JPH029384A - 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 - Google Patents
発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法Info
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- JPH029384A JPH029384A JP15975088A JP15975088A JPH029384A JP H029384 A JPH029384 A JP H029384A JP 15975088 A JP15975088 A JP 15975088A JP 15975088 A JP15975088 A JP 15975088A JP H029384 A JPH029384 A JP H029384A
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- glutamic acid
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は発酵法によるし一グルタミン酸の製造法に関す
る。その目的は、食品添加物等として利用される重要な
アミノ酸であるＬ−グルタミン酸を工業的に安価に製造
することにある。
る。その目的は、食品添加物等として利用される重要な
アミノ酸であるＬ−グルタミン酸を工業的に安価に製造
することにある。
従来の技術
従来、発酵法によるし一グルタミン酸の製造法に関して
は、コリネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属の野
生株あるいは、種々の物質を生育に要求するか又は種々
の物質に耐性を有する変異株を用いる方法が知られてい
る。また、エネルギー代謝阻害を示す抗生物質またはユ
ビキノンの生合成の前駆体に耐性を示し、Ｌ−グルタミ
ン酸生産能を有する微生物を用いる方法（特開昭５９−
１５．４９９５）が知られている。
は、コリネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属の野
生株あるいは、種々の物質を生育に要求するか又は種々
の物質に耐性を有する変異株を用いる方法が知られてい
る。また、エネルギー代謝阻害を示す抗生物質またはユ
ビキノンの生合成の前駆体に耐性を示し、Ｌ−グルタミ
ン酸生産能を有する微生物を用いる方法（特開昭５９−
１５．４９９５）が知られている。
発明が解決しようとする課題
食品添加物等として有用なし一グルタミン酸の安価な製
造法が求められている。
造法が求められている。
、′Ｊ！題を解決するための手段
本発明社らは、Ｌ−グルタミン酸を高収率で得るために
より（衾れたＬ−グルタミン酸生７帝菌の研究を行った
。その結果、エネルギー代謝阻害剤として知られている
各種抗生物質の耐性株の中で、特にグラミシジンに耐性
を有する変異株が高収率で、Ｌ−グルタミン酸を生産す
ることを見出し本発明を完成させた。
より（衾れたＬ−グルタミン酸生７帝菌の研究を行った
。その結果、エネルギー代謝阻害剤として知られている
各種抗生物質の耐性株の中で、特にグラミシジンに耐性
を有する変異株が高収率で、Ｌ−グルタミン酸を生産す
ることを見出し本発明を完成させた。
以下、本発明を具体的に説明する。
本発明は、コリネバクテリウム属またはプレビバクテリ
ウム属に属し、グラミシジンに耐性を有し、かつＬ−グ
ルタミン酸生産能を有する微生物を培地に培養し、培養
物中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積せしめ、該培養物よ
りＬ−グルタミン酸を採取することを特徴とする発酵法
によるＬ−グルタミン酸の製造法を提供する。
ウム属に属し、グラミシジンに耐性を有し、かつＬ−グ
ルタミン酸生産能を有する微生物を培地に培養し、培養
物中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積せしめ、該培養物よ
りＬ−グルタミン酸を採取することを特徴とする発酵法
によるＬ−グルタミン酸の製造法を提供する。
本発明に使用する微生物の例としては、コリネバクテリ
ウム属またはブレビバクテリウム属に属し、グラミシジ
