JPH11302174A

JPH11302174A - 細胞接着阻害剤

Info

Publication number: JPH11302174A
Application number: JP10113583A
Authority: JP
Inventors: Hiromi Kamimura; 裕美上村; Ayako Takashima; 綾子高島; Katsuhide Iwasaki; 勝秀岩崎; Yohei Mukoyama; 洋平向山; Miyoko Kamigaichi; みよ子上垣内; Kenji Toubetsuto; 健司当別当
Original assignee: Maruho Co Ltd
Current assignee: Maruho Co Ltd
Priority date: 1998-04-23
Filing date: 1998-04-23
Publication date: 1999-11-02

Abstract

(57)【要約】（修正有）【解決手段】コリノリン、ケリドニン、ベルベリン、
サリクトカビン、コリダリン誘導体等を細胞接着阻害剤
の有効成分として含有する医薬組成物。【効果】上記の化合物は、細胞接着阻害活性を有し、
細胞浸潤阻害剤、抗炎症剤（抗アレルギー剤、抗喘息
剤、抗リウマチ剤、虚血再灌流障害治療剤等）、免疫抑
制剤などとして有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、細胞接着阻害活
性を有し、細胞浸潤阻害剤、抗炎症剤（抗アレルギー
剤、抗喘息剤、抗リウマチ剤、虚血再潅流障害治療剤
等）、免疫抑制剤などとして有用な化合物を有効成分と
して含有する医薬組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】炎症が成立するには、血流中に存在する
白血球が血管外へ浸潤し、炎症局所へ遊走する過程が必
須である。実際に種々の炎症において、炎症部位への白
血球浸潤が認められる。白血球が血管外へ浸潤するため
には、血管内を流れている白血球が、ＩＬ−１やＴＮＦ
αなどのサイトカインにより活性化された血管内皮細胞
上をローリング（ｒｏｌｌｉｎｇ）した後、血管内皮細
胞へ接着することが不可欠であることが明らかにされて
いる。この細胞接着には細胞表面上に発現したセレクチ
ンファミリー（ＥＬＡＭ−１など）、インテグリンファ
ミリー（ＬＦＡ−１、Ｍａｃ−１など）およびイムノグ
ロブリンスーパーファミリー（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ
−１など）等の種々の接着分子が関与していることが報
告されている (玉谷卓也、モレキュラー・メディシン
（Molecular Medicine）, 32, 90-96(1995)) 。

【０００３】炎症部位としては例えば、関節リウマチ患
者の滑膜（ポスチーゴ(Postigo) AAら、オートイムニテ
ィ(Autoimmunity)、16,69-79 (1993))、アトピー性皮膚
炎患者における皮膚( 片山一朗、「炎症」、17, 121-12
6 (1997)) 、接触性皮膚炎患者における皮膚（サトウ
(Satoh) Tら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イム
ノロジイ(European Journal of Immunology)、27, 85-9
1(1997))、アレルギー性鼻炎患者の鼻粘膜 (朝倉光司、
「医学のあゆみ」、180, 19-23 (1997))、喘息患者の気
管支 (堀江史朗、大久保喜雄、「炎症と免疫」、5, 605
-611(1997)) 、虚血再潅流心筋組織 (黒田智志ら、「血
管」、18, 183-191 (1995)) などが知られている。

【０００４】またこれらの接着分子は、Ｔ細胞と抗原提
示細胞の接着( 臨床医のための実験医学シリーズ、５、
「免疫のしくみと疾患」、98-108、羊土社(1992)) や癌
細胞と血管内皮細胞の接着( ゴルスキー (Gorski) A 、
イムノロジィ・トウデイ(Immunology Today)、15, 251-
255 (1994)) 等にも関与しており、免疫反応や癌転移に
も重要な役割を果たしている。したがって、このような
細胞接着を阻害する物質は、炎症やアレルギー、慢性関
節リウマチに代表される自己免疫疾患、癌などに対する
治療剤として、あるいは臓器移植時の拒絶反応の抑制剤
として有用であることが期待される。

【０００５】種々の公知文献、例えば臨床医のための実
験医学シリーズ（１８、「細胞接着分子と疾患」、羊土
社（１９９４））、「慢性関節リウマチ治療の新たなア
プローチ」（先端医学社（１９９４））およびザ・イヤ
ーズ・ドラッグ・ニュース（(The Year's Drug New
s）、506-508 (1995)）では、各接着分子のモノクロー
ナル抗体が種々の炎症、慢性関節リウマチ、移植臓器拒
絶反応、癌などに有効であることが示されている。しか
しながら、モノクローナル抗体による治療には、投与法
が非経口に制限されること、十分な効果を得るためには
大量の抗体が必要であること、抗原性に基づく副作用の
発生、高価格などの問題点が残されている。

【０００６】一方、これらの問題を解決するため、種々
の低分子細胞接着阻害剤が報告されている。これらは種
々の公知文献、例えばアニュアル・レポーツ・イン・メ
ディシナル・ケミストリー((Annual Reports in Medici
nal Chemistry), 29, 215-224 (1994)) 、ザ・イヤーズ
・ドラッグ・ニューズ(506-508(1995)、エキスパート・
オピニオン・オン・セラピューティック・パテンツ((Ex
pert Opinion on Therapeutic Patents), 6, 205-207
(1996) 、同 7, 695-715(1997))に記載されている。

