JPH0388897A - 洗濯に有用なリパーゼおよびクチナーゼ界面活性剤系と方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は洗浄に有用な酵素的洗剤系をａ、ｉｉａにする
方法、望ましい洗濯および洗浄用途を確認する予測法お
よびこれらに基づく成分に関連するものである。

（従来技術） リパーゼは微生物から高等真核生物に至る広汎な種類の
生物が天然に産生ずる酵素である。高等動物の組織にお
いて酸化を起こす脂肪酸は活性化され、酸化される以前
に遊離型（すなわち、非エステル型）でなければならな
い、そのため、ｍ胞内のリパーゼはトリアジルグリセロ
ールを加水分解し、遊離型の脂肪酸とグリセロールを生
成する１ａ能を持つ。

細菌リパーゼはエステル結合を切断する作用を持つポリ
ペプチドであるので１ｇｉ行的にグリセロールエステル
ヒドロラーゼ（ＥＣ３，１，１，３）と定義されている
。リパーゼは界面に対する親和性が高く、これはグロテ
アーゼおよびエステラーゼと異なる特性である。リパー
ゼが容易に吸着する界面は泊／水のそれである。

クチナーゼはクチンの加水分解を触媒するエステラーゼ
である１例えば、クチナーゼにより、菌類は感染の初期
段階でクチン障壁をえて宿主植物内に侵入する。数種類
のクチナーゼの一次相迫が比較されており、その保存性
は強いことが示されている。　Ｅｔｔｉｎａｅｒ、Ｂｉ
ｏｃｈｅｉｉｓｔｒ　　２６，００７８８３−７８９２
（１９８７）および５ｅｂａｓｔｉａｎら　、＾ｒｃｈ
、　Ｂｉｏｃｈｅｎ。

Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、　２６３±Ｑ、ｐｐ、７７−８５，１
９８８）　ＧＪ：螢光性Ｐ。

ｐｕｔｉｄａ　　（プティダ）株ではクチナーゼの産生
はクチンによって誘導されることを最近、見出している
。このクチナーゼは炭素原子数が４個から１６個の脂肪
酸のｐ−ニトロフェニルエステルの加水分解を触媒する
。

リパーゼは洗剤の成分として可能性があると長年、考え
られてきた。パンクレアチンの状態を取る初期のリパー
ゼ種油を洗剤処方に添加することがＲＯｈｌｌ　、Ｃｈ
ｅｌｌ、八ｂｓ、　　Ｉｎｔ、、　Ｐ２Ｏ４８（１９１
６）により示された。より最近では、ある種のシュード
モナスまたはクロモバクター菌から得られるリパーゼが
洗剤成分として有用であることが開示されている（　１
９８７年１１月１７日にＴｈａＩＩらに与えられた米国
特許第４，７０７，２９１号および１９８８年１月２０
日に発行された欧州共同体特許出願第２５３，４８７号
）。

リパーゼはアニオン性界面活性剤および非イオン性界面
活性剤により阻害されることが長年、−膜内に知られて
いる。リパーゼ活性は乳化剤などにより」二昇すること
が旧Ｉｔｓ、　Ｂｉｏｃｈ、　　６０　　Ｄｏ、　５２
９−５３４　（１９５５）および＾ｎｄｒｅらＪ、＾　
、　Ｂｉｏｃｈｅｎ。

、　２．　ｐｐ、　２１８−２２９　（１９８０）によ
り報告されている。

このような記載にもかかわらず、アニオン性または非イ
オン性界面活性剤を含む洗濯溶液にリパーゼを使用する
試みは大半が不成功に終わっており。

ｉｂ汚れを洗浄するためにリパーゼが有効に使用される
のは前浸漬（ｐｒｅｓｏａｋ）用途に限られてきた。

１９７６年４月１３日に発明者Ｓｔｅｗａｒｔらに与え
られた米国特許第３，９５０，２７７号には酵素リパー
ゼおよびナフタレンスルホン酸、エチレンジアミンのあ
る種のポリオキシアルキレン誘導体およびある種のアシ
ルアミノ酸塩から選択したリパーゼ活性化剤を使用する
プレソーク成分が記載されている。

リパーゼは完全処方の洗剤による従来の洗浄の前の長時
間の前洗い、言いかえるとプレソーク用途として、界面
活性剤を添加しない水溶液中で有効であることが見出さ
れている。このような条Ｃト下でのリパーゼは天然の油
（トリグリセリド）汚れを除去するのに有効であった。

しかし、洗濯溶液の洗剤処方にリパーゼを使用する試み
が多数行なわれたにもかかわらず、洗浄の点での利点は
見出されなかった。

最近、洗浄溶液中の洗剤による影響が少ない特別のリパ
ーゼを発見する試みがなされている。

１９８８年３月２日に発行された欧州共同体特許出頭第
２５８，０６８号にはアニオン性界面活性剤と共存でき
洗剤添加剤として有効とされるＴｈｅｒＩＩＯＩＩｙＣ
１ｌｉＳ属のリパーゼが報告されている。　１９８８年
２月２０日に発行された日本特許出願第６３０３９５７
９号にはシュードモナス属から得られた斬新なリパーゼ
ではアニオン性界面活性剤による阻害はわずかにずぎす
。

また非イオン性界面活性剤によって活性化されると述べ
られている。

要約すると、特定の界面活性剤（洗剤処方中に有効量、
含まれる場合）は一部のリパーゼのリパーゼ活性を１１
を害することは一般に認識されてきたが、洗濯および洗
浄処方中におけるリパーゼの共存性または非共存性に付
いての明白な知見は得られていない、その結果、リパー
ゼを含む洗濯溶液では浸漬を時間的に延長することが必
要になる傾向がある。

（発明が解決しようとする課題およびその手段〉ａ物に
付いたトリグリセリドを加水分解できる酵素および酵素
的加水分解の洗濯溶液中の界面活性剤による阻害を阻止
する添加剤を含み、それによって織物に付いたトリグリ
セリドのしみまたは汚れの加水分解を起こさせる界面活
性剤洗濯溶液の中で有用な酵素成分を得ることが本発明
の目的である。

洗濯溶液中におけるリパーゼの共存性または非共存性を
決定し、それによって、トリグリセリドの加水分解のた
めに浸漬を延長したり、高温にすることを必要としない
で洗濯溶液に使用できるリパーゼおよび／またはクチナ
ーゼを含む界面活性剤系を処方できる方法を得ることが
発明のもう一つの目的である。

本発明の一面では、洗濯用途のための酵素成分は洗濯溶
液中の織物の天然の油汚れを加水分解できる酵素および
洗濯溶液中の界面活性剤による加水分解阻害を回避する
加水分解活性化手段からなる。したがって、酵素による
加水分解の発現は臨界比を越えるか否かに依存している
。このような酵素は洗濯溶液における界面活性剤に対す
る油のモル比がこの出願明細書でｒ臨界比ｊと呼ぶある
鎖を越える場合にのみ作用を発揮し、油汚れを加水分解
することが見出されている。各酵素の臨界比の値は使用
する界面活性剤によって変化する。

加水分解活性化手段は成分が臨界比を越えるように使用
され、それによって酵素が作用を発揮し。

油汚れを加水分解する洗濯溶液中における界面活性剤に
対する油の比率を変化させる。

別法として本発明の別の実態例では洗濯溶液中における
界面活性剤の臨界比を変化させる加水分解活性化手段が
得られる。

本発明による成分に含まれる酵素（界面活性剤に対する
抽の比率または界面活性剤の臨界比のいずれかを変化さ
せるための加水分解活性化手段と配合する）はトリグリ
セリドのような油汚れ全体の少くとも約５ｆｆｉＪ１％
を約２５℃の洗濯溶液中で約１４分から１５分以内で加
水分解するに充分な加水分解活性を界面活性剤洗濯溶液
中で示す。

本発明に使用するに特に望ましい酵素はＰｓｅｕｄｏｎ
ｏｎａｓ　ｐｕｔｉｄａ　（シュードモナス・ブティダ
）（以後、　　”Ｐ、　Ｄｔｌｔｉｄａとする）ＡＴＣ
Ｃ５３５５２からＱｌｔｌｆｉすることが可能である。

本発明の別の面では、リパーゼまたはクチナーゼの阻害
を低下させる界面活性剤系を選択する方法がリパーゼま
たはクチナーゼ、界面活性剤および油を含む水溶液を得
、水溶液中における界面活性剤に対する油のモル比を計
算し、さらに計算したモル比をあらかじめ定められてい
るモル比と比較することによってリパーゼまたはクチナ
ーゼが界面活性剤の存在下で加水分解活性を示すか否か
を判定するｎ段階からなる。

