JPH099987A - 配糖体及び糖転移生成物の製造法 - Google Patents
配糖体及び糖転移生成物の製造法Info
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- JPH099987A JPH099987A JP18616995A JP18616995A JPH099987A JP H099987 A JPH099987 A JP H099987A JP 18616995 A JP18616995 A JP 18616995A JP 18616995 A JP18616995 A JP 18616995A JP H099987 A JPH099987 A JP H099987A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】γ−サイクロデキストリン・グルカノトランス
フェラーゼを用いた配糖体及び糖転移生成物の製造法を
提供する。 【構成】各種のフェノール性水酸基を有する化合物或い
は糖類を受容体として、適当な糖供与体とともに広い受
容体特異性を有し、なおかつ広いpH領域で作用すること
ができるγ-CGTaseを使用し、配糖体及び糖転移生成物
を製造する。例えば、ブレビバクテリウム（Brevibacte
rium）属の生産するγ-CGTaseが用いられる。
フェラーゼを用いた配糖体及び糖転移生成物の製造法を
提供する。 【構成】各種のフェノール性水酸基を有する化合物或い
は糖類を受容体として、適当な糖供与体とともに広い受
容体特異性を有し、なおかつ広いpH領域で作用すること
ができるγ-CGTaseを使用し、配糖体及び糖転移生成物
を製造する。例えば、ブレビバクテリウム（Brevibacte
rium）属の生産するγ-CGTaseが用いられる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、γ−サイクロデキスト
リン・グルカノトランスフェラーゼ（以下、γ-CGTase
という）を用いた配糖体及び糖転移生成物の製造法に関
する。より詳細には各種のフェノール性水酸基を有する
化合物或いは糖類と、糖供与体にブレビバクテリウム
（Brevibacterium）属の生産するγ-CGTaseを作用させ
ることによる各種配糖体又は糖転移生成物の製造法に関
する。
リン・グルカノトランスフェラーゼ（以下、γ-CGTase
という）を用いた配糖体及び糖転移生成物の製造法に関
する。より詳細には各種のフェノール性水酸基を有する
化合物或いは糖類と、糖供与体にブレビバクテリウム
（Brevibacterium）属の生産するγ-CGTaseを作用させ
ることによる各種配糖体又は糖転移生成物の製造法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】従来より各種の配糖体は食品素材、食品
添加物、医薬品等として注目されている。即ち、各種の
配糖体は天然に少量づつではあるが広く存在し、また優
れた生理活性を有するにも拘らず低毒性であること等に
特徴がある。
添加物、医薬品等として注目されている。即ち、各種の
配糖体は天然に少量づつではあるが広く存在し、また優
れた生理活性を有するにも拘らず低毒性であること等に
特徴がある。
【０００３】例えば、アルブチンは、抗酸化作用、抗ア
レルギー作用、メラニン色素抑制作用等があることが知
られ、安全性の高い皮膚外用剤として知られ、また、香
のバランスを良好で保持する作用を有することから化粧
料の保香ベースの成分として利用できる。また、カテコ
ール、レゾルシノールの配糖体は、皮膚色素沈着症等の
予防及び治療、頭皮のフケの発生防止効果が知られてい
る。
レルギー作用、メラニン色素抑制作用等があることが知
られ、安全性の高い皮膚外用剤として知られ、また、香
のバランスを良好で保持する作用を有することから化粧
料の保香ベースの成分として利用できる。また、カテコ
ール、レゾルシノールの配糖体は、皮膚色素沈着症等の
予防及び治療、頭皮のフケの発生防止効果が知られてい
る。
【０００４】このように、フェノール化合物は、種々の
生理活性を有し、有用な物質であり、これを配糖体化す
ることにより、その生理活性を損なうことなく、副作用
や、水に対する溶解性等の問題点を改善することが期待
されている。
生理活性を有し、有用な物質であり、これを配糖体化す
ることにより、その生理活性を損なうことなく、副作用
や、水に対する溶解性等の問題点を改善することが期待
されている。
【０００５】また、ポリフェノール配糖体は、従来か
ら、甘味料、鎮痛剤、下剤、抗マラリヤ剤および強壮剤
等として利用されるだけでなく、優れた美白効果を発揮
する化粧品の配合成分としても利用できる有用な化合物
であり、酵素の分子間転移反応を利用して各種の配糖体
