JPH0767955A - 腫瘍壊死因子産生誘導方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 操作性、実用性、有効性及び安全性の点にお
いて優れた腫瘍壊死因子（ＴＮＦ：Tumor Necrosis Fac
tor)産生誘導方法を提供する。 【構成】 水酸基、アミド基及びエステル基から選択し
た少なくとも１つの官能基を有する高分子材料またはカ
チオン性官能基を有する材料と、血液とを接触させてＴ
ＮＦの産生を誘導するＴＮＦ産生誘導方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、材料と血液とを接触さ
せることにより、ＴＮＦを産生誘導するための方法に関
し、天然型のＴＮＦを高密度に含む血液や血液成分（血
漿や血清）を入手する方法であって、こうして得られた
血液、血液成分、及び天然型ＴＮＦに関するものであ
る。またこうして得られた血液、血液成分及び天然型Ｔ
ＮＦを患者に戻すことにより、例えば癌などに治療効果
を発揮する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】周知のごとく、生体の悪性腫瘍に対する
免疫監視機構を担う抗腫瘍性細胞としては、キラー細
胞、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞及び、活性化マクロファージ
等が重要な役割を果たしている。また、これらの細胞や
リンパ球から分泌されるインターロイキン、インターフ
ェロン、ＴＮＦ等も生体の抗腫瘍性に大きく関与してい
る。したがって、悪性腫瘍に対する免疫学的治療方法と
しては、患者のこれらの細胞を活性化して抗腫瘍効果を
効率的に誘導することや、これらのサイトカインを誘導
することで抗腫瘍効果を発揮させることが考えられる。
しかしながら、癌患者では一般的に癌の進行とともに免
疫能が低下することが報告されており、癌患者の生体内
においては免疫抑制因子等により、免疫能が抑制されて
いる状態にあると考えられている。

【０００３】このような免疫能の低下した癌患者の生体
内においては、抗腫瘍効果の効率的な誘導は困難である
と言える。したがって、癌患者の体内で免疫系を賦活
し、抗腫瘍性を誘導するためには、免疫能の低下した患
者の体内に、誘導された抗腫瘍性細胞を導入する方法、
あるいは免疫賦活作用をもつサイトカインを体内に投与
する方法が癌治療法として考えられる。

【０００４】最近、体外に取り出した癌患者のリンパ球
に遺伝子組み換えヒト・インターロイキン２を加えて培
養し、活性化してＬＡＫ細胞を誘導した後に癌患者体内
に戻して、抗腫瘍効果を発揮させる養子免疫療法や、腫
瘍細胞を特異的に攻撃するＴＮＦ等を癌患者体内に投与
する治療法が試みられている（Rosenberg,S.A.,Lotze,
M.T.,Muul,L.M.et al.:A Progress report on the tre
atment of 157 patients with advanced cancer using
lymphokine-activated killer cells and interleukin
2 or high-dose interleukin 2 alone. N.Engl.J.Med.
316:889-897,1987)。

【０００５】また、細菌の菌体成分等を癌患者に投与し
て、内因性のＴＮＦを誘導する試みも行われている（大
島治之、杣源一郎、水野伝一：腫瘍壊死因子（ＴＮ
Ｆ）：内発性ＴＮＦ産生の人癌への応用とその展望． B
IOTHERAPY, 1:145-151,1987 、加藤幹雄、岡田耕一、杣
源一郎、竹内正七、水野伝一：内因性及び外因性ＴＮ
Ｆ（ＦＥＴ）療法 多施設共同研究による臨床成績．BI
OTHERAPY, 5:473-477,1991) 。

【０００６】さらに、ＴＮＦを産生誘導するリポポリサ
ッカライド（ＬＰＳ）を固定化した材料に血液を循環し
て癌患者の治療を行おうとする基礎的な研究も進められ
ている（阿部元：ＬＰＳ固定化ビーズによる抗腫瘍効
果．日外会誌，92:627-635,1991)。同様に、ＬＰＳを半
透膜や選択性透過膜を介して血液と接触させて、体外で
ＬＰＳ処理した血液を患者に戻して免疫系を賦活するこ
とも考えられている（特開昭61-113465)。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】前記の養子免疫療法で
は、癌患者から大量のリンパ球を取り出し、無菌的に長
期間、インターロイキン２の存在下で培養した後に、癌
患者に注入するという操作を行うため、非常に手間がか
かること並びに、培養に長時間を要することなどの、多
くの問題があった。

【０００８】また、最近、遺伝子組み換えにより、ＴＮ
Ｆの製造が可能となり、遺伝子組み換え型ヒトＴＮＦを
用いた癌治療の臨床検査が進められている（池田重雄、
石原和之：皮膚悪性腫瘍に対する遺伝子組み換え型ヒト
腫瘍壊死因子Sertenef(PT-050)の臨床第２相試験．Skin
Cancer,5:210-226,1991) 。しかし、ＴＮＦは、免疫賦
活効果と、腫瘍細胞を直接殺す効果の双方を併せ持って
いるサイトカインであるが、組み換え型ＴＮＦの効果
は、期待されたほど大きくはなかった。これは、組み換
え型は患者自身からの内因性のものではないため、効果
が少なく、副作用が大きいためと考えられる。

【０００９】そこで、ＢＣＧなどの菌体成分やＯＫ−４
３２などの薬剤を患者に投与して、内因性のＴＮＦを誘
導して癌の治療を行おうとする試みが進められている。
しかし、菌体成分等によるＴＮＦ等の誘導は、癌患者体
内で菌体成分等が様々な反応をするため、副作用が起こ
る。

【００１０】また、ＬＰＳ固定化材料を用いた血液循環
法では、ＬＰＳが脱離し、体内に移行し、副作用を起こ
すという問題がある。また、一般に強い免疫賦活作用を
持つ免疫刺激物質は毒性なども強いものが多く、それら
を半透膜に包んだり、固定化したりした場合、血液中へ
の漏出や、脱離を完全に抑えることは難しく、安全性の
保証ができない。