【０００７】他方、前記の一般式(I) で表わされる化合
物（以下、「化合物（Ｉ）」と略称する）のうち、例え
ばコリダリン(corydaline)がＡＣＡＴ（ａｃｙｌ−Ｃｏ
Ａ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅ
ｒａｓｅ）阻害作用を示し、コレステロール吸収抑制剤
および動脈硬化予防・治療剤として有用であり（特開平
８−５９４６９）、ベンゾ［ｃ］フェナンスリジウム誘
導体が抗腫瘍活性を示し、血小板凝集抑制剤として有用
であり（特開平５−１４８２３９および特開平５−２０
８９５９）、ベルベリン(berberine) が免疫抑制作用
（特開平７−３１６０５１）を有し、テトラヒドロプロ
トベルベリン第４級アンモニウム化合物が不整脈や心室
細動を抑制し、心筋性虚血を保護すること（特開平７−
１０９２７６）も知られている。しかし、この発明の化
合物（Ｉ）が細胞接着を阻害する作用を有することは、
これらの文献では示唆されていない。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】この発明の目的は、細
胞接着阻害作用に基づく細胞浸潤阻害剤、抗炎症剤（抗
アレルギー剤、抗喘息剤、抗リウマチ剤、抗虚血再潅流
障害剤等）あるいは免疫抑制剤として有用な医薬組成物
を提供することにある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】この発明の発明者らは、
細胞接着を阻害する物質を得るべく研究を行った結果、
化合物（Ｉ）が、ヒト臍帯静脈内皮細胞 (ＨＵＶＥＣ）
とヒト末梢血より分離した多形核白血球（ＰＭＮ）との
間の接着を抑制すること、またＩＬ−１βおよびＴＮＦ
α刺激によるＨＵＶＥＣの接着分子発現も抑制すること
を見出し、強い細胞接着阻害作用を有していることを知
見した。さらに，オキサゾロンで感作されたマウスの耳
介部にオキサゾロンを塗布することにより惹起される耳
介浮腫反応において、化合物（Ｉ）を腹腔内投与するこ
とにより炎症反応が抑制されることも見出した。

【００１０】この発明は、一般式(I) ：

【００１１】

【化２】

【００１２】［式中、Ｒ¹およびＲ²は、同一または異
なって低級アルコキシ基またはヒドロキシ基であり、Ｒ
³が水素原子であるか、Ｒ¹とＲ²が互いに結合して−
ＯＣＨ ₂Ｏ−を形成し、Ｒ³が水素原子であるか、また
はＲ¹が水素原子であり、Ｒ²とＲ³が互いに結合して
−ＯＣＨ₂Ｏ−を形成し、Ｒ⁴は、水素原子または低級
アルキル基であり、Ｒ⁵およびＲ⁶は、同一または異な
って水素原子または低級アルキル基であるか、あるいは
互いに結合して、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＯ−ＣＨ₂−ま
たは−ＣＨ（−Ｒ¹⁴）−ＣＨ₂−（ここで、Ｒ¹⁴はヒド
ロキシ基、低級アルカノイルオキシ基もしくはハロ低級
アルカノイルオキシ基であるか、またはＲ¹³と結合して
−Ｏ−を形成する）を形成し、Ｒ⁷およびＲ⁸は、同一
または異なって低級アルコキシ基であり、Ｒ⁹が水素原
子であるか、あるいはＲ⁷とＲ⁸が互いに結合して−Ｏ
ＣＨ₂Ｏ−を形成し、Ｒ ⁹が水素原子であるか、もしく
はＲ⁷が水素原子であり、Ｒ⁸とＲ⁹が互いに結合して
−ＯＣＨ₂Ｏ−を形成し、Ｒ¹¹は水素原子または低級ア
ルキル基であり、Ｒ¹⁰は水素原子または−ＣＨ₂Ｃ（＝
Ｏ）ＯＣＨ₃であり、Ｒ¹²が低級アルキル基またはヒド
ロキシ基であるか、あるいはＲ¹⁰とＲ¹²が互いに結合し
て−ＣＨ₂ＣＨ₂−を形成し、この際Ｒ¹²の結合してい
るＸにはさらに低級アルキル基が結合していてもよい、
Ｒ¹³は水素原子であるか、あるいはＲ¹⁴と結合して−Ｏ
−を形成し、Ｘは窒素原子または炭素原子であり、Ｘが
窒素原子であって４級アンモニウム塩である場合には対
イオンとしてＹを有する（ここでＹはハロゲンアニオン
である）］で表わされる化合物、または薬理学的に許容
されるその塩を細胞接着阻害剤の有効成分として含有す
る医薬組成物に関する。

【００１３】

【発明の実施の形態】前記の一般式（Ｉ）において、低
級アルコキシ基とは炭素数が１〜４の直鎖または分岐状
のアルコキシ基であり、例えば、メトキシ、エトキシ、
プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、tert- ブトキ
シ等が挙げられる。低級アルキル基とは炭素数が１〜４
の直鎖または分岐状のアルキル基であり、例えば、メチ
ル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、tert-
ブチル等が挙げられる。

