KR102101201B1 - Ｐｃｓｋ9 펩티드 백신 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 생체내에서 PCSK9에 대한 항체의 형성을 유도할 수 있는 백신에 관한 것이다.
Description
본 발명은 생체내에서 PCSK9에 대해 유도된 항체 형성을 유도할 수 있는 백신에 관한 것이다.
본 발명은 저밀도 지질단백질 (LDL) 수용체 (LDLR)의 프로단백질 전환효소 서브틸라이신/켁신 타입 9 (Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9: PCSK9)-매개된 분해에 영향을 끼칠 수 있는 신규한 펩티드에 관한 것이다. 펩티드는 면역원성 담체에 커플링되어 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증, 또는 죽상동맥경화증에 의해 초래된 PCSK9-관련 건강 질병을 예방 및/또는 치료하기 위한 백신으로 제형화된다.
전세계 사망의 주요 원인 중 하나는 심혈관 질환 (CVD)이다. 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증, 고혈압 및 죽상동맥경화증과 같은 인자가 이들 질환과 관련이 있다. 포괄적인 역학 연구에서, 혈청 콜레스테롤 수준과 CVD 발생의 양성 관계가 입증될 수 있다. 고 LDL 콜레스테롤 (LDLc) 수준은 높은 심혈관 위험 요소가 되며, 죽상동맥경화증의 증가된 위험성과 직접적인 상관관계에 있다.
LDLR, 주로 간의 LDLR은 혈장으로부터 LDLc 제거의 주요 경로이다. 순환형 LDLc는 LDLR에 결합하고, 형성된 복합체는 클라트린-매개된 세포내이입에 의해 내부화된다. 후속하여, LDLc은 분해로 진행되며, LDLR은 다시 세포 표면으로 재순환된다.
PCSK9는 LDLR에 결합하여 이의 분해를 촉진하는 분비된 세린 프로테아제이다. 2003년에 상염색체 우성 고콜레스테롤혈증 (ADH)과 관련된 제 3 유전자 자리가 밝혀졌다. PCSK9의 "기능 획득 돌연변이" (GOF)는 LDLR과의 이의 상호작용을 향상시키며, LDLR 수준 감소 및 현저하게 더 높은 LDLc 수준을 유도한다. 결론적으로, GOF는 고콜레스테롤혈증 및 죽상동맥경화증에 대한 소인과 관련이 있다. 반대로, "기능 손실 돌연변이" (LOF)는 증가된 LDLR 수준 및 현격하게 감소된 LDLc를 유도하고, 광상심장질환 (CHD)에 대한 위험성을 후속 감소시킨다. 인간 PCSK9는 간, 장 및 신장에서 주로 발현된다. 이는 ~72 kDa 단백질로서 합성되고, 이러한 단백질은 자가 촉매적 절단된 후 ~65 kDa 성숙 단백질로서 분비된다.
순환형 PCSK9는 LDLR의 EGF-A 도메인에 특이적으로 결합한다. 복합물은 세포내이입에 의해 내부화되고, LDLR은 세포 표면으로 다시 재순환하는 대신에, LDLR은 결과적으로 리소좀에서 분해된다. PCSK9-LDLR 상호작용의 순수 효과는 혈장으로부터의 LDLc의 제거에 이용가능한 LDLR의 감소이며, 이는 LDLR 및 따라서, LDLc 대사의 조절제로서 PCSK9의 중요성을 나타낸다.
여러 동물 연구는 LDLc 수준의 조절제로서 PCSK9의 필수 역할을 입증한다. 마우스에서 PCSK9의 아데노바이러스 과다발현은 순환형 LDLc의 현저한 증가를 초래하였다. 이에 반해, PCSK9-/- 마우스는 야생형 동물과 비교하여 LDLR 수준의 2.8배 증가 및 LDLc의 ~50%로의 감소를 보여준다. GOF 및 LOF 돌연변이는 인간의 LDL 대사 조절에서 PCSK9의 중요한 역할을 나타내며, 이로 인해 PCSK9는 약제학적 간섭을 위한 매력적인 표적이 된다. 특히, PCSK9에서 LOF 돌연변이에 대한 인간 이형접합은 건강에 유리하고 정상적인 수명을 갖는 것으로 보인다. 게다가, PCSK9 및 비순환형 PCSK9에서 2개의 불활성화 돌연변이와의 화합물 이형접합체는 건강한 31세 아프리카-아메리카 어미가 매우 낮은 수준의 LDLc (14-34 mg/dl)를 갖게하는 것으로 보고되었다.
순환형 PCSK9의 양을 감소시키거나 이의 LDLR과의 상호작용을 억제하는 여러 화합물을 성공적으로 임상전 및 임상 평가하였다 (예컨대, 모노클로날 항체, 안티센스-올리고누클레오티드 또는 자가촉매작용의 억제제). PCSK9가 LDLR에 대해 세포내 및 세포외로 작용하지만, 순환형 PCSK9 표적화는 LDLc 저하 요법을 위한 가치가 있는 방법이다. 마우스에서의 개체연결 실험은 물론 재조합 단백질의 투여는 세포외 PCSK9가 간 LDLR의 수를 저하시키기에 충분함을 나타냈다. 더욱 중요하게는, PCSK9-특이적 모노클로날 항체 (mAb)를 이용한 인간 임상 연구 결과는 PCSK9 표적화가 LDLc를 효과적이고 안전하게 감소시킬 수 있음을 보여준다. 또한, PCSK9 표적화의 안전성 및 효력을 평가하기 위한 여러 임상 시험이 최근 성공적으로 마무리되었다.
WO 2012/059573 A1 및 WO 2011/027257 A2에는 백신으로서 PCSK9 폴리펩티드의 단편을 기재하고 있다. 리 (Li) 등 (Rec. Pat. DNA & Gene Seq. 3 (2009), 201-212) 및 위어즈빅키 (Wierzbicki) 등 (Exp. Op. Invest. Drugs 21 (2012), 667-676)은 고지질혈증 치료를 위한 PCSK9의 억제에 대한 최근의 발견에 대해 보고하였다.
요약하면, PCSK9는 LDLR 및 따라서, LDLc 수준의 주요 조절제이다. 스타틴이 콜레스테롤 관리를 위한 일선의 간섭을 대표하지만, 스타틴은 특정 대상체에서 목적을 달성하기에 충분하거나 적합하지 않다. 게다가, PCSK9는 스타틴에 의해 상향조절되어 이들의 약물학적 효과와 상반되는 것으로 밝혀졌다. 따라서, LDLc 수준을 제어하기 위한 추가적인 또는 대안적인 약물의 검정이 매우 중요하다. PCSK9의 억제는 단일요법으로서 혈장 LDLc을 저하시키며 또한 스타틴 또는 기타 물질 (예컨대, 예를 들어, 피브레이트 또는 니코틴산)의 콜레스테롤 저하 효과를 증가시키는 것으로 예측된다.
본 발명의 목적은 개체에서 LDLc를 저하시키는 수단 및 방법을 제공하는 것이다. 이러한 목적은 각각의 천연 서열을 모방하는 펩티드, 소위 미모토프를 제공함으로써 달성될 수 있다. 이러한 미모토프는 인간 PCSK9에 특이적으로 결합하여 LDLR의 PCSK9-매개된 분해를 억제하는 항체를 유도할 수 있다.
따라서, 본 발명은 하기 아미노산 서열을 갖는 9 내지 25개 아미노산 잔기로 구성된 적어도 하나의 펩티드를 포함하는 백신, 백신 조성물 또는 조성물로서, 상기 적어도 하나의 펩티드는 약제학적으로 허용되는 담체에 커플링되거나 융합된 백신, 백신 조성물 또는 조성물에 관한 것이다:
X1X2X3WX4X5X6RX7(X8)m(X9)n (SEQ ID No. 1)
상기에서,
X1은 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 세린, 트레오닌, 발린 및 알라닌으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X2는 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 이소류신, 발린, 글라이신, 글루타민 및 알라닌, 더욱 바람직하게는, 이소류신, 발린, 글루타민 및 알라닌의 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이다.
X3은 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 프롤린, 트레오닌, 알라닌 및 발린으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기, 더욱 바람직하게는, 프롤린이며,
X4는 아스파라긴, 세린, 알라닌, 글루타민 및 아스파르트산으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X5는 류신, 글라이신, 알라닌, 티로신, 아스파르트산, 페닐알라닌 및 발린으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기, 바람직하게는, 류신이며,
X6은 친수성의 음으로 하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된 아미노산 잔기, 바람직하게는, 글루탐산 및 아스파르트산으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X7은 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 이소류신, 류신, 알라닌 및 트레오닌으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X8은 트레오닌, 류신, 글루타민, 알라닌 및 세린으로 구성된 군으로부터 선택된 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X9는 X10X11X12, 또는 1 또는 2 개 아미노산 잔기로 구성된 이의 C-말단 절두된 단편이며,
X10은 임의의 아미노산 잔기, 바람직하게는, 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 프롤린, 알라닌 및 세린으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X11은 임의의 아미노산 잔기, 바람직하게는, 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 프롤린, 알라닌, 발린, 트레오닌 및 아스파라긴으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X12는 임의의 아미노산 잔기, 바람직하게는, 아르기닌, 알라닌, 라이신, 세린, 및 류신으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
m은 0 또는 1이며,
n은 0 또는 1이고,
SEQ ID No. 1은 SIPWNLERITPPR 또는 이의 C-말단 절두된 단편이 아니다.
본 발명의 펩티드로의 개체의 백신접종은 PCSK9에 결합하는 폴리클로날 항체의 생성으로 이어진다. 이러한 항체는 LDLR 결합과 경쟁할 수 있다. 그 결과, 간 LDLR 수준은 증가하며, 혈장 LDLc 및 전체 콜레스테롤은 감소한다. 따라서, 본 발명에 따른 백신의 투여는 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증 및/또는 죽상동맥경화증에 의해 초래된 질환의 치료 또는 예방을 허용한다.