【００１１】また、ＴＮＦは生体内において、多様な生
理活性を示すことが知られており、体内のＴＮＦの動態
と各種疾患の病態との関連性が注目されている。そのた
め、従来遺伝子組替え型のＴＮＦを標準品として血液中
のＴＮＦ量を測定することが行われているが、この遺伝
子組替え型のＴＮＦが血液中に存在する天然型ＴＮＦと
同じ反応性を示す保証はない。そのため、正確な測定結
果を得るため天然型ＴＮＦを標準品とすることが望まれ
ている。

【００１２】本発明は、上記の問題点を解決すべく、従
来の方法よりも操作性、実用性、有効性、安全性の点で
飛躍的に向上させたＴＮＦ産生誘導方法を提供するもの
である。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明によるＴＮＦ産生
誘導方法は、水酸基、アミド基及びエステル基から選ば
れる１つあるいは１つ以上の官能基を有する高分子材
料、または、カチオン基を有する高分子材料と、血液と
を接触させることにより、ＴＮＦの産生を誘導すること
を特徴とするものであって、該材料と血液とを１５℃〜
５２℃の範囲で接触させることを特徴とするものであ
る。

【００１４】血液中の単球や好中球などの白血球が異物
と反応すると、種々の酵素、メディエーターを放出す
る。また、これらの細胞が材料と接触するときも同じよ
うな反応が起こる。これは、材料が異物とみなされて起
こるものであるが、この反応は材料の性質によって大き
く変わってくる。そのため、材料の性質を制御すること
によって、この反応を制御できると考えられる。

【００１５】我々は、この反応の中で、白血球によるＴ
ＮＦの産生に注目し、種々の天然及び合成高分子材料と
血液との接触によるＴＮＦの産生誘導について、鋭意研
究を行い、種々の高分子材料が血液中でＴＮＦの顕著な
産生誘導を引き起こすことを発見した。特に、水酸基、
アミド基及び／またはエステル基を有する高分子材料
や、カチオン性官能基を有する高分子材料と血液とを接
触させることによって、顕著なＴＮＦの産生誘導が認め
られたのに対して、ポリスチレンやポリエチレン、ポリ
プロピレン、ポリ塩化ビニルのような高分子材料では、
ほとんどＴＮＦの産生誘導が認められてなかった。スル
ホン酸やカルボキシル基のようなアニオン性基だけを有
する高分子材料では、低いレベルのＴＮＦの産生誘導を
認めたに過ぎなかった。

【００１６】本発明で用いられる、水酸基、アミド基、
エステル基から選ばれる１つあるいは１つ以上の官能基
を有する高分子材料には、アガロース、セルロース、デ
ンプン、プルラン、デキストラン、グリサーゲン、マン
ナン、グルコマンノグリカン、ガラクトマンノグリカ
ン、ペクチン、アルギン酸、ヒアルロン酸、コンドロイ
チン硫酸、キチン、キトサンのような天然多糖類やそれ
らをカルボキシメチル化、スクシニル化、糖側鎖グラフ
ト、ペプチド側鎖グラフト、グリコール化、アシル化、
アミノ化によって修飾した種々の誘導体が挙げられる。

【００１７】例えば、本発明者らが得た知見では、キチ
ン及びそのＮ−脱アセチル化物であるキトサンやキトサ
ンのアミノ基に１、２、３、４級アミンを導入したキト
サン誘導体、アルキル基を導入した誘導体、また、水酸
基にスルホン基、カルボキシメチル基を導入した誘導体
などは血液との接触によって、ＴＮＦの大きな産生誘導
を示した。また、アルガロースやアガロースに２、３−
ジプロモプロパノールを強アルカリ条件下で作用させて
架橋することで強度を高めた架橋型アガロースや、それ
にジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基等のイオン交換
基をエーテル結合させたアガロース誘導体、４級アミン
等で修飾したアガロース誘導体よりなるゲルビーズと血
液との接触によっても、ＴＮＦの顕著な産生誘導方法が
見られた。また、アルギン酸ナトリウムなどを水に溶解
させ、これらと多価金属イオンを含む水溶液とを接触さ
せることにより作製したアルギン酸ゲルビーズと血液と
の接触によっても、ＴＮＦの顕著な産生誘導が見られ
た。

【００１８】また、本発明で用いられる、水酸基、アミ
ド基、エステル基を有する高分子材料には、ポリビニル
アルコール、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリ
ヒドロキシメチルアクリレート、ポリフェノール、ポリ
ビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリリジン、
ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸エステル、ポリ
メタクリル酸エステル等の合成高分子材料やその種々の
誘導体や架橋物及びそれらとスチレン、メタクリル酸エ
ステル等のビニルモノマーとの種々の共重合体が挙げら
れる。

【００１９】例えば、本発明者らが得た知見では、ポリ
ビニルアルコールゲルは、血液との接触によってＴＭＦ
の顕著な産生誘導を示した。このポリビニルアルコール
ゲルは、ほう酸添加により架橋を導入したり、側鎖に光
感応性の官能基であるスチリルピリジニウム基やスチリ
ルキノリニウム基を有する光架橋性ポリビニルアルコー
ルを用いたり、ゲル化剤と称する種々の有機及び無機化
合物を添加したり、該水溶液の真空凍結乾燥や凍結融解
の反復操作によって作製することができる。

【００２０】また、本発明者らが得た知見では、上記官
能基を有するメタクリル酸エステルモノマーを重合及
び、各種のビニル・モノマーなどと共重合することによ
って、水酸基を導入した修飾体や、アルキル基、フェニ
ル基を導入した材料でも、ＴＮＦの顕著な産生誘導が確
認された。

