JPWO1997045451A1

JPWO1997045451A1 - Antibody to human LECT2, cells producing the antibody, and assay method and assay kit

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Publication number: JPWO1997045451A1
Application number: JP9-542021A
Authority: JP
Inventors: 孝夫新井
Original assignee: Medical and Biological Laboratories Co Ltd
Current assignee: Medical and Biological Laboratories Co Ltd
Priority date: 1996-05-27
Filing date: 1997-05-26
Publication date: 1999-06-22
Anticipated expiration: 2017-05-26

Abstract

(57)【要約】ヒトＬＥＣＴ２に特異的に反応する抗体、ヒトＬＥＣＴ２の測定法及び測定用キットである。ヒトＬＥＣＴ２に特異的に反応する抗体は、例えば、融合細胞クローンＧ２Ａ５Ｄ７（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３８）、Ａ１Ｇ１Ｃ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３９）、５Ｃ５（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４０）、Ｈ１２Ｄ１０Ｄ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４１）などによって産生される。かかる抗体を不溶性支持体に結合せしめてなる固相化抗体にヒトＬＥＣＴ２を反応せしめた後、ヒトＬＥＣＴ２と反応する他の抗体を標識物質により標識化した標識抗体を反応させ、この反応生成物の標識量を測定すれば、ヒトＬＥＣＴ２の測定が可能となる。 (57) [Abstract] An antibody specifically reactive with human LECT2, and a method and kit for measuring human LECT2. Antibodies specifically reactive with human LECT2 are produced, for example, by hybridoma clones G2A5D7 (Accession No. FERM P-15638), A1G1C6 (Accession No. FERM P-15639), 5C5 (Accession No. FERM P-15640), and H12D10D6 (Accession No. FERM P-15641). Human LECT2 can be measured by reacting human LECT2 with immobilized antibodies prepared by binding such antibodies to an insoluble support, followed by reaction with a labeled antibody prepared by labeling another antibody reactive with human LECT2 with a labeling substance, and measuring the amount of label in the reaction product.

Description

Detailed Description of the Invention

ヒトＬＥＣＴ２に対する抗体、それを産生する細胞、その測定法及び測定用キット技術分野本発明は、新規な蛋白質ヒトＬＥＣＴ２と反応する抗体、その抗体を産生する融合細胞、ヒトＬＥＣＴ２の測定法及び測定用キットに関する。背景技術最近、好中球の癌細胞破壊反応への関与が知られるようになり、癌組織において好中球の浸潤像が観察されることから、好中球が癌細胞の分泌する走化性因子に応答したものと考えられている。ＬＥＣＴ２（Leukocyte-derived chemotaxin 2）は、このような癌細胞から分泌される走化性因子を探索する中から見いだされたものであり、Ｔ細胞白血病細胞ＳＫＷ−３の培養上清から得られた走化性因子と考えられるものである。ヒトＬＥＣＴ２は、Ｔ細胞白血病細胞ＳＫＷ−３の培養上清中に存在するウシ血清中のＬＥＣＴ２をコードするＤＮＡを用いてヒトのｃＤＮＡライブラリーの中から９０％以上のホモロジーを有する蛋白質として新たに見出されたものである。下記表１は、ヒトＬＥＣＴ２とウシＬＥＣＴ２のアミノ酸配列を比較できるように示したものである。Antibody to Human LECT2, Cells Producing the Antibody, and Assay Method and Kit Technical Field The present invention relates to an antibody that reacts with the novel protein human LECT2, fusion cells producing the antibody, and an assay method and kit for human LECT2. Background Art Recently, the involvement of neutrophils in the destruction of cancer cells has become known, and the observation of neutrophil infiltration in cancer tissues has led to the belief that neutrophils respond to chemotactic factors secreted by cancer cells. LECT2 (leukocyte-derived chemotaxin 2) was discovered during a search for chemotactic factors secreted by such cancer cells, and is believed to be a chemotactic factor obtained from the culture supernatant of the T-cell leukemia cell line SKW-3. Human LECT2 was newly discovered as a protein with over 90% homology from a human cDNA library prepared using DNA encoding bovine serum LECT2 present in the culture supernatant of SKW-3 T-cell leukemia cells. Table 1 below shows a comparison of the amino acid sequences of human LECT2 and bovine LECT2.