본 발명의 펩티드는 소위 미모토프이다. 미모토프는 이들이 유래되는 오리지날 단백질/펩티드 서열과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 이러한 미모토프는 면역계에 의해 이종으로서 간주되며, 따라서 자가-내성을 파괴할 필요가 없다.
본 발명의 펩티드는 아미노산 서열 SIPWNLERITPPR (SEQ ID No. 2)을 갖는 PCSK9 단편의 변이체 (아미노산 교환 및 선택적 절두)이며, 9 내지 25 개 아미노산 잔기, 바람직하게는, 9 내지 24, 9 내지 23, 9 내지 22, 9 내지 21, 9 내지 20, 9 내지 19, 9 내지 18, 9 내지 17, 9 내지 16, 9 내지 15, 9 내지 14, 9 내지 13, 9 내지 12, 9 내지 11, 9 내지 10 또는 9 개 아미노산 잔기, 더욱 바람직하게는, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25 개 아미노산 잔기로 구성된다. SEQ ID No. 2의 4번 위치에서 트립토판 잔기 및 SEQ ID No. 2의 8번 위치에서 아르기닌 잔기의 변경 (예를 들어, 돌연변이)이 PCSK9에 충분하게 결합할 수 없는 항체 형성을 유도함이 놀랍게도 밝혀졌다. 본 발명에 따른 신규한 펩티드 서열 (특히, 면역원성 담체에 결합되고/거나 백신으로 제형화되는 경우)은 PCSK9에 대한 항체 형성을 유도할 수 있으며, 따라서, PCSK9-매개된 LDLR 분해를 유익하게 변경하여 따라서, 후속하여 혈장 LDLc 수준을 감소시킨다. 본 발명에 따라 규정된 펩티드는 놀랍게도, 천연 PCSK9 서열과 비교하여, 심지어 WO 2012/059573 A1 및 WO 2011/027257 A2에 기재된 것과 비교하여 전체 콜레스테롤 수준을 감소시키는 탁월한 결과를 달성한다. 이는 대표적인 동물 모델을 사용함으로써 본 출원의 실시예 부분에서 추가로 입증된다. 따라서, 9 내지 13 개 아미노산 잔기 길이를 갖는 SEQ ID No. 1 (즉, 여기에서 X12는 존재하지 않으며, m=1이거나; m=0이며, X10은 프롤린, 알라닌 및 세린이고, X11은 프롤린, 알라닌, 발린, 트레오닌 및 아스파라긴이고, X12는 아르기닌, 알라닌, 라이신, 세린 및 류신임)에 따른 펩티드를 제공하는 것이 특히 바람직하다.
본 발명이 아미노산 서열 SIPWNLERITPPR (SEQ ID No. 2)을 갖는 PCSK9의 특이적 변이체에 대한 것이므로, 이러한 오리지날 서열 및 모든 이의 C-말단 절두된 단편은 본 발명의 SEQ ID No. 1에 따른 정의에서 제외된다. 이는 오리지날 서열 SIPWNLERITPPR 또는 이의 C-말단 단편화된 버젼 예컨대, 아미노산 서열 SIPWNLERITPP, SIPWNLERITP, SIPWNLERIT, 또는 SIPWNLERI을 갖는 펩티드 (모두 아미노산(들)의 C-말단 결실에 의해 SEQ ID No. 2로부터 유래됨)가 모든 형태의 본 발명의 SEQ ID No. 1에 따른 펩티드의 정의로부터 제외됨을 명백하게 해준다. 따라서, 천연 펩티드, 링커의 존재 또는 부재하에 기질에 결합된 펩티드, 링커 예컨대, 화학적 링커 또는 Cys-링커 등을 갖는 펩티드로서의 이러한 C-말단 절두된 펩티드가 제외되며, 특히 물론, 이러한 펩티드가 백신으로 제공되는 경우에도 제외됨이 또한 명백하다.
본 발명의 백신은 본원에 정의된 바와 같은 아미노산 서열 SEQ ID No. 1을 갖는 적어도 하나, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5 또는 적어도 10 개 펩티드를 포함할 수 있다. 따라서, 백신은 본원에 기재된 바와 같은 2개 이상의 펩티드의 조합을 포함할 수 있다. 그러나, 본 발명의 백신은 또한, 본원에 정의된 바와 같고 SEQ ID No. 1에 따른 하나 이상의 펩티드 옆에 또한 그 밖의 펩티드 예컨대, PCSK9의 미모토프 (즉, PCSK9 단편의 돌연변이체) 또는 단편을 포함하는 것이 가능하다 (예를 들어, WO 2011/027257 참조). PCSK9의 특히 바람직한 단편은 단편 SIPWNLERITPPRYRADEYQPPDGGSLVEV, 특히, SIPWNLERIT, SIPWNLERI, SIPWNLERITPPR, SIPWNLERITPP 또는 SIPWNLERITP이다.
본 발명의 펩티드는 당해 분야에 널리 공지된 방법에 의해 화학적으로 합성될 수 있다. 물론, 재조합 방법을 이용하여 본 발명의 펩티드를 생성하는 것이 또한 가능하다. 펩티드는 박테리아, 효모 또는 진균류와 같은 미생물, 포유동물 또는 곤충 세포와 같은 진핵 세포, 또는 아데노바이러스, 폭스바이러스, 헤르페스 바이러스, 심리키 포레스트 바이러스 (Simliki forest virus), 바쿨로바이러스, 박테리오파아지, 신드비스 바이러스 (sindbis virus) 또는 센다이 바이러스 (Sendai virus)와 같은 재조합 바이러스 벡터에서 생성될 수 있다. 펩티드를 생성하는데 적합한 박테리아는 E. 콜라이 (E. coli), B. 서브틸리스 (B. subtilis) 또는 이러한 펩티드를 발현할 수 있는 임의의 다른 박테리아를 포함한다. 본 발명의 펩티드를 발현하는데 적합한 효모 세포는 사카로마이세스 세레비시애 (Saccharomyces cerevisiae), 스키조사카로마이세스 폼베 (Schizosaccharomyces pombe), 칸디다 (Candida), 피치아 파스토리스 (Pichia pastoris) 또는 펩티드를 발현할 수 있는 임의의 다른 효모를 포함한다. 상응하는 수단 및 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 또한, 재조합으로 생성된 펩티드를 분리하고 정제하는 방법은 당해분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, 겔 여과, 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 등을 포함한다.
본 발명의 펩티드의 분리를 용이하게 하기 위해 융합 폴리펩티드가 제조될 수 있으며, 여기에서 펩티드는 친화성 크로마토그래피에 의한 분리를 가능케 하는 이종성 폴리펩티드에 번역적으로 융합 (공유적으로 결합)된다. 전형적인 이종성 폴리펩티드는 His-Tag (예를 들어, His6; 6개 히스티딘 잔기), GST-Tag (글루타티온-S-트랜스퍼라아제) 등이다. 융합 폴리펩티드는 펩티드의 정제를 용이하게 할 뿐만 아니라, 정제 단계 동안 펩티드의 분해를 방지할 수 있다. 정제 후 이종성 폴리펩티드를 제거하고자 하는 경우, 융합 폴리펩티드는 펩티드와 이종성 폴리펩티드 사이의 접합부에 절단 부위를 포함할 수 있다. 절단 부위는 그 부위에서의 아미노산 서열에 대해 특이적인 효소 (예를 들어, 프로테아제)로 절단되는 아미노산 서열로 구성될 수 있다.
본 발명의 백신 및 펩티드는 인간을 포함하는 임의의 종류의 포유동물에 투여될 수 있다. 그러나, 본 발명의 백신 및 펩티드를 인간에 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, X1은 발린, 세린, 트레오닌 또는 알라닌, 바람직하게는, 발린이다.
본 발명의 추가의 바람직한 구체예에 따르면, X2는 발린, 알라닌, 이소류신 또는 글루타민, 바람직하게는, 발린이다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, X3은 프롤린, 트레오닌, 알라닌 또는 발린이다.
SEQ ID No. 1의 X4는 바람직하게는, 세린 또는 아스파라긴, 바람직하게는, 세린이다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, X6은 글루탐산이다.
X7은 바람직하게는, 류신, 이소류신 또는 트레오닌, 바람직하게는, 트레오닌이다.
X8은 바람직하게는, 글루타민, 트레오닌 또는 류신이다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, X1X2X3은 TIP, VIP, AIP, SVP, SQP, SAP, SGP, SIT, SIA, SIV 및 VQP로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 추가의 바람직한 구체예에 따르면, X4X5X6은 SLE, ALE, QLE, DLE, NAE, NGE, NYE, NDE, NFE, NVE 및 NLD로 구성된 군으로부터 선택된다.