を製造する方法は従来より種々報告されている。
ら、甘味料、鎮痛剤、下剤、抗マラリヤ剤および強壮剤
等として利用されるだけでなく、優れた美白効果を発揮
する化粧品の配合成分としても利用できる有用な化合物
であり、酵素の分子間転移反応を利用して各種の配糖体
を製造する方法は従来より種々報告されている。
【０００６】例えば、糖及びアルコール性水酸基に糖転
移を行なうアミラーゼに関する研究［アミラーゼシンポ
ジウム、10巻、81〜89頁（1975）］、フェノール化合物
に糖供与体の存在下、シュークロースホスホリラーゼを
作用させることによるフェノール配糖体の製造法（特開
平６-153976）、コウジ酸に糖供与体の存在下、シュー
クロースホスホリラーゼを作用させることによるコウジ
酸配糖体の製造法（特開平６-056872）、ハイドロキシ
フラノンに糖供与体の存在下、シュークロースホスホリ
ラーゼを作用させることによるフラノン配糖体の製造法
（特開平６-135987）、エラグ酸にサイクロデキストリ
ン等の糖供与体の存在下、サイクロデキストリン合成酵
素を作用させることによるエラグ酸配糖体の製造法（特
開平５-331183）、キシランおよびメチロール置換フェ
ノール誘導体の混合物に、キシラナーゼを作用させるこ
とによるキシロオリゴシル配糖体の製造法（特開平６-0
87880）、キシランおよびアリールアルカノールの混合
物にキシラナーゼを作用させて配糖体を製造する方法
（特開平６-172403）、セルラーゼの存在下において、
糖基質とポリフェノール受容体を反応させることによる
β型ポリフェノール配糖体の製造法（特開平６-28489
7）、サイクロデキストリン合成能とマルトース分解能
を有さない新規な酵素を用いるポリフェノール配糖体の
製造法（特開平６-284896）等種々報告されている。
移を行なうアミラーゼに関する研究［アミラーゼシンポ
ジウム、10巻、81〜89頁（1975）］、フェノール化合物
に糖供与体の存在下、シュークロースホスホリラーゼを
作用させることによるフェノール配糖体の製造法（特開
平６-153976）、コウジ酸に糖供与体の存在下、シュー
クロースホスホリラーゼを作用させることによるコウジ
酸配糖体の製造法（特開平６-056872）、ハイドロキシ
フラノンに糖供与体の存在下、シュークロースホスホリ
ラーゼを作用させることによるフラノン配糖体の製造法
（特開平６-135987）、エラグ酸にサイクロデキストリ
ン等の糖供与体の存在下、サイクロデキストリン合成酵
素を作用させることによるエラグ酸配糖体の製造法（特
開平５-331183）、キシランおよびメチロール置換フェ
ノール誘導体の混合物に、キシラナーゼを作用させるこ
とによるキシロオリゴシル配糖体の製造法（特開平６-0
87880）、キシランおよびアリールアルカノールの混合
物にキシラナーゼを作用させて配糖体を製造する方法
（特開平６-172403）、セルラーゼの存在下において、
糖基質とポリフェノール受容体を反応させることによる
β型ポリフェノール配糖体の製造法（特開平６-28489
7）、サイクロデキストリン合成能とマルトース分解能
を有さない新規な酵素を用いるポリフェノール配糖体の
製造法（特開平６-284896）等種々報告されている。
【０００７】更に、糖に各種の酵素を用いた糖転移反応
についても多く報告されている。例えば、β−ガラクト
シダーゼを用いる方法（特公昭63-18457、特公昭63-653
01、特開平1-137991、特開平2-84191、特公平2-57902、
特開平6-38785等）、β−Ｄ−マンナナーゼを用いる方
法（特開平5-153992）、β1,6-N-アセチルグルコサミニ
ルトランスフェラーゼを用いる方法（特開平6-19775
6）、バチルス・セレウス由来の酵素を用いる方法（特
開平6-298791）、バチルス・ステアロサーモフィラス由
来のCGTaseを用いる方法（特公昭53-27791）などがあ
る。
についても多く報告されている。例えば、β−ガラクト
シダーゼを用いる方法（特公昭63-18457、特公昭63-653
01、特開平1-137991、特開平2-84191、特公平2-57902、
特開平6-38785等）、β−Ｄ−マンナナーゼを用いる方
法（特開平5-153992）、β1,6-N-アセチルグルコサミニ
ルトランスフェラーゼを用いる方法（特開平6-19775
6）、バチルス・セレウス由来の酵素を用いる方法（特
開平6-298791）、バチルス・ステアロサーモフィラス由
来のCGTaseを用いる方法（特公昭53-27791）などがあ
る。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、種々の
配糖体や糖転移生成物を得るこれらの方法においては、
使用する酵素の受容体特異性が問題であり、従来と比べ
