JPH09107832A - パフィオペディルムのクローン増殖法 - Google Patents
パフィオペディルムのクローン増殖法Info
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- JPH09107832A JPH09107832A JP7293329A JP29332995A JPH09107832A JP H09107832 A JPH09107832 A JP H09107832A JP 7293329 A JP7293329 A JP 7293329A JP 29332995 A JP29332995 A JP 29332995A JP H09107832 A JPH09107832 A JP H09107832A
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- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
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- Cell Biology (AREA)
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 パフィオペディルムのクローン苗を実用的に
生産できる方法を提供すること。 【解決手段】 パフィオペディルムの株の花茎頂芽もし
くは腋生シュートを表面殺菌したもの、あるいは無菌培
養で得られた無菌シュートを横断切片に分割し、植物ホ
ルモンを含む培地で培養することを特徴とするパフィオ
ペディルムのクローン増殖法。
生産できる方法を提供すること。 【解決手段】 パフィオペディルムの株の花茎頂芽もし
くは腋生シュートを表面殺菌したもの、あるいは無菌培
養で得られた無菌シュートを横断切片に分割し、植物ホ
ルモンを含む培地で培養することを特徴とするパフィオ
ペディルムのクローン増殖法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、パフィオペディル
ムのクローン苗を大量に生産する方法に関する。
ムのクローン苗を大量に生産する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】パフィオペディルムは、ラン科植物の中
で最も注目されている園芸植物の一つである。これま
で、パフィオペディルムのクローン増殖技術を確立する
ために、花茎頂芽培養法（河瀬 晃四郎、1988、パフィ
オペディルムの組織培養による増殖、園芸要旨、昭63
春：376-377)、腋生シュート培養法（L.C.Huang, 1988
、AProcedure for Asexual Multiplication of Paphio
pedilums in Vitro. American Orchard Society Bullet
in, 57: 274-278 ) 、プロトコーム培養法(B.F. Mark,
1991、Tissue Culture Method for The Genus Paphiope
dilum. Australian Orchard Review, Feb.: 4-10) 、茎
頂培養法（安木 三郎ら、1995、パフィオペディルムの
茎頂培養によるメリクローン苗形成、園学雑64別 1:516
-517) の研究が行われてきた。
で最も注目されている園芸植物の一つである。これま
で、パフィオペディルムのクローン増殖技術を確立する
ために、花茎頂芽培養法（河瀬 晃四郎、1988、パフィ
オペディルムの組織培養による増殖、園芸要旨、昭63
春：376-377)、腋生シュート培養法（L.C.Huang, 1988
、AProcedure for Asexual Multiplication of Paphio
pedilums in Vitro. American Orchard Society Bullet
in, 57: 274-278 ) 、プロトコーム培養法(B.F. Mark,
1991、Tissue Culture Method for The Genus Paphiope
dilum. Australian Orchard Review, Feb.: 4-10) 、茎
