JPH11180877A - 巨核球前駆細胞を含む細胞製剤及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 本発明はヒトの巨核球前駆細胞のｉｎｖ
ｉｔｒｏにおける増殖を効率よく行うため、造血未分化
細胞をあらかじめ巨核球増殖因子及びＦＬＴ３リガンド
で培養した後、他の造血因子を添加することにより、よ
り巨核球系細胞を増幅させた細胞製剤、及びその製造方
法を提供するものである。 【効果】 本発明の細胞製剤およびその製造方法は、化
学治療や骨髄移植に伴う血小板減少症、血小板減少が原
因と考えられる出血傾向を示す各種の疾患の治療の際に
有効な回復効果を示す同種造血幹細胞移植に有用であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、培養システム内に
おいて造血未分化細胞を培養することによって生成した
巨核球前駆細胞を含む同種造血幹細胞移植用の細胞製
剤、及びその製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体を構成する体細胞に不可欠な血液中
には、赤血球、リンパ球、血小板等の血液細胞が存在す
る。当該血液細胞は、それぞれ固有の機能を分担して、
生体を恒常的に保つ役割を担っている。近年、各種の血
液細胞は、骨髄中の造血未分化細胞より分化、成熟する
こと、及び、その分化、成熟の過程において各種の生体
内液性因子が関与していること等の事実が明らかとなっ
てきている。

【０００３】血小板は、血液中に存在する直径２〜３μ
ｍの細胞であり、生体における止血や血栓の形成に重要
な役割を有する血液中の有形成分の一種である。骨髄中
の造血未分化細胞から巨核球系前駆細胞を経て巨核球と
なり、巨核球の細胞質が断片化して生成された当該血小
板が、血液中に放出されることが明らかとなっている。

【０００４】最近になって、巨核球及び血小板系につい
ての研究成果も種々報告されており、例えば、巨核球増
殖因子が、血小板を産生する巨核球の増幅を促進する作
用を有することが報告されている〔加藤俊一「臍帯血幹
細胞移植」日常診療と血液Ｖｏｌ．７，Ｐ．４７９特集
別刷、医薬ジャーナル社〕。高投与量の化学療法や高線
量の放射線照射の様な癌治療は、骨髄中の造血細胞を破
壊し、該患者を血小板の激しく減少した状態に置く。こ
のような治療の後は、血小板減少症を起こし血小板輸血
を必要とする凝固作用の減少や出血性障害をもたらす。
血小板の不足は、これらの癌治療の後の疾病と死亡の主
な原因であり、癌治療のコストを上昇させる要因となっ
ている。巨核球と血小板の回復には、一般的には１５日
よりも長い時間が要求され、該患者の血液凝固能力がそ
の間不足する。

【０００５】近年、臍帯血バンクなどが設立され、採取
された臍帯血が、採取された個人とは異なる患者に移植
する同種造血幹細胞移植が普及し始めている。移植した
患者の多くの場合において、血小板回復の遅れが問題と
なっている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】この問題を解決するた
め臍帯血由来の造血未分化細胞を培養し、巨核球系細胞
を効率よく増幅させた細胞製剤を製造する方法の開発が
望まれている。こうした細胞処理には、国内外の企業に
より病院外で行われることが期待されている。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、造血未分
化細胞に作用し、巨核球前駆細胞の増殖を促進する培養
方法の開発を目的として、鋭意研究を積み重ねた結果、
その培養方法を明らかにすることに成功し、本発明を完
成するに至った。本発明は、巨核球増殖因子及びＦＬＴ
３リガンドの組み合わせにより、造血未分化細胞から巨
核球前駆細胞への分化を促進し、さらに幹細胞因子を作
用させることにより、巨核球前駆細胞の増殖を促進する
方法を提供する。血小板減少を伴う疾患の治療や、血小
板の機能異常を伴う疾患の治療において、血小板減少か
らの回復を促進させる同種造血幹細胞移植用の細胞製剤
を本発明により提供し得る。本発明により得られる細胞
懸濁液は、癌治療の直後からの血小板の回復を促進させ
るものである。