【表１】このヒトＬＥＣＴ２もウシＬＥＣＴ２同様の走化性因子であると考えられ、病態の把握や癌の治療への応用が期待されることから、このヒトＬＥＣＴ２の測定法を確立することが望まれた。なお、当初、ウシＬＥＣＴ２をＬＥＣＴ２ａ、ヒトＬＥＣＴをＬＥＣＴ２ｂと称していたが、従前の名称は相応しくないことから名称を変更した。本発明は上記課題に鑑みなされたものであり、ヒトＬＥＣＴ２に対する抗体、それを産生する細胞、その測定法及び測定用キットを提供することを目的とする。発明の開示上記課題を解決するため、本発明の第１である抗体は、ヒトＬＥＣＴ２（配列表の配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質）と特異的に反応することを特徴とする。かかる抗体としては、例えば、融合細胞クローンＧ２Ａ５Ｄ７（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３８）によって産生される抗体、融合細胞クローンＡ１Ｇ１Ｃ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３９）によって産生される抗体、融合細胞クローン５Ｃ５（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４０）によって産生される抗体、融合細胞クローンＨ１２Ｄ１０Ｄ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４１）、あるいは、融合細胞クローン８９Ｆ２（受託番号ＦＥＲＭＰ−１６２２９）によって産生される抗体がある。本発明の第２である融合細胞は、ヒトＬＥＣＴ２と特異的に反応する抗体を産生することを特徴とする。かかる融合細胞としては、例えば、融合細胞クローンＧ２Ａ５Ｄ７（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３８）、Ａ１Ｇ１Ｃ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３９）、５Ｃ５（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４０）、Ｈ１２Ｄ１０Ｄ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４１）、８９Ｆ２（受託番号ＦＥＲＭＰ−１６２２９）がある。本発明の第３であるヒトＬＥＣＴ２の測定法は、下記ａ）〜ｃ）及びｄ）〜ｆ）の工程を含むことを特徴とする。即ち、ａ）ヒトＬＥＣＴ２と特異的に反応する第１の抗体を不溶性支持体に結合せしめてなる固相化抗体に標準物質としてのヒトＬＥＣＴ２を反応せしめた後、ｂ）ヒトＬＥＣＴ２と特異的に反応する第２の抗体を標識物質により標識化した標識抗体を反応させ、ｃ）この反応生成物の標識量を測定することにより検量線を作成する工程、及びｄ）前記固相化抗体に検体を反応せしめた後、ｅ）前記標識抗体を反応させ、ｆ）この反応生成物の標識量を測定し、前記検量線から検体中に含まれるヒトＬＥＣＴ２を測定する工程。本発明の第４であるヒトＬＥＣＴ２の測定用キットは、ヒトＬＥＣＴ２と特異的に反応する第１の抗体を不溶性支持体に結合せしめてなる固相化抗体と、ヒトＬＥＣＴ２と特異的に反応する第２の抗体を標識物質により標識化した標識抗体とを備えたことを特徴とする。本発明の第３、第４において、第１の抗体は、融合細胞クローンＧ２Ａ５Ｄ７（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３８）によって産生される抗体、融合細胞クローンＡ１Ｇ１Ｃ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３９）によって産生される抗体、融合細胞クローン５Ｃ５（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４０）によって産生される抗体、融合細胞クローンＨ１２Ｄ１０Ｄ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４１）によって産生される抗体、あるいは、融合細胞クローン８９Ｆ２（受託番号ＦＥＲＭＰ−１６２２９）によって産生される抗体であり、前記第２の抗体は前記４つの抗体のいずれかであって第１の抗体とは異なるものであることが好ましい。また、標識物質としては、例えば、ペルオキシダーゼ、ビオチン、 β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、アルカリフォスファターゼ及びマイクロペルオキシダーゼからなる群から選ばれたものを用いることができる。図面の簡単な説明図１はＥＬＩＳＡ法によるヒトＬＥＣＴ２の検出結果を表すグラフであり、図２はウェスターンブロットによる各クローンのモノクローナル抗体の反応特異性を表す説明図であり、図３はヒトＬＥＣＴ２の濃度と吸光度との関係を表すグラフであり、図４は急性肝炎患者検体の急性期と寛解期におけるヒトＬＥＣＴ２の測定値を表すグラフであり、図５は健常者の組織の染色像を表す写真であり、（Ａ）は１００倍拡大写真、（Ｂ）は２００倍拡大写真であり、図６は肝硬変患者の組織の染色像を表す写真であり、（Ａ）は１００倍拡大写真、（Ｂ）は２００倍拡大写真である。発明を実施するための最良の形態［ヒトＬＥＣＴ２に特異的に反応する抗体、及び、その抗体を産生する融合細胞］ヒトＬＥＣＴ２に特異的に反応する抗体の作製について以下に説明する。Ａ．抗原抗原としてはヒトＬＥＣＴ２（配列番号１で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質）をクローニングし、免疫原として使用した。Ｂ．上記抗原による免疫免疫動物としては哺乳動物であるマウスのほかラット、ハムスターなども用いることができる。通常マウスが最も汎用され、ＢＡＬＢ／ｃマウス、その他の系（ｓｔｒａｉｎ）のマウスを用いることができる。この際、免疫計画及び抗原の濃度は十分な量の抗原刺激を受けたリンパ球が形成されるよう選ばれるべきである。例えばマウス１匹に２５μｇの抗原を２週間間隔で腹腔に３回免疫後、さらに２５μｇを静脈に投与する。最終免疫の数日後に融合のための脾臓細胞を取り出す。Ｃ．細胞融合上記のごとく免疫した哺乳動物の個体から脾臓を無菌的に取り出し、そこから単細胞懸濁液を調製する。この脾臓細胞（抗体産生細胞）を適当な骨髄腫細胞と適当な融合促進剤の使用により細胞融合させる。骨髄腫細胞としては免疫動物と同種の哺乳動物に由来するものが望ましいが、ラット、ハムスター等の脾臓細胞とマウスの骨髄腫細胞を融合させることもできる。脾臓細胞と骨髄腫細胞の好ましい比率は約２０：１〜約２：１の範囲である。約１０⁸個の脾細胞について０．５〜１．５ｍｌの融合媒体の使用が適当である。好ましい融合促進剤としては、例えば平均分子量１０００〜４０００のポリエチレングリコールを有利に使用できるが、この分野で知られている他の融合促進剤（例えばセンダイウイルス（別名ＨＶＪ））を用いることもできる。また、これら融合促進剤を用いた方法以外に電気ショックを用いる方法により細胞融合を行ってもよい。Ｄ．目的とする抗体を産生する融合細胞の選択別の容器（例えばマイクロタイタープレート）で未融合の脾細胞、未融合の骨髄腫細胞及び融合した融合細胞の混合物を未融合の骨髄腫細胞を支持しない選択培地で希釈し、未融合の細胞を死滅させるのに十分な時間（約１時間）培養する。培地は薬物抵抗性（例えば８−アザグアニン抵抗性）で未融合の骨髄腫細胞を支持しないもの（例えばＨＡＴ培地）が使用される。この選択培地中では未融合の骨髄腫細胞は死滅する。この未融合の脾細胞は非腫瘍性細胞なので、ある一定期間後（１週間後）死滅する。これに対して融合した細胞は、骨髄腫の親細胞の腫瘍性と親脾細胞の性質を合わせ持つため、選択培地中で生存できる。かくして、融合細胞が検出された後、前記のヒトＬＥＣＴ２に対する抗体について酵素免疫測定法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay )によりスクリーニングを行い、ヒトＬＥＣＴ２と特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する融合細胞だけを選択する。このような融合細胞として、例えば融合細胞クローンＧ２Ａ５Ｄ７（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３８）、融合細胞クローンＡ１Ｇ１Ｃ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３９）、融合細胞クローン５Ｃ５（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４０）、融合細胞クローンＨ１２Ｄ１０Ｄ６（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６４１）、融合細胞クローン８９Ｆ２（受託番号ＦＥＲＭＰ−１６２２９）が挙げられる。Ｆ．目的とする抗体の取得目的とする抗体を産生する融合細胞を適当な方法（例えば限界希釈法）でクローン化した後、抗体は２つの異なった方法で産生することができる。その第１の方法によれば、融合細胞を一定期間、適当な培地で培養することにより、その培養上清からその融合細胞の産生するモノクローナル抗体を得ることができる。第２の方法によれば、融合細胞は同質遺伝子、または半同質遺伝子を持つ免疫動物の腹腔に注射することができる。一定時間後の宿主動物の血液中および腹水中より、その融合細胞の産生するモノクローナル抗体を得ることができる。［ヒトＬＥＣＴ２の測定法］Ａ．固相化抗体ヒトＬＥＣＴ２と特異的に反応する抗体を不溶性支持体に結合せしめてなる固相化抗体を作成するには、この抗体と不溶性支持体を接触させることにより不溶性支持体の表面に抗体を吸着させて行うほか、共有結合等の化学的な方法によっても結合させることができる。不溶性担体としては、例えばポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリアクリルニトリル、フッ素樹脂、架橋デキストラン、ポリサッカライドなどの高分子、その他紙、ガラス、金属、アガロースおよびこれらの組み合わせなどを例示することができる。また、不溶性担体の形状としては、トレイ状、球状、棒状、繊維状、盤状、容器状、セル、試験管など種々の形状であることができる。Ｂ．標識抗体ヒトＬＥＣＴ２に特異的に反応する抗体は、完全抗体であってもよく、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）’₂等のフラグメントであってもよい。標識物質としては、通常の免疫学的測定方法に使用し得るものであれば特に限定されるものではないが、酵素、アビジン、蛍光物質、発光物質及び放射性物質等を使用するのが好ましい。酵素としてはペルオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、マイクロペルオキシダーゼ、蛍光物質としてはフルオレッセインイソチオシアネート、フィコビリプロテイン、フィコエリスリン等、発光物質としてはイソルシノール、ルシゲニン等、そして放射性物質としては¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、¹⁴Ｃ、³Ｈ等を用いることができる。また、標識物質としてビオチンを用いた場合にはさらに酵素標識アビジンを用いることにより高い感度を得ることができるので、より好ましい。この場合の標識酵素としては抗体に標識した場合の酵素と同様の酵素を用いることができるが、ペルオキシダーゼは特に好ましい。酵素を標識物質として用いた場合にはその活性を測定するために基質、必要により発色剤が用いられる。酵素としてペルオキシダーゼを用いる場合には、基質としてＨ₂Ｏ₂を用い、発色剤として２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンズチアゾリンスルホン酸］アンモニウム塩（ＡＢＴＳ）、５−アミノサリチル酸、ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）、４−アミノアンチピリン、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン等、酵素にアルカリフォスファターゼを用いる場合は基質としてｏ−ニトロフェニルフォスフェート等、酵素にβ−Ｄ−ガラクトシダーゼを用いる場合は基質としてフルオロセイン−ジ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド等を用いることができる。Ｃ．検量線の作成固相化抗体に標準物質としてのヒトＬＥＣＴ２を反応せしめ、次いで固相化抗体と特異的に反応したヒトＬＥＣＴ２に標識抗体を反応させ、その後、この標識抗体の標識量を測定する。これにより、ヒトＬＥＣＴ２の量に対する標識量の関係、即ち検量線が得られる。この免疫学的測定方法において用いられる反応用媒体としては、例えばリン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、酢酸緩衝液などを含んだｐＨ６．０〜８．０の範囲のものが示される。Ｄ．検体に含まれるヒトＬＥＣＴ２の測定固相化抗体に検体を反応せしめ、次いで標識抗体を反応させる。このときに検体中に含まれるヒトＬＥＣＴ２の濃度に応じて標識抗体が反応する。その後、この標識抗体の標識量を測定する。この測定値を検量線に照らすことにより、検体中のヒトＬＥＣＴ２の濃度が測定される。尚、反応用媒体については、上記Ｃ．で述べた通りである。［ヒトＬＥＣＴ２の測定用キット］測定用キットは、少なくとも、（１）ヒトＬＥＣＴ２と特異的に反応する第１の抗体を不溶性支持体に結合せしめてなる固相化抗体、（２）ヒトＬＥＣＴ２と特異的に反応する第２の抗体を標識物質により標識化した標識抗体を含み、その他に、反応用媒体を含んでいてもよいし、あるいは、標準物質（ヒトＬＥＣＴ２）を含んでいてもよい。尚、標識抗体の標識物質が酵素の場合には、通常、酵素の活性を測定するための基質及び反応停止液を含む。また、不溶性支持体、標識物質については上述したのでその説明は省略する。この測定用キットによれば、上述の測定法を実施することができる。以下に、本発明の好適な実施例を図面に基づいて説明する。尚、本発明の実施の形態は、下記の実施例に何ら限定されるものではなく、本発明の技術的範囲に属する限り種々の形態を採り得ることはいうまでもない。［実施例１］免疫原（ヒトＬＥＣＴ２）の作製［１−１］ヒトＬＥＣＴ２のクローニングおよびクローニングされたヒトＬＥＣＴ２のヌクレオチド配列の決定ヒトＬＥＣＴ２ｃＤＮＡのクローニングは次のようにして行った。５０μg/ mlのＰＨＡ−Ｐ（DIFCO 社製）でＴ細胞白血病細胞ＳＫＷ−３を処理しｐｏｌｙＡ⁺ＲＮＡを調製した。５μgのｐｏｌｙＡ⁺ＲＮＡを用い、ｏｌｉｇｏ−ｄＴをプライマーにしてファーストストランドｃＤＮＡ（１ｓｔｃＤＮＡ）を合成した。次に、ウシＬＥＣＴ２（配列番号９にそのアミノ酸配列を示す）の部分アミノ酸配列を基にＰＣＲのプライマーを合成した。即ち、アミノ酸配列ＷＡＩＩＣＡより６種類のオリゴヌクレオチドを演繹して５’のプライマーとし、アミノ酸配列ＨＩＥＮＣＤより４種類のオリゴヌクレオチドを演繹して３’のプライマーとした。ＰＣＲ法により、１ｓｔｃＤＮＡを鋳型とし上記プライマーの組み合わせである２４種類の反応にてＤＮＡ断片の増幅を行った。アミノ酸配列ＤＶＬＣＳＤＧＳＴＶＹＡＰＦを基にＤＮＡプローブ（GATGTC/GCTA/GTGCTCT/CGATGGC/GT CT/CACT/AGTC/GTATGCT/CCCT/CTT、配列番号４参照）を使い、増幅されたＤＮＡ断片をアガロースゲルで分離し、サザンブロットにより解析した。その結果、約３７０bpのＤＮＡ断片が検出され、それをｐＵＣ１９にクローニングした。ヒト肝臓ｃＤＮＡライブラリーを、クローニングされたｃＤＮＡ断片をプローブとしてスクリーニングしたところ、１３０万個のクローン中１２クローンの陽性クローンを得た。それぞれのクローンはすべて、制限酵素の解析により２種類に分けられることがわかり、それぞれのグループの一番長いｃＤＮＡ断片のクローンの塩基配列の決定をした。その結果、２種類のｃＤＮＡは同一の遺伝子由来で３’側に存在する２種類のｐｏｌｙＡシグナルにより生じることが推定された。