頂培養法（安木 三郎ら、1995、パフィオペディルムの
茎頂培養によるメリクローン苗形成、園学雑64別 1:516
-517) の研究が行われてきた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これらの方法
を用いて、パフィオペディルムのクローン増殖を行って
も、増殖率が低かったり、増殖できない場合がある。そ
のため、現在に至るまで、いずれの方法もパフィオペデ
ィルムのクローン増殖技術として実用化されていない。
これらの主な原因として、培養時に組織の褐変による枯
死と、クローン増殖に相応しい培養材料と培養環境の組
み合わせが選ばれていないことが考えられる。
を用いて、パフィオペディルムのクローン増殖を行って
も、増殖率が低かったり、増殖できない場合がある。そ
のため、現在に至るまで、いずれの方法もパフィオペデ
ィルムのクローン増殖技術として実用化されていない。
これらの主な原因として、培養時に組織の褐変による枯
死と、クローン増殖に相応しい培養材料と培養環境の組
み合わせが選ばれていないことが考えられる。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明の目的は、パフィ
オペディルムのクローン苗を実用的に生産できる方法を
提供することである。
オペディルムのクローン苗を実用的に生産できる方法を
提供することである。
【０００５】請求項１記載の本発明は、パフィオペディ
ルムの株の花茎頂芽もしくは腋生シュートを表面殺菌し
たもの、あるいは無菌培養で得られた無菌シュートを横
断切片に分割し、植物ホルモンを含む培地で培養するこ
とを特徴とするパフィオペディルムのクローン増殖法で
ある。 ？実施例の実生苗は「無菌シュート」に該当しますか？ 請求項２記載の本発明は、上記の横断切片を培養する培
地として、培養物より生成されるポリフェノール等の高
分子の増殖阻害物質を拡散もしくは吸着することが可能
な固形支持体を含む液体培地を用いることを特徴とする
パフィオペディルムのクローン増殖法である。
ルムの株の花茎頂芽もしくは腋生シュートを表面殺菌し
たもの、あるいは無菌培養で得られた無菌シュートを横
断切片に分割し、植物ホルモンを含む培地で培養するこ
とを特徴とするパフィオペディルムのクローン増殖法で
ある。 ？実施例の実生苗は「無菌シュート」に該当しますか？ 請求項２記載の本発明は、上記の横断切片を培養する培
地として、培養物より生成されるポリフェノール等の高
分子の増殖阻害物質を拡散もしくは吸着することが可能
な固形支持体を含む液体培地を用いることを特徴とする
パフィオペディルムのクローン増殖法である。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明の方法では、材料として開
花株または開花前のつぼみに由来する花茎頂芽や若い腋
生シュートなどが用いられる。パフィオペディルム株の
花茎頂芽培養は、常温（通常２３〜２７℃、好ましくは
約２５℃）で連続もしくは１６時間の照明下で行う通常
の条件で実施すればよい。この花茎頂芽培養は無菌的に
行うことが望ましい。無菌培養でない方法で得られた花
茎頂芽もしくは腋生シュートは表面殺菌して用いる。な
お、開花前のつぼみ内の花茎頂芽を材料として選択する
と、表面殺菌後の生存率が高いので、好ましい。この場
合、パフィオペディルム株からつぼみを採取し、含水エ
タノール、好ましくは７０％エタノールで数回洗浄した
後、５〜１０分間、好ましくは約１０分間含水エタノー
ル、好ましくは７０％エタノール中に浸漬し、次いで界
面活性剤、例えば約０．１％のツイーン２０を含んだWi
lson液のような塩素系殺菌剤中で約１０分間振盪して表
面殺菌し、次に滅菌水で数回洗うことによって雑菌等に
よる汚染率を最小限に抑えることができる。上記の如
く、無菌培養でない方法で得られた花茎頂芽もしくは腋
生シュートは表面殺菌した後に材料として用い、また無
菌培養で得られた無菌シュートはそのまま材料として用
いる。これらを培地に置床して培養する。なお、殺菌さ
れたつぼみの内から取り出した花茎頂芽を用いる場合
は、その基部より0.５〜１．０ｃｍの花茎を残すように
調整した方が、褐変による枯死の防止に有効である。
花株または開花前のつぼみに由来する花茎頂芽や若い腋
