure Sensitive Adhesive Technology"의 페이지 158 내지 171의 제7장 "Wound dressings"에 기술되어 져 있다.
이것이 계면 드레싱과 같은 드레싱에 합체되어 질 때, 상기 언급된 공중합체는 엘라스토머 매스의 중량에 대비하여 1 중량% 내지 5 중량%의 농도로 사용되어 질 수 있다. 이러한 농도는 섬유아세포 증식을 활성화하고 그리고, 결과적으로 치료를 증진하기에 충분하다는 것이 밝혀졌다.
일반적으로, 상기 언급된 공중합체는 이것이 합체되어 지는 매스의 중량에 대비하여 0.1 중량% 내지 20 중량% 사이, 바람직하기로는 1 중량% 내지 5 중량% 사이로 될 수 있는 양으로 드레싱에 존재될 것이다.
제이 측면에 따르면, 본 발명은 2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르와 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산의 염의 공중합체를 합체하는 상술된 드레싱을 커버하기 위한 것이다.
섬유아세포 상에서 상기 언급된 공중합체의 활성을 입증하기 위하여, 실험실 내에서의 연구가 두 가지 타입의 실험을 사용하여 수행되었다:
1. 단독 또는 활성 기질(본 경우에서는 포타슘 슈크로스 옥타설페이트)과 조합한 공중합체가 다양한 농도로 섬유아세포 배양 배지에 직접적으로 부가되었다.
이 경우에, 단독 또는 포타슘 슈크로스 옥타설페이트와 조합한 공중합체의 다양한 희석이 따라서 제조되고, 그리고 배양배지에 부가되었다.
따라서 0.011　mg/mL에서의 Sepinov EMT 10 공중합체와 0.00064　mg/mL에서의 포타슘 슈크로스 옥타설페이트의 공중합체의 희석물이 섬유아세포를 포함하는 배양 배지에서 시험되어 졌다.
2. 단독 또는 활성 기질(본 경우에서는 포타슘 슈크로스 옥타설페이트)과 조 합한 공중합체가 계면 드레싱의 매트릭스 내로 합체되어 지고 그런 다음 드레싱은 섬유아세포를 포함하는 배양 웰에 적용되었다.
이 경우에, 포타슘 슈크로스 옥타설페이트와 조합하거나 또는 조합하지 않은 공중합체를 다양한 농도로 포함하는 다양한 계면 드레싱이 다음에 기술하는 방법에 따라 생산되어 진다. 이들 두 활성 제제의 어느 것도 포함하지 않는 계면 드레싱이 또한 생산되고 그리고 비교의 수단으로 시험되어 졌다.
시험된 드레싱을 생산하기 위한 방법
a. 엘라스토머 매스의 생산
다양한 엘라스토머 매스(실시예 1 내지 5)가 다음의 조성분을 사용하여 다음 표 1에 언급된 중량의 비율로 생산되었다:
- 엘라스토머: 폴리(스틸렌-에틸렌-부틸렌-스틸렌)의 블럭 공중합체(SEBS로 약칭함); 주식회사 Kraton에 의해 시판되는 Kraton G 1654 및 G 1651;
- 가소제: 미네랄 오일: 주식회사 Shell에 의해 시판되는 Ondina 917;
- 항산화제: 주식회사 Ciba Specialty Chemicals에 의해 시판되는 Irganox 1010;
- 지방 기질: 페트롤륨 젤리: Aiglon에 의해 시판되는 Codex A petroleum jelly;
- 하이드로콜로이드: 소디움 카르복시메틸셀룰로스: 주식회사 Hercules에 의해 시판되는 CMC Blanose 7H4XF;
- 부가적 활성 기질: 포타슘 슈크로스 옥타설페이트: 주식회사 Euticals에 의해 시판되는 것
- 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산 염 및 프로페논 산 2-하이드록시에틸 에스테르의 공중합체: 주식회사 SEPPIC에 의해 시판되는 Sepinov EMT 10.
엘라스토머-기재 매스는 155℃의 셋 포인트 온도에서 Z-블레이드 믹서 내에서 혼합에 의해 제조되어 진다:
1. 스틸렌-에틸렌부틸렌-스틸렌 트리블럭 엘라스토머들은 절반의 미네랄 오일과 그리고 항산화제와 혼합되어 진다.
2. 30분에, 페트롤륨 젤리가 혼합물에 부가되어 진다.
3. 40분에, 나머지 미네랄 오일이 부가된다.
4. 55분에, 활성화 제제를 사용하는 소디움 카르복시메틸셀룰로스가 이 혼합물에 부가되어 진다.
