JPH0840981A - エイコサペンタエノイルグリセライド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 次の一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒ¹ ，Ｒ² 及びＲ³ の少なくとも２つはエイコ
サペンタエノイル基を示し、残余は水素原子を示す）で
表わされるエイコサペンタエノイルグリセライド。 【効果】 本発明のエイコサペンタエノイルグリセライ
ド（１）は、極めて毒性が低く、優れた血清中脂質低下
作用、血小板凝集抑制作用を有し、高脂血清に由来する
種々の疾病の治療及び予防に有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規なエイコサペンタエ
ノイルグリセライド、更に詳細には、次の一般式（１）

【０００２】

【化２】

【０００３】（式中、Ｒ¹ ，Ｒ² 及びＲ³ の少なくとも
２つはエイコサペンタエノイル基を示し、残余は水素原
子を示す）で表わされるエイコサペンタエノイルグリセ
ライドに関する。

【０００４】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来、
次式（２）で表わされるエイコサペンタエン酸（以下、
「ＥＰＡ」と称する）が人体における血漿コレステロー
ルを低下させる作用を有し、血栓症の予防もしくは治療
に使用できることが知られている。

【０００５】

【化３】

【０００６】また、ＥＰＡはサバ、イワシ、タラ等の水
産物油脂中にグリセライドとして含有されているが、こ
のグリセライドは１個のＥＰＡと２個の他の脂肪酸とか
らなるトリグリセライドである。従って、天然の斯かる
トリグリセライドを、ＥＰＡの有効量において投与する
と、他の脂肪酸のために多量のカロリーを与える結果と
なり、栄養過多を惹起するという問題があった。

【０００７】従って、斯かる欠点を克服するものとし
て、近年、２個のＥＰＡと１個の他の脂肪酸とからなる
トリグリセライドが提案された（特開昭５９−１９０９
４８号）。しかし、これも依然として１個の脂肪酸が存
在し、上記問題点は完全には解決されていない。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】斯かる実状において、
本発明者は上記問題点を解決せんと鋭意研究を行った結
果、ＥＰＡのジグリセライド及びトリグリセライドが経
口投与において、吸収性がよく、優れた脂質低下作用及
び血小板凝集抑制作用を示すことを見出し、本発明を完
成した。

【０００９】すなわち、本発明は上記一般式（１）で表
わされるエイコサペンタエノイルグリセライド（以下
「ＥＰＡＧ」と称する）を提供するものである。

【００１０】本発明のＥＰＡ−Ｇとしては次のものが挙
げられる。

【００１１】トリエイコサペンタエノイルグリセライド
〔ＥＰＡ−ＴＧ〕

【００１２】

【化４】

【００１３】１，２−ジ（エイコサペンタエノイル）グ
リセライド〔１，２−ＥＰＡ−ＤＧ〕

【００１４】

【化５】

【００１５】１，３−ジ（エイコサペンタエノイル）グ
リセライド〔１，３−ＥＰＡ−ＤＧ〕

【００１６】

【化６】

【００１７】本発明のＥＰＡＧは例えば、次の反応式に
従ってＥＰＡ（２）をハロゲン化してＥＰＡ−ハロゲニ
ド（３）となし、これにグリセリンを反応させることに
より製造される。

【００１８】

【化７】

【００１９】（Ｒはエイコサペンタエノイル基を、Ｘは
ハロゲン原子を示し、Ｒ¹ ，Ｒ² ，Ｒ ³ は前記の意味を
有する）

【００２０】原料のＥＰＡは、例えば特開昭５８−８０
３７号に記載の方法によって得られたＥＰＡ−エチルエ
ステルをエタノール中、苛性カリで分解することにより
高純度のものとして得ることができる。ＥＰＡのハロゲ
ン化は、自体公知の方法によって行うことができる。例
えばハロゲン化剤としてオキザリルクロライドを使用
し、６５〜９０℃の温度で４時間反応を行えばＥＰＡ−
クロライドが得られる。ＥＰＡ−ハロゲニド（３）とグ
リセリンとの反応は、クロロホルム等の溶媒中、キノリ
ン、ピリジン等の塩基の存在下、数時間加熱還流するこ
とによって行われる。ＥＰＡ−ハロゲニドはグリセリン
の３倍モル以上を使用する。このようにして得られる反
応生成物は、ＥＰＡ−ＴＧ、１，２−ＥＰＡ−ＤＧ及び
１，３−ＥＰＡ−ＤＧの混合物であるが、これは後述の
実施例に示す如く、シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーによりＥＰＡ−ＴＧとＥＰＡ−ＤＧ（１，２−体と
１，３−体の混合物）とに分けて収得することができ
る。そしてこれらの比は約１：１である。

