JPH08233801A

JPH08233801A - 尿比重測定用試験片

Info

Publication number: JPH08233801A
Application number: JP6206695A
Authority: JP
Inventors: Hisashi Sakamoto; 久坂本; Yoshinori Takahashi; 好範高橋; Yoshihiko Higuchi; 善彦樋口; Takehiro Yamaguchi; 武広山口
Original assignee: KDK Corp; Kyoto Daiichi Kagaku KK
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1995-02-23
Filing date: 1995-02-23
Publication date: 1996-09-13

Abstract

(57)【要約】【目的】従来の原理とは全く異なり、比重値１．００
０〜１．０４０の尿の比重を目視的に半定量測定でき、
或は分光反射率計により半定量できる、新規な原理に基
づいた尿比重測定用乾式試験片を作製する。【構成】尿中の蛋白質を測定する方法である『蛋白誤
差法』を利用する。蛋白質と緩衝剤とｐＨ指示薬の存在
下、尿中の塩素イオンとｐＨ指示薬との競争反応を原理
とし、それらを組み込んだ尿比重測定用乾式試験片であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、尿中の比重を精度良
く、かつ簡易に測定するための乾式試験片に関するもの
である。

【０００２】

【従来の技術】尿比重を直接に測定する方法として現在
一般的に行われている方法には、尿比重計、ピクノメー
ター、屈折計などの装置の使用がある。これらの装置
は、ほぼ必要な精度が得られているが、それらの装置は
精度を保持するために、目盛りの校正、器具の洗浄管理
を維持などのメンテナンスが必要であり、時間も手間も
かかり、数多くの不便さがある。

【０００３】また、測定時において、尿量が一定以上必
要であり、不足する場合も生じる。さらに液面の気泡
や、毛細管現象による目盛りの読み取りの困難さもあ
る。そして、これらの問題を解決したものとして、乾式
の試験紙・試験片タイプの尿比重測定用の乾式試験片が
あり、汎用されつつある。この試験片を尿中に浸漬し、
発色した色を比色表と比較する”ｄｉｐａｎｄｒｅ
ａｄ”法で手軽に測定できる上に、他の尿検査項目、例
えばグルコース、ケトン体、蛋白質、ヘモグロビン、白
血球、ビリルビン、ウロビリノーゲン、ｐＨ、アスコル
ビン酸等の試験片と組み合わせて、各項目を同時に測定
することができるので非常に便利である。

【０００４】試験片に担持させる試薬組成物としては、
特開昭５５−１０１０４７号公報に見られるごとき、従
来メチルビニルエーテルと無水マレイン酸の共重合物を
水酸化ナトリウムで部分中和した弱電解性ポリマーにｐ
Ｈ指示薬を組合せたものが一般的であった。このタイプ
のものは、試験片と尿検体中へ浸漬した場合、ポリマー
酸基のＨ⁺が尿中のカチオン（Ｎａ⁺）とイオン交換して
遊離するからｐＨが低下し、それがｐＨ指示薬の色の移
動となって測定される。

【０００５】また近時、色調移動の感度と精度を改良す
る手段として、特開平４−３１５０４９号公報、特開平
６−２９４７９０公報にみられるごとき、試薬組成物な
らびにその含浸試験具が提示されてきた。これらの方法
は、強電解性ポリマーアニオンと解離型色素カチオンと
のイオン会合（結合）が検液のｐＨに関係なく塩類（Ｎ
ａＣｌ）の存在に影響を受け、Ｎａ⁺量に対応した色調
移動を生じることに立脚している。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】尿比重測定用試験片は
“ｄｉｐａｎｄｒｅａｄ” 方式の簡便な手段であ
り、臨床段階におけるスクリーニング手段として、実地
医療に不可欠である。しかし、実状は感度、精度におい
てさらに優れた斬新的な手段の開発が常に要請されてい
る。本発明者は鋭意研究を進めてきた一つの成果とし
て、従来の測定原理とは全く異なる新規な原理により、
優れた測定性能を発揮する尿比重測定片の開発に成功
し、本発明を完成するに至った。