本発明の他の面および利点は次の説明を読むことによっ
てこの分野の技術の当業者には明らかとなる。

（実施例および発明の効果） 洗濯溶液で洗浄するＱ物には身体の油（皮脂）で汚れた
衣服および食品および調理用油で汚れたリンネル製品が
ある。皮脂による汚れおよび調理用油にはモノ、ジおよ
びトリグリセリドが含まれているので、潜在的にリパー
ゼによって加水分解することが可能である。

リパーゼ活性を持ち、　Ｐ、　ｐｕｔｉｄａ　ＡＴＣＣ
５３５５２から単離することが可能であると報告され、
最近。

発見された酵素のアミノ酸配列の分析によって。

この酵素に対するヌクレオチド配列とｃ、　ｃａｐｓｉ
ｃｉについて最近、決定されたクチナーゼ遺伝子のヌク
レオチド配列間にはかなりの相同性があることが示唆さ
れる。１９８８年５月２５日に発行された発明者旧ｅｒ
ｓｅｌ′ｌａらの欧州共同体特許出願節２６８，４５６
号とＥｔｔｉｎｇＱｒらのＢｉｏｃｈｅｌｉｓｔｒｙ、
　　２６．　　Ｄｏ、　　７８８３−７８９２（１９８
７）を比較）、クチナーゼとリパーゼ間には関連性があ
るため１本発明において関心の対象となる酵素には水溶
液中で織物のトリグリセリドを加水分解することができ
、以後１時にグリセロールエステルヒドロラーゼと記載
することもあるクチナーゼおよびリパーゼ双方が含まれ
る０本発明において有用な酵素は通常、ある種のシュー
ドモナス、クロモバクター、フザリウムまたはアスベル
ギルス株から得られる。例えば１本発明で示ず酵素には
Ｐ、　ＤＬＪｔｉｄａ＾ＴＣＣ５３５５２，Ｐ、　ｓｐ
（Ａｍａｎ。

６８Ｓ）、　　　Ｐ、ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ（八１ｌ
ａｎｏ　Ｐ）および＾ｓｐｅｒｇｉ１ｉｕｓ　０ｒｙＺ
ａｅ（リボラーゼ〉に含まれる（または得られる）Ｋｉ
伝子が表現する酵素がある０日本の東洋醸造、米国の米
国バイオケミカル社、オランダのＤｉｏｓｙｎｔｈ社は
Ｃｈｒｏｉｏｂａｃｔｅｒ　ｖｉｓｃｏｓｕｎから得ら
れたリパーゼを販売している。　１９８７年３月　３日
に発行され出頭者がノボインダストリーの欧州共同体特
許出願節０．２１４，７６１号にはｒｕｓａｒｔｕｍ　
ｏｘｙｓｐｏｒｕＩＩから得られたリパーゼが記載され
ている。上記以外の菌株もリパーゼを産生ずることが知
られているか、または報告されている０例えば、　１９
８７年２月１２日に発行された出願者がＧ１５ｔ−Ｂｒ
ｏｃａｄｅｓＮ、Ｖ、　ノＰＣＴ／！４Ｌ８６１０００
２３ニハある種ノアシネトバクターを含む菌株が記載さ
れている。上記酵素を表現する逍伝子は表現性を高度化
するためにＥ、　ｃｏｌｉのような別の微生物でクロー
ン化できることを理解する必要がある。

臨ＪＬ比 本出願で述べる臨界比を用いることによって。

界面活性剤洗濯溶液では、界面活性剤存在下における。

エステル結合を持つ油の特異的グリセロ−エステルヒド
ロラーゼによる加水分解は関心の対象となる溶液中の界
面活性剤に対する油の比率に依存することを発見した。

関心の対象となる溶液中における界面活性剤に対する抽
の比率を以後。

ｒ系における比率」と呼ぶこともある９便宜上。

系における比率および加水分解を開始させるに必要な比
率（ｒ臨界比」と呼ぶ）の双方を水溶液全体における界
面活性剤に対する油のモル関係に基づいて計算し１表現
する。系における比率は特定の界面活性剤に関連する基
’Ｊｌ（油）の関係を絶対的なモル比に基づき定義する
。特定の界面活性剤に関連する臨界比において、また基
質のモルｖＡ係以上では、酵素が活性化し、言いかえる
と作用を発揮し、その結果、加水分解が開始される。す
なわち、洗浄用水溶液のような水系溶媒におけるいずれ
の成分の濃度も重要ではない、これは水系溶媒において
希釈されても、二成分間のモル関係は一定だからである
。

いずれの理論にも制約されることなく、基質が界面活性
剤によって促進されるある様式で変化しない限り、酵素
が基質に結合するのは困難であると推定される。すなわ
ち、基質が酵素によって加水分解可能となるためには基
質と界面活性剤間にある複合体が形成されることが必要
であろう。

次に述べる実施例ではリパーゼおよびクチナーゼの種類
が異なると、その臨界比は関連はしているが、異なるこ
とが示され、この臨界比を出願者は上記のモデルによっ
て実験的に決定した。臨界比モデルの一つの重要な点は
酵素または界面活性剤の量よりはむしろ、界面活性剤に
関連して存在する基質蓋が強調されていることである。

対照的に、先行技術では、大量の酵素または界面活性剤
を使用するか、または上記物質のいずれか、または双方
で反復試験を行えば洗浄性能が向上すると仮定されてい
る。このような先行技術の知見または仮定にしたがうと
大１の醇素、界面活性剤、または双方を浪費することに
なる。

以後、考察する各種界面活性剤の分子Ｊｉ（および典型
的梢３！りおよび油を下記に記す。

北〕Σ物 界面活性剤ＳＯ３（ドデシル＆Ｅ酸ナトリウム）界面活
性剤Ｃｌ２ＬＡＳ 界面活性剤Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９ 界面活性剤Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３３ 界面活性剤スルホン化ＪＬ８ＱＸ 界面活性剤Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００ 界面活性剤Ｃ１６ＤＡＰＳ 基質トリオクタノイン 基質トリオレイン 名」Ｌ鰺 生ヱ羞 ８８ ６２ ９６ ４４ ２５ ２４ ９２ ７０ ８４ 零モル濃度の計算に使用し、また界面活性剤が純枠であ
るとして計算した。

一般的な界面活性剤の典型的な梢遣は次の通りである。

ＤＳ １ Ｃ１２Ｈ２５−φ−８０３ Ｎ　ａ　＋ ｅｏｄｏＩ ５−９ （ＯＣ）■　２　ｏ　）□　２　）　　９−　ト■ｅｏ
ｄｏＩ ２３−６．５ （Ｃ１２Ｃ１３）　（Ｈ２ｅ、　　Ｈ２７）（ＯＣＲ２
ＣＨ２）　６．５−Ｈ 匹Ａ」と上止ｌすｌし Ｃ９ｔ　　ｔ　　　　　１　９　　　　２　３　　　　
０　　　（ＣＨ２ＣＨ２０）ｆ ４．５　　（ＣＨ２ＣＨ２０）１．５−（ＣＨ２ＣＨ２
０）　　　４　、　　５　ＨＨ３ Ｔｒｉｔｏｎ　　Ｘ−１００ Ｃ８Ｈ１７−φ−（ＯＣＨ２ＣＦＩ２）０−Ｈ Ｃ１６０＾ｐｓ ＣＨ３ ■ ■ ＣＨ−Ｎ−（ＣＨ２） １６　３３ ３　　Ｓ　Ｏ３０ Ｈ３ ｅｏｄｏ１ ５−３３ （ｃ　　　−ｃ　　　）（Ｈ２Ｓ−Ｈ３，）−１２１５ １ １ グリセロールエステルヒドロラーゼによる基質の加水分
解の開始は系における比率に対する依存性が強いが。

基質 （トリグリセリド） または界面 活性剤のいずれの濃度にも依存しない。

グリセロールエステルヒドロラーゼによる基質の加水分
解に対する系における比率の影響の実例を表ＩＡ４こ示
した。このデータでは、２種の異なる界面活性剤濃度に
おける酵素活性を多数の異なる濃度のトリオクタノイン
について測定した０表１へのデータに使用した界面活性
剤は時にＣ１６０ＡＰＳ（ＣａｌｂｉＯＣｈｅ１ｍ社市
販の”Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ　３−１６”）と略する
双性イオン性塩である。