X7(X8)m (여기서, m은 1임)은 바람직하게는, LT, TT, AT, IL, IQ, IA, IS, TL, LQ 및 LL로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, X9는 PPR, PP, P, APR, SPR, PAR, PVR, PTR, PNR, PPA, PPK, PPS 및 PPL로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 특히 바람직한 구체예에 따르면, 적어도 하나의 펩티드는 TIPWNLERIT, TIPWNLERITPPR, VIPWNLERIT, VIPWNLERITPPR, AIPWNLERIT, AIPWNLERITPPR, SVPWNLERIT, SVPWNLERITPPR, SQPWNLERIT, SQPWNLERITPPR, SAPWNLERIT, SAPWNLERITPPR, SGPWNLERITPPR, SGPWNLERIT, SITWNLERIT, SITWNLERITPPR, SIAWNLERIT, SIAWNLERITPPR, SIVWNLERITPPR, SIVWNLERIT, SIPWSLERIT, SIPWSLERITPPR, SIPWALERIT, SIPWALERITPPR, SIPWQLERITPPR, SIPWQLERIT, SIPWDLERITPPR, SIPWDLERIT, SIPWNAERIT, SIPWNAERITPPR, SIPWNGERIT, SIPWNGERITPPR, SIPWNYERIT, SIPWNYERITPPR, SIPWNDERIT, SIPWNDERITPPR, SIPWNFERITPPR, SIPWNVERITPPR, SIPWNLDRITPPR, SIPWNFERIT, SIPWNVERIT, SIPWNLDRIT, SIPWNLERLT, SIPWNLERLTPPR, SIPWNLERTT, SIPWNLERTTPPR, SIPWNLERAT, SIPWNLERATPPR, SIPWNLERIL, SIPWNLERILPPR, SIPWNLERIQ, SIPWNLERIQPPR, SIPWNLERIA, SIPWNLERIAPPR, SIPWNLERISPPR, SIPWNLERIS, SIPWNLERITAPR, SIPWNLERITSPR, SIPWNLERITPAR, SIPWNLERITPVR, SIPWNLERITPTR, SIPWNLERITPNR, SIPWNLERITPPA, SIPWNLERITPPK, SIPWNLERITPPS, SIPWNLERITPPL, VIPWNLERLT, VIPWNLERLTPPR, VIPWNLERTT, VIPWNLERTTPPR, VIPWNLERIL, VIPWNLERILPPR, VIPWNLERIQ, VIPWNLERIQPPR, SVPWNLERLT, SVPWNLERLTPPR, SVPWNLERTT, SVPWNLERTTPPR, SVPWNLERIL, SVPWNLERILPPR, SVPWNLERIQ, SVPWNLERIQPPR, SIPWSLERTTPPR, SQPWNLERLT, SQPWNLERLTPPR, SQPWNLERIL, SQPWNLERILPPR, SQPWNLERIQ, SQPWNLERIQPPR, SIPWSLERLT, SIPWSLERLTPPR, SIPWSLERTT, SIPWSLERIL, SIPWSLERILPPR, SIPWSLERIQ, SIPWSLERIQPPR, VQPWSLERTL, VQPWSLERTLPPR, SQPWSLERTL, SQPWSLERTLPPR, VQPWNLERLQ, VQPWNLERLQPPR, VQPWSLERLL, VQPWSLERLLPPR, SVPWSLERLT 및 SVPWSLERLTPPR로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 특히 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 백신에 포함된 적어도 하나의 펩티드는 SIPWSLERIT, SIPWSLERITPPR, SIPWSLERTTPPR, VIPWNLERILPPR, SVPWNLERIQPPR, SIPWSLERTT, SIPWSLERLT, SIPWSLERLTPPR, SIPWSLERIQ, SIPWSLERIQPPR, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ로 구성된 군으로부터 선택된다.
표 A: 아미노산 잔기
특히 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 백신에 포함된 적어도 하나의 펩티드 (SEQ ID No. 1)는 이의 N- 및/또는 C-말단에서 직접적으로 또는 스페이서 서열을 통해 결합된 적어도 하나의 시스테인 잔기를 포함한다.
이러한 시스테인 잔기는 또 다른 분자 또는 담체에 펩티드를 결합시키기 위해 반응기로서 작용할 수 있다. 예를 들어, 이러한 기는 펩티드를 담체 단백질에 결합시키는데 이용될 수 있다. 시스테인 잔기는 본 발명의 펩티드에 직접적으로 또는 스페이서 서열을 통해 결합될 수 있다. 스페이서 서열은 바람직하게는, 적어도 하나, 바람직하게는, 적어도 2개, 더욱 바람직하게는, 적어도 3개, 더욱 더 바람직하게는, 적어도 4개, 및 선택적으로 최대 10개, 바람직하게는 최소 5개의 작은 비극성 아미노산 잔기 예컨대, 글라이신을 포함한다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, 담체는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), CRM (바람직하게는, CRM197), 파상풍 변성독소 (TT), 디프테리아 독소 (DT), 단백질 D 또는 헬퍼 T-세포 에피토프를 함유하는 임의의 기타 단백질 또는 펩티드로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따르면, 펩티드는 약제학적으로 허용되는 담체, 바람직하게는, KLH (키홀 림펫 헤모시아닌), CRM, 파상풍 변성독소, 알부민-결합 단백질, 소 혈청 알부민, 덴드리머 (MAP), 펩티드 링커 (또는 플랭킹 영역), 및 싱 (Singh) 등의 문헌 [Singh et al., Nat. Biotech. 17 (1999), 1075-1081] (특히, 이러한 문헌의 표 1에 기재된 것들), 및 오하간 (O'Hagan) 등의 문헌 [O'Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2 (9) (2003), 727-735] (특히, 여기 기재된 내인성 면역-강화 화합물 및 전달 시스템)에 기술된 애주번트 물질, 또는 이들의 혼합물에 결합된다. 이와 관련해서 컨쥬게이션 화학 작용 (예를 들어, GMBS와 같은 이종이작용성 화합물 (heterobifunctional compounds) 및 물론 또한, 문헌 ["Bioconjugate Techniques", Greg T. Hermanson]에 기술된 바와 같은 다른 화합물을 통한)은 당업자에게 공지된 반응으로부터 선택될 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 적어도 하나의 펩티드를 당해분야에 공지된 방법에 의해 단백질 담체에 융합시키는 것이 또한 가능하다. 이러한 단백질은 무관련된 면역원성 단백질과 함께 본원에 기술된 바와 같은 펩티드를 포함한다. 바람직하게는, 면역원성 단백질은 소환 반응을 유발시킬 수 있다. 이러한 단백질의 예로는 파상풍, 결핵, 간염 단백질 및 단백질 D, 그람-네거티브 박테리움 해모필루스 인플루엔자 B의 표면 단백질을 포함한다 (WO 91/18926). 바람직하게는, 단백질의 대략 1/3 (예를 들어, 처음 N-말단의 100-110 개 아미노산)을 포함하며 지질화될 수 있는 단백질 D 유도체가 이용된다. 융합 단백질을 제공하는데 사용될 수 있는 또 다른 담체는 LYTA로서 공지된 단백질 또는 이의 일부 (바람직하게는, C-말단 부분)일 수 있다. LYTA는 스트렙토코커스 뉴모니애로부터 유래되며, 이는 아미다제 LYTA (LytA 유전자에 의해 엔코딩됨; Gene 43; (1986):265-292)로서 공지된 N-아세틸-L-알라닌 아미다제를 합성한다. LYTA는 펩티도글리칸 백본에서 특정 결합을 특이적으로 분해하는 자가용해소이다. 바람직한 구체예내에, LYTA의 반복 부분이 융합 단백질내로 혼입될 수 있다. 반복 부분은 잔기 178번에서 출발하는 C-말단 영역에서 발견된다. 특히 바람직한 반복 부분은 잔기 188-305와 통합된다.
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, 펩티드는 애주번트와 함께 제형화되며, 바람직하게는, 알루미늄 하이드록시드에 흡착된다.
본 발명에 따른 백신은 애주번트, 바람직하게는, 저가용성 알루미늄 조성물, 특히 알루미늄 하이드록시드와 제형화될 수 있다. 물론, MF59, 알루미늄 포스페이트, 칼슘 포스페이트, 사이토킨 (예를 들어, IL-2, IL-12, GM-CSF), 사포닌 (예를 들어, QS21), MDP 유도체, CpG 올리고뉴클레오티드, LPS, MPL, 폴리포스파젠, 에멀젼 (예를 들어, 프로인드(Freund's), SAF), 리포좀, 비로좀, 아이스콤 (iscom), 코크리트 (cochleates), PLG 미립자, 폴록사머 입자, 바이러스-유사 입자, 열불안정성 엔테로톡신 (LT), 콜레라 독소 (CT), 변종 독소 (예를 들어, LTK63 및 LTR72), 미립자 및/또는 중합된 리포좀과 같은 애주번트가 또한 사용될 수 있다.
적합한 애주번트는 예를 들어, AS01B, AS02A, AS15, AS-2 및 이의 유도체 (GlaxoSmithKline, Philadelphia, PA); CWS, TDM, Leif, 알루미늄 염 예컨대, 알루미늄 하이드록시드 겔 (alum) 또는 알루미늄 포스페이트; 칼슘, 철 또는 아연의 염; 아실화된 티로신의 불용성 현탁액; 아실화된 당; 양이온 또는 음이온 유도된 폴리사카라이드; 폴리포스파젠; 생분해성 미소구체; 모노포스포릴 리피드 A 및 퀼 A로서 시중에서 입수가능하다. 사이토킨 예컨대, GM-CSF 또는 인터류킨-2, -7 또는 -12가 또한 애주번트로서 사용될 수 있다.
우세한 Th1-타입 반응을 유발시키는데 사용하기 위한 바람직한 애주번트는 예를 들어, 선택적으로, 알루미늄 염과 모노포스포릴 리피드 A, 바람직하게는, 3-O-탈아실화된 모노포스포릴 리피트 A (3D-MPL)의 조합물을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Ribi et al., Immunology and Immunopharmacology of Bacterial Endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, (1986): 407-419]; GB 2122204B; GB 2220211; 및 US 4,912,094 참조). 바람직한 형태의 3D-MPL은 직경이 0.2 mm 미만의 작은 입자 크기를 갖는 에멀션이며, 이의 제조 방법은 WO 94/21292에 기재되어 있다. 모노포스포릴 리피트 A 및 계면활성제를 포함하는 수성 제형은 WO 98/43670에 기술되어 있다. 예시적인 바람직한 애주번트는 AS01B (리포좀 제형중의 MPL 및 QS21), 리포좀 제형중의 3D-MPL 및 QS21, AS02A (수중유 에멀션중의 MPL 및 QS21), 3D-MPL 및 QS21 및 수중유 에멀션, 및 AS 15를 포함한다. MPL 애주번트는 예를 들어, US 4,436,727; US 4,877,611; US 4,866,034 및 US 4,912,094에 기술되어 있다.