より広い受容体特異性を持ち、更に対象とする化合物に
応じて、広いpH範囲で作用できる方法の開発が望まれて
いた。
配糖体や糖転移生成物を得るこれらの方法においては、
使用する酵素の受容体特異性が問題であり、従来と比べ
より広い受容体特異性を持ち、更に対象とする化合物に
応じて、広いpH範囲で作用できる方法の開発が望まれて
いた。
【０００９】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者等はこの
ような問題点を解決するため、種々検討を重ねた結果、
γ-CGTaseを用いて各種配糖体を製造することによっ
て、より広い受容体特異性が発揮されることを見い出し
本発明を完成した。
ような問題点を解決するため、種々検討を重ねた結果、
γ-CGTaseを用いて各種配糖体を製造することによっ
て、より広い受容体特異性が発揮されることを見い出し
本発明を完成した。
【００１０】即ち、本発明はフェノール性水酸基を有す
る化合物或いは糖類と、糖供与体にγ-CGTaseを作用さ
せることを特徴とする配糖体或いは糖転移生成物の製造
法に関する。
る化合物或いは糖類と、糖供与体にγ-CGTaseを作用さ
せることを特徴とする配糖体或いは糖転移生成物の製造
法に関する。
【００１１】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
より得られる配糖体の製造法は次の通りである。フェノ
ール、1,3−ジヒドロキシベンゼン、３−ヒドロキシベ
ンジルアルコール、(+)カテキン又はコウジ酸等のフェ
ノール性水酸基を有する化合物0.1〜30％、好ましくは
0.5〜５％と、マルトオリゴ糖、アミロース、アミロペ
クチン又は各種スターチ等の糖供与体0.1〜30％、好ま
しくは0.5〜20％とを含む溶液に、γ-CGTaseを添加し、
20〜60℃、好ましくは30〜50℃で１〜48時間、好ましく
は10〜24時間作用させ、反応液を得る。当該反応のpHは
使用する酵素の至適pHが良いが反応物の溶解性などを考
慮して定めることができる。例えば、３〜11で、好まし
くは５〜９である。反応液を各種溶媒による分配及び各
種クロマトグラフィーによる精製することにより、配糖
体の精製標品を得ることができる。
より得られる配糖体の製造法は次の通りである。フェノ
ール、1,3−ジヒドロキシベンゼン、３−ヒドロキシベ
ンジルアルコール、(+)カテキン又はコウジ酸等のフェ
ノール性水酸基を有する化合物0.1〜30％、好ましくは
0.5〜５％と、マルトオリゴ糖、アミロース、アミロペ
クチン又は各種スターチ等の糖供与体0.1〜30％、好ま
しくは0.5〜20％とを含む溶液に、γ-CGTaseを添加し、
20〜60℃、好ましくは30〜50℃で１〜48時間、好ましく
は10〜24時間作用させ、反応液を得る。当該反応のpHは
使用する酵素の至適pHが良いが反応物の溶解性などを考
慮して定めることができる。例えば、３〜11で、好まし
くは５〜９である。反応液を各種溶媒による分配及び各
種クロマトグラフィーによる精製することにより、配糖
体の精製標品を得ることができる。
【００１２】また、本発明により得られる糖転移生成物
の製造法は次の通りである。Ｄ−マンノースやＬ−ラム
ノース等の糖類0.1〜30％、好ましくは１〜10％と、マ
ルトオリゴ糖、アミロース、アミロペクチン又は各種ス
ターチ等の糖供与体0.1〜30％、好ましくは１〜10％と
を含む溶液に、γ-CGTaseを添加し、20〜60℃、好まし
くは30〜50℃で１〜48時間、好ましくは10〜24時間作用
させ、反応液を得る。当該反応のpHは使用する酵素の至
適pHが良いが反応物の溶解性などを考慮して定めること
ができる。例えば、３〜11で、好ましくは５〜９であ
る。各種溶媒による分配及び各種クロマトグラフィーに
よる精製により、この反応液から糖転移生成物の精製標
品を得ることができる。
の製造法は次の通りである。Ｄ−マンノースやＬ−ラム
ノース等の糖類0.1〜30％、好ましくは１〜10％と、マ
ルトオリゴ糖、アミロース、アミロペクチン又は各種ス
ターチ等の糖供与体0.1〜30％、好ましくは１〜10％と
を含む溶液に、γ-CGTaseを添加し、20〜60℃、好まし
くは30〜50℃で１〜48時間、好ましくは10〜24時間作用
させ、反応液を得る。当該反応のpHは使用する酵素の至
適pHが良いが反応物の溶解性などを考慮して定めること
ができる。例えば、３〜11で、好ましくは５〜９であ
る。各種溶媒による分配及び各種クロマトグラフィーに
よる精製により、この反応液から糖転移生成物の精製標
品を得ることができる。
【００１３】本発明に用いられるフェノール性水酸基を
有する化合物とは、例えばPhenol、Benzyl alcohol、1,