【００１４】低級アルカノイルオキシ基とは炭素数が１
〜４の直鎖または分岐状のアルカノイルオキシ基であ
り、例えば、アセチルオキシ、プロピオニルオキシ、ブ
チリルオキシ等が挙げられる。ハロ低級アルカノイルオ
キシ基とは１〜３個のハロゲン原子で置換された、炭素
数１〜４の直鎖または分岐状のアルカノイルオキシ基で
あり、例えば、フルオロアセチルオキシ、クロロアセチ
ルオキシ、ブロモアセチルオキシ、ヨードアセチルオキ
シ、ジクロロプロピオニルオキシ、クロロブチリルオキ
シ等が挙げられる。ハロゲンアニオンとは、フッ素アニ
オン、塩素アニオン、臭素アニオン、ヨウ素アニオンが
挙げられる。

【００１５】この発明の有効成分である化合物（Ｉ）は
公知の化合物であり、公知の方法、例えばヘルベチカ・
キミカ・アクタ(Helvetica Chimica Acta),66,473 (198
3)、アルチーフ・デア・パルマチー(Arch.Pharm.),317,
223(1984) 、テトラヘドロン(Tetrahedron) 35,1099(19
79) 、テトラヘドロン、35,1977(1979) 、テトラヘドロ
ンレターズ(Tetrahedron Lett.),1979,495、アナーレン
・デア・パルマチー(Ann. pharm.),29,113(1839)、カナ
ディアン・ジャーナル・オブ・ケミストリー(Can.J.Che
m.),47,3701 (1969)、ケミカル・ファーマシューティカ
ル・ブレティン(Chem.Pharm.Bull.),21,1020(1993)、同
21,1096(1973) 等に記載の方法により製造するか、また
はこれら公知の方法により得られた化合物を適宜処理を
することにより得られる。

【００１６】化合物（Ｉ）の代表例を以下に示すが、本
発明はこれらの例に限定されるものではない。

【００１７】（Ａ）（±）−コリノリン，（Ｂ）（±）
−Ｏ−アセチルコリノリン、（Ｃ）（＋）−Ｏ−ブロモ
アセチル−１４−エピコリノリン、（Ｄ）（＋）−Ｏ−
アセチルケリドニン、（Ｅ）（±）−アンヒドロコリノ
リン、（Ｆ）（±）−コリノロン、（Ｇ）（±）−コリ
ノロキシン、（Ｈ）（＋）−ホモケリドニン、（Ｉ）
（−）−テトラヒドロベルベリン、（Ｊ）（±）−テト
ラヒドロベルベルビン、

【００１８】（Ｋ）（±）−メソ−サリクトリカビン、
（Ｌ）（±）−Ｎ−メチル−サリクトリカビニウムクロ
ライド、（Ｍ）（±）−メソコリダリン、（Ｎ）（±）
−コリダリン、（Ｏ）（±）−Ｎ−メチル−コリダリニ
ウムクロライド、（Ｐ）（±）−Ｎ−エチル−コリダリ
ニウムクロライド、（Ｑ）（＋）−コリダリン酸メチル
エステル、（Ｒ）（＋）−デＮーケリドニン（Ｓ）（±）−デＮ−コリノリン

【００１９】上記の化合物はそれぞれ次の構造式で表わ
される。

【００２０】

【化３】

【００２１】

【化４】

【００２２】化合物（Ｉ）には種々の立体異性体、互変
異性体が存在するが、これらの異性体はいずれもこの発
明に含まれる。また、分子中に不斉中心を含む場合に
は、不斉中心の立体配置はＲ，Ｓのいずれでもよく、ま
たそれらの混合物であってもよい。そして、これらの異
性体は、例えば光学活性な化合物を出発原料として用い
るか、または得られた異性体混合物をカラムクロマトグ
ラフィーや再結晶により精製して得ることができる。

【００２３】薬理学的に許容される塩としては、例えば
塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩またはリン酸塩等の無機
酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸
塩またはメタンスルホン酸塩等の有機酸塩等が挙げられ
る。これらの塩は、通常の塩形成反応により製造し、精
製することができる。

【００２４】化合物（Ｉ）およびその薬理学的に許容さ
れる塩は、後記の試験例で示すように、細胞接着を有意
に阻害し、かつ毒性も少ないことから、ヒトや哺乳動物
に対する細胞接着阻害剤として有用である。具体的に
は、細胞接着に起因する各種疾患の予防または治療剤と
して有用であり、そのような疾患としては、例えばアレ
ルギー、喘息、リウマチ、虚血再潅流障害等の炎症、免
疫異常などが挙げられる。

【００２５】この発明の医薬組成物は、その目的に応じ
て各種の剤型、例えば、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細
粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤、注
射剤、点滴剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤、貼付剤、エアゾ
ール等の非経口剤として使用される。これら製剤は、こ
の分野で通常知られた慣用的な方法により製造すること
ができる。

【００２６】さらに、この発明の医薬組成物には、この
発明の効果を損なわない限り、所望により着色剤、保存
剤、香料、風味料、甘味剤のような通常の添加剤、およ
び他の医薬品を配合することもできる。

【００２７】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
して例えば乳糖、デンプン、結晶セルロース等の通常の
賦形剤を用いて常法に従って製造する。この場合、所望
により、デンプン液、カルボキシメチルセルロース等の
結合剤、乾燥デンプン、炭酸カルシウム等の崩壊剤、白
糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊
抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリ
ウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿
剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイ
ド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、
ほう酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用
できる。

【００２８】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
して例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化
植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム
末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、
カンテン等の崩壊剤等を使用できる。