また、コードされたタンパク質のアミノ酸配列よりウシＬＥＣＴ２の決定されたアミノ酸配列に約９０％のホモロジーを有することが判明し、このコードされると考えられるタンパク質をヒトＬＥＣＴ２と命名した。このヒトＬＥＣＴ２のアミノ酸配列及び塩基配列を配列番号１及び２に示す。［１−２］ヒトＬＥＣＴ２遺伝子を含む組換えプラスミドの構築クローニングされたヒトＬＥＣＴ２ｃＤＮＡをもとに、５’側のプライマーとしてGGCGAATTCGAAAACCTGTATTTTCAGGGGCCCTGGGCTAATATATG（配列番号５参照）、３’側のプライマーとしてCGCAAGCTTTTACAGGTATGCAGTAG（配列番号６参照）をそれぞれ用い、熱変性：９４℃、１分間、アニーリング：５５℃、２分間、伸長反応：７２℃、３分間、の２５サイクルのＰＣＲ法にてヒトＬＥＣＴ２のｃＤＮＡを含むＤＮＡ断片を増幅させた。ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄIII での処理後、この断片をｐＭＡＬ^TM−Ｃ（Biolab Inc.）のＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄIII 部位にクローニングした。この組換えプラスミドを、ｐＭＡＬ−ＴＥＶ−ヒトＬＥＣＴ２と命名した。この発現ベクターは、ＩＰＴＧ存在下で、ｔａｃプロモーターの制御下マルトース結合タンパク質（maltose-binding-protein）とヒトＬＥＣＴ２の融合タンパク質を産生させることができ、その連結部分にＴＥＶプロテアーゼ（ Tabacco Etch Virus由来）の切断部位が入っているので特異的な切断ができることが特徴である。また、クローニングされたヒトＬＥＣＴ２ｃＤＮＡをもとに、５’側のプライマーとして GCGGGATCCCCGGGCCATGGGCTAATAT（配列番号７参照）、３’側のプライマーとして CGCGGATCCTTACAGGTATGCAGTAG（配列番号８参照）をそれぞれ用い、熱変性：９４℃、１分間、アニーリング：５５℃、２分間、伸長反応：７２ ℃、３分間、の２５サイクルのＰＣＲ法にてヒトＬＥＣＴ２のｃＤＮＡを含むＤＮＡ断片を増幅させた。ＢａｍＨＩで処理後、この断片をｐＧＥＸ−３Ｘ（Phar macia Inc.）のＢａｍＨＩ部位にクローニングした。この組換えプラスミドを、ｐＧＥＸ−Ｘａ−ヒトＬＥＣＴ２と命名した。この発現ベクターは、ＩＰＴＧ存在下で、ｔａｃプロモーターの制御下グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼとヒトＬＥＣＴ２の融合タンパク質を産生させることができ、その連結部分にＸａプロテアーゼの切断部位が入っているので特異的な切断ができることが特徴である。［１−３］ヒトＬＥＣＴ２遺伝子を含む組換えプラスミドによる大腸菌の形質転換上記のようにして得られた組換えプラスミドｐＭＡＬ−ＴＥＶ−ヒトＬＥＣＴ２を用いて大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換後、得られた大腸菌クローンを、デオキシ法により期待された塩基配列を有するものに関してスクリーニングし、期待されるＤＮＡ断片を持つ大腸菌クローンＭａＩ−ヒトＬＥＣＴ２（受託番号ＦＥＲＭＰ−１４６６９、なお国際寄託へ移管請求したことにより受託番号ＦＥＲＭＢＰ−５３０２が付された）を得た。［１−４］動物細胞によるヒトＬＥＣＴ２の産生ｐＵＣ１９のＢａｍＨＩ部位にＨｉｎｄIII からＥｃｏＲＩの方向でクローニングされたヒトＬＥＣＴ２ｃＤＮＡの５’側をエキソヌクレアーゼIII により −１４の塩基配列まで欠失させ、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端にした後、ＰｓｔＩリンカーをライゲーションし、ＰｓｔＩとＢｇＩIIで切断し、発現ベクターｐｃＤＬ−ＳＲα２９４のＰｓｔＩ／ＢａｍＨＩ部位にクローニングした。この組換え発現ベクターをチャイニーズハムスターＣＨＯ細胞にトランスフェクションし、ヒトＬＥＣＴ２を高発現する株１株（Ｃ１Ｄ８−１）（受託番号ＦＥＲＭＰ−１４６６８、なお国際寄託へ移管請求したことにより受託番号ＦＥＲＭＢＰ−５３０１が付された）を得た。（分子量の決定）リコンビナントヒトＬＥＣＴ２（動物細胞発現）は、³⁵Ｓ−メチオニンによってメタボリックラベルし、ＣＨＯ細胞の培養上清をＳＤＳゲル電気泳動にかけることにより検出した。その結果、分子量が約１４kDa と１６kDa の２本のバンド（１６kDa が主要であり、２つのバンドはプロセッシングの違いにより生じると考えられる）が得られた。［実施例２］免疫上記実施例１のように作製した免疫原ヒトＬＥＣＴ２１００μｌとフロイントの完全アジュバント１００μｌを良く混合して懸濁液を作製し、この懸濁液を２匹のマウス（雄ＢＡＬＢ／ｃ）の腹腔に１匹当たり抗原として２５μｌずつ投与した。さらに１週間おきに同量の抗原を５回投与し、その３日後に脾臓を取り出し融合実験を行った。別に、家兎２羽に対しても同様に免疫し、採決して血清を分離した後、常法に従い吸収操作を行い、ＩｇＧ分画を分離してポリクローナル抗体を得た。［実施例３］細胞融合及び目的とするモノクローナル抗体を産生する融合細胞の選択と取得摘出したマウスの脾臓細胞と、同系マウスの骨髄腫細胞（ＳＰ−２／Ｏ−Ａｇ −１４）とを約１０：１の割合で混合し、５０％ポリエチレングリコール４０００を融合促進剤として細胞融合を行った。融合後の細胞は１×１０⁶cells/mlの細胞濃度となるように１０％牛血清を含むＨＡＴ培地（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジンを含む培地）に懸濁し、９６ウエルのマイクロタイタープレート（ヌンク社製マキシソープ、以下同じ）に１ウエルあたり１００μｌずつ分注した。融合細胞は、ＣＯ₂インキュベータ（５％ＣＯ₂、３７℃）中で培養し、ＨＡＴ培地で培地交換を行い、ＨＡＴ培地中で馴化し、さらに１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ１６４０培地で馴化した。融合培養細胞上清中の抗体は、ヒトＬＥＣＴ２蛋白質を固相化したマイクロタイタープレートを用いてＥＬＩＳＡ法により検出した。陽性となったウエルに対しては限界希釈法によるクローニングを２回繰り返し、ヒトＬＥＣＴ２に対する反応性を有するクローンを５種類選択し、それぞれをＧ２Ａ５Ｄ７、Ａ１Ｇ１Ｃ６、５Ｃ５、Ｈ１２Ｄ１０Ｄ６、８９Ｆ２（受託番号ＦＥＲＭＰ−１５６３８、ＦＥＲＭＰ−１５６３９、ＦＥＲＭＰ−１５６４０、ＦＥＲＭＰ−１５６４１、ＦＥＲＭＰ−１６２２９）と命名した。得られたクローンはそれぞれ１０％ＤＭＳＯを含む９０％牛血清中に懸濁させ、液体窒素中に保存した。各クローンの産生するモノクローナル抗体は、クローンをマウスの腹腔内で増殖させ、その腹水中からプロテイン−Ａセファロースカラムを用いてそれぞれを精製した。［実施例４］モノクローナル抗体の特異性の確認ＥＬＩＳＡ法による特異性の確認ヒトＬＥＣＴ２のＰＢＳ溶液（１〜１０００ｎｇ／ｍｌ）を調製し、この溶液でヒトＬＥＣＴ２を固相化したマイクロタイタープレートに各クローンの抗体溶液を反応させた後、ペルオキシダーゼ標識抗マウスイムノグロブリン（カベル社製）を反応させ、オルトフェニレンジアミンと過酸化水素の溶液を基質として波長４９２ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果を図１に示す。吸光度の値は固相化したヒトＬＥＣＴ２の濃度に伴って上昇し、ある濃度からは一定になることから、各クローンともヒトＬＥＣＴ２に特異的に反応することが確認された。ウエスターンブロットによる特異性の確認ヒトＬＥＣＴ２とマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）の混合物を抗原としてＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）（１６．５％モノアクリルアミド／ビスアクリルアミド；３％ビス／モノアクリルアミド＋ビス）を行い、泳動後ウェスターンブロットにより反応の特異性を確認した。各クローンのモノクローナル抗体とも約１６ｋＤに反応性を認め、ＭＢＰとは反応しなかった。この結果を図２に示す。尚、図２でＣＢＢはクマーシーブリリアントブルーの略で蛋白染色を示す。第１レーンは分子量マーカー、他はヒトＬＥＣＴ２＋ＭＢＰを抗原として泳動し、第１レーン、第２レーンは蛋白染色、他は各モノクローナル抗体によるウェスターンブロットを示す。［実施例５］ＥＬＩＳＡ法によるサブクラスの確認上記実施例３で得られた各モノクローナル抗体について、アメリカンコーレックス社製モノクローナルサブクラスイソタイピングキットを用いてクラス・サブクラスを確認した。結果はクローンＡ１Ｇ１Ｃ６及びＧ２Ａ５がＩｇＧ２ｂ、クローンＨ１２Ｄ１０がＩｇＭであった。尚、クローン５Ｃ５、８９Ｆ２については未確認である。［実施例６］抗体固相化上記実施例３で得られたモノクローナル抗体クローンＧ２Ａ５を０．１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．０で５μｌ／ｍｌの濃度に調製し、９６ウェルのマイクロタイタープレートの各ウエルに１００μｌずつ加え、４℃で２０時間静置反応させた。抗体溶液を捨て、１％ＢＳＡ、５％ショ糖を含むＰＢＳを各ウエルに２００μｌずつ加え、室温（２０〜２５℃）で２時間静置してブロッキングを行った。ブロッキング液を捨て、プレートを風乾し、固相化抗体を得た。この固相化抗体は乾燥剤と共に密封して保存した。［実施例７］標識抗体の作製上記実施例２で得たポリクローナル抗体の精製ＩｇＧ１ｍｇ当たり０．０５６Ｕのフィシンを添加し、３７℃で８時間反応させた後、ＵｌｔｒｏｇｅｌＡＣＡ４４を用いてゲルろ過し、Ｆａｂ’分画を得た。このＦａｂ’分画にマレイミド法によりペルオキシダーゼを標識し、ペルオキシダーゼ標識抗体とした。なお、標識は医学書院刊、石川栄治著、「酵素免疫測定法第３版」に従って行った。［実施例８］ヒトＬＥＣＴ２の測定ヒトＬＥＣＴ２蛋白質をＰＢＳで希釈して０．００１〜２０ｎｇ／ｍｌの溶液を調製し、この液２００μｌを上記実施例６で得た抗体固相化プレートの各ウエルに添加し、室温で１時間反応させた後、各ウエルをＰＢＳ３００μｌで４回洗浄し、余分のＰＢＳを除き、上記実施例７で得たペルオキシダーゼ標識抗体（１００μｌ）を加え、室温で１時間反応させ、再度ＰＢＳで洗浄し、テトラメチルベンジジンと過酸化水素の溶液１００μｌを加えて反応させ、１．５Ｎリン酸１００μｌを加えて反応を停止し、波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。このときの測定結果を表２及び図３に示す。[Table 1] Human LECT2 is thought to be a chemotactic factor similar to bovine LECT2, and is expected to be useful in understanding pathological conditions and treating cancer. Therefore, it was desirable to establish a method for measuring human LECT2. Initially, bovine LECT2 was called LECT2a and human LECT was called LECT2b, but the previous names were changed because they were no longer appropriate. The present invention has been made in consideration of the above-mentioned problems, and aims to provide an antibody against human LECT2, cells producing the antibody, and a method and kit for measuring the antibody. Disclosure of the Invention In order to solve the above-mentioned problems, the first antibody of the present invention is characterized by specifically reacting with human LECT2 (a protein having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing). Examples of such antibodies include those produced by fusion cell clone G2A5D7 (accession number FERM P-15638), fusion cell clone A1G1C6 (accession number FERM P-15639), fusion cell clone 5C5 (accession number FERM P-15640), fusion cell clone H12D10D6 (accession number FERM P-1 5641), and fusion cell clone 89F2 (accession number FERM P-1 6229). The second fusion cell of the present invention is characterized by producing an antibody that specifically reacts with human LECT2. Examples of such fused cells include fused cell clones G2A5D7 (Accession No. FERM P-15638), A1G1C6 (Accession No. FERM P-15639), 5C5 (Accession No. FERM P-15640), H12D10D6 (Accession No. FERM P-15641), and 89F2 (Accession No. FERM P-16229). The third method of the present invention for measuring human LECT2 is characterized by comprising the following steps a) to c) and d) to f): a) reacting a solid-phase antibody prepared by binding a first antibody specifically reactive with human LECT2 to an insoluble support with human LECT2 as a standard substance, b) reacting a second antibody specifically reactive with human LECT2 with a labeled antibody, which is prepared by labeling the second antibody with a labeling substance, c) measuring the amount of label in the reaction product to prepare a calibration curve, and d) reacting a sample with the solid-phase antibody, e) reacting the labeled antibody, f) measuring the amount of label in the reaction product and measuring the amount of human LECT2 in the sample from the calibration curve.A fourth kit for measuring human LECT2 according to the present invention is characterized by comprising a solid-phase antibody prepared by binding a