（１１Ｎ） 濃度（紹） １臨界比を越えていることを示す。

表ＩＡのデータから分るように、系における比率に依存
し、また界面活性剤の濃度には依存しないで酵素活性が
なくなるか（すなわち、酵素の作用が消失する）加水分
解活性が観察されなくなる。

このデータはトリグリセリドの絶対濃度および界面活性
剤の絶対濃度のいずれもが酵素が活性であるか否かを決
定しないことを示している。酵素活性の速度論的プロフ
ィールを最も良く表現しているのは実際には界面活性剤
に対する油の比率である０表１八で検討した酵素につい
ては、この特定の双性イオン性界面活性剤に関連する臨
界比（すなわち、ｐ素活性が発揮される系における比率
）の値は１０から２０の範囲である。系における比率が
１０以下では酵素は不活性である。系における比率が２
０以上では酵素は活性である。

Ｐ、　ｐｕｔｉｄａ＾ＴＣＣ５３５５２の酵素が異なる
臨界比を示す別の界面活性剤、オレイン酸ナトリウムを
用いた。上記現象の別の実例を表１８に示した。

表ＩＢのデータに使用した基質はトリオレインである。

基質濃度（表には示していない）を変化させ１表に示し
た系における比率を得た。オレイン酸は加水分解反応の
生成物であるので９表ＩＢに要約した実験で使用した界
面活性剤、オレイン酸ナトリウムは興味深い。

蟲幽 レン　１ムｌ１ｌＨ匙赳出捷　装態 ０．３　　　　　　　　　　　　　　　１　　　　　　
　　　００．３　　　　　　５　　　　０ ０．３　　　　　　１０　　　　０ ０．３　　　　　　２０　　　　６０ ０．３　　　　　　３０　　　　９０ 表Ｉ＾および１Ｂに述べた酵素活性の測定実験は次のよ
うにして行った。

（ｉ）試料の調製： 必要量のトリグリセリドをＨｅｔｔ　ｌｅｒ天秤（型式
番号　ＡＩＥ１６３）上で適当な大きさのビーカ中で秤
量した。あらかじめ調製してあった界面活性剤保存水溶
液から対応する量の界面活性剤をトリグリセリドに加え
た後、トリグリセリドと界面活性剤を手動で混合した０
次にこの試料の重量を二回蒸溜水を用いて必要量に調製
した。酵素活性を測定する前に資料の乳化を超音波袋２
　（Ｂｒａｕｎ−ＳＯｎｉｃ型式２０００）を用い、水
中で約２分間１行った。

（ｉｉ）酵素活性測定： 酵素活性の測定はエマルジョン中のトリグリセリドの肺
素的加水分解による酸の遊離速度を測定することによっ
て行った。測定は調製したエマルジョン１０１１１にリ
パーゼ約２ｐｐｎ＋を加えることによって開始した。遊
離した酸はＲａｄ　ｔｏａｓｔｅｒ　ｏｆｔ−スタット
（型式番号ＡＢυ８０）を用い、終点をＤＩ＋１０とし
て自動滴定によって測定した０反応の最初の５分間に初
期速度を測定し１反応速度を滴定した１１＋のμｍｏｔ
数／分・ｎｇＥとして報告した。酵素活性は時に油全量
に対する１４分間に加水分解された量の百分率で報告し
である。これらの実験においては反応を１４分間９行な
わせ１滴定した酸の量を記録した０次に抽（トリグリセ
リド）全１に対する加水分解された貝の百分率をトリグ
リセリドの各当量について３当量のオレイン酸が生成す
ると仮定して理論的に計算した値で測定値を割ることに
よって計算した。全ての測定は周囲温度で行った。

水溶液における界面活性剤に対する油の臨界比に対する
加水分解の発現の依存性は表ＩＡおよび表１８のデータ
に使用した特定のグリセロールエステルヒドロラーゼに
特異的ではない、むしろ、原則は他のグリセロールエス
テルヒドロラーゼについても一般的であることが見い出
された。このことは表１１−Ｖに示した０表ＩＩ−Ｖに
は各種の非イオン性およびアニオン性界面活性剤および
数種類の異なる酵素についての臨界比を示した（基質は
トリオクタノイン）０表ＩＩ−Ｖに示した各種の酵素は
高濃度の界面活性剤でも検討した結果、系における比率
に対する依存性が確認された。

患Ｕ゛ （Ｐ、　ｐｕｔｉｄａ　ＡｒＣＣ５３５５２から単離可
能な酵素〉表ＩＩＩ 表■い脚注３に述べた。

表■ （西がμ粕閣喝、鳩閣が市販、　Ｐ、　ｓｐから単離可
能〉紋 （酵素リボラーゼ、ノボインダストリーが市販、＾、　
ｏｒｙｚａｅがら単離可＊＞表１−Ｖから分るように、
゛特定の酵素についての臨界比は界面活性剤の独自性に
依存する。

次の表Ｖｌ−ＩＸは加水分解が基質の種類にも依存する
ことを示している０表Ｖｌ−ＩＸのデータは油として（
表１−Ｖにおけるトリオクタノインではなく）トリオレ
インを使用して収集した。

去■ ’５Ｏ３ ２Ｃ１２ｔＡＳ ”１ｌｅｏｄｏｌ　２５−３３ ’Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９ ５スルホン化−Ｌ−８０Ｘ ９表■＾の脚注３に述べた。

表Ｖｌｌｌ （酔素へｍａｎｏ６８Ｓ） ２Ｃ１２ＬＡＳ ３Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３Ｓ ’Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９ 表Ｖｌｌ ’５Ｏ３ ２Ｃ１２ＬＡＳ ３Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３３ ＄表１納脚注３番ａパた。

去セ （酵素リボラーゼ〉 上記のデータは「表の要約１によって要約されよう、こ
こでは“中子°°は臨界比がｏ、ｏｉ−ｏ、ｉ　。

“十゛は臨界比が０．１−１．０．　　“０”は臨界比
が１．０−１０、また−°゛は臨界比が１０−１００で
あることを意味する。

表による要約 ＮＤ−未測定 （基質トリオレイン） 吏批北ま 検討した４種の酵素（表１−ＩＸ）全てについて。

各界面活性剤の臨界比が明らかにされた。これらの界面
活性剤は市販の洗剤成分中で最も一般的に使用されてい
る界面活性剤の一部である。上記界面活性剤成分は洗濯
溶液に溶解する場合に（７２リツトルの洗浄用溶液に対
する平均負荷及が２−３ｋｉＪと仮定して）界面活性剤
濃度の範囲が約０．２ｍＭから約１．５ｎＨとなる量で
使用される米国における洗濯用途に通常、推奨されてい
るものである。

家庭における洗濯の対象となるａ物の油汚れの平均量は
ａ！ｉｋ１００ｇ当たり油３００ｍｇと推定されている
（Ａｎｄ　ｒｅｅら、　　Ｊ、　　ＡＤＤ、　　Ｂｉｏ
ｃｈｅｌｌ、、　　２．　　ｐｐ、　　２１８−２２９
（１９８０））、このことは上記に示した比率依存性に
基づけ゛ば、（洗濯溶液中の界面活性剤の実際のモル数
に対する実際の油濃度の）使用比率は酵素活性が発揮さ
れる臨界比より低いので大半の市販洗剤に含まれるリパ
ーゼでは洗浄上の利点がほとんど、あるいは全く得られ
ないことを示している。

このような状況はヨーロッパおよび日本についても同様
である。なぜならば、織物の負荷量、洗浄用溶液および
洗剤推奨使用法は米国と異なるが。

使用比率は通常１日本については約０．６未満であり、
ヨーロッパについては約０．４未満だからである。

すなわち、洗剤推奨使用量に基づけば、また各種の洗剤
成分および界面活性剤の分子量を考慮すると、最も一般
的な洗剤についての系における比率は通常、１未満であ
り、より通常的には約０．２−０．６である（使用比率
の計算においては、溶液全体の濃度を仮定し、また界面
における影響の可能性を無視した。）シかし１表１ｌ−
ＩＸのデータから分るように、（油をトリオクタノイン
として）本発明で検討した一般的な界面活性剤の臨界比
は一般に約１より大きい、使用比率が臨界比より低い場
合の性能では、洗濯溶液にリパーゼを含める試みは一般
に無効であった。

洗濯のための通常の洗剤成分はビルグー塩のような種々
の添加剤を含んでいる。洗剤に一般に使用されている添
加剤は使用濃度において臨界比にそれほど影響しないこ
とが見い出された（データは示していない）。

臨界比が異なる界面活性剤を配合した場合の臨界比は配
合剤中の個々の界面活性剤のそれとは異なる０本発明を
実施することにより、界面活性剤を混合して配合界面活
性剤の臨界比を個々の臨界比の中でより低い値以下にす
ることができる。このことについては、以下においてさ
らに説明する。

