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JPH0822235B2 - 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 - Google Patents

発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法

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Publication number
JPH0822235B2
JPH0822235B2 JP61169555A JP16955586A JPH0822235B2 JP H0822235 B2 JPH0822235 B2 JP H0822235B2 JP 61169555 A JP61169555 A JP 61169555A JP 16955586 A JP16955586 A JP 16955586A JP H0822235 B2 JPH0822235 B2 JP H0822235B2
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JP
Japan
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glutamic acid
producing
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fermentation
culture
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JP61169555A
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豊 村上
佐紀子 矢頭
耕従 山田
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Ajinomoto Co Inc
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Ajinomoto Co Inc
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
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    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は調味料に広く利用されているＬ−グルタミン
酸の製造法に関するものである。
（従来の技術） 従来よりブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム
属に属する微生物により、Ｌ−グルタミン酸は発酵法に
より工業的に生産されている。
発酵法に用いるＬ−リジンの製造法に関し、高濃度エ
チレングリコール（30g/dl）に耐性を有し、Ｌ−リジン
生産能を有するコリネバクテリウム属又はブレビバクテ
リウム属に属する微生物がＬ−リジンを大量に生成する
ことが知られている（特開昭57−115186）。しかし、Ｌ
−グルタミン酸発酵において、高濃度食塩（10g/dl以
上）に耐性をするＬ−グルタミン酸生産菌が高蓄積でＬ
−グルタミン酸を生成することは今までに知られていな
い。
（発明が解決しようとする問題点） 本発明が解決しようとする問題点は発酵法によりＬ−
アミノ酸を工業的にさらに安価に製造する方法を開発す
ることにある。
（問題点を解決する為の手段） 本発明者等は、従来の発酵法によるＬ−グルタミン酸
の製造法を改良すべく鋭意研究した結果、ブレビバクテ
リウム属又はコリネバクテリウム属のＬ−グルタミン酸
生産菌より誘導した高濃度塩類存在下でも生育可能な変
異株の中からＬ−グルタミン酸生産能の優秀な菌株を分
離育成することに成功した。本発明は、ブレビバクテリ
ウム属又はコリネバクテリウム属に属し高濃度塩類存在
下でも生育可能でかつＬ−グルタミン酸生産能を有する
変異株を液体培地中で培養し培養液中にＬ−グルタミン
酸を生成蓄積させて、これを採取することを特徴とする
発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造方法であり、本発
明に使用する高濃度塩類存在下でも生育可能な菌株とし
ては、具体的一例として高濃度NaCl存在下で生育可能な
菌株ブレビバクテリウムラクトファーメンタム（Brevib
acterium lactofermentum）AJ 12300（FERM P−8846）
及びコリネバクテリウムグルタミカム（Corynebacteriu
m glutamicum）AJ 12301（FERM8847）がある。
これらの菌株はそれぞれブレビバクテリウムラクトフ
ァーメンタムATCC 13869,コリネバクテリウムグルタミ
カムATCC 13032を親株として変異誘導したものであり、
その他親株としてコリネバクテリウムアセトアシドフィ
ラムATCC 13870,ブレビバクテリウムフラバムATCC 1406
7,ブレビバクテリウム・ディバリカタム（Brevibacteri
um devaricatum）NRRLB−2311、ブレビバクテリウム・
サッカロリィティカム（Brevibacterium saccharolitic
um）ATCC 14066等のブレビバクテリウム属更にはコリネ
バクテリウム・アセティグルタミカム（Corynebacteriu
m acetiglutamicum）ATCC 15806,ミクロバクテリウム・
アンモニアフィラム（Microbacterium ammoniaphilum）
ATCC 15354等のＬ−グルタミン酸生産菌も親株として使
用することができる。
上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照射,X線
照射，放射線照射，変異誘起剤処理等の通常の方法が用
いられ、例えば250μg/mlのＮ−ニトロ−Ｎ′−メチル
−Ｎ−ニトロソグアニジンにより30℃で20分間処理する
方法等がある。尚、高濃度塩類とは培養液中に微生物を
培養する際、添加することにより培養液中の浸透圧を高
めそれによって生育が遅延・阻害される塩類を云い、例
えば塩化ナトリウム・塩化カリウム・塩化アンモニウム
・塩化マグネシウム・塩化カルシウム・塩化第一鉄・塩
化第二鉄，塩化マンガン・塩化（２）マンガン・硫酸ア
ンモニウム・硫酸ナトリウム・硫酸カリウム・硫酸第１
鉄・硫酸マグネシウム・硫酸第２鉄・リン酸１カリウム
