KR100528816B1

KR100528816B1 - 장쇄 알코올, 알칸, 지방산 및 아미드에 의한 바이러스억제 방법

Info

Publication number: KR100528816B1
Application number: KR10-2002-7011861A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 에이취. 카츠; 로라 이. 포프; 모하메드 에이취. 칼릴; 존 에프. 마르셀렛티; 리 알. 카츠
Original assignee: 아바니르 파마슈티컬스
Priority date: 1996-09-17
Filing date: 1997-09-10
Publication date: 2005-11-16
Anticipated expiration: 2017-09-10
Also published as: KR20030097605A; MXPA99002575A; PL332455A1; EP1557167A1; IL163865A0; ES2245004T3; JP3739098B2; WO1998011887A3; CA2273960A1; DK1001759T3; IL129033A0; PT1001759E; PL189618B1; AU742929B2; KR100528815B1; WO1998011887A2; AU4339797A; ATE299700T1; EP1001759A2; DE69733778D1

Abstract

본 발명은 활성 성분으로서 개시되어 있는 장쇄 지방산, 알칸, 아미드 또는 모노-불포화된 알코올, 특히 스테아릴 알코올, 에루실 알코올, 브라시딜 알코올, 아라키딜 알코올, n-도코산, n-도코사노산, 에루카미드, 스테아르산, 또는 이의 혼합물과 혼합된 비이온성 계면활성제를 포함하는 치료학적 조성물에 관한 것이다. 이러한 조성물을 사용하여 바이러스 감염증을 예방 또는 치료하거나, 피부 또는 막의 염증을 치료하거나, 세포증식을 억제하는 방법이 또한 개시된다.

Description

장쇄 알코올, 알칸, 지방산 및 아미드에 의한 바이러스 억제 방법 {VIRAL INHIBITION BY LONG-CHAIN ALCOHOLS, ALKANES, FATTY ACIDS AND AMIDES}

본 발명은 비온성 계면활성제, 및 활성 성분으로서 장쇄 지방산, 장쇄 알칸, 아미드 및 단일 불포화된 장쇄 알코올, 특히 스테아릴 알코올, 에루실 알코올, 에루카미드, 브라시딜 알코올, 아라키딜 알코올, n-도코사놀, n-도코산, n-도코사노산 또는 스테아르산을 함유하는 치료학적 조성물을 사용함으로써 바이러스 감염증 및 피부 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다.

바이러스 감염은 상당한 불쾌증을 초래하며, 생명에 치명적일 수도 있다. 단순포진 바이러스(HSV-1 및 HSV-2), 사이토메갈로바이러스(CMV), 엡스테인-바르 바이러스(EBV), 바리셀라 조스터 바이러스(VZV), 인플루엔자 바이러스, 사람 림프친화성 바이러스(예를 들어, HTLV-1) 및 사람 면역결핍 바이러스(예를 들어, HIV-1)과 같은 바이러스는 상당한 이환율 및 사망율을 초래한다. HSV-1 및 HSV-2는 입술 포진, 구순 포진 및 생식기 포진 소산을 포함하는 피부 및 점막의 염증 및 손상과 관련있다. VZV는 대상 포진을 유발시키며, EBV는 단구 증가증과 관련있다. 인플루엔자 바이러스는 독감 증상을 유발하며, 치명적일 수 있다. HIV는 이 바이러스에 감염된 개체를 쇠약하게 하고 치사시키는 후천적 면역결핍증을 초래한다. 비록 이러한 바이러스가 일부 세포에 잠복되어 다양한 기간 동안 유지될 수 있지만, 일반적으로, 바이러스 복제는 이들이 야기하는 질환의 상이한 임상 증상을 유발하여 감염된 세포의 역행될 수 없는 파괴를 초래한다.

C₂₀ 내지 C₃₂ 지방족 알코올의 항바이러스 및 항염증 활성은 미국 특허 제 4,874,794 호, 제 5,071,879 호, 제 5,166,219 호, 제 5,184,451 호 및 제 5,534,554 호에 기재되어 있다. 지방족 알코올 및 치료학적 활성을 갖는 관련된 화합물을 함유하는 조성물이 상기 문헌에 기재되어 있다.

C₂₂ 지방족 알코올, 즉, 계면활성제에 현탁된 n-도코사놀은 단순포진 바이러스, 즉, HIV-1, 시험관내의 호흡 합포체 바이러스 및 생체내 프랜드 바이러스를 포함하는 바이러스에 대한 잠재적인 항바이러스 활성을 나타낸다[참조: Katz, D.H., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10825-10829, 1991; U.S. Patent No. 5,54,554]. 비록 이러한 바이러스 억제의 메카니즘은 공지되어 있지 않지만, n-도코사놀이 바이러스를 직접적으로 불활성화시키지 못하고, 따라서, C₁₀ 내지 C₁₈ 불포화된 알코올이 세정제형 항바이러스 활성을 나타낼 수 있을 것 같지 않다[참조: Katz, D.H., et al., Proc. Natl. Acad, Sci. USA 88:10825-10829, 1991; Shipes, W. et al., Antimicrob. Agents Chemother. 11:98-104, 1997]. 세포에 의한 n-도코사놀의 진행성 결합 및 흡입은 이들의 항바이러스 활성의 원인이 되는데, 그 이유는 세포의 알코올과의 선인큐베이션이 최적의 항바이러스 활성을 유도하기 때문이다. 인큐베이션 동안, 70%의 세포 결합된 n-도코사놀은 세포막에서 발견되며, 나머지는 가용성 세포 분획과 결합되어 있다[참조: Katz, D.H., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10825-10829, 1991]. n-도코사놀의 세포막 흡입은 세포 표면으로의 바이러스 결합을 억제하지 못한다. 대신에, 초기 바이러스 단백질 합성을 80%가 넘게 억제하여, 바이러스는 핵에 정위되지 않는다[참조: Marcelletti, J. F. et al., Drugs of the Future 17(19): 879-882, 1992]. n-도코사놀의 세포내 신진대사 전환이 이들의 항바이러스 활성의 원인이 되지만[참조: Katz, D. H. et al., Annals N.Y. Acad. Sciences, 724:472-488, 1994], 알코올은 300mM까지의 농도에서는 세포독성적이지 않다.

바이러스의 불활성화에는 1 내지 4개의 불포화된 결합을 갖는 C₁₄ 내지 C₂₀ 불포화된 장쇄 알코올을 사용하는 것으로 보고되어 왔다. 가장 효과적인 알코올은 γ-리놀레닐 알코올이며, 이는 위치 6, 9 및 12에서 이중 결합을 갖는 C₁₈ 알코올이며; 반면, 하나의 시스 이중 결합을 갖는 C₁₈ 알코올 및 4개의 이중 결합을 갖는 C₂₀개인 알코올이 아주 덜 효과적인 알코올이다[참조: Sands et al, Antimicrob. Agents & Chemother. 15:67-73, 1979]. 올레산을 함유하는 조성물(C₁₈, 하나의 이중 결합)은 항포진 바이러스 제제에 대해 가장 효과적으로 것으로 보고되어 왔다[참조: PCT patent application Wo 9602244A1].

장쇄 지방족 알코올과 구조적으로 관련된 일부 화합물은 또한 항바이러스 활성과 관련있다. 예를 들어, 미국 특허 제 4,513,008 호에는 5 내지 7개의 이중 결합을 갖는 C₂₀ 내지 C₂₄ 알코올, 다중불포화 산 또는 알데히드의 바이러스 사멸 활성이 기재되어 있다. 장쇄 지방산 군을 가지며, 3 또는 4개 이상의 불포화된 결합을 가지고, 누클레오시드 또는 누클레오시드 유사체에 결합된 화합물은 미국 특허 제 5,216,142 호에 항바이러스 치료제로서 기재되어 있다. 관련된 미국 특허 제 5,276,020 호에는 누클레오시드 유사체에 부착된 C₁₆, C₁₈ 또는 C₂₀ 장쇄 지방산 군을 갖는 항바이러스 화합물 및 이러한 화합물을 사용하여 바이러스 감염증을 치료하는 방법이 기재되어 있다.

종양, 원생동물 및 진균성 질환, 자가면역 질환 및 골수 손상을 치료하는데 유용한 생물학적 활성이 에루키포스포콜린과 같은 에루실 측쇄 및 브라시딜 측쇄를 갖는 포스포리피드에 부여되어 왔다[참조: U.S. Patnet No. 5,438,234].

비록 일부 장쇄 지방 알코올 및 지방산이 세포 성장에 영향을 미치지만, 이러한 영향은 현재 불명확하다. 예를 들어, n-헥사코사놀, 즉 C₂₆ 알코올은 신경 세포 성장을 촉진하지만, C₁₆, C₂₀,C₂₂, C₂₄ 및 C ₃₀의 다른 장쇄 지방 n-알코올은 그렇지 못하다[참조: Borg, J. et al., FEBS Lett. 213(2):406-410, 1987]. 도코사헥사에노산, 즉, 6개의 이중 결합을 갖는 C₂₂ 지방산은 중추신경계 및 망막에 집중되어 있으며, 이들의 생리학적 역할은 밝혀지지 않았다[참조: Bazan, N., Prog, Clin. Biol. Res. 312:95-112, 1989].

리포소말 AL721, 즉, 뉴트랄 글리세리드, 포스파티딜콜린 및 포스파티딜에탄올아민의 혼합물에 대한 항바이러스 활성은 보고되어 있다[참조: Antonian, L et al., Neurosci. Biobehav. Rev. 11:399-413, 1987]. C₁₅ 라우르산의 글리세롤 모노에스테르 또는 라우르산의 폴리히드리 알코올 모노에스테르를 지방산(C₁₀ 카프르산 및 C₈ 카프릴산)의 혼합물과 함께 함유하는 항균 조성물은 미국 특허 제 5,208,257 호에 기재되어 있다.

알레르기성 약물에 노출시키기 전에 C₁₂ 내지 C₂₆ 지방산의 중합체를 함유하는 보호제를 처리하여, 피부 자극을 방지하거나 감소시키는 방법은 미국 특허 제 4,076,799 호에 기재되어 있다. 바람직한 중합체는 2 내지 4개의 카르복시 또는 카르복실염 기를 가지며, 바람직하게는, 이량체화된 리놀산의 트리에탄올아민 염 또는 이들의 유도체를 가진다. 동종중합체 또는 이종중합체내의 지방족 이종환식 잔기 또는 아실 잔기를 함유하고, 단량체 성분보다 더욱 활성적인 다른 항염증 중합체(예를 들어, C₈ 내지 C₁₈ 지방산의 비닐 에스테르; m.w. 2.000 내지 1,000,000)는 미국 특허 제 3,946,035 호에 기재되어 있다.

마취제, 계면활성제 및 국소적 담체를 함유하는 국소적으로 투여되는 조성물을 사용하여 포진 손상의 치료학적 치료제는 미국 특허 제 5,380,754 호에 기재되어 있다. 에틸-시스,시스(9,12)옥타데카디에노에이트(에틸 리놀레이트)를 국소적으로 적용시켜 입술 포진과 같은 염증을 치료하는 방법은 미국 특허 제 4,025,645 호에 기재되어 있다.

본 발명은 알칸, 알코올, 아미드 및 장쇄 지방족을 포함하는 장쇄 지방족 알코올과 관련된 화합물 특히, n-도코사놀과 관련된 화합물의 항바이러스 및 세포독성 효과를 밝혀냈다. 항바이러스 활성을 갖는 이러한 관련된 화합물은 n-도코산, n-도코사노산, 스테아르산, 에루실 알코올, 에루카미드 및 브라시딜 알코올을 포함한다. 또한, 이러한 화합물과 함께 효과적인 항바이러스 및/또는 세폭독성 현탁액을 제형하기 위한 계면활성제 대 활성 성분의 최적의 비를 밝혀냈다. 이러한 화합물 및 제형은 항바이러스 예방 화합물 및 치료학적 치료제에서 유용하다.

