JPH08781B2 - グルカゴン様生理活性剤 - Google Patents
グルカゴン様生理活性剤Info
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- JPH08781B2 JPH08781B2 JP61307504A JP30750486A JPH08781B2 JP H08781 B2 JPH08781 B2 JP H08781B2 JP 61307504 A JP61307504 A JP 61307504A JP 30750486 A JP30750486 A JP 30750486A JP H08781 B2 JPH08781 B2 JP H08781B2
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Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、高アンモニア血症，低血糖症等に有効な、
下記の構造からなるグルカゴン様生理活性剤（以下、GS
Pと記す）に関するものである。Ala−Val−Pro−Tyr−P
ro−Gln−Arg（Alaはアラニン、Valはバリン、Proはプ
ロリン、Tyrはチロシン、Glnはグルタミン、Argはアル
ギニンを示す。） （従来技術） 生体内では、アミノ酸，蛋白質の代謝の一環として、
生成されるアンモニアを尿素に転換し、体外へ排泄する
尿素サイクルという機構が作働しているが、この尿素サ
イクルの酵素系の欠陥あるいは促進ホルモンの不足など
により高アンモニア血症が生じる場合がある。
下記の構造からなるグルカゴン様生理活性剤（以下、GS
Pと記す）に関するものである。Ala−Val−Pro−Tyr−P
ro−Gln−Arg（Alaはアラニン、Valはバリン、Proはプ
ロリン、Tyrはチロシン、Glnはグルタミン、Argはアル
ギニンを示す。） （従来技術） 生体内では、アミノ酸，蛋白質の代謝の一環として、
生成されるアンモニアを尿素に転換し、体外へ排泄する
尿素サイクルという機構が作働しているが、この尿素サ
イクルの酵素系の欠陥あるいは促進ホルモンの不足など
により高アンモニア血症が生じる場合がある。
従来、この高アンモニア血症に有効なペプチドホルモ
ンとしてグルカゴンが知られている。正常肝臓の培養細
胞には尿素合成の機能があるが、この培養細胞にグルカ
ゴンを加えることにより、尿素合成は促進される。
ンとしてグルカゴンが知られている。正常肝臓の培養細
胞には尿素合成の機能があるが、この培養細胞にグルカ
ゴンを加えることにより、尿素合成は促進される。
また、グルカゴンは、アデニルサイクラーゼを活性化
し、サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼ，グリ
コーゲンホスホリラーゼを介してグリコーゲン分解を促
進し、一方で、グリコーゲン合成酵素の活性抑制により
グリコーゲン合成を抑制する。このことから、グルカゴ
ンは、経口糖尿病薬やインシュリンによる低血糖症の治
療などにも用いられている。
し、サイクリックAMP依存性プロテインキナーゼ，グリ
コーゲンホスホリラーゼを介してグリコーゲン分解を促
進し、一方で、グリコーゲン合成酵素の活性抑制により
グリコーゲン合成を抑制する。このことから、グルカゴ
ンは、経口糖尿病薬やインシュリンによる低血糖症の治
療などにも用いられている。
（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、グルカゴンを膵臓からの抽出によって
得る場合、得られるグルカゴンは微量であり、かつ操作
は多工程を要し繁雑である。合成によって得る場合は、
グルカゴンはアミノ酸29個からなる長いペプチドである
ため、合成する時間、費用等がかかり経済的に有利でな
い。
得る場合、得られるグルカゴンは微量であり、かつ操作
は多工程を要し繁雑である。合成によって得る場合は、
グルカゴンはアミノ酸29個からなる長いペプチドである
ため、合成する時間、費用等がかかり経済的に有利でな
い。
（問題を解決するための手段） 本発明者らは、グルカゴンと同様の効果を有する物質
を経済的に有利にかつ容易な方法で得ることを目的に鋭
意研究を重ねた結果、牛由来カゼインをトリプシンなど
で分解することにより得られたペプチドがグルカゴン様
生理活性を有することを見い出し、この知見に基づいて
本発明に至った。すなわち本発明は、下記の構造からな
るグルカゴン様生理活性剤である。
を経済的に有利にかつ容易な方法で得ることを目的に鋭
意研究を重ねた結果、牛由来カゼインをトリプシンなど
で分解することにより得られたペプチドがグルカゴン様
生理活性を有することを見い出し、この知見に基づいて
本発明に至った。すなわち本発明は、下記の構造からな
るグルカゴン様生理活性剤である。