【０００８】すなわち本発明は、（１）あらかじめ巨核
球増殖因子及びＦＬＴ３リガンドを含む培地で、造血未
分化細胞を培養し、その後に造血因子を含む培地で培養
することにより製造されることを特徴とする巨核球前駆
細胞を含む細胞製剤、（２）造血未分化細胞が臍帯血由
来である（１）に記載の細胞製剤、（３）（１）または
（２）に記載の細胞製剤の製造方法に関する。

【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。造血因子
（サイトカイン）は、顆粒球マクロファージコロニー刺
激因子（ＧＭ−ＣＳＦ），顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ
−ＣＳＦ），インターロイキン１（ＩＬ−１）、インタ
ーロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン６（ＩＬ
−６）、巨核球増殖因子、エリスロポエチン（ＥＰ
Ｏ）、ＦＬＴ３リガンド、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＧＭ
−ＣＳＦ／ＩＬ−３結合タンパク質などが示される。巨
核球増殖因子は、トロンボポエチン（ＴＰＯ）として知
られ、生体内において巨核球を増殖する因子として報告
されている〔Ｗｅｎｄｌｉｎｇ，Ｆ．，ｅｔ．ａｌ．，
Ｎａｔｕｒｅ，３６９、５７１（１９９４）、寺村正
尚，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ 血液，（１９９
６）〕。また、該巨核球増殖因子は、Ｐｅｐｒｏ Ｔｅ
ｃｈ社（ＵＳＡ）などから市販されている。ＦＬＴ３リ
ガンドは、ＦＬＫ２リガンドと同一分子であり、遺伝子
がクローニングされ、造血未分化細胞への作用が報告さ
れる〔Ｌｙｍａｎ，Ｓ．Ｄ．，Ｂｌｏｏｄ，８３，２７
９５（１９９４）、岩間厚志，ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅ
ｗ 血液，１２−３２（１９９５））。幹細胞因子は、
Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒ（ＳＣＦ）としてＺ
ｓｅｂｏらにより報告（Ｃｅｌｌ，６３，１９５−２０
１（１９９０））された。この分子は、チロシンキナー
ゼｃ−ｋｉｔのリガンドであるＫＬ（Ｈｕａｎ，Ｅ．、
Ｃｅｌｌ６３、２２５−２３３）、肥満細胞増殖因子Ｍ
ＧＦ（Ｍａｓｔ ｃｅｌｌＧｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏ
ｒ）（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｄ．Ｅ．、Ｃｅｌｌ、６３、
１６７−１７４（１９９０）〕と同一の分子であり、造
血未分化細胞への作用が報告される〔下坂、実験医学増
刊 「サイトカインと情報伝達」，１８５，（１９９
２）〕。またこれらの因子は、通常１ｎｇ／ｍｌ乃至１
μｇ／ｍｌで使用しうるが、好ましくは、１０から１０
０ｎｇ／ｍｌで使用しうる。

【００１０】本発明は、あらかじめ造血未分化細胞を巨
核球増殖因子及び、ＦＬＴ３リガンドを主な刺激因子と
して添加した培地で１日以上培養し、さらに造血因子を
含む培地で培養することで巨核球前駆細胞を効率的に増
殖させることを可能とした。造血因子の組み合わせによ
る培養は、数多く報告されている（ＷＯ９５／２４４６
９）。しかし、巨核球前駆細胞、及び巨核球を効率的に
生成させるに至っていない。発明者らは、２段階の培養
法を見出し、第一段階において巨核球前駆細胞を大量に
調製し、その後第二段階において必要な組成の血液系前
駆細胞の分化を誘導する方法を確立した。本発明におい
て、あらかじめ造血未分化細胞を巨核球増殖因子及び、
ＦＬＴ３リガンドを主な刺激因子として添加した培地で
培養する際、多少のいくつかのサイトカインを組み合わ
せて用いることができるが、巨核球増殖因子及び、ＦＬ
Ｔ３リガンドのみを使用することが望ましい。また、後
から添加する造血因子は、ＧＭ−ＣＳＦ，Ｇ−ＣＳＦ，
ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−６、巨核球増殖因子、エリ
スロポエチン（ＥＰＯ）、ＦＬＴ３リガンド、幹細胞因
子（ＳＣＦ）、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−３結合タンパク質
など使用しうるが、幹細胞因子を使用することが望まし
い。これらの多種類のサイトカインを組み合わせること
により、より適切な刺激条件を設定しうる可能性がある
が、本発明である巨核球増殖因子及び、ＦＬＴ３リガン
ドを含む培地で培養すること、さらに幹細胞因子を添加
した培地で培養することで、治療上有用な巨核球前駆細
胞を効率よく生成し得ている。造血因子の添加方法は、
培養途中で造血因子を追加することもできれば、遠心機
などで培地を交換することもできる。