본 발명에 있어서, 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 약 1:1(w:w) 내지 약 10:1(w:w)의 혼합물을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기에서, 비이온성 계면활성제는 분자량이 약 1,000 내지 약 25,000인 블록 중합체 즉, 옥톡시놀 또는 데옥시콜레이트이며, 여기에서, 활성 성분은 스테아릴 알코올, 에루실 알코올, 브라시딜 알코올, 아라키딜 알코올, n-도코사놀, n-도코산, n-도코사노산, 에루카미드, 스테아르산 또는 이들의 혼합물이다. 한 구체예에서, 상기 혼합물은 약 5:1(w:w) 내지 약 10:1(w:w)의 비이온성 계면활성제 대 활성 성분을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 상기 혼합물은 약 4:1(w:w) 내지 약 10:1(w:w)의 비이온성 계면활성제 대 스테아르산을 포함한다. 조성물의 한 구체예에서, 블록 중합체는 폴리필렌 글리콜의 폴리옥시알킬렌 유도체를 포함하며, 약 25,000의 분자량을 갖는다. 또 다른 구체에에서, 블록 중합체는 에틸렌 산화물 및 프로필렌 산화물을 포함하며, 분자량은 약 8,400이다. 한 구체예에서, 비이온성 계면활성제는 옥톡시놀-9, 옥톡시놀-10 또는 이들의 조합물이다. 바람직한 구체예에서, 혼합물은 약 5:1(w:w)의 에틸렌 산화물 및 프로필렌 산화물의 블록 중합체 대 n-도코사놀을 포함하며, 상기 블록 중합체는 분자량이 약 8,400이다. 또 다른 구체예에서, 상기 혼합물은 약 5:1(w:w)의 프로필렌 글리콜의 폴리옥시알킬렌 유도체의 블록 중합체 대 n-도코사놀을 포함하며, 상기 블록 중합체의 분자량은 약 25,000이다. 조성물의 바람직한 한 구체예에서, 혼합물은 약 5:1(w:w)의 에틸렌 산화물 및 폴리에틸렌 산화물의 블록 중합체 대 n-도코사노산을 포함하며, 분자량은 약 8,400이다. 또 다른 구체예에서, 상기 화합물은 약 5 내지 20 중량%의 스테아르산을 포함하며, 추가로 당 기재 스테아레이트을 추가로 포함한다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 상기 혼합물은 약 10 내지 약 12 중량%의 n-도코사놀을 포함하며, 당 기재 스테아레이트을 추가로 포함한다. 바람직한 한 구체에에서, 상기 혼합물은 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 비이온 계면활성제 및 스테아르산의 현탁액으로 실질적으로 구성되어 있다. 또 다른 구체예에서, 비이온성 계면활성제는 옥톡시놀, 데옥시콜레이트 또는 프로필렌 글리콜의 폴리옥시알킬렌 유도체의 블록 중합체이며, 상기 중합체는 분자량이 약 25,000이다. 본 발명의 한 구체예는 세포 성장 또는 증식을 억제하기 위해 상기 구체예중 임의의 것에 따른 혼합물을 포함하는 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명의 또 다른 구체예는 바이러스 감염증을 예방하거나 치료하기 위해, 바람직하게는, 단순포진 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 엡스테인-바르 바이러스, 바리셀라 조스터 바이러스, 인플루엔자 바이러스, 사람 림프친화성 바이러스, 사람 면역결핍 바이러스, 파필로마 바이러스(papilloma virus) 또는 호흡 합포체 바이러스에 의해 초래되는 바이러스 감염증을 예방하거나 치료하기 위해 상기에 설명된 혼합물중 임의의 것을 포함하는 조성물을 사용하는 방법을 제공하고 있다. 본 발명의 한 구체예는 피부 또는 막 염증을 완화하기 위해 상기 언급된 혼합물중 임의의 하나를 사용하는 방법을 제공하고 있다. 본 발명의 또 다른 구체예는 국소적용, 경막적용 또는 비경구적용에 적합한 약제를 제조하기 위해 상기에 언급된 혼합물중의 임의의 것을 포함하는 조성물을 사용하는 방법을 제공하고 있다.

n-도코사놀 및 에루실 알코올(시스-13-도코센-1-올)의 합성 방법은 당업자들에게 공지되어 있다(참조: 미국 특허 제 4,186,211호). 스테아릴 알코올은 브라운 등의 방법에 따라 합성될 수 있다[참조문헌: J. Am. Chem. Soc. 78:2582, 1956]. 알칸, 지방족 알코올, 아미드 및 지방족 산의 합성 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 잇다 [참고문헌: A Streitwieser, Jr. & C.H. Heathcock, Introduction to Organic Chemistry, 2nd ed., Macmillan Publishing Co., New York, NY, 1981, pages 160, 243-247, 303-307, 311-312, 315-317, 401-406, 447-453, 515-516, 544, 548-555, 604-605, 670, 753-754 및 950].

바이러스 감염증을 예방하거나 치료하는데 적합한 본 발명의 조성물은 활성 성분 또는 활성 성분으로서 탄소쇄 길이의 탄소수가 18 내지 28개(C₁₈ 내지 C₂₈)인 포화된 지방족 알코올, 모노-불포화된 지방족 알코올, 지방족 알칸, 모노-불포화된 지방족 아미드 및 지방족 산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 배합물을 포함한다. 바람직한 조성물은 활성 성분으로서 스테아릴 알코올, 에루실 알코올, 에루카미드, 브라시딜 알코올, 아라키딜 알코올, n-도코산, n-도코사노산, 스테아르산, 또는 이들의 혼합물, 바람직하게는 계면활성제와 배합된 에루실 알코올, 에루카미드, 브라시딜 알코올, 아라키딜 알코올, n-도코산, n-도코사노산, 스테아르산, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 계면활성제로는 이작용성 블록 중합체와 같은 비이온성 세정제, 즉 분자량이 약 1,000 내지 약 25,000 이상인 프로필렌 글리콜의 폴리옥시알킬렌 유도체가 바람직하다. 바람직한 계면활성제는 분자량이 약 8,400인 에틸렌 산화물(폴록사머 188)와 프로필렌 산화물의 블록 공중합체(예를 들어, 플루로닉 에프. 68(PLURONIC F. 68)이다. 다른 바람직한 계면활성제는 옥톡시놀-9 및/또는 옥톡시놀-10(예를들어, 트리톤 엑스-100(TRITON X-100), 데옥시콜레이트 또는 비이온성 세정제의 혼합물이다. 활성 성분은 최종 조성물에 약 0.1 내지 약 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 10 중량%로 포함된다. 활성 성분의 최적 항바이러스 활성도는 1:1(w:w) 내지 10:1(w:w), 및 바람직하게는 5:1(w:w)일 수 있는 계면활성제 대 활성 성분의 비에 따라 좌우된다.

지방족 알코올, 장쇄 지방산 및 장쇄 알칸을 현탁시키는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 이러한 현탁액을 제조하는 한 가지 적합한 방법은 비이온성 세정제인 계면활성제를 생리 식염수 용액과 같은 수용액 또는 물중에서 1 내지 100mg/ml으로 희석시키고 이 용액을 가열(예를 들어 37 내지 50℃로 가열)시키는 것이다. 그 다음 활성 성분을 상기 계면활성제 용액에 첨가하여 원하는 최종 농도의 활성 성분을 수득하고, 이 배합물을 혼합(예를 들어, 회전 또는 왕복 혼합, 교반 또는 초음파에 의한 혼합)하여 구형 입자(평균 크기-약 0.1 내지 100μ)의 현탁액을 생성한다. 다른 허용가능한 담체는 에멀션(수중의 오일 또는 오일중의 수), 용액, 크림, 로션, 연고, 거품, 겔 및 에어로졸을 포함하며, 이들 모두는 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다.

활성 성분 및 계면활성제는 투여하려는 사람 또는 동물의 피부 및 막 조직에 생리학적으로 적합가능한 담체와 배합될 수 있다. 즉, 담체는 활성 성분의 현탁액을 제조하는데 사용되는 계면활성제 성질을 제외하고 실질적으로 활성인 물질이다. 조성물은 포화된 지방족 알코올, 모노-불포화된 지방족 알코올, 지방족 알칸 및 지방족 산의 효능을 방해하는 다른 생리학적으로 활성 구성 요소를 포함할 수 있다. 조성물의 예가 미국 특허 제 3,592,930호에 기재되어 있다.

적합한 담체로는 예를 들어 백색 바셀린, 이소프로필 미리스테이트, 라놀린 또는 라놀린 알코올, 광유, 소르비탄 모노올레이트, 프로필렌 글리콜, 세틸스테아릴 알코올(혼합 형태 또는 다양한 배합물 형태)와 같은 수성 및 유성 담체가 포함되며, 세정제(예를 들어, 폴리옥실 스테아레이트 또는 나트륨 라우릴 술페이트)와 함께 물과 혼합하여 로션, 겔, 크림 또는 반고체 조성물을 형성한다. 다른 적합한 담체로는 유화제 및 완화제와 수크로오스 스테아레이트, 수크로오스 코코에이트, 수크로오스 디스테아레이트, 광유, 프로필렌 글리콜, 2-에틸-1,3-헥산디올, 폴리옥시프로필렌-15-스테아릴에테르 및 물과의 혼합물을 포함한다. 또한 보존제가 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤질 알코올 및 에틸렌 디아민 테트라아세테이트염을 포함하는 담체 중의 포함될 수 있다. 농후제를 갖지 않는 희석된 현탁액이 널리 공지된 운반 방법을 사용하여, 에어로졸 분무액으로서 피부 표면에 운반하기에 가장 적합하다. 또한 조성물은 글리세롤 또는 폴리에틸렌 글리콜(분자량 800 내지 20,000)와 같은 가소제 및 아존(azone)과 같은 침투제를 포함할 수 있다. 담체의 조성은 활성 성분의 약리학적 활성을 방해하지 않는 한 변할 수 있다.

조성물은 또한 항균제, 다른 항바이러스 작용제, 항진균제, 항산화제, 완충제, 태양 차단제 및 착색제, 방향제, 윤활제 및 보습제 또는 건조제와 같은 향장 작용제를 포함할 수 있다. 조성물에 포함시키는데 유용한 항균제로는 폴리믹신 B 및 테트라시클린이 포함된다. 포함될 수 있는 항진균제로는 미카틴 또는 톨나프태트가 있다. 비타민 E와 같은 항산화제가 포함될 수 있다. 파라 아미노벤조산과 같은 태양 차단제가 포함될 수 있다. 포함될 수 있는 건조제로는 널리 공지된 페놀 및 벤질 알코올이 있다. 합성 또는 천연 밀랍과 같은 윤활제가 포함될 수 있다. 조성물에 첨가되는 농후제로는 푸일룰린, 크산탄, 폴리비닐피롤리돈 또는 카르복시메틸셀룰로오스가 포함될 수 있다.

최상의 조성물은 치료된 개개인, 특히 전신 치료를 위한 개개인, 및 병소, 특히 피부 또는 점막의 손상 부위의 국소 치료를 위한 병소에서의 전반적인 바이러스 적정가를 효과적으로 감소시킨다. 또한 본원에 기재된 치료 방법은 바이러스 감염증(예를 들어, 바이러스가 원인이 된 병소와 관련된 고통)의 증상을 감소시키며, 치료 전보다 더욱 빠른 치유를 촉진시킨다.

본 발명의 방법은 바이러스 감염증을 치료하거나 예방하기 위해 사람 또는 동물에게 활성 성분 및 계면활성제를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 투여는 크림, 로션, 겔, 연고, 현탁액, 에어로졸 분무액 또는 반고체 제형물(예를 들어, 좌약), 당해 분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 제형화된 모든 것을 사용하여 피부 또는 점막에 수행하는 것이 바람직하다. 바이러스 감염증을 치료하거나 예방하는데 효과적인 활성 성분 및 계면활성제를 함유하는 조성물은 1일 내지 14일 동안에 적용시마다 10mg 내지 10g의 양으로 1 내지 10회 적용된다. 적용은 일반적으로 12시간 마다 1회 및 4시간 마다 1회 이하로 이루어진다. 조성물은 약 0.1 내지 5g의 적용량으로 하루에 2 내지 4회 적용되는 것이 바람직하며, 이렇게 하여 1 내지 7일 적용되는 것이 바이러스 감염증을 치료하거나 예방하는데 충분하다. 국소 적용을 위해서, 조성물을 증상(예를 들어, 고통, 부음 또는 염증)이 나타날 때마다 매일 병소에 적용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물 및 방법은 HSV-1, HSV-2 및 HSV-6을 포함하는 포진 바이러스, 사이토메갈로바이러스(CMV), 엡스타인-바르 바이러스(EBV), 바리셀라 조스터 바이러스(VZV), 인플루엔자 바이러스, 사람 림프친화성 바이러스(예를 들어 HTLV-1), 사람 면역결핍 바이러스(예를 들어 HIV-1), 유두 바이러스 및 호흡 합포체 바이러스에 의해 유발되는 것과 같은 다양한 바이러스 감염증을 치료하거나 예방하는데 유용하다. 일부 조성물의 세포 증가 억제 활성으로 인하여, 본 발명의 조성물 및 방법은 또한 악성 세포 성장 및/또는 전이를 억제하는데 유용하다. 이러한 세포 억제는 널리 공지된 암 치료법(예를 들어, 조사 및/또는 화학 요법)과 결부되어 종양 또는 다른 암세포 성장을 국소 또는 부분적으로 억제시킨다.