従来の洗剤成分の一つはＮｅｏｄｏｌ　２５−３３とＣ
ｌ２Ｌ八Ｓの混合物である（モル比　１：０．４）、こ
の従来の洗剤成分は洗剤溶液にリパーゼを含めようとす
る以前の試みが困難であることを実際に示している０表
Ｖｌの洗剤成分中の界面活性剤成分についての適切なデ
ータを検討することによって、臨界比は使用比率よりは
るかに高いと結論できよう、この結論は表Ｘのデータが
示すように織物試料についての試験および洗濯機を使用
する試験を実施した場合に不実であることが分る０表Ｘ
での溶液には従来の洗剤または従来の洗剤に＾ＴＣＣ５
３５５２酵素を添加したものを含めた。

郵 表Ｘのデータが示すように、酵素を添加した洗剤成分の
汚れ除去値は酵素を添加しない洗剤成分での汚れ除去値
と統計的に変わらない、使用比率を計算することによっ
て、使用比率が臨界比測走値である１０−２０より低か
ったことが示され、したがって酵素が不活性であらたの
である。

既に記載されているように、汚れ除去率は“％５ｎ（Ｅ
）”と呼ぶ汚れ除去尺度で測定した。この尺度は汚れの
付いた。処理済み試験試料の外見の変化と最大限の変化
との比率を表現する尺度である。

％５Ｒ（Ｅ）の値は次のように計算する：△Ｅ　　　−
ΔＥ Ｓ　　　　　　　ＯＷ ％ＳＩｌ［Ｅ）＝ ×　１００ ΔＥ。

ここで、Ｅ　およびＥ　はＣＩＥ　Ｌ　”　ａ　’　ｂ
　”色Ｓ　　　　　　　　　ＯＷ 彩空間（ｃｏｌｏｒ　５ｐａｃｅ）における距離であり
、（［ＨｕｎＬｅｒ、　　Ｔｈｅ　　Ｍｅａｓｕｒｅｍ
ｅｎｔ　　ｏｆ　　Ａｐｐｅａｒａｎｃｅ（Ｎｅ＊Ｙｏ
ｒｋ：Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　１９７
５）　ｐｐ、　３０２−３０３を参照１１次の式によっ
て得られる： ここで、下付き文字Ｏ，ＳおよびＷはそれぞれ最初の汚
れの付いていない未処理試験試料、汚れの付いた未処理
試料および汚れの付いた処理試料を意味する。

“ＬＳＤ“と呼ぶ統計的検定は分散分析において分散を
全ての試験群から推定する二標本を検定法を用いて９５
％信頼度で統計的に有意とする群内平均間の最小差に関
連する。

以上を簡潔に要約すると、洗剤溶液中でｍ物の天然の油
汚れを加水分解できる酵素では加水分解能の発現につい
て洗剤溶液中の界面活性剤に対する抽の使用モル比が臨
界値に対する依存性を持つことが示された。この臨界比
は洗剤溶液中の界面活性剤の種類（および洗剤溶液中の
油の種類）によって変化する。しかし、最も一般的な洗
剤の使用比率は通常は１未満であり、また検討された一
般的な界面活性剤の臨界比は一般に約１より大きいので
、リパーゼは概して不活性である。

しかし１本発明では、界面活性剤に対する油の比率を変
化させたり、界面活性剤の臨界比を変化させたりする加
水分解活性化手段によって酵素による加水分解を開始さ
せる方法を発見した０次に臨界比を変化させる方法の実
施例をさらに完全に述べる。また１本発明の成分は１種
類以上のリパーゼまたはクチナーゼで処方すると利点が
得られる。

曲を添加し。

酵素が油汚れを加水分解するよう に洗剤溶液中の界面活性剤に対する油の比率を増加させ
ることによって、界面活性剤存在下においてヒドロラー
ゼの作用を発揮させることができる。

この添加油（洗浄される汚れた織物にみとめられるトリ
グリセリド以外の油であり、油汚れと共に臨界比の計算
において分子となる抽成分を構成する）は酵素の基質で
ある必要はない、酵素の作用を発揮させる手段として添
加油を用いれば添加しない場合に考えられる濃度より低
濃度の油汚れを洗濯中に除去することもできる。

望ましい添加油（基質ではない）はヘキサデカンおよび
オクタデカンである。基質で名よない油の添加について
は表ＸＩのデータによって示した。

トリオレイン −」埜り一 〇３ １．５ ０．３ 郵Ｉ ヘキサデカン　　スルホン化−Ｌ−８０Ｘ　　系Ｅよ社
たＺ逓丑　　酵た活性−Ｕ曵−Ｕ斐Ｌ− ０，３１０ ０，３５１５ １，２０，３５８ １表■の脚注３に述べた。

表×１のデータから分るように，トリオレーン濃度を０
．３１１ＩＨ，系における比率を１とする場合にはヒド
ロラーゼ活性は認められない，トリオレーン濃度を１．
５１Ｈとすると系における比率は５となるが、この場合
にはヒドロラーゼ活性がみとめられる。　　０．３ＩＩ
Ｈのトリオレインに１．２１Ｈのヘキサデカンを添加す
ると、基質濃度は０．３ｎＨと変らなくとも０．３１１
８のスルホン化ＪＬ−８０Ｘの存在下でヒドロラーゼは
活性であることが見い出された。

基質である油の混合物は臨界比をも調節するために使用
できる０表Ｘｌｌは添加する油を基質とし。

酵素を活性化するために系における比率を臨界比より高
くするために使用した実施例である。

トリオレイン 一一℃ｍ−一 ８１ ８７ ２．２５ メ玖Ｉ！ １−リオレイン　　スルホン化ノＬ−８０Ｘ　　基Ｃａ
ｔ肚梁覆退竪　　酵ヱ豆出コ−ｊ！Ｌ−−一一訪吐一− ００，５３，７４０ ０，６３０，５５５１ ０、２５０，５０，５０ ００，５４，５０ 表Ｘｌｌのデータがち分るように、０．５ｉスルホン化
ＪＬ−８０１に乳化した０、２５１Ｈトリオレインは酵
素によって加水分解されない、同様に、　　０．５１Ｗ
Ｈスルホン化ＪＬ−８ＯＬに乳化した２、２５ｎＨトリ
オクタノインも加水分解されない、しがし、双方の油（
０，２５１１Ｍトリオレインおよび２．２５ＩＩＮ　ト
リオクタノイン）を−緒にして０．５ｒａＨスルホン化
ＪＬ−８０１に乳化すると、油全量の５６％が加水分解
される。

（すでに考察したヘキサデカンのような添加油の他に）
加水分解反応に関与しない他の有機化合物を臨界比を得
るために使用することができる。

適切な有機化合物は比較的不溶性であり、また極性基は
酵素活性を妨害することがあるので極性基をほとんどあ
るいは全く含まないことが望ましい。

しかし、有機化合物の極性基が適切な分校または長鎖ア
ルキル基で遮蔽されている場合は、多少。

極性があっても支障はない、荷電置換基（例えば−Ｃｏ
ｏ　　Ｎａ＋）は望ましくない、（酵素の基質とはなら
ない）比較的不溶性の有機化合物はエステル（例えば、
酢酸ブチル、酪酸ブチル、ステアリン酸ブチル、グロビ
オン酸ブチル、カプリル酸エチル）、グリコール（ジオ
ール）誘導体（例えば、ジエチレングリコールモノラウ
リン酸、エチレングリコールジメチルニーデル）、アル
コール〈例えばラウリルアルコール〉、アルデヒド。

ケｌ〜ン（メチルブチルケトン、メチルノニルケトン）
およびアミド（例えば、Ｎ、トリエチルドデカンアミド
）から選択することができるが、これらの物質に限られ
ることはない０次の式によるこれらの物質の溶解度、δ
は約７−９．５であることが望ましい。

ΣＧｄ ０　＝ ここで、ΣＧは分子中の全ての原子および官能基の総計
、ｄは密度、Ｈは分子量である。ここで引用するＪ、　
ＢｒａｎｄｒｕｐおよびＥ、　ｔｌ、　Ｉｌ１１ｅｒｇ
ｕｔ著。

