JPWO2002017957A1 - 長期安定化溶液製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 安定化剤として、実質的にタンパク質を含まず、また安定化剤として、少なくとも一種のアミノ酸又はその塩を含むＧ−ＣＳＦ溶液製剤。

Description

【発明の詳細な説明】技術分野 本発明はＧ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激因子）溶液製剤に関し、特に長期保
存した後も活性成分の損失が少なく、かつＧ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体生
成率の低い、安定化させたＧ−ＣＳＦ製剤に関する。背景技術 Ｇ−ＣＳＦは、好中球の前駆細胞に作用し、その増殖ならびに分化成熟を促進
する分子量約２万の糖タンパク質である。

本出願人によって、口腔底癌患者の腫瘍細胞から採取した細胞株を培養するこ
とにより高純度のヒトＧ−ＣＳＦが精製されて以来、これを契機に、ヒトＧ−Ｃ
ＳＦ遺伝子のクローニングに成功し、現在では遺伝子工学的方法によって微生物
や動物細胞で組換えヒトＧ−ＣＳＦを大量に生産することが可能になった。また
、本願出願人はこの精製したＧ−ＣＳＦの製剤化に成功し、これを感染防御剤と
して市場に製品を供給している（特許第２１１６５１５号）。

Ｇ−ＣＳＦは極めて微量で使用され、通常成人一人当たり、０．１〜１０００
μｇ（好ましくは５〜５００μｇ）のＧ−ＣＳＦを含有する製剤を１〜７回／週
の割合で投与する。しかしながら、このＧ−ＣＳＦは例えば注射用アンプル、注
射器等の器壁に対し吸着性を示す。また、Ｇ−ＣＳＦは不安定で、外的因子の影
響を受けやすく、温度、湿度、酸素、紫外線等に起因して会合、重合あるいは酸
化等の物理的、化学的変化を生じ、結果として大きな活性の低下を招く。

従来、これらの影響を防ぐために、剤形として主に凍結乾燥製剤が選択され、
種々の処方設計がなされてきた。例えば、（ａ）トレオニン、トリプトファン、
リジン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン、アルギニン、システイン、シスチン、
メチオニンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸；（ｂ）少なくとも１種の含
硫還元剤；又は（ｃ）少なくとも１種の酸化防止剤；からなる群から選ばれる少
なくとも１種を含む製剤（特許第２５７７７４４号）等が提案されている。また
、安定化剤としてポリソルベートなどの界面活性剤を含むＧ−ＣＳＦ製剤がある
（特開昭６３−１４６８２６号）。

また、マルトース、ラフィノース、スクロース、トレハロース又はアミノ糖を
含有したＧ−ＣＳＦ凍結乾燥製剤も報告されている（特表平８−５０４７８４号
）。

しかし、凍結乾燥の工程は、工業的には生産コストの増大を招き、さらに機械
トラブルによる危険性の増大を伴うことになる。さらに、凍結乾燥製剤は使用時
に純水（注射用滅菌水）に溶解して使用しなければならないという手間がかかる
、という問題があった。

一方、従来市場に供給されている製品には、これら化学的、物理的変化を抑制
するために、安定化剤として一般的に使用されているヒト血清アルブミンあるい
は精製ゼラチンなどのタンパク質が添加されているものがある。しかしながら、
タンパク質を安定化剤として添加することに関しては、ウィルスのコンタミを除
去する等のために非常に煩雑な工程を必要とする等の問題があった。

しかしながら、このようなタンパク質を添加しない場合には、Ｇ−ＣＳＦのメ
チオニン残基の酸化体の生成が多くなり、品質劣化をもたらすというという問題
があった。

以上の理由から、安定化剤としてタンパク質を含有せず、しかも長期の保存に
も安定な、凍結乾燥製剤に代わるＧ−ＣＳＦの溶液製剤が求められている。発明の開示 上記目的を達成するために鋭意研究した結果、本発明者らは安定化剤として特
定アミノ酸を組み合わせて添加することによって、長期保存後でもＧ−ＣＳＦ残
存率が高く、かつＧ−ＣＳＦのメチオニン残基の酸化体生成率の低いＧ−ＣＳＦ
溶液製剤となしうることを見いだし本発明を完成した。