生シュートなどが用いられる。パフィオペディルム株の
花茎頂芽培養は、常温（通常２３〜２７℃、好ましくは
約２５℃）で連続もしくは１６時間の照明下で行う通常
の条件で実施すればよい。この花茎頂芽培養は無菌的に
行うことが望ましい。無菌培養でない方法で得られた花
茎頂芽もしくは腋生シュートは表面殺菌して用いる。な
お、開花前のつぼみ内の花茎頂芽を材料として選択する
と、表面殺菌後の生存率が高いので、好ましい。この場
合、パフィオペディルム株からつぼみを採取し、含水エ
タノール、好ましくは７０％エタノールで数回洗浄した
後、５〜１０分間、好ましくは約１０分間含水エタノー
ル、好ましくは７０％エタノール中に浸漬し、次いで界
面活性剤、例えば約０．１％のツイーン２０を含んだWi
lson液のような塩素系殺菌剤中で約１０分間振盪して表
面殺菌し、次に滅菌水で数回洗うことによって雑菌等に
よる汚染率を最小限に抑えることができる。上記の如
く、無菌培養でない方法で得られた花茎頂芽もしくは腋
生シュートは表面殺菌した後に材料として用い、また無
菌培養で得られた無菌シュートはそのまま材料として用
いる。これらを培地に置床して培養する。なお、殺菌さ
れたつぼみの内から取り出した花茎頂芽を用いる場合
は、その基部より0.５〜１．０ｃｍの花茎を残すように
調整した方が、褐変による枯死の防止に有効である。
【０００７】本発明に用いる花茎頂芽や腋生シュートの
培養では、培養物より生成されるポリフェノール等の高
分子の増殖阻害物質を拡散もしくは吸着することが可能
な材料を固形支持体として用いる。固形支持体として
は、例えばロックウールや濾紙（ペーパーヴィック）等
が好適である。さらに、通常はジェランガム等のゲル化
剤も支持体として用いられ、所望により吸着材料として
ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等を培地に加えること
ができ、ＰＶＰの添加は褐変抑制に有効である。
培養では、培養物より生成されるポリフェノール等の高
分子の増殖阻害物質を拡散もしくは吸着することが可能
な材料を固形支持体として用いる。固形支持体として
は、例えばロックウールや濾紙（ペーパーヴィック）等
が好適である。さらに、通常はジェランガム等のゲル化
剤も支持体として用いられ、所望により吸着材料として
ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等を培地に加えること
ができ、ＰＶＰの添加は褐変抑制に有効である。
【０００８】培地は、ＭＳ培地，１／２ＭＳ培地等の植
物組織培養用基本培地に、植物ホルモンを加えたものを
使用する。植物ホルモンとしては、ナフタレン酢酸など
のオーキシン類が好ましく、通常はこれにカイネチンま
たはベンジルアデニンのようなサイトカイニン類を組み
合わせる。植物ホルモンを含む培地の具体例について述
べると、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）のようなオーキシン
類を０．１〜１．０ｍｇ／リットル、好ましくは０．５
ｍｇ／リットル、ベンジルアデニン（ＢＡ）のようなサ
イトカイニン類を０．３〜１０ｍｇ／リットル、好まし
くは３ｍｇ／リットルおよび蔗糖２０ｇ／リットルを添
加し、その他にアデニンを約１０．０ｍｇ／リットル、
ココナツウォーターを１０〜１５％、ＰＶＰを６００〜
１０００ｐｐｍ、好ましくは約８００ｐｐｍ等を添加し
てもよい。培地にＮＡＡやＢＡを加えることにより、シ
ュートがより速く成長するようになり、またＰＶＰの添
加によって培養時の褐変による枯死が防止できる。
物組織培養用基本培地に、植物ホルモンを加えたものを
使用する。植物ホルモンとしては、ナフタレン酢酸など
のオーキシン類が好ましく、通常はこれにカイネチンま
たはベンジルアデニンのようなサイトカイニン類を組み
合わせる。植物ホルモンを含む培地の具体例について述
べると、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）のようなオーキシン
類を０．１〜１．０ｍｇ／リットル、好ましくは０．５
ｍｇ／リットル、ベンジルアデニン（ＢＡ）のようなサ
イトカイニン類を０．３〜１０ｍｇ／リットル、好まし
くは３ｍｇ／リットルおよび蔗糖２０ｇ／リットルを添