달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 과학적 용어 및 기술적 용어는 관련 기술의 당업자들에게 통상적으로 이해되는 용어들이다. 다르게 언급하지 않는 한, 본원에 사용되거나 숙고되는 기술은 당업자에게 널리 공지된 표준 방법들이다. 실시예는 단지 예시를 위한 것이다.

실시예 1

C ₂₁ 내지 C ₂₈ 지방족 알코올의 항바이러스 활성

알코올, n-도코사놀(순도 98% 초과; 뉴저지 뉴욕에 거주하는 엠. 마이클로부터 구입)에 대해 설명된 하기 공정을 사용하여, 지방족 알코올을 계면활성제 플루로닉 에프-68(뉴저지 파시퍼니에 소재한 바스프 코포레이션 제품)중에 현탁시켰다. 계면활성제를 37℃의 둘베코의 고 글루코오스 변형된 이글스 배지(Dulbecco's high-glucose modified Eagle's medium(DMEM); 메릴랜드 워커스빌에 소재한 휘타커 바이로프로덕츠사 제품)에서 10mg/ml로 희석시키고, 용액을 50℃까지 가열시켰다. n-도코사놀을 계면활성제 용액에 대한 최종 농도 30mM에 첨가하고 혼합물을 초음파기(브란손 450)을 사용하여 65W의 초기 출력에서 21분 동안 초음파 처리하여 88℃까지 가열시켰다. 생성된 현탁액은 투과형 전자 현미경에 의해 측정된 평균 크기가 0.3μ인 구형 입자를 함유한다. 지방족 알코올이 첨가되지 않은, 플루로닉 에프-68을 함유하는 조절 용액 및 상이한 농도의 계면활성제 및/또는 n-도코사놀을 함유하는 현탁액을 같은 공정을 사용하여 제조하였다.

n-도코사놀 현탁액에 대해 설명된 것과 같은 공정을 사용하여, 스테아릴 알코올(C₁₈), 아라키딜 알코올(C₂₀), 헤네이코사놀(C₂₁), 리노세릴 알코올(C ₂₄), 및 n-헥사코사놀(C₂₆)의 현탁액을 제조하였다. C₂₂ 보다 더 긴 지방족 알코올에 있어서, 리노세릴 알코올에 대해서는 80℃까지 및 n-헥사코사놀(C₂₆) 및 1-옥타코사놀(C₂₈)에 대해서는 90℃까지, 혼합물을 가열한 후에 초음파 처리하였다. n-헥사데칸올은 알드리히 케미칼스(위스콘신 밀워키 소재), 스테아릴 알코올 및 아라키딜 알코올은 엠. 마이클(뉴저지 뉴욕 거주), 그리고 다른 화합물은 시그마 케미칼 코포레이션(미주리 세인트 루이스 소재)로부터 구입하였다.

단순포진 바이러스 2(HSV-2; 메릴랜드 록크빌에 소재하는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션으로부터 구입; ATCC No. VR-540)의 MS 균주를 아프리카산 녹색 원숭이 콩팥 세포(베로 세포(Vero cell); ATCC No. CCL 81)을 감염시키는데 사용하여 플라크 제형의 효능에 대한 지방족 알코올 현탁액의 효과를 결정하였다. 35mm 웰당 1.8ml 배지중의 6×10⁵ 세포 또는 16mm 웰당 0.8ml 배지중의 3×10⁵ 세포를 사용하여, 베로 세포를 10% CO₂를 함유하는 축축해진 인큐베이터내에서 37℃에서 5% 우태아 혈청, 나트륨 피루베이트, L-글루타민, 페니실린/스트렙토마이신 및 1mM 헤페스 완충액으로 보충된 DMEM에서 배양시켰다. 대조 계면활성제 현탁액 또는 지방족 알코올을 함유하는 현탁액을 초기 배양물에 첨가하였다. 24시간 후에, HSV-2 바이러스를 175 pfu/35mm 웰 및/또는 50pfu/16mm 웰을 사용하여 배양물에 첨가하였다.

HSV-2 첨가로부터 42시간 후에, 배양물을 생리 식염수 용액으로 한번 세척하였다. 세포를 고정시키고 카르볼-푸치신(carbol-Fuchsin)(1.25mg/ml) 및 메틸렌 블루(2.5mg/ml)을 함유하는 메탄올로 착색시키고 플라크에 대해 기록하였다. 제시된 자료는 일반적으로 10% 미만으로 변화되는 복제 배양물의 평균값이며, 통계적 비교는 스튜던트 t 시험(Student's t test)을 사용하여 수행하였다.

C₂₁, C₂₄, C₂₆ 또는 C₂₈ 지방족 알코올을 함유하는 현탁액은 n-도코사놀(C₂₂)의 경우와 유사한 복용량 반응 곡선을 갖는 베로 세포내 HSV-2 플라크 생성을 억제하였다. 전형적인 결과가 도 1에 도시되어 있다. 플라크 생성의 50% 억제(EC₅₀)에 요구되는 유효 농도(mM)을 표(1)에 기록하였다.

HSV-2 플라크 형성의 알코올-현탁액 억제

탄소쇄 길이	분자량	50% 억제^* 농도 (mM)
18	284.6	독성적^**
20	298.6	독성적^**
21	312.6	16.0
22	326.6	8.6
24	354.6	14.1
26	382.6	8.4
28	410.6	10.5
* 베로 세포에 첨가된 HSV-2에 의한 플라크 형성의 억제%는 상이한 농도에서 지시 알코올로 세포의 12시간 인큐베이션 후에 측정된 것이며, 억제율은 알코올 농도 함수로서 플로팅되었다; 50% 억제에 요구되는 알코올 농도는 선형 회귀에 의해 측정되었다.** "독성적"이라는 것은 세포 분자막이 1.5mM 이상의 알코올을 함유하는 현탁액으로 12시간 인큐베이션 거의 막바지 쯤에 파괴되었음을 의미하며; 비독성적 농도에서 어떠한 상당한 항바이러스 활성도 기록되지 않았다.

HSV-2 플라크 형성의 억제에 관한 명백한 사슬 길이는 없었다. 모든 C₂₁ 내지 C₂₈ 알코올은 HSV-2 플라크 생성을 억제하였으며, 어떠한 화합물도 C₂₂ 보다 훨씬 더 큰 활성을 나타내지 못했다. 홀수 사슬 길이 화합물, 헤네이코사놀(C₂₁)은 또한 어떠한 명백한 사슬 길이 효과도 없음을 보여주는 HSV-2에 의해 플라크 생성을 억제하였다.

스테아릴 알코올(C₁₈) 및 아라키딜 알코올(C₂₀) 현탁액은 바이러스 억제 활성이 n-도코사놀에서 관찰되는 양으로 첨가되는 경우 베로 세포에 독성적이었다. 세포에 비독성적인 농도(스테아릴 알코올 0.2μM 및 아르아시딜 알코올 2μM)에서, 같은 농도의 C₁₈ 및 C₂₀ 지방족 알코올은 바이러스 플라크 생성의 어떠한 억제도 나타내지 않았다. 지방족 알코올이 없는 계면활성제의 대조 현탁액은 세포독성적이지 않았으며 항바이러스 활성을 나타내지 않았다.

실시예 2

계면활성제 대 지방족 알코올의 비의 증가에 관한 효과

계면활성제 대 지방족 알코올의 비(w:w)를 증가시키는 것의 항바이러스 효과는 플루로닉 에프-68 대 n-도코사놀의 비를 증가시키는 것을 사용하여 설명되었다(계면활성제 대 알코올의 비(w:w) 1:1을 사용하는 실시예 1과 비교). 비가 1:1인 현탁액은 n-도코사놀(분자량 326.57) 대 계면활성제(분자량 8,400) 분자에 대하여 26:1의 분자비를 갖는다. 일반적으로, 계면활성제의 양을 증가시키는 것은 현탁액중의 입자 크기를 감소시키며, 다중막 보다는 보다 더 작은 단일막 소포의 형성을 야기시킨다[참고문헌: Sandra, A. and R. E. Pagano, J. Biol. Chem. 254:2244-2249, 1979]. 이러한 사실에 의해 세포와의 상호작용에 이용되는 입자 표면에서 보다 많은 알코올이 생성된다.

일정량의 알코올을 사용하면서 최종 현탁액중의 플루로닉 에프-68 대 n-도코사놀의 비가 3:1, 5:1 및 10:1이 되도록 계면활성제의 양을 증가시켜서 실시예 1에 기술된 바와 같이 n-도코사놀의 현탁액을 제조하였다. 계면활성제 대 알코올의 비를 증가시키는 것은 베로 세포 배양액중의 현탁액의 항바이러스 효과를 증가시켰다(도 2 참조). 즉, 3:1의 계면활성제 대 알코올의 비를 갖는 현탁액은 1:1의 비(n-도코사놀≥8mM)를 갖는 현탁액보다 훨씬 더 큰 항바이러스 효과를 보여주었으며; 5:1의 비를 갖는 현탁액은 1:1의 비(n-도코사놀≥1mM)를 갖는 현탁액보다 증가된 활성을 보여주었다. 상기 시험된 비 각각에 대하여 현탁액중의 동일한 농도의 계면활성제로 인큐베이션된 대조 배양액이 본질적으로 어떠한 항바이러스 활성도 나타내지 않았기 때문에 항바이러스 활성은 현탁액중의 n-도코사놀에 의존하였다. (도 2b 참조).

증가된 계면활성제 대 알코올의 비는 또한 계면활성제n-[1·¹⁴C]도코사놀 현탁액으로 24시간 동안 인큐베이션된 베로 세포를 사용하여 측정한 바 세포 결합된 n-도코사놀의 양의 증가와 연관되었다. 4:1 비의 계면활성제 대 n-도코사놀을 함유하는 현탁액으로 인큐베이션된 세포는 7.8×10^-6㎍/세포를 결합시켰으며, 반면에 1:1 비의 현탁으로 인큐베이션된 등량의 배양액은 3.1×10^-6㎍/세포를 결합시켰다. n-도코사놀의 최적 항바이러스 활성은 약 4:1 내지 5:1 비율(w:w)의 계면활성제 대 알코올 비로 수득되었다.

지방족 화합물의 항바이러스 활성은 현탁액중의 특정의 비이온성 계면활성제 및 지방족 화합물의 독특한 조합 특성이 아니었다. 즉, 다른 세정제가 지방족 알코올의 효과적인 항바이러스 현탁액을 생성시켰다. a) 90℃에서 1.5g의 세정제로 2.5g의 n-도코사놀을 용융시키고, b) 용융된 용액을 90℃에서 500ml 염수, 및 폴리비닐피롤리돈(PVP)과 혼합시키고, c) 5사이클 동안 1300psi에서 미세유동화기를 통해 고온의 혼합물을 처리하고, d) 처리된 혼합물을 중공 파이버 카트리지를 통해 한외여과시켜 초과량의 세정제 및 PVP를 제거함으로써 비이온성 옥톡시놀 세정제(TRITON X-100, Rohm & Hass)를 갖는 n-도코사놀 현탁액을 제조하였다. n-도코사놀이 제거된다는 것을 제외하고는 유사한 방식으로 대조 세정제 현탁액을 제조하였다. n-데코사놀의 데옥시콜레이트(계면활성제 대 알코올의 중량비 1:1)를 본질적으로 상기된 바와 같이 제조하였다.

n-도코사놀의 옥톡시놀 및 데옥시콜레이트 현탁액 둘 모두 베로 세포 검정에서 HSV-2 플라크 생성을 억제하였다. 전형적인 결과는 도 3에 도시되어 있다. 옥톡시놀/n-도코사놀 현탁액은 약 4.5mM의 EC₅₀과 비교하여 2mM 이상의 n-도코사놀 농도에서 옥톡시놀 대조군에 상대적인 플라크 형성을 억제하였다. 지방족 알코올 현탁액을 제조하는데 사용된 비이온성 계면활성제로는 현탁액의 항바이러스 활성을 설명하지는 못한다.

