KR100956267B1 - Semi-flowable Implants Containing Elastin as Stabilizer - Google Patents
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Abstract
본 발명은 생리학적으로-적합한 완충액 중에, (a) 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 및 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 이식-세포, 및 (b) 엘라스틴과 히알루론산과의 혼합물; 엘라스틴과 콜라겐과의 혼합물; 및 엘라스틴, 히알루론산, 및 콜라겐과의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 반유동성 생체-유래 물질을 포함하는 반유동성 이식용 조성물을 제공한다.The present invention provides a physiologically-suitable buffer comprising: (a) adipose stem cells; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; And graft-cells selected from the group consisting of adipocytes, adipocytes, and admixtures with adipose tissue, and (b) a mixture of elastin and hyaluronic acid; Mixtures of elastin and collagen; And a semi-fluid bio-derived material selected from the group consisting of elastin, hyaluronic acid, and collagen.
지방줄기세포, 지방세포, 지방조직, 반유동성 생체-유래 물질, 엘라스틴 Adipose stem cells, fat cells, adipose tissue, semi-flowing bio-derived substances, elastin
Description
본 발명은 지방줄기세포(adipose stem cells); 지방세포(adipocytes); 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직(adipose tissue)과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물을 포함하는 안정한 이식용 조성물에 관한 것이다.The present invention provides adipose stem cells (adipose stem cells); Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; A mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Or to a stable implantable composition comprising admixture with adipocytes, adipocytes, and adipose tissue.
얼굴 성형, 유방 성형 및 체형보정, 상처로 인한 흔적의 제거, 남성 생식기 성형 등을 위하여, 환자 자신의 피하지방, 예를 들어 복부, 다리 등의 피하지방을 사용한 이식이 성형외과 등에서 통상적으로 행해지고 있다. 일반적으로 튜립 니들(tulip needle) 형태의 끝이 날카롭지 않은 바늘을 갖는 주사기를 사용하여 흡인하여 채취한 피하지방을 원심분리하여 혈액과 지방조직으로 분리한 후, 이를 바로 주사기로 옮겨 원하는 부위에 주입하여 피하지방 이식을 수행한다.Implantation using subcutaneous fat of the patient's own subcutaneous fat, such as the abdomen and legs, is commonly performed in plastic surgery for facial shaping, breast augmentation and body correction, removal of traces due to wounds, and male genitalia. . In general, a subcutaneous fat collected by aspiration using a syringe having a needle having a non-sharp tip in the shape of a tulip needle is centrifuged and separated into blood and adipose tissue. Perform subcutaneous fat transplantation.
한편, 종래와 같이 피하지방을 채취하여 이식을 수행하는 경우, 피하지방의 채취과정에서 약 50% 이상의 지방세포가 손상될 뿐 아니라, 다양한 크기의 세포 덩어리가 잔존함으로써 이식 부위에 원하는 함량을 정밀하게 이식하는 것이 곤란하 고, 피부가 얇고 피하지방이 적은 이식 부위(예를 들어, 눈아래부위 등)에서는 덩어리들이 만져지는 등의 문제가 발생한다. 또한, 피하지방의 덩어리만을 이식한 경우에는 지방조직 덩어리의 내부에 존재하는 지방세포들이 주변의 환경으로부터 필요한 양분을 받거나 또는 노폐물을 배출하는데 어려움을 겪게 되어 쉽게 괴사하는 문제가 발생한다.On the other hand, when performing subcutaneous fat extraction and transplantation as in the prior art, not only about 50% of the fat cells are damaged during the subcutaneous fat extraction process, but also the desired content at the implantation site precisely due to the remaining cell masses of various sizes. It is difficult to transplant and problems such as lumps are touched at the implantation site (for example, under the eyes) where the skin is thin and the subcutaneous fat is low. In addition, when only the lump of subcutaneous fat is implanted, the fat cells existing in the adipose tissue mass may have difficulty in obtaining necessary nutrients from the surrounding environment or exhausting waste products, causing necrosis easily.
따라서, 지방조직 덩어리를 지방세포 및/또는 지방줄기세포로 분리하여 이식할 경우, 피하지방을 그대로 환자에 이식하는데 따른 문제를 해결할 수 있을 것이다. 더욱이, 지방유래 줄기세포 즉 지방줄기세포(adipose stem cell)는 지방세포로의 분화가 가능하며, 크기가 10 ㎛ 미만의 작은 세포이나 성숙한 지방세포는 100 ㎛ 이상의 크기가 되므로 부피가 이론상 1000배 정도가 커질 수 있으므로 바람직하게 사용될 수 있을 것이다. Therefore, when the adipose tissue mass is separated and transplanted into adipose cells and / or adipose stem cells, the problem of transplanting subcutaneous fat into a patient may be solved. Furthermore, adipose derived stem cells, or adipose stem cells, are capable of differentiating into adipocytes, and smaller cells less than 10 μm in size or mature adipocytes are larger than 100 μm in size, resulting in a volume of about 1000 times theoretically. It may be large and may be preferably used.
그러나 지방세포 및/또는 지방줄기세포를 수액 등의 생리식염수에 분산시켜 이식용 주입액을 제조하는 경우, 상기 세포들이 쉽게 침전됨으로써 환자에게 주입하기가 곤란할 뿐 아니라, 여러 군데의 이식 부위에 주입하는 경우 원하는 부위에 균일한 수의 지방줄기세포를 주입하기가 극히 곤란하다. 더욱이, 이식된 부위에서 지방줄기세포가 지방세포로 분화하게 되면, 이식 부위에 따라 심각한 불균형이 초래되게 된다.However, in the case of preparing an implantable injection solution by dispersing adipocytes and / or adipocytes in saline such as sap, the cells are easily precipitated, which makes it difficult to inject them into a patient, as well as injecting them into multiple transplant sites. It is extremely difficult to inject a uniform number of adipose stem cells into a desired area. Moreover, if the adipose stem cells differentiate into adipocytes at the transplanted site, serious imbalances will occur depending on the transplant site.