すなわち、本発明は、安定化剤として、実質的にタンパク質を含まず、また安
定化剤として、少なくとも一種のアミノ酸又はその塩を含むＧ−ＣＳＦ溶液製剤
を提供する。

本発明はさらに、アミノ酸がグリシン、グルタミン酸ナトリウム、アルギニン
及びヒスチジン又はそれらの塩から選択される一種以上である、前記Ｇ−ＣＳＦ
溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、アミノ酸がアルギニン及びヒスチジン又はそれらの塩から選
択される一種以上である、前記Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、アミノ酸がヒスチジン又はその塩である、前記Ｇ−ＣＳＦ溶
液製剤を提供する。

本発明はさらに、メチオニンをさらに含む、前記Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供す
る。

本発明はさらに、アミノ酸の添加量が０．０１重量％〜１０重量％である前記
Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、ヒスチジン又はその塩の添加量が０．０１重量％〜１０重量
％である前記Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、マンニトール及び／又は塩化ナトリウムをさらに含む前記Ｇ
−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、界面活性剤をさらに含む前記Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する
。

本発明はさらに、界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステ
ルである前記Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、界面活性剤がポリソルベート２０及び／又は８０である前記
Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、ｐＨが５〜７である前記Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、ｐＨが５．５〜６．８である前記Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供
する。

本発明はさらに、Ｇ−ＣＳＦがＣＨＯ細胞から産生されたＧ−ＣＳＦである、
前記Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。

本発明はさらに、バイアル製剤又はプレフィルドシリンジ製剤である前記Ｇ−
ＣＳＦ製剤を提供する。

本発明はさらに、４０℃−２週間の加速試験後におけるＧ−ＣＳＦ残存率が９
０％以上であり、あるいは２５℃−６ヶ月間の安定性試験後におけるＧ−ＣＳＦ
残存率が９７％以上であり、あるいは１０℃−１年間の安定性試験後におけるＧ
−ＣＳＦ残存率が９７％以上であり、かつ４０℃−２週間の加速試験後Ｇ−ＣＳ
Ｆのメチオニン残基酸化体生成率が１％以下である、安定なＧ−ＣＳＦ溶液製剤
を提供する。

本発明はさらに、実質的にＧ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体を含まない、安
定なＧ−ＣＳＦ溶液製剤を提供する。ここで、「実質的にＧ−ＣＳＦのメチオニ
ン残基酸化体を含まない」とは、前記Ｇ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体が検出
限界以下のものをいう。

本発明はさらに、安定化剤として、実質的にタンパク質を添加せず、また安定
化剤として、少なくとも一種のアミノ酸又はその塩を添加することを含むＧ−Ｃ
ＳＦ溶液製剤の安定化方法を提供する。

本発明はさらに、少なくとも一種のアミノ酸又はその塩の、安定化されたＧ−
ＣＳＦ溶液製剤の製造のための使用を提供する。

本発明の溶液製剤とは、製造工程で凍結乾燥の工程を含まず、溶液状態で長期
保存可能な製剤をいう。発明を実施するための最良の態様 本発明の溶液製剤に使用するＧ−ＣＳＦは高純度に精製されたヒトＧ−ＣＳＦ
であれば全て使用できる。具体的には、哺乳動物、特にヒトのＧ−ＣＳＦと実質
的に同じ生物学的活性を有するものであり、天然由来のもの、および遺伝子組換
え法によって得られたものを含む。遺伝子組換え法によって得られるＧ−ＣＳＦ
には天然のＧ−ＣＳＦとアミノ酸配列が同じであるもの、あるいは該アミノ酸配
列の１または複数を欠失、置換、付加したもので前記生物学的活性を有するもの
を含む。本発明におけるＧ−ＣＳＦは、いかなる方法で製造されたものでもよく
、ヒト腫瘍細胞の細胞株を培養し、これから種々の方法で抽出し分離精製したも
の、あるいは遺伝子工学的手法により大腸菌などの細菌類；イースト菌；チャイ
ニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｃ１２７細胞、ＣＯＳ細胞などの動物由
来の培養細胞などに産生せしめ、種々の方法で抽出し分離精製したものが用いら
れる。好ましくは大腸菌、イースト菌又はＣＨＯ細胞によって遺伝子組換え法を
用いて生産されたものである。最も好ましくはＣＨＯ細胞によって遺伝子組換え
法を用いて生産されたものである。さらには、ＰＥＧ等により化学修飾されたＧ
−ＣＳＦも含む（国際特許出願公開番号ＷＯ９０／１２８７４参照）。