Ｐａｌ　ｎｅｒ　１ｌａｎｄｂｏｏｋ、　　（第２版、
　Ｊｏｈｎ　１４ｉ１ｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　１９７５
）、　　ＤＯ，ＩＶ−３３７からＩＶ−３５３が示し、
報告しているような溶解度、δが約８．０−９．０の物
質が特に望ましい、好適には極性基をほとんど、あるい
は全く含まない比較的不溶性の化合物は「有効」な油全
濃度を増力ぽさせるに充分な油（基質または非基質）の
化学的アナログである。したがって。

このような比較的不溶性の有機化合物は界面活性剤に対
する油の比率を変化させるための手段のもう一つの実例
である。

表Ｘ１ｌｌにトリオクタノインを基質とする場合の臨界
比を望ましい値にするために適切な比較的不溶性の有機
化合物、　Ｎ、Ｎ−ジエチルドデカンアミドの使用法を
示した。

１０．０　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５　
　　　　　　　　　＜５２、５　　　　　　　　　　０
．５　　　　　５５０　　　　　　　　　　０．５　　
　　　１２表ＸＩから表ＸＩＩＩまでのデータはＰ、　
ｐｔｊｔｉｄａ＾ＴＣＣ５３５５２の酵素を使用して収
集した。しかし、他の酵素も酵素の臨界比が高い界面活
性剤の存在下でも、洗剤成分に酵素の基質ではない油を
加えることによって同様に活性化することができる。こ
のことを酵素をＡｉａｎｏ　Ｐとする表ＸＩＶのデータ
によって示した。

０ 本発明の非素成分における界面活性剤に対する油加水分
解活性化剤（基質、非基質にかかわらず）のモル比は約
０．５より大きいことが望ましい、このモル比は洗濯す
る織物の油汚れを平均０．３４１１Ｈ。

界面活性剤濃度を平均０．７５１ｍＭと仮定する場合。

望ましい臨界比を約１より大きくないとすることによっ
て計算できる。

に　　　　　　　　の 各種界面活性剤についての特定のリパーゼまたはクチナ
ーゼの臨界比を決定するために、ヒドロラーゼについて
界面活性剤および加水分解可能な基質を加えた水溶液中
で加水分解活性を測定した。

加水分解活性を測定するに当たっては界面活性剤と基質
の比率を変化させた０例えば１表Ｉ＾は比率を変化させ
ることによって通常量られるタイプのデータを示す。

望ましい臨界比は通常、１より大きくないので。

臨界比が約１または１未満であることが見出されるまで
１８類以上（および／または別のヒドロラーゼ）につい
て試験を行う必要がある０例えば。

表ＩＡで試験を行った酵素は界面活性剤をＮｅｏｄｏ　
１２５−３３．基質をトリオクタノインとする場合、臨
界比の範囲はｏ、ｓ−ｉであった０次に、臨界比を約１
または１未満となるように選択したリパーゼまたはクチ
ナーゼおよび界面活性剤を加えることによって洗濯成分
を処方することができる。

特定の酵素についての臨界比が高い界面活性剤をその酵
素についての臨界比が低い界面活性剤と混合すれば混合
界面活性剤についての酵素の臨界比が低下することが発
見された。このことは（本発明の酵素成分の）酵素の作
用を発揮させ、加水分解を起こさせるように界面活性剤
の臨界比を変化させる手段の実例である。この実施例を
トリオクタノインを油、言いかえると基質として用い。

また表ＩＩの場合と同一のヒドロラーゼ（２μｇ／ｎｌ
）を用いた表ｘｖに示した。酵素活性は初期速度で測定
し、また反応は終点をｐｌ＋１０．ｏｏとして周囲温度
で行った。

去造 ０；１ ０、０２５　：０．９７５ ０．０５：０．９５ ０．１：０．９ ０．２：０．８ ０．５＋０．５ ０．７５：０．２５ １：０ 表に示した配合によって臨界比は１まで低下したが、そ
れでも酵素を活性にするほど低くはない。

すなわち１表ｘｖのデータから分るように２モル分率が
０．１−０．２のＳＯ３を臨界比が高い界面活性剤と混
合すると、界面活性剤混合物の臨界比をＳＤＳ単独の場
合のそれより低下させるのに有効であったが、この値は
市販の洗剤処方に充分な程低くはない、　表ＸＶＩに臨
界比を低下させるのに有効な界面活性剤の混合物を示し
た。この場合もトリオクタノイン（０，６４＋＋＋Ｈ）
を柚として用い、またヒドロラーゼは表ＩＩと同一とし
た。

犯Ｖｌ ボ、！；：　　　　　　　　　１１１８Ｎｅｏｄｏｌ　
２５−９　　　　　　　０．３Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９
　　　　　　　０．１３Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９　　　
　　　　０．０６４Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９　　　　　
　　０．０３２Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９　　　　　　　
０．０１６Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９　　　　　　　　Ｇ
、００８Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３３（１：１）　　　　　５．０
Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３Ｓ（１：１）　　　　　２．０
Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３Ｓ（１：ｔ）　　　　　１．０
Ｈｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎｃｏｄｏｌ　２５−３３（１：１）　　　　　ｏ、５
Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎｃｏｄｏｌ　２５−３３（１：１）　　　　　０．３
１４以沁ｏｆ　２５−９／ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３Ｓ（１：１）　　　　　０．Ｉ
Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎｃｏｄｏｌ　２５−３３（１：１）　　　　　０．０
３０．０６ ０．３ ０．６ １ ６ あ ０ ３ （資） ■ （イ） 表ＸＶＩのデータから分るように、　　０．３ｍＭの界
面活性剤を０．６４ｎＭの油と共に用い、系における比
率を２とする場合、加水分解は起きない、しかし。

系におけるモル比を同一とし、界面活性剤Ｎｅｏｄｏ　
１２５−９とＮｅｏｄｏｌ　３５−３３の比率を１；１
とする混合物では、全景に対して６０％の加水分解が起
きる。この系は商業的に使用可能な界面活性剤系である
。

表ＸＶＩＩに臨界比の高い界面活性剤と臨界比の低い界
面活性剤を混合し、混合物の臨界比を低下させた別の実
施例を示した０モル比を１：１に一定にしたＮｅｏｄｏ
ｌ　２５−９とＮｅｏｄｏｌ　２５−３Ｓの界面活性剤
成分を調製した。基質（トリオクタノイン＞Ｓ度を通常
の使用濃度（０，６４ｉＨ）の約３ｆ合とし、７分後に
おける基質全量に対する加水分解の百分率を溶液中の界
面活性剤全濃度を変化させて測定した。

及阻団」底土ミ猥坦 Ｎｃｏｄｏｌ　２５−９ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３３（１：１） Ｎα沁ｏｆ　２５−９ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３３（１：１） Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９ Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９／ Ｎ劇ｏｆ　２５−３３（１：１） Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９ Ｎｅｒ沁ｏｆ　２５−９／ Ｎｃｏｄｏｌ　２５−３Ｓ（１：１） Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９ Ｎｃｏｄｏｌ　２５−９／ 表辞Ｉ！ 衾払吸批瞭望庶 １．２８１１Ｎ １．２ａ刺 ０．６４關 ０．６４關 ０．１２翻劇 ０．１２１１１１１Ｎ ｏ、ｏｈ！ＩＨ ０、関市昭 ０．０３２１１８ 釣Ｚ且ぢ抵杢 ０．５ 聾乙里と 表ＸＶＩＩのデータから分るように、調製した界面活性
剤混合物では系における比率が０．５の場合に酵素活性
がみとめられた。したがって、臨界比は少くとも０．５
またはそれより低かった。対照的に。

界面活性剤Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９自体での系における
比率は酵素活性を測定する前は約２０であった。したが
って、　Ｎｅｏｄｏｌ　２５−３３を１：１のモル比で
加えることによって、　Ｎｅｏｄｏｌ　２５−９の臨界
比は約２０から約０．５に低下した。

表ＸＶＩＩＩには臨界比の高い界面活性剤と臨界比の低
い界面活性剤を混合すると、協同的な作用によって、混
合物の臨界比は双方の界面活性剤成分より低い値まで低
下する別の実施例を示した。

Ｃ１□ＬＡＳとＮｅｏｄｏｌ　２５−９　ノ界面活性剤
成分混合物をモル比が２：１になるように調製し１個々
の界面活性剤に対して比較する試験を行った。

Ｃ，２ｔＡｓ／１ｌｅｏｄｏｌ　２５−９（２府１ｍＨ
１ｏ、　ｏｓ−ｏ、　ｉ 表ＸＶＩＩＩのデータによって示した試験における界面
活性剤混合物ではＰＳｅｔｌｄＯＩＩＯｎａＳ　ｐｕｔ
ｉｄａの酵素の活性が０．０５−０．１の範囲の臨界比
でみとめられた。油はトリオレインを使用した。対照的
に。