first antibody specifically reactive with human LECT2 to an insoluble support and a labeled antibody, which is prepared by labeling the second antibody specifically reactive with human LECT2 with a labeling substance. In the third and fourth aspects of the present invention, the first antibody is preferably an antibody produced by hybridoma clone G2A5D7 (accession number FERM P-15638), an antibody produced by hybridoma clone A1G1C6 (accession number FERM P-15639), an antibody produced by hybridoma clone 5C5 (accession number FERM P-15640), an antibody produced by hybridoma clone H12D10D6 (accession number FERM P-15641), or an antibody produced by hybridoma clone 89F2 (accession number FERM P-16229), and the second antibody is preferably one of the above four antibodies but different from the first antibody. Furthermore, the labeling substance may be, for example, a substance selected from the group consisting of peroxidase, biotin, β-D-galactosidase, alkaline phosphatase, and microperoxidase. BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS Figure 1 is a graph showing the results of detecting human LECT2 by ELISA, Figure 2 is an explanatory diagram showing the reaction specificity of the monoclonal antibodies of each clone by Western blot, Figure 3 is a graph showing the relationship between human LECT2 concentration and absorbance, Figure 4 is a graph showing the measured values of human LECT2 in samples from patients with acute hepatitis in the acute and remission phases, Figure 5 is a photograph showing stained images of tissue from a healthy subject, (A) is a 100x magnification photograph and (B) is a 200x magnification photograph, and Figure 6 is a photograph showing stained images of tissue from a patient with liver cirrhosis, (A) is a 100x magnification photograph and (B) is a 200x magnification photograph. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION [Antibody Specifically Reacting with Human LECT2 and Hybridomas Producing the Antibody] The production of an antibody specifically reacting with human LECT2 is described below. A. Antigen Human LECT2 (a protein having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1) was cloned as an antigen and used as an immunogen. B. Immunization with the Antigen Mammals such as mice, rats, and hamsters can be used as immunized animals. Mice are the most commonly used, and BALB/c mice and other strains of mice can be used. The immunization schedule and antigen concentration should be selected to ensure the formation of a sufficient number of antigen-stimulated lymphocytes. For example, a mouse is immunized intraperitoneally with 25 μg of antigen three times at two-week intervals, followed by an additional 25 μg intravenously. Spleen cells for fusion are extracted several days after the final immunization. C. Cell Fusion Spleens are aseptically removed from the immunized mammals, and a single-cell suspension is prepared from them. These spleen cells (antibody-producing cells) are then fused with appropriate myeloma cells using an appropriate fusion promoter. Myeloma cells derived from the same mammalian species as the immunized animal are preferred, but spleen cells from rats, hamsters, etc. can also be fused with mouse myeloma cells. The preferred ratio of spleen cells to myeloma cells is approximately 20:1 to approximately 2:1. A volume of 0.5 to 1.5 ml of fusion medium is appropriate for approximately ¹⁰ splenocytes. A preferred fusion promoter is polyethylene glycol with an average molecular weight of 1,000 to 4,000. However, other fusion promoters known in the art (e.g., Sendai virus (also known as HVJ)) can also be used. In addition to these fusion promoters, cell fusion can also be achieved by a method using electric shock. D. Selection of Fused Cells Producing the Desired Antibody: In a separate container (e.g., a microtiter plate), a mixture of unfused splenocytes, unfused myeloma cells, and fused fusion cells is diluted with a selective medium that does not support unfused myeloma cells and cultured for a time sufficient to kill the unfused cells (approximately 1 hour). A drug-resistant (e.g., 8-azaguanine-resistant) medium that does not support unfused myeloma cells (e.g., HAT medium) is used. Unfused myeloma cells die in this selective medium. Because these unfused splenocytes are non-tumor cells, they die after a certain period of time (1 week). In contrast, the fused cells possess both the neoplastic properties of the parent myeloma cells and the properties of the parent splenocytes, and therefore can survive in a selective medium. Thus, after the fused cells are detected, they are screened for antibodies against human LECT2 by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and only fused cells that produce monoclonal antibodies that specifically bind to human LECT2 are selected. Examples of such fused cells include fused cell clone G2A5D7 (accession number FERM P-15638), fused cell clone A1G1 C6 (accession number FERM P-15639), fused cell clone 5C5 (accession number FERM P-15640), fused cell clone H12D10D6 (accession number FERM P-15641), and fused cell clone 89F2 (accession number FERM P-16229). Obtaining the Target Antibody After cloning the fused cells producing the target antibody by an appropriate method (e.g., limiting dilution), the antibody can be produced by two different methods. According to the first method, the fused cells are cultured in an appropriate medium for a certain period of time, and the monoclonal antibody produced by the fused cells can be isolated from the culture supernatant. According to the second method, the fused cells can be injected into the peritoneal cavity of an immunized animal bearing an isogenic or semi-isogenic gene. After a certain period of time, the monoclonal antibody produced by the fused cells can be isolated from the blood and ascites of the host animal. [Method for Assaying Human LECT2] A. Immobilized Antibody To prepare a immobilized antibody by binding an antibody that specifically reacts with human LECT2 to an insoluble support, the antibody can be adsorbed onto the surface of the insoluble support by contacting the antibody with the insoluble support. Alternatively, the antibody can be bound by chemical methods such as covalent bonding. Examples of insoluble carriers include polymers such as polystyrene, polyethylene, polypropylene, polyester, polyacrylonitrile, fluororesin, cross-linked dextran, and polysaccharide, as well as paper, glass, metal, agarose, and combinations thereof. The insoluble carrier may be in various shapes, such as trays, spheres, rods, fibers, discs, containers, cells, and test tubes. B. Labeled Antibodies. The antibody specifically reacting with human LECT2 may be a complete antibody or a fragment such as Fab or F(ab)' ₂ . Labeling substances are not particularly limited as long as they can be used in conventional immunoassays; however, enzymes, avidin, fluorescent substances, luminescent substances, and radioactive substances are preferred. Enzymes that can be used include peroxidase, β-D-galactosidase, alkaline phosphatase, and microperoxidase; fluorescent substances include fluorescein isothiocyanate, phycobiliprotein, and phycoerythrin; luminescent