JPH08208601A - オクタヒドロ−２−ナフタレンカルボン酸誘導体、その製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ファルネシルトランスフェラーゼを阻害する
新規化合物、その製造法及びファルネシルトランスフェ
ラーゼ阻害剤の提供。 【構成】 式（Ｉ）： 【化１】 で表される化合物ＴＡＮ−１８１３又はその塩；それを
含有してなるファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、
抗腫瘍剤及び医薬組成物；フォーマ属に属し、化合物Ｔ
ＡＮ−１８１３を生産する能力を有する微生物を培地に
培養し、培養物中に化合物ＴＡＮ−１８１３を生成蓄積
せしめ、これを採取することを特徴とする化合物ＴＡＮ
−１８１３又はその塩の製造法；及び化合物ＴＡＮ−１
８１３を生産する能力を有する微生物フォーマエスピー
ＦＬ−４１５１０(ＦＥＲＭ ＢＰ−４６３２)。 【効果】 低毒性で、ファルネシルトランスフェラーゼ
阻害剤、抗腫瘍剤、制癌剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ファルネシルトランス
フェラーゼ阻害剤として有用な新規オクタヒドロ−２−
ナフタレンカルボン酸誘導体(以下、化合物ＴＡＮ−１
８１３と称することもある)、その製造法および用途に
関する。

【０００２】

【従来の技術】ras(ラス)遺伝子は、真核細胞に広く保
存されており、最近の研究からras遺伝子産物(Rasタン
パク質)が細胞の分化や増殖制御におけるシグナル伝達
因子として重要な働きをしていることが明らかにされつ
つある。また、種々の腫瘍において、ras系遺伝子の点
突然変異が高頻度に認められており、その機序は、変異
Rasタンパク質が常時ＧＴＰ結合活性型にとどまること
により増殖促進シグナルが常に伝わっていることにある
とされる[キャンサー・リサーチ(Ｃancer Ｒesearch)
４９,４６８２(１９８９)]。該Rasタンパク質は、分子
量が約２１,０００のＧＴＰ結合タンパク質で、そのＣ
末端システイン残基には３段階の翻訳後修飾によりファ
ルネシルイソプレノイドが付加されており、これをアン
カーにして細胞質膜に局在して初めてシグナルを伝える
と考えられている[ネイチャー(Ｎature)３１０,５８３
(１９８４)、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンス(Ｐroceedings of
the Ｎational Ａcademy ofＳcience,ＵＳＡ)８
６,６６３０(１９８９)等]。従って、Rasタンパク質の
ファルネシル化を抑えることによりRasタンパク質の機
能を抑制し、ひいてはras変異を有する腫瘍の増殖をも
抑制できると期待されている。一方、Rasタンパク質の
Ｃ末端領域には、ユニークなアミノ酸配列モチーフＣＡ
ＡＸ(Ｃはシステイン、Ａは脂肪族アミノ酸、Ｘは通常
セリンまたはメチオニンを示す)が認められる[アニュア
ル・レビュー・オブ・バイオケミストリー(Ａnnual Ｒ
eview of Ｂiochemistry)６１,３５５(１９９２)、ア
ニュアル・レビュー・オブ・ジェネティクス(Ａnnual
Ｒeview of Ｇenetics)３０,２０９(１９９２)等]。
ファルネシルトランスフェラーゼは、このRasタンパク
質のＣＡＡＸモチーフを認識してコレステロール生合成
中間体であるファルネシルピロリン酸をシステイン残基
へ転移する酵素として、ラット脳より単離された[セル
(Ｃell)６２,８１(１９９０)]。

【０００３】微生物由来のファルネシルトランスフェラ
ーゼ阻害作用を有する物質として、１０'−デスメトキ
シストレプトニグリン(desmethoxystreptonigrin)、グ
リオトキシン(gliotoxin)類、ペプチシンナミン(peptic
innamin)類、マニュマイシン(manumycin)類、ザラゴジ
ックアシッド(zaragozic acid)類、ケトメリックアシ
ッド(chaetomellic acid)類[いずれもトレンズ・イン
・バイオケミカル・サイエンシーズ(Ｔrends in Ｂio
chemical Ｓciences)１８,３４９(１９９３)参照]、パ
ツリン(patulin)[フェブス・レターズ(ＦＥＢＳ Ｌett
ers)３１８,８８(１９９３)]等がある。また、テトラペ
プチドＣＡＡＸのアナログである合成ペプチド[サイエ
ンス(Ｓcience)２６０,１９３４−１９４２(１９９３)
等]、また、もう一つの基質であるファルネシルピロリ
ン酸の合成アナログ[リピド(Ｌipid)２８,９６９(１９
９３)等]などもファルネシルトランスフェラーゼ阻害物
質として報告されている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上述した種々のファル
ネシルトランスフェラーゼ阻害物質は、代謝的に不安定
である、細胞に対して不活性であるといった欠点、ある
いはファルネシルトランスフェラーゼの阻害以外にも別
の生物活性を有し特異性に乏しいことなど副作用につな
がる懸念がある。したがって、生体内でも安定で特異性
の高い新たなファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤を
開発することが望まれていた。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記のごと
き課題を解決すべく、新規なファルネシルトランスフェ
ラーゼ阻害物質を微生物代謝産物の中に求め鋭意探索し
た結果、ＴＡＮ−１８１３と命名した新規化合物を培養
液中から単離することに成功し、これがファルネシルト
ランスフェラーゼ阻害作用、細胞増殖阻害作用及び抗腫
瘍作用を有することを見いだした。これらの知見に基づ
き、更に検討した結果、本発明を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明は、（１）式（Ｉ）：

