KR100439426B1 - 동물성 플랑크톤 추출물을 함유하는 주름방지용 화장료조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 동물성 플랑크톤 추출물을 함유하는 주름방지용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 동물성 플랑크톤인 아르테미아 살리나(Artemia salina)로부터 얻은 추출물과 이 추출물을 함유하는 주름방지 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

동물성 플랑크톤 추출물을 함유하는 주름방지용 화장료 조성물{Composition for anti-aging cosmetics contain zooplankton extract}

본 발명은 동물성 플랑크톤 추출물을 함유하는 주름방지용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 동물성 플랑크톤인 아르테미아 살리나(Artemia salina)로부터 얻은 추출물과 이 추출물을 함유하는 주름방지 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 표피, 진피 및 피하지방 등으로 구성되어 있는데, 이 중에서 진피 내의 구성 성분들의 정량 또는 정성변화가 피부 조직의 물리적 및 생화학적 변화에 매우 중요한 요소로 작용하기 때문에 진피 내 주요 구성성분인 콜라겐 섬유, 탄력섬유, 점다당질 등의 섬유간 물질, 전해질 및 수분 등의 변화를 관찰하는 것이 피부의 노화과정을 이해하는데 매우 중요하다고 하겠다.

피부 노화는 크게 인간의 수명에 따른 노인성 노화와 자외선에 의한 광노화로 대별되는데, 두 과정을 엄격하게 구별하기가 힘든 경우도 있고, 만성적으로 태양광선에 노출되는 신체부위에서는 두 과정이 동시에 진행되므로 피부 노화를 이해하는데 이들 과정을 포괄적으로 접근함이 필요하다.

노화에 따른 피부조직의 변화로서는 주름살의 증가, 피부 두께(표피와 진피)의 감소, 피부 부속기관의 퇴화, 진피 내 구성성분의 변화 등이 있다.

특히, 피부노화와 연관하여 진피 내 구성성분 중 기질물질들이 많이 연구되고 있는데, 이들은 무정형 물질로서 주성분인 점다당질과 이 점다당질이 단백질과 결합하고 있는 프로테오글리칸 등과 같은 거대분자로 구성되어 있으며, 겔과 반고형 상태로 존재하여 진피 내 여러 세포나 피부 구조물들을 지탱하는 역할을 하리라 생각되고 있다.

지금까지 알려진 항주름제는 건조한 피부에 부수되는 각화의 이상이 정상으로 회복되어 주름을 개선시켜 주는 보습제 형태, 콜라겐 생합성을 증가시켜 피부의 탄력을 증진시켜 주름을 개선시키는 물질, 항산화 효과를 갖는 물질 및 경피수분 증발을 억제시키는 물질들이다.

항주름 효과를 갖는 보습제로 주로 사용되고 있는 것으로는 히아루론산 또는 소듐콘드로이틴 설페이트를 들 수 있고, 또 의약품에 많이 사용되고 있는 레티노이드산도 항주름 효과가 우수한 것으로 알려져 있다.

그러나, 레티노이드산을 사용 시에 피부가 붉어지고, 비늘이 생기며, 자외선에 의한 민감성 반응을 나타내는 부작용 등이 보고되고 있고 6개월 이상 계속 사용해야만 효과가 나타나는 문제점이 있다. 또한, 항주름 효과 면에서는 레티노이드산과 유사한 효과를 나타내는 알파하이드록시산이 항주름제로 공지되어 있으나, 주름 방지 또는 개선의 효과를 가지기 위해서는 다량(1.0 ∼ 10.0%) 사용해야 하고, 따라서 가려움, 홍반, 피부이상 각질현상 등의 피부자극이라는 부작용을 수반하게 되어 화장품이 추구하는 제품의 안전성 측면을 만족시킬 수 없어 화장품으로서의 가치를 떨어뜨릴 수밖에 없는 문제점이 있다.

이에, 본 발명자들은 보다 피부에 자극이 없고 보다 효과적인 항주름 작용을 나타내는 화장료를 제공하기 위하여 연구한 결과, 피부노화의 주요원인인 피부의 각질형성세포, 섬유아세포의 재생감소, 그리고 이로부터 생성되는 콜라겐의 생합성량 감소를 효과적으로 억제할 수 있고 광노화의 주범인 자외선에 의해 피해를 입은 세포의 보호 및 재생에 효과가 있는 해양성 물질들을 검색하였고 여기서 아르테미아 살리나(Artemia salina)라는 동물성 플랑크톤 추출물이 탁월한 효과가 있음을 알게 됨으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

또한, 아르테미아 살리나라는 동물성 플랑크톤의 생육과 성장에 중요한 인자인 물과 소금(염분)에 따라 그 유효성분의 함량이 크게 달라짐을 알게 되었다.