【００２１】また、本発明で用いられるカチオン性官能
基を有する高分子材料は、１〜４級アミノ基、スルホニ
ウム基、ホスホニウム基等を有する高分子材料であり、
例えば、ポリビニルピリジン及びその塩、イオネンポリ
マー、Ｎ−トリアルキルアミノメチルポリスチレン、ア
ミノアセタール化ポリビニルアルコール、ポリビニルイ
ミダゾール、ポリエチレンイミン、ポリジアルキルジア
リルアンモニウム塩、ポリジアルキルジアリルアンモニ
ウム塩−ＳＯ₂ 共重合体、ポリビニルベンジルスルホニ
ウム塩、ポリビニルベンジルホスホニウム塩等が挙げら
れる。

【００２２】上記カチオン性官能基を有する高分子材料
は、天然多糖類及びポリスチレン等の合成高分子に種々
の化学修飾方法を用いて、上記カチオン性官能基を導入
したり、これらの官能基を有するビニルモノマー間の共
重合、架橋反応により得ることができる。例えば、スチ
レンとジビニルベンゼンを共重合し、Ｆｒｉｅｄｉｌ−
Ｃｒａｆｔｓ反応を介して、クロロメチル基をベンゼン
核に導入し、クロロメチル基をアミンで処理することに
よって、アミノ化し、しかる後にアルキル置換を行うこ
とにより、ポリスチレンにカチオン性官能基を導入する
ことができる。

【００２３】また、他の方法として、例えば、エピクロ
ルヒドリンのような分子内にクロルメチル基とオキシラ
ン環とを有する化合物にイミダゾール類を反応させ、変
性イミダゾールを合成し、これを多官能性エポキシ化合
物で樹脂化することによっても得ることができる。ま
た、カチオン性官能基を有する高分子材料については、
他にも種々の合成法が考えられるが、本発明はその方法
によって限定されるものではない。

【００２４】本発明者らが得た知見では、カチオン性基
として、４級アンモニウムのトリアルキル置換窒素原子
をもつトリメチルアンモニウム基やジアルキルエタノー
ルであるジメチルエタノールアンモニウム基を導入した
ポリスチレン修飾体は、未修飾のポリスチレンやアニオ
ン性基で修飾したポリスチレンからなる材料に比較し
て、著しく大きなＴＮＦの産生誘導を示した。また、カ
チオン性基として、１級または２級アミノ基をもつもの
や３級アミノ基をもつものでも、ＴＮＦの大きな産生誘
導が確認された。一方、アニオン性基であるスルホン酸
基を導入したポリスチレン誘導体では、ほとんどＴＮＦ
の産生誘導が見られなかった。

【００２５】また、ジメチルエタノールアンモニウム
基、ジエチルアミノ基、末端に１級アミノ基のようなカ
チオン性基を有するメタクリル酸エステルモノマーの共
重合により得られたポリメタクリル酸エステル系材料
は、顕著なＴＮＦの産生誘導を示した。一方アニオン性
基であるカルボキシル基を有するメタクリル酸エステル
系材料では、ほとんどＴＮＦの産生誘導が見られなかっ
た。

【００２６】また、キチン及びそのＮ−脱アセチル化物
であるキトサンやキトサンのアミノ基に１〜４級アミン
を導入したキトサン誘導体、ジエチルアミノエチル（Ｄ
ＥＡＥ）基等のイオン交換基をエーテル結合させたアガ
ロース誘導体、４級アミン等で修飾したアガロース誘導
体は、上述したように、特に高いＴＮＦの産生誘導を示
した。

【００２７】本発明において用いられる種々のＴＮＦ産
生誘導材料の形状は、粒子状、繊維状、中空糸状、膜状
等いずれの公知の形状のものでも用いることができる。
例えば、スチレンモノマーにジビニルベンゼンとラジカ
ル開始剤ベンゾイルパーオキサイドを加えて、水中で６
０℃、５時間懸濁攪拌を続けるとスチレン・ジビニルベ
ンゼン共重合体球状粒子を容易に得ることができる。粒
子径は攪拌速度、水中に加える安定剤の種類と濃度、モ
ノマーと水の容量比などで制御できる。また、希釈剤と
モノマーの混液の懸濁重合を行うことで、多孔質化を行
うことも容易である。また、各種メタクリル酸エステル
モノマーの重合をモノマーに対する良溶媒でかつポリマ
ーに対する貧溶媒中で懸濁重合を行うと、ポリメタクリ
ル酸エステルの球状粒子を容易に得ることができる。粒
子形は攪拌速度、添加する安定剤の種類と濃度などで制
御することができる。こうして合成した球状粒子に、上
記したような化学修飾反応を行い、種々のＴＮＦ産生誘
導材料が得られる。

【００２８】血液と上記材料とを接触させる方法につい
ては、血液と上記材料が十分に接触され得る限り、任意
の方法を用いることができる。例えば、繊維状の上記材
料をカラムに充填し、該カラムに血液を循環させる方法
や、粒径５０μｍ〜５ｍｍのビーズ状の材料をカラムに
充填し、血液を循環させる方法を用いることができる。
さらに、血液中に種々の形状の上記材料を浮遊させるこ
とにより、血液と上記材料を接触させてもよい。

【００２９】上記材料と血液を接触させる際の温度は、
１５℃〜５２℃の範囲がＴＮＦの産生誘導を高める上で
好ましい。本発明者らが得た知見では、後述の実施例か
ら明らかなように、接触温度が１５℃未満の時には、Ｔ
ＮＦの産生誘導は見られなかった。また、接触温度が５
２℃より高温度の場合には、血漿タンパク質の変性、著
しい溶血、白血球の崩壊が起こり、ＴＮＦの産生誘導は
激減した。

【００３０】本発明では、上記材料と血液とを接触させ
ることにより、上記材料と細胞との相互作用が起こり、
ＴＮＦの産生誘導が行われる。このＴＮＦ産生細胞と
は、抹消血中の細胞に限らず、リンパ管、リンパ節、膵
臓等から得られる細胞も含まれる。血液中にはＴＮＦを
産生するこれらの細胞が多く含まれている。血液中のこ
れらの細胞が上記材料と作用し、ＴＮＦが産生誘導させ
るが、直接作用せずとも、上記材料と血液中の何らかの
因子とが作用して誘導された別の因子を介して、ＴＮＦ
の産生が誘導されても良い。

