JPH034768A - 乳酸菌調製物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） この発明は、有用な生理活性を持ち、食品用途の乳酸菌
（ストレプトコッカス・ラクチス・リスター）の利用に
関するものである。

（現状及び発明による解決課題） 我国で最大の死亡Ｄ；ｌ因であるがんは、その大部分が
食品を含む化学物質の刺激によって、即ち発がん物質に
よりがん化が誘導され、次いでこれが促進されて発症す
るというゴー段階を経て、がんが成立するとされている
。

この考え方に立てば、食品に含まれている発がん誘導物
質の摂取は避けられないが、第二の促進過程でこれを抑
制するような物質、即ち抗プロモーション活性物質によ
り、がんの成立を防遇することができれば、がんの予防
が可能となる。

即ち、食品中には燻製食品中のペンツピレンのような発
がん物質があり、亜硝酸のように５−ｒｌしく他の食品
中に含まれるアミンと結合してニトロソアミンという発
がん物質を作るものがある。このような発がん物質によ
り、がん化が誘導された組繊細胞に対して、何らかのプ
ロモーターが作用すると、がんが発症するわけであるか
ら、これに対して、このプロモーション過程を抑制する
ことによって、がん予防が可能になる。特に我国は、胃
がんが３５％を占める（１９７６年）が、これは食品の
影響を受けるところが大きいとされている。

疫学調査によれば、静岡県の茶の生産地帯では、胃がん
の発生率が最も少ない地域があり、緑茶の飲用との因果
関係が証明されている。即ち、緑茶中にも抗プロモーシ
ョン活性があることが知られている。

１１１１記と同様の趣旨で、より強力で、１−１つ経済
的な抗プロモーション活性剤の探索を食品中に鋭意行な
ったところ、本発明を完成するに至ったものである。

また、最近医学分野において、多くの生命現象を支配す
る酸化反応と抗酸化反応の微妙なバランスが崩れ、生体
が酸化傾向に傾く現象を「酸化的ストレス」と呼ぶよう
になり、好気的な反応が、同時にその生物にとって危険
な酸化過程をも促進し得ることが明らかにされている。

このことが多くの生物学的及び病態生理的現象の根幹を
成し、炎症、老化、がん化、薬物作用など、様々な医学
的問題と深く関わっている。この「酸化的ストレス」に
ついては、生化学的な指標として、実用的には、２４時
間尿中の８−ハイドロキシデオキシグアノシン、チミン
グリコール、チミジングリコールなどによってモニター
できることが明らかになっている。また、加令に伴って
、この指標が変化することがわかり、更にライフスタイ
ル、栄養によって酸化的ストレスが冗進し、種々の疾患
となって現れるのではないかと推定されてはいるが、未
だ嘗て酸化的ストレスと疾患との結びつき及びこれに基
く有効な処置方法については検討されていない。本発明
者は、酸化的ストレスを十三ターしながら、有効な抗酸
化性物質を探索したところ、本乳酸菌体消化物が生理的
に抗酸化性が高いことを見出した。即ち、従来の乳酸菌
利用法とは全く異なり、酵素（リゾチーム、″キタラー
ゼなど）処理により消化・死菌化したものを利用すると
いう画期的な発明を完成したのである。

現時点で、２００万人とも３００万人ともいわれる成人
５２２糖尿病の存在は、誠に憂慮すべき問題であり、か
かる疾患は、対症療法的ではなく、真の病因に基き、科
学的な研究により治療に解決策をもたらすべきであると
考え、長年の研究の結果、酸化的ストレスの状態が発症
と関わりがあるのではないかとの結論に達し、本庁の食
・１を療法と併行して用い得る効果的な抗酸化剤を探索
した結果、ストレプトコッカス・ラクチス菌体が有する
抗酸化活性を強化した物質を提供することによって該治
療分野においても貞献したいと願っているものである。

この他、「酸化的ストレスＪを起因とする疾患としては
、糖尿病（ＩＩ）、自己免疫病、炎症、リウマチ、浮腫
、白内障、虚血、脳卒中、がん、心筋梗塞、高血圧、潰
瘍、アルツハイマー病、パーキンソン病、老人性筋萎縮
、変形性関節症などがある。

（課題をＮ決する為の手段） この酸化的ストレスの評価については、本願発明の出願
人が先に提案した「老化度の測定法」において酸化的ス
トレスの測定法を確立しているが、この方法によるＩ）
　Ｎ　Ａの酸化的損傷と本庁の相関関係が明らかになり
、本発明を完成するに至った。