・リン酸２カリウム・リン酸１ナトリウム・リン酸２ナ
トリウム・リン酸アンモニウム・グルタミン酸ナトリウ
ム・グルタミン酸アンモニウム・ソルビトール・シュク
ロース・フラクトース・グルコース・フマール酸・クエ
ン酸・エチレングリコール等があり高濃度塩類存在下生
育可能株とは上記の如き塩類を高濃度に含有した培地中
（固体・液体）で親株が生育し得ない条件下でも生育し
得るような菌株を云う。一例としてNaCl高濃度存在下に
おける実験結果を第１表に示す。
第１表の各菌株の生育度は次のように測定した。ポリ
ペプトン１％，酵母エキス１％食塩0.5〜20.0％寒天２
％（pH7.0）を含有する培地を120℃で20分間殺菌し寒天
プレートを調製した。このプレートにブイヨンスランド
で24時間培養した菌株を無菌水で懸濁してプレート当り
100〜200個の菌数を植菌し培養温度31.5℃で48時間培養
し出現したコロニーの大きさを測定した。上記の高濃度
塩類存在下で生育可能な菌株を用いてＬ−グルタミン酸
を生成・蓄積させるにはＬ−グルタミン酸発酵に用いら
れる常法を用いて行なえばよい。
すなわち、使用する培地としては、通常の炭素源，窒
素源，無機イオンその他の栄養素の含有する通常の培地
が用いられる炭素源として例えばサトウキビ甜菜からの
糖汁あるいは廃糖密，澱粉，加水分解物等の糖質原料等
または酢酸等の有機酸等を用いる。窒素源としては通常
のＬ−グルタミン酸発酵に用いられる例えば、アンモニ
ウム塩・アンモニア水，尿素等が用いられ、その他リン
酸イオン、マグネシウムイオン等の無機イオンが必要に
応じて適宜使用され、又ビオチンに関してもビオチン又
はビオチン活性物質が生育の適量以下の制限条件下にお
いて行われ、廃糖密等のビオチン過剰原料を炭素源とし
て使用するときはペニシリンG.F.K.O.V.X等のペニシリ
ン類あるいはシュークロースモノパルミテート，ポリオ
キシエチレンソルビタンモノパルミテート等の高級脂肪
酸又はその誘導体よりなる界面活性剤をビオチン抑制物
質として添加する等の方法で行われ、培養条件について
も温度30〜40℃,pH6〜8.5の範囲内で好気的条件で実施
する等常法によって実施する。
以下本発明の高濃度塩類存在下で生育可能な変異株を
用いた実施例を次に示す。
実施例１ グルコース50mg/ml、尿素2mg/ml、KH2PO4 1mg/ml、Mg
SO4・7aq 0.4mg/ml・FeSO4・7aq 10μg/ml,MnSO4・4aq
10μg/ml,大豆蛋白酸加水分解物（「味液」）５μ/ml
サイアミン塩酸塩100μg/ml、ビオチン2.5μg/NaCl
25mg/mlを含有する培地を調製しその20mlづつを500ml
容の振盪フラスコに入れ115℃で10分間加熱殺菌した。
この培地に次に示す菌株を温度31.5℃で往復振盪培養を
行った。培養中、培養液をpH6.0から8.5に保つように45
0mg/mlの濃度の尿素溶液を少量づつ添加した。30時間で
発酵を終了し発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対
糖収率を測定した。その結果、第２表に示すように、い
づれも高濃度塩類存在下で生育可能な株は良好にＬ−グ
ルタミン酸を蓄積した。
実施例２ 廃糖密（グルコース換算）60mg/ml、KH2PO4 1mg/ml、
MgSO4・7aq 1mg/ml、サイアミン塩酸塩100μg/の組成
と更に培養液中の浸透圧を高めるべく食塩25mg/mlを添
加した培地を調製し（pH7.0）、その20mlづつを500ml振
盪フラスコに分注し115℃−10′加熱殺菌した。これら
の培地に下記の菌株を接種し、往復振盪機により31.5℃
で培養を行った。
培養中、培養液をpH6.0〜8.5に保つように450mg/mlの
濃度の尿素溶液を少量づつ添加した。培養液の26倍希釈
液が562mμの吸光度で0.30に到達した時にポリオキシエ
チレンソルビタンモノパルミテート（PESP）を添加し
た。36時間で発酵を終了し、発酵液中に蓄積したＬ−グ
ルタミン酸の対糖収率を測定した。その結果第３表に示
すように高浸透圧下の条件でもＬ−グルタミン酸を良好
に蓄積した。
実施例３ 廃糖密（グルコース換算）150mg/ml,KH2PO4 1mg/ml、
MgSO4・7aq 1mg/ml、サイアミン塩酸塩100μg/、消泡
剤0.02ml/ソルビトール50mg/mlを有した培地を調製し
（pH7.0）１容のジャーファーメンターに300ml張り込
み120℃−10′加熱殺菌した。
下記の菌を接種し31.5℃で通気撹拌培養を行った。培
養中アンモニアガスをファーメンターに通し培養液をpH
7.8に調整した培養液の26倍希釈液が562mμの吸光度で
0.35に到達した時にPESPを添加した。発酵終了後発酵液
中に蓄積したＬ−グルタミン酸の対糖収率を測定した。
その結果第４表に示すように高濃度塩類存在下で生育可
能な菌株は生育しない菌株に比較しＬ−グルタミン酸を
良好に蓄積した。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ブレビバクテリウム属又はコリネバクテリ
    ウム属に属しＬ−グルタミン酸生産能を有しかつポリペ
    プトン１％，酵母エキス１％，寒天2.0％に食塩を10g/d
    l以上添加した培地中で31.5℃で48時間で生育する変異
    株を液体培地中で好気的に培養して培養液中にＬ−グル
    タミン酸を生成・蓄積せしめ、これを採取することを特
    徴とするＬ−グルタミン酸の製造法。
JP61169555A 1986-07-18 1986-07-18 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 Expired - Lifetime JPH0822235B2 (ja)

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FR2885900B1 (fr) * 2005-05-20 2009-02-13 Omya Development Ag Matieres minerales contenant du carbonate a emission en gaz carbonique combustible fossile reduite lors de leurs decompositions ainsi que leur procede de synthese et leurs utilisations.

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