【０００７】

【化２】

【０００８】で表される化合物ＴＡＮ−１８１３または
その塩、（２）化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩を
含有してなるファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、
（３）化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩を含有して
なる抗腫瘍剤、（４）化合物ＴＡＮ−１８１３またはそ
の塩を含有してなる医薬組成物、（５）フォーマ属に属
し、化合物ＴＡＮ−１８１３を生産する能力を有する微
生物を培地に培養し、培養物中に化合物ＴＡＮ−１８１
３を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩の製造法、および
（６）化合物ＴＡＮ−１８１３を生産する能力を有する
微生物フォーマエスピー ＦＬ−４１５１０(ＦＥＲＭ
ＢＰ−４６３２)を提供するものである。

【０００９】本発明に用いることができる微生物として
は、フォーマ(Ｐhoma)属に属しＴＡＮ−１８１３を生産
する菌であればいずれでもよい。例えば、福島県の植物
から分離された糸状菌フォーマ・エスピー ＦＬ−４１
５１０株(ＦＥＲＭ ＢＰ−４６３２)が使用しうる例と
してあげられる。ＦＬ−４１５１０株は以下のような性
質を示す。 (a)形態的特徴 気生菌糸 :隔壁を有する。表面は滑面または粗面で、
菌糸の巾は１〜１.５μm、所々で多数集まってループ状
に重なり、また縄状を呈する。 分生子殻 :埋没性。球形〜亜球形。一個の孔口を持
つ。暗褐色。直径１５０〜２００μm。 分生子 :一細胞。無色で表面は滑面を示す。楕円形
〜卵円形。３〜５×１.５〜２μm。

【００１０】(b)寒天培地上の性状 ２４℃で２週間培養後、増殖の特徴を観察した。 １)麦芽エキス寒天培地 生育は中程度で培地上での拡がりは遅く、コロニーの直
径は２０〜２２mmである。表面は盛り上がった羊毛状の
菌糸体よりなり、外縁はやや不規則に縁どられている。
中央部から周辺部にかけて、淡灰色から灰白色を呈す
る。裏面の中央部から中間部にかけて、暗灰黒色から暗
灰色を呈し、周辺部は淡灰色を呈する。可溶性色素の生
成は認められない。 ２)バレイショ・ブドウ糖寒天培地 生育は中程度で培地上での拡がりはやや遅く、コロニー
の直径は３３〜３５mmである。表面は盛り上がった羊毛
状の菌糸体よりなり、外縁は規則正しく縁どられてい
る。中央部から周辺部にかけて暗灰色から淡灰色を呈す
る。裏面の中央部から周辺部にかけて、暗茶褐色から淡
茶褐色を呈する。可溶性色素の生成が認められる。 ３)ツアペック寒天培地 生育は中程度で、コロニーの直径は３２mmである。表面
はやや盛り上がった羊毛状の菌糸体よりなり、外縁は規
則正しく縁どられている。中央部から中間部にかけて暗
黒灰色から淡黒灰色を呈し、周辺部は淡灰色を呈する。
裏面の中央部から周辺部にかけて、暗黒褐色から淡黒褐
色を呈する。可溶性色素の生成は認められない。 ４)オートミール寒天培地 生育は中程度で、コロニーの直径は４２mmである。表面
は盛り上がった羊毛状の菌糸体よりなり、外縁は規則正
しく縁どられている。中央部から周辺部にかけて暗灰色
から淡灰色を呈する。裏面の中央部から周辺部にかけ
て、茶褐色から淡茶褐色を呈する。可溶性色素の生成は
認められない。

【００１１】(c)生理学的性状 本菌株の生育条件をバレイショ・ブドウ糖寒天培地で調
べると、pＨ３〜１２のいずれでも生育し、生育温度範
囲は６〜３２℃であり、至適生育温度は２５〜２９℃で
ある。以上の諸性質を、ディー・マロチ(Ｄ．Ｍalloch)
著、宇田川俊一訳「かびの分離・培養と同定」(昭和５８
年、医歯薬出版株式会社)５１頁記載の同定検索表と照
合すると、本菌は、胞子は１細胞からなり、コロニー、
分生子及び他の器官は暗色で、分生子は連鎖せず分生子
殻内部に形成し、菌糸は隔壁を有することから、フォー
マ(Ｐhoma)属に属することが明らかであり、本菌株をフ
ォーマ・エスピー(Ｐhoma sp．)ＦＬ−４１５１０と同
定した。本菌株は、平成６年３月１日に財団法人発酵研
究所(ＩＦＯ)に寄託番号ＩＦＯ３２６１３として、また
平成６年４月１１日に通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所(ＮＩＢＨ)にブタペスト条約に基づき、寄
託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−４６３２としてそれぞれ寄託さ
れている。

【００１２】本発明の化合物ＴＡＮ−１８１３またはそ
の塩は、これらの菌株に限らず、遺伝子操作技術を含
め、自体公知の方法(例、Ｘ線、ガンマー線、紫外線等
の放射線の照射、薬剤処理、薬剤含有培地上での培養
等)により、これらの菌株から誘導される本化合物の生
産能を有する変異株をはじめ、当該生産能を有する微生
物を培地中で培養し、本化合物を培地中に生成蓄積せし
め、それを採取することにより製造できる。