加し、その他にアデニンを約１０．０ｍｇ／リットル、
ココナツウォーターを１０〜１５％、ＰＶＰを６００〜
１０００ｐｐｍ、好ましくは約８００ｐｐｍ等を添加し
てもよい。培地にＮＡＡやＢＡを加えることにより、シ
ュートがより速く成長するようになり、またＰＶＰの添
加によって培養時の褐変による枯死が防止できる。
【０００９】本発明の方法では、横断切片は上記の花茎
頂芽や腋生シュート培養から得られた無菌的なシュート
から作成できる。例えば、上記の培地で３〜５ヶ月間２
３〜２７℃、好ましくは２５℃で、１０００〜４０００
ルクス、好ましくは１７００クスの１２〜２４時間、好
ましくは１６時間照明下の条件で培養して得た３〜５葉
を有する無菌シュートを用いる。この無菌シュートを除
根してから、基部より厚さ約２ｍｍの輪切り切片を４〜
６切片に調整し、これを横断切片として切片培養用培地
に置床する。
頂芽や腋生シュート培養から得られた無菌的なシュート
から作成できる。例えば、上記の培地で３〜５ヶ月間２
３〜２７℃、好ましくは２５℃で、１０００〜４０００
ルクス、好ましくは１７００クスの１２〜２４時間、好
ましくは１６時間照明下の条件で培養して得た３〜５葉
を有する無菌シュートを用いる。この無菌シュートを除
根してから、基部より厚さ約２ｍｍの輪切り切片を４〜
６切片に調整し、これを横断切片として切片培養用培地
に置床する。
【００１０】本発明の方法では、切片培養用培地の支持
体として通常ジェランガム等のゲル化剤を用いる。さら
に、培養物より生成されるポリフェノール等の高分子の
増殖阻害物質を拡散もしくは吸着することが可能な材料
を固形支持体として用いる。固形支持体としては、例え
ばロックウールや濾紙（ペーパーヴィック）等があり、
さらに所望により培地に吸着材料として前述のＰＶＰ等
を加えると、褐変抑制に有効である。なお、ジェランガ
ムの添加量は０．２〜０．４％が適当であり、ロックウ
ールなどは液体培地の液面より約１ｃｍ高いものを作成
して用いる。
体として通常ジェランガム等のゲル化剤を用いる。さら
に、培養物より生成されるポリフェノール等の高分子の
増殖阻害物質を拡散もしくは吸着することが可能な材料
を固形支持体として用いる。固形支持体としては、例え
ばロックウールや濾紙（ペーパーヴィック）等があり、
さらに所望により培地に吸着材料として前述のＰＶＰ等
を加えると、褐変抑制に有効である。なお、ジェランガ
ムの添加量は０．２〜０．４％が適当であり、ロックウ
ールなどは液体培地の液面より約１ｃｍ高いものを作成
して用いる。
【００１１】切片培養に使用する培地はＭＳ培地，１／
２ＭＳ培地等の植物組織培養用基本培地に、ナフタレン
酢酸（ＮＡＡ）のようなオーキシン類を0.１〜３．０ｍ
ｇ／リットル、カイネチンのようなサイトカイニン類を
１〜１０ｍｇ／リットルおよび蔗糖１５ｇ／リットルを
添加したもので、その他にアデニンを約１０．０ｍｇ／
リットル、ココナツウォーターを１０〜１５％、ＰＶＰ
を６００〜１０００ｐｐｍ、好ましくは約８００ｐｐｍ
等を添加してもよい。培地中の植物ホルモンの濃度が低
いと、十分な効果が得られず、高すぎると逆効果となる
ので、好ましくない。
２ＭＳ培地等の植物組織培養用基本培地に、ナフタレン
酢酸（ＮＡＡ）のようなオーキシン類を0.１〜３．０ｍ
ｇ／リットル、カイネチンのようなサイトカイニン類を
１〜１０ｍｇ／リットルおよび蔗糖１５ｇ／リットルを
添加したもので、その他にアデニンを約１０．０ｍｇ／
リットル、ココナツウォーターを１０〜１５％、ＰＶＰ
を６００〜１０００ｐｐｍ、好ましくは約８００ｐｐｍ
等を添加してもよい。培地中の植物ホルモンの濃度が低
いと、十分な効果が得られず、高すぎると逆効果となる
ので、好ましくない。
【００１２】横断切片を上記の培地に置床し、２３〜２
７℃、好ましくは２５℃で１０００〜４０００ルクス、
好ましくは１７００ルクスの１２〜２４時間、好ましく
は１６時間照明下で培養する。このような状態で約３ヶ
月培養することによって、各切片からマルチシュートが
形成される。形成されたマルチシュートを３〜５葉にな
るまで成長させた後、これより横断切片を作成し、繰返
し横断切片の培養を行う。このようにすることにより、
パフィオペディルムのクローン苗の大量増殖が可能とな
る。
７℃、好ましくは２５℃で１０００〜４０００ルクス、