따라서, 본 발명은 아르테미아 살리나라는 동물성 플랑크톤으로부터 얻은 추출물과 이 추출물을 함유하는 주름방지용 화장료 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명은 주름방지용 화장료 조성물에 있어서, 동물성 플랑크톤인 아르테미아 살리나(Artemia salina) 추출물을 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.01 ∼ 50.0 중량%로 함유하는 주름방지용 화장료 조성물을 특징으로 한다.

또한, 상기 아르테미아 살리나 추출물은 아르테미아 살리나의 유생을 소금, 바람직하게는 일반 소금 또는 고순도 소금을 첨가하여 열수 추출하여 얻은 주름방지용 화장료 조성물을 특징으로 한다.

이와 같은 본 발명을 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.

아르테미아 살리나는 브라인 슈림프(Brine Shrimp)라고 불리기도 하는 해수에서 서식하는 갑각류의 유생으로 그 크기가 2 ㎜정도로 작으며 특별한 성장과정과 포화소금물에서 생존할 수 있게 되어 있는 독특한 생물학적 적응 메카니즘을 갖고 있다. 이 동물성 플랑크톤은 이러한 이유 때문에 분화의 생화학적 연구와 분자 연구 모델로 종종 사용되고 있다.

아르테미아 살리나는 포낭에 싸인 동물성 플랑크톤이 되어 완전탈수와 같은 혹독한 환경에서도 버텨낸다. 이 시기에 아르테미아 살리나는 일종의 동면상태로 접어들고, 이 상태로 장기적인 건조상태와 악조건을 견뎌낼 수 있다. 그리고, 바닷물이 다시 공급되면 성장을 재개한다. 소금(염분)과 온도는 어떤 신진대사를 재개하는 생리학적 신호가 된다고 보고되고 있다.

본 발명의 아르테미아 살리나 추출물의 추출방법은 다음과 같다.

먼저, 시중에서 판매하는 것은 아르테미아 살리나의 알을 건조시킨 것으로 실험실에서 쉽게 부화시켜 사용할 수 있다. 부화방법으로는 2개의 비이커에 물 1 ℓ씩 넣고 일반 소금과 자사에서 특수하게 정제 개발한 "에너지플레이크 솔트"라는 고순도 소금을 4 g씩 첨가하고 아르테미아 살리나 알 건조물 2 g을 넣고 온도는 25 ∼ 30 ℃로 맞추어 에어레이션을 해주면 24시간이 지난 후 부화한다. 에어레이션이 지나치게 약하면 알들이 물속에서 순환하지 못하여 부화율이 떨어지고, 지나치게 세면 부화한 알들이 빨리 죽으므로 알 전체가 순환할 수 있는 최소의 세기를 유지해 주는 것이 바람직하다.

부화한 아르테미아 살리나가 포함되어 있는 액에 3배량의 물을 가하여 100 ℃에서 3시간동안 열수 추출한 후, 여과과정을 2 회 반복한다. 이 여과액은 분자량 10,000의 초여과막을 사용하여 여과시킨다. 여과된 액을 드라이오븐에 넣어 건조시킨 후 건조물의 조성을 분석하였고 분석결과는 다음 표 1과 같다.

상기 표 1의 결과를 보면, 일반 소금을 첨가하여 부화시킨 여과액과 고순도 소금을 첨가하여 부화시킨 여과액의 건조물 조성비는 같다. 여기서 누클레오티드의 조성을 HPLC와 TLC를 통해 자세히 분석하였다. 분석결과는 다음 표 2와 같다.

일반소금을 넣고 부화시켜 얻은 추출물보다 고순도 소금을 첨가하고 부화시켜 얻은 추출물이 전체 누클레오티드의 조성비는 2%로 같으나, 디구아노신 테트라포스페이트(Diguanosine tetraphosphate)의 조성량은 더 크다는 것을 알 수 있다.

이하, 본 발명은 실시예에 의거하여 상세히 설명하겠는바, 본 발명이 실시예에 한정되는 것은 아니다.