【００３１】上記材料を用いて、癌患者の血液からＴＮ
Ｆの産生誘導を行い、癌等の治療に用いることや天然型
のＴＮＦを得ることが可能となる。治療においては、体
外循環システム等を用いて、ＴＮＦが産生誘導された血
液を癌患者に戻すことにより、癌患者由来の内因性ＴＮ
Ｆが患者体内で抗腫瘍効果を発揮する。また、接触させ
た血液から血漿などを分離し、ＴＮＦを産生誘導した癌
患者自身の血漿などを適時、全身もしくは腫瘍局所に投
与することも可能である。

【００３２】これらの治療方法をより詳しく述べる。ま
ず、癌患者などの治療には、これらの材料を充填したカ
ラムを用いた血液の体外循環治療を行うことができる。
癌患者などの血液を血液チューブなどを用いて体外循環
システムに導き、繊維状またはビーズ状にしたＴＮＦ誘
導材料を充填したカラムに導入する。カラム内で、血液
と材料が接触することで内因性のＴＮＦが血液内で誘導
される。高密度の内因性ＴＮＦを含む血液を再び癌患者
などの体内に返還することで、患者体内に患者由来のＴ
ＮＦが投与されることになる。また、上記ＴＮＦ産生誘
導材料を充填した血液バッグ等に、予め採血した患者の
血液を入れ、この中でＴＮＦの産生誘導を行い、患者由
来の内因性ＴＮＦを高密度に含有する血漿などを採取す
る。この血漿などを凍結した保存しておき、必要に応じ
て患者に投与することで、有効な治療を行うことができ
る。例えば、腫瘍を外科的に切除するときなどに予め凍
結しておいた自己のＴＮＦ産生血漿を全身もしくは腫瘍
局所に投与し、腫瘍の増大、移転を阻止することができ
る。

【００３３】また、種々のＴＮＦ産生誘導材料を用いて
患者血液から簡便にＴＮＦを誘導することができ、その
誘導量の程度を測定することにより、患者のＴＮＦ産生
能を検出することができる。つまり、患者自身のもつＴ
ＮＦ産生能を簡便に調べることができる。これは、患者
の病態を反映する有効な免疫学的パラメーターとなり得
る。

【００３４】一方、従来の方法によって血液中のＴＮＦ
濃度を測定する場合、標準品として遺伝子組替え型ＴＮ
Ｆが用いられているが、天然型ＴＮＦを高密度に含む血
漿、天然型ＴＮＦ、患者自身由来のＴＮＦなどは、非常
に信頼性の高い標準品となる。従って、種々のＴＮＦ産
生誘導材料と血液との接触によって産生されたＴＮＦ
は、非常に信頼性の高い標準品として用いることがで
き、またこうしたＴＮＦは簡便に得ることができる。

【００３５】

【作用】本発明では、水酸基、アミド基、エステル基を
有する高分子材料やカチオン性官能基を有する高分子材
料が血液と接触されるため、後述の実施例に示すよう
に、上記材料の性質によるため、血液中のＴＮＦを産生
する細胞と該材料との相互作用が促進されることによ
り、あるいは上記材料と何らかの因子とが相互作用し、
それによって誘導された別の因子により、ＴＮＦの産生
が効率よく誘導され得る。

【００３６】

【実施例】以下、本発明の実施例及び比較例を挙げるこ
とにより、本発明を詳細に説明するが、本発明は、以下
の実施例に限定されるものではない。

【００３７】（キトサンまたはキトサン誘導体によるＴ
ＮＦの産生誘導）実施例１ キトサンのアミノ基がそのまま残っているキトサンゲル
粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３
（富士紡績社製商品名）を１５ｍｌ用ポリプロピレンチ
ューブ（岩城硝子社製）に、かさ体積で１ｍｌ入れた。
これに注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ添
加して軽く攪拌した。次に、５００ｒｐｍで５分間遠心
し、遠心後、上澄みを吸引して捨てさった。さらに、同
様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ加え
て攪拌し、５００ｒｐｍで５分間遠心し、しかる後上澄
みを吸引して捨てた。この洗浄操作を３回行い、４℃に
て一晩放置した。その後、同じ洗浄操作を５回行い、最
後にできるだけ生理食塩水を取り除いた。

【００３８】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社）に上記のよ
うにして洗浄したキトサンゲル粒子を、かさ体積で５０
０μｌ充填し、実施例１とした。

【００３９】実施例２ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基がアセチル化されたｃｈｉｔｏｐｅａ
ｒｌ ｂａｓｉｃ ＢＬ−０３（富士紡績社製）に変更
したこと以外は実施例１と同様にして、実施例２のキト
サン誘導体充填チューブを得た。

【００４０】実施例３ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基に芳香族アルキル基を介して１級アミ
ンが導入されたＣｈｉｔｏｐｅａｒｌ ＢＣＷ−３５０
３（富士紡績社製）に変更したこと以外は実施例１と同
様にして、実施例３のキトサン誘導体充填チューブを得
た。

【００４１】実施例４ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基に直鎖アルキル基を介して１級アミン
が導入されたＣｈｉｔｏｐｅａｒｌ ＢＣＷ−３００３
（富士紡績社製）に変更したこと以外は実施例１と同様
にして、実施例４のキトサン誘導体充填チューブを得
た。

【００４２】実施例５ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基に３級アミンが導入されたＣｈｉｔｏ
ｐｅａｒｌ ＢＣＷ−２６０３（富士紡績社製）に変更
したこと以外は実施例１と同様にして、実施例５のキト
サン誘導体充填チューブを得た。