好ましくは１７００ルクスの１２〜２４時間、好ましく
は１６時間照明下で培養する。このような状態で約３ヶ
月培養することによって、各切片からマルチシュートが
形成される。形成されたマルチシュートを３〜５葉にな
るまで成長させた後、これより横断切片を作成し、繰返
し横断切片の培養を行う。このようにすることにより、
パフィオペディルムのクローン苗の大量増殖が可能とな
る。
【００１３】
【実施例】次に、本発明を実施例により詳しく説明す
る。 実施例１ パフィオ・シャルメイン（Paphiopedilums Sharmain)の
開花株の花茎頂芽および開花前株のつぼみを採取し、７
０％エタノールで３回表面を洗浄した後、１０分間７０
％エタノール中に浸漬した。次に、０．１％のツイーン
２０を含んだWilson液中で約１０分間振盪して表面殺菌
した後、滅菌水で３回洗った。このようにして殺菌され
た開花株の花茎頂芽および開花前株のつぼみの内から花
茎頂芽を取り出し、花茎頂芽の基部より０．５ｃｍの花
茎を残すように調整した。
る。 実施例１ パフィオ・シャルメイン（Paphiopedilums Sharmain)の
開花株の花茎頂芽および開花前株のつぼみを採取し、７
０％エタノールで３回表面を洗浄した後、１０分間７０
％エタノール中に浸漬した。次に、０．１％のツイーン
２０を含んだWilson液中で約１０分間振盪して表面殺菌
した後、滅菌水で３回洗った。このようにして殺菌され
た開花株の花茎頂芽および開花前株のつぼみの内から花
茎頂芽を取り出し、花茎頂芽の基部より０．５ｃｍの花
茎を残すように調整した。
【００１４】次に、ジェランガム０．２％およびロック
ウール（２．０φ（ｃｍ）×３ｃｍ（長さ）のロックウ
ール支持体）を支持体とした１／２ＭＳ培地にＮＡＡを
０．５ｍｇ／リットル、ＢＡを３ｍｇ／リットル、蔗糖
２０ｇ／リットルを添加し、その他にアデニンを約１
０．０ｍｇ／リットル、ココナツウォーターを１５％、
ＰＶＰを約８００ｐｐｍを添加した液体培地８ｍｌを入
れた２．５φ（ｃｍ）×１５ｃｍ（深さ）の培養用試験
管内に上記の開花株の花茎頂芽および開花前株のつぼみ
の内から花茎頂芽を置床した。次いで、２５℃で１７０
０ルクスの１６時間照明下で培養を行った。３ヶ月後に
シュートの形成について調査した結果を第１表に示し
た。
ウール（２．０φ（ｃｍ）×３ｃｍ（長さ）のロックウ
ール支持体）を支持体とした１／２ＭＳ培地にＮＡＡを
０．５ｍｇ／リットル、ＢＡを３ｍｇ／リットル、蔗糖
２０ｇ／リットルを添加し、その他にアデニンを約１
０．０ｍｇ／リットル、ココナツウォーターを１５％、
ＰＶＰを約８００ｐｐｍを添加した液体培地８ｍｌを入
れた２．５φ（ｃｍ）×１５ｃｍ（深さ）の培養用試験
管内に上記の開花株の花茎頂芽および開花前株のつぼみ
の内から花茎頂芽を置床した。次いで、２５℃で１７０
０ルクスの１６時間照明下で培養を行った。３ヶ月後に
シュートの形成について調査した結果を第１表に示し
た。
【００１５】
【表１】
【００１６】表から明らかなように、開花前の花茎頂芽
はジェランガム，ロックウールのいずれの支持体でも同
様のシュート形成数を示したが、開花株の花茎頂芽はロ
ックウールを支持体とした方が褐変が少なく、多数のシ
ュート形成数を示した。
はジェランガム，ロックウールのいずれの支持体でも同
様のシュート形成数を示したが、開花株の花茎頂芽はロ
ックウールを支持体とした方が褐変が少なく、多数のシ
ュート形成数を示した。
【００１７】実施例２ 無菌シュートの横断切片培養において、無菌培養で育成
した交配株（品種パフィオ・ネッティと品種パフィオ・
マウディアエとを交配したもの）の３〜５葉を展葉した
実生苗（無菌シュートと同等）を材料とし、除根した
後、基部より厚さ約２ｍｍの輪切り横断切片を苗当り５
切片に調整した（図１参照）。
した交配株（品種パフィオ・ネッティと品種パフィオ・
マウディアエとを交配したもの）の３〜５葉を展葉した
実生苗（無菌シュートと同等）を材料とし、除根した
後、基部より厚さ約２ｍｍの輪切り横断切片を苗当り５
切片に調整した（図１参照）。
【００１８】次に、寒天０．６％、ジェランガム０．２
％、濾紙および液体培地を支持体として、１／２ＭＳ培
地にＮＡＡを１．０ｍｇ／リットル、カイネチンを３ｍ
