KR19990065727A

KR19990065727A - 신규한 알릴티오피리다진 유도체 및 그의 제조방법

Info

Publication number: KR19990065727A
Application number: KR1019980001153A
Authority: KR
Inventors: 권순경; 김상건; 박영남; 김미경; 최성희; 신혜순
Original assignee: 권순경; 황준수; 주식회사 서울제약
Priority date: 1998-01-16
Filing date: 1998-01-16
Publication date: 1999-08-05
Anticipated expiration: 2018-01-16
Also published as: DE69814473T2; US5942511A; CN1285825A; KR100261139B1; WO1999036407A1; EP1058681B1; EP1058681A1; CN1147477C; CA2317673A1; DE69814473D1; DE69814473T9; JP3417926B2; JP2002509138A; CA2317673C; ATE239711T1

Abstract

본 발명은 독성물질에 의해 유발되는 간질환의 예방 및 치료 또는 방사선에 대한 보호에 있어서 우수한 효과를 나타내는 하기 화학식 1의 신규한 알릴티오피리다진 유도체, 약제학적으로 허용되는 그의 염, 그의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다:

상기식에서

R₁은 할로겐원자, 저급알콕시 등을 나타내고,

R₂및 R₃는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬 등을 나타낸다.

Description

신규한 알릴티오피리다진 유도체 및 그의 제조방법

본 발명은 독성물질에 의해 유발되는 간질환 예방 및 치료 또는 방사선에 대한 보호에 있어서 우수한 효과를 나타내는 하기 화학식 1의 신규한 알릴티오피리다진 유도체 및 그의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:

화학식 1

상기식에서

R₁은 할로겐원자, 저급알콕시, 디알킬아미노알콕시, 하이드록시알콕시, 저급알킬에 의해 치환되거나 비치환된 페녹시, 벤질옥시, 또는 페닐을 나타내고,

R₂및 R₃는 각각 독립적으로 수소 또는 저급알킬을 나타내거나, R₂및 R₃가 함께 이들이 부착되어 있는 탄소원자와 함께 포화되거나 불포화된 6원환을 형성할 수 있으며,

단, R₁이 클로로인 경우에 R₂및 R₃는 수소가 아니다.

본 발명은 또한, 상기 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법, 이러한 제조방법 과정중에 사용되는 신규한 중간체, 및 이 화합물을 유효성분으로 함유함을 특징으로 하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

올티프라즈(oltipraz)는 세포내 산화환원효소의 일종인 마이크로좀 에폭사이드 하이드롤라제(microsomal epoxide hydrolase; mEH) 및 글루타치온 S-트랜스퍼라제(glutathione S-transferases; GST)의 발현율을 증가시켜 결과적으로 이들 효소의 세포내 농도를 증가시키는 작용을 하며, 이러한 기전에 따라 방사선으로부터 세포조직을 보호하는 효과를 나타낸다(참조: S. G. Kim,et al.,Molecular Pharmacology, 51, 225-233, 1997; S. Y. Nam,et al.,Radiation Research, 147, 613-620, 1997). 즉, mEH 및 GST의 세포내 발현율 증가는 방사선으로부터 이들 세포를 보호하는 작용과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있다. mEH 및 GST의 세포내 발현율 증가는 또한, 독성물질로부터 인체를 보호하는 효과와도 관련이 있는 것으로 인식되고 있다(참조: Ansheret al., Hepatology, 3, 932-935, 1983; Lu Miwa, Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 20, 513-531, 1980).

한편, 아세트아미노펜(acetaminophen) 또는 사염화탄소와 같은 독성물질에 의한 조직손상은 이들 독성물질을 대사하는 사이토크롬(cytochrome) P450 2E1의 활성과 깊은 관련이 있는 것으로 보고되어 있다(참조: S. K. Kim,et al.,J. Pharmacol. Exp. Therap. 277, 1058, 1996). 즉, 사이토크롬 P450 2E1의 유도제인 피리딘을 랫트에 처치할 경우 저용량의 사염화탄소에 의해서도 매우 강력한 간손상이 일어날 수 있는 것이다. 따라서, 사이토크롬 P450 2E1의 활성을 효과적으로 억제할 수 있다면 독성물질에 의한 인체장기(특히, 간)의 조직손상을 피할 수 있으며, 동일한 맥락으로 발암물질, 방사선, 항암화학요법제에 의한 소장, 결장, 방광, 기관지, 췌장, 유선 및 피부의 공격으로부터 인체를 보호할 수도 있을 것이다.

간질환을 유도할 수 있는 독성물질로부터 간을 보호하고 치료하는데 현재 임상적으로 사용되고 있는 치료제중 하나인 말로틸레이트는 사염화탄소 및 아세트아미노펜에 의해 유발되는 간염에 우수한 방어 및 치료효과를 갖고 있는 것으로 나타났다. 또한, 마늘오일(garlic oil)의 방향성분중 하나인 디알릴설파이드 및 알리신은 1,2-디메틸하이드라진에 의해 유발된 암의 발생을 억제하거나, 동일물질에 의해 유발되는 간독성을 방어하는 효과를 지닌 것으로 인정되고 있다.

이러한 기술적 배경하에 본 발명자들은 mEH 및 GST의 세포내 발현율을 증가시키는 한편, 사이토크롬 P450 2E1의 활성을 효과적으로 억제하여 상기한 바와 같이 독성물질 또는 방사선으로부터 인체장기를 보호하는 효과를 나타내기 위해서는 알릴티오기가 중요한 역할을 수행한다는 사실을 인식하게 되었다. 따라서, 알릴티오기를 함유하는 광범위한 화합물을 새로이 합성하고 이들 화합물의 효과를 검증하는 연구를 지속적으로 수행하였으며, 그 결과, 피리다진 모핵에 약리학적 잔기로서 알릴티오그룹을 도입시키고 알릴티오기의 파라위치에 할로겐, 알콕시 등의 치환체를 도입시킨 상기 화학식 1의 화합물이 mEH 및 GST의 발현을 증가시킴과 함께 대사효소의 발현을 제어함으로써 인체조직을 방사선 및 활성형 공격물질로부터 보호할 수 있다는 사실을 확인한 결과 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 상기 화학식 1의 신규한 알릴티오피리다진 유도체 및 약제학적으로 허용되는 그의 염에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 화학식 1의 화합물을 제조하는 신규한 제조방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 유효성분으로서 화학식 1의 화합물 또는 그의 염을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유함을 특징으로 하는 간질환 예방 및 치료제 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 유효성분으로서 화학식 1의 화합물 또는 그의 염을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유함을 특징으로 하는 방사선 보호제 조성물에 관한 것이다.

이하, 본 발명의 구성을 상세히 설명한다.

도 1은 본 발명에 따른 화합물을 투여한지 24시간 후에 간조직중의 마이크로좀 에폭사이드 하이드롤라제(microsomal epoxide hydrolase)의 mRNA 증가정도를 노던블롯 분석에 의하여 관찰한 결과를 나타낸 것이다.

도 2는 본 발명에 따른 화합물을 투여한지 24시간 후에 간조직중의 글루타치온 S-트랜스퍼라제(glutathione S-transferases) A2의 mRNA 증가정도를 노던블롯 분석에 의하여 관찰한 결과를 나타낸 것이다.