本発明における乳酸菌ストレプトコッカス・ラクチス・
リスターは、ＡＴＣＣＰＡ′ｒ＄株１９４３５及びその
類縁の株が含まれるものである。

ストレプトコッカス・ラクチスの培養は、１例を挙げる
と、１％グルコース、０．８７％ペプトン、０．４％イ
ーストエキストラクト、０．３％クエン酸ナトリウム、
０．２５％重曹を含む水性培地で２４時間、３７℃で静
置培養を行なって、遠心分離により菌体回収後、生理的
食塩水にて３回洗浄を繰返し、凍結乾燥を行なった。

菌体の酵素処理は、菌体を１０％になるように水に分散
し、これにリゾチーム；３０μｇ／ｍ℃、３７°Ｃにて
緩やかに攪拌しながら３時間、処理を行なった。

６６０　ｎｍにおける濁度による測定で、８０％以十の
消化率を得た。

このものを凍結乾燥し、乳酸菌消化物（１）とした。

また、更にこの消化物１ｇをｌ０ｎｌのリン酸緩衝液（
Ｉ　ＯｍＭ、　ｐｔ１７．　Ｏ）に分散し、“キタラー
セ”　（リゾクトニア・ソラニ培養物から得た酵素剤、
ケイ・アイ化成株式会社、静岡県磐田郡福田町）を５ｍ
ｇ、３７℃で反応させ、１２時間、処理を行なった。こ
の消化物の凍結乾燥したもの（消化物Ｉ＋）を試験に供
した。

（実験例１） 抗プロモーション試験 この消化物（１）をエタノールにより抽出し、デトラデ
カノイルフオルボールアセテート（ＴＰＡ）発がんプロ
モーション系を用い、抗プロ千−ション活性を調べた。

即ちバルブＣマウス表皮由来の、Ｊ　Ｂ　６培養細胞を
用い、”Ｔ’　ＰΔ誘導軟寒天コロニー形成に対する抑
制作用を見ることにより、抗プロモーション活性を検出
した。

ストレプトコッカス・ラクチス消化物中の活性成分の分
画：　ｒｊｌ記消化物（Ｔ）のアルコール抽出画分を透
析し、透析画分と非透析画分に分け、活性が見られた１
コミＩ者について、酢酸エチルによる液々分配により酸
性画分を得た。即ち、ストレプトコッカス・ラクチス消
化物透析性画分の酢酸エチルｉｆ溶性酸性画分をシリカ
ゲルカラムに充填し、酢酸エチルで溶出した両分につい
て活性を調べた。

先ず、消化物は、Ｊ　１３　Ｅ５細胞に対して、クロー
ン２２では１μｇ／ｍＩ！、より高濃度で増殖ｔ＜１＋
害が見られた。また、ＪＢ６細胞イン・ビトロ発がんプ
ロモーション検出系で、′「［）△誘導光がんプロモー
ションを約５０％減少させた（図１）。

しかも、これはＪＢ６細胞の腫瘍化した細胞で、その遺
伝子発現を抑制するものではないから、発がんプロモー
ションの過程を特異的に抑制した。

また、コントロールとして緑茶の酢酸エチル抽出物を用
いたところ、活性は４０％以ドであった。

以上より、強力な抗プロモーション活性剤ということが
でき、且つ乳酸菌を培養し、菌体を利用するものである
から、極めて経済的である。

（実験例２） 抗酸化性試験 乳酸菌消化物を含む調製物（糖類２．８ｇ、乳酸菌消化
物］、１６ｇ、クエン酸０．０４ｇ、計４ｇを１包）を
、毎日３回、１週間継続投与し、その前後における２４
時間、尿を試料として、尿中の８ハイドロキシデオキシ
グアノシンを測定、クレアチニンに対するモル比で表し
た。

健常人５名に対して行なった結果、Ｙｌｉ−均値は０゜
０７４、乳酸菌使用前の８ハイドロキシグアノシン１ｄ
の高値のものは、いずれも低下傾向を示した（図２）。

（実験例３） 延命効果試験 試験動物として、２群の生後５週齢の脳卒中易発症性高
面圧自然発症ラット（ＳＨＲ３Ｐ、血圧上昇の緩やかな
系統の雄）を用い、対象群には市販粉末飼料（船橋農場
製“船橋ＳＰ”）を投与し、□実験群には消化乳酸菌を
１５％相当添加して与えた。