또한 엉덩이, 가슴 등 비교적 다량의 지방이 사용되어야 하는 경우에는 필요에 따라 추출된 지방조직의 일부를 사용하여 줄기세포를 추출한 후 나머지 추출된 지방조직과 섞어 줄기세포의 농도를 높이는 방법을 사용할 수도 있으나, 이 경우에 도 역시 섞어준 줄기세포와 기존의 지방조직들이 균등히 분포되지 않는 문제가 있다.In addition, if a relatively large amount of fat such as hips and chest should be used, if necessary, stem cells may be extracted using a part of the extracted adipose tissue and then mixed with the remaining adipose tissue to increase the concentration of stem cells. In this case, there is a problem that the mixed stem cells and the existing adipose tissue are not evenly distributed.
본 발명자들은 지방줄기세포와 지방세포를 동시에 함유하는 이식용 조성물로서, 히알루론산을 안정화제로서 사용한 반유동성 이식용 조성물을 개발하여 특허출원을 완료한 바 있다 (대한민국 특허출원 제10-2007-0043363호, 미공개). The present inventors have completed the patent application by developing a semi-flowable transplant composition using a hyaluronic acid as a stabilizing composition containing both fat stem cells and fat cells at the same time (Korean Patent Application No. 10-2007-0043363 Issue, undisclosed).
본 발명자들은 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물이 안정하게 분산된 이식용 조성물을 개발하고자 연구를 거듭한 결과, 엘라스틴을 히알루론산 또는 콜라겐과 함께 혼합하여 얻어진 안정화제를 사용할 경우, 상기 세포 또는 세포 혼합물이 완충액 등의 매질 중에 안정하게 분산될 뿐만 아니라, 얻어지는 이식용 조성물이 천연의 피부 조성과 거의 유사하게 됨으로써, 생체 적합성을 높일 수 있음을 발견하였다.The present inventors are adipose stem cells; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Alternatively, as a result of researches to develop a composition for transplantation in which a mixture of adipose stem cells, adipocytes, and adipose tissue is stably dispersed, when using a stabilizer obtained by mixing elastin with hyaluronic acid or collagen, the cells Or it was found that the cell mixture is not only stably dispersed in a medium such as a buffer solution, but also the biocompatibility can be enhanced by making the resulting transplant composition almost similar to the natural skin composition.
따라서, 본 발명은 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물을 포함하는 안정하고 생체 적합성이 높은 이식용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Thus, the present invention is a fat stem cell; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Another object is to provide a stable, highly compatible implantable composition comprising adipocytes, adipocytes, and admixtures with adipocytes.
본 발명의 일 태양에 따라, 생리학적으로-적합한(physiologically- compatible) 완충액 중에, (a) 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 이식-세포(transplant-cell), 및 (b) 엘라스틴과 히알루론산과의 혼합물; 엘라스틴과 콜라겐과의 혼합물; 및 엘라스틴, 히알루론산, 및 콜라겐과의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 반유동성 생체-유래 물질을 포함하는 반유동성 이식용 조성물이 제공된다.According to one aspect of the invention, in a physiologically-compatible buffer, (a) adipose stem cells; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Or a transplant-cell selected from the group consisting of adipocytes, adipocytes, and adipocytes, and (b) a mixture of elastin and hyaluronic acid; Mixtures of elastin and collagen; And a semi-fluid bio-derived material selected from the group consisting of elastin, hyaluronic acid, and collagen.
상기 이식-세포가 지방줄기세포일 때, 상기 반유동성 생체-유래 물질의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ∼ 40 중량%일 수 있다. 또한, 상기 이식-세포가 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물일 때, 상기 반유동성 생체-유래 물질의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.0005 ∼ 5 중량%일 수 있다.When the transplant-cells are adipose stem cells, the amount of the semi-fluid bio-derived material may be 0.1 to 40% by weight based on the total weight of the composition. In addition, the transplant-cells are adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; When the mixture of adipose stem cells and adipose tissue or a mixture of adipose stem cells, adipose cells, and adipose tissue, the content of the semi-flowable bio-derived substance may be 0.0005 to 5% by weight relative to the total weight of the composition.
상기 반유동성 생체-유래 물질은 분자량 1 ∼ 100 kDa의 엘라스틴 및 중량평균분자량 200,000 ∼ 400,000의 히알루론산과의 혼합물일 수 있으며, 상기 엘라스틴과 히알루론산의 중량비는 1 : 0.1∼10 의 범위일 수 있다.The semi-flowing bio-derived material may be a mixture of elastin having a molecular weight of 1 to 100 kDa and hyaluronic acid having a weight average molecular weight of 200,000 to 400,000, and the weight ratio of elastin and hyaluronic acid may range from 1: 0.1 to 10. .
또한, 상기 반유동성 생체-유래 물질은 분자량 1 ∼ 100 kDa의 엘라스틴 및 분자량 80 ∼ 3000 kDa의 콜라겐, 바람직하게는 아테로콜라겐(aterocollagen)과의 혼합물일 수 있으며, 상기 엘라스틴과 콜라겐(또는 아테로콜라겐)의 중량비는 1 : 0.1∼10 의 범위일 수 있다.In addition, the semi-flowing bio-derived material may be a mixture of elastin having a molecular weight of 1 to 100 kDa and a collagen having a molecular weight of 80 to 3000 kDa, preferably atrocollagen, and the elastin and collagen (or atherosclerosis) Collagen) may be in the range of 1: 0.1 to 10.
또한, 상기 반유동성 생체-유래 물질은 분자량 1 ∼ 100 kDa의 엘라스틴, 중량평균분자량 200,000 ∼ 400,000의 히알루론산 및 분자량 80 ∼ 3000 kDa의 콜라 겐, 바람직하게는 아테로콜라겐과의 혼합물일 수 있으며, 상기 엘라스틴, 히알루론산, 및 콜라겐(또는 아테로콜라겐)의 중량비는 1 : 0.1∼10 : 0.1∼10 의 범위일 수 있다.In addition, the semi-flowable bio-derived material may be a mixture of elastin having a molecular weight of 1 to 100 kDa, hyaluronic acid having a weight average molecular weight of 200,000 to 400,000, and a collagen having a molecular weight of 80 to 3000 kDa, preferably atherocollagen. The weight ratio of the elastin, hyaluronic acid, and collagen (or atherocollagen) may be in the range of 1: 0.1 to 10: 0.1 to 10.