【００２９】なお、錠剤、丸剤及び顆粒剤等は、必要に
応じて通常の剤皮を施した剤形、例えば糖衣錠、ゼラチ
ン被包剤、腸溶被包剤、フィルムコーティング剤等とす
ることができ、また錠剤は二重錠等の多層錠とすること
もできる。

【００３０】カプセル剤は、常法に従って、本発明の化
合物またはその塩を上記で例示した各種の担体と混合し
て、硬化ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して
調製される。

【００３１】経口用液体製剤を調製する場合は、本発明
の有効成分に、必要に応じて矯味剤、緩衝剤、安定化剤
等の担体を加えて、常法により内服液剤、シロップ剤、
エリキシル剤等を製造することができる。この場合、矯
味剤としては、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が使用
でき、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化
剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が使
用できる。

【００３２】注射剤または点滴剤を調製する場合は、本
発明の化合物またはその塩に、必要に応じてpH調製剤、
緩衝剤、安定化剤、局所麻酔剤、等張化剤等の担体また
は希釈剤を添加し、常法により静脈内、筋肉内、皮下、
皮内または腹腔内用の注射剤または点滴剤を製造するこ
とができる。

【００３３】pH 調製剤および緩衝剤としては、クエン
酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等
が、安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、エチレン
ジアミン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸等が、局
所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等
が、また等張化剤としては食塩、ブドウ糖あるいはグリ
セリン等を使用することができる。また、希釈剤として
は、例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロ
ピレングリコール等を挙げることができる。

【００３４】なお、注射剤または点滴剤は殺菌され、か
つ血液と等張であるのが好ましい。

【００３５】坐剤は、本発明の化合物またはその塩に基
剤、さらに必要に応じて界面活性剤等を加えた後、常法
に従って調製することができる。基剤としては、例え
ばマクロゴール、ラノリン、カカオ油、脂肪酸トリグリ
セライド、ウィテップゾール（ダイナマイトノーベルズ
社製）等の油性基剤を用いることができる。

【００３６】軟膏剤を調製する場合は、本発明の化合物
またはその塩に通常使用される基剤、安定化剤、湿潤
剤、保存剤等の担体が必要に応じて配合され、常法によ
り混合、製剤化される。基剤としては流動パラフィン、
白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアル
コール、パラフィン等が挙げられる。保存剤としてはパ
ラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、
パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。

【００３７】貼付剤は、通常の支持体に前記軟膏、ペー
スト、クリーム、ゲル等を常法により塗布することによ
り調製することができる。支持体としては綿、スフ、化
学繊維からなる織布または不織布、軟質塩化ビニル、ポ
リエチレン、ポリウレタン等のフィルムあるいは発泡体
シートを挙げることができる。

【００３８】この発明の医薬組成物は、剤形、患者の年
齢、疾患の程度等に応じて、経口投与、静脈内投与、皮
下・皮内投与、筋肉内投与、関節内投与、直腸投与、経
粘膜投与等の非経口投与により使用され得るが、経口投
与、静脈内投与および関節内投与が好ましい。

【００３９】本発明化合物を治療上用いる場合の投与量
は、疾病の種類、患者の症状・重篤度、体重、年齢、性
別、薬物に対する認容度、薬物の投与形態やその他の条
件等に応じて適宜増減されるが、通常成人に１日あたり
１〜２０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇとする
ことができる。

【００４０】

【実施例】以下参考例、試験例および実施例によりこの
発明を説明するが、この発明はこれらの参考例、試験例
および実施例に限定されるものでない。

【００４１】参考例１ (±)-コリノリン(corynoline)
（Ａ）の製造

【化５】乾燥重量3.7 ｋｇのムラサキケマン（福井県産）のメタ
ノールエキスを３％酒石酸で抽出した。酒石酸層はエー
テル抽出により中性および酸性物質を除去後、アンモニ
ア水を加え、アルカリ性としてエーテル抽出を行った。
このエーテル層は無水炭酸カリウムで乾燥後、エーテル
留去により赤褐色油状の残査を１４．１ｇ得た。この残
査をクロロホルム−メタノール混合溶媒で再結晶し、m.
p.216-217 ℃の無色プリズム状の（±）−コリノリン
３．５ｇを得た。

【００４２】参考例２ (＋) −Ｏ−アセチルコリノリ
ン（Ｂ）の製造

【化６】

【００４３】（＋）−コリノリン７０ｍｇを無水酢酸
０．５ｍｌに溶解し、ピリジン数滴を加えて室温で４時
間放置した。反応後、反応液中に少量の氷片を加えて無
水酢酸を分解後、アンモニア水を加えてアルカリ性とし
てエーテル抽出を行った。このエーテル層は無水炭酸カ
リウムで乾燥後、エーテルを留去し、残査をアセトン−
エーテル混合溶媒で再結晶すると、m.p.115-116 ℃の無
色柱状結晶として（＋）−Ｏ−アセチルコリノリンが７
１ｍｇ得られた。