2−Dihydroxybenzene、1,3−Dihydroxybenzene、1,4−D
ihydroxybenzene、1,2,3−Trihydroxybenzene、1,3,5−
Trihydroxybenzene、３−Hydroxybenzoic acid、４−Hy
droxybenzoic acid、２−Hydroxybenzyl alcohol、３−
Hydroxybenzyl alcohol、４−Hydroxybenzyl alcohol、
Caffeic acid、Gallicacid、(+)-Catechin、(-)-Epigal
locatechin gallate、Kojic acid、Ascorbicacid、p-Ni
trophenol等が挙げられるが、他起源（例えばバチルス
・マセランスやバチルス・ステアロサーモフィラス）由
来のCGTaseに比べて配糖体の生成が良好なものとして
は、例えばPhenol、1,3−Dihydroxybenzene、３−Hydro
xybenzylalcohol、(+)Catechin、Kojic acid等である。
有する化合物とは、例えばPhenol、Benzyl alcohol、1,
2−Dihydroxybenzene、1,3−Dihydroxybenzene、1,4−D
ihydroxybenzene、1,2,3−Trihydroxybenzene、1,3,5−
Trihydroxybenzene、３−Hydroxybenzoic acid、４−Hy
droxybenzoic acid、２−Hydroxybenzyl alcohol、３−
Hydroxybenzyl alcohol、４−Hydroxybenzyl alcohol、
Caffeic acid、Gallicacid、(+)-Catechin、(-)-Epigal
locatechin gallate、Kojic acid、Ascorbicacid、p-Ni
trophenol等が挙げられるが、他起源（例えばバチルス
・マセランスやバチルス・ステアロサーモフィラス）由
来のCGTaseに比べて配糖体の生成が良好なものとして
は、例えばPhenol、1,3−Dihydroxybenzene、３−Hydro
xybenzylalcohol、(+)Catechin、Kojic acid等である。
【００１４】また、単糖類としてはD-glucose、D-galac
tose、D-mannose、D-fructose、D-glucosamine、D-arab
inose、L-arabinose、D-xylose、D-ribose、D-fucose、
L-fucose、L-rhamnose等が挙げられるが、他起源（例え
ばバチルス・マセランスやバチルス・ステアロサーモフ
ィラス）由来のCGTaseに比べて糖転移生成物の生成が良
好なものとしては、例えばD-mannose、L-rhamnoseが挙
げられる。
tose、D-mannose、D-fructose、D-glucosamine、D-arab
inose、L-arabinose、D-xylose、D-ribose、D-fucose、
L-fucose、L-rhamnose等が挙げられるが、他起源（例え
ばバチルス・マセランスやバチルス・ステアロサーモフ
ィラス）由来のCGTaseに比べて糖転移生成物の生成が良
好なものとしては、例えばD-mannose、L-rhamnoseが挙
げられる。
【００１５】本発明に使用するγ-CGTaseとは、澱粉に
作用してサイクロデキストリンを生成する作用を有する
サイクロデキストリン・グルカノトランスフェラーゼに
分類される酵素であり、澱粉溶液に作用させたときに、
α、β、γ型の各サイクロデキストリンのうち、主にγ
型を生産する酵素をいう。例えばバチルス・エスピー
（Bacillus sp.）AL６のCGTase（特開昭61-274680）、
バチルス・エスピー（Bacillus sp.）No.313 のCGTase
（特開昭62-25976）及びバチルス・フィルムス（Bacill
us firmus）290-3のCGTase〔New trend in cyclodextri
ns and derivatives25頁（1991年）、サンテ（Sante）
社（フランス、パリ）出版〕やブレビバクテリウム（Br
evibacterium）属の生産するCGTase（特開平6-11384
2）、バチルス・メガテリウム（Bacillus megaterium）
の生産するCGTase（特開平6-113843）、より具体的には
ブレビバクテリウム・エスピー（Brevibacterium sp.）
No.9605（FERM BP-4537）由来のγ-CGTase等が挙げられ
る。より好ましくは、その作用pHの広さからブレビバク
テリウム・エスピーNo.9605由来のγ-CGTaseが使用でき