CpG-함유 올리고누클레오티드 (여기서, CpG 디누클레오티드는 비메틸 (unmethyl)화됨)는 또한 우세한 Th1 반응을 유도한다. CpG는 DNA에 존재하는 사이토신-구아노신 디누클레오티드 모티프에 대한 약어이다. 이러한 올리고누클레오티드는 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, WO 96/02555, WO 99/33488, US 6,008,200 및 US 5,856,462에 기술되어 있다. 면역자극 DNA 서열이 또한 예를 들어, 문헌 [Sato et al., Science 273; (1996):352]에 기술되어 있다. CpG는 백신내로 제형화되는 경우, 자유 항원과 함께 자유 용액중에 (WO 96/02555; 상기 McCluskie and Davis) 또는 항원에 공유적으로 컨주게이팅되어 (WO 98/16247) 일반적으로 투여되거나, 알루미늄 하이드록시드와 같은 담체와 함께 제형화된다 ((간염 표면 항원) Davis et al., supra; Brazolot-Millan et al., PNAS USA, 95(26), (1998):15553-8). CpG는 전신 및 점막 경로 둘 모두에 의해 투여될 수 있는 애주번트로서 공지되어 있다 (WO 96/02555, EP 0 468 520, Davis et al., J.lmmunol, 160(2), (1998):870-876; McCluskie and Davis, J.Immunol., 161(9), (1998):4463-6).
또 다른 바람직한 애주번트는 사포닌 또는 사포닌 미모토프 또는 유도체, 바람직하게는, QS21 (Aquila Biopharmaceuticals Inc.)이며, 이는 단독으로 또는 그 밖의 애주번트와 조합되어 사용될 수 있다. 예를 들어, 개선된 시스템은 모노포스포릴 리피드 A와 사포닌 유도체의 조합물 예컨대, WO 94/00153에 기술된 바와 같은 QS21과 3D-MPL의 조합물, 또는 WO 96/33739에 기술된 바와 같이 QS21이 콜레스테롤로 켄칭되는 덜 반응원성 (reactogenic)인 조성물을 포함한다. 그 밖의 바람직한 제형은 수중유 에멀션 및 토코페롤을 포함한다. 수중유 에멀션중의 QS21, 3D-MPL 및 토코페롤을 포함하는 특히 강력한 애주번트 제형은 WO 95/17210에 기술되어 있다. 본 발명에 사용하기 위한 추가적인 사포닌 애주번트는 QS7 (WO 96/33739 및 WO 96/11711에 기술됨) 및 QS17 (US 5,057,540 및 EP 0 362 279 B1에 기술됨)을 포함한다.
그 밖의 바람직한 애주번트는 Montanide ISA 720 (Seppic, France), SAF (Chiron, California, United States), ISCOMS (CSL), MF-59 (Chiron), SBAS 애주번트 시리즈 (예를 들어, GlaxoSmithKline에서 입수가능한 SBAS-2, AS2', AS2, SBAS-4, 또는 SBAS6), Detox (Corixa), RC-529 (Corixa, Hamilton, MT) 및 그 밖의 아미노-알킬 글루코사미니드 4-포스페이트 (AGP)를 포함한다. 추가의 예시적인 애주번트는 Shiga 독소 B 아단위를 기반으로 하는 애주번트 및 합성 MPL을 포함한다 (WO 2005/112991 참조). 애주번트로서 알루미늄 하이드록시드를 사용하는 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 백신은 피하, 근육내, 피내, 정맥내로 투여될 수 있다 (예를 들어, 문헌 ["Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formula-tions", Sarfaraz Niazi, CRC Press Inc, 2004] 참조). 투여 경로에 따라, 의약은 각각의 담체, 애주번트 및/또는 부형제를 포함할 수 있다.
본 발명의 펩티드 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 백신은 임의의 적합한 적용 방식 예를 들어, 피내 (i.d.), 복강내 (i.p.), 근내 (i.m.), 비강내, 경구, 피하 (s.c.), 등에 의해 그리고, 임의의 적합한 전달 모드에 의해 투여될 수 있다 (O'Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2 (9), (2003), 727-735). 본 발명의 펩티드는 바람직하게는, 피내, 피하 또는 근내 투여를 위해 제형화된다. 각각의 제형을 수득하기 위한 수단 및 방법은 당업자에게 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 ["Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations", Sarfaraz Niazi, CRC Press Inc, 2004] 참조).
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, 백신은 특히, 포유동물, 바람직하게는, 인간에서 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증 및/또는 죽상동맥경화증에 의해 초래된 장애 바람직하게는, 심혈관 질환, 뇌졸중 또는 말초 혈관 질환의 치료 및/또는 예방에 사용된다.
기술된 바와 같이, 본 발명의 펩티드는 PCSK9에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 형성을 유도할 수 있다. 항체와 PCSK9의 상호작용은 생체내 간세포에서 저밀도 지질단백질 수용체를 증가시키고, 혈장 콜레스테롤 흡수를 증가시키고 이어서 혈장 LDL 콜레스테롤 수준 및 따라서 총 혈장 콜레스테롤 수준을 감소시킨다.
죽상동맥경화증과 관련된 질환은 바람직하게는, 말초동맥 폐색증, 관상심장 질환, 졸중성 뇌 발작 (apoplectic cerebral insultus) 및 뇌졸중 (stroke)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
용어 "고지질혈증, 고콜레스테롤혈증 및/또는 죽상동맥경화증과 관련된 질환" 및 "고지질혈증, 고콜레스테롤혈증 및/또는 죽상동맥경화증에 의해 초래된 질병"은 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증 및 죽상동맥경화증의 결과인 질환을 나타낸다. 이러한 질환으로는 특히, 말초동맥 폐색증, 관상심장 질환 및 졸중성 뇌 발작을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Steinberg, D. J Lipid Res 46(2005):179-190 and Steinberg, D. J Lipid Res 47(2006):1339-1351] 참조).
본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, 본 발명의 펩티드는 접종당 0.1 ng 내지 10 mg, 바람직하게는, 0.5 내지 500 ㎍, 더욱 바람직하게는, 1 내지 100 ㎍의 양으로 포유동물 또는 개체에 투여된다. 바람직한 구체예에서, 이러한 양은 백신중에 존재하는 모든 펩티드 (백신중에 하나 초과의 펩티드가 사용되는 경우)를 나타낸다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 이러한 양은 백신중에 존재하는 각 단일 단편을 나타낸다. 물론, 펩티드가 상이하거나 동일한 양으로 존재하는 백신을 제공하는 것이 가능하다. 그러나, 본 발명의 펩티드는 대안적으로, 0.1 ng 내지 10 mg, 바람직하게는, 10 ng 내지 1 mg, 특히, 100 ng 내지 300 ㎍/kg 체중의 양으로 포유동물 또는 개체에 투여될 수 있다.
단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 펩티드의 양은 치료되는 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 다양할 것이다. 백신의 용량은 포유동물 또는 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 요망되는 반응을 유도하는 항체의 능력과 같은 요인에 따라 다양할 수 있다. 투여 요법은 최적의 치료 반응을 제공하기 위해 조절될 수 있다. 예를 들어, 수개의 나누어진 용량으로 매일 투여될 수 있거나, 용량은 치료적 긴급 상황에 의해 지시된 바에 따라 비례적으로 감소될 수 있다. 백신의 용량은 또한, 환경에 따라 최적의 예방적 용량 반응을 제공하기 위해 변화될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 펩티드 및 백신은 항상 PCSK9에 대해 유도된 항체의 수준에 따라 수일, 1주 또는 2주, 또는 심지어 수개월 또는 수년의 간격을 두고 개체에 투여될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 펩티드/백신은 2회 내지 10회, 바람직하게는, 2회 내지 7회, 심지어 더욱 바람직하게는, 5회 이하 및 가장 바람직하게는, 4회 이하로 적용된다. 이러한 횟수의 접종은 기본적 면역화를 유도할 수 있다. 특히 바람직한 구체예에서, 후속 백신 접종들 사이의 시간 간격은 2주 내지 5년, 바람직하게는, 1개월 내지 3년 이하, 더욱 바람직하게는, 2개월 내지 1.5년으로 선택된다. 예시된 백신 접종 스케줄은 6주 내지 8주 및 6개월 이하의 기간에 걸친 3회 내지 4회 초기 백신 접종을 포함할 수 있다. 그 후, 백신 접종은 매 2년 내지 10년 마다 반복될 수 있다. 본 발명의 펩티드/백신의 반복된 투여는 치료적 백신 접종의 최종 효과를 최대화할 수 있다.
본 발명의 백신은 또한, 인간 체내 LDL 및/또는 HDL 수준의 조절에 또한 관련되는 다른 단백질로부터 유래된 항원을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 PCSK9 단편은 인간 CETP 단백질로부터 유래된 에피토프와 조합될 수 있다. 본 발명의 백신은 또한 PCSK9 단백질의 상이한 에피토프로부터 유래된 항원을 포함할 수 있다.