本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤には好ましくは安定化剤としてヒト血清アルブミ
ンや精製ゼラチンなどのタンパク質を実質的に含まない。

本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤は、安定化剤として、少なくとも一種のアミノ酸
又はその塩を含む。上記アミノ酸としては、グリシン、グルタミン酸ナトリウム
、アルギニン及びヒスチジン又はそれらの塩から選択される一種以上であること
が好ましく、アルギニン及びヒスチジン又はそれらの塩から選択される一種以上
であることがより好ましく、ヒスチジン又はその塩であることが最も好ましい。

本発明で用いるアミノ酸は、遊離のアミノ酸ならびにそのナトリウム塩、カリ
ウム塩、塩酸塩などの塩を含む。本発明の製剤には、これらのアミノ酸のＤ−、
Ｌ−およびＤＬ−体を含み、より好ましいのはＬ−体ならびにその塩である。

本発明の製剤に添加するアミノ酸の添加量は使用するアミノ酸の種類により、
後述する試験方法を用いて好ましい範囲を定めることができる。一般には０．０
０１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％で、より好ましくは０．１〜
３重量％である。ヒスチジン又はその塩の場合には、通常０．０１〜１０重量％
、好ましくは０．０５〜３重量％で、より好ましくは０．１〜２重量％である。
ヒスチジン塩酸塩の場合には、４０℃−２週間加速試験では、試験した０．１〜
１．６重量％の範囲で極めて高いＧ−ＣＳＦ残存率を示し、０．４重量％で最も
高い残存率を示した。

本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤には、メチオニンを含むことが好ましい。メチオ
ニンの添加量は好ましくは０．００１〜５重量％、さらに好ましくは０．０１〜
１重量％、最も好ましいのは０．１重量％である。メチオニンの添加により、Ｇ
−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体生成率を検出限界以下にすることが観察された
。本発明者らは、特定の理論に拘束されるつもりはないが、Ｇ−ＣＳＦのメチオ
ニン残基に代えて、添加されたメチオニンが酸化されることにより、Ｇ−ＣＳＦ
のメチオニン残基酸化体生成率を低くすると推測した。

本発明の製剤には等張化剤として、ポリエチレングリコール；デキストラン、
マンニトール、ソルビトール、イノシトール、グルコース、フラクトース、ラク
トース、キシロース、マンノース、マルトース、シュークロース、ラフィノース
などの糖類や塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの無機塩類を用いることができ
、好ましくはマンニトールあるいは塩化ナトリウム、特に好ましくはマンニトー
ルを用いる。マンニトール等の糖類の添加量は製剤中に０．１〜１０重量％、さ
らに好ましくは０．５〜６重量％である。塩化ナトリウム等の無機塩類の添加量
は製剤中に２０〜２００ｍＭ、好ましくは５０〜１５０ｍＭである。