Ala−Val−Pro−Tyr−Pro−Gln−Arg本発明のGSPと同
一のペプチドは、アンジオテンシン転換酵素阻害剤とし
て知られているものであるが（特公昭61−51562）、こ
のペプチドがグルカゴン様生理活性を有することは、本
発明者らが始めて見い出した知見である。
一のペプチドは、アンジオテンシン転換酵素阻害剤とし
て知られているものであるが（特公昭61−51562）、こ
のペプチドがグルカゴン様生理活性を有することは、本
発明者らが始めて見い出した知見である。
本発明によるGSPを得るには、特公昭61−51562に記載
されているように、牛由来カゼインをpH5.5〜9.0の条件
下、トリプシンにより分解し、分解物を100℃程度の加
熱処理又は酸を加えて処理することによりトリプシン及
び未分解のカゼインを沈澱させ、この沈澱物を遠心分離
などにより除去する。このようにして得た母液を水酸化
ナトリウムなどのアルカリで中和したのち、減圧下で２
〜３倍に濃縮する。このようにして得た濃縮液を精製し
て製品を得る。
されているように、牛由来カゼインをpH5.5〜9.0の条件
下、トリプシンにより分解し、分解物を100℃程度の加
熱処理又は酸を加えて処理することによりトリプシン及
び未分解のカゼインを沈澱させ、この沈澱物を遠心分離
などにより除去する。このようにして得た母液を水酸化
ナトリウムなどのアルカリで中和したのち、減圧下で２
〜３倍に濃縮する。このようにして得た濃縮液を精製し
て製品を得る。
また、公知のペプチド合成手段を利用して得ることも
可能である。
可能である。
すなわち、一方のアミノ酸のアミノ基をベンジルオキ
シカルボニル基又は、ｔ−ブトキシカルボニル基等で保
護、他方のアミノ酸又はペプチドのカルボキシル基をベ
ンジルエステル等で保護し、DCC（N,N′−ジシクロヘキ
シルカルボジイミド）等でカップリングさせる。この操
作を繰り返し、保護基を脱離させ、精製して製品を得る
ことができる。
シカルボニル基又は、ｔ−ブトキシカルボニル基等で保
護、他方のアミノ酸又はペプチドのカルボキシル基をベ
ンジルエステル等で保護し、DCC（N,N′−ジシクロヘキ
シルカルボジイミド）等でカップリングさせる。この操
作を繰り返し、保護基を脱離させ、精製して製品を得る
ことができる。
（効果） 本発明のGSPは、経済的に有利に、かつ容易な方法で
得ることができ、尿素合成促進作用及びグリコーゲン合
成抑制作用を有し、高アンモニア血症および低血糖症に
対して有効である。
得ることができ、尿素合成促進作用及びグリコーゲン合
成抑制作用を有し、高アンモニア血症および低血糖症に
対して有効である。
またGSPは、単独でも尿素合成促進作用及びグリコー
ゲン分解促進作用を表わすが、グルカゴンと併用するこ
とにより、GSPはグルカゴンの該二作用を増強する作用
もある。
ゲン分解促進作用を表わすが、グルカゴンと併用するこ
とにより、GSPはグルカゴンの該二作用を増強する作用
もある。
（実施例） 次に実施例により本発明のGSPの生理作用について説
明する。
明する。
実施例１ GSPの尿素合成に及ぼす影響 ウィスター（Wistar）系雄ラット（体重約250g）よ
り、セグレンらの方法（P.O.Seglen,Methods in Cell B
iology 13,29（1976））を改良した中村らの方法（蛋
白質核酸酵素 別冊No.24動物実験の手技手法,P.55）に
より、肝臓細胞を単離し、10％仔牛血清を含むウィリア
ムズＥ培地（Flow Laboratories社製）で、１×105細胞
／培養皿底面1cm2（培養液125μを含む）の濃度で24
時間培養した後、血清およびアルギニンを含まないウィ
リアムズＥ培地でさらに24時間培養した。
り、セグレンらの方法（P.O.Seglen,Methods in Cell B
iology 13,29（1976））を改良した中村らの方法（蛋
白質核酸酵素 別冊No.24動物実験の手技手法,P.55）に
より、肝臓細胞を単離し、10％仔牛血清を含むウィリア
ムズＥ培地（Flow Laboratories社製）で、１×105細胞
／培養皿底面1cm2（培養液125μを含む）の濃度で24
時間培養した後、血清およびアルギニンを含まないウィ
リアムズＥ培地でさらに24時間培養した。
培養３日目の細胞（２×105細胞／培養皿底面2cm
2（培養液250μを含む））に、図１−1,1−２に示し
たようなGSPの各濃度を加え、６時間後に培養上清を取
り、ジェームズらによるジアセチルモノオキシム法（W.
James and D.Danica,Anal.Biochem.,37,412（1971））
による540nmの吸光度を測定し、尿素の相対合成量とし
た。
2（培養液250μを含む））に、図１−1,1−２に示し
たようなGSPの各濃度を加え、６時間後に培養上清を取
り、ジェームズらによるジアセチルモノオキシム法（W.