【００４３】実施例６ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基に４級アミンが導入されたＣｈｉｔｏ
ｐｅａｒｌ ＢＣＷ−２５０３（富士紡績社製）に変更
したこと以外は実施例１と同様にして、実施例６のキト
サン誘導体充填チューブを得た。

【００４４】実施例７ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンの６位の水酸基にカルボキシメチル基が導入され
たＣｈｉｔｏｐｅａｒｌ ＣＭ−０３（富士紡績社製）
に変更したこと以外は実施例１と同様にして、実施例７
のキトサン誘導体充填チューブを得た。

【００４５】実施例８ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンの６位の水酸基にスルホン基が導入されたＣｈｉ
ｔｏｐｅａｒｌ ＳＵ−０３（富士紡績社製）に変更し
たこと以外は実施例１と同様にして、実施例８のキトサ
ン誘導体充填チューブを得た。

【００４６】実施例９ ＣＨＩＴＯＳＡＮ １０Ｂ（ヒゲタ醤油社製商品名）の
粉末５ｇを注射用生理食塩水（大塚製薬社製）３０ｍｌ
に懸濁し、１５００ｒｐｍで１分間の条件で高速遠心し
た。遠心後、上澄みを吸引して捨て、同様に注射用生理
食塩水（大塚製薬社製）を３０ｍｌ加えて懸濁し、５０
０ｒｐｍで１分間遠心し、次に上澄みを吸引して捨て
た。この洗浄操作を３回行い、４℃にて一晩放置した。
その後、上記と同じ洗浄操作を５回行い、最後にできる
だけ生理食塩水を取り除いた。

【００４７】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社）中に、上記
のようにして洗浄したキトサン粉末をかさ体積で５００
μｌ充填し、実施例９とした。

【００４８】実施例１〜９で得た各チューブに、ヘパリ
ン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に
取り付けて、３７℃で２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒
混和した。

【００４９】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をＴＮＦモノクローナル抗体
を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System 社製 Quant
ikineTNF-α) にて測定した。なお、この測定方法の検
出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。

【００５０】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表１に示す。

【００５１】

【表１】

【００５２】（アガロース及びアガロース誘導体による
ＴＮＦの産生誘導）実施例１０ アガロース（ナカライ化学社製、 電気泳動用特製試薬
ＧＰ−３６）を５重量％濃度で蒸留水に溶解させ、１
２１℃で２０分間オートクレープを行った。この溶液を
６０℃に保温しておき、冷蒸留水（４℃）中にマイクロ
シリンジを用いて滴下して、アガロースゲルビーズ（粒
径５ｍｍ）を作製した。

【００５３】このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用チューブ（eppendorf 社) に充填した。充填量は
アガロースゲルビーズ２０個とした。

【００５４】実施例１１ 約２重量％濃度のアガロースよりなる、 Sepharose 2B
(Pharmacia LKB Biotechnolgy社) の懸濁液３ｍｌを、
１５ｍｌ用ポリプロピレンチューブ（岩城硝子社製）に
入れた。これを１０００ｒｐｍで５分間遠心して、上澄
みを吸引して捨て、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）
を１２ｍｌ加えて攪拌し、同じ条件で遠心し、上澄みを
吸引して捨てた。この洗浄操作を３回行い、４℃にて一
晩放置した。

【００５５】このゲル担体５００μｌ（かさ体積）を実
施例１と同様に、２ｍ１用ポリプロピレンチューブ (ep
pendorf 社) に入れて、注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）にて洗浄した。

【００５６】実施例１２ 約６重量％濃度の架橋型アガロースよりなる、Sepharos
e CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnolgy 社）を用いたこ
と以外は、実施例１１と同様にしてビーズを作製した。

【００５７】実施例１３ 約６重量％濃度の架橋型アガロースにジエチルアミノエ
チル（ＤＥＡＥ）基をエーテル結合で導入した、DEAE S
epharose CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnolgy社）を用
いたこと以外は、実施例１１と同様にして、ビーズを作
製した。

【００５８】実施例１４ 約４重量％濃度の架橋型アガロースにエーテル結合を介
してフェニル基を導入した、Phenyl Sepharose CL-4B(P
harmacia LKB Biotechnolgy 社）を用いたこと以外は、
実施例１１と同様にしてビーズを得た。

【００５９】実施例１５ 約６重量％濃度の架橋型アガロースに４級アミンを導入
した、Q Sepharose FF(Pharmacia LKB Biotechnology
社）を用いたこと以外は、実施例１１と同様にしてビー
ズを得た。

【００６０】実施例１０〜１５の各ビーズを充填したチ
ューブにヘパリン採血した健常人鮮血１．６ｍｌを加え
て回転円盤に取り付けて、３７℃で２時間、回転数２６
ｒｐｍで転倒混和した。

【００６１】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をＴＮＦモノクローナル抗体
を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System 社製 Quant
ikineTNF-α) にて測定した。なお、この測定方法の検
出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。

【００６２】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表２に示す。

【００６３】

【表２】

【００６４】（アルギン酸ゲルによるＴＮＦの産生誘
導）実施例１６ ２重量％のアルギン酸ナトリウム（ＡＬ−１、中粘度タ
イプ、新田ゼラチン社製）を生理食塩水に懸濁して、オ
ートクレーブにより１２１℃、２０分で処理すること
で、加熱滅菌と同時にアルギン酸ナトリウムを溶解させ
た。これを滅菌済み１．５重量％塩化カルシウム溶液中
へ滴下してゲル化させることにより、粒径約２．５ｍｍ
のアルギン酸カルシウムのゲルビーズを作製した。この
ゲルビーズを１５ｍｌ用ポリピロプレンチューブ（岩城
硝子社製）に、かさ体積で１ｍｌ入れた。これに注射用
生理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ添加して軽く攪
拌した。５００ｒｐｍで１分間遠心し、上澄みを吸引し
て捨て、同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１
２ｍｌ加えて攪拌し、遠心して上澄みを吸引して捨て
た。この洗浄操作を３回行い、一晩４℃にて放置した。
その後、同じ洗浄操作を５回行い、最後にできるだけ生
理食塩水を取り除いた。