계면활성제 대 n-도코사놀의 비의 증가로 인해 현탁액의 항바이러스 활성이 상당히 증가되었다. 즉, 현탁액중의 n-도코사놀의 양은 증가된 플라크 형성의 50% 억제(예를 들어 15mM에서 3mM로)를 요구하였다.

실시예 3

지방족 알칸 즉, n-도코산의 항바이러스 활성

계면활성제/n-도코산 (시그마 케미칼 컴파니(Sigma Chemical Co.)) 현탁액을 본질적으로 실시예 1에 기술된 바와 같이 제조하였다. 본질적으로 실시예 1에 기술된 바와 같이 HSV-2 플라크의 억제율을 측정하기 위해 베로 세포 검정을 사용하여 계면활성제/n-도코산 현탁액의 항바이러스 활성을 유사한 계면활성제/n-도코사놀 현탁액의 활성과 비교하였다.

도 4에 도시된 바와 같이, 계면활성제/n-도코산 현탁액은 계면활성제/n-도코사놀 현탁액의 용량 작용 곡선과 유사한 용량 작용 곡선을 갖는 베로 세포 배양액에서 HSV-2에 의해 플라크 생성을 억제하였다. n-도코사놀(□) 및 n-도코산(△)의 플루로닉 에프-88 현탁액은 HSV-2 첨가 전에 12시간 동안 현탁액으로 인큐베이션된 배양된 베로 세포에서 HSV-2 바이러스 플라크 형성을 억제하였다. 대조 계면활성제 현탁액은 어떠한 항바이러스 활성도 나타내지 않았다(데이타는 도시되지 않음). 따라서, C₂₂ 지방족 알코올 및 알칸 둘 모두 히드록실 잔기가 바이러스 플라크 형성의 억제에 의해 측정된 바와 같이 활성을 위해 요구되지 않음을 나타내는 비교할 수 있을 정도의 항바이러스 활성을 보여주었다.

실시예 4

n-도코사놀의 1-히드록실 잔기의 산화로 인한 세포 파괴

비이온성 세정제 계면활성제/n-도코사노산 (시그마 케미칼 컴파니) 현탁액을 제조하고, 본질적으로 실시예 1에 기술된 바와 같이 베로 세포 및 HSV-2를 사용하여 항바이러스 활성을 시험하였다. C₂₂ 지방산은 n-도코사놀로 인해 바이러스 억제가 일어나는 농도와 동등한 농도에서 사용될 때 베로 세포에 독성적이었다(표 2 참조). 4mM 내지 15mM에서 도코사노산의 현탁액을 배양액에 첨가한 경우, 둥글게 되어 플레이트로부터 분리되었다. n-도코사노산의 허용가능한 농도(≤2mM)에서, 항바이러스 활성은 동일 농도에서 n-도코사놀 현탁액에서 관찰된 활성과 거의 동등하였지만, 4 내지 15mM n-도코사놀 현탁액에서 관찰된 농도보다는 상당이 작았다. 이와 같이, C₂₂ 지방산은 세포에 허용가능한 희석에서 약간 항바이러스 활성을 보이지만 상응하는 지방족 알코올과 비교하여 증가된 세포 파괴를 갖는다.

플라크 형성의 %억제율

mM^*	도코사놀	도코산	도코사노산	에루실 알코올	브라시딜 알코올
15	66	58	독성적^†	독성적	ND
8	44	55	독성적	독성적	48
4	36	42	독성적	독성적	44
2	40	31	30	독성적	35
1	14	28	16	93	27
0.5	ND^‡	ND	26	91	ND
0.25	ND	ND	ND	70	ND

*에루실 및 브라시딜 알코올이 바이러스와 동시에 첨가되었다는 것 이외에, HSV-2 바이러스의 첨가 12 시간 전에 베로 세포 배양액중의 PLURONIC F-68(분자량 8,400)을 갖는 현탁액중의 n-도코사놀(분자량 326.6), n-도코산(분자량 310.6), n-도코사노산(분자량 340.6) 및 에루실 알코올(분자량 324.6), 및 PLURONIC F-908(분자량 25,000)을 갖는 현탁액중의 브라시딜 알코올(분자량 324.6)의 mM 농도.

† "독성적"은 세포 분자막이 제 1 열에 기재된 알코올 또는 지방산의 농도에서 현탁액의 첨가 22 시간 후 파괴되었음을 의미한다.

‡ "ND"는 측정되지 않음을 의미한다.

** 플라크 형성 억제율은 어떠한 현탁액도 첨가되지 않은 베로 세포의 대조 감염과는 대조를 이다. 또 다른 대조군은 어떠한 활성 성분도 첨가되지 않은 계면활성제 현탁액이었으며, 감염된 베로 세포에 첨가될 때 어떠한 현탁액도 첨가되지 않은 베로 세포의 바이러스 감염에 대하여 5% 만의 억제율을 보여주었다.

실시예 5

C ₂₂ 모노-불포화된 지방족 알코올의 항바이러스 활성

계면활성제/에루실 알코올 (시스-13-도코산-1-올; 시그마 케미칼 컴파니) 현탁액을 제조하고, 본질적으로 실시예 1에 기술된 바와 같이 베로 세포 및 HSV-2를 사용하여 항바이러스 활성을 시험하여 탄화수소 사슬의 불포화 효과를 결정하였다. 계면활성제/에루실 알코올 현탁액은 n-도코사놀이 유효한 농도(2-15mM)에서 배양액에 첨가되었을 때 베로 세포에 대하여 독성적이었다. 그러나, 표 2에 기재된 바와 같이 세포에 허용되는 농도(≤1mM)는 HSV-2 플라크 생성의 상당한 억제(93% 이하)를 보여주었다. 더욱이, 어떠한 세포 파괴도 1mM 에루실 알코올에서 관찰되지 않았다. 에루실 알코올에 대하여 50%까지 플라크 형성율을 억제하는데 요구되는 유효 농도(EC₅₀=0.15mM)는 n-도코사놀에 대해 요구되는 농도(EC₅₀=9mM)보다 60배 더 낮았다. 이와 같이, 치료 지수는 6.7 (즉, 1mM/0.15mM) 이상이다.

유사한 방식으로, C₂₂ 모노-불포화된 알코올, 브라시딜 알코올(트랜스-13-도코센-1-올)의 트랜스 이성질체의 항바이러스 활성을 결정하였다. 또 다른 비이온성 계면활성제, TETRONIC-908(바스프)로 현탁액을 제조하고, 본질적으로 실시예 1에 기술된 방법을 사용하여 HSV-2 대신에 HSV-1으로 하여 바이러스 억제 검정을 수행하였다. 표 2에 나타난 바와 같이, 브라시딜 알코올은 n-도코사놀과 유사한 항바이러스 효능을 나타낸다. 브라시딜 알코올의 세포 독성은 에루실 알코올의 세포 독성 보다 현저하게 작았다.

이들 결과를 기초로 해 볼때, C₂₂ 지방족 알코올의 위치 13에 하나의 시스(트랜스가 아님) 이중 결합을 첨가시키면 항바이러스 활성이 크게 증가하였다. 트랜스 이중 결합을 갖는 알코올은 시스 이중 결합을 갖는 알코올 보다 독성이 덜했다. 증가된 세포독성은 시스 이중 결합으로 인한 분자내의 굽음(bend)에 기인할 수 있다.

계면활성제/에루실 알코올 현탁액은 직접적인 바이러스사멸 효과를 갖지 않았다. 즉, HSV-2 바이러스를 계면활성제/에루실 알코올 현탁액과 2시간 동안 인큐베이션시킨 경우에 베로 세포 상에서의 후속 플라크 형성에 의해 측정하여 바이러스를 불활성화시키지 않았다.

실시예 6

포유동물 세포 배양액에서의 에루카미드 시험

에루카미드(시스-13-다코세노아미드; 분자량 = 337.59)는 에루실 알코올과 구조상 유사한 하나의 이중 결합을 갖는 C₂₂ 장쇄 아미드이다. 비이온성 세정제 계면활성제/에루카미드(알드리히 케미칼 컴패니(Aldrich Chemical Co.)) 현탁액을 테트로닉-908(TETRONIC-908)으로 제조하고, 본질적으로 실시예 1에 기재된 바와 같이 베로 세포 및 HSV-2를 사용하여 항바이러스 활성에 대해 시험하였다. C₂₂ 아미드는 3mM 이상의 농도로 사용된 경우에 베로 세포에 대해 독성이었는데, 이는 에루시 알코올 및 n-도코사노산에 의해 관찰되는 독성과 유사하다(표 2 참조). 3mM 내지 15mM의 에루카미드의 현탁액을 배양액에 첨가한 경우에, 세포는 구형이 되며, 플레이트로부터 분리되었다. 현탁액 중의 에루카미드의 저농도에서, 현저한 항바이러스 활성이 관찰되었다. 에루카미드의 허용가능한 농도(1.7mM 이하)에서, 에루카미드 현탁액의 항바이러스 활성은 에루실 알코올의 현탁액의 본질적으로 등가의 농도 보다 작았지만, n-도코사놀, n-도코산, n-도코사노산 또는 브라시딜 알코올의 현탁액의 항바이러스 활성 보다 컸다. 즉, 에루카미드 현탁액에 대한 플라크 형성의 % 억제율은 1.7mM에서 78%, 1.5mM에서 68%, 1.2mM에서 58%, 0.89mM에서 44%, 0.59mM에서 42% 및 0.03mM에서 34% 였다. 따라서, C₂₂ 아미드는 세포에 대해 허용가능한 희석율에서 현저한 항바이러스 활성을 나타내지만, C₂₂ 포화 지방족 알코올(n-도코사놀)에 비해 세포독성을 증가시키며, 상응하는 C₂₂ 모노-불포화된 에루실 알코올에 의해 관찰되는 항바이러스 활성과 유사하였다.

실시예 7

포유동물 세포 배양액에서의 세포독성

n-도코사놀은 인큐베이션을 연장하여도 최소 세포독성을 나타낸다. 하기 3가지 검정을 사용하여 세포 생존 및 증식에 대한 지방족 알코올의 효과를 정량하였다: 1) 혈구계로 세포를 계수하고, 트리판 블루를 배제한 세포 수를 측정한다; 2) 세포 DNA로의 ³H-티미딘의 혼입을 ³H-티미딘(뉴 잉글랜드 뉴클리어(New England Nuclear)로부터 입수)을 배양기에 첨가시킴으로써 측정하고, 세포를 물로 용해시키고, DNA를 필터지 상에서 수거한다; 및 3) 전체 세포 단백질을 96-웰 미소적정판에 사용하기에 적합한 술포르호다민 검정을 사용하여 측정한다 [참조: Skehan, P. et al., J. Natl. Cancer Inst. 82:1107-1112, 1990]. 이들 모든 검정은 널리 공지된 세포 생존성 및 세포독성 검정이었다.

시험된 세포로는 베로 세포(실시예 1 참조), WI-38, 사람 배 이배체 폐 세포주(ATCC No. CCL 75), HFL1, 사람 태아 폐 이배체 세포주(ATCC No. CCL 153) 및 사람 태아 포피(ATCC No. 1835)가 있다. 쥐과동물 B 세포 하이브리도마 라인(MBI-9로 표시됨)을 구성하고, ATCC TIB 또는 HB 세포주 중의 어느 하나와 같은 그 밖의 종양 라인 및 하이브리도마를 동등하게 사용하여 세포 증식에 대해 현탁액중에서 지방족 화합물의 효과를 결정할 수 있다고 하더라도, 이전에 기술된 바와 같이[참조: Marcelletti, J.F. et al., J. Immunol. 148:3857-3863, 1992] 배양하였다. 모든 세포를 당 분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 10% 우태아 혈청, 피루브산 나트륨, L-글루타민 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 DMEM에서 배양하였다. 지방족 알코올의 현탁액을 본질적으로 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조하였다.

