JPWO2006106926A1 - リグナン類化合物含有水中油滴型エマルション及びそれを含有する組成物 - Google Patents

Abstract

本発明の課題は、リグナン類化合物の体内吸収速度を速めること、すなわち即効性を有するリグナン類化合物を提供することである。
リグナン類化合物の一種以上を油脂に溶解せる油相を水相に乳化させた水中油滴型のエマルションにおいて、分散相である油滴の粒子径を高速攪拌等により微粒子化して平均粒子径を1000nm以下、好ましくは500nm以下、より好ましくは300nm以下となるように調製した、リグナン類化合物の体内吸収速度を向上させ、即効性を付与したリグナン類化合物含有組成物。

Description

本発明は、リグナン類化合物を含有する水中油滴型エマルション及びそれを含有する組成物に関し、詳細にはリグナン類化合物の体内吸収速度を改善した組成物に関する。

リグナン類化合物について種々の生体内作用が報告されており、例えば、USP4427694には、セサミンがアルコール中毒やアルコールや喫煙の禁断症状の緩和に有効であること、また特開平2−138120号公報には、セサミノールやエピセサミノールが気管支喘息等のアレルギー症の治療・予防に有効であることが開示されている。本出願人らも、リグナン類化合物の種々の生理作用を確認しており、現在までに血中コレステロール低下作用（特許3001589号）、Δ⁵ −不飽和化酵素阻害作用（特許3070611号）、肝機能改善作用（特許3075358号）、コレステロール降下（特許3075360号）、悪酔防止作用（特許3124062号）、コレステロール及び胆汁酸の代謝阻害、コレステロール低下作用（特許3283274号）、発癌抑制作用（特許3183664号）、乳癌抑制作用（特開平05-043458号）や、過酸化脂質生成抑制作用（特開平05-051388号）、活性酸素除去作用（特開平06-227977号）等の効果を明らかにしている。

これらリグナン類化合物の効果には、長期間にわたって徐々に発揮されることが好ましい効果もあるが、摂取後に速やかに発揮されることが望ましい効果もある。例えば、悪酔い防止効果や活性酸素除去効果は、即効性であることが望ましい。

しかしながら、リグナン類化合物は水には殆ど溶解しない上、医薬用又は食用に使用可能な有機溶媒に対してある程度溶解するだけである。このような、脂溶性物質は、生体内で吸収されにくいという問題を有している。脂溶性物質の体内吸収性を向上させる方法として、脂溶性物質のミセルを微細化（微粒子化）する方法が提案されている。これは、消化管吸収性の点で、脂溶性物質の粒子径が小さいほど有利な性質を利用したものである。具体的には、例えば、特開２００４−１９６７８１号には、コエンザイムＱ１０と、特定のポリグリセリン、脂肪酸モノエステル等とからなる組成物で、平均粒子径を１１０ｎｍ以下とすることにより生体内吸収性が顕著に改善されたコエンザイムＱ１０含有水溶性組成物が開示されている。また、特開平９−１５７１５９号には、カロチノイド類を油脂に溶解した油相を、ポリグリセリン脂肪酸エステル、レシチン及び多価アルコールを含む水相に乳化させた組成物で、前記油相の平均粒子径が１００ｎｍ以下とすることにより難溶性物質であるカロチノイドの体内吸収性を改善したカロチノイド類含有組成物が開示されている。

上記のとおり、脂溶性物質のミセルを微細化（微粒子化）することにより、体内の吸収性(すなわち合計吸収量)を向上させることは知られている。しかし、脂溶性物質の体内吸収速度については、上記文献には何ら示唆も開示もされていない。
USP4427694 特開平2-138120号 特許3001589号 特許3070611号 特許3075358号 特許3075360号 特許3124062号 特許3283274号 特許3183664号（特開平04-159221号） 特開平05-043458号 特開平05-051388号 特開平06-227977号 特開2004-196781号 特開平9-157159号

本発明者らは、リグナン類化合物の体内吸収速度を速めることができるなら、すなわち即効性を有するリグナン類化合物が得られれば、リグナン類化合物の一部の作用を従来より効率的に発揮しうるとの考えに至った。具体的には、体内吸収速度を速めたリグナン類化合物を飲酒直前若しくは飲酒直後に摂取することによって悪酔防止作用を効率的に発揮することができる。あるいは、体内吸収速度の速いリグナン類化合物を運動直前に摂取することによって運動中に発生する体内の活性酸素を効率的に除去できるとの考えである。