【０００７】

【発明の開示】本発明は、蛋白質、緩衝剤およびｐＨ指
示薬を含有する含浸液を多孔性マトリックスに吸液さ
せ、乾燥させて作製する尿比重測定用試験片である。こ
の場合、好適には、蛋白質が、アルブミン、グロブリ
ン、ゼラチンまたはカゼインから選ばれるか、またはこ
れらの混合物であること、含浸液中の蛋白質、緩衝剤お
よびｐＨ指示薬の濃度がそれぞれ０．１〜３％（ｗ／
ｖ）、０．０５〜２Ｍ（モル／ｌ）、および０．１〜２
Ｍ（モル／ｌ）であること、さらに多孔性マトリックス
としては濾紙が好適であることを提示するものである。

【０００８】本発明は、尿中の蛋白質を測定する方法と
して一般的に用いられている『蛋白誤差法』が塩濃度の
影響を受けることを逆に利用したものである。すなわち
蛋白質、緩衝剤、ｐＨ指示薬の存在下、尿中の陰イオン
とｐＨ指示薬との競争反応を原理とする尿比重測定用乾
式試験片が本発明である。尿分析の分野において、蛋白
質を『蛋白誤差法』を利用して測定する方法は既に公知
である。また、この『蛋白誤差法』が塩濃度、とりわけ
陰イオン（特に塩素イオン）濃度によって影響を受ける
こともまた知られている。これらについては例えば「分
析化学」Ｖｏｌ．４２（１９９３）４９７〜５０３頁に
示されている。

【０００９】『蛋白誤差法』では、蛋白質の正荷電した
アミノ基と負荷電したカルボキシル基による電荷的平衡
状態と、ｐＨ指示薬における解離型と非解離型による電
荷的平衡状態とがあり、その両者の結合により呈色が見
られる。つまり、蛋白質は、ｐＨが等電点では、電荷的
中性状態であり、正荷電したアミノ基と負荷電したカル
ボキシル基が同数存在する状態にある。ｐＨが等電点以
下では、正荷電したアミノ基が増え、全体として正に荷
電する。逆にｐＨが等電点以上では、負荷電したカルボ
キシル基が増え、蛋白質は、全体として負に荷電する。
蛋白質は、複数の反応部位を持ち、解離型陰イオンｐＨ
指示薬は、正荷電したアミノ基と結合する。また、尿中
の共存陰イオンも、この正荷電したアミノ基と結合す
る。すなわち、蛋白質の正荷電したアミノ基に、尿中陰
イオンと解離型陰イオンｐＨ指示薬が競争的に反応す
る。

【００１０】このように尿蛋白の測定法である『蛋白誤
差法』が塩濃度の影響を受けることをふまえて、これが
尿比重の測定法として応用できるかを検討したところ、
意外にも非常に良好な成績が得られた。本発明は、この
『蛋白誤差法』における塩濃度の影響を利用して、尿比
重測定用の試験片を作製しようとするものであ。比重測
定においては、好ましくは蛋白質の正荷電したアミノ基
と解離型陰イオンｐＨ指示薬が結合しやすく、また離れ
やすい状況を設定する。そのためにはｐＨ、蛋白質の等
電点・量・構造・置換基の電荷・分子サイズ、ｐＨ指示
薬の量・構造・置換基の電荷・分子サイズなどの適正化
する。

【００１１】含浸液の作製方法、含浸液の含浸方法、含
浸のための多孔性マトリックスの選択などは従来行われ
ている方法で構わない。すなわち、試薬組成物の溶剤ま
たは分散媒（以下、含浸液用溶媒と略記）としては、水
または／およびアルコール類例えばメタノール、エタノ
ール、イソプロパノール等を使用することができる。ま
た多孔性マトリックスとしては、生理的に、かつ含浸液
用溶媒液に不活性な材質で、重量当たりの表面積が大き
い試薬担持性能を有するものであればいずれも使用する
ことができる。これらの例示としては、天然および合成
になる紙状態、布状態、連続気泡体、粒状体、粒状等各
種のものがあるが、特に、取り扱い易さ、強度、純度の
点から濾紙が好適である。