도 3은 본 발명에 따른 화합물을 마우스에 투여한 후 8Gy의 방사선을 조사하였을 때, 30일간의 경시 생존율을 도시한 것이다.

본 발명은 독성물질에 의해 유발되는 간질환의 예방 및 치료 또는 방사선에 대한 보호에 있어서 우수한 효과를 나타내는 하기 화학식 1의 알릴티오피리다진 유도체 및 그의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:

화학식 1

상기식에서

단, R₁이 클로로인 경우에 R₂및 R₃는 수소가 아니다.

우수한 효과를 나타내는 상기 화학식 1의 화합물 중에서도 바람직한 화합물은 R₁은 클로로, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 2-프로폭시, n-부톡시, 2-부톡시, t-부톡시, n-펜틸옥시, i-펜틸옥시, 2-(N,N-디메틸아미노)에톡시, 2-하이드록시에톡시, 페녹시, 벤질옥시, 4-메틸페녹시, 3-메틸페녹시, 2-메틸페녹시 또는 페닐을 나타내고, R₂및 R₃는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸을 나타내거나, R₂및 R₃가 함께 이들이 부착되어 있는 탄소원자와 함께 포화되거나 불포화된 6원환을 형성하는 화합물이다.

본 발명에 따른 화학식 1 화합물의 약제학적으로 허용되는 염으로는 아스파라긴산염, 글루콘산염, 글루탐산염, 염산염, 파라-톨루엔설폰산염 또는 시트르산염 등과 같이 약제학적으로 허용되는 산부가염, 나트륨, 칼륨 또는 리튬 등과 같은 알칼리금속과의 염, 그밖에 올티프라즈나 디알릴설파이드, 알리신 등의 화합물에 대해 공지되어 사용되고 있는 다른 산 또는 염기와의 염을 언급할 수 있다. 이들은 통상의 전환공정에 의하여 제조된다.

한편, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 (a) 하기 화학식 2의 화합물을 용매중에서 염기의 존재하에 하기 화학식 3의 화합물과 반응시켜 화학식 1의 화합물을 제조하거나; (b) 하기 화학식 4의 화합물을 용매중에서 하기 화학식 5의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 1a의 화합물을 제조함을 특징으로하여 제조할 수 있다. 따라서, 본 발명은 이러한 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법을 제공함도 그 목적으로 한다.

상기식에서

R₁, R₂및 R₃는 앞에서 정의한 바와 같고,

R₁' 는 저급알킬, 디알킬아미노알킬, 하이드록시알킬, 저급알킬에 의해 치환되거나 비치환된 페닐 또는 벤질을 나타내며,

X 는 반응성 이탈기를 나타낸다.

방법 (a)에서 사용가능한 용매로는 메탄올, 에탄올, 아세톤 및 메틸에틸케톤 중에서 선택된 1 종 이상을 들 수 있고, 염기로는 나트륨, 칼륨, 리튬과 같은 알칼리금속 중에서 선택된 1 종 이상을 들 수 있다. 바람직하게는, 반응을 가열환류조건에서 1 내지 24시간동안 진행시킨다.

방법 (b)에서 사용가능한 용매로는 방법 (a)에 대해 언급한 것과 동일한 것을 들 수 있다. 이 방법에서 반응물질로 사용되는 상기 화학식 5의 화합물은 반응용기내에 나트륨과 R₁'OH 화합물을 첨가하여 제조된 것으로서 바로 화학식 4 화합물과의 반응에 이용한다. 반응은 가열환류조건에서 24시간동안 진행시킨다.

한편, 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법 (a)에서 출발물질로 사용된 상기 화학식 2의 화합물은 그 자체로 신규한 화합물이므로 본 발명은 이와 같이 신규한 화학식 2의 화합물을 제공함을 또다른 목적으로 한다.

화학식 2의 화합물은 하기 반응식 1 또는 2에 나타낸 바와 같은 방법에 따라 제조될 수 있으며, 구체적인 제조방법은 후술하는 제조예를 참조할 수 있다.

상기식에서

R₁, R₂, R₃및 X 는 앞에서 정의한 바와 같다.

상기 반응식 1에서 반응액중에 첨가된 R₁-H 화합물과 알칼리금속은 상호 반응하여 알칼리금속염을 형성하며, 생성된 알칼리금속염이 출발물질과 반응하여 화학식 2의 화합물을 제조하게 된다. 반응은 통상 실온 또는 가온상태에서 수행되며, 30분 내지 12시간동안 진행시킴으로써 반응을 완결시킬 수 있다.

한편, 화학식 2의 화합물중에서도 반응성이탈기로서 클로로가 치환되어 있고 R₁위치에도 클로로가 치환되어 있는 화합물은, 하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이, 피리다진환의 3 및 6번 위치에 각각 하이드록시기가 치환되어 있는 화합물을 옥시염화인(POCl₃)와 함께 반응시켜 제조할 수 있다. 이때, 반응은 가열환류조건하에 5 내지 10시간동안 수행된다.

상기식에서 R₂및 R₃는 앞에서 정의한 바와 같다.

한편, 화학식 1의 화합물을 제조하는 상기 방법 (b)에서 출발물질로 사용된 화학식 4의 화합물(X=Cl)은 공지의 화합물로서 문헌(참조: M. Kocevaret al., Croat. Chem. Acta., 45, 457, 1973)에 공지된 방법을 참조하여 제조할 수 있다.

본 발명자들은 또한, 본 발명에 따른 알릴티오피리다진 유도체의 mEH 및 GST 발현율에 대한 영향을 확인하기 위하여 각 화합물을 마우스에 경구투여하고 일정시간이 지난 후 간조직중에 생성된 mEH 및 GSTA2의 mRNA 양을 노던블롯 분석법으로 정량하였으며(도 1 및 2 참조), 그 결과 현저한 mRNA 발현율의 증가를 관찰할 수 있었다. 화학식 1 화합물의 이와 같은 mRNA 증가효과는 곧바로 독성물질에 대한 간질환 예방 및 보호효과 또는 방사선에 대한 보호효과로 이어질 수 있다고 생각되었으며, 따라서 본 발명자들은 화학식 1의 화합물을 대상으로하여 간질환 예방 및 치료효과와 방사선 보호효과를 확인하고자 다음과 같이 실험하였다.

먼저, 상기 화학식 1에 따른 알릴티오피리다진 유도체의 간질환 예방 및 치료효과는 사염화탄소 모델과 아세트아미노펜(acetaminophen) 모델을 이용하여 조사하였다.

사염화탄소 모델(참조: Philippe letteronet al.,Biochemical Pharma- cology, 39, 12, 2027-2034, 1990)은 실험적 간장해 모델중 가장 일반적으로 사용되는 것으로서, 사염화탄소가 체내 사이토크롬 P-450에 의해 독성이 강한 대사물인 트리클로로메틸 자유라디칼(CCl₃·)로 전환되고 이 대사물이 간 마이크로좀의 막단백 티올기와 강하게 결합하여 지질라디칼(lipid radical)을 형성하며 산소 존재시 과산화라디칼(peroxy radical)로 되어 막의 지질 과산화반응을 촉진하는 현상을 기초로하여 확립된 것이다. 즉, 사염화탄소는 간에서의 단백질 생합성을 억제하고, 혈중 ALT(alanine aminotransferase)를 증가시키며, 조직학적으로는 간세포의 소엽중심성 괴사를 일으킨다.