したがって、本発明の課題は、リグナン類化合物の体内吸収速度を速めること、すなわち即効性を有するリグナン類化合物を提供することである。

本発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討を行った結果、驚くべきことに、リグナン類化合物の一種以上を溶解せる油相を水相に乳化させて得られる水中油滴型エマルションのリグナン類化合物含有組成物を経口投与すると、油脂に溶解させたリグナン類化合物を経口投与した場合と比較して、体内吸収速度が著しく速くなることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、リグナン類化合物の一種以上を溶解した油相を水相に乳化させた水中油滴型エマルションを提供する。エマルションにおける分散相である油滴の平均粒子径は、臨床上有効量のリグナン類化合物の一種以上を含むエマルションを、空腹時に経口投与した場合、５時間以内、好ましくは２．５時間以内、より好ましくは２．０時間以内に最高血中濃度到達時間（Ｔmax）を有する速度でリグナン類化合物の吸収を可能にするのに有効であれば、特に限定はないが、本発明者らの検討によれば、１００ｎｍ、１３０ｎｍ、２５０ｎｍの平均粒子径を有するいずれのエマルションおいても、このような良好な吸収が観察された。

本発明はまた、経口投与後５時間以内、好ましくは２．５時間以内、より好ましくは２．０時間以内に最高血中濃度到達時間（Ｔmax）となる速度でリグナン類化合物の吸収を可能にする、リグナン類化合物含有組成物及びその製造方法も提供する。このような組成物は、以下の工程：
１）リグナン類化合物の一種以上を油脂に溶解して油相となるリグナン類化合物溶解液を得る工程；
２）前記リグナン類化合物溶解液を水相に乳化させて水中油滴型エマルションを形成させる工程；
３）前記エマルジョン中の油滴の平均平均粒子径が、１０００ｎｍ（好ましくは５００ｎｍ）以下に微細化されるまで、さらに乳化する工程；
を含む方法により、製造することができる。

リグナン類化合物を本発明により経口投与した場合、リグナン類化合物を単に油脂に溶解して同様の条件で投与した場合に比較して、最高血中濃度到達時間（Tmax）が大幅に短縮され、また、最高血中濃度（Ｃmax）を高めることができる。

したがって、本発明により、抗酸化剤として運動直前に摂取することにより運動中発生する活性酸素を効率的に除去することができる。また、アルコール代謝向上剤として飲酒直前に摂取する又は飲酒食後に摂取することにより悪酔防止を図ることができる。

本発明の組成物は、錠剤やカプセル剤のような形態で利用できるのはもちろんのこと、優れた分散安定性を有するので、飲食品、特にドリンク剤の形態で利用することができる。

本発明のエマルション（平均粒子径≒100nm）と比較例の組成物を投与したラットの血中のセサミン濃度及びエピセサミン濃度の総和（セサミン＋エピセサミン濃度）の経時変化を示すグラフである。 本発明のエマルション（平均粒子径≒100nm）と比較例の組成物を投与したラットの体内吸収量（AUC）を示すグラフである。 本発明のエマルション（平均粒子径≒130nm）と比較例の組成物を投与したラットの血中のセサミン濃度及びエピセサミン濃度の総和（セサミン＋エピセサミン濃度）の経時変化を示すグラフである。 本発明のエマルション（平均粒子径≒130nm）と比較例の組成物を投与したラットの体内吸収量（AUC）を示すグラフである。 本発明のエマルション（平均粒子径≒250nm）と比較例の組成物を投与したラットの血中のセサミン濃度及びエピセサミン濃度の総和（セサミン＋エピセサミン濃度）の経時変化を示すグラフである。 本発明のエマルション（平均粒子径≒250nm）と比較例の組成物を投与したラットの体内吸収量（AUC）を示すグラフである。 本発明のエマルション（平均粒子径≒250nm）で、均質な乳化組成物と一部不均質な乳化組成物を投与したラットの体内吸収量（AUC）を示すグラフである。

リグナン類化合物
本発明で使用するリグナン類化合物としては、セサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセサミノール、セサモリン、２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３，３，０］オクタン、２，６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ［３，３，０］オクタン、又は２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ［３，３，０］オクタン等を挙げることができ、これらを単独で、又は混合して使用することができる。

上記リグナン類化合物は、その形態や製造方法等、何ら制限されるものではない。例えば、ごま油から公知の方法(例えば、ごま油に熱メタノールを加えて抽出し、メタノールを除去後、残渣にアセトンを加えて抽出する方法(特開平４−９３３１号公報に記載))によって抽出したもの（リグナン類化合物高含有の抽出物または精製物）を用いることもできるが、市販のごま油（液状）をそのまま用いることもできる。しかしながら、ごま油を用いた場合には、ごま油特有の風味が官能的に好ましくないと評価されることもあることから、ごま油から抽出された無味無臭であるリグナン類化合物高含有の抽出物または精製物を用いることが好ましい。また、ごま油を用いた場合、リグナン類化合物の含有量が低いため、好ましい量のリグナン類化合物を配合しようとすると、処方されるリグナン類化合物含有水中油滴型エマルションを含有する組成物の摂取量が多くなり過ぎるため、摂取に不都合を生じることがある。したがって、摂取量が少なくてよいという観点からもごま油からのリグナン類化合物高含有抽出物または単離精製されたリグナン類化合物の精製物を用いることが好ましい。なお、リグナン類化合物高含有の胡麻種子等からの抽出物は、香ばしい胡麻の香りを有するものであるため、本発明の動物用飲食物に用いれば、胡麻の香りをも付加することも可能である。