본 발명의 조성물은 생리학적으로-적합한 생리식염수 중에 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물이 안정하게 분산됨으로써, 상기 세포 또는 세포 혼합물이 조성물 중에 부유되거나 침강되지 않는다. 따라서, 본 발명의 이식용 조성물은 이식-세포의 함량을 미세하게 조절할 수 있으며, 다양한 이식부위에 원하는 양만큼 정확하게 주입할 수 있으므로, 부작용의 발생을 획기적으로 줄일 수 있다. 또한, 얻어지는 이식용 조성물이 천연의 피부 조성과 거의 유사하게 됨으로써, 생체 적합성을 더욱 높일 수 있다.Compositions of the present invention comprise adipose stem cells in physiologically-compatible saline; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Or stably disperse the admixture with adipocytes, adipocytes, and adipose tissue so that the cell or cell mixture does not float or settle in the composition. Therefore, the graft composition of the present invention can finely control the content of the graft-cells, and can accurately inject the desired amount into various graft sites, thereby significantly reducing the occurrence of side effects. In addition, the resulting implantable composition can be made almost similar to the natural skin composition, thereby further enhancing biocompatibility.
본 발명의 조성물에 있어서, 지방세포, 지방줄기세포 및 지방조직은 공지의 방법에 의해 얻을 수 있다. 예를 들어, 국제특허공개 제WO2000/53795호 및 제WO2005/042730호에 개시된 바와 같이, 지방조직(adipose tissue)으로부터 지방흡인(liposuction) 및 침강, 콜라게나제(collagenase) 등의 효소처리, 원심분리에 의한 적혈구 등의 부유 세포 제거 등의 과정을 통하여 지방세포 및 지방줄기세포를 분리할 수 있다.In the composition of the present invention, adipocytes, adipose stem cells and adipose tissue can be obtained by a known method. For example, as disclosed in WO2000 / 53795 and WO2005 / 042730, liposuction and sedimentation from adipose tissue, enzyme treatment such as collagenase, and centrifugation Adipose cells and adipose stem cells can be separated through a process of removing floating cells such as red blood cells by separation.
본 발명의 생리학적으로-적합한 완충액은 의료용, 혈관주사용을 포함한 이식 용 주입액에 통상적으로 사용되는 완충액을 포함하며, 예를 들면, 체액의 삼투압과 동일한 삼투압을 가지는 생리식염수를 포함한다.Physiologically-suitable buffers of the present invention include buffers commonly used in medical, implantable infusions, including vascular injections, and include, for example, physiological saline having an osmotic pressure equal to that of body fluids.
본 발명의 조성물에 함유되는 이식-세포는 지방줄기세포(adipose stem cells) 또는 지방세포(adipocytes) 단독이거나, 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직(adipose tissue)과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물일 수 있다. 특히, 지방줄기세포와 지방세포를 동시에 포함할 경우, 이식과 동시에 지방세포로 인한 이식부위 부피의 증가를 달성할 수 있어 성형효과를 얻을 수 있을 뿐만 아니라, 지방줄기세포들이 지방세포로 분화, 성장할 수 있어 이식부위의 부피성장을 도모할 수 있다. 또한, 종래 비교적 다량의 지방세포를 피부 깊이 이식하는 가슴 및 엉덩이 성형의 경우에는 추출한 지방줄기세포와 지방세포 및 지방조직을 동시에 이식하는 것이 바람직할 수 있다. Transplantation-cells contained in the composition of the present invention may be adipose stem cells or adipocytes alone or a mixture of adipocytes and adipocytes; A mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Or admixture with adipocytes, adipocytes, and adipose tissue. Particularly, when the adipose stem cells and the adipose cells are included at the same time, an increase in the volume of the transplant site due to the adipose cells can be achieved at the same time as the graft, thereby obtaining a molding effect, and the adipose stem cells can be differentiated and grown into the adipose cells. This can promote volume growth of the implanted site. In addition, in the case of chest and hip molding in which a relatively large amount of fat cells are deeply implanted, it may be desirable to simultaneously transplant the extracted adipose stem cells, fat cells, and adipose tissue.
본 발명의 이식용 조성물에 사용되는 지방줄기세포, 지방세포 및/또는 지방조직은 피하지방으로부터 지방조직 채취시 손상된 지방세포를 최대한 제거하는 것이 바람직하다. 손상된 지방세포를 최대한 제거한다는 것은 지방세포로부터 유출된 기름, 세포 파쇄물, 혈액을 포함한 체액 및 채취를 위해 투여된 각종 물질 등을 30% 이하, 바람직하게는 5% 이하로 존재하도록 처리하는 것을 의미한다. Adipose stem cells, adipocytes, and / or adipose tissues used in the implantable composition of the present invention are preferably to remove the damaged adipocytes as much as possible when collecting the adipose tissue from the subcutaneous fat. To remove the damaged fat cells as much as possible means treating the oil spilled from the fat cells, cell debris, body fluids including blood and various substances administered for collection to be present in 30% or less, preferably 5% or less. .