ン耐性を有し、かつＬ−グルタミン酸生産能を有する微
生物であればいずれも用いることができる。
ウム属またはブレビバクテリウム属に属し、グラミシジ
ン耐性を有し、かつＬ−グルタミン酸生産能を有する微
生物であればいずれも用いることができる。
本変異株は、コリネバクテリウム属またはブレビバクテ
リウム属のし一グルタミン酸生産性細菌から誘導するこ
とにより、あるいは、上記性質を有する菌にＬ−グルタ
ミン酸生産性を付与することによって得られる。
リウム属のし一グルタミン酸生産性細菌から誘導するこ
とにより、あるいは、上記性質を有する菌にＬ−グルタ
ミン酸生産性を付与することによって得られる。
例えば、Ｌ−グルタミン酸生産菌コリネバクテリウム・
グルタミクムＡＴＣＣ−１３０３２をＸ線、紫外線、コ
バルト等の照射あるいは薬剤、例えば、Ｎ−メチル−Ｎ
′−二トローＮ−二トロングアニジンに接触せし袷る等
の通常の変異誘導方法が適宜適用できる。
グルタミクムＡＴＣＣ−１３０３２をＸ線、紫外線、コ
バルト等の照射あるいは薬剤、例えば、Ｎ−メチル−Ｎ
′−二トローＮ−二トロングアニジンに接触せし袷る等
の通常の変異誘導方法が適宜適用できる。
変異処理した菌体から変異株を分離する方法は、親株が
生育できない量のグラミシジンを含む固体培地中に生育
できるような菌株を採取するこきにより行われる。
生育できない量のグラミシジンを含む固体培地中に生育
できるような菌株を採取するこきにより行われる。
以下に変異株の取得方法の具体例を示す。
コリネバクテリウム・グルタミクムＡＴＣＣ１３０３２
にＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロングアニジン
による通常の変異処理（２００ｍｇ／ｊ’、３０℃、３
０分間）を行った後、ｌＯ鱈／ｍ Ｉのグラミシジンを
含む最小培地〔グルコース１０ｇ／β、塩化アンモニウ
ム４ｇ／ｊ！、ＫＨ２ＰＯ。
にＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロングアニジン
による通常の変異処理（２００ｍｇ／ｊ’、３０℃、３
０分間）を行った後、ｌＯ鱈／ｍ Ｉのグラミシジンを
含む最小培地〔グルコース１０ｇ／β、塩化アンモニウ
ム４ｇ／ｊ！、ＫＨ２ＰＯ。
Ｉｇ＃、に２ＨＰＯ４３ｇ／Ｉｔ、Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２
００，０１ｇ／ｊ！、Ｆｅ５０．・７Ｈ，ＯＯ，０１ｇ
／１２．ＭｎＳＯ４’４ＨｚＯＯｌｏ １ ｇ／１．尿
素２ｇ／ｊ！、ビオチン５０■／Ｉ！、寒天２０ ｇ／
Ｉｔ。
００，０１ｇ／ｊ！、Ｆｅ５０．・７Ｈ，ＯＯ，０１ｇ
／１２．ＭｎＳＯ４’４ＨｚＯＯｌｏ １ ｇ／１．尿
素２ｇ／ｊ！、ビオチン５０■／Ｉ！、寒天２０ ｇ／
Ｉｔ。
ｐ Ｈ７，２）に塗布する。３０℃で２〜６日培養し、
生育してくるグラミシジン耐性のコロニーを取得する。
生育してくるグラミシジン耐性のコロニーを取得する。
グラミシジンはシグマ社製（グラミシジンＤまたはグラ
ミシジンＮＦともよばれる）を使用する。グラミシジン
の耐性株５０株を釣菌し、親株よりＬ−グルタミン酸生
産能が向上した菌株を分離する。代表的な菌株として、
コリネバクテリウム・グルタミクムＨ−７１１０があげ
られる。
ミシジンＮＦともよばれる）を使用する。グラミシジン
の耐性株５０株を釣菌し、親株よりＬ−グルタミン酸生
産能が向上した菌株を分離する。代表的な菌株として、
コリネバクテリウム・グルタミクムＨ−７１１０があげ
られる。
本菌株１よ、昭和６３年５月１１日付で、工業技術院微
生物工業技術研究所にＦＥＲＭ ＢＰ−１８７６として
寄託されている。
生物工業技術研究所にＦＥＲＭ ＢＰ−１８７６として
寄託されている。
本発明で用いる培地としては、炭素源、窒素源。
無機物、その他使用菌株の必要とする微１の栄養素を捏
良く含有するものであれば合成培地および天然培地のい
ずれも使用できる。
良く含有するものであれば合成培地および天然培地のい
ずれも使用できる。
すなわち炭素源としてはグルコース、フラクトース、シ
ークロース、マルトース、マンノース。
ークロース、マルトース、マンノース。
ンルビトール等の炭水化物、糖アルコール、グリセロー
ル、′ｉｌ粉、澱粉加水分解物、糖蜜などが使用でき、
また酢酸、ピルビン酸、乳酸、フマール酸、グルコン酸