전형적으로, 백신은 0.5 내지 500 ㎍, 바람직하게는, 1 내지 100 ㎍ 및 대안적으로, 0.1 ng 내지 10 mg, 바람직하게는, 10 ng 내지 1 mg, 특히, 100 ng 내지 100 ㎍, 또는, 대안적으로, 예를 들어, 100 fmol 내지 10 μmol, 바람직하게는, 10 pmol 내지 1 μmol, 특히, 100 pmol 내지 100 nmol의 양으로 본 발명의 펩티드를 함유한다. 전형적으로, 백신은 또한, 보조 물질 예를 들어, 완충제, 안정화제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는 죽상동맥경화증 또는 죽상동맥경화증과 관련된 질환을 앓고 있거나 걸릴 위험성이 있는 개체를, 이러한 개체에 본 발명에 따른 펩티드 또는 백신을 투여하는 과정으로 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 백신 다음에, 치료될 개체는 또한, 인간 및 포유동물중의 LDL 및/또는 HDL 수준에 영향을 끼치는 것으로 공지된 기타 활성 성분 예컨대, 스타틴, 피브레이트, 니코틴산, 콜레스테롤 흡수 억제제 (예를 들어, 에제티미브 (ezetimibe)), ApoA1 Milano, 지질제거된 (delipidated) HDL, 식물성 스테롤을 수용할 수 있다. 본 발명의 백신을 스타틴과 함께 (즉, 동시에, 연속하여 등) 개체에 투여하는 것이 특히 바람직하다. 본 발명의 백신은 또한 LDL 성분채집과 같은 방법으로 조합될 수 있다. LDL 성분채집은 혈류로부터 콜레스테롤-함유 입자 저-밀도 지질단백질 (LDL)을 제거하기 위한 성분채집의 한 형태이다. 전형적으로, LDL 성분채집은 낮은 pH에서 헤파린과 LDL을 침전시킴으로써 또는 항체로 코팅된 칼럼을 통해 정맥 혈액을 아포지질단백질 B (LDL 입자의 주요 단백질), 덱스트란 설페이트 또는 폴리아크릴레이트로 인도함으로써 수행된다. 각각의 방법은 당업자에게 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "예방"은 위험 요소 감소와 같이 질환 발병을 예방할 뿐만 아니라 질환의 진행을 저지하고 일단 발병하면 이의 예후를 감소시키는 조치를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료" 또는 이의 문법적 동의어는 질환 증상의 개선 및/또는 역행을 포함한다. 따라서, 본 발명의 스크리닝 방법에 사용되는 경우 질환과 관련된 임의의 파라미터에서 개선을 유도하는 화합물은 치료 화합물로서 식별될 수 있다. 용어 "치료"는 치료학적 치료 및 예방적 또는 방지적 조치 둘 모두를 나타낸다. 예를 들어, 본 발명의 조성물 및 방법으로의 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 대상들은 질환 및/또는 질병에 이미 걸린 대상들은 물론 질환 및/또는 질병이 예방되는 대상들 (예를 들어, 본 발명의 예방학적 치료를 이용하여)을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 상기 정의된 바와 같은 아미노산 서열 X1X2X3WX4X5X6RX7(X8)m(X9)n (SEQ ID No. 1)로 구성된 펩티드에 관한 것이다.
본 발명은 하기 구체예, 도면 및 실시예에 의해 추가로 설명되며, 그러나 이들로 제한되지는 않는다.
구체예
:
1. 하기 아미노산 서열을 갖는 9 내지 25 개 아미노산 잔기로 구성된 적어도 하나의 펩티드를 포함하는 백신으로서, 상기 적어도 하나의 펩티드가 약제학적으로 허용되는 담체에 커플링되거나 융합된 백신:
X1X2X3WX4X5X6RX7(X8)m(X9)n (SEQ ID No. 1)
상기에서,
X1은 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 세린, 트레오닌, 발린 및 알라닌으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X2는 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 이소류신, 발린, 글라이신, 글루타민 및 알라닌, 더욱 바람직하게는, 이소류신, 발린, 글루타민 및 알라닌의 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이다.
X3은 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 프롤린, 트레오닌, 알라닌 및 발린으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기, 더욱 바람직하게는, 프롤린이며,
X4는 아스파라긴, 세린, 알라닌, 글루타민 및 아스파르트산으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X5는 류신, 글라이신, 알라닌, 티로신, 아스파르트산, 페닐알라닌 및 발린으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기, 바람직하게는, 류신이며,
X6은 친수성의 음으로 하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된 아미노산 잔기, 바람직하게는, 글루탐산 및 아스파르트산으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X7은 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 이소류신, 류신, 알라닌 및 트레오닌으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X8은 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된 바람직하게는, 트레오닌, 류신, 글루타민, 알라닌 및 세린으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X9는 X10X11X12, 또는 1 또는 2 개의 아미노산 잔기로 구성된 이의 C-말단 절두된 단편이며,
X10은 임의의 아미노산 잔기, 바람직하게는, 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 프롤린, 알라닌 및 세린으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X11은 임의의 아미노산 잔기, 바람직하게는, 비하전된 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된, 바람직하게는, 프롤린, 알라닌, 발린, 트레오닌 및 아스파라긴으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
X12는 임의의 아미노산 잔기, 바람직하게는, 아르기닌, 알라닌, 라이신, 세린 및 류신으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이며,
m은 0 또는 1이며,
n은 0 또는 1이고,
SEQ ID No. 1은 SIPWNLERITPPR 또는 이의 C-말단 절두된 단편이 아니다.
2. 구체예 1에 있어서, X1이 발린, 세린 또는 알라닌, 바람직하게는, 발린인 백신.
3. 구체예 1 또는 2에 있어서, X2가 발린, 이소류신 또는 글루타민, 바람직하게는, 발린인 백신.
4. 구체예 1 내지 3중 어느 하나에 있어서, X3이 프롤린, 트레오닌, 알라닌 또는 발린인 백신.
5. 구체예 1 내지 4중 어느 하나에 있어서, X4가 세린 또는 아스파라긴, 바람직하게는, 세린인 백신.
6. 구체예 1 내지 5중 어느 하나에 있어서, X6이 글루탐산인 백신.
7. 구체예 1 내지 6중 어느 하나에 있어서, X7이 류신, 이소류신 또는 트레오닌, 바람직하게는, 트레오닌인 백신.
8. 구체예 1 내지 7중 어느 하나에 있어서, X8이 글루타민, 트레오닌 또는 류신인 백신.
9. 구체예 1 내지 8중 어느 하나에 있어서, X1X2X3이 TIP, VIP, AIP, SVP, SQP, SAP, SGP, SIT, SIA, SIV 및 VQP로 구성된 군으로부터 선택되는 백신.
10. 구체예 1 내지 9중 어느 하나에 있어서, X4X5X6이 SLE, ALE, QLE, DLE, NAE, NGE, NYE, NDE, NFE, NVE 및 NLD로 구성된 군으로부터 선택되는 백신.
11. 구체예 1 내지 10중 어느 하나에 있어서, X7(X8)m (여기서, m은 1임)이 LT, TT, AT, IL, IQ, IA, IS, TL, LQ 및 LL로 구성된 군으로부터 선택되는 백신.
12. 구체예 1 내지 11중 어느 하나에 있어서, X9가 PPR, PP, P, APR, SPR, PAR, PVR, PTR, PNR, PPA, PPK, PPS 및 PPL로 구성된 군으로부터 선택되는 백신.
13. 구체예 1 내지 12중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 펩티드가 TIPWNLERIT, TIPWNLERITPPR, VIPWNLERIT, VIPWNLERITPPR, AIPWNLERIT, AIPWNLERITPPR, SVPWNLERIT, SVPWNLERITPPR, SQPWNLERIT, SQPWNLERITPPR, SAPWNLERIT, SAPWNLERITPPR, SGPWNLERITPPR, SGPWNLERIT, SITWNLERIT, SITWNLERITPPR, SIAWNLERIT, SIAWNLERITPPR, SIVWNLERITPPR, SIVWNLERIT, SIPWSLERIT, SIPWSLERITPPR, SIPWALERIT, SIPWALERITPPR, SIPWQLERITPPR, SIPWQLERIT, SIPWDLERITPPR, SIPWDLERIT, SIPWNAERIT, SIPWNAERITPPR, SIPWNGERIT, SIPWNGERITPPR, SIPWNYERIT, SIPWNYERITPPR, SIPWNDERIT, SIPWNDERITPPR, SIPWNFERITPPR, SIPWNVERITPPR, SIPWNLDRITPPR, SIPWNFERIT, SIPWNVERIT, SIPWNLDRIT, SIPWNLERLT, SIPWNLERLTPPR, SIPWNLERTT, SIPWNLERTTPPR, SIPWNLERAT, SIPWNLERATPPR, SIPWNLERIL, SIPWNLERILPPR, SIPWNLERIQ, SIPWNLERIQPPR, SIPWNLERIA, SIPWNLERIAPPR, SIPWNLERISPPR, SIPWNLERIS, SIPWNLERITAPR, SIPWNLERITSPR, SIPWNLERITPAR, SIPWNLERITPVR, SIPWNLERITPTR, SIPWNLERITPNR, SIPWNLERITPPA, SIPWNLERITPPK, SIPWNLERITPPS, SIPWNLERITPPL, VIPWNLERLT, VIPWNLERLTPPR, VIPWNLERTT, VIPWNLERTTPPR, VIPWNLERIL, VIPWNLERILPPR, VIPWNLERIQ, VIPWNLERIQPPR, SVPWNLERLT, SVPWNLERLTPPR, SVPWNLERTT, SVPWNLERTTPPR, SVPWNLERIL, SVPWNLERILPPR, SVPWNLERIQ, SVPWNLERIQPPR, SIPWSLERTTPPR, SQPWNLERLT, SQPWNLERLTPPR, SQPWNLERIL, SQPWNLERILPPR, SQPWNLERIQ, SQPWNLERIQPPR, SIPWSLERLT, SIPWSLERLTPPR, SIPWSLERTT, SIPWSLERIL, SIPWSLERILPPR, SIPWSLERIQ, SIPWSLERIQPPR, VQPWSLERTL, VQPWSLERTLPPR, SQPWSLERTL, SQPWSLERTLPPR, VQPWNLERLQ, VQPWNLERLQPPR, VQPWSLERLL, VQPWSLERLLPPR, SVPWSLERLT 및 SVPWSLERLTPPR로 구성된 군으로부터 선택되는 백신.