또한, 본 발명화합물의 간보호작용을 아세트아미노펜 모델(참조: Wanget al., Toxicology and applied Pharmacology, 136, 146-154, 1996)에 의해서도 확인하였다. 아세트아미노펜은 CYP2E1에 의해 신속히 대사가 촉진되는데 기인하여 심한 간독성을 나타내며, 결국은 간세포막 구조의 변화와 기능변화를 야기시켜 소엽산재성 괴사 및 혈중 ALT, LDH (lactate dehydrogenase)의 상승을 일으키게 된다.

본 발명에서는 마우스를 실험동물로 하여 본 발명에 따른 신규화합물을 3일간 경구투여한 후 사염화탄소 및 아세트아미노펜 유발 간장해에 대한 본 발명 화합물의 억제효과를 측정하였다. 각 실험동물의 간 손상정도는 혈청중 ALT, LDH를 측정함으로써 확인하였으며(참조:Biol. Pharm. Bull., 20, 4, 381-385, 1997;Toxicology and Applied Pharmacology, 95, 1-11, 1988), 또한 간을 절취한 후 헤마톡실린(hematoxylin) 및 에오신(eosin)으로 염색(x100)하고 현미경으로 관찰하여 간세포의 괴사정도를 평가함으로써 확인하였다. 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 간보호제로서 널리 공지되어있는 실리마린에 비해서도 우수한 간보호효과를 가지고 있는 것으로 나타났다.

또한, 본 발명자들은 본 발명에 따른 알릴티오피리다진 유도체의 방사선에 대한 보호효과를 확인하기 위하여 마우스에 화합물을 투여한 다음 8 또는 9Gy의 방사선을 조사하였으며, 일정한 기간이 경과한 후에 생존율을 측정하였다. 예를들어 8Gy의 방사선을 조사한 경우 30일간의 경시 생존율을 측정한 결과는 도 3에 나타낸 바와 같으며, 구체적인 실험결과는 하기 표 7을 참조할 수 있다. 8Gy의 방사선을 조사한 경우에, 방사선 단독 조사군은 마우스의 30일간 생존율이 48%에 불과하였으나, 본 발명에 따른 실시예 4 및 8의 화합물을 미리 투여한 후에 8Gy의 방사선을 조사하면 30일간의 생존율이 각각 76% 및 70%로 증가되는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물의 방사선에 대한 보호효과가 매우 탁월함을 알 수 있다.

한편, 본 발명에 따른 화합물의 일반적인 독성을 평가하기 위하여 마우스를 사용하여 급성독성시험을 실시한 결과, 1 회 경구투여시 각 화합물의 LD₅₀은 3.5g/㎏ 이상으로서 상당히 안전한 화합물로 평가되었다.

이상의 결과를 종합해볼 때, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 안전하면서도 우수한 간질환 예방 및 치료효과를 지니고 있으므로, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 간질환 예방 및 치료제 조성물을 제공함을 또다른 목적으로 한다. 또한, 본 발명에 따른 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 방사선에 대한 보호효과를 지니고 있는 것으로 확인되었으므로 이를 유효성분으로 함유하는 방사선에 대한 보호제 조성물 역시 본 발명의 대상이다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 이러한 효과는 산화환원효소인 mEH 및 GST의 발현율을 증가시키는 화학식 1 화합물의 작용기전과 관련이 있고, 사이토크롬 P450 2E1의 활성을 억제시키는 것과도 관련이 있다. 그런데, 앞에서도 설명하였듯이, mEH 및 GST의 발현율을 증가시키고 사이토크롬 P450 2E1의 활성을 억제하는 작용기전은 간질환의 예방 및 치료 또는 방사선에 대한 보호효과와 더불어 항암화학요법제의 독성을 경감시키고 화학물질에 의한 발암을 억제하는 효과와도 연관되어 있으므로, 본 발명에 따른 조성물 역시 이러한 효과를 발휘할 수 있는 것으로 이해된다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 임상학적으로 투여시에 약제학적으로 허용되는 불활성담체와 화학식 1의 화합물을 배합하여 경구 또는 비경구 투여에 적합한 고체, 반고체 또는 액체 형태의 약제학적 제제로 제형화시켜 투여할 수 있다.

이러한 목적으로 적합하게 사용할 수 있는 약제학적으로 허용되는 불활성 담체는 고체이거나 액체일 수 있으며 희석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제, 정제팽화제로 작용할 수 있는 물질중의 어느 하나 또는 그 이상일 수 있다. 본 발명에서 사용하기에 적당한 고체 또는 액체 담체의 구체적인 예로는 전분, 유당, 셀룰로오스 유도체(아비셀^R), 설탕 등을 언급할 수 있다.

간질환의 예방 및 치료 또는 방사선에 대한 보호목적으로 사용됨에 있어서 본 발명의 약제학적 조성물은 활성화합물을 기준으로 하여 초기에는 하루에 체중 킬로그람당 1 내지 500㎎의 투여량이 바람직하다. 그러나, 투약량은 환자의 필요정도, 치료되어야할 상태의 정도, 사용될 화합물에 따라 변할 수 있으며 특정한 상태에서 바람직한 투약량을 결정하는 것은 본 분야의 전문가에게 공지되어 있는 기술이다. 일반적으로 치료는 화합물의 최적량보다 적은 투약량으로 시작한다. 그런 다음 상황에 따라 최적의 효과가 나타날 때까지 조금씩 투약량을 증가시킨다. 편의에 따라 하루 총 투약량을 몇회로 나누어 하루 동안 투여할 수도 있다.

이하, 본 발명을 하기 제조예 및 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 제조예 및 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 것일뿐, 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: 3,6-디하이드록시-4,5-디메틸피리다진의 합성

하이드라진 모노하이드레이트 3.4㎖(0.07mol)에 정제수 50㎖를 가하고 교반하면서 진한염산 14㎖(0.14mol)를 적가한 후 반응액이 끓는 상태가 되도록 가온하였다. 반응혼합물이 환류하기 시작하면 2,3-디메틸무수말레산 8.83g(0.07mol)을 가하고 계속해서 3시간동안 환류시켰다. 반응혼합물을 냉각시킨 후, 석출된 흰색결정을 여과하고 정제수로 세척하였다. 끓는 정제수에 용해시켜 불용성 물질을 제거하고 재결정하여 무정형 백색 결정을 수득하였다.

수율 9.10g(92.8%)

융점 298-300℃(분해)

재결정용매 물

NMR (CDCl₃+ DMSO-d₆, δ): 2.00(s,3H×2,CH₃), 3.30(s,1H×2,OH)

제조예 2: 1,4-디하이드록시-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진의 합성

하이드라진 모노하이드레이트 1.7㎖(0.035mol)에 정제수 25㎖를 가하고 교반하면서 진한염산 7㎖(0.07mol)를 적가한 후 반응액이 끓는 상태가 되도록 가온하였다. 반응혼합물이 환류하기 시작하면 3,4,5,6-테트라하이드로무수프탈산 5.33g(0.035mol)을 가하고 계속해서 3시간동안 환류시켰다. 이후, 제조예 1에서와 동일하게 처리하여 침상의 백색 결정을 수득하였다.