６〜７匹１群とし、２２±１℃に調節した動物飼育室で
飼育した。飼料は自由摂取させ、死亡するまで飼育した
。また、１０週齢以後、一定期毎に尾静脈より採血を行
ない、血清と赤血球分画を得た後、血清過酸化脂質１ｉ
ｌを八木蛍光法で、゛「１３Ａ反応物質量として示した
。また、赤血球分画は、溶面させて粗酵素液とし、グル
タチオンペルオキシダーゼ活性をＰ、Ｄ、ワグナ−らの
方法で測定し、血液１　　ｍＩ２中の活性値として示し
た。

（実施例１） （１）ストレプトコッカス・ラクチス菌体の作成１．５
％脱脂粉乳、０．８％ペプトン、０．４％イーストエキ
ストラクト、０．３％クエン酸ナトリウムを含む液体培
地で２４時間、３７℃で緩やかに攪拌しながら培養し、
次いで１０．０００ｒｐｍで１０分間遠心操作を行ない
、３回生理的食塩水で洗浄したものを凍結乾燥した。

（２）消化菌体調製 Ｍ／】０りん酸緩衝液に固形分１０％になるように菌体
を懸濁し、これにリゾチーム２５μｇ／ｍ℃、３７℃で
３時間攪拌しながら消化を行なった。７８％消化率６ （３）　（ａｌ消化菌体にょるＴＰＡ誘導発がんプロモ
ーション抑制試験 軟寒天コロニー数（％）４５であったので、抑制率５５
％。

（３）　（ｂ）尿中８ハイドロキシデオキシグアノシン
に対する影ＩＪ（ｔＪＡ尿病ＮＩＤＩ）Ｍ患者２例フ消
化菌体を１日２ｇ、牛乳に懸濁して１週間服用後、血糖
値とともに２４時間、尿で測定を行なった。

（実施例２） リゾチーム消化した消化乳酸菌（消化物■）を１ｋｇ、
１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７、０）　　Ｉ　Ｏ＋に溶
解し、キタラーゼＩＯｇを加え、３７℃で８時間反応さ
せ、終了後、凍結乾燥物（消化物ＩＩ）として市販粉末
飼料（船橋農場製、船橋５ｔ））に１５％相当量を添加
し、よく混合して実験飼料とし、雄性の３１１　ＲＳ　
Ｉ）を対象群６匹、実験群７匹とし、延命効果試験、血
清過酸化脂質及び赤血球のギルタチオンベルオキシダー
ゼ活性測定を行なった。

生佇口数 参　対象群と５％の危険水準で有意差が認められた。

即ち寿命延長が見られた。

次に、別に１群５〜７匹で、血清中の過酸化脂質、赤血
球のグルタチオンペルオキシダーゼを測定した。

の一部として用いることにより、がん、その他加令に伴
う諸疾患の予防について優れた効果がある。

【図面の簡単な説明】

第１図は消化菌体のｉ”　Ｐ　Ａ誘導光がんプロモーシ
ミ１ンに対する影汁のグラフ、第２図は消化菌体の酸化
的損傷に対する影響のグラフである。 血清過酸化脂質については、実験群において低下傾向を
示したが、赤血球膜におけるグルタチオンペルオキシダ
ーセ活性においては、実験群が有意に高い活性を示した
。 この成績は、実験群に見られた延命効果が、過酸化脂質
の低ドと活性の高いグルタチオンペルオキシダーゼに関
連づけられ、それが乳酸菌体消化物の抗プロモーション
活性及び抗酸化性に基くものであることが推察される。 （発明の効果）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　ストレプトコッカス・ラクチス・リスターの菌体消
   化物から成る乳酸菌調製物 ２　ストレプトコッカス・ラクチス・リスターの菌体消
   化物の透析性部分で、且つ酸性で、酢酸エチルで抽出可
   能分画である請求項１記載の乳酸菌調製物 ３　菌体消化物調製のためには、リゾチーム（ＥＣ３、
   ２１、１７）及び／又は“キタラーゼ”を用いることを
   特徴とする請求項１記載の乳酸菌調製物 ４　目的とする生理活性が、抗プロモーション活性であ
   ることを特徴とする請求項１記載の乳酸菌調製物 ５　目的とする生理活性が、抗酸化性であり、関連疾患
   を軽減することを特徴とする請求項１記載の乳酸菌調製
   物 ６　目的とする生理活性が、延命効果であることを特徴
   とする請求項１記載の乳酸菌調製物