14. 구체예 1 내지 13중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 펩티드가 SIPWSLERIT, SIPWSLERITPPR, SIPWSLERTTPPR, VIPWNLERILPPR, SVPWNLERIQPPR, SIPWSLERTT, SIPWSLERLT, SIPWSLERLTPPR, SIPWSLERIQ, SIPWSLERIQPPR, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ로 구성된 군으로부터 선택되는 백신.
15. 구체예 1 내지 14중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 펩티드가 이의 N- 및/또는 C-말단에서 직접적으로 또는 스페이서 서열을 통해 결합된 적어도 하나의 시스테인 잔기를 포함하는 백신.
16. 구체예 1 내지 15중 어느 하나에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 단백질 담체인 백신.
17. 구체예 16에 있어서, 단백질 담체가 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 파상풍 변성독소 (TT), 단백질 D 또는 디프테리아 독소 (DT), 바람직하게는, 변이된 디프테리아 독소, 더욱 바람직하게는, CRM197로 구성된 군으로부터 선택되는 백신.
18. 구체예 1 내지 17중 어느 하나에 있어서, 화합물이 애주번트와 제형화되는, 바람직하게는, 알하이드로겔 (Alhydrogel)에 흡착되는 백신.
19. 구체예 1 내지 18중 어느 하나에 있어서, 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증 및/또는 죽상동맥경화증에 의해 초래된 질병, 바람직하게는, 심혈관 질환, 뇌졸증 또는 말초 혈관 질환을 치료하고/거나 예방하기 위한 방법에 사용되는 따른 백신.
20. 구체예 1 내지 15중 어느 하나에 정의된 바와 같은 아미노산 서열 X1X2X3WX4X5X6RX7(X8)m(X9)n (SEQ ID No. 1)로 구성된 펩티드.
도 1. 결합 ELISA
도 1은 인간 PCSK9 aa 153-162 또는 aa 153-165에 특이적인 폴리클로날 항체를 함유하는 마우스 혈청에 의한 PCSK9 미모토프 서열의 검출을 보여준다.
A) 단일 교환 함유 미모토프
B) 다중 교환 함유 미모토프
그래프는 무관련 음성 대조군 대비 모든 미모토프로부터의 평균 역가를 나타낸다. 양성 대조군으로서, 오리지날 인간 PCSK9 서열을 포함시켰다: aa 153-162 또는 aa 153-165. 1:50.000 초과의 값을 갖는 미모토프는 우수한 후보물로서 간주된다.
도 2. 경쟁 ELISA
도 2는 PCSK9에 대해 특이적으로 유발된 마우스 혈청중 폴리클로날 항체에 결합하기 위한 오리지날 PCSK9 서열 (aa 153-162 또는 aa 153-165)과 경쟁하는 PCSK9 미노토프의 능력을 보여준다.
모든 미모토프는 음성 대조군 (무관련 펩티드에 의해 0% 경쟁)과 비교된다. 각 경쟁 ELISA에 대한 양성 대조군으로서, 오리지날 PCSK9 서열을 사용하였다 (aa 153-162 또는 aa 153-165).
A) 단일 교환 함유 미모토프
B) 다중 교환 함유 미모토프
그래프는 PCSK9에 대해 유발된 폴리클로날 항체로의 결합을 위해 오리지날 PCSK9 서열 (aa 153-162 또는 aa 153-165)과 경쟁하기 위한 미모토프의 능력 (%)을 나타낸다.
20%의 초과의 경쟁력을 갖는 미모토프가 우수한 후보물로 간주된다.
도 3. 단백질 ELISA
도 3은 지시된 서열에 의해 유도된 인간 PCSK9 단백질에 대한 평균 역가 (n=5 마우스/군)의 비교를 보여준다. 데이타는 인간 PCSK9 단백질과 교차-반응하는 항체를 유도하는 미모토프의 능력을 보여준다. 무관련 펩티드에 의해 유발된 항체는 단백질을 인식하지 않는다.
도 4. 총 콜레스테롤 (대조군 대비 %)
도 4는 무관련 펩티드로 면역화된 대조군 대비 미모토프로 면역화된 마우스의 평균 (n=5 마우스/군) 총 콜레스테롤 수준의 비교를 보여준다. 데이타는 대략 30% 이하로 마우스의 총 콜레스테롤 수준을 실질적으로 저하시키는 미모토프의 능력을 보여준다.
도 5. 백신접종시 총 콜레스테롤 (TC) 수준
도 5는 오리지날 PCSK9 서열 SIPWNLERIT 및 신규한 서열 SIPWSLERIT (직접 비교)로 백신접종시 총 콜레스테롤 (TC) 수준을 보여준다.
도 6. 면역화시 총 콜레스테롤 (TC) 수준
도 6은 신규한 서열 SIPWSLERIT, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ을 함유하는 백신으로 면역화시키는 경우 총 콜레스테롤 (TC) 수준을 보여준다.
도 1은 인간 PCSK9 aa 153-162 또는 aa 153-165에 특이적인 폴리클로날 항체를 함유하는 마우스 혈청에 의한 PCSK9 미모토프 서열의 검출을 보여준다.
A) 단일 교환 함유 미모토프
B) 다중 교환 함유 미모토프
그래프는 무관련 음성 대조군 대비 모든 미모토프로부터의 평균 역가를 나타낸다. 양성 대조군으로서, 오리지날 인간 PCSK9 서열을 포함시켰다: aa 153-162 또는 aa 153-165. 1:50.000 초과의 값을 갖는 미모토프는 우수한 후보물로서 간주된다.
도 2. 경쟁 ELISA
도 2는 PCSK9에 대해 특이적으로 유발된 마우스 혈청중 폴리클로날 항체에 결합하기 위한 오리지날 PCSK9 서열 (aa 153-162 또는 aa 153-165)과 경쟁하는 PCSK9 미노토프의 능력을 보여준다.
모든 미모토프는 음성 대조군 (무관련 펩티드에 의해 0% 경쟁)과 비교된다. 각 경쟁 ELISA에 대한 양성 대조군으로서, 오리지날 PCSK9 서열을 사용하였다 (aa 153-162 또는 aa 153-165).
A) 단일 교환 함유 미모토프
B) 다중 교환 함유 미모토프
그래프는 PCSK9에 대해 유발된 폴리클로날 항체로의 결합을 위해 오리지날 PCSK9 서열 (aa 153-162 또는 aa 153-165)과 경쟁하기 위한 미모토프의 능력 (%)을 나타낸다.
20%의 초과의 경쟁력을 갖는 미모토프가 우수한 후보물로 간주된다.
도 3. 단백질 ELISA
도 3은 지시된 서열에 의해 유도된 인간 PCSK9 단백질에 대한 평균 역가 (n=5 마우스/군)의 비교를 보여준다. 데이타는 인간 PCSK9 단백질과 교차-반응하는 항체를 유도하는 미모토프의 능력을 보여준다. 무관련 펩티드에 의해 유발된 항체는 단백질을 인식하지 않는다.
도 4. 총 콜레스테롤 (대조군 대비 %)
도 4는 무관련 펩티드로 면역화된 대조군 대비 미모토프로 면역화된 마우스의 평균 (n=5 마우스/군) 총 콜레스테롤 수준의 비교를 보여준다. 데이타는 대략 30% 이하로 마우스의 총 콜레스테롤 수준을 실질적으로 저하시키는 미모토프의 능력을 보여준다.
도 5. 백신접종시 총 콜레스테롤 (TC) 수준
도 5는 오리지날 PCSK9 서열 SIPWNLERIT 및 신규한 서열 SIPWSLERIT (직접 비교)로 백신접종시 총 콜레스테롤 (TC) 수준을 보여준다.
도 6. 면역화시 총 콜레스테롤 (TC) 수준
도 6은 신규한 서열 SIPWSLERIT, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ을 함유하는 백신으로 면역화시키는 경우 총 콜레스테롤 (TC) 수준을 보여준다.
실시예
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재료 및 방법
백신:
펩티드를 이종이작용성 링커 GMBS (4-말레이미도부티르산 N-하이드록시석신이미드 에스테르)를 통해 KLH (키홀 림펫 헤모시아닌)에 컨쥬게이션하였다.
동물 실험:
5 Balb/c 마우스를 피하 접종하였다. 마우스가 무제한으로 음식과 물에 접근할 수 있게 하였으며, 12h 명/암 사이클 하에 두었다. 실험 시작시 마우스는 8주령 내지 10주령이었다.
마우스에 총 1ml의 부피중의, KLH에 결합되고 애주번트로서의 알하이드로겔 (Alhydrogel)에 흡착된 15 ㎍의 순수 펩티드를 2주 간격으로 4회 주입하였다.
최종 주입하고 약 2주 후에 혈액을 채취하였다.
경쟁 ELISA:
20 μg의 각 지시된 펩티드를 오리지날 PCSK9 서열 (aa 153-162 또는 aa 153-165: SEQ ID No. 2)가 주입된 마우스로부터의 혈청과 인큐베이션시켰다. 이어서, 혈청을 오리지날 PCSK9 서열 (aa 153-162 또는 aa 153-165: SEQ ID No. 2)로 코팅된 ELISA 플레이트상에서 인큐베이션하였다. 항-마우스 IgG 항체를 사용하여 검출을 수행하고, ABTS를 유색 기질로서 사용하고, 광밀도 (OD)를 405 nm에서 측정하였다.