본 발명의 조성물에 함유되는 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물의 함량은 이식이 필요한 환자의 상태, 목적, 성별, 나이 등에 따라 적절히 변경될 수 있다. 예를 들어, 얼굴 성형 등의 목적으로 지방 세포를 이식하는 경우에는 약 1 ∼ 100 ml, 바람직하게는 약 3 ∼ 50 ml의 지방세포를 이식할 수 있다. 지방줄기세포의 경우에는 1 X 103 - 108 cells 의 범위로 사용될 수 있다. 또한, 지방세포와 지방줄기세포를 동시에 사용하는 경우에도 상기 범위에서 적절히 혼합하여 사용될 수 있으나, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 지방세포와 지방줄기세포를 동시에 사용하는 경우, 약 50 ml의 지방세포 및 약 1 X 105 cells의 지방줄기세포를 사용할 수도 있다. 본 발명의 이식용 조성물의 장점 중의 하나는 지방세포와 지방줄기세포의 혼합 비율을 필요에 따라 자유로이 조절하여 이식할 수 있다는 점이다.Adipose stem cells contained in the composition of the present invention; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Alternatively, the content of adipocytes, adipocytes, and admixtures with adipocytes may be appropriately changed depending on the condition, purpose, sex, age, etc. of the patient in need of transplantation. For example, when transplanting fat cells for the purpose of face shaping and the like, about 1 to 100 ml, preferably about 3 to 50 ml of fat cells can be transplanted. For fat stem cells, 1 X 10 3 - can be used in a range of 10 8 cells. In addition, even when using adipose cells and fat stem cells at the same time can be used in a suitable mixture in the above range, but is not necessarily limited thereto. For example, when using adipocytes and adipose stem cells at the same time, about 50 ml of adipocytes and about 1
본 발명의 조성물은 상기 이식-세포를 안정하게 분산시키기 위한 안정화제로서, 엘라스틴과 히알루론산과의 혼합물; 엘라스틴과 콜라겐과의 혼합물; 및 엘라스틴, 히알루론산, 및 콜라겐과의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 반유동성 생체-유래 물질을 함유한다. 상기 엘라스틴, 히알루론산, 및 콜라겐은 생체에서 유래되는 물질로서, 생체내에서 자연적으로 분해될 수 있는 생분해성 성질을 가지며, 수친화성 매질중에 함유되었을 때 점도를 높게 유지시킴으로써 전체적인 조성을 반-유동성(semi-floating) 성질을 나타낼 수 있다. 상기 엘라스틴, 히알루론산, 및 콜라겐은 화학적 합성 또는 반합성된 물질일 수 있으며, 이들이 생분해성의 성질을 갖는 한, 본 발명의 조성물에 함유되는 엘라스틴, 히알루론산, 및 콜라겐은 상기 합성 또는 반합성된 것들을 포함한다. 따라서, 본 발명의 조성물에서와 같이, 이들을 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물과 함께 제제화할 경우에는 상기 세포 또는 세포 혼합물이 매질 중에 부유하거나 침강되지 않고 골고루 분산되어 존재할 수 있도록 한다.The composition of the present invention is a stabilizer for stably dispersing the transplant-cell, a mixture of elastin and hyaluronic acid; Mixtures of elastin and collagen; And a semi-flowing bio-derived material selected from the group consisting of elastin, hyaluronic acid, and mixtures with collagen. The elastin, hyaluronic acid, and collagen are materials derived from a living body, have biodegradable properties that can be naturally degraded in vivo, and maintain the high viscosity when contained in a water affinity medium, thereby making the overall composition semi-flowable. -floating) property. The elastin, hyaluronic acid, and collagen may be chemically synthesized or semisynthetic materials, and as long as they have biodegradable properties, elastin, hyaluronic acid, and collagen contained in the composition of the present invention include those synthesized or semisynthesized. . Thus, as in the composition of the present invention, these include adipose stem cells; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Or when formulated with admixtures with adipocytes, adipocytes, and adipose tissue so that the cells or cell admixtures are evenly distributed and do not float or settle in the medium.
본 발명의 조성물에 함유되는 반유동성 생체-유래 물질은 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물이 안정되게 분산될 수 있는 점도를 부여할 수 있도록 농도 및 분자량을 선택할 수 있다. Semi-flowing bio-derived materials contained in the composition of the present invention include adipose stem cells; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Alternatively, the concentration and the molecular weight may be selected so as to impart a viscosity to stably disperse the adipocytes, adipocytes, and adipose tissue.
예를 들어, 본 발명의 조성물이 이식-세포로서 지방줄기세포를 함유하는 경우, 상기 반유동성 생체-유래 물질은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ∼ 40 중량%, 바람직하게는 약 0.5 ∼ 35 중량%, 더욱 바람직하게는 약 1 ∼ 25 중량%를 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물이 이식-세포로서 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물을 함유하는 경우, 상기 반유동성 생체-유래 물질은 조성물 총 중량에 대하여 0.0005 ∼ 5 중량%, 바람직하게는 0.001 ∼ 1 중량%, 더욱 바람직하게는 약 0.002 ∼ 0.4 중량%, 더 더욱 바람직하게는 약 0.02 ∼ 0.2 중량%를 사용할 수 있다.For example, when the composition of the present invention contains adipose stem cells as transplant-cells, the semi-flowable bio-derived material is 0.1-40% by weight, preferably about 0.5-35% by weight, based on the total weight of the composition, More preferably, about 1 to 25% by weight can be used. In addition, the composition of the present invention may be adipocytes as transplant-cells; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Or when containing a mixture with adipocytes, adipocytes, and adipose tissue, the semi-flowable bio-derived material is 0.0005 to 5% by weight, preferably 0.001 to 1% by weight, more preferably based on the total weight of the composition About 0.002 to 0.4% by weight, more preferably about 0.02 to 0.2% by weight can be used.
또한, 상기 반유동성 생체-유래 물질은 분자량 1 ∼ 100 kDa의 엘라스틴 및 중량평균분자량 200,000 ∼ 400,000의 히알루론산과의 혼합물일 수 있으며, 상기 엘라스틴과 히알루론산의 중량비는 1 : 0.1∼10 의 범위일 수 있다.In addition, the semi-flowing bio-derived material may be a mixture of elastin having a molecular weight of 1 to 100 kDa and hyaluronic acid having a weight average molecular weight of 200,000 to 400,000, wherein the weight ratio of elastin and hyaluronic acid is in the range of 1: 0.1 to 10. Can be.
또한, 상기 반유동성 생체-유래 물질은 분자량 1 ∼ 100 kDa의 엘라스틴 및 분자량 80 ∼ 3000 kDa의 콜라겐, 바람직하게는 아테로콜라겐(aterocollagen)과의 혼합물일 수 있으며, 상기 엘라스틴과 콜라겐(또는 아테로콜라겐)의 중량비는 1 : 0.1∼10 의 범위일 수 있다.In addition, the semi-flowing bio-derived material may be a mixture of elastin having a molecular weight of 1 to 100 kDa and a collagen having a molecular weight of 80 to 3000 kDa, preferably atrocollagen, and the elastin and collagen (or atherosclerosis) Collagen) may be in the range of 1: 0.1 to 10.