수율 5.47g(94.0%)

융점 298-300℃(분해)

재결정용매 물

NMR (CDCl₃+ DMSO-d₆, δ): 1.65(s,2H×2,CH₂), 2.35(s,2H×2,CH₂), 3.30 (s,1H×2,OH)

제조예 3: 3,6-디클로로-4,5-디메틸피리다진의 합성

옥시염화인(POCl₃) 20㎖에 완전히 건조시킨 3,6-디하이드록시-4,5-디메틸피리다진 2.80g(0.02mol)(제조예 1에서 수득)을 가하고, 7시간동안 환류시키면서 무색의 반응액이 자주색을 유지할 때를 반응의 종말점으로 잡았다. 과잉의 옥시염화인을 감압농축하여 제거하였다. 잔류물에 소량의 얼음물을 넣고 교반하면 현탁액이 형성되었다. 현탁액의 액성이 알카리로 될 때까지 28% 수산화암모늄 수용액을 가하면 갈색 침전물이 생성되었다. 침전물을 여과한 후 뜨거운 에탄올에 녹여 불용성 물질을 제거하였다. 활성탄을 가하여 5분간 환류시키고 실리콘디옥사이드에 통과시켜 탈색시킨 후, 과잉의 에탄올을 감압증류하여 침상의 백색 결정을 수득하였다.

수율 2.45g(69.2%)

융점 109-111℃

재결정용매 에탄올

NMR (CDCl₃, δ): 2.05(s,3H×2,CH₃)

제조예 4: 1,4-디클로로-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진의 합성

옥시염화인 20㎖에 완전히 건조시킨 1,4-디하이드록시-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진 3.32g(0.02mol)(제조예 2에서 수득)을 가한 후, 상기 제조예 3에서와 동일하게 반응시켜 침상의 백색 결정을 수득하였다.

수율 2.68g(66.0%)

융점 148-150℃

재결정용매 에탄올

NMR (CDCl₃, δ): 1.85(s,2H×2,CH₂), 2.75(s,2H×2,CH₂)

제조예 5: 3-메톡시-4,5-디메틸-6-클로로피리다진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.46g(0.02mol)을 가하여 용해시킨 후 제조예 3에서 수득한 3,6-디클로로-4,5-디메틸피리다진 3.54g(0.02mol)을 가하여 완전히 용해시켰다. 반응액을 실온에서 1시간동안 교반하고 과잉의 메탄올을 감압농축하여 제거한 다음 디에틸에테르 100㎖를 가해 10분간 격렬히 교반하였다. 디에틸에테르에 녹지 않는 불용성 물질을 제거하고 정제수 50㎖로 2회 세척한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 디에틸에테르를 감압농축하여 백색의 침상 결정을 수득하였다.

수율 2.63g(76.2%)

융점 80-82℃

재결정용매 에탄올

제조예 6: 1-메톡시-4-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.34g(0.015mol)을 가하여 용해시킨 후, 제조예 4에서 수득한 1,4-디클로로-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진 3.05g(0.015mol)을 가하여 완전히 용해시켰다. 실온에서 1시간동안 교반한 후, 제조예 5에서와 동일하게 처리하여 백색의 침상 결정을 수득하였다.

수율 1.78g(59.7%)

융점 117-119℃

재결정용매 에탄올

제조예 7: 1-메톡시-4-클로로프탈라진의 합성

무수 메탄올 50㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 가하여 용해시킨 후, 1,4-디클로로프탈라진 1.99g(0.01mol)을 가하여 완전히 용해시켰다. 실온에서 1시간동안 교반한 후, 제조예 5에서와 동일하게 처리하여 무정형의 백색결정을 수득하였다.

수율 1.81g(92.8%)

융점 92-94℃

재결정용매 에탄올

NMR (CDCl₃, δ): 4.28(s,3H,OCH₃), 7.90-8.25(m,1H×4,aromatic)

제조예 8: 3-에톡시-4,5-디메틸-6-클로로피리다진의 합성

무수 에탄올 100㎖에 나트륨 금속 0.69g(0.03mol)을 가하여 용해시킨 후, 제조예 3에서 수득한 3,6-디클로로-4,5-디메틸피리다진 5.31g(0.03mol)을 가하여 완전히 용해시켰다. 실온에서 4시간동안 교반한 후, 제조예 5에서와 동일하게 처리하여 미백색의 결정을 수득하였다.

수율 4.22g(75.4%)

융점 60-62℃

재결정용매 에탄올

NMR (CDCl₃, δ): 1.42(t,3H,CH₃), 2.20(s,3H,CH₃), 2.32(s,3H,CH₃), 4.52(q, 2H,OCH₂)

제조예 9: 1-에톡시-4-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진의 합성

무수 에탄올 100㎖에 나트륨 금속 0.69g(0.03mol)을 가하여 용해시킨 후, 제조예 4에서 수득한 1,4-디클로로-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진 6.09g(0.03mol)을 가하여 완전히 용해시켰다. 실온에서 4시간동안 교반한 후, 제조예 5에서와 동일하게 처리하여 미백색의 결정을 수득하였다.

수율 5.98g(93.7%)

융점 105-107℃

재결정용매 에탄올

NMR (CDCl₃, δ): 1.40(t,3H,CH₃), 1.80-2.65(m,2H×4,aromatic), 4.52(q,2H, OCH₂)

제조예 10: 1-에톡시-4-클로로프탈라진의 합성

무수 에탄올 100㎖에 나트륨 금속 0.69g(0.03mol)을 가하여 용해시킨 후, 1,4-디클로로프탈라진 5.97g(0.03mol)을 가하여 완전히 용해시켰다. 50±10℃에서 1시간동안 교반한 후, 제조예 5에서와 동일하게 처리하여 백색의 침상 결정을 수득하였다.

수율 5.02g(80.2%)

융점 76-78℃

재결정용매 에탄올

NMR (CDCl₃, δ): 1.55(t,3H,CH₃), 4.70(q,2H,OCH₂), 7.92-8.20(m,1H×4, aromatic)

실시예 1: 3-클로로-4,5-디메틸-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 40㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄(CH₂=CH-CH₂-SH) 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 제조예 3에서 수득한 3,6-디클로로-4,5-디메틸피리다진 1.77g(0.01mol)을 가하고 1시간동안 환류시켰다. 메탄올을 감압농축하여 제거한 다음 디에틸에테르 50㎖를 가하고 10분간 격렬히 교반하였다. 디에틸에테르에 녹지않는 불용성 물질을 제거하고 정제수 30㎖로 2회 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 디에틸에테르를 감압농축시켜 황색 오일상의 잔류물을 수득하였다. 수득된 잔류물은 TLC 상에서 5개 spot(Rf=0.8, 0.6, 0.5, 0.2, 0.1)으로 분리되는데, 이중 Rf=0.5인 물질이 목적화합물이므로 이를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출제: n-헥산/에틸아세테이트=5/1, v/v)로 분리하였다. 용출용매를 감압하에 제거하고 농축시켜 수득한 백색 오일상 잔류물을 고진공하에 2시간동안 건조시켜 빙결하는 백색 결정을 수득하였다.