る。
作用してサイクロデキストリンを生成する作用を有する
サイクロデキストリン・グルカノトランスフェラーゼに
分類される酵素であり、澱粉溶液に作用させたときに、
α、β、γ型の各サイクロデキストリンのうち、主にγ
型を生産する酵素をいう。例えばバチルス・エスピー
（Bacillus sp.）AL６のCGTase（特開昭61-274680）、
バチルス・エスピー（Bacillus sp.）No.313 のCGTase
（特開昭62-25976）及びバチルス・フィルムス（Bacill
us firmus）290-3のCGTase〔New trend in cyclodextri
ns and derivatives25頁（1991年）、サンテ（Sante）
社（フランス、パリ）出版〕やブレビバクテリウム（Br
evibacterium）属の生産するCGTase（特開平6-11384
2）、バチルス・メガテリウム（Bacillus megaterium）
の生産するCGTase（特開平6-113843）、より具体的には
ブレビバクテリウム・エスピー（Brevibacterium sp.）
No.9605（FERM BP-4537）由来のγ-CGTase等が挙げられ
る。より好ましくは、その作用pHの広さからブレビバク
テリウム・エスピーNo.9605由来のγ-CGTaseが使用でき
る。
【００１６】本発明に使用するγ-CGTaseの添加量は、
受容体（フェノール性水酸基を有する化合物又は糖類）
と糖供与体の合計重量１グラム当たり10単位以上、望ま
しくは50〜200単位である。また、本発明において、γ-
CGTaseの活性は以下のようにして求めた。
受容体（フェノール性水酸基を有する化合物又は糖類）
と糖供与体の合計重量１グラム当たり10単位以上、望ま
しくは50〜200単位である。また、本発明において、γ-
CGTaseの活性は以下のようにして求めた。
【００１７】活性測定法：基質〔1.5％可溶性澱粉、0.1
Ｍ アトキンス・パンチン（Atkins& Pantin）緩衝液（p
H10.0）〕0.5mlに酵素液0.05mlを添加し、40℃にて30分
間反応した。その後、0.1Ｎ塩酸５mlを加え反応を停止
し、0.5mlを抜き取り、ヨウ素液５mlを加え。660nmでの
吸光度の減少を測定した。１単位は、本条件下、１分間
に660nmの吸光度を１％減少させる酵素量とした。
Ｍ アトキンス・パンチン（Atkins& Pantin）緩衝液（p
H10.0）〕0.5mlに酵素液0.05mlを添加し、40℃にて30分
間反応した。その後、0.1Ｎ塩酸５mlを加え反応を停止
し、0.5mlを抜き取り、ヨウ素液５mlを加え。660nmでの
吸光度の減少を測定した。１単位は、本条件下、１分間
に660nmの吸光度を１％減少させる酵素量とした。
【００１８】以下に試験例及び実施例にて本発明を具体
的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定され
るものではない。
的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定され
るものではない。
【００１９】
【実施例】実施例１ 配糖体の製造 2.5(w/v)％溶性澱粉（片山化学製）、表１記載の各種受
容体（フェノール性水酸基を有する化合物）を2.5(w/v)
％、各種CGTaseを1.2単位含む反応液200μl（各pHの緩
衝液濃度50mM）を調製し、40℃で20時間反応した。尚、
pH5.5は５mM CaCl2を含む酢酸緩衝液、pH7.0及び9.0は
５mM CaCl2を含むホウ酸緩衝液を使用した。但し、(+)-
Catechin、(-)-Epigallocatechin gallate、p-Nitrophe
nolは濃度として、0.5(w/v)％として反応に供した。ま
た、CGTaseとしてはバチルス・マセランス由来（商品
名：コンチザイム、天野製薬社製）（表１に於いて、酵
素１と記載）、バチルス・ステアロサーモフィラス由来
（林原生化学工業社製）（表１に於いて、酵素２と記
載）及びブレビバクテリウム・エスピー（Brevibacteri
um sp.）No.9605（FERM BP-4537）由来（天野製薬社
製）（表１に於いて、酵素３と記載）を使用した。
容体（フェノール性水酸基を有する化合物）を2.5(w/v)
％、各種CGTaseを1.2単位含む反応液200μl（各pHの緩
衝液濃度50mM）を調製し、40℃で20時間反応した。尚、
pH5.5は５mM CaCl2を含む酢酸緩衝液、pH7.0及び9.0は
５mM CaCl2を含むホウ酸緩衝液を使用した。但し、(+)-
Catechin、(-)-Epigallocatechin gallate、p-Nitrophe