【００１３】本発明の化合物の生産菌の培養に用いる培
地は、該菌が利用しうる栄養源を含むものなら液状でも
固状でもよいが、大量に処理するときには液体培地を用
いるのが適当である。培地には、該化合物生産菌が同化
しうる炭素源、窒素源、無機物質、微量栄養源を適宜配
合する。炭素源としては、例えばブドウ糖、乳糖、ショ
糖、麦芽糖、デキストリン、澱粉、グリセリン、マンニ
トール、ソルビトール、油脂類(例、大豆油、ラード
油、チキン油など)、n−パラフィンなどが用いられる。
窒素源としては、例えば肉エキス、酵母エキス、乾燥酵
母、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、ペプトン、
綿実粉、廃糖蜜、尿素、アンモニウム塩類(例、硫酸ア
ンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢
酸アンモニウムなど)が用いられる。さらに、ナトリウ
ム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む塩
類、鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、ニッケルなどの金
属塩類、リン酸、ホウ酸などの塩類、酢酸、プロピオン
酸などの有機酸の塩類などを適宜用いてもよい。その
他、アミノ酸類(例、グルタミン酸、アスパラギン酸、
アラニン、リジン、メチオニン、プロリンなど)、ペプ
チド類(例、ジペプチド、トリペプチドなど)、ビタミン
類(例、ビタミンＢ₁、ビタミンＢ₂、ニコチン酸、ビタ
ミンＢ₁₂、ビタミンＣなど)、核酸類(例、プリン、ピリ
ミジン、その誘導体など)などを含有させてもよい。培
地のpＨを調節する目的で、無機または有機の酸または
アルカリ類、緩衝剤などを加え、あるいは消泡の目的で
油脂類、界面活性剤などの適量を添加しても差し支えな
い。液体培養に際しては、培地のpＨは中性付近、pＨ６
〜８が好ましい。培養温度は約２０〜３０℃、培養時間
は約４８〜１６８時間が好ましい。培養の手段は、静置
培養、振盪培養または通気撹拌培養法等の自体公知の方
法に従えばよい。大量の処理には通気撹拌培養法が好ま
しい。通常、４〜６日の培養で化合物ＴＡＮ−１８１３
の生産量は最高に達する。

【００１４】培養物から目的とする化合物ＴＡＮ−１８
１３を採取する方法を以下に述べる。該化合物は酸性で
脂溶性を示すため、この性質を利用する一般的手段を採
用すれば良い。培養液中、化合物ＴＡＮ−１８１３は、
菌体および培養上清中に含まれるため、まず培養液をp
Ｈ２〜７、好ましくはpＨ２.５〜４.０に調整後、水と
混和しない有機溶媒、例えばクロロホルム、酢酸エチ
ル、メチルイソブチルケトンあるいはブタノールなどを
加え、約１０分から２０時間、好ましくは約２０分から
４時間撹拌混和し、濾過助剤を加えて濾過するか、また
は遠心分離して有機層を分離する。このようにして得ら
れた有機層を水で洗浄後、濃縮することによって化合物
ＴＡＮ−１８１３を含有する粗物質が得られる。あるい
は得られた有機層から適当な塩基性塩、例えば重曹、炭
酸ナトリウムなどの水溶液などにより水層へ転溶して有
機層と分離後、水層をpＨ２〜７、好ましくはpＨ２.５
〜４に調整し、水と混和しない前述の有機溶媒で再び抽
出後、抽出液を濃縮することによっても化合物ＴＡＮ−
１８１３を含有する粗物質が得られる。

【００１５】粗物質をさらに精製し、純粋な化合物ＴＡ
Ｎ−１８１３を得るには種々のクロマトグラフィー法が
有利に用いられる。担体としては、シリカゲル、結晶性
セルロース、セファデックスＬＨ−２０(ファルマシア
社製、スウェーデン)など、または吸着性樹脂、陰イオ
ン交換樹脂などが用いられる。これらは通常カラムクロ
マトグラフィー法で行なわれる。担体から活性物質を溶
出するには適当な有機溶媒、例えばヘキサン、クロロホ
ルム、トルエン、酢酸エチル、ジクロロメタン、アセト
ン、アセトニトリル、メタノール、酢酸、ギ酸などの単
独あるいはこれらの混合溶媒が用いられる。これらの溶
媒に水を混和させた溶媒も用いることができる。

【００１６】さらに、分取高速液体クロマトグラフィー
(ＨＰＬＣ)によっても化合物ＴＡＮ−１８１３を精製し
てもよい。担体としてはオクタデシルシラン(ＯＤＳ)系
およびシリカゲル系のものが有利に用いられる。例えば
ＯＤＳ系の担体の場合、メタノールあるいはアセトニト
リルと塩類含有水溶液の混合溶液が溶出液として有利に
用いられる。溶出液を濃縮することによって粗粉末が得
られるが、あるいは溶出液が水溶液の場合には水と混和
しない適当な有機溶媒で抽出し、濃縮すると粗粉末が得
られる。粗粉末を適当な溶媒、例えば石油ベンジン、石
油エーテル、ヘキサン、トルエン、エーテル、クロロホ
ルム、酢酸エチル、アセトニトリル、エタノール、メタ
ノールあるいはこれらの混合液に溶解し、冷所で放置し
て粉末化すると化合物ＴＡＮ−１８１３の精製粉末が得
られる。