ELISA 플레이트상에 코팅된 오리지날 인간 PCSK9 에피토프 (aa 153-162 또는 153-165: SEQ ID No.3)로의 혈청으로부터의 폴리클로날 항체의 후속 결합을 >20%로 감소시키는 미모토프가 경쟁 미모토프 및 우수한 후보물로서 간주되었다.
결합 ELISA:
미모토프를 1 μmol/mL 농도로 ELISA 플레이트상에 코팅시켰다. 비특이적 결합을 차단한 후 (PBS중 1% BSA), 오리지날 인간 PCSK9 서열 aa 153-162 또는 aa 153-165 (SEQ ID No.3)이 주입된 마우스로부터의 적절한 혈청 희석물을 첨가하고, 대략 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 항-마우스 IgG 항체로의 검출을 수행하였다. ABTS를 기질로서 사용하였다. OD 측정을 405 nm에서 수행하고, 역가를 ODmax의 50%에 도달되는 혈청 희석물로서 규정하였다.
단백질 ELISA:
백신의 면역원성을 측정하기 위해, ELISA 플레이트를 재조합으로 발현된 인간 PCSK9 단백질로 코팅하였다. 차단 완충제 (PBS중의 1% BSA)와 인큐베이션함으로써 비특이적 결합을 차단하였다. 적절한 혈청 희석물을 웰에 첨가하고, 1:2배 연속 희석하고, 약 1시간 동안 인큐베이션하였다. 결합된 항체를 항-마우스 IgG와 인큐베이션함으로써 검출하고, 기질로서 ABTS를 첨가하고, 405nm에서 OD를 측정하였다. 음성 대조군으로서, 무관련 펩티드가 주입된 대조군으로부터의 혈청을 분석하였다. 역가를, 검정시 ODmax의 50%에 도달하는 경우의 혈청 희석물로서 규정하였다.
총 콜레스테롤 검정
총 콜레스테롤을 LabAssayTM 콜레스테롤 키트 (Wako)로 측정하였다.
결과
실시예 1: 서열 목록 및 오리지날 인간 PCSK9 서열에 대한 평균 항체 역가 (도 1a 및 1b 참조) 및 음성 대조군 대비 미모토프의 경쟁력 (%) (도 2a 및 도 2b 참조). KLH로의 펩티드의 커플링을 촉진하기 위해, 펩티드는 C-말단에서 링커로서 시스테인 잔기를 포함할 수 있다.
실시예 2: 본 발명에 따른 펩티드의 예상치 못한 효과
추가의 실험에서, 본 발명에 따른 펩티드 백신으로 면역화시킬 경우 유발된 항체의 작용성을 연구하였다. 본 실험에서, 신규한 서열 (SEQ ID No.21 SIPWSLERIT, SEQ ID No. 55 VIPWNLERIL 및 SEQ ID No. 60 SVPWNLERIQ)을 함유하는 백신으로 면역화시킬 경우 유발된 항체의 매우 현저한 작용성은 오리지날 PCSK9 서열 (SIPWNLERIT) 및 음성 대조군 서열을 함유하는 백신으로 백신접종시 유발된 항체와 비교하여 입증하였다 - 모두 동일한 담체 KLH에 커플링됨 (도 5 및 도 6).
이러한 목적을 위해, KLH에 커플링되고, 애주번트 (Alum)와 백신 (서열-KLH/Alum)으로서 제형화된, HPLC 정제 펩티드로 마우스를 면역화시켰다. 첫 번째 실험에서, 오리지날 PCSK9 서열과 신규한 서열 SIPWSLERIT 간의 직접 비교를 수행하였다. 여기서, 마우스를 음성 대조군으로서 무관련 펩티드 백신 (무관련 펩티드-KLH/Alum), 오리지날 PCSK9 서열 백신 (SIPWNLERIT- KLH/Alum) 및 신규한 서열 백신 (SIPWSLERIT-KLH/Alum)으로 면역화시켰다. 후자 군 (SIPWSLERIT-KLH/Alum)을, 유도된 항체의 이의 작용성과 오리지날 PCSK9 서열 백신 (SIPWNLERIT-KLH/Alum)을 사용하여 발생한 항체의 작용성을 비교하는데 사용할 뿐만 아니라, 또한, 다양한 실험간의 연결 군 (bridging group)으로서 사용하였다. 입증된 바와 같이, 두 백신 모두 - 오리지날 PCSK9 서열 백신 (SIPWNLERIT- KLH/Alum) 및 신규한 서열 백신 (SIPWSLERIT-KLH/Alum)은 음성 대조군 대비 총 콜레스테롤 수준을 현저하게 감소시킬 수 있다 (도 5a 및 5b). 그러나, 흥미롭게도, 음성 대조군과 비교할 경우 뿐만 아니라 오리지날 PCSK9 서열 SIPWNLERIT을 함유하는 백신이 주입된 군과 비교하여, 신규한 서열 백신 (SIPWSLERIT-KLH/Alum)으로 백신접종시, 마우스는 전체 콜레스테롤의 현저한 감소를 나타냈다 (도 5a 및 도 5b).
후속하여, 두 번째 실험을 수행하였으며, 여기에서 마우스는 음성 대조군으로서 무관련 펩티드 및 모두 3개의 신규한 서열 SIPWSLERIT, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ (모두 KLH에 커플링되고 백신으로서 제형화됨)로 면역화시켰다. 이미 상기에서 언급된 바와 같이, 신규한 서열 (SIPWSLERIT-KLH/Alum)로 면역화시킨 마우스를 실험 간의 연결 군으로서 사용하였다. 실제로, 신규한 서열 (SIPWSLERIT-KLH/Alum)이 주입된 연결 군은 두 실험 모두에서 유사한 방식으로 작용하며 (도 5a, 5b, 6a 및 6b), 가장 중요하게는, 서열 SIPWSLERIT, VIPWNLERIL 또는 SVPWNLERIQ중 하나를 함유하는 백신으로 면역화시킨 모든 3개의 군은 총 혈장 콜레스테롤 수준 감소에 있어서 매우 유사한 방식으로 작용하였다 (도 6a 및 도 6b).
이와 같이, 본 데이타에 의해 본 발명에 따른 백신 특히, 서열 SEQ ID No.21 SIPWSLERIT, SEQ ID No. 55 VIPWNLERIL 및 SEQ ID No. 60 SVPWNLERIQ를 함유하는 펩티드 백신의 작용성 항체를 유도하는 현저한 효율이 확인되었으며, 이러한 항체는 무관련 음성 대조군 대비 혈장 TC 수준을 매우 감소시킬 뿐만 아니라, 오리지날 PCSK9 서열 (SIPWNLERIT-KLH/Alum)을 함유하는 백신 대비 총 콜레스테롤 수준을 현저하게 감소시킬 수 있다.
도 5a는 오리지날 PCSK9 서열 SIPWNLERIT을 함유하는 백신으로의 면역화와 비교하고, 무관련 (음성) 대조군 (SEQ ID No. 2 ERTKSDPGAQHREF)과 비교한, 신규한 서열 SIPWSLERIT을 함유하는 백신으로 면역화시킬 경우의 혈장 평균 값 (mg/dl)을 보여준다. 한편으로는 오리지날 PCSK9 서열 SIPWNLERIT을 함유하는 백신 및 다른 한편으로는 음성 대조군과 비교하여, 신규한 서열 SIPWSLERIT을 함유하는 백신으로 면역화시킨 군에서 TC 수준의 매우 현저한 감소는 이러한 도면으로부터 입증되었다. 도 5b는 무관련 (음성) 대조군 대비 군의 TC 감소율 %을 제시한다. 무관련 음성 대조군과 비교하여, 오리지날 PCSK9 서열 (SIPWNLERIT-KLH/Alum)로 백신접종시 TC의 ~20% 감소가 이루어졌으며, 신규한 서열 (SIPWSLERIT-KLH/Alum)로 백신접종시 TC 수준이 35-40% 까지 매우 강하게 감소되었음을 특히 주목해야 한다.
도 6a는 무관련 (음성) 대조군 (SEQ ID No. 2 ERTKSDPGAQHREF)과 비교하여, 신규한 서열 SIPWSLERIT, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ을 함유하는 백신으로 면역화시킨 경우의 혈장 평균 값 (mg/dl)을 보여준다. 음성 대조군 대비 신규한 서열로 면역화시킨 모든 3개의 군에서 TC 수준이 매우 현저하게 감소되었음이 본 도면으로부터 입증된다. 도 6b는 무관련 (음성) 대조군 대비, SIPWSLERIT, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ가 주입된 군의 TC 감소율 %을 제시한다. 모든 3 개의 신규한 서열 SIPWSLERIT, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ로 백신접종한 경우 TC는 40% 까지 매우 강하게 감소됨이 특히 주목되어야 한다. 실제로, 신규한 서열 SIPWSLERIT을 함유하는 백신으로 면역화시킨 군 (실헌간의 연결 군)은 두 실험 모두에서 유사한 방식으로 작용하였으며 (도 5a 및 5b 참조), 이는 오리지날 PCSK9 서열 SIPWNLERIT을 함유하는 백신과 비교하여, 신규한 서열 SIPWSLERIT, VIPWNLERIL 및 SVPWNLERIQ을 함유하는 백신으로 면역화시킨 경우 발생한 항체의 현저하게 더 높은 작용성을 확인시켜준다.
이러한 데이타로부터, 본 발명에 따른 백신 특히, 서열 SEQ ID No.21 SIPWSLERIT, SEQ ID No. 55 VIPWNLERIL 및 SEQ ID No. 60 SVPWNLERIQ을 포함하는 펩티드 백신이 종래 기술에 존재하는 백신과 비교하여 놀랍고도 예상치 못한 유리한 효과를 나타냄이 입증되었다.