【００１１】本発明によれば、添加するサイトカイン種
が少ないこと、また、添加する時期を調整し添加量を最
低限度に減らすことは、産業上有効な要件であり、より
安全かつ実用的な効果を生み出し、特に低価格で培養シ
ステム、培養した細胞製剤を提供しうる可能性を示して
いる。細胞製剤とは、細胞を含む懸濁液、遠心等により
濃縮したペレットなどの細胞塊、細胞懸濁液の凍結保存
物を示す。こうした細胞製剤は、医療機関のみならず、
細胞処理専用の外部施設で製造されうる。

【００１２】使用する培地は、ヒトまたは、動物由来血
清を添加しうるが、より好ましくは無血清の培地も使用
しうる。例えば通常使用しうる動物細胞用の基本培地の
他、無血清培地に向けた添加組成物としてコルチコステ
ロイド、トランスフェリン、インシュリン、コレステロ
ール、エタノールアミン、及びヒトのアルブミンなどが
挙げられる。

【００１３】本発明によれば、巨核球の前駆細胞の集団
を容易にｉｎ ｖｉｔｒｏで作ることが可能となる。該
細胞は骨髄、臍帯血又は末梢血のいずれからでも生じ
る。骨髄液および末梢血は正常な供与者から得ることが
できる。ここでいう造血未分化細胞とは、骨髄液、臍帯
血、末梢血などから得た多分化能を有する造血多能性幹
細胞、造血コロニーを形成しうる未分化細胞を総称して
おり、ＣＤ３４陽性細胞表面抗原を有する造血細胞を含
む。末梢血においては、ＣＤ３４陽性細胞の数は全白血
球の約０．１％しか構成しない。臍帯血においては、Ｃ
Ｄ３４陽性細胞は全白血球の約０．１〜１％を構成す
る。典型的には正常な骨髄は１〜２％のＣＤ３４陽性細
胞を含むのみである。白血球は勾配による遠心分離のよ
うな標準的な方法によって骨髄又は臍帯血又は末梢血か
ら分離される。〔Ｇｅｉｇｙ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
Ｔａｂｌｅｓ，Ｖｏｌ ３，Ｃ．Ｌｅｎｔｎｅｒ，ｅ
ｄ．Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅ
ｒｌａｎｄ，（１９８４）〕。ライト−ギムザ染色法の
解析では、骨髄内の成熟した巨核球は該白血球集団の約
０．０５％しか構成していない一方、巨核球系細胞に特
異的な免疫染色は、約０．２％まで標識した。健康な個
体内では、巨核球の前駆細胞は該骨髄内で完全に分化す
るので、前駆細胞は正常な血液中には極く稀にしか発見
されない。分離後、白血球は無血清培地において直ちに
培養してもよい。好ましくは、造血未分化細胞を、該白
血球集団から単離する。造血未分化細胞の単離は、ＣＤ
３４陽性に特異的な抗体へのそれらの結合、それに続く
磁気ビーズを用いた抗体結合幹細胞の分離に基づくもの
であってもよい〔Ｈａｒｄｗｉｃｋ，Ｒ．Ａ．，ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒ．１，３７９−３８
６（１９９２）〕。単離された造血未分化細胞は、５，
０００乃至５００，０００細胞／ｍｌの密度範囲、好ま
しくは１０，０００細胞／ｍｌで培養中におかれる。い
かなる組織培養フラスコ又はバッグ又は中空糸モジュー
ル又はフィルターモジュールが、静的又は灌流培養シス
テムのいずれにおいても使用しうる〔Ｋｏｌｌｅｒ，
Ｍ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，ＢＩＯ／ＴＥＣＨＮＯＬＯＧ
Ｙ，１１，３５８−３６３，Ｅｍｅｒｓｏｎ，Ｓ．Ｇ，
ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ ＷＯ９２／１１３５５〕。静的
な培養システムが使用された場合、該細胞は栄養物を補
給し、老廃物を除去するために５日乃至７日の間隔で培
地を供給される。細胞は７〜１４日、より好ましくは９
〜１２日間培養される。この時間において、該細胞懸濁
液は血小板減少症の治療において使用されるに適した巨
核球前駆細胞の集団を含む。