substances include isorcinol and lucigenin; and radioactive substances include ^125I , ^131I , ^14C , and ^3H . When biotin is used as the labeling substance, it is preferable to further use enzyme-labeled avidin, as this can achieve high sensitivity. In this case, the same enzymes used to label antibodies can be used as the labeling enzyme, but peroxidase is particularly preferred. When an enzyme is used as the labeling substance, a substrate and, if necessary, a coloring agent are used to measure its activity. When peroxidase is used as the enzyme, _H2O2 is used as the substrate, _and 2,2'-azino-di-[3-ethylbenzthiazoline sulfonic acid]ammonium salt (ABTS), 5-aminosalicylic acid, o-phenylenediamine (OPD), 4-aminoantipyrine, 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, etc. can be used as color developers. When alkaline phosphatase is used as the enzyme, o-nitrophenyl phosphate, etc. can be used as the substrate. When β-D-galactosidase is used as the enzyme, fluorescein-di-(β-D-galactopyranoside), 4-methylumbelliferyl-β-D-galactopyranoside, etc. can be used as the substrate. C. Preparation of a calibration curve Human LECT2 as a standard substance is reacted with the immobilized antibody, and then labeled antibody is reacted with the human LECT2 that has specifically reacted with the immobilized antibody, and the amount of labeling of this labeled antibody is then measured. This provides a calibration curve, i.e., the relationship between the amount of label and the amount of human LECT2. Examples of reaction media used in this immunoassay include phosphate buffer, Tris-HCl buffer, acetate buffer, etc., with a pH range of 6.0 to 8.0. D. Measurement of Human LECT2 in a Sample The sample is reacted with the immobilized antibody, followed by the labeled antibody. The labeled antibody reacts according to the concentration of human LECT2 in the sample. The amount of label in this labeled antibody is then measured. The concentration of human LECT2 in the sample is determined by comparing this measurement value with the calibration curve. The reaction medium is as described in C. above. [Kit for Measuring Human LECT2] The kit contains at least: (1) a solid-phase antibody obtained by binding a first antibody specifically reacting with human LECT2 to an insoluble support; and (2) a labeled antibody obtained by labeling a second antibody specifically reacting with human LECT2 with a labeling substance. The kit may also contain a reaction medium or a standard substance (human LECT2). When the labeling substance of the labeled antibody is an enzyme, the kit usually contains a substrate for measuring the enzyme activity and a reaction stop solution. Since the insoluble support and labeling substance have been described above, their description is omitted here. The above-mentioned measurement method can be carried out using this measurement kit. Preferred examples of the present invention are described below with reference to the drawings. It goes without saying that the present invention is not limited to the following examples, and various forms are possible as long as they fall within the technical scope of the present invention. Example 1: Preparation of Immunogen (Human LECT2) [1-1] Cloning of Human LECT2 and Determination of the Nucleotide Sequence of Cloned Human LECT2 Cloning of human LECT2 cDNA was performed as follows. SKW-3 T-cell leukemia cells were treated with 50 μg/ml PHA-P (DIFCO) to prepare polyA ⁺ RNA. First-strand cDNA (1st cDNA) was synthesized using 5 μg of polyA ⁺ RNA and oligo-dT as a primer. Next, PCR primers were synthesized based on the partial amino acid sequence of bovine LECT2 (the amino acid sequence of which is shown in SEQ ID NO:9). Six oligonucleotides were deduced from the amino acid sequence WAIICA to prepare 5' primers, and four oligonucleotides were deduced from the amino acid sequence HIENCD to prepare 3' primers. Using PCR, DNA fragments were amplified using the 1st cDNA as a template and 24 different primer combinations. A DNA probe (GATGTC/GCTA/GTGCTCT/CGATGGC/GTCT/CACT/AGTC/GTATGCT/CCCT/CTT, see SEQ ID NO: 4) based on the amino acid sequence DVLC SDGSTVYAPF was used. The amplified DNA fragments were separated on an agarose gel and analyzed by Southern blot. A DNA fragment of approximately 370 bp was detected and cloned into pUC19. A human liver cDNA library was screened using the cloned cDNA fragment as a probe, yielding 12 positive clones out of 1.3 million clones. Restriction enzyme analysis revealed that each clone could be divided into two types, and the nucleotide sequence of the longest cDNA fragment in each group was determined. The results indicated that the two cDNAs originated from the same gene and were generated by two different polyA signals present at the 3' end. Furthermore, the amino acid sequence of the encoded protein was found to have approximately 90% homology with the determined amino acid sequence of bovine LECT2, and the protein believed to be encoded by this was named human LECT2. The amino acid sequence and nucleotide sequence of this human LECT2 are shown in SEQ ID NOs: 1 and 2. [1-2] Construction of a recombinant plasmid containing the human LECT2 gene Based on the cloned human LECT2 cDNA, a DNA fragment containing human LECT2 cDNA was amplified by PCR using the 5' primer GGCGAATTCGAAAACCTGTATTTTCAGGGGCCCTGGGCTAATATATG (see SEQ ID NO: 5) and the 3' primer CGCAAGCTTTTACAGGTATGCAGTAG (see SEQ ID NO: 6) for 25 cycles of heat denaturation at 94°C for 1 minute, annealing at 55°C for 2 minutes, and extension at 72°C for 3 minutes. After digestion with EcoRI and HindIII, this fragment was cloned into the EcoRI/HindIII site of pMAL ^™ -C (Biolab Inc.). This recombinant plasmid was designated pMAL-TEV-human LECT2. This expression vector can produce a fusion protein of maltose-binding protein and human LECT2 under the control of the tac promoter in the presence of IPTG. The fusion protein contains a cleavage site for TEV protease (derived from Tabacco Etch Virus), allowing specific cleavage. Furthermore, a DNA fragment containing the human LECT2 cDNA was amplified using the cloned human LECT2 cDNA by PCR using the 5' primer GCGGGATCCCCGGGCCATGGGCTAATAT (see SEQ ID NO: 7) and the 3' primer CGCGGATCCTTACAGGTATGCAGTAG (see SEQ ID NO: 8) for 25 cycles of heat denaturation at 94°C for 1 minute, annealing at 55°C for 2 minutes, and extension at 72°C for 3 minutes. After treatment with BamHI, this fragment was cloned into the BamHI site of pGEX-3X (Pharmacia Inc.). This recombinant plasmid was designated pGEX-Xa-human LECT2. This expression vector can produce a fusion protein of glutathione-S-transferase and human LECT2 under the control of the tac promoter in the presence of IPTG, and is characterized by the inclusion of a cleavage site for Xa protease at the junction, allowing specific cleavage. [1-3] Transformation of E. coli with a recombinant plasmid containing the human LECT2 gene E. coli JM109 was transformed with the recombinant plasmid pMAL-TEV-human LECT2 obtained as described above, and the resulting E. coli clones were screened by the deoxyribonucleotide method for those having the expected nucleotide sequence. An E. coli clone MaI-human LECT2 (accession