【００１７】本発明の化合物は自体公知の方法により例
えばナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属との塩、
例えばカルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金
属との塩、アンモニウム塩等の無機塩基類、例えばメチ
ルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピ
ルアミン、ブチルアミン、第３級ブチルアミン、ジメチ
ルアミン、ジエチルアミン、トリメチルアミン、トリエ
チルアミン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルア
ミン、Ｎ,Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミンなどの有機
アミン類との塩、例えばリジン、アルギニンなどのアミ
ノ酸等との有機塩基塩などの生理学的に許容される塩と
しても得ることができる。

【００１８】次に、化合物ＴＡＮ−１８１３の生物活性
について述べる。 試験例１ ファルネシルトランスフェラーゼ阻害試験 [方法]ラット脳からのファルネシルトランスフェラーゼ
の調製は、ワイ・ライス(Ｙ．Ｒeiss)らの方法[セル(Ｃ
ell)６２,８１(１９９０)]に従った。また、以下の操作
は４℃で行った。ＳＤラット(雄、６週令、チャールズ
リバー社)より脳を取り出しハサミで細切りした後、１m
Ｍ ＥＤＴＡ、１mＭ ＥＧＴＡ、０．２mＭフェニル・
メチル・スルフォニル・フルオライドおよび０．１mＭ
ロイペプチンを含む５０mＭトリス塩酸緩衝液(pＨ７.
５)を脳１個あたり２mlずつ加え、テフロンホモジナイ
ザー(浜田理科社製)で氷中にてホモジナイズした。この
抽出液を６０,０００×gで７０分間遠心分離して得られ
た上澄液から、硫酸アンモニウム濃度が３０〜５０Ｗ／
Ｖ％の間に沈澱してくる画分を回収し、１mＭジチオス
レイトール、２０μＭ塩化亜鉛を含む２０mＭトリス塩
酸緩衝液(pＨ７．５)で一晩透析する。透析終了後に１
５,０００×gで１０分間遠心分離して得られた上澄液を
粗酵素液とした。

【００１９】ファルネシルトランスフェラーゼ活性の測
定は、ＦＴアッセイキット(アマシャム社製)を用いて以
下に述べるように行った。ヒトのラミンＢのＣ末端部分
の１１アミノ酸残基からなるペプチドのＮ末端にビオチ
ン化修飾を施したペプチド１００nＭ、１２０nＭ ³Ｈ
−ファルネシルピロリン酸、６mＭ 塩化マグネシウ
ム、４mＭ 塩化カリウム、１mＭ ジチオスレイトー
ル、０.００２％ トリトンＸ−１００および１０mＭ
ＨＥＰＥＳ緩衝液(pＨ７.５)からなる反応液６０μl
に、化合物ＴＡＮ−１８１３の溶液２０μlと上記粗酵
素液２０μlとの混合液を加え、３７℃で１時間保温し
た後、アマシャム社製のＳＰＡビーズ液１５０μlを添
加し、反応を停止した。³Ｈ−ファルネシル化ペプチド
の定量は、ＳＰＡビーズとの結合によって生じるカウン
トをシンチレーションカウンターで測定し、化合物ＴＡ
Ｎ−１８１３存在下あるいは非存在下のカウントを比較
することにより化合物ＴＡＮ−１８１３のファルネシル
トランスフェラーゼ阻害率を算出した。 [結果]化合物ＴＡＮ−１８１３はファルネシルトランス
フェラーゼに対し、１２μg／mlで５０％阻害を示し
た。

【００２０】試験例２ 細胞増殖阻害試験 [方法]化合物ＴＡＮ−１８１３の細胞増殖阻害作用を、
マウス胎児由来線維芽細胞株ＮＩＨ３Ｔ３のＫ−ras形
質転換細胞株ＮＩＨ３Ｔ３／Ｋ−rasを用い、モスマン
(Ｍosmann)の方法[ジャーナル・オブ・イミュノロジカ
ル・メソッド(Ｊournalof Ｉmmunological Ｍethods)
６５,５５(１９８３)]を改変した方法で測定した。すな
わち、ＮＩＨ３Ｔ３／Ｋ−ras細胞を３×１０⁴個／mlの
濃度で培地に懸濁し、あらかじめ種々の濃度の化合物Ｔ
ＡＮ−１８１３を溶かしたリン酸緩衝化生理食塩水(pho
sphate−buffered saline、ＰＢＳ)を１０μl添加した
９６穴平底プレート(ヌンク社)の各ウエルに０.１mlず
つ分注した。培地はダルベッコ改変型イーグル・ミニマ
ムエッセンシャルメディウム[ウィッタカー・バイオプ
ロダクト(Ｗhittaker Ｂioproducts)社、米国]にウシ
胎児血清[ウィッタカー・バイオプロダクト(Ｗhittaker
Ｂioproducts)社、米国]を１０％ｖ／ｖ添加したもの
を用いた、上記プレートを３７℃、５％ＣＯ₂に設定し
た炭酸ガスインキュベーターで３日間培養後、テトラゾ
リウム塩ＭＴＴ(シグマ社、米国)を５mg／mlとなるよう
にＰＢＳに溶かした溶液を２５μl添加し、上記炭酸ガ
スインキュベーター中にて保温した。４時間後に０.０
１Ｎの塩酸に１０％となるようにＳＤＳを加えた溶液を
各ウエルに０.１mlずつ加え、上記炭酸ガスインキュベ
ーター(３７℃、５％ＣＯ₂)中にて一晩保温し、６２０n
mでの吸光度をタイターテックマルチスキャン吸光度計
(フロー社、米国)を用いて測定した。ＰＢＳのみを１０
μl加えた場合の吸光度を対照として、各濃度における
化合物ＴＡＮ−１８１３の細胞増殖阻害率(％)を算出し
た。 [結果]化合物ＴＡＮ−１８１３は、ＮＩＨ３Ｔ３／Ｋ−
ras細胞の増殖を、０.４μg／mlの濃度で５０％阻害し
た。