また、合成によりリグナン類化合物を得ることもできる。その方法としては、例えば、セサミン、エピセサミンについては、Berozaらの方法（J. Am. Chem. Soc., 78, 1242(1956) ）で合成できる他、ピノレシノールはFreundenbergらの方法（Chem. Ber., 86, 1157(1953)）によって、シリンガレシノールはFreundenbergらの方法（Chem. Ber., 88, 16(1955)）によって合成することができる。

さらに、リグナン類化合物は、配糖体の形で使用することもできる上、これらを単独で、又は適宜組み合わせて組成物の成分とすることもできる。

リグナン類化合物含有エマルション
本発明により、リグナン類化合物を含有するエマルションが提供される。ここで、エマルションであるリグナン類化合物とは、リグナン類化合物が溶解された油脂（油相）を水等の水相に分散した水中油滴型のエマルションである。

本発明の「油相」とは、リグナン類化合物を油脂に溶解させた、リグナン類化合物溶解液をいう。具体的には、ごま油、ごま油に溶解したままの状態であるごま油からのリグナン類化合物高含有抽出物（ごま油濃縮物）の他、胡麻抽出物、精製されたリグナン類化合物等の粉状（固体状）のリグナン類化合物を油脂に溶解させて調製したものを挙げることができる。ここで、リグナン類化合物を溶解させる油脂は、食品又は医薬品に添加できる油脂で、リグナン類化合物を溶解できるものであれば、特に制限されずに用いることができ、１種単独又は複数種混合して用いることができる。具体的には、アーモンドオイル、サフラワー油、アプリコットカーネルオイル、アボガドオイル、月見草オイル、小麦胚芽油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、ウォールナッツオイル（クルミオイル）、オリーブ油、キャスターオイル（ひまし油）、ククイナッツオイル、グレープシードオイル、ココアバター、ココナッツオイル、大豆油、菜種油、落花生油、米油、胡麻油、パーム核油、パームオイル、ホホバオイル、マカダミアナッツオイル、シアバター、マンゴーバター、コクムバター、鯨油、イワシ油、イカ油等の天然油脂、マーガリン等の合成油脂を例示でき、上記オリーブ油等に含まれるジアシルグリセロールを主成分とする油脂やパーム核油等に含まれる中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）を主成分とする油脂等を用いることもできるが、中でも、飽和脂肪酸を多く含む油脂が酸化されにくいことから好ましい。また、常温で液状である油脂だけでなく、半固体状または固体状のラード、牛脂、水素添加魚油、マーガリン、ショートニングなどと混合したものも使用することができる。リグナン類化合物及びリグナン類化合物高含有の抽出物は、本来食用油脂中に含まれていた有効成分及びその抽出物であるため、油脂への添加は容易で、常温で混合するだけでリグナン類化合物を溶解させることが可能であるが、必要に応じ加熱溶解等を行ってもよい。

本発明における「水相」としては、水系溶媒であれば特に限定されるものではなく、水又は水溶液の他、ジュース飲料、炭酸飲料、牛乳、豆乳、穀物飲料、コーヒー、緑茶等の一般飲料、及びアルコール飲料をはじめとする種々の水性飲料を例示できる。

また、油相の含有率を高める目的で、水相に溶解補助剤を添加してもよい。かかる溶解補助剤としては、例えば、プロピレングリコール、エタノール、モノ−及びジ−サッカリド及び糖アルコール（例えばソルビトール、キシリトール及びマンニトール）が挙げられる。

本発明のリグナン類化合物含有エマルションを調製するには、まず、リグナン類化合物の溶解液（油相）を調製する。上記のとおり、ごま油等の溶解液をそのまま用いてもよいし、粉末状のリグナン類化合物を、溶剤となる油脂に添加して混合し、好ましくは加温下で攪拌することにより充分に溶解させて調製することができる。リグナン類化合物と油脂との配合比は、リグナン類化合物の種類及び溶剤となる油脂によって異なることを考慮して適宜設定することができる。本出願人らは、リグナン類化合物であるセサミン、エピセサミン及びその混合物について、油脂により溶解度が異なることを見出している（表１参照）。