本発明の製剤には界面活性剤をさらに含むことができる。界面活性剤としては
、非イオン界面活性剤、例えばソルビタンモノカプリレート、ソルビタンモノラ
ウレート、ソルビタンモノパルミテート等のソルビタン脂肪酸エステル；グリセ
リンモノカプリレート、グリセリンモノミリテート、グリセリンモノステアレー
ト等のグリセリン脂肪酸エステル；デカグリセリルモノステアレート、デカグリ
セリルジステアレート、デカグリセリルモノリノレート等のポリグリセリン脂肪
酸エステル；ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレ
ンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート
、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビ
タントリオレエート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート等のポリ
オキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンソルビットテト
ラステアレート、ポリオキシエチレンソルビットテトラオレエート等のポリオキ
シエチレンソルビット脂肪酸エステル；ポリオキシエチレングリセリルモノステ
アレート等のポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル；ポリエチレングリ
コールジステアレート等のポリエチレングリコール脂肪酸エステル；ポリオキシ
エチレンラウリルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルエーテル；ポリオキ
シエチレンポリオキシプロピレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンポリ
オキシプロピレンプロピルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン
セチルエーテル等のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル
；ポリオキシエチエレンノニルフェニルエーテル等のポリオキシエチレンアルキ
ルフェニルエーテル；ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒ
マシ油（ポリオキシエチレン水素ヒマシ油）等のポリオキシエチレン硬化ヒマシ
油；ポリオキシエチレンソルビットミツロウ等のポリオキシエチレンミツロウ誘
導体；ポリオキシエチレンラノリン等のポリオキシエチレンラノリン誘導体；ポ
リオキシエチレンステアリン酸アミド等のポリオキシエチレン脂肪酸アミド等の
ＨＬＢ６〜１８を有するもの；陰イオン界面活性剤、例えばセチル硫酸ナトリウ
ム、ラウリル硫酸ナトリウム、オレイル硫酸ナトリウム等の炭素原子数１０〜１
８のアルキル基を有するアルキル硫酸塩；ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナト
リウム等の、エチレンオキシドの平均付加モル数が２〜４でアルキル基の炭素原
子数が１０〜１８であるポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩；ラウリル
スルホコハク酸エステルナトリウム等の、アルキル基の炭素原子数が８〜１８の
アルキルスルホコハク酸エステル塩；天然系の界面活性剤、例えばレシチン、グ
リセロリン脂質；スフィンゴミエリン等のフィンゴリン脂質；炭素原子数１２〜
１８の脂肪酸のショ糖脂肪酸エステル等を典型的例として挙げることができる。
本発明の製剤には、これらの界面活性剤の１種または２種以上を組み合わせて添
加することができる。

好ましい界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルであり、
特に好ましいのはポリソルベート２０、２１、４０、６０、６５、８０、８１、
８５であり、最も好ましいのはポリソルベート２０及び８０である。

本発明のＧ−ＣＳＦ含有製剤に添加する界面活性剤の添加量は、一般にはＧ−
ＣＳＦ１重量部に対して０．０００１〜１０重量部であり、好ましくはＧ−ＣＳ
Ｆ１重量部に対して０．０１〜５重量部であり、最も好ましくはＧ−ＣＳＦ１重
量部に対して０．２〜２重量部である。具体的に、界面活性剤の添加量は、０．
０００１〜０．５重量％の間で適宜選択することができる。

本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤のｐＨは好ましくは５〜７であり、さらに好まし
くはｐＨが５．５〜６．８であり、さらに好ましくはｐＨが６〜６．７であり、
最も好ましくはｐＨが６．５である。

本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤には、所望によりさらに希釈剤、溶解補助剤、賦
形剤、ｐＨ調整剤、無痛化剤、緩衝剤、含硫還元剤、酸化防止剤等を含有しても
よい。例えば、含硫還元剤としては、Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−アセチルホ
モシステイン、チオクト酸、チオジグリコール、チオエタノールアミン、チオグ
リセロール、チオソルビトール、チオグリコール酸及びその塩、チオ硫酸ナトリ
ウム、グルタチオン、並びに炭素原子数１〜７のチオアルカン酸等のスルフヒド
リル基を有するもの等が挙げられる。また、酸化防止剤としては、エリソルビン
酸、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、α−トコフェ
ロール、酢酸トコフェロール、Ｌ−アスコルビン酸及びその塩、Ｌ−アスコルビ
ン酸パルミテート、Ｌ−アスコルビン酸ステアレート、亜硫酸水素ナトリウム、
亜硫酸ナトリウム、没食子酸トリアミル、没食子酸プロピルあるいはエチレンジ
アミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、ピロリン酸ナトリウム、メタリン酸ナ
トリウム等のキレート剤が挙げられる。さらには、塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、炭酸水素ナトリウム
などの無機塩；クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、酢酸ナトリウムなどの
有機塩などの通常添加される成分を含んでいてよい。