nolは濃度として、0.5(w/v)％として反応に供した。ま
た、CGTaseとしてはバチルス・マセランス由来（商品
名：コンチザイム、天野製薬社製）（表１に於いて、酵
素１と記載）、バチルス・ステアロサーモフィラス由来
（林原生化学工業社製）（表１に於いて、酵素２と記
載）及びブレビバクテリウム・エスピー（Brevibacteri
um sp.）No.9605（FERM BP-4537）由来（天野製薬社
製）（表１に於いて、酵素３と記載）を使用した。
【００２０】各種受容体への転移率はHPLCによる分析に
て全ピーク面積に対する転移生成物のピーク面積の比と
して表した。なお、HPLCの分析条件としては、カラム：
YMCODS-AQ303（ＹＭＣ社製）、カラム温度：30℃、流
速：1.0ml/分で行い、溶媒としては以下を使用した。
て全ピーク面積に対する転移生成物のピーク面積の比と
して表した。なお、HPLCの分析条件としては、カラム：
YMCODS-AQ303（ＹＭＣ社製）、カラム温度：30℃、流
速：1.0ml/分で行い、溶媒としては以下を使用した。
【００２１】 (A) : 20(v/v)％メタノール（リン酸でpH2.5に調製） (B) : 30(v/v)％メタノール（リン酸でpH2.5に調製） (C) : 40(v/v)％メタノール（リン酸でpH2.5に調製） (D) : 7.5(v/v)％メタノール（リン酸でpH2.5に調
製） (E) : 50mM KH2PO4（リン酸でpH2.5に調製） (F) : 50(v/v)％メタノール（リン酸でpH2.5に調製）
製） (E) : 50mM KH2PO4（リン酸でpH2.5に調製） (F) : 50(v/v)％メタノール（リン酸でpH2.5に調製）
【００２２】また、表１において、各種受容体は以下の
略名で示した。表中で「−−」は受容体が分解していた
ため配糖体の生成が確認できなかったことを示す。
略名で示した。表中で「−−」は受容体が分解していた
ため配糖体の生成が確認できなかったことを示す。
【００２３】 1,2-DHB : 1,2-Dihydroxybenzene(Catechol) 1,3-DHB : 1,3-Dihydroxybenzene(Resorcin) 1,4-DHB : 1,4-Dihydroxybenzene(Hydroquinone) 1,2,3-THB : 1,2,3-Trihydroxybenzene(Pyrogallol) 1,3,5-THB : 1,3,5-Trihydroxybenzene(Phloroglucino
l) 3-HBAD : 3-Hydroxybenzoic acid 4-HBAD : 4-Hydroxybenzoic acid 2-HBAL : 2-Hydroxybenzyl alcohol 3-HBAL : 3-Hydroxybenzyl alcohol 4-HBAL : 4-Hydroxybenzyl alcohol (-)-EGCg : (-)-Epigallocatechin gallate
l) 3-HBAD : 3-Hydroxybenzoic acid 4-HBAD : 4-Hydroxybenzoic acid 2-HBAL : 2-Hydroxybenzyl alcohol 3-HBAL : 3-Hydroxybenzyl alcohol 4-HBAL : 4-Hydroxybenzyl alcohol (-)-EGCg : (-)-Epigallocatechin gallate
【００２４】
【表１】
【００２５】表１からも明らかなように、ブレビバクテ
リウム属由来の酵素（酵素３）を使用した場合、バチル
ス・ステアロサーモフィラス由来のCGTaseと同様に広い
受容体特異性を有し、特にフェノール、1,3-ジヒドロキ
シベンゼン、３−ヒドロキシベンジル アルコール、
(+)−カテキン及びコウジ酸については配糖体を多く合
成する。
リウム属由来の酵素（酵素３）を使用した場合、バチル
ス・ステアロサーモフィラス由来のCGTaseと同様に広い
受容体特異性を有し、特にフェノール、1,3-ジヒドロキ
シベンゼン、３−ヒドロキシベンジル アルコール、
(+)−カテキン及びコウジ酸については配糖体を多く合
成する。
【００２６】また、ブレビバクテリウム属由来の酵素
は、中性（pH 7.0）やアルカリ性（pH9.0）でも配糖体
の合成能力があり、受容体の溶解性などの点で中性或い
はアルカリ側での反応を必要とする場合に特に有用であ
る。
は、中性（pH 7.0）やアルカリ性（pH9.0）でも配糖体
の合成能力があり、受容体の溶解性などの点で中性或い
はアルカリ側での反応を必要とする場合に特に有用であ
る。
【００２７】実施例２ 反応pHによる比較 実施例１と同様にして酵素１、酵素２及び酵素３につい
て1,3-ジヒドロキシベンゼン、1,3,5-トリヒドロキシベ