等の有機酸、およびアスパラギン酸などのアミノ酸類、
あるいはエタノールなどの低級アルコールも使用できる
。
ル、′ｉｌ粉、澱粉加水分解物、糖蜜などが使用でき、
また酢酸、ピルビン酸、乳酸、フマール酸、グルコン酸
等の有機酸、およびアスパラギン酸などのアミノ酸類、
あるいはエタノールなどの低級アルコールも使用できる
。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、炭酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
、酢酸アンモニウムなどの各種無機および有機アンモニ
ウム塩類、あるいはアスパラギン酸などのアミノ酸類、
尿素および窒素含有物質、例えばペプトン、肉エキス、
コーン・ステイープ・リカー、カゼイン加水分解物、大
豆の加水分解物などの種々のものが使用できる。
アンモニウム、炭酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
、酢酸アンモニウムなどの各種無機および有機アンモニ
ウム塩類、あるいはアスパラギン酸などのアミノ酸類、
尿素および窒素含有物質、例えばペプトン、肉エキス、
コーン・ステイープ・リカー、カゼイン加水分解物、大
豆の加水分解物などの種々のものが使用できる。
無機物としてはリン酸二水素カリウム、リン酸水素二カ
リウム、硫酸マグネシウム、塩化す） ＩＪウム、硫酸
第一鉄、硫酸マンガンおよび炭酸カルシウム等が用いら
れる。
リウム、硫酸マグネシウム、塩化す） ＩＪウム、硫酸
第一鉄、硫酸マンガンおよび炭酸カルシウム等が用いら
れる。
さらに、必要に応じてビオチン、ニコチンアミド、パン
トテン酸、サイアミン等の微生物の生育に必要なビタミ
ン類も使用されるが、これらの物質は前記のような他の
培地組成に伴って培地に供されれば、特に加えなくても
よい。
トテン酸、サイアミン等の微生物の生育に必要なビタミ
ン類も使用されるが、これらの物質は前記のような他の
培地組成に伴って培地に供されれば、特に加えなくても
よい。
培養は振盪培養または深部通気攪拌培養などの好気的条
件下で行う。培養は温度２０〜４０℃で、ｐＨ３〜９の
範囲で、好ましくは中性付近に保持する。培地のｐＨ調
整は臭酸カルシウム、有機または無機の酸、アルカリ溶
液、アンモニア、ｐＨ緩所液などによって行う。培養時
間は通常１〜４日間で培養液中にＬ−グルタミン酸が生
成Ｍ積する。
件下で行う。培養は温度２０〜４０℃で、ｐＨ３〜９の
範囲で、好ましくは中性付近に保持する。培地のｐＨ調
整は臭酸カルシウム、有機または無機の酸、アルカリ溶
液、アンモニア、ｐＨ緩所液などによって行う。培養時
間は通常１〜４日間で培養液中にＬ−グルタミン酸が生
成Ｍ積する。
またＬ−グルタミン酸を蓄晴させるため、従来知られて
いるように、ビオチン咄を低く抑えたり、ビオチン含有
１の高い培地の場合には界面活性剤。
いるように、ビオチン咄を低く抑えたり、ビオチン含有
１の高い培地の場合には界面活性剤。
ペニシリン等を添加してもよい。
培ｆｆ終了後、培養液よりＬ−グルタミン酸を採取する
には、培養液より菌体などの固形分を除去し、公知のイ
オン交換処理法、ａ縮性、吸着法。
には、培養液より菌体などの固形分を除去し、公知のイ
オン交換処理法、ａ縮性、吸着法。
塩析法などを併用することにより、培養液からＬグルタ
ミン酸を回収することができる。
ミン酸を回収することができる。
以下、実施例をあげて本発明を具体的に説明する。
実施例１゜
種菌としてコリネバクテリウム・グルタミクムＨ−７１
１０（ＦＥＲＭ ＢＰ−１８７６）株を用いた。Ｈ−
７１１０株をグルコース４０ｇ／Ｉ！。
１０（ＦＥＲＭ ＢＰ−１８７６）株を用いた。Ｈ−
７１１０株をグルコース４０ｇ／Ｉ！。
酵母エキス５ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１，５ｇ／Ｉ！。
Ｋ２ＨＰＯ４０，５ｇ／ｎ、Ｍｇ ＳＯ＋・７Ｈ２００
，５ｇ＃、ビオチン１００ｇ／Ｌ尿素３ ｇ／Ｉ！。
，５ｇ＃、ビオチン１００ｇ／Ｌ尿素３ ｇ／Ｉ！。
ｐ Ｈ７，２の組成の種培地２０亀１を含む２５ Ｑｍ
ｌ容の三角フラスコで２４時間、振盪培養した。得られ
た種培養液１＋＋＋ｌを２ Ｑｍｌの下記発酵培地を含
む２５ Ｑｍｌ容の三角フラスコに植菌し、３０℃。