ｇ／リットル、蔗糖１５ｇ／リットルを添加し、その他
にアデニンを１０．０ｍｇ／リットル、ココナツウォー
ターを１５％、ＰＶＰを約８００ｐｐｍを添加した培地
に上記の横断切片を置床した。その後、２５℃で１７０
０ルクスの１６時間照明下で培養を行った。３ヶ月後に
シュートの形成について調査した結果を第２表に示し
た。表中のシュート形成切片数は、培養した切片のう
ち、シュートを形成した切片の数を、シュート形成総数
は、培養した切片から形成されたシュートの数を示す。
なお、濾紙の場合はペーパーヴイック法（２．５φ（ｃ
ｍ）×１５ｃｍ（深さ）の培養用試験管内にWhatman N
o.2濾紙で２．０φ（ｃｍ）×３ｃｍ（長さ）の円筒状
ペーパーヴイックを形成し、８ｍｌの液体培地を入れ
る）によって行った。また、液体培地の場合は２ｒｐｍ
の回転培養を実施した。
％、濾紙および液体培地を支持体として、１／２ＭＳ培
地にＮＡＡを１．０ｍｇ／リットル、カイネチンを３ｍ
ｇ／リットル、蔗糖１５ｇ／リットルを添加し、その他
にアデニンを１０．０ｍｇ／リットル、ココナツウォー
ターを１５％、ＰＶＰを約８００ｐｐｍを添加した培地
に上記の横断切片を置床した。その後、２５℃で１７０
０ルクスの１６時間照明下で培養を行った。３ヶ月後に
シュートの形成について調査した結果を第２表に示し
た。表中のシュート形成切片数は、培養した切片のう
ち、シュートを形成した切片の数を、シュート形成総数
は、培養した切片から形成されたシュートの数を示す。
なお、濾紙の場合はペーパーヴイック法（２．５φ（ｃ
ｍ）×１５ｃｍ（深さ）の培養用試験管内にWhatman N
o.2濾紙で２．０φ（ｃｍ）×３ｃｍ（長さ）の円筒状
ペーパーヴイックを形成し、８ｍｌの液体培地を入れ
る）によって行った。また、液体培地の場合は２ｒｐｍ
の回転培養を実施した。
【００１９】
【表２】
【００２０】
【発明の効果】本発明により、多数の腋芽を含んだ無菌
的なシュートを横断切片とし、培養することによってマ
ルチシュートの形成が実現された。また、花茎頂芽培養
およびシュート横断切片培養において、ロックウールや
濾紙を固体支持体として用い、植物ホルモンを含有する
液体培地との組合せによって組織の褐変による枯死を有
効に防止することができた。さらに、開花前のつぼみを
材料とした殺菌方法や培地組成および培養条件の最適化
によって、パフィオペディルムのクローン増殖技術によ
る大量生産の実用化が可能となった。
的なシュートを横断切片とし、培養することによってマ
ルチシュートの形成が実現された。また、花茎頂芽培養
およびシュート横断切片培養において、ロックウールや
濾紙を固体支持体として用い、植物ホルモンを含有する
液体培地との組合せによって組織の褐変による枯死を有
効に防止することができた。さらに、開花前のつぼみを
材料とした殺菌方法や培地組成および培養条件の最適化
によって、パフィオペディルムのクローン増殖技術によ
る大量生産の実用化が可能となった。
【図１】 実生苗からの横断切片の調製を示した図であ
る。
る。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成７年１２月２１日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００５】請求項１記載の本発明は、パフィオペディ
ルムの株の花茎頂芽もしくは腋生シュートを表面殺菌し
たもの、あるいは無菌培養で得られた無菌シュートを横
断切片に分割し、植物ホルモンを含む培地で培養するこ
とを特徴とするパフィオペディルムのクローン増殖法で
ある。請求項２記載の本発明は、上記の横断切片を培養
する培地として、培養物より生成されるポリフェノール
等の高分子の増殖阻害物質を拡散もしくは吸着すること
が可能な固形支持体を含む液体培地を用いることを特徴
とするパフィオペディルムのクローン増殖法である。
ルムの株の花茎頂芽もしくは腋生シュートを表面殺菌し
たもの、あるいは無菌培養で得られた無菌シュートを横
断切片に分割し、植物ホルモンを含む培地で培養するこ
とを特徴とするパフィオペディルムのクローン増殖法で
ある。請求項２記載の本発明は、上記の横断切片を培養
する培地として、培養物より生成されるポリフェノール
等の高分子の増殖阻害物質を拡散もしくは吸着すること