本発明の溶液製剤は、これらの成分をリン酸緩衝液（好ましくはリン酸一水素
ナトリウム−リン酸二水素ナトリウム系）及び／又はクエン酸緩衝液（好ましく
はクエン酸ナトリウムの緩衝液）などの溶液製剤の分野で公知の水性緩衝液に溶
解することによって製造できる。

本発明の安定化されたＧ−ＣＳＦ溶液製剤は通常非経口投与経路で、例えば注
射剤（皮下注、静注、筋注など）、経皮、経粘膜、経鼻、経肺などで投与される
が、経口投与も可能である。

本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤は、通常密封、滅菌されたプラスチックまたはガ
ラス容器中に収納されている。容器はアンプル、バイアルまたはディスポーザブ
ル注射器のような規定用量の形状で供給することができ、あるいは注射用バック
または瓶のような大用量の形状で供給することもできる。

本発明の製剤中に含まれるＧ−ＣＳＦの量は、治療すべき疾患の種類、疾患の
重症度、患者の年齢などに応じて決定できるが、一般には最終投与濃度で１〜１
０００μｇ／ｍｌ、好ましくは１０〜８００μｇ／ｍｌ、さらに好ましくは５０
〜５００μｇ／ｍｌである。

本発明の製剤は、感染症や癌の化学治療において、抗生物質、抗菌剤、抗癌剤
などの薬剤を投与する際に同時投与すると、患者の抵抗力、活性などといった免
疫応答力に基づいた防御機能を改善することが判明しており、臨床上極めて有用
である。従って、本発明の製剤はこれらの薬剤と併用投与することができる。

本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤は後述の実施例に示すように、４０℃−２週間の
加速試験を行った後にも、極めて良好なＧ−ＣＳＦ残存率を示す。また、４０℃
−２週間の加速試験後にも、Ｇ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体生成率がほとん
ど観察されなかった。

本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤は、４０℃−２週間の加速試験後におけるＧ−Ｃ
ＳＦ残存率が９０％以上、好ましくは９３％以上であり、最も好ましくは９５％
以上であり、あるいは２５℃−６ヶ月間の安定性試験後におけるＧ−ＣＳＦ残存
率が９７％以上であり、あるいは１０℃−１年間の安定性試験後におけるＧ−Ｃ
ＳＦ残存率が９７％以上であり、かつ４０℃−２週間の加速試験後Ｇ−ＣＳＦの
メチオニン残基酸化体生成率が１％以下、好ましくは検出限界以下であり、従来
知られているＧ−ＣＳＦ製剤に比べて極めて安定な製剤である。

本発明の検討の中で、溶液製剤を封入するバイアル、シリンジなどの容器条件
（製造ロット間の差など）によっては、ヒスチジンを添加したときにメチオニン
残基酸化体が増加する現象が観察され、この現象は特にシリンジ容器で顕著であ
った。このメチオニン残基酸化体の生成はメチオニンの添加によりほぼ完全に抑
制された。従って、プレフィルドシリンジ製剤として供給する場合には、ヒスチ
ジンなどのアミノ酸と、メチオニン又は既知の酸化防止剤などメチオニン残基酸
化体の生成を抑制する薬剤を添加することにより、Ｇ−ＣＳＦの残存率が極めて
高く、またＧ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体生成率の低い、長期安定化製剤と
することができる。産業上の利用可能性 本発明のＧ−ＣＳＦ溶液製剤は、短期加速試験後においても、長期保存後にお
いても、等張化剤の種類や容器形態によらず、Ｇ−ＣＳＦの残存率が極めて高く
、またＧ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体生成率をほぼ完全に抑制することので
きる安定な製剤である。