【００２１】試験例３ 生体内腫瘍増殖抑制試験 [方法]ヒト線維肉腫細胞株ＨＴ−１０８０をヌードマウ
ス１匹あたり２×１０⁶個皮下移植し、移植１０日後か
ら４日間、３匹を処理群として、化合物ＴＡＮ−１８１
３を毎日５０mg／kgの用量で皮下投与した。抗腫瘍活性
は癌細胞移植後１８日後の腫瘍塊の体積を測定すること
により判定した。腫瘍増殖抑制率は、未処理のコントロ
ール群３匹の腫瘍塊体積(Ｃ)mm³を測定し、化合物ＴＡ
Ｎ−１８１３投与群３匹の腫瘍塊体積(Ｔ)mm³と比較す
ることにより算出した。腫瘍塊体積は長径(a)と短径(b)
をキャリバーで測定し、計算式０.５×a×b²から算出し
た。 [結果]腫瘍体積比(Ｔ／Ｃ×１００)は４６％であった。
これより化合物ＴＡＮ−１８１３の投与により、腫瘍の
増殖は顕著に抑制されたことがわかる。以上の試験例に
示すように、本発明の化合物ＴＡＮ−１８１３またはそ
の塩は、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害作用、細
胞増殖阻害作用及び抗腫瘍作用を示す新規化合物であ
る。

【００２２】本発明の化合物ＴＡＮ−１８１３及びその
塩は低毒性であり、これらを有効成分とするファルネシ
ルトランスフェラーゼ阻害剤は、哺乳動物(例、ラッ
ト、マウス、ウシ、ウマ、サル、ヒト等)に投与して、
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤として有用であ
り、例えば、哺乳動物の腫瘍の治療あるいは転移防止に
用いることができる。該薬剤は、化合物ＴＡＮ−１８１
３またはその塩を、自体公知の方法により、薬理学的に
許容される担体と混合することにより得られる。本剤
は、非経口剤として、例えば注射剤、点滴剤、外用剤
(例、経鼻投与製剤、経皮製剤など)、坐剤(例、直腸坐
剤、膣坐剤など)、経口剤として、例えばカプセル剤、
錠剤、シロップ剤、散剤および顆粒剤またはそのほかの
医薬組成物として経口的または非経口的に投与すること
ができる。

【００２３】これらの製剤は、製剤工程において通常一
般に用いられる自体公知の方法により製造することがで
きる。例えば、経口投与製剤にするには、自体公知の方
法に従い、本発明の化合物ＴＡＮ−１８１３またはその
塩を、例えば賦形剤(例、乳糖、白糖、デンプンなど)、
崩壊剤(例、デンプン、炭酸カルシウムなど)、結合剤
(例、デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセル
ロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセ
ルロースなど)または滑沢剤(例、タルク、ステアリン酸
マグネシウム、ポリエチレングリコール６０００など)
などを添加して圧縮成形し、次いで必要に応じ、味のマ
スキング、直溶性あるいは持続性の目的のため自体公知
の方法でコーティングすることにより経口投与製剤とす
ることができる。該コーティング剤としては、例えばヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロー
ス、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピル
セルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツィーン
８０、ブルロニックＦ６８、セルロースアセテートフタ
レート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレー
ト、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネー
ト、オイドラギット(ローム社製、ドイツ、メタアクリ
ル酸・アクリル酸共重合)及び酸化チタン、ベンガラ等
の色素が用いられる。

【００２４】非経口剤、例えば注射剤を製造する際に
は、本発明の化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩を分
散剤(例、ツィーン(Ｔween)８０(アトラスパウダー社
製、米国)、ＨＣＯ６０(日光ケミカルズ製)、ポリエチ
レングリコール、カルボキシメチルセルロース、アルギ
ン酸ナトリウムなど)、保存剤(例、メチルパラベン、プ
ロピルパラベン、ベンジルアルコール、クロロブタノー
ルなど)、等張化剤(例、塩化ナトリウム、グリセリン、
ソルビトール、ブドウ糖など)などと共に水性注射剤に
成形する。または、例えばオリーブ油、ゴマ油、ラッカ
セイ油、綿実油、コーン油などの植物油、プロピレング
リコールなどに溶解、懸濁あるいは乳化して油性注射剤
に成形すればよい。

【００２５】例えば、外用剤とするには、自体公知の方
法に従い、本発明の化合物ＴＡＮ−１８１３またはその
塩を固状、半固状または液状の外用投与剤とすることが
できる。例えば、上記固状のものとしては、化合物ＴＡ
Ｎ−１８１３またはその塩をそのまま、あるいは賦形剤
(例、マンニトール、デンプン、微結晶セルロースな
ど)、増粘剤(例、天然ゴム類、セルロース誘導体、アク
リル酸重合体など)などを添加、混合して粉状の組成物
とする。上記液状のものとしては、注射剤の場合と同様
で、油性あるいは水性懸濁剤とする。半固状の場合は、
水性または油性のゲル剤、あるいは軟膏状のものと混合
すればよい。また、これらはいずれも、pＨ調節剤(例、
炭酸、リン酸、クエン酸、塩酸、水酸化ナトリウムな
ど)、防腐剤(例、パラオキシ安息香酸エステル類、クロ
ロブタノール、塩化ベンザルコニウムなど)などを加え
ても良い。