제 1 검정을 사용한 경우에, 베로(그린 원숭이 신장) 세포를, 배양액이 35mm 웰 당 1.8ml 배지 중의 6 x 10⁵개 세포 또는 16mm 웰 당 0.8ml 배지 중의 3 x 10⁵ 세포로 접종된 경우에, 관찰가능한 유해 효과 없이 계면활성제 현탁액에 함유된 9mM n-도코사놀의 존재하에 72시간까지 배양하였다. 전형적인 데이터를 표 3에 제시하였고, 이는 생존가능한 베로 세포 및 포피 섬유아세포의 전체 수는 지방족 알코올 현탁액과 24시간 내지 72시간 배양한 후에 변하지 않았음을 나타낸다. 정상 피부 섬유아세포(ATCC CRL 1900), WI-38 폐 세포, 사람 태아 폐 세포 및 B 세포 하이브리도마를 포함하는 시험된 그 밖의 세포주는 세포가 비교적 고밀도로 접종된 경우에 n-도코사놀 현탁액의 존재하에 유사한 세포 생존성을 나타내었다. 지방족 알코올이 없는 계면활성제의 대조 현탁액은 또한 베로 세포에 대한 세포독성을 나타내지 않았지만, 알코올 함유 현탁액에 의해 관찰되지 않았던 태아 포피 세포에 대한 시간 의존성 세포독성을 나타내었다. 태아 포피 세포주의 경우에, 지방족 알코올을 첨가시키면 계면활성제의 세포독성 효과가 명백하게 감소되었다.

n-도코사놀 함유 또는 비함유 계면활성제 현탁액에 노출시킨 후의 세포 생존력

		베로 세포		태아 포피 세포
처리^*	인큐베이션(시간)	생존 세포수^**	대조군(%)^***	생존 세포수^**	대조군(%)^***
n-도코사놀 + 계면활성제	24	7.48 x 10⁵	101	2.41 x 10⁵	131
n-도코사놀 + 계면활성제	48	8.69 x 10⁵	137	2.78 x 10⁵	118
n-도코사놀 + 계면활성제	72	8.61 x 10⁵	120	2.72 x 10⁵	118
계면활성제	24	7.1 x 10⁵	95.7	1.55 x 10⁵	84
계면활성제	48	7.2 x 10⁵	107	1.66 x 10⁵	70
계면활성제	72	6.6 x 10⁵	89.0	1.0 x 10⁵	43

^*베로 또는 태아 포피 세포를 1.4mM 계면활성제에 현탁된 9mM n-도코사놀과 인큐베이션시키거나 1.4mM 계면활성제를 함유하는 배지와 인큐베이션시킨다. 현탁액 중의 계면활성제 대 n-도코사놀의 비는 4:1(w:w) 이었다.

^**표시된 인큐베이션 시간 후에, 세포를 트립신처리하고, 생존성 세포의 수를 트리판 블루 배제에 의해 측정하였다.

^***대조 샘플을 배지만의 존재하에 인큐베이션시켰다.

세포주가 n-도코사놀과의 72시간 인큐베이션 후에도 트리판 블루에 대해 불투과성으로 남아있으나, 정상 피부 섬유아세포, 포피 섬유아세포, WI-38 세포 및 사람 태아 폐 세포는 광학 현미경을 사용하여 조사한 경우에 형태의 검출성 변화를 나타내었다. 알코올 현탁액과의 72시간 인큐베이션 후에, 다수의 투명 영역이 세포의 세포질에 나타났고, 세포는 액포화되었다. 대조 계면활성제 현탁액으로 처리된 세포는 72시간 인큐베이션 후에 액포화되지 않았다.

n-도코사놀 현탁액에 의해 일반적으로 관찰되는 세포독성의 결핍과는 대조적으로, 스테아릴 알코올(C₁₈)과 아라키딜 알코올(C₂₀)의 현탁액은 시험된 모든 세포주에 대해 극히 세포독성이 있었다. 이러한 C₁₈ 및 C₂₀ 지방족 알코올이 존재하는 경우에, 단층에서 증식하는 세포는 플레이트로부터 분리되며, 용해되었다. 현탁된 세포는 스테아릴 및 아라키딜 알코올 현탁액에 노출되는 경우에 또한 용해되었다.

생존성을 DNA에 ³H-티미딘 혼입을 측정하거나 술포르호다민 B로 염색시켜 전체 세포 단백질을 측정함으로써 다양한 세포주에서 정량하였다. 전형적인 결과를 도 5에 도시하며, 이는 C₁₈, C₂₀ 및 C₂₂ 지방족 알코올의 다양한 농도에서 B 세포 하이브리도마의 DNA로의 ³H-티미딘 혼입의 억제를 나타낸다. B 세포주 및 다른 세포주에 대한 스테아릴 알코올(C₁₈)에 대한 IC₅₀는 35μM 미만이었고; 아라키딜 알코올(C₂₀)에 대한 IC₅₀은 약 1.7mM 이었다. 대조적으로, 외삽에 의해 평가된 n-도코사놀에 대한 IC₅₀은 약 20mM 이었고, 계면활성제만으로 관찰된 IC₅₀보다 컸다. 따라서, C₂₀ 지방족 알코올이 탄소가 2개 줄면 LC₅₀이 약 50배 감소하였다.

도 5에 도시된 데이터를 현탁액과 48시간 인큐베이션한 후에 수득하였다; 그러나, 명백한 독성은 인큐베이션 24시간 내에는 분명하였다. 헤네이코사놀(C₂₁)의 현탁액 및 장쇄 알코올, 링고세릴 알코올(C₂₄), n-헥사코사놀(C₂₆) 및 n-옥타코사놀(C₂₈)의 현탁액은 n-도코사놀 현탁액에 의해 관찰되었던 세포독성의 동일한 최소 수준을 나타내었다.

세포 증식에 대한 n-도코사놀 및 n-도코산의 효과(세포성색전)를 96-웰 플레이트에서 인큐베이션시킨 사람 포피 섬유아세포의 배양액 상에서 술포르호다민 염색 검정을 사용하여 정량하였다. 도 6a 및 6b에 도시된 결과는 n-도코사놀 현탁액의 억제 효과가 시험관내 배양액의 초기 세포 밀도에 좌우되는 반면에, n-도코산 현탁액은 어느 하나의 세포 밀도에서 대조 계면활성제 현탁액과 비교하여 현저한 항 증식 효과를 나타내지 않았음을 입증한다. 도 7에 도시된 결과는 n-도코사놀 현탁액과 관련된 세포가 전체 인큐베이션 기간에 의존하여 보다 큰 증식 억제를 나타냄을 입증한다. 즉, 인큐베이션이 길수록 세포 증식의 억제율이 높았다.

포피 섬유아세포를 지방족 알코올 현탁액 또는 대조 계면활성제의 존재 또는 부재하에 웰 플레이트 중에서 웰 당 1,000개 세포(도 6a 및 도 7) 또는 웰 당 30,000개 세포(도 6b)로 플레이팅하였다. 37℃에서 72시간 또는 96시간 동안 인큐베이션시킨 후, 세포를 트리클로로아세트산으로 처리하고, 술포르호다민으로 염색하고, 미소적정판 판독기에서 OD₅₄₀을 측정하여 정량화시켰다. 도 6은 96시간 동안 인큐베이션시킨 세포에 대해 얻어진 결과를 도시한 것이고, 도 7은 96시간과 비교하여 72시간 후에 얻어진 세포에 대한 결과를 도시한 것이다.

3 mM보다 많은 n-도코사놀의 현탁액은 96시간 인큐베이션 후에 검정한 1,000개 세포/웰로 플레이팅된 세포의 증식을 나타내었다 (도 6a). 대조적으로, C₂₂ 알칸인 n-도코산은 계면활성제 대조군과 비교하여 최소 항증식 효과를 나타내었다 (도 6a). 더 높은 초기 세포 밀도(도 6b), 더 짧은 인큐베이션 시간(도 7) 또는 3 mM 미만의 농도에서, n-도코사놀은 대조군(현탁액 중에만 존재하는 계면활성제)와 비교하여 세포 증식을 억제하지 않았다. n-도코사놀을 도 6 및 7에 대해 기술된 바와 동일한 증식 검정을 사용하여 WI38-세포, 사람 배 폐세포 및 정상 피부 섬유아세포와 인큐베이션시킨 경우에 유사한 결과가 얻어졌다.

탄소수가 20개보다 많은 지방족 알코올을 함유하는 현탁액은 세포 독성을 거의 나타내지 않았다. 명백한 세포 증식 억제 효과는 세포를 저밀도로 플레이팅시키고, 72시간 이상 동안 3 Mm보다 많은 n-도코사놀과 인큐베이션시킨 경우에만 나타났다. 지방족 알코올이 결핍된 대조군 현탁액은 세포 증식 억제 효과를 나타내지 않았다.

항바이러스 활성에 대한 사슬 길이의 명백한 효과가 나타나지 않은 실시예 1에 제공된 결과와 대조적으로, 지방족 알코올의 사슬 길이가 이것의 세포 독성에 영향을 미쳤다. 계산된 IC₅₀ 측정값은 C₂₂ 또는 C₂₁ 알코올에 대해 15 mM보다 큰 값으로부터, C₂₀ 알코올에 대해 1.5 mM로, C₁₈ 알코올에 대해 35μM 미만으로 감소하였다. 4개의 탄소만이 적은 알코올인 C₁₈ 사슬 길이를 갖는 지방족 알콜에 의한 독성의 현저한 증가는 예측되지 않았다.

스테아르산 조성물의 항바이러스 활성

본질적으로 실시예 1에 기술한 바와 같이, 에탄올 중에 용해시키거나 테트로닉 908(Tetronic 908)중에 현탁시킨 스테아르산(분자량 284.5)의 항바이러스 활성 및 세포독성을 측정하였다. 항바이러스 활성을 본질적으로 실시예 1에 기술한 바와 같이 수행한 베로 세포 배양에서 HSV-2 플라크 형성의 % 억제율로서 측정하였다. 세포독성을 비처리 대조군 배양액과 비교하여 배양판 중에서 세포 성장 및 보존에 대해 세포의 현미경 시험에 의해 평가하였다. 명백한 독성은 비처리 세포와 구별되지 않는 처리된 세포의 단층으로서 규정되지 않았다. 대조군과 비교하여 세포 단층의 얇아진 정도로서 중간 독성이 규정되었다. 독성은 처리된 세포의 단층을 배양판으로부터의 세포의 탈착에 증명되는 바와 같이 파괴시키는 농도로서 규정하였다. 테트로닉 908 중의 11μM 및 22μM 스테아르산 현탁액 및 에탄올 중의 3.5μM 스테아르산 용액에 대해서는 명백한 독성은 관찰되지 않았다. 이들 처리는 모두 감염된 대조군 세포 배양액에 대한 HSV-2 플라크 형성의 10% 미만의 억제를 나타내었다. 44μM 스테아르산-테트로닉 908 현탁액 및 35μM 스테아르산-에탄올 용액으로 처리한 후에 중간 독성이 관찰되었으며; 항바이러스 활성은 세포의 상태로 인해 정량화될 수 없었다. 88μM 내지 350μM 스테아르산의 현탁액 또는 용액은 모두 독성이고, 항바이러스 활성은 세포의 단층이 파괴되었기 때문에 측정될 수 없었다.