【００１４】フローサイトメーター分析が細胞表面抗原
による標識に基づいて細胞表現型を決定するために行わ
れた。ＣＤ３４陽性細胞は、造血未分化細胞を示し、Ｃ
Ｄ６１陽性細胞は、巨核球系細胞を示す〔ＣＤ分類ハン
ドブック、癌と化学療法社〕。フローサイトメーターに
よる分析によれば、成熟した巨核球は、細胞質の増大、
多核化を呈することから容易に成熟度を解析することが
可能である。造血未分化細胞の主たる形質は、ＣＤ３４
陽性ＣＤ６１陰性である。造血未分化細胞は、本発明に
より処理することにより効率的にＣＤ３４陽性ＣＤ６１
陽性の巨核球前駆細胞への分化を促進し、さらにＣＤ３
４陰性ＣＤ６１陽性の未成熟巨核球系細胞が増幅しう
る。ＦＬＴ３リガンド及び巨核球増殖因子により巨核球
前駆細胞への分化を促進し、幹細胞因子と巨核球増殖因
子により該巨核球前駆細胞の増殖を促進して、未成熟な
巨核球が増幅される。

【００１５】本発明により生産される細胞懸濁液は、多
種の血液細胞の前駆細胞を含むと共に、巨核球前駆細
胞、未熟な巨核球を含むが、さらに多種の造血因子を含
めて培養することで、必要とされる巨核球系の細胞への
分化が促進される。また、本発明による巨核球系細胞懸
濁液中の細胞は、血小板放出をし得ない細胞片ＰＰＦ
（Ｐｒｏｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｆｏｒｍ
ａｔｉｏｎ）が生成しないこと、また、成熟巨核球と異
なり多核化の程度が低いことから、生体に移植した際に
血栓を形成しにくい利点がみられる。

【００１６】本発明の巨核球前駆細胞の濃縮された細胞
懸濁液は、癌治療によって生じたものに加え、さまざま
なタイプの血小板減少症に効果的な治療を可能にする。
このため、ここに与えられる細胞懸濁液は、血小板減少
症の治療において血小板注入に置き換わる可能性も示唆
するものである。該上記の細胞集団は、化学療法等の後
の患者に投与された場合、該投与された細胞は、最終的
に血小板を生成する巨核球を生成するためにｉｎ ｖｉ
ｖｏでさらに分化することが期待される。さらにフィブ
リン凝塊アッセイの中においた時、該巨核球前駆細胞は
成熟した巨核球を形成しそして血小板を放出することが
観察される。これらのアッセイからの結果は、該無血清
培養からの細胞はそれらがｉｎ ｖｉｖｏの条件に帰さ
れた後でもさらなる成熟をすることができることを示唆
する。

【００１７】

【発明の実施の形態】以下の実施例は本発明を説明する
ものであって、その範囲を制限するものではない。

【００１８】

【実施例１】臍帯血をフィコールパック（ファルマシア
社）で分画し、単核細胞層を回収し、５％牛胎児血清を
含むＲＰＭＩ−１６４０培地（ギブコ社）で洗浄した。
得られた細胞を培養用プラスチックシャーレに蒔き、細
胞培養用インキュベーター（３７℃、５％二酸化炭素ガ
ス）で１時間培養し付着細胞を除いた。得られた細胞懸
濁液に、ダイナビーズ（ダイナル社）抗ＣＤ３４抗体デ
タッチャブルビーズを加え、氷上で３０分間反応させ
た。このダイナビーズの分離操作は、付属のマニュアル
に従った。得られたＣＤ３４陽性細胞の懸濁液は、牛胎
児血清を最終濃度約１５％、ディメチルスルフォキシド
（ＤＭＳＯ）を最終濃度１０％になるように添加し、バ
イアルに小分けし、凍結を行った。