number FE RM P-14669, accession number FE RM BP-5302 was assigned upon request for transfer to international deposit) containing the expected DNA fragment was obtained. [1-4] Production of human LECT2 in animal cells. Human LECT2 cDNA was cloned into the BamHI site of pUC19 in the HindIII to EcoRI direction, and the 5' end was deleted up to base -14 using exonuclease III. The end was blunted with T4 DNA polymerase, and a PstI linker was ligated. The resulting fragment was digested with PstI and BgIII and cloned into the PstI/BamHI site of the expression vector pcDL-SRα294. This recombinant expression vector was transfected into Chinese hamster CHO cells to obtain a strain (C1D8-1) highly expressing human LECT2 (accession number FERM P-14668; accession number FERM BP-5301 was assigned upon request for international deposit). (Molecular Weight Determination) Recombinant human LECT2 (expressed in animal cells) was metabolically labeled with ^35S -methionine and detected by SDS gel electrophoresis of the CHO cell culture supernatant. Two bands with molecular weights of approximately 14 kDa and 16 kDa were observed (the 16 kDa band was the major band, and the other two bands are thought to arise from differences in processing). [Example 2] Immunization: 100 μl of the immunogen human LECT2 prepared as in Example 1 above was thoroughly mixed with 100 μl of Freund's complete adjuvant to prepare a suspension. 25 μl of this suspension was administered intraperitoneally to two male BALB/c mice as antigen per mouse. The same amount of antigen was administered five times at weekly intervals, and three days later, the spleens were removed and subjected to fusion experiments. Separately, two domestic rabbits were immunized in the same manner, and the serum was separated and absorbed according to standard procedures. The IgG fraction was isolated to obtain polyclonal antibodies. [Example 3] Cell fusion and selection and isolation of fused cells producing the desired monoclonal antibody. Spleen cells from the isolated mouse were mixed with myeloma cells (SP-2/O-Ag-14) from a syngeneic mouse in a ratio of approximately 10:1, and cell fusion was carried out using 50% polyethylene glycol 4000 as a fusion accelerator. The fused cells were suspended in HAT medium (a medium containing hypoxanthine, aminopterin, and thymidine) containing 10% bovine serum to a cell concentration of 1 x ¹⁰ cells/ml, and 100 μl of the suspension was dispensed into a 96-well microtiter plate (Maxisorp, manufactured by Nunc; the same applies below) at 100 μl per well. The fused cells were cultured in a _CO2 incubator (5% _CO2 , 37°C), the medium was replaced with HAT medium, and the cells were conditioned in HAT medium and further conditioned in 10% FCS-RPMI 1640 medium. Antibodies in the supernatant of the fused culture cells were detected by ELISA using a microtiter plate coated with human LECT2 protein. Positive wells were subjected to limiting dilution cloning twice, and five clones reactive with human LECT2 were selected and designated G2A5D7, A1G1C6, 5C5, H12D10D6, and 89F2 (accession numbers FERM P-15638, FERM P-15639, FERM P-15640, FERM P-15641, and FERM P-16229). The resulting clones were suspended in 90% bovine serum containing 10% DMSO and stored in liquid nitrogen. The monoclonal antibodies produced by each clone were grown in the peritoneal cavity of mice and purified from the ascites using a protein-A Sepharose column. [Example 4] Confirmation of monoclonal antibody specificity Confirmation of specificity by ELISA A PBS solution of human LECT2 (1-1000 ng/ml) was prepared, and the antibody solution of each clone was reacted with a microtiter plate on which human LECT2 had been immobilized. Then, peroxidase-labeled anti-mouse immunoglobulin (Cabell) was reacted, and the absorbance at a wavelength of 492 nm was measured using a solution of o-phenylenediamine and hydrogen peroxide as substrate. The results are shown in Figure 1. The absorbance value increased with the concentration of immobilized human LECT2 and then leveled off at a certain concentration, confirming that each clone specifically reacted with human LECT2. Confirmation of Specificity by Western Blot SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) (16.5% monoacrylamide/bisacrylamide; 3% bis/monocrylamide + bis) was performed using a mixture of human LECT2 and maltose-binding protein (MBP) as the antigen, and the specificity of the reaction was confirmed by Western blotting after electrophoresis. Each monoclonal antibody from each clone showed reactivity at approximately 16 kDa, but did not react with MBP. The results are shown in Figure 2. In Figure 2, CBB stands for Coomassie Brilliant Blue, which indicates protein staining. Lane 1 shows molecular weight markers, while the others show human LECT2 + MBP as antigens. Lanes 1 and 2 show protein staining, while the others show Western blots using each monoclonal antibody. [Example 5] Confirmation of Subclass by ELISA The class and subclass of each monoclonal antibody obtained in Example 3 above were confirmed using a monoclonal subclass isotyping kit manufactured by American Corex. The results indicated that clones A1G1C6 and G2A5 were IgG2b, and clone H12D10 was IgM. The results for clones 5C5 and 89F2 remain to be confirmed. [Example 6] Antibody Immobilization The monoclonal antibody clone G2A5 obtained in Example 3 above was adjusted to a concentration of 5 μl/ml in 0.1 M carbonate buffer, pH 9.0, and 100 μl was added to each well of a 96-well microtiter plate. The plate was then incubated at 4°C for 20 hours. The antibody solution was discarded, and 200 μl of PBS containing 1% BSA and 5% sucrose was added to each well. The plate was then incubated at room temperature (20-25°C) for 2 hours for blocking. The blocking solution was discarded, and the plate was air-dried to obtain the immobilized antibody. The immobilized antibody was stored sealed with a desiccant. Example 7: Preparation of labeled antibody 0.056 U of ficin was added per mg of purified IgG from the polyclonal antibody obtained in Example 2 above, and the mixture was incubated at 37°C for 8 hours. The mixture was then subjected to gel filtration using Ultrogel AC A44 to obtain a Fab' fraction. This Fab' fraction was labeled with peroxidase by the maleimide method to obtain a peroxidase-labeled antibody. Labeling was performed according to "Enzyme Immunoassay, 3rd Edition," by Eiji Ishikawa, published by Igaku-Shoin Publishing. Human LECT2 protein was diluted with PBS to prepare a 0.001-20 ng/ml solution. 200 μl of this solution was added to each well of the antibody-coated plate prepared in Example 6. After incubation at room temperature for 1 hour, each well was washed four times with 300 μl of PBS. The excess PBS was removed, and 100 μl of the peroxidase-labeled antibody prepared in Example 7 was added. The incubation was continued at room temperature for 1 hour. The wells were washed again with PBS, and 100 μl of a solution of tetramethylbenzidine and hydrogen peroxide was added to the wells. The reaction was stopped by adding 100 μl of 1.5 N phosphoric acid. The absorbance at a wavelength of 450 nm was measured. The results are shown in Table 2 and Figure 3.