믹서는 70분에 비워진다.
b.　드레싱의 생산
엘라스토머 매스로 도포된 메쉬로 구성된 계면 드레싱이 상기 언급된 엘라스토머 매스를 사용하여 제조되어 졌다.
보다 자세하게는, 여기에서는 대략적으로 0.8 내지 1㎟의 구경을 갖는 스퀘어 메쉬 셀(주식회사 MDB Texinov에 의해 시판되는 메쉬 555)을 갖는 랩 및 웨프트 방향으로 33 데시텍스의 폴리에스테르(폴리에틸렌 테레프탈레이트) 사로 만들어진 열경화성 마키젯으로부터 형성된 메쉬가 사용되었다.
이 메쉬는 135 내지 145℃에서 용융 엘라스토머 매스의 층으로 도포되어 지고 그런 다음 과잉의 양은 그 사이에 200㎛의 갭을 가지는 두 개의 고정된 롤러 사이를 통과함에 의해 제거되어 진다. 따라서 얻어진 스트립은 절단되어 지고 그런 다음 그 측면의 각각에 23㎛의 두께를 갖는 보호 폴리에스테르 필름과 복합되어지고, 따라서 개개의 드레싱은 불투과성의 파우치에 포장되고 그리고 25　kGy에서 β-방사 하에서 살균되어 형성된다.
구성성분 실시예 1 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5
미네랄 오일(온디나 917) 75 74 70 62.38 69.9
S-EB-S(Kraton G1651) 4.9 4.9 4.9
S-EB-S(Kraton G1654) 6 6
항산화제(Irganox 1010) 0.1 0.1 0.1 0.12 0.1
페트롤륨 젤리(코덱스 A 페트롤륨 젤리) 5 5 5 5 5
카르복시메틸셀룰로스(CMC Blanose 7H4XE) 15 15 15 14 14
Sepinov EMT 10 1 5 5 5
포타슘 슈크로스 옥타설페이트 7.5
섬유아세포 증식에 대한 2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르와 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산의 염의 공중합체의 효과가 다음의 프로토콜에 따라 결정되었다.
섬유아세포 증식에 대한 상기 언급된 공중합체의 활성의 입증 :
사용된 세포:
타입: 정상 인간 표피 섬유아세포 (NHDF) R9PF2의 풀
배양: 37℃, 5% CO2
배양 배지:
DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, Invitrogen 21969035)
2mM L-글루타민 (Invitrogen 25030024)
50　IU/mL 페니실린 (Invitrogen 15070063)
10% 송아지 태반 혈청 (v/v, Invitrogen 10270098).
시험된 제품:
실시예 1 내지 5의 에라스토머 매스를 사용하여 이미 기술하고 있는 바와 같이 하여 제조된 웰의 사이즈 및 0.011　mg/mL에 Sepinov EMT 10 공중합체의 희석과 0.00064　mg/mL에 포타슘 슈크로스 옥타설페이트의 희석을 갖는 드레싱이 시험되었다.
증식에 대한 효과:
섬유아세포가 12-웰 플레이트 내에 낮은 밀도(60% confluence)로 접종되고 그런 다음 세포는 희석 처리되거나 또는 드레싱 조각이 이들 플레이트에 적용되고 플러그의 수단에 의해 제 위치에 유지되어 진다("테스트"로 지칭됨). 플러그는 있지만 희석이 없는 것과 드레싱이 없는 것도 수행되었다("대조군"으로 지칭됨)
세포는 그런 다음 24시간, 48시간, 그리고 72시간 동안 배양되어 진다. 각 배양 시간 동안 적정된 티미딘([메틸-3H]-티미딘, 아머샴 TRK 686 2.5μCi/mL 최종 농도)이 배양의 최종 24시간 동안 부가되어 지고, 그런 다음 세포 층에서 세포의 DNA가 추출되고 그리고 정제되었으며, 그리고 DNA 내로 합체되어 진 방사능이 신틸레이션 카운터를 사용하여 계수되었다.
얻어진 결과는 분당 계수(cpm)로, 그런 다음 다음의 식에 따라 대조군에 대한 백분율로 표현되었다:
%대조군 = (cpm테스트 / cpm대조군) ×100
여기서:
cpm테스트: 테스트로 얻어진 분당 계수의 수
cpm대조군: 대조군으로 얻어진 분당 계수의 수
모든 실험은 삼 회 반복 수행되어 졌다.
얻어진 결과는 아래 표 2 내지 4에 나타냈다.