界面活性剤Ｎ０ＯｄＯＩ　２５−９自体の臨界比は０．
５１Ｎで１０−２０の範囲であり、界面活性剤Ｃ１□Ｌ
ＡＳ自体の臨界比は０．５ｎＨで５−１０であった。こ
のように、上記の２″Ｂの界面活性剤を配合すると、配
合剤の臨界比はいずれの界面活性剤自体の臨界比より低
い値まで低下した。

杢Ａ」Ｂ先炭量 トリグリセリドが付いている織物を洗濯するための単位
量に有用な望ましい洗剤成分は全成分の単位量を選択溶
液に溶解する場合、界面活性剤濃度が約０．２１１８か
ら約１．５ＩＩＮとなる界面活性剤処方からなる。特に
望ましい成分はＰ、　ｐｕｔｉｄａ＾ＴＣＣ５３５５２
から単離することが可能な酵素を含み１．ｔた。その車
は全成分の単位量を選択溶液に溶解する場合に、ａ物の
トリグリセリドの少くとも約５重量ぶを加水分解するの
に充分な量である。

例えば２本発明による成分（ｒ発明成分」と呼ぶ）は非
イオン性界面活性剤Ｎｅｏｄｏ１２３−６．５と非イオ
ン性界面活性剤スルホン化ＪＬ−８０Ｘをモル比が１；
０．２になるように混合することによって１＃製した。

この他の添加剤および、その比率は次の通りである。

炭量　　　　　　　　　　　　　　　　　　重量界面活
性剤 （Ｎｅｏｄｏ　１２３−６．５／　　　　　　　　　　
　３．７スルホン化ＪＬ−８０Ｘ）　　　　　　　　　
２６．０脱イオン水　　　　　　　　　　　　０．６ト
リポリリン酸ナトリウム 炭酸ナトリウム　　　　　　　　　　１０．５ポリケイ
酸ナトリウム１１．５ アルカリプロテアーゼ２・３０．８１０．６光沢剤４０
．９ 色素　　　　　　　　　　　　　　　０．１０．２ １　商標名Ｂｒ１ｔｅｓｉｌ　　ＰＱ　Ｃｏｒｐｏｒａ
ｔｉｏｎが市販２　商標名＾Ｉｃａｌａｓｅノボインダ
ストリー社が市販３　商標名５ａｖｉｎａｓｅノボイン
ダストリ一社が市販４　商標名Ｔｒｉｎｏｐａ１５ＢＨ
−ＸＣチバガイギー社が市販この洗剤成分に加えたヒド
ロラーゼは１９８８年５月２５０に発行された１４＋ｅ
ｒｌａｎらの欧州共同体特許出願第２６８．４５６号に
述べられている方法にしたがイ、　Ｐ、　ｐｕｔｉｄａ
　ＡＴＣＣ５３５５２を増殖させ２単離したが１水出願
書閲覧の便宜上、下記でも述べる。

（＾）扱ｌ目りよユ皐運吐 接種培地は０．６％普通ブイヨン（Ｄｉｒｃｏ）および
１ｘグルコース（ｐｔ１６．５）で調製した。　この培
地１００ｉ１を５００ｉ　１の７エルンバツハフラスコ
中で滅菌した。各フラスコに普通培地で一夜、増殖させ
たＬ１吐側ＬＡ　Ｔ　ＣＣ５３５５２の培養試料を白金
耳を用いて接種した後、　Ｎｅｖ　Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ
振盪装置に載せ。

３７℃、　２５０ｒｐｉで１２時間、ｉｎした。１２時
間、インキュベートした培養試料の適当量（１−１０％
Ｖ／Ｖ）を１リツトルノ醗酵装Ｗ　（ｔｉ作容Ｊ１２５
０１１１）、　１５１Ｊ　ットルＢｉｏｌａｆｉｔｔｅ
発酵装ｒＩｌ（操作容ｊｔ１２リットル）または温度調
節装置、　ＲＰＨ，空気流量および圧力の調節装置が付
いている１００リツトルＢｉｏｌａｆｉｔｔｅ醗酵装置
に接種した。醗酵培地には０．６％昔通培地（Ｄｉｆｃ
ｏ）、　０．３Ｘリンゴクチンおよび０．２％酵母エキ
ス（Ｄｉｒｃｏ）を加え、初期ｐＨを６．５とした。こ
の培地をｐＨ６，８に調節し、接種前に４０分間、滅菌
した。細菌の増殖および酵素産生は醗酵装置中で１２−
１５時間、継続させた。

（Ｂ）　　　ロ゛・・に　　　−Ｏ ｍ製の醗酵試料を二枚ノＲｏＩｌｉｃｏｎ微孔ＷＡ（０
，２２μ）を付けた＾１ｉｃｏｎ装置で先ず口過し、４
Ｈ１胞を除去した。クチン粒子に結合した股上残留酵素
は遠心によって集めた。全回収皿は約９０％であった。

（Ｃ）口 ＾１ｉｃｏｎ装置から回収した口液を二個のｌ１ｏｎｉ
ｃｏｎＰｉ　１０モジユールを付けたＡｎｉｃｏｎ限外
口過装置で３リツトルに：ａ縮した０次に、濃縮材料を
０．０１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ１７，５）２０リツ
トルを用いて透析し、塩類と色素を除去した。この段階
における回収率は平均、約８０１であった。この粗製種
晶の全活性は８．６８ｘｌＯ６単位であった。リパーゼ
１単位はｏ、１ｍ１ｘのＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００を含
む０．ＩＨＴｒｉｓ−１ｌｃ＋バツフアー（ｐＨ８，ｏ
）中で　ｌのｐ−ニトロフェニル醋酸と２０℃でインキ
ュベートする場合に。

４１５ｎ！ｌにおける吸光度を１分当たり　１．０増加
させる酵素量と定義する。

（０）ヒ゛ロ′−ゼ　′＝Ｌｊ−ｆ− 希望の酵素は同様にリパーゼ活性を持つ別酵素と疎水性
樹脂によるクロマトグラフィによって完全分離すること
ができる。限外口過および透析後の実施例ｌ１１（Ｃ）
の酵素溶液のＮａＣｌ１度を０．５Ｈに調節した後、　
　０．５ＨＮａＣｌを含む１０ＩＩＨＴｒｉｓ（ＣＩ）
（ｐＨ８）と平衡化したオクチルセファロースカラム（
０，８ｘ７ｃｌ）に充填し、非結合タンパク質を除去す
るために洗浄した。洗浄後、カラムをｎ−プロパツール
濃度が５０％になるまでの濃度勾配液で展開した。

カラム画分についてリパーゼ活性の位置を決定するため
に、ｐ−ニトロフェニル酪酸（ＰＮＢ）およびｐ−二ト
ロフェニル力プリン酸（ＰＮＣ）に対する活性を測定し
た。２種の酵素は明確に分離し１画分３２のＰＮＢ／Ｐ
ＮＣ比は４．６（これは希望の酵素である）。

画分５１のＰＮＢ／ＰＮＣ比は１．４０であった。

油上１．１塩法！ｂ４葺 織物を用いる試験および洗濯機を用いる試験双方をここ
で述べる本発明の成分を用いて実施した。

織物を用いる試験（１）では２ｐｐｍのヒドロラーゼを
すでに発明成分（ａ）として述べた洗剤成分と混合した
。洗濯機を用いる試験（１）では２０ｐｐＨのヒドロラ
ーゼを上記成分と混合した。双方の試験では合成皮脂で
汚れをつけた織物を用いた０合成皮脂の汚れは次のよう
に調製した。すなわち９次の比率で油を混合した： 油 ステアリン酸 スクアレン コレステロール リノール酸 オレイン酸 パラフィン油 バルミチン酸 ココナツ油 鞘液ろう（５ｐｅｒＩｌ オリーブ油 上記の溶解油１５ｇにオレイン酸ｏ、ｅｇ、　）リエタ
ノールアミン１．２１２および木炭０．２２５ｇを加え
た。

次に５５℃の水６０ＩＩＩを加え、混合液を１分間、撹
拌した。

′　　を　いる）　　１ 綿織物に合成皮脂による汚れを付けた後、１４分。

撹拌し、ついで５分、すすぐことにより試験ピー力中で
洗浄した。洗濯溶液は水２５０＋１１に発明成分（ａ）
　０．２０５！Ｊを溶解したものであった。ヒドロラー
ゼを含まない対照成分も調製し、同一の方式によって、
よごれを付けた綿織物を処理するのに使用した４表ＸＩ
Ｘに発明成分（ａ）と対照成分の汚れ除去率を示した。