ンゼン、(+)-カテキン及びコウジ酸を受容体として、pH
5.5及びpH7.0の場合を比較した。その結果を表２に示
す。表中において比率は各々の酵素に於けるpH5.5とp
H7.0の生成比率を示し、比率は酵素１の各pHにおける
配糖体生成量を１としたときのpH5.5及びpH7.0での各々
の酵素用いた場合の生成比率を示す。
て1,3-ジヒドロキシベンゼン、1,3,5-トリヒドロキシベ
ンゼン、(+)-カテキン及びコウジ酸を受容体として、pH
5.5及びpH7.0の場合を比較した。その結果を表２に示
す。表中において比率は各々の酵素に於けるpH5.5とp
H7.0の生成比率を示し、比率は酵素１の各pHにおける
配糖体生成量を１としたときのpH5.5及びpH7.0での各々
の酵素用いた場合の生成比率を示す。
【００２８】
【表２】
【００２９】表２からも明らかなように、ブレビバクテ
リウム由来の酵素（酵素３）はpH7.0でも良好な配糖体
生成率を示し、特に(+)-カテキンの場合には、ほとんど
pHの影響もなく高い生成率を示した。
リウム由来の酵素（酵素３）はpH7.0でも良好な配糖体
生成率を示し、特に(+)-カテキンの場合には、ほとんど
pHの影響もなく高い生成率を示した。
【００３０】実施例３ 糖転移体の製造 ５(w/v)％溶性澱粉（片山化学製）、各種単糖類（受容
体）を５(w/v)％、各種CGTaseを0.6単位含む反応液200
μl（各pHの緩衝液濃度30mM）を調製し、40℃で20時間
反応した。尚、pH5.5は５mM CaCl2を含む酢酸緩衝液、p
H9.0は５mM CaCl2を含むホウ酸緩衝液を使用した。ま
た、CGTaseとしてはバチルス・マセランス由来、バチル
ス・ステアロサーモフィラス由来及びブレビバクテリウ
ム・エスピー（Brevibacterium sp.）No.9605（FERM BP
-4537）由来を使用した。反応後、反応液３μlを使用し
てＴＬＣで糖転移生成物を分析した。その結果を図１に
示す。図中の記号は以下の場合を示す。
体）を５(w/v)％、各種CGTaseを0.6単位含む反応液200
μl（各pHの緩衝液濃度30mM）を調製し、40℃で20時間
反応した。尚、pH5.5は５mM CaCl2を含む酢酸緩衝液、p
H9.0は５mM CaCl2を含むホウ酸緩衝液を使用した。ま
た、CGTaseとしてはバチルス・マセランス由来、バチル
ス・ステアロサーモフィラス由来及びブレビバクテリウ
ム・エスピー（Brevibacterium sp.）No.9605（FERM BP
-4537）由来を使用した。反応後、反応液３μlを使用し
てＴＬＣで糖転移生成物を分析した。その結果を図１に
示す。図中の記号は以下の場合を示す。
【００３１】Ｒ ：オリゴ糖混合液(グルコース、マ
ルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース) Ｂｌ ：ブランク（酵素液の代わりに水を用いて同様に
反応した） Ｍ ：バチルス・マセランス由来のCGTaseを使用した
場合 Ｓ ：バチルス・ステアロサーモフィラス由来のCGTa
seを使用した場合 Ｂ ：ブレビバクテリウム・エスピーNo.9605由来の
γ-CGTaseを使用した場合
ルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース) Ｂｌ ：ブランク（酵素液の代わりに水を用いて同様に
反応した） Ｍ ：バチルス・マセランス由来のCGTaseを使用した
場合 Ｓ ：バチルス・ステアロサーモフィラス由来のCGTa
seを使用した場合 Ｂ ：ブレビバクテリウム・エスピーNo.9605由来の
γ-CGTaseを使用した場合
【００３２】(1) ：受容体を含まない場合 (2) ：受容体としてＤ−グルコースを使用 (3) ：受容体としてＤ−ガラクトースを使用 (4) ：受容体としてＤ−マンノースを使用 (5) ：受容体としてＤ−フルクトースを使用 (6) ：受容体としてＤ−グルコサミンを使用 (7) ：受容体としてＤ−アラビノースを使用 (8) ：受容体としてＬ−アラビノースを使用 (9) ：受容体としてＤ−キシロースを使用 (10) ：受容体としてＤ−リボースを使用 (11) ：受容体としてＤ−フコースを使用 (12) ：受容体としてＬ−フコースを使用 (13) ：受容体としてＬ−ラムノースを使用
【００３３】ブレビバクテリウム・エスピーNo.9605由
来のγ-CGTaseを使用した場合、バチルス・ステアロサ
ーモフィラス由来のCGTaseを使用した場合と同様に、そ
の受容体特異性は広く、特にＤ−マンノース、Ｌ−ラム
ノースを受容体とした場合には転移生成物を多く合成し
た。
来のγ-CGTaseを使用した場合、バチルス・ステアロサ
ーモフィラス由来のCGTaseを使用した場合と同様に、そ