James and D.Danica,Anal.Biochem.,37,412（1971））
による540nmの吸光度を測定し、尿素の相対合成量とし
た。
また、グルカゴンの一定量（10-7M）をGSPの各濃度と
併用したものについても同様の方法で実施した。
併用したものについても同様の方法で実施した。
結果を図１−１に示す。
次に、同様の方法でグルカゴンの各濃度に一定量のGS
Pを加えたものおよびグルカゴン単独のものについても
実施した。
Pを加えたものおよびグルカゴン単独のものについても
実施した。
結果を図１−２に示す。
図１−１および図１−２から、GSPが尿素合成を促進
していること、およびグルカゴンの尿素合成促進作用を
増強していることがわかる。特に、グルカゴンの濃度が
10-7M付近のときにGSPはグルカゴンを最も強く増強して
いる。
していること、およびグルカゴンの尿素合成促進作用を
増強していることがわかる。特に、グルカゴンの濃度が
10-7M付近のときにGSPはグルカゴンを最も強く増強して
いる。
実施例２ GSPのグリコーゲン合成に及ぼす影響 実施例１と同様の方法で培養した培養３日目のラット
の肝臓細胞（１×106細胞／培養皿底面10cm2（培養液1m
lを含む））に、GSPの各濃度および14C−Ｄ−グルコー
ス（0.5μCi）を加え、３時間培養後、上清を捨て、30
％水酸化カリウムで細胞を可溶化後（100℃,30分）、冷
エタノールでグリコーゲンを沈澱させた。次に、冷エタ
ノールで沈澱を２回洗浄した後、液体シンチレーション
カウンターにより、14C取り込み量（DPM）を測定し、グ
リコーゲンの相対合成量とした。
の肝臓細胞（１×106細胞／培養皿底面10cm2（培養液1m
lを含む））に、GSPの各濃度および14C−Ｄ−グルコー
ス（0.5μCi）を加え、３時間培養後、上清を捨て、30
％水酸化カリウムで細胞を可溶化後（100℃,30分）、冷
エタノールでグリコーゲンを沈澱させた。次に、冷エタ
ノールで沈澱を２回洗浄した後、液体シンチレーション
カウンターにより、14C取り込み量（DPM）を測定し、グ
リコーゲンの相対合成量とした。
また、GSPにグリコーゲン合成促進作用を有するイン
シュリン（2nM）を加えたものについても同様に実施し
た。
シュリン（2nM）を加えたものについても同様に実施し
た。
結果を図２に示す。
図２より、GSPは、インシュリンの存在にかかわら
ず、グリコーゲンの合成を抑制することがわかる。
ず、グリコーゲンの合成を抑制することがわかる。
図１−１および図１−２は、本発明のGSPの、尿素合成
に及ぼす作用を540nmにおける吸光度によって示した図
である。 図２は、本発明のGSPの、グリコーゲン合成に及ぼす作
用を、液体シンチレーションカウンターにより測定した
14C取り込み量（DPM）によって示した図である。
に及ぼす作用を540nmにおける吸光度によって示した図
である。 図２は、本発明のGSPの、グリコーゲン合成に及ぼす作
用を、液体シンチレーションカウンターにより測定した
14C取り込み量（DPM）によって示した図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＥＥ
Claims (3)
- 【請求項１】下記の構造からなるグルカゴン様生理活性
剤Ala−Val−Pro−Tyr−Pro−Gln−Arg - 【請求項２】グルカゴン様生理活性が尿素の合成促進作
用である特許請求の範囲第１項記載の生理活性剤 - 【請求項３】グルカゴン様生理活性がグリコーゲン合成
抑制作用である特許請求の範囲第１項記載の生理活性剤
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61307504A JPH08781B2 (ja) | 1986-12-23 | 1986-12-23 | グルカゴン様生理活性剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61307504A JPH08781B2 (ja) | 1986-12-23 | 1986-12-23 | グルカゴン様生理活性剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63159323A JPS63159323A (ja) | 1988-07-02 |
| JPH08781B2 true JPH08781B2 (ja) | 1996-01-10 |
Family
ID=17969878
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61307504A Expired - Lifetime JPH08781B2 (ja) | 1986-12-23 | 1986-12-23 | グルカゴン様生理活性剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08781B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2197471A2 (en) * | 2007-09-11 | 2010-06-23 | Mondobiotech Laboratories AG | Use of the peptides maippkknqdk (cow kappa casein 106-116) and/or ygfqna (serorphin) as therapeutic agents |
-
1986
- 1986-12-23 JP JP61307504A patent/JPH08781B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63159323A (ja) | 1988-07-02 |
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