실시예 9

동물 모델 중에 n-도코사놀 또는 스테아르산을 함유하는 국소 적용된 조성물의 항바이러스 활성

스테아르산 함유 조성물의 항바이러스 활성을 HSV-2 감염의 기니아 피그 모델을 사용하여 생체내에서 확인하였다. 털을 제거한 기니아 피그(시험 1회당 6마리의 수컷, 각각의 체중 200 내지 300 g ; 매사츄세츠, 윌밍톤에 소재하는 챠알스 리버스 라보라토리즈(Charles Rivers Laboratories)로부터 입수함)를 마취시키고, HSV-2(베로 세포 중에서 성장시키고 표준 방법을 사용하여 정제한 ATCC 균주 VR-540)와 인큐베이션시켰다. 0일째에, 각각의 동물을 등의 4㎠ 면적 내의 6개의 접종 부위에서, 9.75×10⁶ PFU/㎖를 함유하는 생리학적 식염 용액 75㎕로 접종시켰다. 24시간 후 접종(1일)으로 시작하여, 동물을 하기에 기술되는 크림 또는 네거티브 대조군으로서 물로 매일 3 또는 5회 국소적으로 처리하고, 2일, 3일 및 4일 동안 동일한 비율로 계속 처리하였다. 접종 부위를 2일, 3일 및 4일째에 피부 자극 및 소포 형성에 대해 평가하였다. 자극을 0 내지 4의 스케일로 기록하였으며; 0은 홍진이 없는 정상 피부를 나타내고, 1은 약간의 홍진을 나타내고, 2는 중간 정도의 홍진을 나타내고, 3은 심한 홍진을 나타내고, 4는 출혈을 동반하는 심한 홍진을 나타낸다. 소포는 백색 유체 충전 농포로서 규정하였다.

국소 치료용 조성물은 n-도코사놀 함유 크림; 스테아르산 함유 크림; 및 위약이다. n-도코사놀 크림은 10% w/w n-도코사놀(뉴욕, 뉴욕에 소재하는 마이클 앤드 컴패니), 5% w/w 슈크로오스 스테아레이트(뉴욕, 뉴욕에 소재하는 코르다, 인코포레이티드), 8% w/w 광유 NF(뉴저지, 뉴어크에 소재하는 위트코 코포레이션), 5% w/w 프로필렌 글리콜 USP, 2.7% w/w 벤질 알코올 NF(뉴저지, 어빙톤에 소재하는 루거 케미컬 컴패니) 및 69.3% 정제수 USP를 함유했다. 스테아르산 크림은 10% w/w 스테아르산(오하이오, 신시내티 소재 헨켈), 5% w/w 슈크로오스 스테아레이트(뉴욕, 뉴욕에 소재하는 코르다, 인코포레이티드), 8% w/w 광유 NF(뉴저지, 뉴어크에 소재하는 위트코 코포레이션), 5% w/w 프로필렌 글리콜 USP, 2.7% w/w 벤질 알코올 NF(뉴저지, 어빙톤에 소재하는 루거 케미컬 컴패니) 및 69.3% 정제수 USP를 함유했다. 2가지 크림은 모두, 물을 제외한 모든 성분을 배합시키고, 80℃로 가열하고, 성분들을 400±5 RPM으로 교반시키고(하이돌프 RZR 205 교반기를 사용함), 여기에 85℃에서 물을 첨가하면서, 교반 속도를 1900±5 RPM으로 증가시킴으로써 제조하였다. 80℃에서 3분 동안, 혼합물을 30℃로 냉각시키면서 계속 교반시켰다 (약 8분). 위약은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 3350이 완전히 용융될 때까지 70% PEG 400 NF 및 30% PEG 3350 NF를 65℃로 가열한 후, 혼합물이 30℃로 냉각될 때까지, 혼합물을 400 RPM으로 계속 교반시킴으로써 제조하였다.

이들 시험의 결과를 표 4에 평균값으로서 요약하였다. 2일째의 측정은 접종 후 48시간 후에 이루어졌고; 3일째에는 접종후 72시간 후에, 4일째에는 접종후 96시간 후에 이루어졌다 (측정 1회당 총 6개 부위). 표 4로부터 알 수 있는 바와 같이, 2일째에 크림은 수처리 대조군에 비해 소포의 수에 현저히 영향을 주지 않고, 모든 부위는 자극을 나타내지 않았다. 3일째에, n-도코사놀 처리 부위는 수처리 대조군에 비해 소포의 수의 현저한 억제를 나타내었다. 하루에 n-도코사놀 함유 크림의 3회 도포는, 하루에 5회의 도포가 본질적으로 동일한 억제 수준을 나타내기 때문에 충분한 것으로보인다. 3일째에, 스테아르산 크림으로 하루에 3회 처리한 부위는 수처리 대조군과 비교하여 적절한 소포 억제를 나타내는 반면, 하루에 5회 처리된 부위는 통계적으로 현저한 소포의 억제를 나타내었다. 하루에 5회 PEG 위약의 도포는 어느 시점에서도 수처리 대조군과 비교하여 소포의 수를 현저히 감소시키지 않았다.

3일째에, n-도코사놀 및 스테아르산 크림 둘 모두에 의해 약간의 자극이 관찰되었다. 4일째에, 하루에 n-도코사놀 크림에 의한 3회 처리는, 자극이 거의 관찰되지는 않았지만, 대조군과 비교하여 소포의 수를 현저히 감소시켰다. 4일째에, 하루에 n-도코사놀 크림 또는 스테아르산 크림에 의한 5회 처리는, 2가지 처리 모두에 의해 약간의 홍진이 관찰되었지만, 대조군 및 위약에 비해 소포의 수를 현저히 감소시켰다.

이들 생체내 결과는 활성 성분으로서 n-도코사놀 및 활성 성분으로서 스테아르산을 함유하는 크림에 의한 HSV-2 감염의 국소 적용이 감염으로부터 유발되는 소포의 수를 현저히 감소시킬 수 있음을 보여준다. 활성 성분으로서 n-도코사놀을 함유하는 크림은, 하루에 3회 처리만으로도 소포의 수의 현저한 감소가 관찰되는 반면에, 활성 성분으로서 스테아르산만을 함유하는 크림에 의해 소포의 수의 감소를 관찰하기 위해서는 하루에 5회 처리가 필요하기 때문에, 바이러스 감염증을 치료하는 데에 더욱 효과적이다.

기니아 피그 모델에서의 HSV-2의 국소 적용

처리	소포의 수			자극 스코어
	2일	3일	4일	2일	3일	4일
물	45	34	19	0	0	0
n-도코사놀(3X/일)	40	12	3	0	1.2	0.8
n-도코사놀(5X/일)	43	5	3	0	1.3	1.3
스테아르산(3X/일)	49	17	11	0	1.2	0.8
스테아르산(5X/일)	49	13	5	0	1.7	2
위약(5X/일)	41	30	15	0	0	0

실시예 10

화상의 국소 적용

접촉성 피부염(화상)에 걸린 마우스 모델을 사용하여, 비처리 대조군 및 PEG 위약 연고로 처리된 마우스와 비교하여, 5% w/w 슈크로오스 스테아레이트를 함유하고 활성 성분으로서 스테아르산(5%, 10% 및 20% w/w) 또는 n-도코사놀(10% 및 12% w/w)을 갖는 국소 도포된 크림의 치료적 효능을 시험하였다. 크림 및 위약 연고를 본질적으로 실시예 9에 기술된 바와 같이 제조하였다. 각각의 시험군에 대해, CAF-1 마우스의 복부의 털을 제거하고, 페놀과 클로로포름의 혼합물(0.2% 2-메르캅토에탄올을 함유하고 1M 트리스 완충액(pH 8)으로 포화시킨 1:1 v/v)을 마우스 1마리당 2곳의 노출 부위에 도포하고(약 5 내지 8㎟/부위의 면적을 갖는 5㎕/부위), 공기 건조시켰다. 화상 부위를 페놀과 클로로포름의 혼합물의 도포후 0.5시간, 3시간 및 6시간 후에 크림 또는 위약 연고로 처리하고, 페놀과 클로로포름의 혼합물의 도포후 8시간 후에 스코어를 기록하였다. 화상 부위를 하기와 같이 수치적으로 기록하였으며; 0은 정상 피부를 나타내고, 1은 약간의 염증을 나타내고, 2는 적색 피부를 나타내고, 3은 부위 둘레에 적색 가장자리를 갖는 매우 적색인 피부를 나타내고 4는 궤양화를 나타낸다. 이들 수치적 스코어 각각의 더 크거나 더 작은 심도를 0.33 내지 0.5의 증가 또는 감소로 평가하였다.

이들 시험의 결과를 표 5에 요약하였다.

페놀 유도 화상의 치료에 크림을 함유하는 스테아르산 또는 n-도코사놀의 치료 효능

치료	부위의 수	평균 점수
없음	6	4.1
플라시보 연고	2	4.2
10% n-도코사놀 크림	4	0.9
12% n-도코사놀 크림	4	1.0
5% 스테아르산 크림	2	2.7
10% 스테아르산 크림	4	2.1
20% 스테아르산 크림	4	1.7

상기 결과는 스테아르산 및 n-도코사놀을 함유하는 크림으로 화상을 치료한 경우가 심한 홍반 및 궤양형성을 보여주었던 치료받지 않거나 플라세보 치료된 대조군에 비해 병변 중증도가 상당히 감소하였음을 보여준다. 5%, 10% 또는 20% w/w 스테아르산 크림으로 병변을 치료한 경우의 치료적 이점은 10% 또는 12% w/w n-도코사놀 함유 크림을 유사한 복용량으로 병변을 치료한 후에 나타난 것보다 덜한 것으로 나타났다. 스테아르산과 n-도코사놀 함유 크림 둘 모두, 화상 병변에 대한 치료적 효과에 있어서 비선형적 증가와 활성 성분의 농도 증가가 관찰되었다.

실시예 11

사람 임상 연구에서 국소 적용된 n-도코사놀 및

스테아르산 함유 조성물이 항바이러스 활성

스테아르산 함유 조성물의 항바이러스 활성을, 국소 구강 포진 발병(즉, 초기 전구증 지각 시기에서의 소수포가 아닌 홍반 또는 구진)이 생긴 12 시간내에 치료가 시작되는 648명의 면역적격 환자에게 구강 포진 치료의 생체내 임상 연구로 확인하였다. 이들 환자는 치료받지 않은 발병 지속 기간으로 보고된 평균 8.9일(지각 및/또는 홍반의 개시에서 완전 치유까지) 동안 구순 포진이 급성 재발한 내력이 있다. 이 기간은 이 질병에 대한 공개된 보고서에서의 구강 포진 발병 기간인 8 내지 10일의 통상적인 기간과 일치한다[참조: R.J. Whitley, in Fields Virology at p. 2316].

상기 연구에서, 필수적으로 실시예 9에서와 같이 제조된 10% n-도코사놀 또는 10% 스테아르산을 함유하는 크림중 하나를 환자에 무작위로 적용시켰다. 환자에게 최소 5일 동안 매일 5회 편재된 포진 발병 영역에 크림을 국소적으로 도포하였다(지정 도포수 25회, 심한 운동, 샤워 또는 목욕 후에 다시 도포, 재도포는 지정 도포수에 포함시키지 않음). 포진 발병이 5일 후에도 지속되는 경우, 환자에게 크림을 10일까지 지속적으로 도포하였다(지정 도포수 50회). 20명의 환자가 10일 넘게 계속 치료받았다. 환자에게 일당 도포수를 유지시키고, 병변 통증 및 가려움 증상을 치료를 받는 기간 동안 일당 2회 관찰하여 치료의 효과를 평가하였다.

치료 평가에 사용된 기준에는 발병 부전을 포함하는 치유(소수포 단계에 이르기 전의 발병 관련 증상의 완전한 해소로서 정의됨) 또는 완전 치유(홍반, 플래킹(flaking) 또는 비상칭이 있든 없든간에 활성 병변의 증거나 전혀 없는 가피의 부재로서 정의됨) 시간; 바이러스 발산의 중지 시간(연구를 위해, 수 1); 통증 경감 시간; 통증 중지 시간; 가려움 중단 시간; 및 단단한 가피 단계로의 시간이 포함된다. 비교상, 환자 내역 데이타 및 공개된 결과(S.L. Spruance et al., "The Natural History of Recurrent Herpes Simplex Labialis, "New Eng. J. Med. 297:69-75, 1977)가 치료받지 않은 병변에 사용되었다.

표 6은 두개의 독립적인 연구 결과를 보여준다(표에서 괄호안에 표시함). 이들 데이타는 단순포진 기간이 n-도코사놀을 함유하는 크림 또는 스테아르산을 함유하는 크림으로 치료한 후, 환자의 보고된 사실적인 평균 기간인 8.9일의 비치료된 단순포진 기간에 비해 평균 5.5일로 현저하게 감소되었음을 보여준다. 따라서, 이 기간은 환자가 n-도코사놀 또는 스테아르산 함유 크림으로 발병 초기에 치료받는 경우에 35%(P≤0.0001) 넘게 현저하게 감소된 것이다. 또한, 상기 크림중 하나로 초기 단계를 치료하는 경우에는 재발성 포진 발병과 관련된 통증 증상의 기간을 이 질병이 치료되지 않은 경우의 약 6일과 비교하여 치료된 영역에 대해 3일 미만으로 단축된다.