発明成分（ａ） 対照成分 （イ）、７２ ５７、３７ 表ＸＩＸの綿ｍ′ａを使用した試験データから分るよう
に１発明成分について汚れ除去率が統計的に向上するこ
とがみとめられた。

゛　　　　　　い　　　　　　１ ポリエステル織物に皮脂、植物油またはオリープ油で汚
れを付けた０次に、これらの織物を７２リツトルの洗濯
機中で温度を３６℃として１２分間、洗浄し１通常のす
すぎサイクルですすいでから空気乾燥させた。−組の織
物を発明成分５９１Ｊを溶解した洗濯溶液で処理し、別
の一組の織物をヒドロラーゼを除いた他は発明成分と同
一の対照成分で処理した。　ｘｓｎで表わした汚れ除去
データを表ｘｘに示した。

発明成分（ａｌ 対照成分 部、６９ お、７５ ５１．８２ ２９、２０ （資）、７９ 話、０５ 表ｘｘのデータから分るように、ポリエステル織物で試
験を行った全ての汚れについて統計的に有意の汚れ除去
率が得られた。

お　び　　　　　いる−　　２ ポリコツトン製織物を切断して１０ｃＩＩｘ１０ｃ１１
の大きさの布切れとした。各布切れの乗員は約０．３９
（１であった。必要量のトリオレインを２−メチルペン
タンに溶解し、各布切れにピペットを用いて塗布した（
２００μＬ／布切れ），トリオレーンの汚れを室温で７
２時間、放置し、余分の汚れを除去した。

汚れの反射率をＩｔ　ｕ　ｎ　ｔ　ｅ　ｒ分光光度計を
用いて評価し。

洗浄前値（吸収物質種の濃度に比例）を測定した。

汚れを付けた布切れを１群４枚に分け、　２５０ｍ１の
瓶に入れ、各部に必要な処理液２００ｉ　Ｉを加えた。

次に、これらの瓶を室温で１２分間、振盪し、２回熱溜
水２００ｍ　ｌで２回、すすいだ、ｎ後に、空気乾燥さ
せ、洗浄後の１ｉｉ（吸収物質種の濃度に比例）を測定
した。

Ｗ布切れを０．３１ＨＣ１２［八Ｓ／Ｎｅｏｄｏ　１２
５−９（モル比、　２：１）からなる界面活性剤成分で
洗浄した。リパーゼは加えなかった。

先艶隻星り界面活性剤成分に５１）０１１のリパーゼ＾
ＴＣＣ５３５５２を加えた以外は八と同様。

比艷夏凰監０．３ｍＨＣｌ２Ｌ八Ｓ／Ｎｅ０ｄＯ１２５
−９（モル上り。

約に４）からなる界面活性剤成分を含む別の処方液中で
洗浄した。リパーゼは加えなかった。

！界面活性剤成分に５ｐｐＩのリパーゼＡＴＣＣ５３５
５２を加えた以外は処理Ｂと同様。

各処理において除去された油汚れの量を表ＸＸＩに要約
した。

表窟■ 表ＸＸＩのデータから分るように１本発明による成分を
使用するとポリコツトン織物の油の３３％から６０％が
除去され、この除去率はヒドロラーゼを含まない場合よ
り（ヒドロラーゼを含む）本発明成分の方が顕著に良好
であった。　ＬＳ［ｌ　Ｉはこの除去率が統計的に有意
であることを示している。

要約すると１本発明の酵素成分は洗濯溶液中で有用であ
り、洗濯溶液中において織物に付いている天然の油汚れ
を加水分解できる酵素および界面活性剤に対する油の比
率を変化させるか、または界面活性剤の臨界比を変化さ
せる加水分解活性化手段からなる。洗濯溶液に使用し、
その結果、酵素が油汚れを加水分解する点で活性となる
加水分解活性化剤のいくつかの実施例を示した。酵素が
トリグリセリドによる汚れ全量の少くとも約５重Ｉｋ％
を約２５℃で約１４分または１５分以内に加水分解する
に充分な活性を示す場合に１通常、加水分解の発現を観
察することができる６本発明の加水分解活性化手段を用
いないと、洗濯溶液に約０．１ｎＨから５ｎＨの界面活
性剤が含まれる場合には、Ｕ素は加水分解性の天然の油
のしみまたは汚れによって阻害されるのが通常である０
本発明の加水分解活性化手段の効果を別の方法で表現す
ると１本発明にしたがい１本発明の加水分解活性化手段
を界面活性剤処方と混合する場合、リパーゼまたはクチ
ナーゼは少くとも約３０１ｇのトリオレインを加水分解
することが可能となり、単位１の洗濯成分をｐＨ１０，
２５℃で水溶液に溶解すると約１４分間における脂肪酸
の生成平均速度が約０．００７２１１１０１ｅＳ／分で
あるということになる。このように２本発明にしたがえ
ば、洗浄時間を延長することや温度を高くする必要のな
い条件で、洗濯溶液中に使用するためのリパーゼおよび
／またはクチナーゼを含む界面活性剤系を処方すること
ができる。