【００２１】ＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧの物性は表
１のとおりである。

【００２２】

【表１】

【００２３】

【作用】次にＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧの生物学的
活性を示す。

【００２４】実験１ 急性毒性（マウス） （１）実験方法 体重２５〜３０ｇの４週令の雌雄のＳＩＣ：ＩＣＲ系マ
ウスを１群１０匹として、ＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−Ｄ
Ｇを経口（ｐｏ）又は腹腔内投与（ｉｐ）し、投与後７
日間観察し、その間の急性中毒症状及び致死効果の有無
を調べた。 （２）実験成績 経口投与：雌、雄ともにＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＧ
２５ｇ／kg ｐｏ後７日間内に死亡したものは１例も無
く、急性中毒症状についても投与１日後に下痢が見られ
たが投与３日〜４日後に正常に復し、それ以外の変化は
見られなかった。 腹腔内投与：雌、雄ともにＥＰＡ−ＴＧ１０ｇ／kg ｉ
ｐ後７日間内に死亡したものは１例も無く、著明な急性
中毒症状を発現したものも無かった。 （３）結論 ＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧのマウスにおける致死量
は雌、雄ともに経口投与（ｐｏ）の場合、２５ｇ／kg以
上であり、腹腔内投与（ｉｐ）の場合、１０ｇ／kg以上
である。

【００２５】実験２ 血清中脂質低下作用（ラット） （１）実験方法 体重２００ｇ前後の雄のＳＤ系ラットを１群７匹とし、
ＥＰＡ−ＴＧ０．５ｇ／kg又はＥＰＡ−ＤＧ０．７５ｇ
／kg、サフラワー油５．０ｇ／kg、対照として精製水
５．０ｇ／kgをそれぞれ３０日間、連日経口投与（ｐ
ｏ）したのち、採血し血清中の脂質濃度を測定した。血
清中の脂質濃度は次の測定用試薬を使用し、自動分析装
置（日立７０５）により測定した。 総コレステロール：コレステロール７０５「ニッスイ」
（日水製薬） リン脂質：リン脂質−７０５「ニッスイ」（日水製薬） トリグリセライド：トリグリセライド−７０５「ニッス
イ」（日水製薬） 遊離脂肪酸：ＮＥＦＡ−Ｃセット「ニッスイ」（日水製
薬） （２）実験成績 表２に示した様に、ＥＰＡ−ＴＧ０．５ｇ／kg及びＥＰ
Ａ−ＤＧ０．７５ｇ／kgのｐｏにより血清中の総コレス
テロール、リン脂質濃度は有意に低下した。一方サフラ
ワー油５．０ｇ／kgでは総コレステロール、リン脂質濃
度に著明な変化は見られなかった。血清中トリグリセラ
イド濃度はＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧ群、サフラワ
ー油投与群とも変化なく、血清中遊離脂肪酸濃度はＥＰ
Ａ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧ群、サフラワー油群とも対照
群に比し減少傾向がみられた。

【００２６】

【表２】

【００２７】実験３ 高脂血動物における血清中脂質
低下作用（ラット） （１）実験方法 ウイスター系の雄性ラットを１群１０匹とし、被検薬投
与開始の２週間前より下に示す高コレステロール食を摂
取させておきながら、被検薬を８週間、連日経口投与
（ｐｏ）したのち採血し、血清中の総コレステロール濃
度及び遊離コレステロール濃度を実験２と同様の方法で
測定した。

【００２８】

【表３】高コレステロール食の処方 ミルクカゼイン １８．０（％） ショ糖 ６１．０ セルロース ４．０ 硬化植物油 １０．０ ミネラル類 ４．０ ビタミン類 ２．０ コレステロール ０．５ コール酸ソーダ ０．５

【００２９】（２）実験成績 表４に示した様にＥＰＡ−ＴＧ６mg／kg又はＥＰＡ−Ｄ
Ｇ１０mg／kgのｐｏにより高コレステロール食摂取によ
る血清中総コレステロール、遊離コレステロール濃度の
上昇は著明に抑制された。また正常食群における血清中
遊離コレステロール濃度もＥＰＡ−ＴＧ６０mg／kg又は
ＥＰＡ−ＤＧ９０mg／kgのｐｏにより低下した。