ｌ容の三角フラスコで２４時間、振盪培養した。得られ
た種培養液１＋＋＋ｌを２ Ｑｍｌの下記発酵培地を含
む２５ Ｑｍｌ容の三角フラスコに植菌し、３０℃。
２４時間振盪培養を行った。その時のし一グルタミン酸
生産量は２８．１ｇ／ｊ！であった。対照として親株Δ
ＴＣＣ−１３０３２を用いて同様に培養した結果、Ｌ−
グルタミン酸の生産量は２４．４ ｇ／７！であった。
生産量は２８．１ｇ／ｊ！であった。対照として親株Δ
ＴＣＣ−１３０３２を用いて同様に培養した結果、Ｌ−
グルタミン酸の生産量は２４．４ ｇ／７！であった。
また、グラミシジン耐性株の取得と同様の変異処理によ
り得られた他のエネルギー代謝阻害を示す抗生物質であ
るオリゴマイシン。
り得られた他のエネルギー代謝阻害を示す抗生物質であ
るオリゴマイシン。
アンチマイシンＡ、ルタマイシン９パリノマイシン、グ
ラミシジンＳのそれぞれの耐性株Ｍ−３４８２゜Ｍ−３
４８８，Ｍ−３４９０，Ｍ−３４９７，Ｍ−３４９９に
ついても、同様に培養を行い、Ｌ−グルタミン酸の生産
量を測定した。その結果を第１表に示す。
ラミシジンＳのそれぞれの耐性株Ｍ−３４８２゜Ｍ−３
４８８，Ｍ−３４９０，Ｍ−３４９７，Ｍ−３４９９に
ついても、同様に培養を行い、Ｌ−グルタミン酸の生産
量を測定した。その結果を第１表に示す。
発酵培地の組成：
糖蜜（糖換算）５０ｇ／ｆｆｉ、ＮＨ４Ｈ，ＰＯ４１ｇ
／ Ｒ，（Ｎ Ｈ＋）ｚＨＰ ０４ １ ｇ ／ ｊ
！ 、 （Ｎ Ｈ４）２ Ｓ ０４２ ｇ ／ ｉ’
、尿素５ ｇ／ｌ、 Ｍｎ ５０４−４Ｈ２０１０ｖｇ
／ １！、 Ｃａ ＣＯ３３０ｇ／ ｊ！、ペニシリ
ンＧ５ ｕｎ＋ｔｓ７ｍｌ （ｐ Ｈ６，５）第
１ 表 ：：ｌ’Ｊ Ｊｔ−抗生物質耐性（濃度） Ｌ−グル
タ’、ｌ−１３１！！２ オリゴマイシン （０，１
ｍｇ／ｍｌ）’、ｉ−ＦＬ３ｇ アンチマイシンＡ
（０，１ｍｇ／ｆｆ＋ｌ）Ｘ： −３４９０ルクマイシ
ン （０，１ｚｇ／ｉｆ）Ｍ−３１９７バリノマイ／
ン （０，１ｍｇ／ｍｌ）Ｍ−３４９９グラミンジンＳ
（１０ｘｒ／ｍ１）１（−７１１０グラミシジン
（１０埒／ｍｌ）、へ Ｔ ＣＣ−１３０３２ 実施例２゜ ミン酸軸／２） ２６．３ ２５．４ ２５．２ ２５．３ ２６．６ ２４．３ 種菌として、コリネバクテリウム・グルタミクムＨ−７
１１０（ＦＥＲＭ ＢＰ−１３７６）株を用いた。実
施例１と同様の種培地にＨ−７１１０株を培養して得ら
れた種培養液３９ｍ１を、下記組成の発酵培地８０ Ｑ
ｍｌを含む２２ジャーファーメンタ−に殖菌し、通気ｉ
ｌ ＶＶＩＩＩ、 １拌数８００ｒｐｍ。
／ Ｒ，（Ｎ Ｈ＋）ｚＨＰ ０４ １ ｇ ／ ｊ
！ 、 （Ｎ Ｈ４）２ Ｓ ０４２ ｇ ／ ｉ’
、尿素５ ｇ／ｌ、 Ｍｎ ５０４−４Ｈ２０１０ｖｇ
／ １！、 Ｃａ ＣＯ３３０ｇ／ ｊ！、ペニシリ
ンＧ５ ｕｎ＋ｔｓ７ｍｌ （ｐ Ｈ６，５）第
１ 表 ：：ｌ’Ｊ Ｊｔ−抗生物質耐性（濃度） Ｌ−グル
タ’、ｌ−１３１！！２ オリゴマイシン （０，１
ｍｇ／ｍｌ）’、ｉ−ＦＬ３ｇ アンチマイシンＡ
（０，１ｍｇ／ｆｆ＋ｌ）Ｘ： −３４９０ルクマイシ
ン （０，１ｚｇ／ｉｆ）Ｍ−３１９７バリノマイ／
ン （０，１ｍｇ／ｍｌ）Ｍ−３４９９グラミンジンＳ
（１０ｘｒ／ｍ１）１（−７１１０グラミシジン
（１０埒／ｍｌ）、へ Ｔ ＣＣ−１３０３２ 実施例２゜ ミン酸軸／２） ２６．３ ２５．４ ２５．２ ２５．３ ２６．６ ２４．３ 種菌として、コリネバクテリウム・グルタミクムＨ−７
１１０（ＦＥＲＭ ＢＰ−１３７６）株を用いた。実
施例１と同様の種培地にＨ−７１１０株を培養して得ら
れた種培養液３９ｍ１を、下記組成の発酵培地８０ Ｑ
ｍｌを含む２２ジャーファーメンタ−に殖菌し、通気ｉ
ｌ ＶＶＩＩＩ、 １拌数８００ｒｐｍ。
ｐ Ｈ７，６（アンモニア水により調整）で培養を行っ
た。
た。
培地中の糖が消費され、ｐ Ｈが上昇時に、ペリ／リン
Ｇを５ｕｎｉｔｓ／ｍｌになるように添加後、４０％の
砧を含む加水糖蜜を連続的に添加しながら、４３時間の
培養を行った。対照として、親株、へＴＣＣ−１３０３
２株を用いて、同様に培養を行った。Ｈ−７］１０株及
びＡＴＣＣ−１３０３２株でのグルタミン酸ｉ４：産１
を第２表に示す。
Ｇを５ｕｎｉｔｓ／ｍｌになるように添加後、４０％の
砧を含む加水糖蜜を連続的に添加しながら、４３時間の
培養を行った。対照として、親株、へＴＣＣ−１３０３