【００６５】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（Eppendorf 社製）にこのゲルビーズ
を７０個充填した。

【００６６】実施例１７ ２重量％のアルギン酸ナトリウムを５重量％の濃度のも
のに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。

【００６７】実施例１８ ２重量％のアルギン酸ナトリウムを１０重量％の濃度の
ものに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。

【００６８】実施例１９ １．５重量％の塩化カルシウム溶液を３重量％の濃度の
ものに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。

【００６９】実施例２０ １．５重量％の塩化カルシウム溶液を１．５重量％の塩
化バリウム溶液に変更した以外はすべて実施例１６と同
様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。

【００７０】実施例２１ １．５重量％の塩化カルシウム溶液を１．５重量％の塩
化バリウム溶液に変更し、５重量％のアルギン酸ナトリ
ウムを３重量％の濃度のものに変更した以外はすべて実
施例１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得
た。

【００７１】実施例２２ アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（100 〜
150cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。

【００７２】実施例２３ アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（300 〜
400cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。

【００７３】実施例２４ アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（500 〜
600cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。

【００７４】実施例１６〜２４の各ビーズを充填したチ
ューブにヘパリン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加
えて回転円盤に取り付けて、３７℃で２時間、回転数２
６ｒｐｍで転倒混和した。

【００７５】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をＴＮＦモノクローナル抗体
を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System 社製 Quant
ikineTNF-α) にて測定した。なお、この測定方法の検
出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。

【００７６】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表３に示す。

【００７７】

【表３】

【００７８】（ポリビニルアルコールゲルによるＴＮＦ
の産生誘導）実施例２５ 重合度；約１４００、けん化度；９９ｍｏｌ％のポリビ
ニルアルコールゲル（キシダ化学社製）の１０重量％水
溶液を調製した。この水溶液は、Ｒ＝［ポリビニルアル
コールモノマー単位］／［金属イオン］と定義された、
Ｒ＝１０となるようにＦｅ³⁺を含んでいる。この粘ちょ
う溶液を、滅菌済み１ＭのＮａＯＨ水溶液中にシリンジ
を用いて滴下し、約３０分放置した。これによって、粒
径約２．５ｍｍのポリビニルアルコールゲルビーズを調
製した。［横井弘：ＰＶＡおよびＰＡＡの錯体ゲル、高
分子加工，Ｖｏｌ．４０，Ｎｏ．１１，９９１］。

【００７９】上記ゲルビーズを１５ｍｌ用ポリプロピレ
ンチューブ（岩城硝子社製）に、かさ体積で１ｍｌ入れ
た。これに注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍ
ｌ添加し、軽く攪拌した。次に、５００ｒｐｍで１分間
遠心し、上澄みを吸引して捨て、同様に注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ加えて攪拌し、上記と同
条件で遠心し、上澄みを吸引して捨てた。この洗浄操作
を３回行い、４℃にて一晩放置した。その後、同じ洗浄
操作を５回行い、最後にできるだけ生理食塩水を取り除
いた。

【００８０】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に、得ら
れたゲルビーズを７０個充填した。

【００８１】実施例２６ 用いたポリビニルアルコールを重度；約２０００、けん
化度；９８．５〜９９．４ｍｏｌ％のポリビニルアルコ
ール（キシダ化学社製）に変更したこと以外はすべて実
施例２５と同様にして、実施例２６のポリビニルアルコ
ールゲル充填チューブを得た。

【００８２】実施例２７ 用いたポリビニルアルコールの濃度を１５重量％に変更
したこと以外はすべて実施例２５と同様にして、実施例
２７のポリビニルアルコールゲル充填チューブを得た。

【００８３】実施例２８ 用いたポリビニルアルコールの濃度を１５重量％に変更
したこと以外はすべて実施例２６と同様にして、実施例
２８のポリビニルアルコールゲル充填チューブを得た。

【００８４】実施例２９ 用いた金属イオン量をＲ＝２０となるように変更したこ
と以外はすべて実施例２５と同様にして、実施例２９の
ポリビニルアルコールゲル充填チューブを得た。

【００８５】実施例３０ 用いた金属イオン量をＲ＝２０となるように変更したこ
と以外はすべて実施例２６と同様にして、実施例３０の
ポリビニルアルコールゲル充填チューブを得た。

【００８６】実施例３１ 用いた金属イオン量をＣｕ²⁺に変更したこと以外はすべ
て実施例２５と同様にして、実施例３１のポリビニルア
ルコールゲル充填チューブを得た。

【００８７】実施例３２ 用いた金属イオン量をＣｕ²⁺に変更したこと以外はすべ
て実施例２６と同様にして、実施例３２のポリビニルア
ルコールゲル充填チューブを得た。

【００８８】実施例３３ 光架橋性ポリビニルアルコール（重合度；１７００、け
ん化度；８８ｍｏｌ％及びスチリルピリジニウム置換基
の割合；１．３％）を、５重量％となるように注射用生
理食塩水に加え、オートクレーブにより１２１℃、２０
分で処理することで加熱滅菌と同時に光架橋性ポリビニ
ルアルコールを溶解させ、光架橋性ポリビニルアルコー
ル溶液を得た。

【００８９】得られた溶液を流動パラフィン中に加えて
充分に攪拌し、溶液を懸濁させた。この後に３００Ｗの
ハロゲンランプを装着したスライドプロジェクターを用
いて、３０分間攪拌しながら光を照射することにより、
光架橋性ポリビニルアルコールをゲル化し、粒径２．５
ｍｍのゲルビーズを作製した。このゲルビーズを注射用
生理食塩水を用いて充分に洗浄し、付着していた流動パ
ラフィンを除いた。