【００３０】

【表４】

【００３１】実験４ 血小板凝集抑制作用（ウサギ） （１）実験方法 体重２．０kg前後の健康な雄の家兎を１群４匹とし、コ
レステロール０．５％を添加した飼料（オリエンタル製
ＲＣ−４）により飼育した。ＥＰＡ−ＴＧは２００mg／
kg、ＥＰＡ−ＤＧ３００mg／kgを４週間、連日経口投与
（ｐｏ）した。４週間経過後耳静脈より採血し、血小板
豊富血しょう（ＰＲＰ）を作製し、理化電機製「アグリ
ゴメーター」（ＡＵＴＯＲＡＭ−２１型）を用い、コラ
ーゲン１．２５μｇ／mlによる血小板凝集能を測定し
た。 （２）実験成績 表５及び図３のごとくＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＧ投
与群では無処置群に比し、血小板凝集能は著明に抑制さ
れた。

【００３２】

【表５】

【００３３】実験５ 喘息発作の予防効果 （１）実験方法 ３０才から５５才の季節性の認められない男性喘息患者
８例中５例にＥＰＡ−ＴＧ０．９ｇ／日を、残りの３例
にＥＰＡ−ＤＧ１．５ｇ／日をソフトカプセルの形で連
日経口投与し、喘息発作の発現に対する影響を調べた。 （２）実験成績 ＥＰＡ−ＴＧの場合には、投与した患者５例中１例はＥ
ＰＡ−ＴＧ投与開始の４ケ月前よりプレドニン５mgを毎
日内服していたが、ＥＰＡ−ＴＧ投与開始後１ケ月で喘
息発作の発現回数が減少し始め、３ケ月後にはプレドニ
ンから離脱することができた。別な１例はＥＰＡ−ＴＧ
投与開始３ケ月近くなって発作回数の減少が著明となっ
た。残りの３例はＥＰＡ−ＴＧ３ケ月間連続投与後も喘
息発作発現に対し変化がみられず投与を中止した。また
ＥＰＡ−ＤＧの場合には、３例の患者中２例はＥＰＡ−
ＴＧ投与開始１ケ月後より喘息発作の発現回数が減少
し、３ケ月後にはほとんど発作が発現しなくなった。残
りの１例は３ケ月投与後も発作発現の減少傾向が見られ
なかったので、投与を中止した。これによりＥＰＡ−Ｔ
Ｇ及びＥＰＡ−ＤＧは喘息発作発現に対し著明な予防効
果を有することが判明した。

【００３４】実験６ 実験的腎炎に対する予防効果
（ラット） （１）実験方法 ６週令の雄ドンリュウ系ラットを１群１０匹とし、グラ
ソック（Ｇｌａｓｓｏｃｋ）らの方法〔ジャーナル・オ
ブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．）１２７，５５５（１９６８）〕によりハイマン
（Ｈｅｙｍａｎｎ）腎炎を作製し、この腎炎発現に対す
るＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧの予防効果を調べた。
ドンリュウ系ラットの尿細管の水不溶性画分２０mg／個
体を０．５mlのフロインドの完全アジュバントとともに
ラットの両側後肢の足蹠皮下に注射して感作し、感作翌
日よりＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＧ１００mg／kgを６
週間連日経口投与し、尿たん白排出量の変動を調べた。
対照群には精製水０．１ml／kgを被検薬と同様に投与し
た。尿たん白量は永松らの方法〔日薬理誌 ８１，２９
５（１９８３）〕により測定した。 （２）実験成績 表６に示した様にＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧ１００
mg／kg投与により感作６週後及び８週後の尿たん白排出
量は有意に抑制された。これによりＥＰＡ−ＴＧ及びＥ
ＰＡ−ＤＧは自己免疫複合体腎炎の進行に対し予防効果
を有することが判明した。

【００３５】

【表６】

【００３６】実験７ 実験的糖尿病に対する効果（ラ
ット） （１）実験方法 体重２００ｇ程度の雄のドンリュウ系ラットを１群５匹
とし、糖尿病発症グループにはpH４．５のクエン酸緩衝
液に溶解したストレプトゾトシン３０mg／kgを静注し
た。被検薬はストレプトゾトシン静注の２４時間前、１
時間前及び５時間後にそれぞれ経口投与した。ストレプ
トゾトシン静注の２４時間後に静脈血を採血し、酵素法
によるグルコース測定用試薬Ｖ−ＧＬＵ−Ｃセット「ニ
ッスイ」（日水製薬）を用い、自動分析装置（日立７０
６型）により測定した。 （２）実験成績 表７に示した様に、ＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＧ１０
０mg／kg経口投与によりストレプトゾトシン糖尿病は著
明に抑制された。これによりＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−
ＤＧはストレプトゾトシン糖尿病発症の予防ならびに進
行抑制効果を有することが判明した。