【００１２】使用できる蛋白質の種類としては、アルブ
ミン、α−グロブリン、β−グロブリン、γ−グロブリ
ン、ゼラチン、カゼインなどがあるが、アルブミン、γ
−グロブリンが好適である。蛋白質濃度としては、含浸
液状態で０．１〜３％（ｗ／ｖ）が好ましい。使用でき
る緩衝液の種類としてはクエン酸、リン酸が好適であ
り、濃度としては含浸液状態で０．０５〜２Ｍ（モル／
１）が好ましい。また、緩衝液のｐＨは、蛋白質の等電
点以下であればよく、例えば、蛋白質としてアルブミン
を用いた場合、等電点は、４．９であるので、ｐＨ３〜
４．５が好ましい。

【００１３】使用できるｐＨ指示薬としては、蛋白質の
等電点以下を変色域とするものであれば使用することが
でき、ブロムフェノールブルー、ブロムクレゾールグリ
ーン、ブロムクレゾールパープル、コンゴーレッド、テ
トラブロムフェノールブルー、ブロムキシレノールブル
ー、テトラブロムフェノールフタレイン、メチルオレン
ジなどがあげられ、濃度は、含浸液状態で０．１〜２Ｍ
（モル／１）が好ましい。

【００１４】本発明の乾式試験片においては蛋白質、緩
衝剤、ｐＨ指示薬をマトリックス層中に含浸・乾燥させ
ると、第１の変色が起こる。ｐＨ一定のもと、ｐＨ指示
薬に存在する負電荷またはラジカルが蛋白質の正電荷に
近づき、解離型のｐＨ指示薬が生じることにより、ｐＨ
指示薬と蛋白質が結合するためと考えられる。そして、
この状態で保存する。

【００１５】塩を含んだ尿と反応させる場合には、蛋白
質と結合しているｐＨ指示薬と陰イオン（尿ならば特に
塩素イオン）とが競合することにより、第２の変色が起
こる。これは、陰イオン濃度が高くなれば、ｐＨ指示薬
が非解離型として蛋白質より遊離するためと思われる。
そしてこの変色を測定する。以下に実施例を示すが、本
発明はこれに限定されるものではない。

【００１６】

【実施例】

含浸液の調製（処方）ブロムクレゾールグリーン２０ｍｇエタノール１５ｍｌ０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ３．５）８５ｍｌ牛血精アルブミン１００ｍｇ上記の混合物による含浸液を調製した後、１５×１５ｃ
ｍの濾紙（ワットマン社製：３ＭＭｃｈｒ）に含浸し、
５０℃にて３０分間乾燥する。これを５×５ｍｍに裁断
し、５×６０ｍｍの白色ポリエチレンテレフタレートプ
レートの先端に両面テープを用いて貼り付けて、試験片
とした。本発明の尿比重測定用試験片の有用性を示すた
めに上記のようにして作製した試験片を用いて試験を行
った。試験方法比重を１．０００、１．０１０、１．０２０、１．０３
０の各レベルに調節した塩化ナトリウム水溶液を調製
し、試料とした。これに先に作製した試験片を２秒間浸
漬し、引き上げた試験片の呈色を目視で観察し、同時に
色差計（（株）日本電色工業、Σ−９０）で６２０ｎｍ
での反射率を測定した。試験結果試験結果を表１に示す。

【００１７】

【表１】表１の比重値と色差計による反射率との関係を表２に示
す。供試水溶液の比重と反射率は、良好な比例関係にあ
ることが判る。

【００１８】

【表２】

【００１９】

【発明の効果】本発明は従来の原理とは全く異なる原理
に基づいており、本発明によれば良好な測定結果を示す
新しい尿比重測定試験紙が得られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者山口武広京都市南区東九条西明田町57番地株式会社京都第一科学内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】蛋白質、緩衝剤およびｐＨ指示薬を含有
する含浸液を多孔性マトリックスに吸液させ、乾燥させ
て作製する尿比重測定用試験片。
【請求項２】蛋白質がアルブミン、グロブリン、ゼラ
チンまたはカゼインから選ばれるか、またはこれらの混
合物であることを特徴とする請求項１の尿比重測定用試
験片。
【請求項３】含浸液中の蛋白質、緩衝剤およびｐＨ指
示薬の濃度がそれぞれ０．１〜３％（ｗ／ｖ）、０．０
５〜２Ｍ（モル／ｌ）、および０．１〜２Ｍ（モル／
ｌ）である請求項１〜２の尿比重測定用試験片。