本発明を以下の実施例によってさらに詳しく説明するが、本発明の範囲はこれ
に限定されない。本発明の記載に基づき種々の変更、修飾が当業者には可能であ
り、これらの変更、修飾も本発明に含まれる。実施例 実施例１：各種アミノ酸の安定性に及ぼす効果 第１表記載の処方となるよう所定量のアミノ酸、０．０１重量％ ポリソルベ
ート２０を含む２５０μｇ／ｍｌ Ｇ−ＣＳＦ、ｐＨ６．５調剤液を無菌濾過し
た後、ガラスバイアルに上記調剤液を１ｍＬずつ無菌的に充填し、打栓を施した
。

このように、無菌的に調製・濾過を行い製造した第１表記載のＧ−ＣＳＦ製剤
は、４０℃の恒温槽において２週間の加速に供された。未加速品試料、および、
４０℃−２週間加速品試料について、下記評価法１を用いて、４０℃−２週間加
速後の残存率（％）を算出した。評価法１ Ｃ４逆相カラム（４．６ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ、３００オングストローム）を
用い、純水、アセトニトリル、トリフルオロ酢酸を移動相に用いた逆相系高速液
体クロマトグラフィー法によりＧ−ＣＳＦ含量を測定した。Ｇ−ＣＳＦとして、
５μｇ相当量を注入し、アセトニトリルのグラジエントによりＧ−ＣＳＦを溶出
させ、２１５ｎｍの波長で分光学的に検出し、Ｇ−ＣＳＦ含量を測定した。

本方法で測定したＧ−ＣＳＦ含量を用い、下記の式に基づき４０℃−２週間加
速後の残存率（％）を算出した。

その結果を第２表に示す。

このように、グリシン、グルタミン酸ナトリウム、アルギニン塩酸塩、及びヒ
スチジン塩酸塩の添加により４０℃−２週間加速において良好な残存率が観察さ
れ、特にアルギニン塩酸塩及びヒスチジン塩酸塩の添加により残存率が顕著に向
上することが見いだされた。

実施例２：メチオニン添加のＧ−ＣＳＦ酸化体生成に及ぼす効果 第３表記載の処方となるよう所定量のメチオニン、０．０１重量％ ポリソル
ベート２０を含む１００μｇ／ｍｌ Ｇ−ＣＳＦ、ｐＨ６．５調剤液を無菌濾過
した後、ガラスバイアルに上記調剤液を１ｍＬずつ無菌的に充填し、打栓を施し
た。

このように、無菌的に調製・濾過を行い製造した第３表記載のＧ−ＣＳＦ製剤
を、２５℃の恒温槽において５日間保存後、下記評価法２を用いてＧ−ＣＳＦ酸
化体含量を算出した。評価法２ Ｃ４逆相カラム（４．６ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ、３００オングストローム）を
用い、純水、アセトニトリル、トリフルオロ酢酸を移動相に用いた逆相系高速液
体クロマトグラフィー法によりＧ−ＣＳＦ含量を測定した。Ｇ−ＣＳＦとして、
５μｇ相当量を注入し、アセトニトリルのグラジエントによりＧ−ＣＳＦを溶出
させ、２１５ｎｍの波長で分光学的に検出し、Ｇ−ＣＳＦ酸化体のピーク面積、
Ｇ−ＣＳＦ未変化体のピーク面積を測定した。

本方法で測定した各ピーク面積値を用い、下記の式に基づきＧ−ＣＳＦ酸化体
含量（％）を算出した。

その結果を第４表に示す。

メチオニンの添加により、Ｇ−ＣＳＦ酸化体の生成を抑制しうることを見いだ
した。

実施例３：ヒスチジン添加量の安定性に及ぼす効果 第５表記載の処方となるよう所定量の塩酸ヒスチジン、０．１重量％ メチオ
ニン、０．０１重量％ ポリソルベート２０を含む２５０μｇ／ｍｌ Ｇ−ＣＳ
Ｆ、ｐＨ６．５調剤液を無菌濾過した後、ガラスバイアルに上記調剤液を１ｍＬ
ずつ無菌的に充填し、打栓を施した。