【表２】これにより、ヒトＬＥＣＴ２の量に対する標識量の関係、即ち検量線が得られ、この検量線を用いることにより検体中のヒトＬＥＣＴ２の量に対する標識量の関係、即ち、検量線が得られ、この検量線を用いることにより検体中のヒトＬＥＣＴ２の含有量を知ることができる。急性肝炎の患者検体について、その急性期と寛解期における測定値の比較を行ったデータを表３及び図４に示す。[Table 2] This provides a calibration curve showing the relationship between the amount of label and the amount of human LECT2, and the calibration curve can be used to determine the amount of human LECT2 in a sample. Table 3 and Figure 4 show the data comparing the measured values in acute and remission phases for samples from patients with acute hepatitis.

【表３】測定系に関する予備的検討の結果、検体中のヒトＬＥＣＴ２は比較的早期にその抗原性を喪失すること、特に血清では速やかに抗原性が消失することが明らかとなったことから、検体として血漿を用い、各血漿は採血後速やかに分離することによって得たあと、測定時までは−２０℃以下で凍結保存した。また、検体の希釈率が５倍以下の場合、測定値に影響を与える可能性があることから、検体は１０倍希釈して測定した。各検体の急性期及び寛解期の測定値を比較すると、明らかに寛解期において測定値が低下していることから、検体中のヒトＬＥＣＴ２の濃度は患者の病態を反映しているものと判断した。このように、検体中の走化性因子ヒトＬＥＣＴ２の含有量を測定することができるため、その測定結果を利用して病態の把握や治療への応用が可能となる。［実施例９］免疫組織染色健常者の肝臓組織及びＣ型肝硬変患者の肝臓組織を取り、常法に従いホルマリン固定し、パラフィン包埋した。このパラフィン包埋組織からミクロトームを用いて組織切片を作製し、常法に従い脱パラフィンを行い、実施例３で得たモノクローナル抗体クローン８９Ｆ２より精製したＩｇＧ分画のＰＢＳ溶液約１００μ ｌ（５μｇ／ｍｌ）を切片にのせ、３７℃で３０分間反応させた後、ＰＢＳで洗浄した。これにペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ（ダコ社製）を３７℃で３０分間反応させ、再度ＰＢＳで洗浄した後、３，３’，５，５’−ジアミノベンジジンと過酸化水素の溶液を反応させ染色した。細胞の核はヘマトキシリンで染色した。図５は、健常者の組織の染色像を表す写真であり、（Ａ）は１００倍拡大写真、（Ｂ）は２００倍拡大写真である。また、図６は、肝硬変患者の組織の染色像を表す写真であり、（Ａ）は１００倍拡大写真、（Ｂ）は２００倍拡大写真である。健常者、肝硬変患者の組織切片とも、肝細胞の細胞質にびまん性の染色を認めた。具体的には、健常者、肝硬変患者とも肝実質細胞にジアミノベンジジンの顆粒状の染色（茶色に染まっている）が認められたが、肝硬変患者では陰陽性の細胞の混在が認められ、健常者とは異なる染色パターン（健常者では肝実質細胞がすべて陽性）を示した。結合組織には染色は認められなかった。なおＭ図５及ぴ図６の写真中、青く点状に染まっているのは核である。このことは、ＬＥＣＴ２が細胞周期と何らかの関連を持っていることを示唆している。産業上の利用可能性本発明のヒトＬＥＣＴ２に対する抗体によれば、免疫治療や診断、及びこれらに関連した産業分野において有用である。また、本発明の融合細胞によれば、ヒトＬＥＣＴ２に対する抗体を入手するうえで有用である。更に、本発明のヒトＬＥＣＴ２に対する抗体は、ヒトＬＥＴ２の測定法及び測定用キットに用いることができる。この測定法及び測定用キットによれば、検体中に含まれるヒトＬＥＣＴ２（走化性因子と考えられる）を測定することができるため、その測定結果を利用して病態の把握や治療への応用が可能となるという効果が得られる。具体的には、例えば種々の疾患（例えば肝炎や肝硬変など）の患者から取り出した組織等に対し、本発明の抗体を反応させて、ＬＥＣＴ２を発現している細胞が組織のどこに存在しているかを調べることができる。これにより各種疾患の診断や治療へつなげることが可能となる。寄託機関Ｃ１Ｄ８−１及びＭａＩ−ヒトＬＥＣＴ２は、以下の国際寄託機関に、それぞれ下記の受託番号と寄託日で寄託されている。名称：通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所住所：日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５）受託番号及び寄託日（１）Ｃ１Ｄ８−１ＦＥＲＭＢＰ−５３０１：１９９４年１１月２５日（２）ＭａＩ−ヒトＬＥＣＴ２ＦＥＲＭＢＰ−５３０２：１９９４年１１月２５日融合細胞クーロンＧ２Ａ５Ｄ７、Ａ１Ｇ１Ｃ６、５Ｃ５、Ｈ１２Ｄ１０Ｄ６、８９Ｆ２は、以下の国内寄託機関に、それぞれ下記の受託番号と寄託日で寄託されている。名称：通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所住所：日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５）受託番号及び寄託日 (１) 融合細胞クーロンＧ２Ａ５Ｄ７ＦＥＲＭＰ−１５６３８：１９９６年５月２１日 (２) 融合細胞クーロンＡ１Ｇ１Ｃ６ＦＥＲＭＰ−１５６３９：１９９６年５月２１日 (３) 融合細胞クーロン５Ｃ５ＦＥＲＭＰ−１５６４０：１９９６年５月２１日 (４) 融合細胞クーロンＨ１２Ｄ１０Ｄ６ＦＥＲＭＰ−１５６４１：１９９６年５月２１日 (５) 融合細胞クーロン８９Ｆ２ＦＥＲＭＰ−１６２２９：１９９７年５月１９日 [Table 3] Preliminary studies on the assay system revealed that human LECT2 in samples loses its antigenicity relatively quickly, particularly in serum. Therefore, plasma samples were used. Each plasma sample was obtained by rapid separation after blood collection and then frozen at -20°C or below until measurement. Furthermore, because a dilution rate of 5x or less may affect the measured values, the samples were diluted 10x for measurement. Comparing the measured values for each sample during the acute and remission phases, the measured values clearly decreased during the remission phase, suggesting that the concentration of human LECT2 in the samples reflects the patient's pathological condition. Thus, the content of the chemotactic factor human LECT2 in samples can be measured, enabling the results to be used to understand the pathological condition and apply it to treatment. [Example 9] Immunohistochemical Staining Liver tissue from healthy individuals and liver tissue from patients with hepatitis C virus cirrhosis was collected, fixed in formalin according to standard procedures, and embedded in paraffin. Tissue sections were prepared from the paraffin-embedded tissue using a microtome and deparaffinized according to standard procedures. Approximately 100 μl (5 μg/ml) of a PBS solution of the IgG fraction purified from the monoclonal antibody clone 89F2 obtained in Example 3 was applied to the sections and incubated at 37°C for 30 minutes, followed by rinsing with PBS. Peroxidase-labeled anti-mouse IgG (Dako) was then incubated at 37°C for 30 minutes, washed again with PBS, and stained with a solution of 3,3',5,5'-diaminobenzidine and hydrogen peroxide. Cell nuclei were stained with hematoxylin. Figure 5 shows photographs of stained tissue from a healthy subject; (A) is a 100x magnification, and (B) is a 200x magnification. Figure 6 shows photographs of stained tissue from a patient with liver cirrhosis; (A) is a 100x magnification, and (B) is a 200x magnification. Diffuse staining was observed in the cytoplasm of hepatocytes in both healthy and cirrhotic tissue sections. Specifically, granular diaminobenzidine staining (brown) was observed in hepatic parenchymal cells in both healthy and cirrhotic patients. However, negatively stained cells were also observed in the cirrhotic patients, demonstrating a different staining pattern from that observed in healthy individuals (in which all hepatic parenchymal cells were positive). No staining was observed in the connective tissue. Note that the blue dots in Figures 5 and 6 represent nuclei. This suggests that LECT2 may be involved in the cell cycle. INDUSTRIAL APPLICABILITY: The antibodies against human LECT2 of the present invention are useful in immunotherapy, diagnosis, and related industrial fields. Furthermore, the fused cells of the present invention are useful for obtaining antibodies against human LECT2. Furthermore, the antibodies against human LECT2 of the present invention can be used in methods and kits for measuring human LECT2. This assay method and assay kit enable the measurement of human LECT2 (thought to be a chemotactic factor) contained in a sample, thereby enabling the measurement results to be used to understand the pathology and apply it to treatment. Specifically, for example, the antibody of the present invention can be reacted with tissues extracted from patients with various diseases (e.g., hepatitis, cirrhosis, etc.) to determine where in the tissue LECT2-expressing cells are located. This can lead to the diagnosis and treatment of various diseases. Depositary Institution C1D8-1 and MaI-human LECT2 have been deposited at the following international depositary institution under the following accession numbers and deposit dates, respectively. Name: National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry Address: 1-1-3 Higashi, Tsukuba, Ibaraki, Japan (Postal Code: 305) Accession Number and Date of Deposit (1) C1D8-1 FERM BP-5301: November 25, 1994 (2) MaI-human LECT2 FERM BP-5302: November 25, 1994 The hybridoma clones G2A5D7, A1G1C6, 5C5, H12D10D6, and 89F2 have been deposited at the following domestic depository institutions with the following accession numbers and dates of deposit, respectively. Name: National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry Address: 1-1-3 Higashi, Tsukuba, Ibaraki, Japan (Postal Code: 305) Accession Number and Date of Deposit (1) Fusion Cell Clone G2A5D7 FERM P-15638: May 21, 1996 (2) Fusion Cell Clone A1G1C6 FERM P-15639: May 21, 1996 (3) Fusion Cell Clone 5C5 FERM P-15640: May 21, 1996 (4) Fusion Cell Clone H12D10D6 FERM P-15641: May 21, 1996 (5) Fusion Cell Clone 89F2 FERM P-16229: May 19, 1997