【００９０】上記ゲルビーズ作製法以外は実施例２５と
同様にして、実施例３３のポリビニルアルコールゲル充
填チューブを得た。

【００９１】実施例３４ 用いた光架橋性ポリビニルアルコール濃度を１０重量％
に変更したこと以外はすべて実施例３３と同様にして、
実施例３４のポリビニルアルコールゲル充填チューブを
得た。

【００９２】実施例３５ 用いた光架橋性ポリビニルアルコール濃度を１５重量％
に変更したこと以外はすべて実施例３３と同様にして、
実施例３５のポリビニルアルコールゲル充填チューブを
得た。

【００９３】実施例２５〜３５で得た各チューブに、ヘ
パリン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円
盤に取り付けて、３７℃で２時間、回転数２６ｒｐｍで
転倒混和した。

【００９４】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をＴＮＦモノクローナル抗体
を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System 社製 Quant
ikineTNF-α) にて測定した。なお、この測定方法の検
出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。また、採血直後
の血液を遠心分離して血漿を採取して、血漿中のＴＮＦ
の濃度を同様にして測定した。

【００９５】結果を表４に示す。

【００９６】

【表４】

【００９７】（ポリスチレン修飾体によるＴＮＦの産生
誘導）実施例３６ ４級アンモニウム基であるトリメチルアンモニウム基を
もつ、スチレン・ジビニルベンゼン共重合体である、Ｄ
ｉａｉｏｎ ＳＡ１１Ａ（三菱化成社製）を５０ｍｌポ
リプロピレンチューブ（岩城硝子社製）に、かさ体積で
３ｍｌ入れた。これにメタノール（和光純薬社製 液体
クロマトグラム用グレード）４０ｍｌを添加して、軽く
攪拌した。静置後、上清を吸引して除去した。これを３
回行った後、同様にメタノール４０ｍｌを添加して、室
温にて一晩静置した。

【００９８】次に、メタノールを吸引して除き、同様に
メタノールを用いて２回洗浄した。これに、滅菌済み蒸
留水を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。５００ｒｐｍで
１分間遠心し、上済みを吸引して除き、同様に滅菌済み
蒸留水を用いて３回洗浄した。その後、滅菌済み蒸留水
４０ｍｌを加えて、室温にて３時間静置した。

【００９９】次に、同じ洗浄操作を３回行い、最後にで
きるだけ蒸留水を取り除いた。これに、注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。
５００ｒｐｍで１分間遠心し、上済みを吸引して除き、
同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて３回洗浄
を行い、最後に注射用生理食塩水４０ｍｌを加えて、一
晩室温にて静置した。その後、同じ洗浄操作を５回行
い、最後にできるだけ生理食塩水を取り除いた。

【０１００】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に、この
ポリスチレン粒子をかさ体積で５００μｌ充填した。

【０１０１】実施例３７ 用いたポリスチレン粒子を、４級アミモニウム基である
ジメチルエタノールアンモニウム基をもつ、Ｄｉａｉｏ
ｎ ＳＡ２１Ａ（三菱化成社製）に変更した以外はすべ
て実施例３６と同様にして行った。

【０１０２】実施例３８ 用いたポリスチレン粒子を、１、２級アミノ基〔−ＣＨ
₂ ＮＨ（ＣＨ₂ ＣＨ₂ＮＨ）_n Ｈ（ｎ＝１〜３）〕をも
つ、Ｄｉａｉｏｎ ＷＡ２１（三菱化成社製）に変更し
た以外はすべて実施例３６と同様にして行った。

【０１０３】実施例３９ 用いたポリスチレン粒子を、３級アミノ基〔−（Ｃ
Ｈ₂ ）_n Ｎ（ＣＨ₃ ）₂ （ｎ＝１〜３）〕をもつ、Ｄｉ
ａｉｏｎ ＷＡ３０（三菱化成社製）に変更した以外は
すべて実施例３６と同様にして行った。

【０１０４】比較例１ 用いたポリスチレン粒子を、未修飾のポリスチレン粒子
であるテクポリマー：ＳＢ−１００Ｓ（積水化成品工業
社製）に変更した以外はすべて実施例３６と同様にして
行った。

【０１０５】比較例２ 用いたポリスチレン粒子をスルホン酸基をもつスチレン
・ジビニルベンゼン共重合体である、Ｄｉａｉｏｎ Ｓ
Ｋ１Ｂ（三菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例
３６と同様にして行った。

【０１０６】実施例３６〜３９、比較例１，２のチュー
ブにヘパリン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて
回転円盤に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６
ｒｐｍで転倒混和した。

【０１０７】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製 Ｑｕ
ａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＮＦ−α）にて測定した。この測
定方法の検出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。

【０１０８】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表５に示す。

【０１０９】

【表５】

【０１１０】（ポリメタクリル酸エステル誘導体による
ＴＮＦの産生誘導）実施例４０ ジメチルエタノールアミンで修飾されている、ポリメタ
クリル酸エステル系材料である、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ
ＦＰ−ＱＡ１３（三菱化成社製）を５０ｍｌ用ポリプロ
ピレンチューブ（岩城硝子社製）に、かさ体積で３ｍｌ
入れた。これにメタノール（和光純薬社製 液体クロマ
トグラム用グレード）４０ｍｌを添加して、軽く攪拌し
た。静置後、上清を吸引して除去した。これを３回行っ
た後、同様にメタノール４０ｍｌを添加して、室温にて
一晩静置した。

【０１１１】その後、メタノールを吸引して除き、同様
にメタノールを用いて２回洗浄した。これに、滅菌済み
蒸留水を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。５００ｒｐｍ
で１分間遠心し、上澄みを吸引して除き、同様に滅菌済
み蒸留水を用いて３回洗浄した。その後、滅菌済み蒸留
水４０ｍｌを加えて、室温にて３時間静置した。

【０１１２】次に、同じ洗浄操作を３回行い、最後にで
きるだけ蒸留水を取り除いた。これに、注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）を４０ｍｌ添加した軽く攪拌した。
５００ｒｐｍで１分間遠心し、上澄みを吸引して除き、
同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて３回洗浄
を行い、最後に注射用生理食塩水４０ｍｌを加えて、一
晩室温にて静置した。しかる後、同じ洗浄装置を５回行
い、最後にできるだけ生理食塩水を取り除いた。