表１より明らかなとおり、リグナン類化合物と油脂との配合比（重量比）は、リグナン類化合物：溶剤＝１：１５〜２０００、好ましくは１：１５〜１００程度であれば、リグナン類化合物は充分溶解する。

この油相と水相とを混合して均質化を施すことによって乳化させ、水中に油滴が分散された水中油滴型エマルションを得る。

油相と水相との混合比率（重量比）は、リグナン類化合物を目的の濃度で含有させるために適宜設定することができるが、例えば、油相：水相＝１：２〜１００とすることができ、また１：３〜５０とすることができる。

均質化のための物理的手法としては何ら制限されないが、例えば、撹拌乳化機、高圧ホモジナイザー、超音波乳化機、ウルトラミキサー、コロイドミル等の装置を例示することができる。

また、本発明者らの検討によれば、均質なエマルションが形成されていない、すなわちエマルション中の油滴の分散安定性が悪いと体内への吸収性(すなわち合計吸収量、本明細書では「吸収量」「ＡＵＣ」と称することもある)が低減することもある。均質なエマルションを得るには、エマルションの水相及び／又は油相に界面活性剤を添加するとよい。界面活性剤は、リグナン類化合物及び油脂の種類や量に応じて適宜選択すればよいが、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ショ糖酢酸イソブチレート、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ステアロイル乳酸カルシウム、ダイズサポニン、レシチン、小麦蛋白分解物、ゼラチン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアガム、キサンタンガム、アラビノガラクタン、デキストリン、カゼイン、カゼインナトリウムなどを単独で又は混合して用いることができる。リグナン類化合物が、セサミン及び／又はエピセサミンである場合、レシチン又はその誘導体が好ましく、特にリゾレシチンが好ましい。リゾレシチンは水溶性レシチン誘導体の一つでリゾリン脂質、1−モノアシルグリセロリン脂質、酵素分解レシチン、酵素改質レシチン、リゾホスファチジルコリン、モノ−O−アシル−3−ホスホリルコリンとも言われ、化学名は1−アシル−sn−グリセロ−3−ホスファチジルコリンである。レシチンをホスホリパーゼA₂ などで処理することなどにより製造できる。製法については、例えば特開昭62-279832号、特開昭63-44893号、特開昭63-279753号などに開示されており、レシノール、サンレシチンなどの商品名で市販されている。リゾレシチンとしては純品である必要はない。純度が高い方が好ましいが、３０％以上のものであれば他の不純物を含んでいるものでも何等問題ない。

レシチンは大豆や卵黄を原料とする天然の乳化剤である点からも好ましい。また、酵素分解レシチンは脂肪酸のエステル結合を加水分解して水酸基を増やすことにより親水性を増大し、Ｏ／Ｗ乳化力が非常に高く、かつ水溶性であり、耐酸性、耐塩性、耐熱性が高い点からも好ましい。

界面活性剤を用いる場合、リグナン類化合物を含む油相と界面活性剤の配合比率（重量比）は、例えば１：０．０５〜１０、好ましくは１：０．１〜５である。

また、一般に、粒子径が減少するに伴い表面積が拡大するため、静電的安定性が増し、分散安定性が向上することが知られている。したがって、均質なエマルションを得るには、分散相である油滴の粒子径を小さく（微細化）するのも有効である。具体的には、油滴の平均粒子径が１０００ｎｍ以下、好ましくは５００ｎｍ以下、さらに好ましくは３００ｎｍ以下にするとよい。３００ｎｍ以下にすると、室温で２日間放置した場合にも油相の分離が生じず、良好な分散安定性を示す。なお、本発明者らの検討によると、油脂としてＭＣＴを用いた場合、特異的に油滴の粒子径が小さくなることを見出している。具体的には、油脂としてオリーブ油を用いて製造したセサミン及びエピセサミン含有エマルションの平均粒子径が、８６２．３ｎｍ、１５７．３ｎｍ、１７２．９ｎｍであった場合に、油脂としてＭＣＴを用いる以外は同じ条件で製造したセサミン及びエピセサミン含有エマルションの平均粒子径が、それぞれ２７７．７ｎｍ、８１．５ｎｍ、９５．９ｎｍであった。したがって、微細化されたリグナン類の油滴、特に１００ｎｍ以下の油滴を製造することを目的とする場合には、油脂としてＭＣＴが好適に選択できる。ＭＣＴは、やし油、ココナツ油、ババス油等の植物油脂中の成分として存在するものを使用することができ、また人工的に合成したものを使用してもよい。