このように、無菌的に調製・濾過を行い製造した第５表記載のＧ−ＣＳＦ製剤
は、４０℃の恒温槽において２週間の加速に供された。未加速品試料、および、
４０℃−２週間加速品試料について、前述の評価法１を用いて、４０℃−２週間
加速後の残存率（％）を算出した。

その結果を第６表に示す。

このように、ヒスチジンの添加に伴い、飛躍的に残存率が向上し、短期加速試
験における安定性向上が可能となった。

また、被験試料Ｎｏ．１２〜１６はいずれもＧ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化
体は検出限界以下であった。

実施例４：容器形態が安定性に及ぼす効果 第７表記載の処方となるよう０．４重量％塩酸ヒスチジン、０．１重量％ メ
チオニン、０．０１重量％ ポリソルベート２０を含む２５０μｇ／ｍｌ Ｇ−
ＣＳＦ、ｐＨ６．５調剤液を無菌濾過した後、下記に示した容器形態に上記調剤
液を１ｍＬずつ無菌的に充填し、打栓を施した。

このように、無菌的に調製・濾過を行い製造した第７表記載のＧ−ＣＳＦ製剤
は、４０℃の恒温槽において２週間の加速に供された。未加速品試料、および、
４０℃−２週間加速品試料について、前述評価法１を用いて、４０℃−２週間加
速後、２５℃−６ヶ月保存後、１０℃−１年保存後の残存率（％）を算出した。

その結果、第８表に示す。

４０℃における短期加速試験だけでなく、２５℃および１０℃における長期保
存試験においても、ヒスチジンの添加効果は顕著であり、ヒスチジンの添加によ
りＧ−ＣＳＦ製剤の長期保存安定性確保が可能であることが見いだされた。また
、被験試料Ｎｏ．１９及び２０はいずれもＧ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体は
検出限界以下であった。これらの結果から、容器形態によらず、安定化されたＧ
−ＣＳＦ製剤の提供が可能であると考えられた。

なお、本検討の中で、溶液製剤を封入するバイアルやシリンジの製造ロット間
の差により、ヒスチジン０．４％のみを添加したときにメチオニン残基酸化体が
増加する現象が観察され、この現象は特にシリンジ容器で顕著であった。このメ
チオニン残基酸化体の生成はメチオニン０．１％の添加により検出限界以下とな
った。

実施例５：等張化剤の安定性に及ぼす効果 第９表記載の処方となるよう、所定の等張化剤（塩化ナトリウムまたはＤ−マ
ンニトール）、０．４重量％ 塩酸ヒスチジン、０．１重量％ メチオニン、０
．０１重量％ポリソルベート２０を含む２５０μｇ／ｍｌ Ｇ−ＣＳＦ、ｐＨ６
．５調剤液を無菌濾過した後、ガラスバイアルに上記調剤液を１ｍＬずつ無菌的
に充填し、打栓を施した。

このように、無菌的に調製・濾過を行い製造した第９表記載のＧ−ＣＳＦ製剤
は、４０℃の恒温槽において２週間の加速に供された。未加速品試料、および、
４０℃−２週間加速品試料について、前述評価法１を用いて、２５℃−４ヶ月、
２５℃−６ヶ月及び１０℃−１年保存後の残存率（％）を算出した。

その結果を第１０表に示す。

また、被験試料Ｎｏ．２１及び２２はいずれもＧ−ＣＳＦのメチオニン残基酸
化体は検出限界以下であった。

以上の結果から等張化剤の種類によらず、良好な安定性確保が可能であること
が判明した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 47/34 Ａ６１Ｋ 47/34 Ａ６１Ｐ 43/00 １０７ Ａ６１Ｐ 43/00 １０７ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＱ， ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(Ｇ Ｈ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ， ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，Ｂ Ｙ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ， ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，Ｉ Ｌ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ， ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，Ｎ Ｚ，ＰＨ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ （注）この公表は、国際事務局（ＷＩＰＯ）により国際公開された公報を基に作 成したものである。 なおこの公表に係る日本語特許出願（日本語実用新案登録出願）の国際公開の 効果は、特許法第１８４条の１０第１項（実用新案法第４８条の１３第２項）に より生ずるものであり、本掲載とは関係ありません。