【００１９】分離したＣＤ３４陽性細胞率をフローサイ
トメーターで測定した。方法は、細胞の一部にフィコエ
リトリン（ＰＥ）標識抗ＣＤ３４抗体（ベクトン社）を
添加して、氷上で約３０分染色し、細胞を洗浄後、ＦＡ
ＣＳキャリバー（ベクトン社）で測定した。ＣＤ３４細
胞の陽性率は、８０から９０％程度であった。

【００２０】

【実施例２】実施例１で凍結した細胞を解凍液（２％デ
キストラン（ミドリ十字社）及び１０％牛胎児血清を含
むＲＰＭＩ−１６４０培地）中で解凍、洗浄し、２から
２．５ｘ１０⁵ ／ｍｌの密度になるようＸ−ＶＩＶＯ
１０培地（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ社）で懸濁し
た。これらを無菌の試験管（ファルコン社、製品番号２
０５７番）に分注した。第一実験区として、この細胞懸
濁液に対し二段階の培養を施した。第一段階の培養に使
用した刺激因子として、ＦＬＴ３リガンド（１００ｎｇ
／ｍｌ、Ｇｅｎｚｙｍｅ社）、及び巨核球増殖因子（５
０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、該細胞懸濁液を細胞用培養器
（タバイ社、５％炭酸ガス、３７℃）で５日間培養し
た。

【００２１】引き続き第二段階の培養を行った。その方
法を以下に示した。培養後の細胞を回収し、遠心後、添
加剤を加えたＸ−ＶＩＶＯ １０培地（以下Ｘ−ＶＩＶ
Ｏ１０改変培地と呼ぶ）で２から２．５ｘ１０⁵ ／ｍｌ
の密度になるように調製した。添加剤は、インシュリン
（最終濃度１０μｇ／ｍｌ、シグマ社Ｉ６６３４番）、
トランスフェリン（最終濃度１０μｇ／ｍｌ、シグマ社
Ｔ４７７８番）、低密度リポプロテイン（ＬＤＬ、最終
濃度５．５μｇ／ｍｌ、シグマ社Ｌ５４０２番）、２−
メルカプトエタノール（２−ＭＥ、最終濃度４．３ｘ１
０^-5Ｍ、メルク社）を使用した。培地の交換後は、第２
段階の刺激因子としてＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）、巨核
球増殖因子（５０ｎｇ／ｍｌ）を添加した。さらに５日
間細胞用培養器で培養した。

【００２２】細胞を回収後、遠心機にて細胞を洗浄し、
該細胞を５％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地
（ギブコ社）５０μｌに懸濁し、フルオレセインイソチ
オシアネート（ＦＩＴＣ）標識抗ＣＤ６１抗体（ダコ
社）を２μｌずつ添加し、氷上で３０分間染色を行っ
た。遠心機で２回洗浄後、ＦＡＣＳキャリバー（ベクト
ン社）でＣＤ６１の染色程度を測定した。基準となる対
照として刺激因子を添加しなかった系、刺激剤の対照と
して第二実験区として第一段階、第二段階の培養共に刺
激因子に巨核球増殖因子（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＳＣＦ
（５０ｎｇ／ｍｌ）のまま添加し続けた系、さらに、第
三実験区として、第一段階、第二段階の培養共に、刺激
剤としてＦＬＴ３リガンド（１００ｎｇ／ｍｌ）、及び
巨核球増殖因子（５０ｎｇ／ｍｌ）添加で培養した系を
行った。

【００２３】その結果刺激剤を添加していない対照に対
し、培養後のＣＤ６１陽性細胞の存在率は、第一実験区
１４１．２倍、第二実験区１１．８倍、第三実験区６
７．１倍であった。従って、途中で刺激因子を切り換え
ることにより、高倍率で巨核球系細胞を増殖させること
を示した。