本発明の水中油滴型エマルションは、油相と水相とを混合して均質化を行うことにより製造できるが、上記油滴の平均粒子径が１０００ｎｍ以下、好ましくは５００ｎｍ以下、さらに好ましくは３００ｎｍ以下の微細化された油滴を含有するエマルションを製造するには、油相と水相とを混合して予備乳化を行った後、さらに油滴の平均粒子径が上記サイズになるまで乳化する（本乳化）手段を施すことにより製造できる。この乳化手段としては、高速に攪拌できるものであれば特に制限せず使用することができ、具体的には、前記の均質化処理と同様、撹拌乳化機、高圧ホモジナイザー、超音波乳化機、ウルトラミキサー、コロイドミル等の装置を例示することができる。攪拌は、装置の種類や形状、攪拌する被対象物（油相と水相の混合物）の性質や量により適宜設定すればよいが、通常、５０００〜３００００ｒｐｍ、好ましくは、６０００〜２００００ｒｐｍで、１０〜３０分程度である。

本発明のリグナン類化合物含有エマルションには、上記リグナン類化合物、油脂、水系溶媒、界面活性剤の他、酸化を防ぐ目的で、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ｄ−α−トコフェロールエラグ酸、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエン、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、フェロールなどの酸化防止剤を混合してもよい。さらに、必要に応じて甘味料、調味料、酸味料、ｐＨ調整剤などを添加することもできる。

用途
本発明により、生体内におけるリグナン類化合物の吸収性が向上する。したがって、本発明の水中油滴型エマルションは、リグナン類の吸収速度が好ましい結果を生じうる種々の食品組成物又は経口用医薬組成物の形態で用いることができる。本発明の食品組成物は、飲料の形態であるものも含む。本発明の食品組成物は、栄養機能食品、特定保健用食品、健康食品、栄養補助食品、ドリンク剤、ソフトカプセル等とすることができる。

本発明の水中油滴型エマルションの食品組成物又は経口用医薬組成物への配合比率（重量比）は、リグナン類化合物を目的の濃度・量で含有させるために適宜設定することができるが、例えば、１〜１００重量％程度である。また、本発明の食品組成物又は経口医薬組成物には、許容される種々の添加物、例えば、附形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤、保存剤、緩衝剤を用いることができる。

本発明の医薬組成物において、有効成分であるリグナン類化合物の量、投与期間、間隔は、目的、症状、対象者の年齢、体重等に応じて適宜とすることができる。

本発明の食品組成物又は経口医薬組成物の対象は、ヒト又は動物である。動物とは、産業動物、ペットおよび実験動物を表し、具体的には、産業動物とは、ウシ、ウマ、ブタ、ヤギ、ヒツジ等の家畜、ニワトリ、アヒル、ウズラ、七面鳥、ダチョウ等の家禽、ブリ、ハマチ、マダイ、マアジ、コイ、ニジマス、ウナギ等の魚類など産業上飼養することが必要とされている動物をいい、ペットとはイヌ、ネコ、マーモセット、小鳥、ハムスター、金魚などのいわゆる愛玩動物、コンパニオン・アニマルをいい、実験動物とはラット、モルモット、ビーグル犬、ミニブタ、アカゲザル、カニクイザルなど医学、生物学、農学、薬学等の分野で研究に供用される動物を表す。

評価方法
リグナン類化合物を本発明により経口投与した場合、リグナン類化合物を単に油脂に溶解して同様の条件で投与した場合に比較して、最高血中濃度到達時間（Ｔmax）が大幅に短縮され、また、最高血中濃度（Ｃmax）を高めることができる。このような体内への吸収性の向上は、血中のリグナン類化合物濃度を経時的に測定することによって評価することができる。

血中のリグナン類化合物濃度は、血液を採取して遠心分離操作により血漿サンプルを得、内部標準（例えば、フナコシ株式会社製のユーデスミン）を添加して固相抽出用ポリマー充？剤（例えば、Waters Corporation製のOasis HLB）で固相抽出し、抽出液を減圧濃縮後、メタノールで懸濁し、フィルターろ過してＬＣ−ＭＳ／ＭＳに付し、リグナン類化合物の定量を行うことで求めることができる。

複数のリグナン類化合物が用いられている場合には、総和の血中濃度に基づいて、Ｃmax及びＴmaxを求め、評価することができる。

なお、本明細書において平均粒子径というときは、特別な場合を除き、メディアン径（ふるい上分布曲線の50％に対応する粒子径。中位径、または50％粒子径ともいう。）をいい、光散乱式粒度分布測定法で測定することができる。動的光散乱式粒度分布測定法で測定してもよい。