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】安定化剤として、実質的にタンパク質を含まず、また安定化剤とし
   て、少なくとも一種のアミノ酸又はその塩を含むＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
2. 【請求項２】アミノ酸がグリシン、グルタミン酸ナトリウム、アルギニン及びヒ
   スチジン又はそれらの塩から選択される一種以上である、請求項１記載のＧ−Ｃ
   ＳＦ溶液製剤。
3. 【請求項３】アミノ酸がアルギニン及びヒスチジン又はそれらの塩から選択され
   る一種以上である、請求項２記載のＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
4. 【請求項４】アミノ酸がヒスチジン又はその塩である請求項３記載のＧ−ＣＳＦ
   溶液製剤。
5. 【請求項５】メチオニンをさらに含む請求項１〜４のいずれかに記載のＧ−ＣＳ
   Ｆ溶液製剤。
6. 【請求項６】アミノ酸の添加量が０．０１重量％〜１０重量％である請求項１〜
   ５のいずれかに記載のＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
7. 【請求項７】ヒスチジン又はその塩の添加量が０．０１重量％〜１０重量％であ
   る請求項６に記載のＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
8. 【請求項８】マンニトール及び／又は塩化ナトリウムをさらに含む請求項１〜７
   のいずれかに記載のＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
9. 【請求項９】界面活性剤をさらに含む請求項１〜８のいずれかに記載のＧ−ＣＳ
   Ｆ溶液製剤。
10. 【請求項１０】界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステルで
    ある請求項９記載のＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
11. 【請求項１１】界面活性剤がポリソルベート２０及び／又は８０である請求項１
    ０記載のＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
12. 【請求項１２】ｐＨが５〜７である請求項１〜１１のいずれかに記載のＧ−ＣＳ
    Ｆ溶液製剤。
13. 【請求項１３】ｐＨが５．５〜６．８である請求項１２記載のＧ−ＣＳＦ溶液製
    剤。
14. 【請求項１４】Ｇ−ＣＳＦがＣＨＯ細胞から産生されたＧ−ＣＳＦである請求項
    １〜１３のいずれかに記載のＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
15. 【請求項１５】バイアル製剤又はプレフィルドシリンジ製剤である請求項１〜１
    ４のいずれかに記載のＧ−ＣＳＦ製剤。
16. 【請求項１６】プレフィルドシリンジ製剤である請求項１５記載のＧ−ＣＳＦ製
    剤。
17. 【請求項１７】４０℃−２週間の加速試験後におけるＧ−ＣＳＦ残存率が９０％
    以上であり、あるいは２５℃−６ヶ月間の安定性試験後におけるＧ−ＣＳＦ残存
    率が９７％以上であり、あるいは１０℃−１年間の安定性試験後におけるＧ−Ｃ
    ＳＦ残存率が９７％以上であり、かつ４０℃−２週間の加速試験後Ｇ−ＣＳＦの
    メチオニン残基酸化体生成率が１％以下である、安定なＧ−ＣＳＦ溶液製剤。
18. 【請求項１８】実質的にＧ−ＣＳＦのメチオニン残基酸化体を含まない、安定な
    Ｇ−ＣＳＦ溶液製剤。
19. 【請求項１９】安定化剤として、実質的にタンパク質を添加せず、また安定化剤
    として、少なくとも一種のアミノ酸又はその塩を添加することを含むＧ−ＣＳＦ
    溶液製剤の安定化方法。
20. 【請求項２０】少なくとも一種のアミノ酸又はその塩の、安定化されたＧ−ＣＳ
    Ｆ溶液製剤の製造のための使用。