또한, 상기 반유동성 생체-유래 물질은 분자량 1 ∼ 100 kDa의 엘라스틴, 중량평균분자량 200,000 ∼ 400,000의 히알루론산 및 분자량 80 ∼ 3000 kDa의 콜라겐, 바람직하게는 아테로콜라겐과의 혼합물일 수 있으며, 상기 엘라스틴, 히알루론산, 및 콜라겐(또는 아테로콜라겐)의 중량비는 1 : 0.1∼10 : 0.1∼10 의 범위일 수 있다.In addition, the semi-flowable bio-derived material may be a mixture of elastin having a molecular weight of 1 to 100 kDa, hyaluronic acid having a weight average molecular weight of 200,000 to 400,000, and collagen having a molecular weight of 80 to 3000 kDa, preferably atherocollagen. The weight ratio of elastin, hyaluronic acid, and collagen (or atherocollagen) may range from 1: 0.1 to 10: 0.1 to 10.
상기 이식-세포를 안정하게 분산시키기 위한 안정화제로서 사용되는 반유동성 생체-유래 물질 중 하나인 엘라스틴은 황색의 망상구조로 된 탄성섬유를 구성하며, 고등동물의 결합조직 중에 많이 함유되어 있는, 조직 중에 콜라겐과 함께 존재하여 피부의 중요 성분을 이루는 물질이다. 아미노산 조성은 글리신과 프롤린 함량이 많은 점이 콜라겐과 비슷하며 콜라겐 분자가 아르기닌과 히드록시프롤린 함량이 많은 부분을 잃고 엘라스틴이 되는 것으로 추측되며, 열 ·알칼리 ·단백질 분해효소에 대한 저항성은 콜라겐보다 강하다. 본 발명의 조성물에 함유될 수 있는 엘라스틴은 인간을 포함한 포유동물로부터 얻어진 엘라스틴, 유전자 재조합 방법을 사용한 미생물 또는 세포를 배양하여 얻은 엘라스틴 등을 모두 사용할 수 있다. 엘라스틴의 분자량은 크게 제한되지 아니하며, 예를 들어 1 ∼ 100 kDa의 범위일 수 있으며, 분자량 10 ∼ 60 kDa인 알파형 및 분자량 3 ∼ 10 kDa인 베타형 엘라스틴 각각 또는 혼합물일 수 있다. 또한 약 71 kDa (71,927 Da)인 엘라스틴을 사용할 수 도 있으며, 조성물 중의 엘라스틴 함량, 즉 농도에 따라 적절하게 변경시켜 사용할 수도 있다.Elastin, one of the semi-flowing bio-derived materials used as a stabilizer for stably dispersing the transplanted-cells, constitutes a yellow network of elastic fibers and contains a large amount of tissue in the connective tissue of higher animals. It is present with collagen in the body and forms an important component of the skin. The amino acid composition is similar to collagen in that the content of glycine and proline is high, and it is assumed that the collagen molecule loses a large portion of arginine and hydroxyproline and becomes elastin, and the resistance to heat, alkali, and protease is stronger than collagen. Elastin that may be contained in the composition of the present invention can be used both elastin obtained from mammals including humans, elastin obtained by culturing microorganisms or cells using a genetic recombination method. The molecular weight of elastin is not particularly limited, and may be, for example, in the range of 1 to 100 kDa, and may be an alpha type having a molecular weight of 10 to 60 kDa and a beta type elastin having a molecular weight of 3 to 10 kDa, respectively, or a mixture thereof. Elastin, which is about 71 kDa (71,927 Da), may also be used, and may be suitably modified according to the elastin content, that is, the concentration of the composition.
히아루론산은 식품의약품안전청으로부터 체내 주입이 허가된 생분해성 중합체로서, 생체에서 유래되는 물질이다. 본 발명의 조성물에 함유되는 히아루론산은 인간을 포함한 포유동물의 체액 또는 조직으로부터 정제된 히아루론산, 재조합 미생물 또는 세포를 배양하여 얻은 히아루론산, 또는 화학적 합성방법에 의해 얻어진 히아루론산 모두를 사용할 수 있다. 히아루론산의 중량평균분자량은 약 200,000 ∼ 400,000 의 범위일 수 있으며, 조성물 중의 히아루론산 함량, 즉 농도에 따라 적절하게 변경시켜 사용할 수도 있다. Hyaluronic acid is a biodegradable polymer that is permitted to be injected into the body from the Food and Drug Administration. As the hyaluronic acid contained in the composition of the present invention, all of hyaluronic acid obtained by culturing purified hyaluronic acid, recombinant microorganisms or cells from mammalian body fluids or tissues, or hyaluronic acid obtained by a chemical synthesis method can be used. The weight average molecular weight of hyaluronic acid may be in the range of about 200,000 to 400,000, and may be appropriately changed depending on the content of hyaluronic acid in the composition, that is, the concentration.
콜라겐은 인간을 포함한 포유동물의 뼈 연골, 건(tendon), 피부 등에 다량으로 함유되어 있는 경단백질로서 융해시키게 되면 젤라틴으로 변환되는 성질을 갖는다. 본 발명의 조성물에 함유될 수 있는 콜라겐은 인간을 포함한 포유동물로부터 얻어진 콜라젠, 유전자 재조합 방법을 사용한 미생물 또는 세포를 배양하여 얻은 콜라겐 등을 모두 사용할 수 있다. 콜라겐의 분자량은 80 ∼ 3000 kDa, 바람직하게는 80 ∼ 200 kDa, 더욱 바람직하게는 약 90 ∼ 130 kDa의 범위일 수 있으며, 조성물 중의 콜라겐 함량, 즉 농도에 따라 적절하게 변경시켜 사용할 수도 있다.Collagen is a light protein contained in a large amount of bone cartilage, tendon, skin, etc. of mammals including humans and is converted into gelatin when melted. Collagen that may be contained in the composition of the present invention can be used both collagen obtained from mammals including humans, collagen obtained by culturing microorganisms or cells using a genetic recombination method. The molecular weight of the collagen may be in the range of 80 to 3000 kDa, preferably 80 to 200 kDa, more preferably about 90 to 130 kDa, and may be suitably changed depending on the collagen content in the composition, that is, the concentration.