以下に、実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。

〈実施例１：吸収性試験−１〉
試料
セサミン（竹本油脂製；セサミン：エピセサミン＝５１．１：４８．２）１ｇを８０℃に熱したオリーブ油５０ｇに懸濁し、２０分間攪拌し、セサミンを均一に溶解した。この溶液を約７０℃まで冷却し、酵素分解レシチン（サンレシチンＶＡ−１；太陽化学（株）製；有効成分 ３３．３％；原料 大豆）２５ｇを７０℃に加温した水１０００ｍＬに混合溶解した水溶液に撹拌注加し、ディストロミックス（エーテックジャパン（株）製）で６０００ｒｐｍ、１５分間乳化処理を行った。さらに、この乳化液を５０〜６０℃に保温し、高速攪拌乳化機（エムテクニック（株）製クレアミックスダブルモーション）でローター部２００００ｒｐｍ、スクリーン部１２５００ｒｐｍで４０分間処理して、セサミンを含有する水溶性乳化組成物（セサミン含有水中油滴型エマルション）を得た（試料１）。また、得られたセサミン含有水中油滴型エマルションの平均粒子径は堀場製作所株式会社製動的光散乱式粒度分布測定装置ＬＢ−５５０によって測定し、その結果は９７．８ｎｍであった。

比較例として、セサミン（竹本油脂製；セサミン：エピセサミン＝５１．１：４８．２）５０ｍｇを８０℃に熱したオリーブ油５０ｍＬに懸濁し、２０分間攪拌し、セサミンを均一に溶解した溶解液を用いた（比較試料）。

セサミン体内吸収性試験
ＳＤ（ＩＧＳ）系雄性ラット（９週齢）を日本チャールスリバー社より購入し、１週間試験環境で馴化させた後、順調な発育を示した動物を試験に供した。一晩絶食させたラットを各群４匹からなる２群に分け、試料１のセサミン含有水中油滴型エマルション又は比較試料のセサミンのオリーブ溶解油脂を、１０ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇの用量で、ゾンデを用いて経口投与した。投与開始後、１、３、５、７、９時間後及び２５時間後に尾静脈よりヘパリン採血管に血液を採取し、遠心分離操作（８０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）により血漿サンプルを得た。内部標準を添加してOasis HLBで固相抽出し、抽出液を減圧濃縮後、メタノールで懸濁し、フィルターろ過してＬＣ−ＭＳ／ＭＳに付してセサミン及びその異性体であるエピセサミンの定量を行った。セサミン及びエピセサミン量は、常法に従い、セサミン及びエピセサミンのピーク面積と、内部標準として用いたユーデスミン（フナコシ株式会社）のピーク面積との比により決定した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析条件を以下に示す。

（ＨＰＬＣ）
カラム：Develosil C30-UG-5（５μｍ、２．０Φ×５０ｍｍ、野村化学社製）
移動相：Ａ；蒸留水、Ｂ；メタノール、Ｄ；１００ｍＭ 酢酸アンモニウム水溶液
流速 ：０．２５ｍＬ／ｍｉｎ
グラジエント：Ｂ液が５５％、Ｄ液が１０％で２分間、その後、３分間でＢ液が５５％から６０％、Ｄ液が１０％、２分間でＢ液が６０％から８５％、Ｄ液が１０％となるリニアグラジエント
（ＭＳ／ＭＳ）
測定モード：選択反応モニタリング
検出 ：エピセサミン（保持時間約5.6分）；前駆イオンm/z=372（[M+NH4]+）、生成イオンm/z=233
：ユーデスミン（保持時間約2.8分）；前駆イオンm/z=404([M+NH4]+)、生成イオンm/z=249
イオン化法：ESI法
図１に、血中のセサミン濃度及びエピセサミン濃度の総和（セサミン＋エピセサミン濃度）の経時変化を示す。血中のセサミン＋エピセサミン濃度の最大値（Ｃmax）は、試料１摂取群では４８ｎｇ／ｍＬであるのに対し、比較試料摂取群では２０ｎｇ／ｍＬであった。また、最大値（Ｃmax）までに要する時間（Ｔmax）は、試料１摂取群では約１時間、比較試料摂取群では約９時間であった。さらに、図１から体内吸収量（ＡＵＣ）を求めると、吸収量には差がなかった（図２）。

以上より、試料１（微細化されたリグナン類化合物含有水溶液）摂取群では、体内吸収量は変わらないが、体内吸収速度が向上し、即効性を有することが示唆された。
〈実施例２：吸収性試験−２〉
試料
実施例１と同様に、セサミン含有水中油滴型エマルションを調製した（試料２）。高速攪拌乳化機による乳化時間を３０分としたこと以外、製造条件は実施例１と同じである。このエマルションの油滴の平均粒子径は、１３０ｎｍ（堀場製作所株式会社製動的光散乱式粒度分布測定装置ＬＢ−５５０による）であった。