２株を用いて、同様に培養を行った。Ｈ−７］１０株及
びＡＴＣＣ−１３０３２株でのグルタミン酸ｉ４：産１
を第２表に示す。
発酵培地の組成：
糖蜜（ｉＦｉ換算）３０ｇ／ｌ、ＮＨ，Ｈ２ＰＯ。
１．２１？／Ｌ （ＮＨ９）ｚＨＰ○、 １．２ｇ
／ｉ’。
／ｉ’。
Ｍｎ５Ｏ，・４〜６Ｈ２０１００ｇ／ｌ。
Ｃｕ ＳＯ＝ ・５Ｈ２０２０ｇ／ １ （ｐＨ７，６
）第 表 菌 株 Ｌ−グルタミン酸軸／β） 対糖収率（％） ΔＴ ＣＣ−１３０３２ 発明の効果 本発明により、 収率よくＬ−グルタミン酸を得 ることかできる。
）第 表 菌 株 Ｌ−グルタミン酸軸／β） 対糖収率（％） ΔＴ ＣＣ−１３０３２ 発明の効果 本発明により、 収率よくＬ−グルタミン酸を得 ることかできる。
Claims (1)
- コリネバクテリウム属またはブレビバクテリウム属に属
し、グラミシジンに耐性を有し、Ｌ−グルタミン酸生産
能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ−グル
タミン酸を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴
とする発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15975088A JPH029384A (ja) | 1988-06-28 | 1988-06-28 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
| CN 89106345 CN1039442A (zh) | 1988-06-28 | 1989-06-28 | 生产l-谷氨酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15975088A JPH029384A (ja) | 1988-06-28 | 1988-06-28 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH029384A true JPH029384A (ja) | 1990-01-12 |
Family
ID=15700444
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15975088A Pending JPH029384A (ja) | 1988-06-28 | 1988-06-28 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH029384A (ja) |
| CN (1) | CN1039442A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1035727C (zh) * | 1991-04-02 | 1997-08-27 | 黄文涛 | L-谷氨酸发酵新工艺 |
| JP3880636B2 (ja) * | 1994-01-10 | 2007-02-14 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
| EP1293560B1 (en) * | 1994-08-19 | 2007-11-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Methods for producing L-lysine and L-glutamic acid by fermentation |
| CN100999756B (zh) * | 2006-12-18 | 2010-06-02 | 浙江大学 | 用枯草芽孢杆菌和谷氨酸棒杆菌混和培养体系制备γ-聚谷氨酸的方法 |
-
1988
- 1988-06-28 JP JP15975088A patent/JPH029384A/ja active Pending
-
1989
- 1989-06-28 CN CN 89106345 patent/CN1039442A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1039442A (zh) | 1990-02-07 |
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