【００４４】参考例３（＋）−Ｏ−ブロモアセチル−
１４−エピコリノリン(bromoacetyl-14-epicorynoline)
（Ｃ）の製造

【化７】

【００４５】テトラヘドロン、３５、１０９９−１１０
７（１９７９）に記載の方法に従って、製造した。

【００４６】参考例４（＋） −Ｏ−アセチルケリド
ニン(acetylchelidonine)（Ｄ）の製造

【化８】

【００４７】アルチーフ・デア・パルマチー、３１７、
２２３−２３７（１９８４）に記載の方法に従って、製
造した。

【００４８】参考例５（＋) −アンヒドロコリノリン
(anhydrocorynoline)（Ｅ）の製造例

【化９】

【００４９】（＋) −コリノリン１００ｍｇを少量のベ
ンゼンに溶解して、氷冷下塩化チオニル０．２ｍｌを滴
下後３０分間加熱還流した。反応後少量の氷片を加え、
反応液を減圧留去し、得られた残査を水に溶解し、アン
モニア水でアルカリ性とした後にエーテルで抽出した。
抽出液は無水硫酸ナトリウムで乾燥後、エーテルを留去
し、帯黄色の油状物質を得た。これをアルミナカラムク
ロマトグラフィー（ベンゼン）で精製後、エーテルで再
結晶するとm.p.146-147 ℃の無色プリズム状結晶として
（＋) −アンヒドロコリノリンが６０ｍｇ得られた。

【００５０】参考例６ (＋) −コリノロン(corynolone)
（Ｆ）の製造

【化１０】 (＋) −コリノリン１００ｍｇを無水ベンゼン１５ｍｌ
に溶解後、カリウムｔ−ブトキシド３００ｍｇを加え、
フルオレノン(fluorenone)２００ｍｇを加えて室温で２
時間振とうした。反応後５％塩酸２０ｍｌを加えて酸性
とした後、エーテル抽出により中性物質を除去し、次い
でアンモニア水でアルカリ性とし、エーテルで抽出し
た。抽出液は無水硫酸ナトリウムで脱水後、溶媒を留去
すると橙色の油状物質が得られた。これをアルミナカラ
ムクロマトグラフィー（ベンゼン）により精製し、アセ
トン／エーテル混合溶媒で再結晶するとm.p.167-168 ℃
のプリズム状結晶として、４５ｍｇの (＋) −コリノロ
ンを得た。

【００５１】参考例７ (＋) −コリノロキシン(coryn
oloxine)（Ｇ）の製造

【化１１】

【００５２】(＋) −コリノリン１００ｍｇを５％酢酸
に溶解してHg₂(OAc)₂２１０ｍｇを加え水浴上で４時間
加熱した。反応後析出したHg(OAc)₂をろ別して、ろ液を
アンモニア水でアルカリ性とした後エーテルで抽出し
た。エーテル層を無水炭酸カリウムで乾燥後溶媒を留去
すると帯黄色油状物質が得られた。これをアルミナカラ
ムクロマトグラフィー（ベンゼン）により精製し、メタ
ノールから再結晶するとm.p.147-148 ℃の無色プリズム
状結晶として (＋)−コリノロキシンが５５ｍｇ得られ
た。

【００５３】参考例８（＋）−ホモケリドニン(homoc
helidonine) （Ｈ）の製造

【化１２】白屈菜（大和商会k.k., 乾燥重量30Kg）から、常法によ
りメタノールエキスを作り、３級非フェノール性アルカ
ロイド分画を得た。この分画をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（ベンゼン：エーテル＝１：１）で分離
し、（＋） −ケリドニン(chelidonine) の次に溶出す
る分画を単離した。その分画をアセトン／エーテル混合
溶媒から結晶化するとm.p.181-182 ℃のプリズム状結晶
として（＋）−ホモケリドニンが８０ｍｇ得られた。

【００５４】参考例９（±）−テトラヒドロベルベリ
ン（Ｉ）の製造

【化１３】

【００５５】ヘルベチカ・キミカ・アクタ、66,473(198
3)に記載の方法に従って、製造した。

【００５６】参考例１０（±）−テトラヒドロベルベ
ルビン(tetrahydroberberrubine)（Ｊ）の製造

【化１４】

【００５７】ベルベリンクロライド５ｇと尿素１０ｇを
乳鉢で混合し、この混合物を油浴中２００℃で３０分間
加熱した。次いでその反応液を分液ロート中に移しクロ
ロホルムで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ク
ロロホルムを留去し、残査からベルベルビン(berberrub
ine)５６０ｍｇを得た。次いで、これをメタノール５０
０ｍｌに溶解し、NaBH₄を３００ｍｇ加えて還元を行っ
た。反応後、反応液を減圧留去し、得られた残査をクロ
ロホルムで抽出した。抽出液は無水硫酸マグネシウムで
乾燥後、クロロホルムを留去し、得られた残査をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン／エーテル）
で精製し、メタノール/ エーテルから再結晶すると、
（±）−テトラヒドロベルベルビンが１７０ｍｇ得られ
た。