구순포진의 국부 치료를 위한 사람 임상학적 실험 결과

	n-도코사놀 크림 치료	스테아르산 크림 치료	치료되지 않음˚
치유 시간(hr^§)	(1) 123 ± 4.9(2) 141 ± 5.2	(1) 124 ± 5.2(2) 143 ± 4.0	(1) 215 ± 0.4(2) 211 ± 0.4
바이러스 발산의 중지(hr^§)	(1) 47 ± 2.4(2) ND**	(1) 49 ± 1.9(2) ND	74 내지 83*
통증의 경감(hr^§)	(1) 27 ± 2.3(2) 55 ± 4.1	(1) 31 ± 3.4(2) 50 ± 3.8	NR**
통증의 완전 중지(hr^§)	(1) 63 ± 4.4(2) 96 ± 5.8	(1) 68 ± 4.5(2) 86 ± 5.0	111 내지 178*
가려움의 중지(hr^§)	(1) 58 ± 4.9(2) 63 ± 5.2	(1) 51 ± 3.4(2) 76 ± 5.8	NR
단단한 가피 단계(hr^§)	(1) 61 ± 3.2(2) 87 ± 4.4	(1) 62 ± 2.5(2) 94 ± 4.9	NR

°치유 시간은 환자의 보고된 내력에 기초한다; 상기 칼럼에 기입된 모든 사항은 에스. 엘. 스프루언스(S.L. Spruance)등의 문헌("The Natural History of Recurrent Herpes Simplex Labilais, "New Eng. J. Med. 297:69-75, 1977].

§ 평균 ± 평균의 표준 오차로서 기재됨

* 범위는 77.5㎟ 미만으로 측정되는 병변 및 77.5㎟ 보다 크게 측정되는 병변에 대한 평균 병변 크기를 나타낸다.

** "ND"는 "수행되지 않음"을 의미하고, "NR"은 보고되지 않음을 의미한다.

실시예 12

n-도코산 제형으로 국소 치료한 후 HSV-1 병변의 치유 개선

안면 HSV-1 병변(단순포진) 발생의 과거 내력이 있는 10명의 환자에게 20㎎/㎖ 폴록사머 블록 공중합체 계면활성제 중에 현탁된 5.0㎎/㎖의 n-도코산의 크림 제형을 제공하였으며, 이 제형에는 완화제로서 5-8 중량%의 광물오일 NF, 습윤제로서 5중량%의 프로필렌 글리콜 USP, 보조 방부제로서 1-3중량%의 벤질 알코올 NF 및 수성 담체로서 나머지 량의 정제수가 포함된다.

개인에게 단순포진이 검출되는 경우 입주변의 병변 또는 조기 염증에 크림을 바르도록 지시한다. 개인들은 치료받지 않은 단순포진을 평균 10일 앓은 경험이 있으며, 모든 치료받지 않은 단순포진은 궁극적으로는 소수포로 진행되어 딱지로 되어 치유된다. 개인들은 일일 2회 이상 4회까지 피부의 발병 부분에 크림을 바르도록 지시받는다. 또한, 개인들은 이들에게 관찰되는 감염 단계(홍반에서 구진, 소수포, 부종, 딱지까지)를 기록하고, HSV-1 병변과 관련된 통중에 대한 주관적인 관찰을 기록하도록 지시받는다.

각 개인은 연구 기간 동안에 하나 이상의 단순포진을 치료한다. 모든 개인은 단순포진이 치료받지 않은 과거의 병변에 비해 n-도코산 함유 크림으로 치료받는 경우에 통증이 감소되었음을 보고하였다. 각각의 개인에 대해, 과거 감염에 비해 HSV-1 감염의 발병 기간은 20% 내지 60%(즉, 개인에 따라 4 내지 8일) 감소하였다. n-도코산 함유 크림으로 매일 4회 단순포진을 치료한 연구에 참여한 개인의 반 이상은 단순포진이 소수포 단계로 진행되지 않았다. 대신, HSV-1 병변이 홍반 또는 구진 단계에서 국소적으로 치료되는 경우, 병변은 일반적으로 소수포 단계를 너머 진행하지 않았으며, 병변의 추가 진행없이 치유되었다. 이러한 결과는 n-도코산 함유 제형이 국소적으로 도포되는 경우에 바이러스 감염증을 예방하고 치료하는 데 효과적임을 보여준다.

실시예 13

에루실 알코올 또는 에루카미드 제형으로 인플루엔자 감염의 치료

방부제로서 프로필렌 글리콜 USP(0.5중량%) 및 벤질 알코올 NF(2중량%)를 함유하는 비이온계 폴록사머 188 계면활성제 1.4mM중의 0.15mM 에루실 알코올 수성 현탁액을, 병이 압착되는 경우에 현탁액이 에어로졸을 생성시킬 수 있는 표준 적응성 비용 스프레이로 제조하였다. 유사하게는, 1.5mM 에루카미드를 함유하는 제제를 현탄액의 에어로졸을 생성시키기 위한 비용 스프레이 용기에서 만들어 생성시켰다. 제제를, 이전 12 개월내에 인플루엔자 바이러스에 접종된 적이 없는 20명의 건강한 개인을 두 그룹(한 그룹은 에루실 알코올을 시험하기 위한 그룹이며, 나머지 한 그룹은 에루카미드를 시험하기 위한 그룹이다)으로 하여 인플루엔자 시기 동안에 제공하였다.

개인들은 인플루엔자 증상(호흡 정체, 신체 통증, 예민해진 눈, 열, 메스꺼움 또는 이들이 결합된 증상)이 관찰되는 경우에, 일일 1 내지 5회(2.4시간의 간격으로 각각의 콧구멍에 1회 내지 2회 분무) 비용 스프레이로서 제공된 현탁액을 사용하도록 지시받는다. 개인들은 이들이 증상이 검출되는 시기 동안에 이들의 인플루엔자 증상의 중증도를 주관적 및 개관적으로 관찰하여 기록하도록 지시받는다. 또한, 개인들은 이 기간 동안에 비용 스프레이 현탁액의 사용(투여된 분무 회수 및 투여 수)을 기록하도록 지시받는다. 개인들은 인플루엔자 감염되었던 적과 비교하여 계면활성제/에루실 알코올 또는 계면활성제/에루카미드 에어로졸을 사용하는 경우에 이들의 인플루엔자 증상의 중증도를 주관적으로 관찰하여 요약하도록 요구받는다.

계면활성제/에루실 알코올 에어로졸을 사용한 연구에 참여한 개인들의 반 이상은 직접적으로 이전의 인플루엔자 발병에 비해 인플루엔자 증상이 감소하였음을 보고하였다. 일일 평균 5회(각각의 콧구멍에 대해 1 내지 2회 분무)로 에어로졸을 사용한 사람들은 치료받지 않은 개인들과 비교하여 인플루엔자 감염과 관련된 호흡 정체가 상당히 감소하였음을 보고하였다. 일일 평균 5회로 에어로졸을 사용한 사람들은 치료받지 않은 개인들과 비교하여 발열 횟수가 상당히 감소(각 인플루엔자 발병당 2내지 5회)하였고, 치료받지 않은 개인(평균 38.9℃)과 비교하여 최고 기록 체온(평균 37.8℃)이 상당히 감소한 것으로 보고하였다. 계면활성제/에루실 알코올 에어로졸로 치료된 개인의 반 이상에서의 인플루엔자 증상의 평균 기간은 1.7일인데 반해, 치료받지 않은 개인은 인플루엔자 증상의 평균 기간이 3일이었다. 이러한 결과는 계면활성제/에루실 알코올 현탁액이 점막에 도포되는 경우에 항바이러스 치료 효과가 있음을 보여준다.

유사한 결과가 에루카미드 현탁액 비용 스프레이로 치료한 환자에게서 얻어졌다. 환자의 반 이상은 이들이 증상이 검출되자 마자 계면활성제/에루카미드 스프레이를 사용한 경우에 이전의 인플루엔자 발병에 비해 인플루엔자 증상이 감소되었음을 보고하였다. 대부분의 개인들은 이들이 일일 평균 3회(각 콧구멍에 1 내지 2회 분무) 에어로졸을 사용한 경우에 이전의 인플루엔자 상태에 비해 호흡 정체가 크게 감소하였음을 경험하였다. 일일 평균 3회 에어로졸을 사용한 대부분의 개인들은 인플루엔자 증상 기간 동안에 평균 최고 기록 체온이 약 37℃로 1회 발열이 있었던 것으로 보고하였다. 일일 3회 이상 에어로졸을 사용한 개인의 인플루엔자 증상의 평균 기간은 치료받지 않은 개인이 3일인 것과 비교하여 이틀이었다. 이러한 결과는 계면활성제/에루카미드 현탁액이 호흡계의 점막에 도포되는 경우에 항바이러스 치료 효과가 있음을 보여준다.

실시예 14

브라시딜알코올을 사용한 HSV-2의 점막을 통한 치료

덱스트로스 무수물(300-400㎎/좌제), 식물 전분(300-400㎎/좌제) 및 마그네슘 스테아레이트(5-10㎎/좌제)을 가하여 혼합물을 생성하고 이를 질 삽입을 위한 좌제(좌제당 1-10g)로 압축하여, 필수적으로 실시예 1 및 5에서 제조된 비이온계 세제 현탁액중 8mM의 브라시딜 알코올을 함유하는 좌제를 제형화시켰다.

질 및/또는 질 주위의 포진 병변의 병력이 있는 15 HSV-감염된 여성에게는 좌제로 제공되며, 포진 병변 또는 포진 병변과 관련된 불쾌증이 검출되는 경우에 일일 1 내지 4의 좌제를 사용하도록 지시했다. 여성은 활성 감염의 기간, 병변(홍반, 구진, 소포진, 부종 또는 가피상)의 중증도, 활성 감염 에피소드와 관련된 통증 및 불쾌증의 정도에 대한 자신의 관찰에 대하여 기록하게 했다. 여성에게는 활성 감염증 또는 활성적인 감염의 징후가 관찰되자 마자 좌제를 사용하도록 지시했다. 여성에게서 비처리되는 경우에 소포진으로 발전하는 병변은 평균 12일 지속되었다.

모든 경우에, 각각의 여성은 연구를 수행하는 동안 하나 이상의 활성 포진 감염 에피소드를 치료했다. 모든 여성은 비처리된 감염 에피소드와 비교하여 감염증이 좌제로 처리되는 경우, 통증 및 불쾌증이 감소됨을 보고했다. 모든 경우에, HSV-2 활성 감염은 좌제 처리에 의해 7 내지 8일로 감소하며, 5 명의 여성은 평균 3 내지 4일을 기록했다. 좌제를 일일 4회 사용하고 치료를 홍반 및 구진 단계에서 개시하는 대분분의 경우에, 감염증은 소포진으로 진행되지 않았으며 구진 단계에 도달한 후에 치유되었다.

또한, 계면활성제/브라시딜 알코올 현탁액가 계면활성제/브라시딜 알코올 현탁액를 냉각시키기 전에 첨가 및 분산하기 위해서 60℃에서 용융하는 약 50 내지 80%의 백색 연질 파라핀을 함유하는 연고로 제형될 수 있다. 연고는 주로 활성 포진 감염증의 외생식기 치료에 요구되는 바에 따라 일일 2 내지 4회 사용하라는 처방이 있는 압축 가능한 튜브에 제공된다. 각각의 환자에게는 징후가 검출되자 마자 일일 1 내지 4회 질 또는 질주위 영역에 있는 HSV-2 병변을 덮기에 충분한 양으로 사용하도록 지시된다. 연고를 사용한 절반 이상의 환자에게서 통증 및 불쾌증이 감소하고, 치유시간이 단축되었으며, 병변이 소포진으로 발전되지 않고 치유되었다.

이러한 결과는 계면활성제/브라시딜 알코올 현탁액가 점막에 국소 적용되는 경우에 치료학적 항바이러스 효과를 지니고 있다는 것을 나타낸다.