の受容体特異性は広く、特にＤ−マンノース、Ｌ−ラム
ノースを受容体とした場合には転移生成物を多く合成し
た。
【００３４】
【発明の効果】広い受容体特異性を持つγ-CGTaseを使
用することにより、フェノール性水酸基を有する化合物
の配糖体を効率よく製造することができ、更に糖転移生
成物も製造することができる。本発明の方法は広いpH領
域、即ち、中性〜アルカリ性においても実施することが
できる。
用することにより、フェノール性水酸基を有する化合物
の配糖体を効率よく製造することができ、更に糖転移生
成物も製造することができる。本発明の方法は広いpH領
域、即ち、中性〜アルカリ性においても実施することが
できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例３のＴＣＬ結果を示す図である。
Claims (5)
- 【請求項１】フェノール性水酸基を有する化合物と糖供
与体にγ−サイクロデキストリン・グルカノトランスフ
ェラーゼを作用させることを特徴とする配糖体の製造
法。 - 【請求項２】糖類と糖供与体にγ−サイクロデキストリ
ン・グルカノトランスフェラーゼを作用させることを特
徴とする糖転移生成物の製造法。 - 【請求項３】中性又はアルカリ性の条件で作用させるこ
とを特徴とする請求項１或いは請求項２記載の製造法。 - 【請求項４】γ−サイクロデキストリン・グルカノトラ
ンスフェラーゼがブレビバクテリウム属由来の酵素であ
る請求項１又は請求項２記載の製造法。 - 【請求項５】ブレビバクテリウム属に属する微生物がブ
レビバクテリウム・エスピーNo.9605（FERM BP-4537）
である請求項４記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18616995A JP3718543B2 (ja) | 1995-06-28 | 1995-06-28 | 配糖体及び糖転移生成物の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18616995A JP3718543B2 (ja) | 1995-06-28 | 1995-06-28 | 配糖体及び糖転移生成物の製造法 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2005213937A Division JP2005312464A (ja) | 2005-07-25 | 2005-07-25 | 配糖体及び糖転移生成物の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH099987A true JPH099987A (ja) | 1997-01-14 |
| JP3718543B2 JP3718543B2 (ja) | 2005-11-24 |
Family
ID=16183606
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18616995A Expired - Fee Related JP3718543B2 (ja) | 1995-06-28 | 1995-06-28 | 配糖体及び糖転移生成物の製造法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3718543B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000074662A3 (en) * | 1999-06-07 | 2002-03-14 | Univ Sheffield | Arthritis treatment |
| JP2008187927A (ja) * | 2007-02-02 | 2008-08-21 | Chiba Univ | 新規なフェノール配糖化酵素 |
-
1995
- 1995-06-28 JP JP18616995A patent/JP3718543B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000074662A3 (en) * | 1999-06-07 | 2002-03-14 | Univ Sheffield | Arthritis treatment |
| JP2008187927A (ja) * | 2007-02-02 | 2008-08-21 | Chiba Univ | 新規なフェノール配糖化酵素 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3718543B2 (ja) | 2005-11-24 |
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