【００５８】参考例１１（±) −メソ−サリクトリカ
ビン(meso-thalictricavine)（Ｋ）の製造

【化１５】

【００５９】分液ロートにベルベリンクロライド１０
ｇ、アセトン２００ｍｌおよび１０％水酸化ナトリウム
水溶液（１００ｍｌ）を入れ、３０分間室温で振とうし
た後、析出した結晶をろ過して、ベルベリンアセトン付
加体を得た。加圧ビン中でベルベリンアセトン付加体２
ｇをアセトンに溶解し、ヨウ化メチル５ｍｌを加え４．
５時間、５０℃で反応させた。反応後、析出した結晶を
ろ別し、１３−メチル−ベルベリンアイオダイドを得
た。次いで、ナス型フラスコに１３−メチル−ベルベリ
ンアイオダイド２ｇ、メタノール３００ｍｌ、Ｚｎ末２
ｇ及び濃塩酸６ｍｌを入れ、水浴上６時間、６０℃で加
熱した。反応後、Ｚｎ末をろ別し、水２０ｍｌを加えた
後メタノールを減圧下に留去した。得られた残査に水を
加え全量を約２００ｍｌとした後、２５％アンモニア水
を加えアルカリ性とし、クロロホルム３００ｍｌで２回
抽出を行った。抽出液は無水硫酸マグネシウムで乾燥
し、次いで、溶媒を留去して油状の（±）−サリクトリ
カビンと（±）−メソ−サリクトリカビンの反応混合物
を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（ベンゼン／エーテル／メタノール）により分離し、ク
ロロホルムから再結晶することによりｍ．ｐ．１１１．
５−１１２℃の（±）−メソ−サリクトリカビンを得
た。

【００６０】参考例１２ (±) −Ｎ−メチル−サリクト
リカビニウムクロライド(methyl-thalictricavinium ch
loride) （Ｌ）の製造

【化１６】

【００６１】参考例１１と同様の操作で単離した（±）
−サリクトリカビンのアセトン溶液にヨウ化メチルを加
え、封管中、８０℃で６時間反応させた。反応後、析出
結晶をろ別し、メタノールから再結晶することにより
（±）−Ｎ−メチル−サリクトリカビニウムアイオダイ
ドの無色結晶を得た。次いで、１．５ｇのアンバーライ
トＣＧ−４００を水に懸濁させてカラムに充填し、１０
０ｍｌのメタノールに１００ｍｇのＮ−メチル−サリク
トリカビニウムアイオダイドを溶解した溶液を注入した
後、メタノールにより溶出した。溶出液を減圧下濃縮乾
固することにより、（±）−Ｎ−メチル−サリクトリカ
ビニウムクロライド７５ｍｇを無色粉末として得た。分
解点１６１．８−１６８．７℃

【００６２】参考例１３ (±) −メソコリダリン(meso
-corydaline) （Ｍ）の製造

【化１７】

【００６３】分液ロートにパルマチンクロライド１０
ｇ、アセトン２００ｍｌそして１０％水酸化ナトリウム
水溶液（１００ｍｌ）を入れ、３０分間室温で振とうし
た後、析出した結晶をろ過して、パルマチンアセトン付
加体を得た。加圧ビン中でパルマチンアセトン付加体
（２ｇ）をアセトンに溶解し、ヨウ化メチル５ｍｌを加
え４．５時間、５０℃で反応させた。反応後、析出した
結晶をろ別し、１３−メチルパルマチンアイオダイド(1
3-methyl-palmatine iodide)を得た。ナス型フラスコに
１３−メチルパルマチンアイオダイド２．０ｇ、メタノ
ール３００ｍｌ、Ｚｎ末２ｇおよび濃塩酸６ｍｌを入
れ、水浴上６時間、６０℃で加熱した。反応後、Ｚｎ末
をろ別し、水２０ｍｌを加えた後メタノールを減圧下留
去した。得られた残差に水を加え全量を約２００ｍｌと
した後、２５％アンモニア水を加えアルカリ性とし、ク
ロロホルム３００ｍｌで２回抽出を行った。抽出液は無
水硫酸マグネシウムで乾燥し、次いで、溶媒を留去して
油状の（±）−コリダリンと（±）−メソコリダリンの
反応混合物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（ベンゼン／エーテル／メタノール）により分
離し、クロロホルムから再結晶することによりｍ．ｐ．
１５５．５−１５６．７℃の（±）−メソコリダリンを
１８０ｍｇ得た。

【００６４】参考例１４ (±) −コリダリン（Ｎ）の製
造

【化１８】

【００６５】１３−メチルパルマチンアイオダイド２．
０ｇから参考例１３と同様の操作によりｍ．ｐ．１３
３．０−１３４．１℃の（±）−コリダリンを２４０ｍ
ｇ得た。

【００６６】参考例１５（±）−Ｎ−メチル−コリダ
リニウムクロライド(methyl-corydalinium chloride)
（Ｏ）の製造

【化１９】

【００６７】（±）−コリダリンのアセトン溶液にヨウ
化メチルを加え、封管中、８０℃で６時間反応させた。
反応後、析出結晶をろ別し、メタノールから再結晶する
ことにより（±）−Ｎ−メチルコリダリニウムアイオダ
イドの無色結晶を得た。次いで、参考例１２と同様の操
作により（±）−Ｎ−メチルコリダリニウムクロライド
を白色粉末として得た。分解点１８１．０−２３１．８
℃