が可能な固形支持体を含む液体培地を用いることを特徴
とするパフィオペディルムのクローン増殖法である。
Claims (7)
- 【請求項１】 パフィオペディルムの株の花茎頂芽もし
くは腋生シュートを表面殺菌したもの、あるいは無菌培
養で得られた無菌シュートを横断切片に分割し、植物ホ
ルモンを含む培地で培養することを特徴とするパフィオ
ペディルムのクローン増殖法。 - 【請求項２】 請求項１記載の培地として、培養物より
生成されるポリフェノール等の高分子の増殖阻害物質を
拡散もしくは吸着することが可能な固形支持体を含む液
体培地を用いることを特徴とするパフィオペディルムの
クローン増殖法。 - 【請求項３】 請求項１記載の花茎頂芽が開花株および
／または開花前株のつぼみに由来するものである請求項
１記載の増殖法。 - 【請求項４】 無菌シュートが３〜５葉を展葉した苗で
ある請求項１記載の増殖法。 - 【請求項５】 培地が植物ホルモンとしてナフタレン酢
酸とカイネチンまたはベンジルアデニンを含有するもの
である請求項１記載の増殖法。 - 【請求項６】 培地が植物ホルモンと共にポリビニルピ
ロリドンを含むものである請求項１記載の増殖法。 - 【請求項７】 固形支持体がロックウールおよび濾紙の
いずれかである請求項２記載の増殖法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7293329A JPH09107832A (ja) | 1995-10-17 | 1995-10-17 | パフィオペディルムのクローン増殖法 |
| EP96935343A EP0800761A4 (en) | 1995-10-17 | 1996-10-16 | METHOD FOR CLONING PAPHIOPEDILA |
| US08/849,221 US6060313A (en) | 1995-10-17 | 1996-10-16 | Methods for clone-multiplication of paphiopedilums |
| PCT/JP1996/002998 WO1997014295A1 (fr) | 1995-10-17 | 1996-10-16 | Processus de clonage de paphiopedila |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7293329A JPH09107832A (ja) | 1995-10-17 | 1995-10-17 | パフィオペディルムのクローン増殖法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09107832A true JPH09107832A (ja) | 1997-04-28 |
Family
ID=17793419
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7293329A Pending JPH09107832A (ja) | 1995-10-17 | 1995-10-17 | パフィオペディルムのクローン増殖法 |
Country Status (4)
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|---|---|
| US (1) | US6060313A (ja) |
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1996
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- 1996-10-16 US US08/849,221 patent/US6060313A/en not_active Expired - Fee Related
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|---|---|
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| EP0800761A4 (en) | 1999-01-20 |
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