セサミン体内吸収性試験
試験の方法は、実施例１に準じて行った。一晩絶食させたラットを各群６匹からなる２群に分け、試料２（平均粒子径；１３０ｎｍ）のセサミン含有水中油滴型エマルション又は実施例１で調製した比較試料のセサミンのオリーブ溶解油脂を、１０ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇの用量で、ゾンデを用いて経口投与し、血中濃度推移を測定した。

図３に、血中のセサミン濃度及びエピセサミン濃度の総和（セサミン＋エピセサミン濃度）の経時変化を示す。最大値（Ｃmax）までに要する時間（Ｔmax）は、比較試料摂取群では約７時間であるのに対して、試料２摂取群は約１時間であった。血中のセサミン＋エピセサミン濃度の最大値（Ｃmax）は、比較試料摂取群では２８ｎｇ／ｍＬであるのに対し、試料２摂取群では６９ｎｇ／ｍＬであった。また、体内吸収量（ＡＵＣ）を求めると、吸収量に差はなかった（図４）。 以上より、平均粒子径１３０ｎｍのものにおいても、体内吸収量は変わらないが、体内吸収速度が向上し、即効性を有することが示唆された。
〈実施例３：吸収性試験−３〉
試料
実施例２と同様に、セサミン含有水中油滴型エマルションを調製した（試料）。乳化液を５０〜６０℃に保温し、高速攪拌乳化機（エムテクニック（株）製クレアミックスダブルモーション）でローター部９０００ｒｐｍ、スクリーン部６５００ｒｐｍとしたこと以外、製造条件は実施例２と同じである。このエマルションの油滴の平均粒子径は、２４８.３ｎｍ（堀場製作所株式会社製動的光散乱式粒度分布測定装置ＬＢ−５５０による）であった。

セサミン体内吸収性試験
試験の方法は、実施例１に準じて行った。一晩絶食させたラットを各群６匹からなる２群に分け、試料３（平均粒子径；２４８.３ｎｍ）のセサミン含有水中油滴型エマルション又は実施例１で調製した比較試料のセサミンのオリーブ溶解油脂を、１０ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇの用量で、ゾンデを用いて経口投与し、血中濃度推移を測定した。

図５に、血中のセサミン濃度及びエピセサミン濃度の総和（セサミン＋エピセサミン濃度）の経時変化を示す。最大値（Ｃmax）までに要する時間（Ｔmax）は、比較試料摂取群では約５時間であるのに対して、試料３摂取群は約１時間であった。血中のセサミン＋エピセサミン濃度の最大値（Ｃmax）は、比較試料摂取群では２４ｎｇ／ｍＬであるのに対し、試料３摂取群では６７ｎｇ／ｍＬであった。さらに、図４から体内吸収量（ＡＵＣ）を求めると、吸収量に差はなかった。（図６）
以上より、平均粒子径２４８．３ｎｍ（≒２５０ｎｍ）においても、体内吸収量は変わらないが、体内吸収速度が向上し、即効性を有することが示唆された。
〈実施例４：吸収性試験−４〉
実施例３で得た試料３（平均粒子径２４８．３ｎｍのセサミン含有水中油滴型エマルション）を数ヶ月間放置し、試料のごく一部に油相分離が発生しているもの（目視での確認による）（試料４）について、実施例３と同様にしてセサミン体内吸収性試験を実施した。

試料３と比較すると、最大値（Ｃmax）までに要する時間（Ｔmax）は変わらないが、試料４ではＣmaxの値が低下していた（図示せず）。体内吸収量（ＡＵＣ）を求めると、試料４摂取群は、試料３摂取群と比較して約１／２倍に吸収量が低下していた（図７）。

以上より、充分な乳化を行った安定なエマルションを調製しないと、体内吸収量が低下する、すなわち効率的な吸収が得られないことが示唆された。
〈実施例５：分散性試験〉
試料
セサミン（竹本油脂製；セサミン：エピセサミン＝５１．１：４８．２）１ｇを１００℃に熱した中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）（アクターＭ−１；理研ビタミン（株）製）５０ｇ又はオリーブ油５０ｇに懸濁し、マグネティクスターラーを用いて２０分間攪拌し、セサミンを均一に溶解して油相を調製した。また、界面活性剤として０〜１００ｇの酵素分解レシチン（サンレシチンＶＡ−１；太陽化学（株）製；有効成分 ３３．３％；原料 大豆）を用い、８０℃に加温した水に混合溶解して１０００ｇの水相を調製した。前記油相を約８０℃まで冷却し、前記水相に撹拌注加し、予備乳化した。予備乳化には、エムテクニック（株）製クレアミックスＣＬＭ−１．５Ｓを用い、５０００ｒｐｍで５分間攪拌した。また、表２に示すように、試料のいくつかは、予備乳化に続いて本乳化処理を行った。本乳化処理は、予備乳化液を温度８０℃で、エムテクニック（株）製クレアミックスダブルモーションＣＬＭ−２．２／３．７Ｗを用い、ローター部２００００ｒｐｍ、スクリーン部１２５００ｒｐｍで３０分間処理して行った。このように種々の条件により、１６種類のセサミンを含有する水溶性乳化組成物（セサミン含有水中油滴型エマルション）を得た（試料Ａ〜Ｐ）。これらエマルションの油滴の平均粒子径を、実施例１と同様に堀場製作所株式会社製動的光散乱式粒度分布測定装置ＬＢ−５５０を用いて測定した。さらに、これらエマルション１０ｍＬを遠沈管に分取し、２日間室温にて静置し、目視により分離状態（分散安定性）を確認した。