【００２４】

【実施例３】実施例１で凍結した細胞を解凍液（２％デ
キストラン（ミドリ十字社）及び１０％牛胎児血清を含
むＲＰＭＩ−１６４０培地）で解凍し、洗浄後、２から
２．５ｘ１０⁵ ／ｍｌの密度になるようＸ−ＶＩＶＯ
１０培地（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ社）で懸濁し
た。これらを無菌の試験管（ファルコン社、製品番号２
０５７番）に分注した。第一実験区として、この細胞懸
濁液に対し、第一段階の刺激因子としてＦＬＴ３リガン
ド（１００ｎｇ／ｍｌ、Ｇｅｎｚｙｍｅ社）、巨核球増
殖因子（５０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、細胞用培養器（タ
バイ社、５％炭酸ガス、３７度）で５日間培養した。

【００２５】培養後の細胞を回収し、第二段階の培養を
以下の様に行った。遠心後、Ｘ−ＶＩＶＯ １０改変培
地で２から２．５ｘ１０⁵ ／ｍｌの密度になるように調
製した。培地の交換後は、第２段階の刺激因子としてＳ
ＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）、巨核球増殖因子（５０ｎｇ／
ｍｌ）を添加した。引き続き５日間細胞用培養器で培養
した。

【００２６】対照として、第二実験区は第一段階、第二
段階共に刺激因子に巨核球増殖因子（５０ｎｇ／ｍ
ｌ）、ＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）のまま添加し続けた
系、さらに、第三実験区は、第一段階、第二段階の刺激
剤にＦＬＴ３リガンド（１００ｎｇ／ｍｌ）、巨核球増
殖因子（５０ｎｇ／ｍｌ）添加のままで培養した系で行
った。それぞれ３検体以上の独立した実験で行った。

【００２７】培養後に一部の細胞を回収し、抗体による
標識を行い、細胞種の測定を行った。つまり遠心機にて
細胞を洗浄し、該細胞を５％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ
−１６４０培地（ギブコ社）５０μｌに懸濁し、ＰＥ標
識抗ＣＤ３４抗体（ベクトン社）１０μｌ、及びＦＩＴ
Ｃ標識抗ＣＤ６１抗体（ダコ社）２μｌを添加し、氷上
で３０分間染色を行った。冷生理食塩水で２回遠心機を
使用して洗浄後、ＦＡＣＳキャリバー（ベクトンディッ
キンソン社）でＣＤ３４及びＣＤ６１の染色程度を測定
した。

【００２８】その結果、巨核球前駆細胞を示すＣＤ３４
陽性ＣＤ６１陽性の細胞数は、培養前ではほとんど検出
できなかったのに対し、第一実験区７．４ｘ１０⁴ 個、
第二実験区３．２ｘ１０⁴ 個、第三実験区４．２ｘ１０
⁴ 個に増幅していることが示された。また、巨核球系細
胞であるＣＤ６１陽性細胞は、第一実験区１２．７ｘ１
０⁵ 個、第二実験区７．２ｘ１０⁵ 個、第三実験区９．
２ｘ１０⁵ 個であった。従って、途中で刺激因子を切り
換えることにより、高倍率で巨核球前駆細胞、及び巨核
球系細胞を増殖させることを示した。

【００２９】

【発明の効果】本発明の細胞製剤およびその製造方法
は、化学治療や骨髄移植に伴う血小板減少症、血小板減
少が原因と考えられる出血傾向を示す各種の疾患の治療
の際に有効な回復効果を示す同種造血幹細胞移植に有用
である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】あらかじめ巨核球増殖因子及びＦＬＴ３リ
   ガンドを含む培地で、造血未分化細胞を培養し、その後
   に造血因子を含む培地で培養することにより製造される
   ことを特徴とする巨核球前駆細胞を含む細胞製剤。
2. 【請求項２】造血未分化細胞が臍帯血由来である請求項
   １に記載の細胞製剤。
3. 【請求項３】請求項１または２に記載の細胞製剤の製造
   方法。