本発明を特定の実施例を引用して述べたが９種々の改良
・変化は本発明の趣旨から逸脱せずにこの分野の技術の
当業者が容易に行えることを理解する必要がある。した
がって、上記の開示内容は実例として解釈すべきであり
、制約的な意味で解釈すべきではない０本発明はすでに
述べた特許請求の範囲のみによって制約される。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）洗濯溶液中で織物の天然の油汚れを加水分解可能な
   酵素であつて、加水分解が洗濯溶液中における油汚れと
   界面活性剤とのモル比の臨界値に依存して始まり、該臨
   界値が使用する界面活性剤に依存するところの酵素と、 酵素が油汚れを加水分解するように当該成分を用いる洗
   濯溶液中の油汚れ対界面活性剤との比率を増加するため
   の加水分解活性化手段と、 から成る洗濯用途のための酵素成分。 ２）加水分解活性化手段が炭化水素，酵素基質，比較的
   不溶性の有機化合物またはこれらの混合物である請求項
   １の酵素成分。 ３）加水分解活性化手段がヘキサデカン，オクタデカン
   ，トリオクタノイン，トリオレーンまたはＮ，Ｎ−ジエ
   チルドデカンアミドである請求項２の酵素成分。 ４）酵素がリパーゼまたはクチナーゼである請求項１の
   酵素成分。 ５）酵素がシュードモナス属，クロモバクター属、アス
   ベルギルス属，アシネトバクター属またはフザリウム属
   から得られる遺伝子を表現する微生物から単離可能な請
   求項４の成分。 ６）酵素がシュードモナス・プティダＡＴＣＣ５３５５
   ２，この変異株またはこのクローン株から単離可能な請
   求項４の成分。 ７）さらに少くとも１種の界面活性剤を含み、前記界面
   活性剤に対する油加水分解活性化剤のモル比が約０．５
   より大きい請求項１の酵素成分。 ８）界面活性剤をドデシル硫酸ナトリウム、Ｃ＿１＿２
   Ｈ＿２＿５−φ−ＳＯ＾−＿３Ｎａ＾＋，▲数式、化学
   式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼， Ｃ＿８Ｈ＿１＿７−φ−（ＯＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｏ）ｒ−
   Ｈ，およびこれらの混合物から選択する請求項７の酵素
   成分である。ここで、Ｒ＿１は炭素原子数が約１０個か
   ら１５個のアルキル基またはこれらの温合物であり、ｎ
   は平均約３であり、Ｒ＿２は炭素原子数が約１２個から
   １５個のアルキル基またはこれらの混合物であり、ｍは
   平均約９であり、またＲ＿３は炭素原子数が約９個から
   １１個のアルキル基、またはこれらの混合物であり、ｏ
   は平均約４．５、ｐは平均約１．５、ｑは平均約４．５
   、またｒは平均約１０である。 ９）酵素がシュードモナス属、クロモバクター属、アス
   ベルギルス属またはフザリウム属から得られる遺伝子を
   表現する微生物から単離可能な請求項７の成分。 １０）酵素がシュードモナス・プティダＡＴＣＣ５３５
   ５２，この変異株またはこのクローン株から単離可能な
   請求項７の成分。 １１）界面活性剤をドデシル硫酸ナトリウム、Ｃ＿１＿
   ２Ｈ＿２＿５−φ−ＳＯ＾−＿３Ｎａ＾＋，▲数式、化
   学式、表等があります▼ Ｒ−（ＯＣＨ＿２ＣＨ＿２）＿ｍ−Ｈ， ▲数式、化学式、表等があります▼， およびこれらの混合物から選択する請求項１０の酵素成
   分である。ここで、Ｒ＿１は炭素原子数が約１０個から
   １５個のアルキル基またはこれらの混合物であり、ｎは
   平均約３であり、Ｒ＿２は炭素原子数が約１２個から１
   ５個のアルキル基またはこれらの温合物であり、ｍは平
   均約９であり、またＲ＿３は炭素原子数が約９個から１
   １個のアルキル基、またはこれらの混合物であり、ｏは
   平均約４．５、ｐは平均約１．５、ｑは平均約４．５で
   ある。 １３）油汚れが付いた織物をリパーゼまたはクチナーゼ
   および少くとも１種の界面活性剤を含む溶液中で洗濯す
   る方法であつて、 炭化水素、酵素基質、比較的不溶性の有機化合物および
   これらの混合物から選択した薬剤からなる加水分解活性
   化剤を上記溶液に添加する工程を含む方法。 １４）油汚れの付いた織物を洗濯溶液中で洗濯する方法
   であつて、 洗濯溶液に少くとも１種の界面活性剤、リパーゼまたは
   クチナーゼおよび炭化水素、酵素基質、比較的不溶性の
   有機化合物およびこれらの混合物から選択した加水分解
   活性化剤を添加する工程を含む方法。 １５、界面活性剤と活性化剤を溶液に添加し、活性化剤
   対界面活性剤のモル比を上記界面活性剤に対する酵素の
   臨界比より大きくなるようにする請求項１４の方法。 １６、界面活性剤に対する活性化剤のモル比が約０．５
   より大きくなるような相対量で界面活性剤と活性化剤を
   添加する請求項１４の方法。 １７、シュードモナス属、クロモバクター属、アスベル
   ギルス属、アシネトバクター属またはフザリウム属から
   得られる遺伝子を表現する微生物から酵素を単離するこ
   とが可能な請求項１４の方法。 １８）シュードモナス・プティダＡＴＣＣ５３５５２，
   この変異株またはこのクローン株から酵素を単離するこ
   とが可能な請求項１４の方法。 １９）界面活性剤をドデシル硫酸ナトリウム。 Ｃ＿１＿２Ｈ＿２＿５−φ−ＳＯ＿３＾−Ｎａ＾＋，▲
   数式、化学式、表等があります▼， ▲数式、化学式、表等があります▼， およびこれらの混合物から選択する請求項１４の方法で
   ある。ここで、Ｒ＿１は炭素原子数が約１０個から１５
   個のアルキル基またはこれらの温合物であり、ｎは平均
   約３であり、Ｒ＿２は炭素原子数が約１２個から１５個
   のアルキル基またはこれらの混合物であり、ｍは平均約
   ９であり、またＲ＿３は炭素原子数が約９個から１１個
   のアルキル基、またはこれらの混合物であり、ｏは平均
   約４．５、ｐは平均約１．５、ｑは平均約４．５である
   。 ２０、洗濯溶液中で織物の天然の油汚れを加水分解可能
   な酵素であつて、加水分解が臨界値を越える、洗濯溶液
   中における油汚れ対界面活性剤のモル比に依存して始ま
   り、前記臨界値は特定の界面活性剤に依存するところの
   酵素と、 酵素が油汚れを加水分解するように当該成分を用いる洗
   濯溶液中における界面活性剤の臨界比を変化させるため
   の加水分解活性化手段と、 から成る洗濯用途のための酵素成分。 ２１）活性化手段が界面活性剤を含み、前記界面活性剤
   は洗濯溶液中で他の界面活性剤と配合する場合、配合の
   臨界比が約１より大きくならないように選択される請求
   項２０の成分。 ２２）酵素に関連する第１の臨界比を持つ少くとも１種
   の界面活性剤を含み、また前記活性化手段が酵素に関連
   する第２の臨界比を持つ第２の界面活性剤を含み、前記
   界面活性剤は界面活性剤の配合臨界比が第２の臨界比以
   下となるように選択される請求項２０の成分。 ２３）シュードモナス・プティダＡＴＣＣ５３５５２，
   この変異株またはクローン株から酵素を単離することが
   可能な請求項２１の成分。 ２４）界面活性剤が ▲数式、化学式、表等があります▼ およびＲ＿２−（ＯＣＨ＿２ＣＨ＿２）＿ｍ−Ｈである
   請求項２２の成分である、ここでＲ＿１は炭素原子数が
   約１０個から１５個のアルキル基、またはこれらの混合
   物であり、ｎは平均約３であり、またＲ＿２は炭素原子
   数が約１２個から１５個のアルキル基、またはこれらの
   混合物であり、ｍは平均約９である。 ２５）シュードモナス・プティダＡＴＣＣ５３５５２，
   この変異株およびクローン株から酵素を単離することが
   可能な請求項２４の成分。 ２６）界面活性剤が ▲数式、化学式、表等があります▼ およびＲ＿２−（ＯＣＨ＿２ＣＨ＿２）＿ｍ−Ｈである
   請求項２４の成分である、ここでＲ＿１は炭素原子数が
   約１０個から１５個のアルキル基、またはこれらの混合
   物であり、ｎは平均約３であり、またＲ＿２は炭素原子
   数が約１２個から１５個のアルキル基、またはこれらの
   混合物であり、ｍは平均約９である。 ２７）洗濯溶液中の界面活性剤が、界面活性剤の推奨使
   用濃度に対する織物の油汚れのモル比が酵素と界面活性
   剤の臨界比より低い場合に、油汚れの加水分解を阻害す
   るとき、織物の油汚れを加水分解するために界面活性剤
   洗濯溶液中でリパーゼまたはクチナーゼを有効に使用す
   る方法であって、界面活性剤洗濯溶液にリパーゼおよび
   加水分解活性化界面活性剤を添加する工程を含み、加水
   分解活性化界面活性剤は界面活性剤の配合の臨界比が加
   水分解活性化界面活性剤のそれ以下となるように選択さ
   れる、ところの方法。 ２８）酵素がシュードモナス・プティダＡＴＣＣ５３５
   ５２，この変異株またはクローン株から単離することが
   可能な請求項２７の方法。 ２９）加水分解活性化界面活性剤がドデシル硫酸ナトリ
   ウム。 ▲数式、化学式、表等があります▼， Ｃ＿１＿２Ｈ＿２＿５−φ−ＳＯ＿３＾−Ｎａ＾＋，お
   よびこれらの混合物である請求項２８の方法である。こ
   こでＲ＿１は炭素原子数が約１０から１５個のアルキル
   基、またはこれらの混合物であり、ｎは平均約３である
   。 ３０）配合界面活性剤が ▲数式、化学式、表等があります▼， またはＣ＿１＿２Ｈ＿２＿５−φ−ＳＯ＿３＾−Ｎａ＾
   ＋である請求項２７の方法であり、ここでＲ＿１は炭素
   原子数が約１０個から１５個のアルキル基、またはこれ
   らの混合物であり、ｎは平均約３である。 ３２）界面活性剤がドデシル硫酸ナトリウムまたは ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項２７の方法である、ここでＲ＿１は炭素原
   子数が約１０個から１５個のアルキル基、またはこれら
   の混合物であり、ｎは平均約３である。 ３３）界面活性剤が ▲数式、化学式、表等があります▼ またはＲ＿４−（ＯＣＨ＿２ＣＨ＿２）＿ｓ−Ｈである
   請求項２７の方法であり、ここでＲ＿３は炭素原子数が
   約９個から１１個のアルキル基、またはこれらの混合物
   であり、ｏは平均約４．５であり、ｐは平均約１．５で
   あり、またｑは平均約４．５であり、またＲ＿４は炭素
   原子数が約１２個から１３のアルキル基であり、ｓは平
   均６．５である。 ３４）リパーゼまたはクチナーゼが活性な洗濯溶液に有
   用な界面活性剤系を選択する方法であって、（ａ）水溶
   液にリパーゼまたはクチナーゼ、第１の界面活性剤およ
   び第１の油を加える工程であって、この第１の界面活性
   剤と第１の油により界面活性剤に対する油の第１のモル
   比が定められ、第１の油がリパーゼまたはクチナーゼの
   加水分解可能な基質となる、ところの工程と、 （ｂ）臨界比が得られ、前記第１の油が加水分解される
   ように、界面活性剤と油のモル比を調節する工程と、 （ｃ）それによってリパーゼまたはクチナーゼおよび選
   択した界面活性剤または界面活性剤混合物を含む洗剤成
   分を決定する工程と、 から成る方法。