SEQUENCE LISTING
<110> Affiris AG
<120> Vaccine
<130> R 64465
<150> EP 12182241.5
<151> 29.08.2012
<160> 118
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa is an amino acid residue selected from the group of uncharged
amino acid residues, preferably selected from the group
consisting of serine, threonine, valine and alanine
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa is an amino acid residue selected from the group of uncharged
amino acid residues, preferably selected from the group of
isoleucine, valine, glycine, glutamine and alanine, more
preferably isoleucine, valine, glutamine and alanine
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa is an amino acid residue selected from the group of uncharged
amino acid residues, preferably selected from the group
consisting of proline, threonine, alanine and valine, more
preferably proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa is an amino acid residue selected from the group consisting
of asparagine, serine, alanine, glutamine and aspartic acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa is an amino acid residue selected from the group consisting
of leucine, glycine, alanine, tyrosine, aspartic acid,
phe-nylalanine and valine, preferably leucine
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa is an amino acid residue selected from the group of
hy-drophilic, negatively charged amino acid residue, preferably
an amino acid residue selected from the group consisting of
glutamic acid and aspartic acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> Xaa is an amino acid residue selected from the group of uncharged
amino acid residues, preferably selected from the group
consisting of isoleucine, leucine, alanine and threonine
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa is an amino acid residue selected from the group of uncharged
amino acid residues, preferably selected from the group
consisting of threonine, leucine, glutamine, alanine and serine
or nil
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa is X10X11X12 as defined in the patent application as filed or
a C-terminal truncated fragment thereof consisting of 1 or 2
amino acid residues or nil
<400> 1
Xaa Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 2
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PCSK9 fragment
<400> 2
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1 5 10
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 3
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1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence
<400> 4
Ile Thr Glu Leu Ser Arg Trp Pro Asn Ile
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 5
Thr Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 6
Val Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 7
Ala Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 8
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1 5 10
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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1 5 10
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
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<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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Ser Ala Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 11
<211> 13
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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1 5 10
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 12
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1 5 10
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 13
Ser Ile Ala Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 14
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 14
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1 5 10
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 15
Ser Ile Pro Phe Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 16
Ser Ile Pro Ala Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 17
Ser Ile Pro Gly Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 18
Ser Ile Pro His Asn Leu Glu Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 19
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<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 20
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1 5 10
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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1 5 10
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 23
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<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 24
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 25
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1 5 10
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 29
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<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 30
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 31
Ser Ile Pro Trp Asn Leu Ala Arg Ile Thr
1 5 10
<210> 32
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 32
Ser Ile Pro Trp Asn Leu Asp Arg Ile Thr Pro Pro Arg
1 5 10
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 33
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1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 34
Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Ala Ile Thr
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 35
Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Asp Ile Thr
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 42
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 43
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 49
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr Pro Pro Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 52
Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Ile Thr Pro Pro Leu
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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Val Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg Thr Thr
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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Ser Ile Pro Trp Ser Leu Glu Arg Leu Thr Pro Pro Arg
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<211> 13
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Ser Ile Pro Trp Ser Leu Glu Arg Ile Leu Pro Pro Arg
1 5 10
<210> 113
<211> 13
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<213> Artificial Sequence
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<223> Artificial Sequence, Mimotope
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Ser Ile Pro Trp Ser Leu Glu Arg Ile Gln Pro Pro Arg
1 5 10
<210> 114
<211> 13
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Val Gln Pro Trp Ser Leu Glu Arg Thr Leu Pro Pro Arg
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<211> 13
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Ser Gln Pro Trp Ser Leu Glu Arg Thr Leu Pro Pro Arg
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<211> 13
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Val Gln Pro Trp Asn Leu Glu Arg Leu Gln Pro Pro Arg
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Val Gln Pro Trp Ser Leu Glu Arg Leu Leu Pro Pro Arg
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<210> 118
<211> 13
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<220>
<223> Artificial Sequence, Mimotope
<400> 118
Ser Val Pro Trp Ser Leu Glu Arg Leu Thr Pro Pro Arg
1 5 10
Claims (23)
- 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 심혈관 질환, 뇌졸증 또는 말초 혈관 질환에 의해 야기되는 장애를 치료하거나 예방하기 위한, SIPWSLERIT (SEQ ID No. 21), VIPWNLERIL (SEQ ID No. 55) 및 SVPWNLERIQ (SEQ ID No. 60)로부터 선택되는 적어도 하나의 펩티드를 포함하는 조성물로서, 상기 적어도 하나의 펩티드가 약제학적으로 허용되는 담체에 커플링되거나 융합된 조성물.
- 제 1항에 있어서, 적어도 하나의 펩티드가 이의 N- 말단, C-말단, 또는 N- 말단 및 C-말단에서 직접적으로 또는 스페이서 서열 (spacer sequence)을 통해 결합된 적어도 하나의 시스테인 잔기를 포함하는 조성물.
- 제 1항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 단백질 담체인 조성물.
- 제 3항에 있어서, 단백질 담체가 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 파상풍 변성독소 (TT), 단백질 D 또는 디프테리아 독소 (DT)로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
- 제 4항에 있어서, 단백질 담체가 변이된 디프테리아 독소인 조성물.
- 제 4항에 있어서, 단백질 담체가 CRM197인 조성물.
- 제 1항에 있어서, 조성물이 애주번트와 제형화되는 것인, 조성물.
- 제 7항에 있어서, 조성물이 알하이드로겔 (Alhydrogel)에 흡착되는 것인, 조성물.
- SIPWSLERIT (SEQ ID No. 21), VIPWNLERIL (SEQ ID No. 55) 및 SVPWNLERIQ (SEQ ID No. 60)의 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된 펩티드.
- 제 9항의 펩티드를 포함하는 화합물로서, 여기서 상기 펩티드가 약제학적으로 허용되는 담체에 커플링되거나 융합된 화합물.
- 고지질혈증, 고콜레스테롤혈증, 죽상동맥경화증, 심혈관 질환, 뇌졸증 또는 말초 혈관 질환에 의해 야기되는 장애를 치료하거나 예방하는 방법에 사용되는 백신으로서, 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항의 조성물, 제 9항의 펩티드, 또는 제 10항의 화합물로 구성된 백신.
- 제 11항에 있어서, 펩티드는 접종당 0.1 ng 내지 10 mg의 양으로 포유동물에 투여되는 것인, 백신.
- 제 12항에 있어서, 펩티드는 접종당 0.5 내지 500 ㎍의 양으로 포유동물에 투여되는 것인, 백신.
- 제 12항에 있어서, 펩티드는 접종당 1 내지 100 ㎍의 양으로 포유동물에 투여되는 것인, 백신.
- 제 11항에 있어서, 백신은 2회 내지 10회 적용되는 것인, 백신.
- 제 15항에 있어서, 백신은 2회 내지 7회 적용되는 것인, 백신.
- 제 15항에 있어서, 백신은 2회 내지 5회 적용되는 것인, 백신.
- 제 15항에 있어서, 백신은 2회 내지 4회 적용되는 것인, 백신.
- 제 11항에 있어서, 백신은 0.5 내지 500 ㎍의 양으로 펩티드를 함유하는 것인, 백신.
- 제 19항에 있어서, 백신은 1 내지 100 ㎍의 양으로 펩티드를 함유하는 것인, 백신.
- 제 19항에 있어서, 백신은 100 fmol 내지 10 μmol의 양으로 펩티드를 함유하는 것인, 백신.
- 제 19항에 있어서, 백신은 10 pmol 내지 1 μmol의 양으로 펩티드를 함유하는 것인, 백신.
- 제 19항에 있어서, 백신은 100 pmol 내지 100 nmol의 양으로 펩티드를 함유하는 것인, 백신.
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| US4877611A (en) | 1986-04-15 | 1989-10-31 | Ribi Immunochem Research Inc. | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants |
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| SE466259B (sv) | 1990-05-31 | 1992-01-20 | Arne Forsgren | Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal |
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| DE69327599T2 (de) | 1992-06-25 | 2000-08-10 | Smithkline Beecham Biolog | Adjuvantien enthaltende Impfstoffzusammensetzung |
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| AUPM873294A0 (en) | 1994-10-12 | 1994-11-03 | Csl Limited | Saponin preparations and use thereof in iscoms |
| UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
| RU2147307C1 (ru) | 1995-06-07 | 2000-04-10 | Стихтинг Инститют Вор Дирхаудерей эн Диргезондхейд | Улучшенный пептид, иммуногенная композиция и вакцина с его использованием, способ иммунизации животных против гормона лгвг |
| US5856462A (en) | 1996-09-10 | 1999-01-05 | Hybridon Incorporated | Oligonucleotides having modified CpG dinucleosides |
| EP0930893B1 (en) | 1996-10-11 | 2005-04-13 | The Regents of The University of California | Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates |
| PL190237B1 (pl) | 1997-04-01 | 2005-11-30 | Corixa Corp | Kompozycja adiuwantowa, szczepionka, sposób wytwarzania kompozycji adiuwantowej oraz zastosowanie |
| GB9727262D0 (en) | 1997-12-24 | 1998-02-25 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| AUPR593101A0 (en) | 2001-06-26 | 2001-07-19 | Council Of The Queensland Institute Of Medical Research, The | Cytomegalovirus t cell epitopes |
| WO2004026897A1 (ja) | 2002-09-20 | 2004-04-01 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Ｗｔ１置換型ペプチド |
| GB0411411D0 (en) | 2004-05-21 | 2004-06-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccines |
| JP2010523135A (ja) * | 2007-04-13 | 2010-07-15 | ノバルティス アーゲー | プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ｐｃｓｋ９）を調整する分子および方法 |
| CN101932594A (zh) * | 2008-02-01 | 2010-12-29 | 阿尔法-O肽股份公司 | 可用作疫苗的自装配肽纳米颗粒 |
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