수율 1.16g(54.0%)

융점 51-53℃

NMR (CDCl₃, δ): 2.25(s,3H,CH₃), 2.35(s,3H,CH₃), 3.95(d,2H,SCH₂), 5.25 (dd,2H,CH₂), 6.00(m,1H,CH)

실시예 2: 1-클로로-4-알릴티오-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 제조예 4에서 수득한 1,4-디클로로-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진 2.03g(0.01mol)을 가하고 1시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 백색 결정을 수득하였다.

수율 1.81g(75.1%)

융점 43-45℃

NMR (CDCl₃, δ): 1.85-2.65(m,2H×4,aromatic), 3.95(d,2H,SCH₂), 5.25(dd, 2H,CH₂), 6.00(m,1H,CH)

실시예 3: 1-클로로-4-알릴티오프탈라진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 1,4-디클로로프탈라진 1.99g(0.01mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미백색의 침상 결정을 수득하였다.

수율 1.27g(53.6%)

융점 76-78℃

NMR (CDCl₃, δ): 4.15(d,2H,SCH₂), 5.30(dd,2H,CH₂), 6.10(m,1H,CH), 8.10 (m,1H×4, aromatic)

실시예 4: 3-메톡시-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 50㎖에 나트륨 금속 1.15g(0.05mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 4.98㎖(0.05mol)와 혼합하였다. 여기에 3-메톡시-6-클로로피리다진 7.23g (0.05mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 미백색 결정을 수득하였다.

수율 3.99g(53.7%)

융점 25-27℃

NMR (CDCl₃, δ): 3.95(d,2H,SCH₂), 4.08(s,3H,OCH₃), 5.25(dd,2H,CH₂), 6.00(m,1H,CH), 6.80-7.30(dd,1H×2,CH)

실시예 5: 3-메톡시-4,5-디메틸-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 제조예 5에서 수득한 3-메톡시-4,5-디메틸-6-클로로피리다진 1.73g(0.01mol)을 가하고 1시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 미백색 결정을 수득하였다.

수율 0.67g(31.9%)

융점 51-53℃

실시예 6: 1-메톡시-4-알릴티오-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 제조예 6에서 수득한 1-메톡시-4-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진 1.99g(0.01mol)을 가하고 1시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 미백색 결정을 수득하였다.

수율 1.37g(58.1%)

융점 46-48℃

실시예 7: 1-메톡시-4-알릴티오프탈라진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 제조예 7에서 수득한 1-메톡시-4-클로로프탈라진 1.95g(0.01mol)을 가하고 1시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 미백색 결정을 수득하였다.

수율 1.58g(68.1%)

융점 32-34℃

NMR (CDCl₃, δ): 4.08(d,2H,SCH₂), 4.20(s,3H,OCH₃), 5.26(dd,2H,CH₂), 6.10 (m,1H,CH), 7.82-8.17(m,1H×4,aromatic)

실시예 8: 3-에톡시-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 40㎖에 나트륨 금속 0.57g(0.025mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 2.49㎖(0.025mol)와 혼합하였다. 여기에 3-에톡시-6-클로로피리다진 3.96g(0.025mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 미백색 결정을 수득하였다.

수율 1.85g(37.7%)

융점 28-30℃

NMR (CDCl₃, δ): 1.35(t,3H,CH₃), 4.45(q,2H,OCH₂), 5.15(dd,2H,CH₂), 5.95(m,1H,CH), 6.70-7.15(dd,1H×2,CH)

실시예 9: 3-에톡시-4,5-디메틸-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 100㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 제조예 8에서 수득한 3-에톡시-4,5-디메틸-6-클로로피리다진 1.87g(0.01mol)을 가하고 3시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 백색 결정을 수득하였다.

수율 0.15g(6.7%)

융점 29-31℃

실시예 10:1-에톡시-4-알릴티오-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진의 합성

무수 메탄올 100㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 제조예 9에서 수득한 1-에톡시-4-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로프탈라진 2.13g(0.01mol)을 가하고 3시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 백색 결정을 수득하였다.

수율 0.36g(14.4%)

융점 39-41℃

실시예 11: 1-에톡시-4-알릴티오프탈라진의 합성

무수 메탄올 100㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 제조예 10에서 수득한 1-에톡시-4-클로로프탈라진 2.09g(0.01mol)을 가하고 3시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 빙결하는 백색 결정을 수득하였다.

수율 0.79g(32.1%)

융점 44-46℃

실시예 12: 3-(n-프로폭시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 75㎖에 나트륨 금속 1.15g(0.05mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 4.98㎖(0.05mol)와 혼합하였다. 여기에 3-(n-프로폭시)-6-클로로피리다진 8.63g(0.05mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미황색의 오일상 잔류물을 수득하였다.

수율 3.11g(29.6%)

융점 0℃ 이하

NMR (CDCl₃, δ): 1.10(t,3H,CH₃), 1.82(q,2H,CH₂), 3.95(d,2H,SCH₂), 4.40 (q,2H,OCH₂), 5.25(dd,2H,CH₂), 6.00(m,1H,CH), 6.75-7.30(dd,1H×2,CH)

실시예 13: 3-(2-프로폭시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 150㎖에 나트륨 금속 2.30g(0.1mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 9.28㎖(0.1mol)와 혼합하였다. 여기에 3-(2-프로폭시)-6-클로로피리다진 17.26g(0.1mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미황색의 오일상 물질을 수득하였다.

수율 4.39g(20.9%)

융점 0℃이하

NMR (CDCl₃, δ): 1.35(d,3H×2,CH(CH₃)₂), 3.90(d,2H,SCH₂), 5.20(dd,2H, CH₂), 5.45(m,1H,OCH), 5.95(m,1H,CH), 6.70-7.20(dd,1H×2,CH)

실시예 14: 3-(n-부톡시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 75㎖에 나트륨 금속 1.15g(0.05mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 4.98㎖(0.05mol)와 혼합하였다. 여기에 3-(n-부톡시)-6-클로로피리다진 9.33g(0.05mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미황색의 오일상 물질을 수득하였다.

수율 2.24g(20.2%)

융점 0℃이하

NMR (CDCl₃, δ): 0.90(t,3H,CH₃), 1.42(q,2H,CH₂), 1.75(q,2H,CH₂), 3.85(d, 2H,SCH₂), 4.40(t,2H,OCH₂), 5.18(dd,2H,CH₂), 6.00(m,1H,CH), 6.70-7.20(dd,1H×2,CH)

실시예 15: 3-(2-부톡시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 120㎖에 나트륨 금속 0.92g(0.04mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 3.98㎖(0.04mol)와 혼합하였다. 여기에 3-(2-부톡시)-6-클로로피리다진 7.47g(0.04mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미황색의 오일상 물질을 수득하였다.

수율 1.19g(13.3%)

융점 0℃ 이하

NMR (CDCl₃, δ): 0.90(t,3H,CH₃), 1.30(d,3H,CH₃), 1.70(m,2H,CH₂), 3.90 (d,2H,SCH₂), 5.15(dd,2H,CH₂), 5.30(m,1H,OCH₂), 5.98(m,1H,CH), 6.70-7.15(dd,1H×2,CH)

실시예 16: 3-(t-부톡시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.46g(0.02mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 1.99㎖(0.02mol)와 혼합하였다. 여기에 3-(t-부톡시)-6-클로로피리다진 3.75g(0.02mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미황색의 오일상 물질을 수득하였다.