【００２６】例えば、坐剤とするには、自体公知の方法
に従い、本発明の化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩
を油性または水性の固状、半固状あるいは液状の坐剤と
することができる。上記組成物に用いる油性基剤として
は、例えば高級脂肪酸のグリセリド[例、カカオ脂、ウ
イテプゾル類(ダイナマイトノーベル社製)など]、中級
脂肪酸[例、ミグリオール類(ダイナマイトノーベル社
製)]あるいは植物油(例、ゴマ油、大豆油、綿実油など)
などが挙げられる。また、水性基剤としては、例えばポ
リエチレングリコール類、プロピレングリコールなど
が、水性ゲル基剤としては、例えば天然ゴム類、セルロ
ースおよびその誘導体、ビニル重合体、アクリル酸重合
体などが挙げられる。

【００２７】これらの製剤は経口的または非経口的に投
与され、例えばヒトに経口的に用いる場合の投与量は対
象疾病の種類、程度、患者の年齢などで変動し得るが、
通常、化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩の含量とし
て、１日成人(体重５０kg)１人当たり約１から４０mg、
好ましくは約２から３０mgが疾患の治療に用いられる。
これらの製剤は、１日１〜３回に分けて投与することが
できる。例えば化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩
を、注射剤として非経口的に皮下、静脈内または筋肉内
に投与する場合、その投与量は成人(体重５０kg)１人当
たり約０.５〜３０mg／日、好ましくは約１〜２０mg／
日である。

【００２８】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に詳しく説
明するが、これによって本発明が限定されるものではな
い。培地におけるパーセント(％)は、特に断りのない限
り、重量／容量パーセントを表示する。また、溶媒の混
合比率は、特に断りのない限り、容量比を表示する。ま
た実施例中で用いる記号は次の意味を有する。 s：シングレット、d：ダブレット、t：トリプレット、
q：クワルテット、dd：ダブルダブレット、ddd：ダブル
ダブルダブレット、m：マルチプレット、br：幅広い、
j：カップリング定数 実施例１ 化合物ＴＡＮ−１８１３（化合物(Ｉ)）:５−[２,５−
ジヒドロ−４−(１−オクテン−３−イル)−２,５−ジ
オキソ−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル]−８a−ヒド
ロキシ−４,６−ジメチル−１,２,３,４,４a,５,６,８a
−オクタヒドロ−２−ナフタレンカルボン酸の製造法 ２.４％ポテト・デキストロース・ブロス(ディフコ社
製、米国)、２％寒天及び水からなる斜面培地上で、２
８℃で、７日間培養したフォーマ・エスピー ＦＬ−４
１５１０株(ＦＥＲＭ ＢＰ−４６３２)を２％ブドウ
糖、３％麦芽糖、１.５％生大豆粉、１％コーン・ステ
ィープ・リカー、０.５％ペプトン、０.３％酵母エキ
ス、０.３％塩化ナトリウムおよび０.０５％アクトコー
ル(商品名、消泡剤、武田薬品工業(株)製)を含む５００
mlの種培地(２リットルの坂口フラスコ中、pＨ６.０)に
接種し、２４℃、４８時間往復振盪培養を行った。得ら
れた培養液１リットルを上記種培地３０リットルを入れ
た５０リットル容タンクに移植し２４℃で更に４８時間
通気撹拌培養(通気量３０リットル／分、撹拌毎分２８
０回転)を行うことによって得られた種培養液６リット
ルを、１％ブドウ糖、４％デキストリン、０.５％生大
豆粉、０.５％麦芽エキス、０.５％ペプトン、０.２％
酵母エキス、０.０５％硫酸第一鉄(７水和物)、０.０５
％硫酸マグネシウム(７水和物)、０.０５％硫酸マンガ
ン(４水和物)、０.１％燐酸二水素カリウム、０.５％炭
酸カルシウムおよび０.０５％アクトコール(商品名、消
泡剤、武田薬品工業(株)製)からなる主培養培地(pＨ
７．５)１２０リットルを入れた２００リットル容タン
クに接種し２４℃で１１４時間通気撹拌培養(通気量１
２０リットル／分、撹拌毎分１５０回転)を行ない、培
養液を得た。