실시예 15

장쇄 지방족 알코올 현탁액에 의한 EBV 감염증(감염성 단핵증)의 치료

감염성 단핵증(인후염, 발열, 권태증, 전신성 림프절 병증, 말초혈액중의 이형 단핵증 T-림프구, 혈액중의 12,000 내지 18,000의 전체 백혈구 수)을 앓고 있는 것으로 진단된 10대 성인(14 내지 19세)을 기본적으로는 실시예 1에서와 같이 제조된 10mM n-헥사코사놀 함유 비이온성 계면활성제의 무균 수성 현탁액로 전신처리했다. 현탁액을 임상조건하에 의사에 의해서 0.001g/kg 내지 1g/kg의 지방족 알코올의 용량으로 주입(근육내 또는 정맥내)했다. 이어서, 감염성 단핵증에 대한 환자의 증상을 일주일 동안 매일 모니터링하고 3 개월동안 매주 모니터링했다. 모든 환자가 표준 면역검정법에 의해서 그들의 혈청중의 항-EBV 항체의 검출되는 바로는 마지막 연구 기간에서 EBV-양성으로 시험되었다.

모든 환자에게서 인후염과 발열 증상이 계면활성제/n-헥사코사놀 현탁액 투여 1 주일 이내에 치유되고, 일반적으로 투여 2 주일 이내에 열병 증상이 감소됨을 나타났다. 치료된 환자중 여덟명은 지방족 알코올 현탁액 투여 2 내지 3주 이내에 원기를 회복하면서 전신성 림프절 병증이 완화되는 것으로 입증되었다. 모든 치료된 환자에게서 투여 4주 이내에 전체 백혈구 수가 2개월의 후처리에 의해 정상으로 되면서 말초 혈액중의 이형 단핵증 T-림프구가 감소함을 보였다.

유효농도의 n-도코사놀, 리그노세릴 알코올 및 n-옥타코사놀의 현탁액로 전신 처리되는 감염성 단핵증의 증상을 보이는 EBV-감염된 환자에서 유사한 결과를 얻었다.

이러한 결과는 수성 현탁액중의 소정의 장쇄 지방족 알코올을 전신 투여하면 치료학적 항바이러스 효과가 있다는 것을 나타낸다.

실시예 16

장쇄 지방족 알코올 현탁액에 의한 림프 증식성 질환의 치료

호즈킨병(단계 I 또는 II-A 림프구성-조직구성 형태는 림프절중에 조직구와 혼합된 성숙 림프구의 광범위한 확산 침윤에 의해 특정화된다)을 앓고 있는 35 내지 55세의 5명의 환자에게 기본적으로는 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조된 테트로닉-908중의 2mM n-도코사노산의 무균 수성 형탁제를 주마다 주입 처리하였다. 용량은 생리적인 염 용액중으로 1 내지 2시간에 걸친 정맥내 주입에 의한 바람직한 치료방법으로 투여당 0.1mg/kg 내지 10mg/kg이다.

전체 8주 동안 매주 n-도코사노산 현탁액를 투여한 4명의 환자에게서 현저한 발열 및/또는 침한의 개시가 감소되거나 존재하지 않음을 포함한 증상에서의 현저한 진전을 보였다. 또한, 이러한 4명의 환자는 모두가 치료 동안 체중이 감소하지 않았으며, 두명은 체중이 약 5% 증가한 것으로 나타났다. 치료에 양성 반응을 보인 모든 4명의 환자에게서, 알코올 현탁액 투여 12 내지 16주 후에 질환이 림프절 또는 외림프 기관 또는 조직으로 진행되지 않았다. 비이온성 계면활성제 및 20μM 스테아릴 알코올 또는 1mM 아라키딜 알코올을 함유하는 수성 현탁액를 주마다 주입하여 유사한 결과를 얻었다. 이러한 결과는 소정의 장쇄 알코올의 세포독성이 세포증식성 질환을 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 나타낸다.

본 발명이 특정의 실시예 및 바람직한 양태에 대한 내용으로 설명되고 있지만, 본 발명이 이러한 양태로 한정되는 것이 아니며 첨부되는 청구범위에 의해 한정되는 것임을 인지할 수 있을 것이다.

도 1은 시험관내에서 X 축에 나타낸 농도를 갖는 n-도코사놀(C₂₂, □), n-테트라코사놀(리그노세릴)알코올(C₂₄, ◇), n-헥사코사놀(C₂₆, ○) 및 n-옥타코사놀(C₂₈, △)의 현탁액에 의해 베로 세포(Vero cell)에서 HSV-2 플라크 제형의 억제를 나타내는 그래프이다(데이타는 장쇄 알코올이 결핍된 계면활성제 현탁액에 노축된 대조군 배양과 비교하여 관찰된 플래크의 백분율이다).

도 2a는 HSV-2 바이러스를 첨가하기 전에 12 시간 동안 베로 세포를 현탁액과 배양할 경우, 계면활성제 대 n-도코사놀의 비의 증가는 바이러스 플라크 생성을 감소시키는 것을 보여주는 그래프이다; 계면활성제:n-도코사놀 비는 1:1(□), 3:1(△), 5:1(◇) 및 10:1(○)이다.

도 2b는 도 2a에 상응하는 대조군을 나타내고 있으며, 도 2a에 도시된 각각의 계면활성제:알코올 비에 대해 현탁액중의 동일한 농도의 계면활성제를 이용하였으며, n-도코사놀은 함유하지 않는다(도 2a에서와 동일한 심볼을 사용).

도 3은 옥톡시놀 계면활성제 현탁액은 48시간 동안 현탁액 및 HSV-2로 인큐베이션한 베로 세포내의 HSV-2 플라크 제형을 억제하여, n-도코사놀(□)의 농도를 증가시킴에 따라 억제도 증가되는 반면, HSV-2 및 옥톡시놀 계면활성제(○)과 함께 인큐베이션된 대조군 배양은 억제하지 않음을 나타내는 그래프이다(즉, 약 50 플라크/웰을 갖는 비처리된 대조군과 동가임); 데이타 포인트 위 아래의 막대는 복제 샘플에 대한 표준 편차를 나타낸다.

도 4는 계면활성제/n-도코사놀(□) 및 계면활성제/n-도코산(△)의 현탁액은 HSV-2를 첨가하기 전에 12시간 동안 화합물과 함께 인큐베이션되어 배양된 베로 세포에서 HSV-2 바이러스 플라크 제형을 억제하는 그래프이다.

도 5는 DNA로의 ³H-티미딘 혼입에 의해 측정되는 것으로서, 알코올(○) 또는 계면활성제/n-도코사놀(C₂₂, □)을 함유하지 않은 계면활성제의 현탁액과 함께 인큐베이션된 대조군과 비교하여, 스테아릴 알코올(C₁₈, ◇) 및 아라키딜 알코올(C₂₀, △)의 현탁액이 X축에 나타낸 농도의 현탁액과 함께 48시간 동안 인큐베이션되어 배양된 B-세포 종양 세포에 독성을 나타낸다는 것을 보여주는 그래프이다(데이타는 단지 배지하고만 배양된 대조군의 백분율을 나타낸다).

도 6a 및 도 6b는 계면활성제/n-도코산(△)의 현탁액과 함께 배양된 세포 또는 활성 성분(○)을 함유하지 않는 계면활성제 현탁액과 함께 배양된 대조군과 비교하여, 96-웰 플레이트에서 1,000 세포/웰(도 6a) 또는 30,000 세포/웰(도 6b)에서 인큐베이션되는 세포의 98시간 인큐베이션 후에, 정량화된 복제 분석의 X축 평균에 나타낸 농도에서 포피 섬유아세포상의 계면활성제/n-도코사놀(□)의 현탁액의 세포 항증식 효과를 그래프로 나타내고 있다.

도 7은 도 6a에 설명된 바와 같은 방법을 이용하여 72시간(□) 및 96시간(○) 인큐베이션한 후 계면활성제/n-도코사놀 현탁액의 세포의 항증식 효과의 시간 의존성을 나타내는 그래프이다.

Claims

약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 약 1:1 (w:w) 내지 약 10:1 (w:w)의 데옥시콜레이트 및 활성성분의 혼합물을 포함하는 바이러스 감염증을 예방 또는 치료하기 위한 조성물로서, 활성성분이 스테아릴 알코올, 에루실 알코올, 브라시딜 알코올, n-도코사놀, 아라키딜 알코올, n-도코산, n-도코사노산, 에루카미드, 스테아르산, 또는 이의 혼합물인 조성물.
제 1항에 있어서, 혼합물이 약 4:1(w:w) 내지 약 10:1(w:w)의 데옥시콜레이트 및 활성성분을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 혼합물이 약 5:1(w:w) 내지 약 10:1(w:w)의 데옥시콜레이트 및 활성성분을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 혼합물이 당 기재 스테아레이트를 추가로 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 혼합물이 당 기재 스테아레이트 및 약 5%(w/w) 내지 약 20%(w/w)의 활성성분을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 혼합물이 당 기재 스테아레이트 및 약 10%(w/w) 내지 약 12%(w/w)의 활성성분을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 혼합물이 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체중의 데옥시콜레이트와 활성성분의 현탁액을 필수성분으로 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 활성성분이 n-도코사놀을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 혼합물이 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 데옥시콜레이트 및 n-도코사놀의 현탁액을 필수성분으로 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 8항에 있어서, 혼합물이 당 기재 스테아레이트를 추가로 포함함을 특징으로 하는 조성물.
약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 약 1:1 (w:w) 내지 약 10:1 (w:w)의 데옥시콜레이트 및 n-도코사놀의 혼합물을 포함하는 바이러스 감염증을 예방 또는 치료하기 위한 조성물.
제 11항에 있어서, 혼합물이 약 4:1(w:w) 내지 약 10:1(w:w)의 데옥시콜레이트 및 n-도코사놀을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 11항에 있어서, 혼합물이 약 5:1(w:w) 내지 약 10:1(w:w)의 데옥시콜레이트 및 n-도코사놀을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 11항에 있어서, 혼합물이 약 5:1(w:w)의 데옥시콜레이트 및 n-도코사놀을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 11항에 있어서, 혼합물이 약 5%(w/w) 내지 약 20%(w/w)의 n-도코사놀을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 11항에 있어서, 혼합물이 약 10%(w/w) 내지 약 12%(w/w)의 n-도코사놀을 포함함을 특징으로 하는 조성물.
제 11항에 있어서, 혼합물이 당 기재 스테아레이트를 추가로 포함함을 특징으로 하는 조성물.
삭제
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제 1항 또는 제 11항에 있어서, 바이러스 감염증이 단순포진 바이러스, 엡스테인-바르 바이러스 및 인플루엔자 바이러스에 의해 유발됨을 특징으로 하는 조성물.
약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 약 1:1 (w:w) 내지 약 10:1 (w:w)의 데옥시콜레이트 및 활성성분의 혼합물을 포함하는 피부 및 점막의 염증을 완화시키기 위한 조성물로서, 활성성분이 스테아릴 알코올, 에루실 알코올, 브라시딜 알코올, n-도코사놀, 아라키딜 알코올, n-도코산, n-도코사노산, 에루카미드, 스테아르산, 또는 이의 혼합물인 조성물.
약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 약 1:1 (w:w) 내지 약 10:1 (w:w)의 데옥시콜레이트 및 활성성분의 혼합물을 포함하는 화상 치료를 위한 조성물로서, 활성성분이 스테아릴 알코올, 에루실 알코올, 브라시딜 알코올, n-도코사놀, 아라키딜 알코올, n-도코산, n-도코사노산, 에루카미드, 스테아르산, 또는 이의 혼합물인 조성물.
제 1항에 있어서, 조성물이 국소 적용 및 경막 적용으로부터 선택된 임의의 하나의 경로에 의해 투여됨을 특징으로 하는 조성물.
약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 약 1:1 (w:w) 내지 약 10:1 (w:w)의 데옥시콜레이트 및 n-도코사놀의 혼합물을 포함하는 피부 및 점막의 염증을 완화시키기 위한 조성물.
약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 중의 약 1:1 (w:w) 내지 약 10:1 (w:w)의 데옥시콜레이트 및 n-도코사놀의 혼합물을 포함하는 화상 치료를 위한 조성물.
제 11항에 있어서, 조성물이 국소 적용 및 경막 적용으로부터 선택된 임의의 하나의 경로에 의해 투여됨을 특징으로 하는 조성물.