수율 1.13g(25.1%)

융점 0℃ 이하

NMR (CDCl₃, δ): 1.60(s,3H×3,C(CH₃)₃), 3.92(d,2H,SCH₂), 5.20(dd,2H, CH₂), 6.00(m,1H,CH), 6.65-7.20(dd,1H×2,CH)

실시예 17: 3-(n-펜틸옥시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 75㎖에 나트륨 금속 1.15g(0.05mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 4.98㎖(0.05mol)와 혼합하였다. 3-(n-펜틸옥시)-6-클로로피리다진 10.03g (0.05mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미황색의 침상 결정을 수득하였다.

수율 4.21g(35.3%)

융점 39-42℃

NMR (CDCl₃, δ): 0.95(t,3H,CH₃), 1.40(t,2H×2,CH₂), 1.80(q,2H,CH₂), 3.95 (d,2H,SCH₂), 4.45(m,2H,OCH₂), 5.22(dd,2H,CH₂), 6.00(m,1H,CH), 6.75-7.30(m,1H×2,CH)

실시예 18: 3-이소펜틸옥시-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 150㎖에 나트륨 금속 1.15g(0.05mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 4.98㎖(0.05mol)와 혼합하였다. 여기에 3-이소펜틸옥시-6-클로로피리다진 10.03g(0.05mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미황색 오일상의 물질을 수득하였다.

수율 2.12g(17.8%)

융점 0℃ 이하

NMR (CDCl₃, δ): 0.92(d,3H×2,CH(CH₃)₂), 1.70(m,1H2H,CHCH₂), 3.90(d,2H, SCH₂), 4.45(t,2H,OCH₂), 5.15(dd,2H,CH₂), 5.95(m,1H,CH), 6.70-7.20(dd,1H×2,CH)

실시예 19: 3-(2-N,N-디메틸아미노에톡시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 2-디메틸아미노에탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.46g(0.02mol)을 용해시켰다. 여기에 3-클로로-6-알릴티오피리다진 3.73g(0.02mol)을 가하고 실온에서 2시간동안 교반하였다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 황색 침상 결정을 수득하였다.

수율 0.25g(5.2%)

융점 36-38℃

NMR (CDCl₃, δ): 1.88(d,3H×2,N(CH₃)₂), 1.95(d,2H×2,OCH₂CH₂), 4.00(d, 2H,SCH₂), 5.25(dd,2H,CH₂), 6.10(m,1H,CH), 6.85-7.20(m,1H×2,CH)

실시예 20: 3-(2-하이드록시에톡시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 이를 알릴머캅탄 1.00㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 3-(2-하이드록시에톡시)-6-클로로피리다진 1.75g(0.01mol)을 가하고 24시간동안 환류시켰다. 이후, 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 미백색의 침상 결정을 수득하였다.

수율 1.24g(58.5%)

융점 38-40℃

NMR (CDCl₃, δ): 3.92(d,2H,SCH₂), 4.10(s,2H×2,OCH₂CH₂O), 5.22(dd,2H, CH₂), 6.00(m,1H,CH), 6.80-7.25(dd,1H×2,CH)

실시예 21: 3-페녹시-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 페놀 30g에 나트륨 금속 0.11g(0.005mol)을 용해시키고 여기에 3-클로로-6-알릴티오피리다진 0.93g(0.005mol)을 가하여 160±5℃에서 3시간동안 교반하였다. 반응을 중단하고 냉각시킨 후 2N-NaOH를 가하여 반응액을 알카리성(pH 14)으로 조절하면 결정이 석출되었다. 석출된 결정을 디에틸에테르로 추출하고 이후 실시예 1에서와 동일하게 처리하여 결정을 수득하였다.

수율 0.42g(34.5%)

융점 71-73℃

NMR (CDCl₃, δ): 3.95(d,2H,SCH₂), 5.22(dd,2H,CH₂), 6.00(m,1H,CH), 6.80- 7.10(m,1H×2,CH), 7.15-7.45(m,1H×5,aromatic)

실시예 22: 3-벤질옥시-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 벤질알콜 20㎖에 나트륨 금속 0.11g(0.005mol)을 용해시키고 여기에 3-클로로-6-알릴티오피리다진 0.93g(0.005mol)을 가하여 80±5℃에서 2시간동안 교반하였다. 반응혼합물로부터 과잉의 벤질알콜과 불용성 물질(NaCl)을 제거하기 위하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출제: n-헥산/에틸아세테이트=40/1, v/v)로 정제하여 침상 결정을 수득하였다.

수율 0.92g(71.3%)

융점 56-58℃

재결정용매 에탄올

NMR (CDCl₃, δ): 4.00(d,2H,SCH₂), 5.25(dd,2H,CH₂), 5.55(s,2H,OCH₂), 6.05 (m,1H,CH), 6.85-7.30(dd,1H×2,CH), 7.35-7.65(m,1H×5,aromatic)

실시예 23: 3-(4-메틸페녹시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 p-크레졸 30g에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 여기에 3-클로로-6-알릴티오피리다진 1.87g(0.01mol)을 가하여 100±5℃에서 5시간동안 교반하였다. 반응을 중단하고 냉각시킨 후 2N-NaOH 150㎖를 가하여 반응액을 알카리성(pH 14)으로 조절하면 결정이 석출되었다. 석출된 결정을 디에틸에테르로 추출하고 정제수로 2회 세척한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 디에틸에테르를 감압농축시켜 제거함으로써 갈색을 띠는 오일상 잔류물을 수득하였다. 이 혼합물을 천천히 냉각시켜 미백색 무정형의 결정을 수득하였다.

수율 1.07g(41.5%)

융점 115-117℃

NMR (CDCl₃, δ): 2.35(s,3H,CH₃), 3.95(d,2H,SCH₂), 5.20(dd,2H,CH₂), 6.00 (m,1H,CH), 6.98-7.10(dd,1H×2,CH), 7.18-7.35(m,1H×4,aromatic)

실시예 24: 3-(3-메틸페녹시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 m-크레졸 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 여기에 3-클로로-6-알릴티오피리다진 1.87g(0.01mol)을 가하여 100±5℃에서 5시간동안 교반하였다. 이후 실시예 23에서와 동일하게 처리하여 미백색의 침상 결정을 수득하였다.

수율 0.94g(36.4%)

융점 48-50℃

NMR (CDCl₃, δ): 2.30(s,3H,CH₃), 3.90(d,2H,SCH₂), 5.15(dd,2H,CH₂), 5.95 (m,1H,CH), 6.95(m,1H×2,CH), 7.22(m,1H×4,aromatic)

실시예 25: 3-(2-메틸페녹시)-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 o-크레졸 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고 여기에 3-클로로-6-알릴티오피리다진 1.87g(0.01mol)을 가하여 100±5℃에서 5시간동안 교반하였다. 이후 실시예 23에서와 동일하게 처리하여 미백색의 침상 결정을 수득하였다.