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 15/06 1/21 5/06 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 39/395 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）（注）この公表は、国際事務局（ＷＩＰＯ）により国際公開された公報を基に作成したものである。なおこの公表に係る日本語特許出願（日本語実用新案登録出願）の国際公開の効果は、特許法第１８４条の１０第１項（実用新案法第４８条の１３第２項）により生ずるものであり、本掲載とは関係ありません。─────────────────────────────────────────────────────── Continued from the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification Symbol FI C12N 15/06 1/21 5/06 C12P 21/02 A61K 39/395 (C12N 1/21 C12R 1:19) (C12P 21/02 C12R 1:19) (C12P 21/02 C12R 1:91) (Note) This publication is based on the gazette published internationally by the International Bureau (WIPO). The effect of the international publication of the Japanese language patent application (Japanese language utility model registration application) related to this publication arises pursuant to Article 184-10, paragraph 1 of the Patent Act (Article 48-13, paragraph 2 of the Utility Model Act) and is unrelated to this publication.

Claims

[Claims]

1. An antibody that specifically reacts with the novel protein human LECT2 (a protein having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 in the Sequence Listing).

2. The antibody according to claim 1, which is produced by the hybridoma clone G2A5D7 (accession number FERM P-15638).

3. The antibody of claim 1, which is produced by hybridoma clone A1G1C6 (accession number FERM P-15639).

4. The antibody of claim 1, which is produced by hybridoma clone 5C5 (accession number FERM P-15640).

5. The antibody of claim 1, produced by fused cell clone H12D10D6 (accession number FERM P-15641).

6. The antibody of claim 1, produced by hybridoma clone 89F2 (accession number FERM P-16229).

7. A fused cell characterized by producing the antibody according to claim 1.

8. The fusion cell of claim 7, which is one selected from the group consisting of fusion cell clones G2A5D7 (accession number FERM P-15638), A1G1C6 (accession number FERM P-15639), 5C5 (accession number FERM P-15640), H12D10D6 (accession number FERM P-15641), and 89F2 (accession number FERM P-16229).

9. A method for measuring human LECT2, comprising the following steps a) to c) and d) to f): a) reacting a solid-phase antibody prepared by binding a first antibody specifically reactive with human LECT2 to an insoluble support with human LECT2 as a standard substance; b) reacting a second antibody specifically reactive with human LECT2 with a labeled antibody, which is prepared by labeling the second antibody with a labeling substance; c) measuring the amount of label in the reaction product to prepare a calibration curve; and d) reacting a sample with the solid-phase antibody; e) reacting with the labeled antibody; f) measuring the amount of label in the reaction product and measuring the amount of human LECT2 in the sample from the calibration curve.

10. The method for measuring human LECT2 according to claim 9, wherein the first antibody is an antibody described in any one of claims 2 to 6, and the second antibody is an antibody described in any one of claims 2 to 6 but is different from the first antibody.

11. A kit for measuring human LECT2, comprising: a solid-phase antibody comprising a first antibody that specifically reacts with human LECT2 bound to an insoluble support; and a labeled antibody comprising a second antibody that specifically reacts with human LECT2 and is labeled with a labeling substance.

12. The kit for measuring human LECT2 according to claim 11, wherein the first antibody is an antibody described in any one of claims 2 to 6, and the second antibody is an antibody described in any one of claims 2 to 6 but is different from the first antibody.