상기 콜라겐으로는 아테로콜라겐을 사용하는 것이 특히 바람직하다. 아테로콜라젠은 콜라젠의 펩티드 결합을 절단해 분자량을 작게 하여 수용성으로 만든 것으로서 콜라겐과 마찬가지로 3개의 펩티드 쇠사슬 구조를 유지하고 있다. 또한 생체 조직과의 친화성이 뛰어나며, 펩티드를 구성하는 아미노산은 3분의 1이 글리신 으로 다른 단백질에는 없는 히드록시 프롤린을 함유하고 있는 특징을 지닌다. 본 발명의 조성물에 함유될 수 있는 아테로콜라겐은 인간을 포함한 포유동물로부터 얻어진 아테로콜라겐, 유전자 재조합 방법을 사용한 미생물 또는 세포를 배양하여 얻은 아테로콜라겐 등을 모두 사용할 수 있다. 상기 콜라겐의 예와 마찬가지로 아테로콜라겐의 분자량은 80 ∼ 3000 kDa, 바람직하게는 80 ∼ 200 kDa, 더욱 바람직하게는 약 90 ∼ 130 kDa의 범위일 수 있으며, 조성물 중의 아테로콜라겐 함량, 즉 농도에 따라 적절하게 변경시켜 사용할 수도 있다.It is particularly preferable to use atherocollagen as the collagen. Aterocollagen is made water-soluble by cleaving the peptide bond of collagen and making the molecular weight small, and maintains three peptide chain structures like collagen. In addition, it has excellent affinity with biological tissues, and one-third of the amino acids constituting the peptide is glycine and contains hydroxyproline, which is not found in other proteins. The atherocollagen that can be contained in the composition of the present invention can be used both atherocollagen obtained from mammals including humans, atherocollagen obtained by culturing microorganisms or cells using a genetic recombination method. As in the example of collagen, the molecular weight of the atherocollagen may range from 80 to 3000 kDa, preferably from 80 to 200 kDa, more preferably from about 90 to 130 kDa, depending on the content of the atherocollagen in the composition, i. It can also be changed accordingly.
본 발명의 조성물은 필요에 따라 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 함유할 수 있으며, 예를 들면 덱스트란 등의 등장화제, 벤질알코올 등의 무통화제를 함유할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The composition of the present invention may contain a pharmaceutically acceptable additive, if necessary, for example, may include, but is not limited to, isotonic agents such as dextran, benzyl alcohol and the like.
상기와 같은 본 발명의 조성물은 생리학적으로-적합한 완충액 중에 지방줄기세포; 지방세포; 지방줄기세포와 지방세포와의 혼합물; 지방줄기세포와 지방조직과의 혼합물; 또는 지방줄기세포, 지방세포, 및 지방조직과의 혼합물이 조성물 중에 부유되거나 침강되지 않는다. 따라서, 본 발명의 이식용 조성물은 이식-세포의 함량을 미세하게 조절할 수 있으며, 다양한 이식부위에 원하는 양만큼 정확하게 주입할 수 있으므로, 종래 피하지방을 이식했을 때 발생하는 부작용을 획기적으로 줄일 수 있다. The composition of the present invention as described above comprises adipose stem cells in physiologically-suitable buffer; Adipocytes; Adipocytes and mixtures of adipocytes; Mixture of adipose stem cells and adipose tissue; Or admixture with adipocytes, adipocytes, and adipose tissue does not float or settle in the composition. Therefore, the graft composition of the present invention can finely control the content of the graft-cells, and can be precisely injected into various graft sites as desired, thereby significantly reducing the side effects that occur when conventionally implanting subcutaneous fat. .
또한, 이식-세포가 골고루 분산되어 주입됨으로써, 지방줄기세포, 지방세포 및/또는 지방조직이 비균등하게 이식되는 것을 원천적으로 방지할 수 있으며, 이식된 세포들의 틈을 통해 줄기세포 및 지방세포들이 쉽게 외부 체액에 존재하는 영양 분을 공급받거나 노폐물을 배출할 수 있다. 또한, 주입된 지방세포 및 줄기세포들이 기존의 지방조직 및 결합조직 사이로 넓게 펴져 나갈 수 있어 혈관의 도움을 받아서 생존할 수 있는 확률을 높일 수 있으므로 세포의 생착율을 높일 수 있어 이식 후 부피의 감소를 줄일 수 있다.In addition, evenly distributed implantation of graft-cells prevents non-uniform transplantation of adipose stem cells, adipocytes and / or adipose tissues, and allows stem cells and adipocytes to It can easily be fed nutrients or waste products present in external body fluids. In addition, the injected adipocytes and stem cells can be expanded widely between the existing adipose tissue and connective tissue, thereby increasing the probability of survival with the help of blood vessels, thereby increasing the engraftment rate of the cells, thereby reducing the volume after transplantation. Can be reduced.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these examples are for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
실시예Example 1. 지방세포 및 지방줄기세포의 채취 1. Collection of Adipocytes and Adipose Stem Cells
피하지방 제거 시술을 받은 환자로부터 동의를 얻고, 해당 환자로부터 지방흡인(liposuction)방법을 통하여 제거되어 버려지는 지방조직을 수거하였다. 수거한 지방조직은 10 - 200 g정도씩 프로세싱 백에 옮겨 생리완충액을 가하여 체액과 혈액 부분을 제거하는 과정을 새로운 생리완충액으로 3회 반복하고, 체액과 혈액이 제거된 지방조직을 수거하였다. 상기 채취단계에서, 수거된 지방조직에 생리완충액을 가했을 때의 성상은 도 1과 같으며, 이를 3회 반복하여 지방조직만을 수거한 결과는 도 2와 같다. 도 1에서 알 수 있는 바와 같이 지방조직은 위로, 혈구등 혈액유래물질들은 아래로 완충액과 함께 가라앉는다. 또한, 도 2에서 알 수 있는 바와 같이 분리과정을 통해 얻어진 지방조직은 지방세포들이 전반적으로 균질화 되어 있지 않고 비중에 의해 조성물의 상부에 치우쳐 있어, 이식 시 균일한 주입 곤란하다.The patient received the subcutaneous fat removal procedure, and the adipose tissue was removed from the patient by liposuction method. The collected adipose tissues were transferred to the processing bag by 10-200 g each time, and the process of removing the body fluid and blood portion by adding a menstrual buffer was repeated three times with a new menstrual buffer and the adipose tissue from which the body fluid and blood were removed was collected. In the collection step, when the physiological buffer solution is added to the collected adipose tissue is as shown in Figure 1, the result of collecting only the adipose tissue by repeating this three times is shown in Figure 2. As can be seen in Figure 1 adipose tissue up, blood derived substances such as blood cells sink down with the buffer. In addition, as can be seen in Figure 2, the adipose tissue obtained through the separation process, the fat cells are not homogenized as a whole, biased on the upper portion of the composition by specific gravity, it is difficult to uniform injection during transplantation.