【００２９】得られた培養液１０５リットルをpＨ２．
６に調整し、酢酸エチル１００リットルを加えて３０分
間撹拌した。混合物にラジオライト６００(昭和化学工
業社製)を加えてろ過し、得られた有機層８０リットル
を水３０リットルにて２度洗浄後、濃縮すると粗油状物
７８gが得られた。この油状物を少量のクロロホルム−
酢酸エチル混合液に溶解し、シリカゲル(１．３リット
ル、シリカゲル６０、７０−２３０メッシュ、イー・メ
ルク社、ドイツ)のカラムクロマトグラフィーに付し
た。カラムをヘキサン２リットル、ヘキサン−アセトン
(９:１)２リットルおよびヘキサン−アセトン(８:２)５
リットルにて順次洗浄後、活性物質をヘキサン−アセト
ン(６:４)２リットルにて溶出した。溶出液を濃縮する
と褐色粉末８．９gが得られた。この粉末を５等分し、
それぞれを高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)(カ
ラム、ＹＭＣ−Ｐack Ｓ−３６３−１５、Ｉ−１５、
ＯＤＳ、ワイエムシー社製;溶媒、５８％アセトニトリ
ル−１０mＭ リン酸緩衝液(pＨ３．０);流速、２０ml
／分)に付し、２０mlづつ分画した。各回についてフラ
クション番号２２から３２を集め(合計１．１リット
ル)、４００mlになるまで濃縮後、pＨを３．０に補正
し、酢酸エチルにて抽出した(２×２００ml)。酢酸エチ
ル層を合わせ、水洗(２×１５０ml)後、無水硫酸ナトリ
ウムにて乾燥し、濃縮した。得られた残渣を、少量のエ
ーテルに溶解しヘキサンを加えることにより、化合物Ｔ
ＡＮ−１８１３が淡黄色の粉末２．１gとして得られ
た。

【００３０】得られた化合物ＴＡＮ−１８１３の物理化
学的性状を以下に示す。 (１)外観:淡黄色粉末 (２)質量分析値(ＥＩＭＳ法) :m／z ４５７(Ｍ⁺) (３)分子式:Ｃ₂₆Ｈ₃₅ＮＯ₆ (４)元素分析値(％):Ｃ₂₆Ｈ₃₅ＮＯ₆として 計算値:Ｃ,６８．２５ Ｈ,７．７１ Ｎ,３．０６ 実測値:Ｃ,６７．９５ Ｈ,７．６３ Ｎ,２．９３ (５)紫外線(ＵＶ)吸収スペクトル:メタノール中、（図
１） 極大値:２４０nm(ε １６５００) (６)赤外線(ＩＲ)吸収スペクトル:ＫＢr錠剤中、 主な波数を示す(cm^-1)（図２） ３３３０、３２５０、２９６５、２９３５、２８６０、
２６３０、１７２５、１７１０、１６７０、１５９５、
１４６０、１３３５、１０９５、１００５、９２５、７
６０、７００

【００３１】(７)¹Ｈ核磁気共鳴(ＮＭＲ)スペクトル:３
００ＭＨz、重ジメチルスルホキシド中、テトラメチル
シランのシグナルを内部標準(０ ppm)とする（図
３）。 δppm;０.６４(３Ｈ,d,Ｊ＝６.７Ｈz)、０.７７(３Ｈ,
d,Ｊ＝７.４Ｈz)、０.８３(３Ｈ,t,Ｊ＝６.６Ｈz)、１.
０９(１Ｈ,m)、１.１５(１Ｈ,m)、１.２４(４Ｈ,m)、
１.３０(１Ｈ,m)、１.３６(１Ｈ、t,Ｊ＝１２.８Ｈz)、
１.５５(１Ｈ,t,Ｊ＝１０.５Ｈz)、１.７１(２Ｈ,m)、
１.７７(１Ｈ,m)、１.９２(２Ｈ,m)、２.７４(１Ｈ,
m)、２.７７(１Ｈ,m)、３.９４(１Ｈ,dd,Ｊ＝１０.５,
７.８Ｈz)、４.００(１Ｈ,q,Ｊ＝８.３Ｈz)、４.４１
(１Ｈ,s)、５.０５(１Ｈ,brd,Ｊ＝１０.２Ｈz)、５.０
７(１Ｈ,brd,Ｊ＝１７.１Ｈz)、５.５４(１Ｈ,dd,Ｊ＝
９.５,３.７Ｈz)、５.６５(１Ｈ,dd,Ｊ＝９.５,２.１Ｈ
z)、５.９９(１Ｈ,ddd,Ｊ＝１７.１,１０.２,８.３Ｈ
z)、１１.２９(１Ｈ,brs)、１１.９９(１Ｈ,brs)．

【００３２】(８)¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル:７５ＭＨ
z、重ジメチルスルホキシド中、テトラメチルシランの
シグナルを内部標準(０ ppm)とする（図４）。 δppm:１３.７(ＣＨ₃)、１７.６(ＣＨ₃)、２１.９(ＣＨ
₂)、２３.２(ＣＨ₃)、２６.６(ＣＨ₂)、２９.８(Ｃ
Ｈ)、３０.７(ＣＨ₂)、３１.２(ＣＨ)、３２.２(Ｃ
Ｈ₂)、３７.７(ＣＨ)、３８.３(ＣＨ₂)、４１.０(Ｃ
Ｈ)、４１.３(ＣＨ₂)、４７.２(ＣＨ)、４８.２(Ｃ
Ｈ)、６７.１(Ｑ)、１１７.４(ＣＨ₂)、１３２.９(Ｃ
Ｈ)、１３３.１(Ｑ)、１３４.１(ＣＨ)、１３７.３(Ｃ
Ｈ)、１５３.４(Ｑ)、１６９.９(Ｑ)、１７０.２(Ｑ)、
１７６.８(Ｑ)、１９９.６(Ｑ)(ただし、Ｑは４級炭
素、ＣＨはメチン炭素、ＣＨ₂はメチレン炭素、ＣＨ₃は
メチル炭素をそれぞれ示す。)