【０１１３】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に、この
ポリメタクリル酸エステル系材料の粒子をかさ体積で５
００μｌ充填した。

【０１１４】実施例４１ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、ジエチルア
ミノ基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＦＰ−ＤＡ１３（三
菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例４０と同様
にして行った。

【０１１５】実施例４２ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、末端に１級
アミノ基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＦＰ−ＨＡ１３
（三菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例４０と
同様にして行った。

【０１１６】実施例４３ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、水酸基をも
つＳＥＰＡＢＥＡＤＳＦＰ−ＨＧ１３（三菱化成社製）
に変更した以外はすべて実施例４０と同様にして行っ
た。

【０１１７】実施例４４ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、疎水性基
〔−ＯＣ₆ Ｈ₅ ）をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＦＰ−１
３（三菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例４０
と同様にして行った。

【０１１８】比較例３ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、カルボキシ
ル基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＦＰ−ＣＭ１３（三菱
化成社製）に変更した以外はすべて実施例４０と同様に
して行った。

【０１１９】実施例４０〜４４、比較例３の各チューブ
にヘパリン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回
転円盤に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒ
ｐｍで転倒混和した。

【０１２０】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製 Ｑｕ
ａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＮＦ−α）にて測定した。この測
定方法の検出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。

【０１２１】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表６に示す。

【０１２２】

【表６】

【０１２３】（疎水性材料によるＴＮＦの産生誘導）比較例４ 注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄した２ｍｌ用
チューブ（eppendorf社製）。

【０１２４】比較例５ ポリエチレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形に
より作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥し
た。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍ
ｌ用チューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填量は
ビーズ７０個とした。

【０１２５】比較例６ ポリスチレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形に
より作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥し
た。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍ
ｌ用チューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填量は
ビーズ７０個とした。

【０１２６】比較例７ ポリ塩化ビニルのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形
により作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥
した。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用チューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填量
はビーズ７０個とした。

【０１２７】比較例８ ポリプロピレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形
により作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥
した。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用チューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填量
はビーズ７０個とした。

【０１２８】比較例９ ポリテトラフルオロエチレンプロピレン共重合体のビー
ズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形により作製した。次に
このビーズをメタノールで洗浄後乾燥した。次に、この
ビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄後、
同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍｌ用チューブ
（eppendorf 社製）に充填した。充填量はビーズ７０個
とした。

【０１２９】比較例４〜９の各チューブにヘパリン採血
した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付
けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和
した。

【０１３０】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製 Ｑｕ
ａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＮＦ−α）にて測定した。この測
定方法の検出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。

【０１３１】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表７に示す。

【０１３２】

【表７】

【０１３３】（接触温度のＴＮＦの産生誘導に及ぼす影
響）実施例４５ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
１５℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。

【０１３４】実施例４６ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
２５℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。

【０１３５】実施例４７ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
４７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。

【０１３６】実施例４８ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
５２℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。

【０１３７】比較例１０ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
１０℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。

【０１３８】比較例１１ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
６０℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。

【０１３９】混和後の各血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製 Ｑｕ
ａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＮＦ−α）にて測定した。この測
定方法の検出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。

【０１４０】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表８に示す。

【０１４１】

【表８】

【０１４２】採血直後の血漿中ＴＮＦ濃度は測定限界以
下であり、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄し
た２ｍｌ用チューブに血液を充填しただけのもの（比較
例４）では、血漿中ＴＮＦ濃度濃度は２５ｐｇ／ｍｌ以
下であった。表１〜７の結果から、水酸基、アミド基、
エステル基を有する高分子材料、及びカチオン性官能基
を有する高分子材料は、血液との接触によって特に高い
ＴＮＦの産生を誘導することが明らかである。

【０１４３】他方、未修飾のポリスチレン、ポリエチレ
ン、ポリ塩化ビニルなどの疎水性高分子材料やアニオン
性官能基だけを有する高分子材料ではＴＮＦの産生をほ
とんど誘導しなかった。

【０１４４】また、表８の結果から明らかなように、血
液と上記ＴＮＦ誘導材料との接触温度が、１５℃〜５２
℃の範囲ではＴＮＦの産生誘導が見られた。また、１５
℃未満及び５２℃より高温度のときにはＴＮＦの産生誘
導は見られなかった。

【０１４５】

【発明の効果】本発明によれば、体外において、水酸
基、アミド基及び／またはエステル基を有する高分子材
料あるいはカチオン性官能基を有する高分子材料と血液
を接触させることにより、ＴＮＦの産生を誘導して、天
然型のＴＮＦや癌患者由来の内因性ＴＮＦを簡便に得る
ことができ、癌などの治療や病態把握のための免疫学的
診断などに新しい方法を提供するものである。

【０１４６】また、従来の生理活性物質固定化材料のよ
うに、固定化された生理活性物質等の脱離がないため安
全に人体に適用できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 特願平5−114576 (32)優先日 平５(1993)５月17日 (33)優先権主張国 日本（ＪＰ）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 水酸基、アミド基及びエステル基から選
   ばれる１つあるいは１つ以上の官能基を有する高分子材
   料と血液とを接触させることにより、ＴＮＦ（ＴＮＦ：
   Tumor Necrosis Factor ）の産生を誘導することを特徴
   とするＴＮＦ産生誘導方法。
2. 【請求項２】 カチオン性官能基を有する高分子材料と
   血液とを接触させることにより、ＴＮＦの産生を誘導す
   ることを特徴とするＴＮＦ産生誘導方法。
3. 【請求項３】 請求項１，２に記載のＴＮＦ産生誘導材
   料と血液とを１５℃〜５２℃の範囲で接触させることを
   特徴とするＴＮＦ産生誘導方法。