【００６８】参考例１６（±）−Ｎ−エチルコリダニ
ウムクロライド（Ｐ）の製造

【化２０】ヨウ化エチルを用い、参考例１５と同様にして（±）−
Ｎ−エチル−コリダリニウムクロライドを帯黄色粉末と
して得た。分解点１６２．１−１７０．３℃

【００６９】参考例１７（＋)−コリダリン酸メチルエ
ステル(corydalic acid methyl ester) （Ｑ）の製造

【化２１】

【００７０】ケミカル・ファーマシューティカル・ブレ
ティン、２１、１０２０（１９７３）に記載の方法に従
い、植物から単離した。

【００７１】参考例１８（＋）−デＮ−ケリドニン(d
eN-chelidonine)（Ｒ）の製造

【化２２】

【００７２】アルチーフ・デア・パルマチー、３１７、
２２３−２３７（１９８４）に記載の方法に従って、製
造した。

【００７３】参考例１９ (±) −デＮ−コリノリン(deN
-corynoline)（Ｓ) の製造

【化２３】

【００７４】テトラヘドロン、３５、１９７７−１９７
９（１９７９）に記載の方法に従って、製造した。

【００７５】試験例１血管内皮細胞と多形核白血球の接着に対する阻害作用ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を４８穴プレート
でコンフルエントになるまで培養後、ＩＬ−１βを添加
した。添加４時間後にＨＵＶＥＣを洗浄し、そこへＢＣ
ＥＣＦ（２’，７’−Ｂｉｓ（ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙ
ｌ）−４又は５−ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉ
ｎ）標識したヒト末梢血由来多形核白血球（ＰＭＮ）を
各穴に１ｃｍ²当たり４×１０⁵個添加した。試験化合
物はＰＭＮと同時にＨＵＶＥＣへ添加した。３７℃で３
０分間インキュベート後、接着していないＰＭＮを洗浄
して除去し、ＨＵＶＥＣ上に残ったＰＭＮを０．２％Ｓ
ＤＳを含む０．１ＭＮａＯＨで溶解して、残存してい
る蛍光強度を測定した。阻害活性は｛( 化合物無添加で
のＩＬ−１β刺激ＨＵＶＥＣへのＰＭＮ接着数) −( 化
合物無添加での無刺激ＨＵＶＥＣへのＰＭＮ接着数) ＝
１００％｝として算出した。この値を表１に示す。

【００７６】

【表１】

【００７７】試験例２血管内皮細胞の接着分子発現に対する阻害作用ＩＬ−１βおよびＴＮＦα刺激によるヒト臍帯静脈内皮
細胞（ＨＵＶＥＣ）の各種接着分子（ＩＣＡＭ−１、Ｖ
ＣＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１）の発現に対する試験化合物
の作用をみた。すなわち、９６穴プレートでコンフルエ
ントになるまで培養したＨＵＶＥＣを、ＩＬ−１βで３
７℃、４時間刺激してＩＣＡＭ−１およびＥＬＡＭ−１
の発現を、またＴＮＦαで３７℃４時間刺激してＥＬＡ
Ｍ−１の発現を、さらに、ＴＮＦαで３７℃６時間刺激
してＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１の発現をみた。試
験化合物は、ＩＬ−１βまたはＴＮＦαで刺激する１時
間前にＨＵＶＥＣへ添加した。接着分子発現量は、一次
抗体に各接着分子に対するマウスモノクローナル抗体
を、また二次抗体にビオチン標識抗マウスＩｇＧ抗体を
用い、ストレプトアビジン結合アルカリホスファターゼ
によるＣＥＬＬＥＬＩＳＡ法により測定した。阻害活
性はＣＥＬＬＥＬＩＳＡで得られた吸光度値より算出
した。この値を表２〜表６に示す。

【００７８】

【表２】

【００７９】

【表３】

【００８０】

【表４】

【００８１】

【表５】

【００８２】

【表６】

【００８３】試験例３オキサゾロン誘発耳介浮腫に対する抑制作用ＢＡＬＢ／ｃ雄性マウス (２０〜２５ｇ、１群４匹)
を、エタノールに溶解した３％オキサゾロン（１００μ
ｌ）を腹部に塗布することにより感作した。感作６日後
に、アセトンに溶解した０．５％オキサゾロンを、右側
耳介の両面に１０μｌずつ塗布して浮腫反応を惹起し
た。左側耳介にはアセトンのみを塗布した。反応惹起２
４時間後、エーテル麻酔死させ、左右耳介を６ｍｍ径に
パンチで打ち抜き、その切片の重量を測定して浮腫率を
求めた。試験化合物は５％ポリエチレングリコール４０
０および１％Ｔｗｅｅｎ８０を含むリン酸緩衝生理食塩
水に懸濁させ、浮腫反応惹起の３０分前および６時間後
の２回、１００ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与した。この結果
を表７に示す。

【００８４】

【表７】

【００８５】試験例４なお、上記試験例１および２における試験化合物につい
て、以下の方法により細胞毒性試験を行い、上記濃度に
おいて毒性が認められないことを確認した。すなわち、
９６穴プレートでコンフルエントとなったＨＵＶＥＣに
試験化合物を添加し、３７℃で２４時間インキュベート
後、培養上清中の乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性を測定
した。酵素活性はＬＤＨ−細胞毒性テストキット（和光
純薬工業、大阪市）を用い、吸光度値より算出した。細
胞毒性の陽性対照として０．２％Ｔｗｅｅｎ２０をＨ
ＵＶＥＣに加えた。この結果、試験化合物を添加して
も、培養上清中にＬＤＨ活性は認められなかった。な
お、上記濃度における試験化合物のＬＤＨ活性測定系へ
の影響は認められなかった。

【００８６】実施例１（±）−コリノリン２０ｇをとり、乳糖９０ｇ、コーン
スターチ５９．５ｇ、結晶セルロース２０ｇ、カルボキ
シメチルセルロースカルシウム１０ｇおよびステアリン
酸マグネシウム０．５ｇを加えて全量を２００ｇの粉末
とし、これをよく混合した後、１錠２００ｍｇの錠剤を
製造した。