【００３３】(９)比旋光度:[α]_D ²²−４８．９°(c
０．５２、メタノール) (１０)高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ): カラム;ＹＭＣ−Ｐack Ａ−３１２ ＯＤＳ(ワイエム
シー社製) 移動相;６５％アセトニトリル−１０mＭリン酸緩衝液(p
Ｈ３．０) 流速;２.０ml／分 検出;ＵＶ吸収、２１４nm、２５４nm 保持時間;４.５分 (１１)薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ）： Ａ 担体；シリカゲル６０ Ｆ２５４ ＴＬＣプレート
(イー・メルク社製、ドイツ) 展開溶媒;クロロホルム−メタノール(９:１) Ｒf値; ０.４３ Ｂ 担体;シリカゲル６０ Ｆ２５４ ＴＬＣプレート
(イー・メルク社製、ドイツ) 展開溶媒;ヘキサン−アセトン(１:１) Ｒf値; ０.５０

【００３４】(１２)呈色反応: 陽性;リンモリブデン酸、ヨウ素、濃硫酸、過マンガン
酸カリウム 陰性;ニンヒドリン、エールリッヒ試薬、バートン試薬 (１３)酸性、中性、塩基性の別:酸性 (１４)溶解性: 易溶;メタノール、酢酸エチル、クロロホルム、ジメチ
ルスルホキシド 難溶;水、ヘキサン これらのデータに基づき、化合物ＴＡＮ−１８１３の構
造を以下のとおり決定した。

【００３５】

【化３】

【００３６】製剤例１ 実施例１で得られた化合物ＴＡＮ−１８１３を用いて、
下記に示す処方の全成分を混和し、ゼラチンカプセルに
充填し、カプセル１個当たり、３０mgの化合物ＴＡＮ−
１８１３を含有するカプセル剤を製造した。 化合物ＴＡＮ−１８１３ ３０mg 乳糖 １００mg コーンスターチ ４０mgステアリン酸マグネシウム １０mg 合 計 １８０mg

【００３７】製剤例２ 実施例１で得られた化合物ＴＡＮ−１８１３とステアリ
ン酸マグネシウムを可溶性デンプンの水溶液で顆粒化
し、乾燥後、乳糖及びコーンスターチと混合した。混合
物を圧縮成型し、下記に示す処方の錠剤を製造した。 化合物ＴＡＮ−１８１３ ３０mg 乳糖 ６５mg コーンスターチ ３０mg 可溶性デンプン ３５mgステアリン酸マグネシウム ２０mg 合 計 １８０mg

【００３８】製剤例３ 実施例１で得られた化合物ＴＡＮ−１８１３を用いて、
下記に示す処方の全成分を混和し、ゼラチンカプセルに
充填し、カプセル１個当たり、１０mgの化合物ＴＡＮ−
１８１３を含有するカプセル剤を製造した。 化合物ＴＡＮ−１８１３ １０mg 乳糖 １１０mg コーンスターチ ５０ｍｇステアリン酸マグネシウム １０ｍｇ 合 計 １８０mg

【００３９】製剤例４ 化合物ＴＡＮ−１８１３を各バイアルに１０mgずつ分配
して静注用組成物を得た。一方、ポリエチレングリコー
ル４００(３０％Ｗ／Ｗ)を含有する注射用蒸留水(１リ
ットル)にマンニトール(５０g)を溶解した。この溶液を
滅菌濾過に付し、その１mlをバイアルに充填して可溶化
剤用組成物を得た。上記組成物を組み合わせてキットと
して使用した。

【００４０】

【発明の効果】本発明によれば、ファルネシルトランス
フェラーゼ阻害作用、細胞増殖阻害作用及び抗腫瘍作用
を有する新規化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩、そ
の製造法、および化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩
を含有してなるファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤
が提供される。化合物ＴＡＮ−１８１３およびその塩は
低毒性で、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤とし
て有用であり、かつ、抗腫瘍剤、特にras遺伝子変異を
有する腫瘍の増殖および転移を防止し得る物質であるた
め、制癌剤としても有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】 化合物ＴＡＮ−１８１３の紫外線吸収スペク
トル(メタノール中)である。

【図２】 化合物ＴＡＮ−１８１３の赤外線吸収スペク
トル(ＫＢr錠剤中)である。

【図３】 化合物ＴＡＮ−１８１３の¹Ｈ核磁気共鳴(Ｎ
ＭＲ)スペクトル(重ジメチルスルホキシド中、内部標準
としてテトラメチルシランを添加)である。

【図４】 化合物ＴＡＮ−１８１３の¹³Ｃ核磁気共鳴
(ＮＭＲ)スペクトル(重ジメチルスルホキシド中、内部
標準としてテトラメチルシランを添加)である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 9/99 (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/10 Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 で表される化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩。
2. 【請求項２】 化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩を
   含有してなるファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤。
3. 【請求項３】 化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩を
   含有してなる抗腫瘍剤。
4. 【請求項４】 化合物ＴＡＮ−１８１３またはその塩を
   含有してなる医薬組成物。
5. 【請求項５】 フォーマ属に属し、化合物ＴＡＮ−１８
   １３を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培
   養物中に化合物ＴＡＮ−１８１３を生成蓄積せしめ、こ
   れを採取することを特徴とする化合物ＴＡＮ−１８１３
   またはその塩の製造法。
6. 【請求項６】 化合物ＴＡＮ−１８１３を生産する能力
   を有する微生物フォーマエスピー ＦＬ−４１５１０
   (ＦＥＲＭ ＢＰ−４６３２)。