시험예 1 : 인체 섬유아세포 증식효과 측정

3.5% 소태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지에서 배양한 인체 섬유아세포를 96-웰 평판배양기(96-well microtiter plate)에 5,000세포/웰이 되도록 분주하고 각 아르테미아 살리나 추출물을 배양배지로 1 ×10 에서 1 ×10^-3중량%까지 순차적으로 희석하여 첨가한 후 37 ℃에서 4일간 배양하였다. 배양 후 0.2% MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)용액을 각 웰당 50 ㎕씩 첨가하고, 다시 37 ℃에서 4시간동안 배양 후 생성된 포르마잔(formazan)을 DMSO(Dimethyl sulfoxide)로 용해시켰다. 용해된 포르마잔의 흡광도를 평판배양측정기(microplate reactor)를 이용하여 570 ㎚에서 측정하였다. 아르테미아 살리나 추출물로 처리하지 않은 대조군을 상기와 동일한 방법으로 실시하여 흡광도를 측정하였다. 아르테미아 살리나 추출물을 함유한 실험군과 대조군의 흡광도를 비교한 후, 그 결과를 다음 표 4에 나타내었다. 이때 일반 소금은 시중에서 판매되고 있는 식용 소금을 사용하였고, 고순도 소금으로는 자사에서 일반 소금을 재결정 단계를 10회 이상 반복하여 일반 소금 내에 함유된 불순물을 모두 제거하고 다량의 미네랄이 함유된 물에 녹여 다시 재결정화 처리하여 개발한 에너지플레이크 솔트를 사용하였다.

상기 표 3에서 알 수 있듯이, 두 가지 모두 높은 섬유아세포 증식효능을 나타내었으며, 일반 소금을 첨가하여 부화시켜 얻은 추출물보다 에너지플레이크 솔트를 첨가시켜 부화하여 얻은 추출물이 더 좋은 증식효능을 보였다.

시험예 2 : 각질형성세포 증식효과 측정

각질형성세포를 사용하여 상기 시험예 1과 동일한 방법으로 각질형성 세포의 증식 효능을 측정하였고, 그 결과를 다음 표 4에 나타내었다.

상기 표 4에서 알 수 있듯이, 두 가지 모두 각질형성세포 증식효능을 나타내었으며, 에너지플레이크 솔트를 첨가하여 부화시켜 얻은 추출물이 더 높은 증식효과를 보였다.

시험예 3 : 콜라겐 세포 생합성 증식효과 측정

인체 섬유아세포를 24-웰 평판배양기에 배양한 후, 각 아르테미아 살리나 추출물을 배양배지로 1 ×10 에서 1 ×10^-3중량%까지 순차적으로 희석하여 첨가하였다. 배양 3일째 10%의 소태아 혈청이 함유된 DMEM 배지를 각 웰당 0.5 ㎖씩 첨가한 후 L[2,3,4,53H]-프롤린 10 ci를 첨가하였다. 24시간 후 각 웰에 들어있는 배지와 세포들을 모아 5% 트리클로로아세트산(TCA) 용액에 넣어 수세한 후 2개의 시험관에 분주하고 1개의 시험관에는 타입Ⅰ 콜라게나제(type Ⅰ Collagenase) 1 unit/㎕를 넣고 37 ℃에서 90분간 배양하였으며, 다른 시험관을 4 ℃에서 보관하였다. 그런 다음, 모든 시험관에 50% TCA를 0.05 ㎖씩 첨가하고 4℃에서 20분간 방치한 후 각각 15,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 각각의 상등액과 침전물을 액체 신틸레이션 계수기(LSC : Liquid Scintillation Counter)로 DPM(decay per minute)값을 얻어 각 아르테미아 살리나 추출물을 처리한 실험군과 처리하지 않은 대조군에 대한 콜라겐 생합성 값(Relative Collagen Biosynthesis)을 구하고, 그 결과를 다음 표 5에 나타내었다.

상기 표 5에서 알 수 있듯이, 두 가지 모두 콜라겐 생합성 촉진 효능을 나타내었고, 에너지플레이크 솔트를 첨가하여 부화시켜 얻은 추출물이 더 높은 콜라겐 생합성 촉진 효능을 보였다.

이상의 시험예에서 아르테미나 살리나 추출물은 피부세포 증식 및 콜라겐의 생합성을 촉진하는 물질임을 알 수 있고, 특히 고순도 소금을 첨가하여 얻은 추출물이 더 높은 효과를 보임을 알 수 있었다.