상기 체액과 혈액이 제거된 지방조직만을 모아 0.05 - 0.2 중량%가 되도록 콜라게나제를 가한 후, 37 ℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 지방세포층과 지방줄기세포층을 분리한 후, 각각의 층에 생리식염수를 가하여 콜라게나제를 제거하였다. 지방조직에 콜라게나제를 처리하여 위부터 차례로 기름, 지방세포 및 지방줄기세포 층으로 나뉜 모습은 도 3에 나타내었다. Only the body tissue and the adipose tissue from which the blood was removed were added collagenase to 0.05-0.2% by weight, and then stirred at 37 ° C for 1 hour. After separating the adipocyte layer and the adipocyte layer, physiological saline was added to each layer to remove collagenase. The collagenase treatment of adipose tissue divided into oil, fat cells and fat stem cell layers from the top is shown in FIG. 3.
위에서 얻어진 지방세포층은 다시 50 x g로 원심분리하여 채취 및 효소처리 과정에서 발생한 파괴된 지방세포와 순수기름을 제거하였다. 또한, 위에서 얻어진 지방줄기세포층은 역시 다시 50 x g로 원심분리하여 채취 및 효소처리 과정에서 발생한 파괴된 지방세포와 순수기름을 제거하였다.The fat cell layer obtained above was centrifuged at 50 x g again to remove the destroyed fat cells and pure oil generated during the extraction and enzyme treatment. In addition, the fat stem cell layer obtained above was also centrifuged at 50 x g again to remove destroyed fat cells and pure oil generated during the extraction and enzyme treatment.
실시예Example 2. 지방줄기세포-함유 이식용 조성물의 제조 2. Preparation of fat stem cell-containing transplant composition
중량평균분자량 300,000의 2 중량% 의료용 생체주입용 히아루론산 용액과 20 중량% 엘라스틴(Sigma사, E6527) 용액과의 1:1(v/v) 혼합액 2.5 ml에 실시예 1에서 얻어진 지방줄기세포 1 X 107 을 함유하는 생리완충액 0.5 ml을 가하고, 10 분 동안 교반하여, 지방줄기세포-함유 이식용 조성물을 제조하였다. 얻어진 지방줄기세포-함유 이식용 조성물의 성상은 도 4와 같다.1 x fat stem cells obtained in Example 1 in 2.5 ml of a 1: 1 (v / v) mixture of a weight-average molecular weight of 300,000, a 2% by weight medical injection of hyaluronic acid and a 20% by weight elastin (Sigma, E6527) solution 0.5 ml of physiological buffer containing 10 7 was added and stirred for 10 minutes to prepare a composition for adipose stem cell-containing transplantation. The properties of the resulting adipose stem cell-containing implant composition are shown in FIG. 4.
상기에서 얻어진 이식용 조성물을 시험관(높이 10 cm, 직경 0.4 cm)에 넣은 직후(0 시간), 이식용 조성물을 최상층, 중상층, 중하층 및 최하층으로 4등분하여 동일부피에 포함된 지방줄기세포의 중량을 측정하여 지방줄기세포의 분포를 측정하 고, 이를 실온에서 24 시간 보존한 후 지방줄기세포의 분포를 측정한 결과는 도 5a와 같다. 비교예로서, 상기 히알루론산과 엘라스틴의 혼합물 대신 생리완충액 2.5 ml를 첨가하여 제조한 이식용 조성물에 대하여 동일한 시험을 수행한 결과는 도 5b와 같다. 도 5a 및 5b로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 이식용 조성물은 제조 후 24시간이 경과한 시점에서도 지방줄기세포가 침전되지 않고 고루 분포함을 알 수 있다.Immediately after the implantable composition obtained above was put into a test tube (
실시예Example 3. 지방세포-함유 이식용 조성물의 제조 3. Preparation of adipocyte-containing transplant composition
중량평균분자량 300,000의 2 중량% 의료용 생체주입용 히아루론산 용액과 20 중량% 엘라스틴(Sigma사, E6527) 용액과의 1:1(v/v) 혼합액 1 ml에 실시예 1에서 얻어진 지방세포 15 ml을 가하고, 10 분 동안 교반하여, 지방세포-함유 이식용 조성물을 제조하였다.15 ml of the adipocytes obtained in Example 1 were added to 1 ml of a 1: 1 (v / v) mixture of a 2 wt% medical hyaluronic acid solution with a weight average molecular weight of 300,000 and a 20 wt% elastin (Sigma, E6527) solution. And stirred for 10 minutes to prepare a composition for adipocyte-containing transplantation.
실시예Example 4. 지방세포 및 지방줄기세포-함유 이식용 조성물의 제조 4. Preparation of Adipocyte and Adipocyte-Containing Transplant Composition
중량평균분자량 300,000의 2 중량% 의료용 생체주입용 히아루론산 용액과 20 중량% 엘라스틴(Sigma사, E6527) 용액과의 1:1(v/v) 혼합액 0.5 ml에 실시예 1에서 얻어진 지방줄기세포 1 X 107 을 함유하는 생리완충액 0.5 ml, 및 실시예 1에서 얻어진 지방세포 15 ml를 가하고, 5 분 동안 교반하여, 지방세포 및 지방줄기세포-함유 이식용 조성물을 제조하였다. 1 x fat stem cells obtained in Example 1 in 0.5 ml of a 1: 1 (v / v) mixture of a weight-average molecular weight of 300,000, a 2% by weight medical injection of hyaluronic acid and a 20% by weight elastin (Sigma, E6527) solution 0.5 ml of the physiological buffer containing 10 7 and 15 ml of the adipocytes obtained in Example 1 were added and stirred for 5 minutes to prepare a composition for adipocyte and adipocyte-containing transplant.