結果を表３に示す。油脂としてＭＣＴを用いると、オリーブ油を用いた場合と比較して、平均粒子径が小さくなった。また、粒子径が３００ｎｍ以下であると、優れた分散安定性を示すことが示唆された。

〈実施例６：ソフトカプセル剤〉
（油相）
セサミン ３．５ｇ
ビタミンＥ（α−トコフェロール含量５０％） ４０ｇ
小麦胚芽油 １６０ｇ
（水相）
水 １０００ｇ
酵素分解レシチン ２５ｇ
実施例１と同様に、油相及び水相を調製し、油相を水相に滴下しながら水中油滴型の組成物を調製した。この組成物を、通常のロータリー法によってゼラチン皮膜（ゼラチン 60.0%、グリセリン 30.0%、パラオキシ安息香酸メチル 0.15%、パラオキシ安息香酸プロピル 0.51%、水 適量）により構成したソフトカプセル中に充填し、ソフトカプセル剤を調製した。

〈実施例６：ドリンク剤〉
セサミン ０．１％
オリーブ油 ５％
液糖 １０％
酸味料 ０．２％
香料 ０．２％
酵素分解レシチン １．５％
水 ８８．４％
セサミンを加温下でオリーブ油に添加して溶解させ、セサミン溶解液を調製した。所定量の液糖と水と酵素分解レシチンを混合して高速攪拌し、次いで、酸味料、香料を添加してセサミン入りドリンク剤を調製した。

Claims (12)

1. リグナン類化合物の一種以上を溶解した油相を水相に乳化させた、水中油滴型エマルション。
2. リグナン類化合物が、セサミン及び／又はエピセサミンである、請求項１に記載の水中油滴型エマルション。
3. 油相及び／又は水相が、乳化上有効量の界面活性剤を含有する、請求項１又は２に記載の水中油滴型エマルション。
4. 界面活性剤が、レシチン又はその誘導体である、請求項３に記載の水中油滴型エマルション。
5. 油滴の平均粒子径が、１０００ｎｍ以下（好ましくは５００ｎｍ以下、さらに好ましくは３００ｎｍ以下）である、請求項１〜４のいずれかに記載の水中油滴型エマルション。
6. 請求項１〜４のいずれかに記載の水中油滴型エマルションを含む、食品組成物又は経口用医薬組成物。
7. 経口投与用の、リグナン類化合物を含有する組成物であって、該組成物が、
   臨床上有効量のリグナン類化合物の一種以上を溶解した油相を水相に乳化させた、乳化上有効量の界面活性剤を含有してもよい、水中油滴型エマルションであって、
   経口投与後５時間以内に最高血中濃度到達時間（Ｔmax）を有する速度でリグナン類化合物の吸収を可能にするのに有効である、水中油滴型エマルション
   を含む、リグナン類化合物含有組成物。
8. 界面活性剤として、レシチン又はその誘導体を含有する、請求項７に記載の経口投与用組成物。
9. 下記の工程：
   １）リグナン類化合物の一種以上を油脂に溶解して油相となるリグナン類化合物溶解液を得る工程；
   ２）前記リグナン類化合物溶解液を水相に乳化させて水中油滴型エマルションを形成させる工程；
   ３）前記エマルジョン中の油滴の平均平均粒子径が、１０００ｎｍ以下（好ましくは５００ｎｍ以下、さらに好ましくは３００ｎｍ以下）に微細化されるまで、さらに乳化する工程；
   を含む、リグナン類化合物含有組成物の製造方法。
10. リグナン類化合物が、セサミン及び／又はエピセサミンである、請求項９に記載の製造方法。
11. 油相及び／又は水相に乳化上有効量の界面活性剤を添加して工程２）を行う、請求項９又は１０に記載の製造方法。
12. 界面活性剤が、レシチン又はその誘導体である、請求項１１に記載の製造方法。