【００３７】

【表７】

【００３８】実験８ アジュバント関節炎に対する効
果（ラット） （１）実験方法 ドンリュウ系の雌の７週令のラットを１週間飼育したの
ち実験に使用した。フロインドの完全アジュバント０．
０６mlをラットの尾皮内に注射してアジュバント関節炎
を惹起した。被検薬はアジュバント注射の前日より１日
１回２１日間経口投与した。関節炎症状の評価はアジュ
バント注射２及び３週間後に四肢及び両耳介について関
節炎スコアーにより実施した。 （２）実験成績 表８に示した様にＥＰＡ−ＴＧ又はＥＰＡ−ＤＧ１００
mg／kg経口投与によりアジュバント注射２週後及び３週
後の関節炎スコアーは著明に抑制された。これによりＥ
ＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧはアジュバント関節炎の進
行発症に対し予防効果を有すことが判明した。

【００３９】

【表８】

【００４０】

【発明の効果】以上の実験から明らかな如く、本発明の
エイコサペンタエノイルグリセライド（１）は、極めて
毒性が低く、優れた血清中脂質低下作用、血小板凝集抑
制作用を有し、高脂血清に由来する種々の疾病の治療及
び予防に有効である。

【００４１】

【実施例】次に実施例を挙げて説明する。

【００４２】実施例１ ＥＰＡ−エチルエステル４０ｇ（０．１２１モル）及び
１０％ＫＯＨエタノール〔ＫＯＨとして８．１５ｇ
（０．１４５モル）〕を仕込み、Ｎ₂ガス導入下（１５
０ml／分）、７５〜７６．５℃で１時間還流した。反応
物を室温まで冷却し、１０％ＨＣｌ水にてpH２とし、無
機塩が析出するので水５０mlを加えて溶かし、ｎ−ヘキ
サン１００ml及び５０mlで２回抽出した。抽出液を無水
硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下４０℃で留去
し、油状のＥＰＡ３５．９ｇ（収率９８．１％）を得
た。

【００４３】実施例２ ＥＰＡ３５．１ｇ（０．１１６モル）にオキザリルクロ
ライド２９．５ｇ（０．２３２モル）をＮ₂ガス導入下
室温で滴下した。次いで６５〜７５℃で４時間反応さ
せ、反応後過剰のオキザリルクロライドをエバポレータ
ーで留去した。残留物を減圧下蒸留し、１４４℃／１mm
Hg〜１８７℃／２mmHgの留分を集めＥＰＡ−クロライド
１８．７８ｇ（収率５０．４％）を得た。

【００４４】実施例３ グリセリン１．８１ｇ（０．０１９７モル）、キノリン
１０．８ｇ（０．０８４モル）及びクロロホルム８０．
１ｇを仕込み、これにＥＰＡ−クロライド１８．０ｇ
（０．０５６モル）を徐々に滴下した。これを７２〜８
０℃で３．５時間還流した。反応液を冷却後、石油エー
テル５４０ml中に注加し、０．５Ｎ−硫酸水溶液３００
mlを攪拌下加えて１０分間攪拌し、３０分間静置した。
分液し、その上層に５％炭酸カリウム水溶液３００mlを
加え、分液した。上層に水３００mlを加え分液し、更に
上層に飽和食塩水１００mlを加えて分液し、その上層を
採取した。これを無水硫酸マグネシウムで乾燥後エバポ
レーターで石油エーテルを留去し、油状物１５．１５ｇ
を得た。シリカゲル５００ｇを特級ベンゼンを用いてガ
ラスカラムに充填し、これに上記油状物１０ｇを特級ベ
ンゼン１００mlに溶かしたものを注加した。次いで同ベ
ンゼン８Ｌを用いて溶出し、３００mlずつの分画を採取
した。この分画について、ＴＬＣ（キーゼルゲル６０Ｆ
₂₅₄，展開溶媒：ベンゼン、確認：Ｉ₂ベイパー）により
溶出物を確認し、同一溶水物を集め、減圧下溶媒を留去
し、次の物質を得た。

【００４５】

【表９】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＥＰＡ−ＴＧの赤外線吸収スペクトルを示す図
である。

【図２】ＥＰＡ−ＤＧの赤外線吸収スペクトルを示す図
である。

【図３】ＥＰＡ−ＴＧ及びＥＰＡ−ＤＧの血小板凝集抑
制作用を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/23 ＡＤＮ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒ¹ ，Ｒ² 及びＲ³ の少なくとも２つはエイコ
   サペンタエノイル基を示し、残余は水素原子を示す）で
   表わされるエイコサペンタエノイルグリセライド。