24시간에 적정된 티미딘의 편입 후 NHDF 증식의 연구 결과
처리 %대조군
대조군 100
실시예 1에 따른 드레싱 130
실시예 2에 따른 드레싱 196
48시간에 적정된 티미딘의 편입 후 NHDF 증식의 연구 결과
처리 %대조군
대조군 100
실시예 1에 따른 드레싱 181
실시예 2에 따른 드레싱 260
실시예 3에 따른 드레싱 506
실시예 4에 따른 드레싱 456
실시예 5에 따른 드레싱 243
0.011 mg/mL에서의 포타슘 슈크로스 옥타설페이트 106
0.00064 mg/mL에서 Sepinov EMT 10 125
0.011　mg/mL에서의 포타슘 슈크로스 옥타설페이트 그리고 0.00064 mg/mL에서 Sepinov EMT 10 152
72시간에 적정된 티미딘의 편입 후 NHDF 증식의 연구 결과
처리 %대조군
대조군 100
실시예 1에 따른 드레싱 150
실시예 2에 따른 드레싱 120
실시예 3에 따른 드레싱 493
실시예 4에 따른 드레싱 292
0.00064 mg/mL에서 Sepinov EMT 10 147
따라서 이들 실험실 내의 실험은 섬유아세포 증식에 대한 Sepinov EMT 10의 역할과 또한 이들 동일 세포에 대한 이 공중합체와 포타슘 슈크로스 옥타설페이트의 조합된 활성을 입증하는 것을 가능하게 한다.
얻어진 효과는 특히 Sepinov EMT 10 공중합체가 전체 질량의 5%의 농도로 엘라스토머 매스 안으로 편입되어 질 때 유익하게 되고, 이것은 세포 배양 배지와 48시간 및 72시간의 후 접촉이다.
아주 낮은 농도(0.00064　mg/mL)로 세포 배양 배지에 희석으로 단독으로 사용된 공중합체 또한 섬유아세포 증식을 유의적으로 증진하였다.
놀랍게도, Sepinov EMT 10 공중합체가 포타슘 슈크로스 옥타설페이트와 조합으로 사용되어 질 때 시너지의 효과가 섬유아세포 증식에서 일어난다는 것이 또한 관찰될 수 있었다. 이 시너지 효과는 특히 포타슘 슈크로스 옥타설페이트가 0.011　mg/mL의 농도에서 배양 배지에 그리고 0.00064　mg/mL의 농도에서 Sepinov EMT 10의 공중합체에 부가되어 질 때 관찰되었다.
따라서, 본 발명에 따라 사용된 공중합체는 상처의 치료에, 그리고 특히 치료를 증진하는데, 더욱 특별하게는 이것이 드레싱에 편입되어 질 때 상처 치료에 특히 유익하다.

Claims (12)

  1. 생체 내에서 또는 생체 외에서 섬유아세포 증식을 증진하고 및/또는 가속화하기 위한 조성물의 제조를 위한 2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르 및 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산의 염의 공중합체의 용도.
  2. 제 1항에 있어서, 치료를 증진하기 위한 조성물의 제조를 위한 용도.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 언급된 공중합체는 하나 또는 그 이상의 활성 기질과 조합된 것임을 특징으로 하는 용도.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 언급된 공중합체는 바람직하기로는 포타슘 슈크로스 옥타설페이트인 설페이트화 사카라이드와 조합된 것임을 특징으로 하는 용도.
  5. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 언급된 2-메틸-2-[(1-옥 소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판-술폰산의 염은 나트륨 염임을 특징으로 하는 용도.
  6. 2-하이드록시에틸프로페노에이트 에스테르 및 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산의 염의 공중합체를 포함함을 특징으로 하는 상처 치료용 드레싱.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 언급된 공중합체는 하나 또는 그 이상의 활성 기질과 조합된 것임을 특징으로 하는 상처 치료용 드레싱.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 언급된 활성 기질은 바람직하기로는 포타슘 슈크로스 옥타설페이트인 설페이트화 사카라이드인 것을 특징으로 하는 상처 치료용 드레싱.
  9. 제 6항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 언급된 공중합체는 드레싱을 구성하는 흡수성 요소에 존재함을 특징으로 하는 상처 치료용 드레싱.
  10. 제 6항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 언급된 공중합체는 매스, 바람직하기로는 드레싱을 구성하는 엘라스토머 매스에 존재함을 특징으로 하는 상처 치료용 드레싱.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 언급된 공중합체는 이것이 편입되어 지는 매스의 중량 대비 0.1 중량% 내지 20 중량% 사이, 바람직하기로는 1 중량% 내지 5 중량% 사이의 양으로 존재함을 특징으로 하는 상처 치료용 드레싱.
  12. 제 6항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 언급된 2-메틸-2-[(1-옥소-2-프로페닐)아미노]-1-프로판술폰산 염은 나트륨 염임을 특징으로 하는 상처 치료용 드레싱.
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