실시예 1 , 2 및 비교예 1

30세 이상의 안면 주름이 있는 시험 대상자 60명을 다음 표 6과 같은 조성을 갖는 에센스에 대하여 각 아르테미아 살리나 추출물을 함유한 실시예 1, 2 및 함유하지 않은 비교예 1의 피부주름 개선효과를 비교, 평가하였다.

시험대상자를 20명씩 세 군으로 나누어 각각 실시예 1, 2 및 비교예 1을 사용하도록 하였고, 사용하기 전에 안면 양쪽부의 피부상태를 측정해 놓은 후 하루에 2 회씩 3개월간 사용하여 동일 부위를 재측정함으로써 피부주름의 변화를 측정하였다.

피부측정은 24 ℃, 상대습도 40%의 항온 항습실에서 수행하였으며, 눈 꼬리 부위의 주름을 레플리카(replica)로 떠서 피부주름측정기(Visiometer system ; C+K사)로 피부주름을 측정하였다. 레플리카를 CCD(Charge Coupled Device) 카메라로 그 상을 3차원적으로 분석하며, 피부주름의 분석은 에센스를 사용하기 전에 측정된 주름의 높이에서 3개월간 사용 후 측정된 주름의 높이가 얼마나 감소했는지를 각각 평균을 내어 다음 표 7에 나타내었다.

실험결과 3달간 사용 후 피부주름의 높이가 비교예 1에서는 0.038 ∼ 0.078 ㎜(평균값 : 0.05 ㎜)이고 실시예 1에서는 0.121 ∼ 0.153 ㎜(평균값 : 0.139 ㎜)정도 낮아져 주름이 통계학적으로 유의한 범위 내에서 확실히 개선되었음을 알 수 있고(P ＜ 0.01), 실시예 2에서는 0.133 ∼ 0.163 ㎜(평균값 : 0.145 ㎜)정도 낮아져 마찬가지로 통계학적으로 유의한 범위 내에서 확실히 개선되었음을 알 수 있다(P ＜ 0.01). 실시예 1과 실시예 2를 비교하면, 실시예 2가 실시예 1에 비해 약간 높은 주름 개선효과가 있음을 알 수 있었다.

본 발명의 주름방지용 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정된 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 팩, 클렌징 폼 등의 화장료로 제형화할 수 있다. 제형화할 수 있는 예를 다음 표 8에 나타내었다.

(계속)

상술한 바와 같이, 본 발명의 주름방지용 화장료 조성물은 동물성 플랑크톤인 아르테미아 살리나(Artemia salina)를 소금, 바람직하게는 일반 소금 또는 고순도 소금을 첨가시켜 얻은 추출물로서 다량의 단백질과 누클레오티드가 함유되어 있다.

시험예 1에서의 섬유아세포 증식 효능, 시험예 2에서 각질형성세포 증식효능과 시험예 3에서 콜라겐 생합성 촉진 효능이 일반 소금을 첨가한 추출물과 에너지플레이크 솔트를 첨가한 추출물 모두 뛰어난 효과를 보였으며, 특히 에너지플레이크 솔트를 첨가한 추출물에서 더 높은 효능 수치를 나타내었다. 시험예 4에서 사람의 눈 꼬리 부위의 주름의 개선되는 정도를 평가해 본 결과, 일반 소금과 에너지플레이크 솔트 첨가 추출물 모두 뚜렷한 주름 개선효과를 보였으며, 에너지플레이크 솔트 첨가 추출물이 더 높은 개선효과를 나타내었다.

따라서, 아르테미아 살리나 추출물을 함유시킴으로써 피부주름을 개선시킬 수 있는 각종 화장품 분야에 널리 효과적으로 응용될 수 있다.

Claims (4)

1. 유효성분이 동물성 플랑크톤인 아르테미아 살리나(Artemia salina)를 소금으로 열수 추출하여 얻은 추출물로 0.01 ∼ 50.0 중량% 함유된 것임을 특징으로 하는 주름방지용 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 제 1 항에 있어서, 상기 소금은 일반 소금 또는 고순도 소금인 것을 특징으로 하는 주름방지용 화장료 조성물.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 화장료는 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 팩 또는 클렌징 폼의 제형인 것을 특징으로 하는 주름방지용 화장료 조성물.