【００８７】実施例２（±）−コリノロキシン４０ｇをとり、乳糖７８ｇ、コ
ーンスターチ５１．５ｇ、結晶セルロース２０ｇ、カル
ボキシメチルセルロースカルシウム１０ｇおよびステア
リン酸マグネシウム０．５ｇを加えて全量を２００ｇの
粉末とし、これをよく混合した後、１錠２００ｍｇの錠
剤を製造した。

【００８８】

【発明の効果】この発明の化合物（Ｉ）は優れた細胞接
着阻害作用を有し、毒性も少ないので、細胞浸潤阻害
剤、抗アレルギー剤・抗喘息剤・抗リウマチ剤・虚血再
潅流障害治療剤等の抗炎症剤および免疫抑制剤として有
用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/36 ＡＢＣＡ６１Ｋ 31/36 ＡＢＣ 31/435 ＡＢＥ 31/435 ＡＢＥ // Ａ６１Ｋ 35/78 35/78 ＣＣ０７Ｄ 317/70 Ｃ０７Ｄ 317/70 455/03 455/03 491/056 491/056 491/153 491/153 (72)発明者向山洋平大阪市北区大淀中１−８−23 マルホ株式会社中央研究所内 (72)発明者上垣内みよ子豊中市新千里北町３−８−６ (72)発明者当別当健司大阪市北区大淀中１−８−23 マルホ株式会社中央研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式（Ｉ）【化１】［式中、Ｒ¹およびＲ²は、同一または異なって低級ア
ルコキシ基またはヒドロキシ基であり、Ｒ³が水素原子
であるか、Ｒ¹とＲ²が互いに結合して−ＯＣＨ ₂Ｏ−
を形成し、Ｒ³が水素原子であるか、またはＲ¹が水素
原子であり、Ｒ²とＲ³が互いに結合して−ＯＣＨ₂Ｏ
−を形成し、Ｒ⁴は、水素原子または低級アルキル基で
あり、Ｒ⁵およびＲ⁶は、同一または異なって水素原子
または低級アルキル基であるか、あるいは互いに結合し
て、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＯ−ＣＨ₂−または−ＣＨ
（−Ｒ¹⁴）−ＣＨ₂−（ここで、Ｒ¹⁴はヒドロキシ基、
低級アルカノイルオキシ基もしくはハロ低級アルカノイ
ルオキシ基であるか、またはＲ¹³と結合して−Ｏ−を形
成する）を形成し、Ｒ⁷およびＲ⁸は、同一または異な
って低級アルコキシ基であり、Ｒ⁹が水素原子である
か、あるいはＲ⁷とＲ⁸が互いに結合して−ＯＣＨ₂Ｏ
−を形成し、Ｒ ⁹が水素原子であるか、もしくはＲ⁷が
水素原子であり、Ｒ⁸とＲ⁹が互いに結合して−ＯＣＨ
₂Ｏ−を形成し、Ｒ¹¹は水素原子または低級アルキル基
であり、Ｒ¹⁰は水素原子または−ＣＨ₂Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ
Ｈ₃であり、Ｒ¹²が低級アルキル基またはヒドロキシ基
であるか、あるいはＲ¹⁰とＲ¹²が互いに結合して−ＣＨ
₂ＣＨ₂−を形成し、この際Ｒ¹²の結合しているＸには
さらに低級アルキル基が結合していてもよい、Ｒ¹³は水
素原子であるか、あるいはＲ¹⁴と結合して−Ｏ−を形成
し、Ｘは窒素原子または炭素原子であり、Ｘが窒素原子
であって４級アンモニウム塩である場合には対イオンと
してＹを有する（ここでＹはハロゲンアニオンであ
る）］で表わされる化合物、または薬理学的に許容され
るその塩を細胞接着阻害剤の有効成分として含有する医
薬組成物。
【請求項２】細胞接着阻害剤が細胞浸潤阻害剤である
請求項１の医薬組成物。
【請求項３】細胞接着阻害剤が抗炎症剤である請求項
１の医薬組成物。
【請求項４】細胞接着阻害剤が細胞接着阻害作用に基
づく免疫抑制剤である請求項１の医薬組成物。
【請求項５】細胞接着阻害剤が抗アレルギー剤、抗喘
息剤、抗リウマチ剤または虚血再潅流障害治療剤である
請求項１の医薬組成物。
【請求項６】一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（±）−コリノリン、（±）−Ｏ−アセチルコリノリ
ン、（＋）−Ｏ−ブロモアセチル−１４−エピコリノリ
ン、（＋）−Ｏ−アセチルケリドニン、（±）−アンヒ
ドロコリノリン、（±）−コリノロン、（±）−コリノ
ロキシン、（＋）−ホモケリドニン、（−）−テトラヒ
ドロベルベリン、（±）−テトラヒドロベルベルビン、
（±）−メソ−サリクトリカビン、（±）−Ｎ−メチル
−サリクトリカビニウムクロライド、（±）−メソコリ
ダリン、（±）−コリダリン、（±）−Ｎ−メチル−コ
リダリニウムクロライド、（±）−Ｎ−エチル−コリダ
リニウムクロライド、（＋）−コリダリン酸メチルエス
テル、（＋）−デＮーケリドニンまたは（±）−デＮ−
コリノリンである請求項１の医薬組成物。