상기에서 얻어진 이식용 조성물을 시험관(높이 10 cm, 직경 0.4 cm)에 넣은 직후(0 시간), 이식용 조성물을 최상층, 중상층, 중하층 및 최하층으로 4등분하여 동일부피에 포함된 지방줄기세포 및 지방세포의 중량을 측정하여 지방줄기세포의 분포를 측정하고, 이를 실온에서 24 시간 보존한 후 지방줄기세포 및 지방세포의 분포를 촬영한 결과는 도 6a와 같다 . 비교예로서, 상기 히알루론산과 엘라스틴의 혼합물 대신 생리완충액 2.5 ml를 첨가하여 제조한 이식용 조성물에 대하여 동일한 시험을 수행한 결과는 도 6b와 같다. 도 6a 및 6b로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 이식용 조성물은 제조 후 24시간이 경과한 시점에서도 지방줄기세포 및 지방세포층이 분리되지 않고 고루 분포함을 알 수 있다.Immediately after the transplant composition obtained above was put into a test tube (
실시예Example 5. 지방줄기세포-함유 이식용 조성물의 제조 5. Preparation of Adipose Stem Cell-Containing Implant Composition
동량의 분자량 130 kDa의 콜라겐과 엘라스틴(Sigma사, E6527)을 생리식염수에 녹여 2 중량% 의 용액을 제조하였다. 얻어진 용액 1 ml에 실시예 1에서 얻어진 지방줄기세포 1 X 105 을 함유하는 생리완충액 1 ml을 가하고, 10 분 동안 교반하여, 지방줄기세포-함유 이식용 조성물을 제조하였다.The same amount of the molecular weight of 130 kDa collagen and elastin (Sigma, E6527) was dissolved in physiological saline to prepare a 2% by weight solution. 1 ml of the obtained physiological buffer containing 1 × 10 5 of the adipose stem cells obtained in Example 1 was added to 1 ml of the resulting solution, and stirred for 10 minutes to prepare a composition for adipose stem cell-containing transplantation.
실시예Example 6. 지방세포 및 지방줄기세포-함유 이식용 조성물의 제조 6. Preparation of Adipocyte and Adipocyte-Containing Transplant Composition
실시예 5에서 얻어진 이식용 조성물에 실시예 1에서 얻어진 지방세포 15 ml 를 가하고, 5 분 동안 교반하여, 지방세포 및 지방줄기세포-함유 이식용 조성물을 제조하였다.15 ml of the adipocytes obtained in Example 1 were added to the transplant composition obtained in Example 5, and stirred for 5 minutes to prepare a composition for adipocyte and adipocyte-containing transplant.
실시예Example 7. 지방조직 및 지방줄기세포-함유 이식용 조성물의 제조 7. Preparation of Adipose Tissue and Adipose Stem Cell-Containing Composition
중량평균분자량 300,000의 2 중량% 의료용 생체주입용 히아루론산 용액과 20 중량% 엘라스틴(Sigma사, E6527) 용액과의 1:1(v/v) 혼합액 0.5 ml에 실시예 1에서 얻어진 지방줄기세포 1 X 107 을 함유하는 생리완충액 0.5 ml, 및 환자로부터 추출되어 수세과정을 거쳐 콜라제나제 처리 없이 얻어진 지방조직 15 ml를 가하고, 5 분 동안 교반하여, 지방조직 및 지방줄기세포-함유 이식용 조성물을 제조하였다. 1 x fat stem cells obtained in Example 1 in 0.5 ml of a 1: 1 (v / v) mixture of a weight-average molecular weight of 300,000, a 2% by weight medical injection of hyaluronic acid and a 20% by weight elastin (Sigma, E6527) solution 0.5 ml of physiological buffer containing 10 7 and 15 ml of adipose tissue extracted from the patient and obtained without collagenase treatment after washing with water were added and stirred for 5 minutes to prepare a composition for adipose tissue and adipose stem cell-containing transplantation. Prepared.
도 1은 수거된 지방조직에 생리완충액을 가했을 때의 성상을 나타낸다.Figure 1 shows the appearance when adding a physiological buffer to the collected adipose tissue.
도 2는 혈구를 제거하는 단계를 거쳐 지방조직만을 수거한 결과를 나타낸다.Figure 2 shows the result of collecting only adipose tissue through the step of removing blood cells.
도 3은 지방조직에 콜라게나제를 처리한 후 손상된 지방세포에서 유래된 기름층 및 지방세포 하층에 가라앉은 줄기세포의 성상을 나타낸다.Figure 3 shows the appearance of the stem cells settled in the oil layer and fat cell lower layer derived from damaged fat cells after treatment with collagenase to adipose tissue.
도 4는 실시예 2에서 제조한 지방줄기세포-함유 이식용 조성물의 성상을 나타낸다.Figure 4 shows the appearance of the composition for adipose stem cell-containing transplant prepared in Example 2.
도 5a 및 도 5b는 각각 실시예 2에서 제조한 지방줄기세포-함유 이식용 조성물(도 5a) 및 안정화제를 함유하지 않은 지방줄기세포-함유 이식용 조성물(즉 비교예, 도 5b)를 0시간과 24 시간 동안 수직으로 보관한 후의 지방줄기세포의 분포를 측정한 결과를 나타낸다.5A and 5B show adipose stem cell-containing implant composition (FIG. 5A) and adipose stem cell-containing implant composition (i.e. Comparative Example, FIG. 5B) containing no stabilizer prepared in Example 2, respectively. The results of measurement of the distribution of fat stem cells after vertical storage for 24 hours and 24 hours are shown.
도 6a 및 도 6b는 각각 실시예 7에서 제조한 이식용 조성물(도 6a) 및 비교예(히알루론산과 엘라스틴의 혼합물 대신 생리완충액 함유, 도 6b)의 제조 직후와 24시간 보존 후의 성상을 촬영한 결과를 나타낸다.6A and 6B are photographs of the implantable compositions prepared in Example 7 (FIG. 6A) and comparative examples (containing a physiological buffer solution instead of a mixture of hyaluronic acid and elastin, FIG. 6B) and after 24 hours of storage, respectively. Results are shown.
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