수율 0.48g(18.6%)

융점 78-80℃

NMR (CDCl₃, δ): 2.20(s,3H,CH₃), 3.92(d,2H,SCH₂), 5.20(dd,2H,CH₂), 6.00 (m,1H,CH), 7.00-7.35(m,1H×21H×4,CHaromatic)

실시예 26: 3-페닐-6-알릴티오피리다진의 합성

무수 메탄올 30㎖에 나트륨 금속 0.23g(0.01mol)을 용해시키고, 이를 알릴머캅탄 0.93㎖(0.01mol)와 혼합하였다. 여기에 6-클로로-3-페닐피리다진 1.90g (0.01mol)을 가하여 5시간동안 환류시켰다. 메탄올을 감압농축하여 제거한 다음 디에틸에테르 100㎖를 가하고 10분간 격렬히 교반하였다. 디에틸에테르에 녹지않는 불용성 물질을 제거하고 정제수 50㎖로 2회 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 디에틸에테르를 감압농축하여 제거함으로써 백색 결정을 수득하였다.

수율 2.18g(95.6%)

융점 96-98℃

NMR (CDCl₃, δ): 4.08(d,2H,SCH₂), 5.28(dd,2H,CH₂), 6.08(m,1H,CH), 7.48 (m,1H×2,CH)

실험예 1: 급성독성시험

급성독성시험이란 시험화합물을 시험동물에 1회 투여하였을 때, 단기간에 나타나는 독성을 질적, 양적으로 검사하는 시험이다.

본 실험예에서는 대한실험동물센타에서 구입한 5-6주령 ICR 품종의 수컷 마우스를 사용한 급성독성시험을 수행하였다. 화합물을 투여하기 전일 오후 6시부터 투여당일 오전 9시까지 마우스를 절식시킨 후, 각 화합물을 옥수수유에 마쇄, 현탁시켜 1000 내지 6000㎎/㎏의 용량으로 조제하여 투여하였으며, 각 용량군의 수는 6마리로 하였다. 화합물은 투여당일 조제하여 사용하였으며, 경구투여용 바늘을 사용하여 일회 경구투여하였다. 본 발명에 따른 화합물중 대표적으로 실시예 4의 화합물을 투여한 후 사망유무를 14일간 관찰한 결과를 하기 표 1에 나타내었으며, 이 결과로부터 리치필드-윌콕슨(Litchfield-Wilcoxon)법으로 분석하였을 때, LD₅₀이 3.95g/㎏ (95% 신뢰구간은 3.26∼4.78g/㎏)인 것으로 나타났다.

투여용량(㎎/㎏)	1000	2000	3000	4000	5000	6000
사망동물수/시험동물수	0/6	0/6	1/6	3/6	4/6	6/6

실험예 2: 본 발명에 따른 화합물이 mEH 및 GST 발현율에 미치는 영향

본 발명에 따른 알릴티오피리다진 유도체의 mEH 및 GST 발현율에 대한 영향을 확인하기 위하여, 각 화합물을 100㎎/㎏의 용량으로 5-6주령 수컷 S.D. 랫트에 경구투여하였다. 투여한 때로부터 24시간이 지난 후 간조직중에 생성된 mEH 및 GSTA2의 mRNA 양을 노던블롯 분석법으로 정량하였으며, 그 결과를 비처치군과의 상대적인 증가배수로서 도 1 및 2에 나타내었다. 도 1 및 2로부터 알 수 있듯이, 실험된 화합물은 모두 1배 이상의 발현율 증가를 나타내었으며, 여러 화합물이 월등한 발현율 증가를 나타내었다.

실험예 3: 사염화탄소 유발 간장해에 대한 억제효과

공지의 방법(참조: Philippe letteronet al.,Biochemical Pharmacology, 39, 12, 2027-2034, 1990)에 따라 본 발명에 따른 화합물의 간보호효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 실험하였다.

본 발명에 따른 화합물을 옥수수유에 현탁시켰으며, 현탁액은 1.0㎖/㎏의 양으로 투여하였다. 각각 3 내지 10마리의 5-6주령 수컷 ICR 마우스를 한 군으로하고, 시험화합물을 1일당 50㎎/㎏의 용량으로 3일간 경구투여하였으며, 마지막 시험화합물 투여시 사염화탄소를 100㎕/㎏의 용량으로 복강내 주사하였다. 시험화합물에 대한 대조화합물로는 실리마린을 사용하였다. 사염화탄소를 투여한지 24시간 후에 각 시험동물로부터 심장천공에 의해 혈액을 채취하여 혈청중 ALT 값을 구하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다(여기서, ALT 값은 평균값±SE를 나타낸다). 혈청중 ALT 효소단위는 혈액을 원심분리하여 상등액인 혈청을 분리한 후, 시판되는 키트(영동제약, BC101-O,P)를 이용하여 라이트만-프란켈(Reitman-Frankel)법에 따라 측정하였다. 즉, DL-알라닌과 α-케토글루타레이트를 기질액으로 하고 2,4-디니트로페닐하이드라진을 가하여 생성된 하이드라존에 수산화나트륨을 가하여 발색시킨 후 505nm에서의 흡광도를 측정하였다.

아울러, 시험동물로부터 간을 절취하여 헤마톡실린(hematoxylin) 및 에오신(eosin)으로 염색(x100)한 후 현미경으로 관찰하였으며, 간세포의 괴사정도를 0(병변없음), 1(약한 병변), 2(중간정도의 병변), 3(심각한 병변), 및 4(광범위한 병변)의 5등급으로 나누어 평가하고 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 하기 표 2 및 3의 결과를 통계적으로 분석할 때 비처리군 및 실시예 4번 화합물의 처리군만이 CCl₄처리군과 유의적으로 다른 것으로 나타났다(p＜0.01).

	시험동물수	혈청중 ALT 값(KA 단위/ℓ)	억제율(%)
비처리군	3	157± 48	100
CCl₄처리군	9	9086±1017	0
실시예 12 화합물 + CCl₄처리군	9	5585± 705	40
실시예 8 화합물 + CCl₄처리군	7	6123±2230	33
실시예 4 화합물 + CCl₄처리군	10	3966±1116	57
실리마린 + CCl₄처리군	10	7602± 662	17

	각군당시험동물수	괴사등급
	각군당시험동물수	0	1	2	3	4
비처리군	3	3	0	0	0	0
CCl₄처리군	9	0	0	0	0	9
실시예 12 화합물 + CCl₄처리군	9	0	0	2	3	4
실시예 8 화합물 + CCl₄처리군	7	0	1	2	1	3
실시예 4 화합물 + CCl₄처리군	10	0	1	5	2	2
실리마린 + CCl₄처리군	10	0	0	1	7	2

실험예 4: 아세트아미노펜(APAP) 유발 간장해에 대한 억제효과

공지의 방법(참조: Wanget al., Toxicology and applied Pharmacology, 136, 146-154, 1996)에 따라 본 발명에 따른 화합물의 간보호효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 실험하였다.

본 발명에 따른 화합물을 옥수수유에 현탁시켰으며, 현탁액은 1㎖/㎏의 양으로 투여하였다. 각각 3 내지 10마리의 5-6주령 수컷 ICR 마우스를 한 군으로하고, 시험화합물을 1일당 50㎎/㎏의 용량으로 3일간 경구투여하였으며, 마지막 시험화합물 투여한지 2시간 후에 아세트아미노펜을 0.5g/㎏의 용량으로 경구투여하였다. 시험화합물에 대한 대조화합물로는 실리마린을 사용하였다. 아세트아미노펜을 투여한지 22시간 후에 각 시험동물로부터 혈액을 채취하여 혈청중 ALT 값 및 LDH 값을 구하였으며, 그 결과를 하기 표 4 및 5에 나타내었다(여기서, ALT 값 및 LDH 값은 평균값±SE를 나타낸다). 아울러, 시험동물로부터 간을 절취하여 상기 실험예 3에서와 동일한 방법으로 관찰하여 괴사정도를 평가하였으며, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 하기 표 4 내지 6의 결과를 통계적으로 분석할 때 비처리군 및 실시예 4번 및 8번 화합물의 처리군만이 CCl₄처리군과 유의적으로 다른 것으로 나타났다(p＜0.01).

	시험동물수	혈청중 ALT 값(KA 단위/ℓ)	억제율(%)
비처리군	3	64± 3	100
APAP 처리군	10	3666± 825	0
실시예 12 화합물 + APAP 처리군	10	2749±1352	25
실시예 8 화합물 + APAP 처리군	9	98± 26	99
실시예 4 화합물 + APAP 처리군	10	186± 118	97
실리마린 + APAP 처리군	10	2562± 712	31

	시험동물수	혈청중 LDH 값(KA 단위/ℓ)	억제율(%)
비처리군	3	680± 46	100
APAP 처리군	10	12375±2598	0
실시예 12 화합물 + APAP 처리군	10	5480±2346	59
실시예 8 화합물 + APAP 처리군	9	1193± 546	95.6
실시예 4 화합물 + APAP 처리군	10	703± 83	99.8
실리마린 + APAP 처리군	10	8095±3534	37

	각군당시험동물수	괴사등급
	각군당시험동물수	0	1	2	3	4
비처리군	6	6	0	0	0	0
APAP 처리군	5	0	0	0	0	5
실시예 12 화합물 + APAP 처리군	6	0	1	1	1	3
실시예 8 화합물 + APAP 처리군	9	7	0	2	0	0
실시예 4 화합물 + APAP 처리군	10	5	4	1	0	0
실리마린 + APAP 처리군	10	0	0	2	3	5

실험예 5: 방사선 손상에 대한 보호효과

본 발명에 따른 화합물이 방사선 조사에 대하여 보호효과를 나타내는지 확인하기 위하여 다음과 같이 실험하였다.

대한실험동물센타로부터 구입한 수컷 ICR 마우스를 실내온도 20∼23℃, 상대습도 50%의 무균공기를 공급하는 챔버내에서 충분한 물과 사료를 공급하여 사육하였다. 마우스의 체중이 20∼25g 정도 되었을때, 본 발명에 따른 화합물을 옥수수유에 현탁시켜 100㎎/㎏의 용량(1㎖/㎏)으로 1일 1회 2일간 투여한 후 마지막으로 투여한지 3시간 후에 8 또는 9Gy의 방사선을 조사하였다. 즉, 마우스를 거의 움직일 수 없는 아크릴 상자내에 넣어⁶⁰Co 방사선 물질로부터 생성된 방사선을 115.8cGy/분의 조사율로 몸전체에 조사하였다. 아크릴 상자는 31×31㎠의 크기로 방사선 조사면적과 동일하게 제작하였다. 조직병리학적 관찰을 위하여 마우스는 γ-선을 조사한 후 7일째에 희생시켰다. 8Gy의 방사선을 투여한 다음 30일간의 생존율 변화를 측정한 결과는 도 3에 나타내었으며, 8 또는 9Gy의 방사선을 투여한 때로부터 일정기간(10일, 13일, 또는 30일)이 경과한 후의 생존율을 측정한 결과는 하기 표 7에 나타낸 바와 같다.

	방사선 조사	실시예 4번 화합물 + 방사선 조사	실시예 8번 화합물 + 방사선 조사
8Gy 조사후 30일 경과	생존수	11/23	18/23	16/23
8Gy 조사후 30일 경과	생존율(%)	48	78	70
9Gy 조사후 10일 경과	생존수	7/23	16/23	17/23
9Gy 조사후 10일 경과	생존율(%)	30	70	74
9Gy 조사후 13일 경과	생존수	0/23	3/23	5/23
9Gy 조사후 13일 경과	생존율(%)	0	13	22

Claims

하기 화학식 1의 알릴티오피리다진 유도체 및 약제학적으로 허용되는 그의 염:

화학식 1

상기식에서

R₁은 할로겐원자, 저급알콕시, 디알킬아미노알콕시, 하이드록시알콕시, 저급알킬에 의해 치환되거나 비치환된 페녹시, 벤질옥시, 또는 페닐을 나타내고,

R₂및 R₃는 각각 독립적으로 수소 또는 저급알킬을 나타내거나, R₂및 R₃가 함께 이들이 부착되어 있는 탄소원자와 함께 포화되거나 불포화된 6원환을 형성할 수 있으며,

단, R₁이 클로로인 경우에 R₂및 R₃는 수소가 아니다.
제 1 항에 있어서, R₁은 클로로, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 2-프로폭시, n-부톡시, 2-부톡시, t-부톡시, n-펜틸옥시, i-펜틸옥시, 2-(N,N-디메틸아미노)에톡시, 2-하이드록시에톡시, 페녹시, 벤질옥시, 4-메틸페녹시, 3-메틸페녹시, 2-메틸페녹시 또는 페닐을 나타내고, R₂및 R₃는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸을 나타내거나, R₂및 R₃가 함께 이들이 부착되어 있는 탄소원자와 함께 포화되거나 불포화된 6원환을 형성하는 화합물.
(a) 하기 화학식 2의 화합물을 용매중에서 염기의 존재하에 하기 화학식 3의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 1의 화합물을 제조하거나; (b) 하기 화학식 4의 화합물을 용매중에서 하기 화학식 5의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 1a의 화합물을 제조함을 특징으로하여 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법:

화학식 2

화학식 3

화학식 4

화학식 5

화학식 1a

화학식 1

상기식에서

R₁, R₂및 R₃는 제 1 항에서 정의한 바와 같고,

R₁' 는 저급알킬, 디알킬아미노알킬, 하이드록시알킬, 저급알킬에 의해 치환되거나 비치환된 페닐 또는 벤질을 나타내며,

X 는 반응성 이탈기를 나타낸다.
제 3 항에 있어서, 방법 (a) 및 (b)에서 용매로 메탄올, 에탄올, 아세톤 및 메틸에틸케톤 중에서 선택된 1 종 이상을 사용하는 방법.
제 3 항에 있어서, 방법 (a)에서 염기로 나트륨, 칼륨 및 리튬 중에서 선택된 1 종 이상의 금속을 사용하는 방법.
제 3 항에 있어서, 화학식 5의 화합물이 나트륨 금속과 R₁'OH 화합물을 반응시켜 제조된 것인 방법.
하기 화학식 2의 화합물.

화학식 2

상기식에서

R₁, R₂및 R₃는 제 1 항에서 정의한 바와 같고,

X 는 반응성 이탈기를 나타낸다.
유효성분으로서 제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유함을 특징으로 하는 간질환 예방 및 치료제 조성물.
제 8 항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 전분, 유당, 셀룰로오스 유도체 및 설탕 중에서 선택된 1 종 이상인 조성물.
유효성분으로서 제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 함유함을 특징으로 하는 방사선 보호제 조성물.
제 10 항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 전분, 유당, 셀룰로오스 유도체 및 설탕 중에서 선택된 1 종 이상인 조성물.