JPH07502011A - 免疫抑制性および寛容原性のオリゴ糖誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫抑制性および寛容原性のオリゴ糖誘導体発明の背景 １、発明の分野 本発明は、細胞性免疫応答の処置にオリゴ糖グリコシドを使用する方法、ならび にこれらのオリゴ糖グリコシドを含有する医薬組成物に関するものである。特に 、本発明は、細胞性炎症応答を含む細胞性免疫応答の調整（例えば抑制）に血液 型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを使用する方法に関するものである。 ２、参考刊行物 本田願書において、下記の参考刊行物を本田願書の相当する箇所に上付きの数字 により引用する：１１９８４）。 ４゜　Ｆｒａｚｉ＠ｒ等、Ａｎｎｕ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、。 弧：４９１　（１９７９）。 ３４、Ｔｏｏｎｅ＊　、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　Ｎｏ、　１７゜公：５３ ６５−５４２２１１９８９）。 ３７、Ｚｂｌｒａ１％、Ｍｏｎａｆｓｈ、Ｃｈｅｍ、。 、　Ｊｊｊｌ：１２７−１４１　（１９８Ｂ＋。 ５６５０（１９６０１゜ ４３、Ｌｅｍｉｅｕｘ等、ＵＳ、特許Ｎｏ。 ４．１３７，４０１　（１９７６１゜ ４４、Ｌｅｍｉｅｕｘ等、υ、Ｓ−特５’Ｔ　Ｎｏ。 ４．１９５，１７４（１９７８１゜ ４５、Ｐａｕｌｓｅｎｔ！　、　Ｃｄｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、。 、１３：２１−４５１１９８４１゜ ４６．５ａｂｅｓａｎ％、　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、。 ｆｉ２：６４４−６５２　（１９Ｂ４ン。 ４ｇ、Ｌｅｍｉ＠ｕｘ等、ｕ、ｓ、特許Ｎｏ。 ４．７６７．８４５　（１９８７１゜ ４９、ＭａｚｉｄｖＰ、　Ｕ、Ｓ、　、特許出願５ｅｒｉａｌ　Ｎｏ、　０７／ ３３６，９３２　（１９８９）。 ２５１：１３８３５−１３８４４　（１９８２１゜５３、　９ｍｔｔｈ等、　Ｉ ｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｒｒｖｎｕｎｌｔｙ、　３ユニ１２９１１９８０ １゜ ５４、Ｒａｔｃｌｉｆｆ等、υ、５．５ｅｒｉａｌ　Ｎｏ、　０７７２７８，１ ０６゜１９８８年Ｉ＋月３０日出願 ５５、Ｚｉｏｌａ等、　Ｊ、　ｏｆ　１ｍｍｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈｏｄｓ、　旦 ｚ：１５９゜（１９８７１゜ ５６、Ｅｋｂｅｒｇ等、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、　ｊｊｆｉ：５５ −６７　（１９８２）。 ５Ｂ、Ｒａｎａ等バ’：ａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｒａｓ、４１：１４９−１５７　（ １９Ｂ１１゜５９、Ａｍｖｓｍ−Ｚｏｌｌｏ等、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒａ ｓ、、　上澄：１９シ２１２（１９８６１゜ ６０、Ｐａｕｌｓｅｎ等、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒａｇ、、ＪＱ４：１９シ ２１９（１９８２）。 旦：５３１−５３７　（１９８９）。 ６３、Ｌｅｅ等、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、　３２：１９３以降（１ ９７４）。 本明細書に記載の刊行物および特許出願書はいずれも、本発明か関連する分野の 当業者１ノベルに示すものである。 これらの刊行物または特許出願書はそれぞれ、詳細にかつまた個別に示している ことか、その全体を引用することによって組み入れられるものと同一程度で、こ れらの刊行物または特許出願書をそれぞれ、その全体を引用することによってこ こに組み入ねる。 ３、技術状況 成長、運動、形感学的発達、および分化のような哺乳動物の細胞か関与する重要 なプロセスは、細胞の表面に対して作用する細胞外からのシグナルによって部分 的に制御される１−３゜ある程度の刺激は細胞外流体により細胞に到達するか、 その他のシグナルは細胞表面の近くからもしくは細胞表面に近ついて受け取られ 、直接的細胞−細胞接触によりそれらの作用を発揮する４、５０証拠は、特異的 細胞−表面レセプターが特異結合により並置する細胞の分子シグナルを［感受（ ｓｅｎｓｅ）Ｊすることかでき、この結合を細胞応答中に書き写す生物学的メカ ニズムが存在することを示唆している。例えば、■雑な細胞−表面相互作用は、 病原体の標的組織への結合６７、精子−非相互作用８、免疫系における細胞間の 相互作用１１０、および胚発生＋＋などの直接プロセスを助けるものと信じられ ている。さらにまた、細胞−細胞の認識の欠落は、新生物の形質転換および転移 を特徴とする無制御の細胞増殖および運動能を強めるものと考えられている１１ ＋２゜別の証拠は、細胞−認識プロセスは複合糖質の炭水化物鎖またはグリカン 部分によって媒介されることを示唆している４１４・＋６゜例えば−個の細胞の 表面複合糖質の、もう一つの細胞上の相補炭水化物−結合蛋白質（レクチン）へ の結合は、特異的相互作用の開始をもたらすことができる。 炭水化物−結合蛋白質の重要な一部に、ＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質［レクチン十ＥＧ Ｆ十相補調節ドメイン細胞接着分子（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ　Ｒｅｇｕｌ ａｔｏｒｙ　Ｄｏｍａｉｎｓ−ＣｅｌｌＡｄｈｅｓｉｏｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌｅｓ ）　］がある。これらの、蛋白質または機能的に類似する蛋白質あるいはレクチ ンは、細胞−細胞接触を経る、およびまた白血球の溢出による、免疫応答（炎症 応答を含む）で必須の役割を演じることができるＩＴ−２１０特定の炭水化物リ ガンドが、ＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質に関わる推定上のレセプター構造体の一部とし て、最近に同定されている−７−２１゜これらの同定された構造体には、下記の 構造体が含まれる。 これらの式において、Ｑは別の適当に結合した一種または二種以上の糖を表す。 しかしながら、インビボでは、このような炭水化物は一般に、容易には合成する ことができず、また治療量では容易に単離することができない天然産生の複合糖 質の一部である。 成る種のオリゴ糖グリコシドが以前に開示されたが、細胞性免疫応答（細胞性炎 症応答を含む）の抑制におけるそれらの使用は教示されていない。 本発明の要旨 ここに、上記ソアリルールイスＸまたはルイスＸグリカン鎖を含む細胞表面複合 糖質は、レクチンと機能的に相互作用して、哺乳動物における細胞性免疫応答を 抑制することができる由−のりガントてはない、ことか見出だされた。詳細に言 えは、本発明は、低分子量（ＭＷは一般に、約２０００ダルトンより小さい）の 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドがまた、ＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質とまた 相互作用することおよび（または）細胞性炎症応答を含む哺乳動物細胞性免疫応 答をインビボて抑制するのに充分の強さを有するその他のレクチンと相互作用す ることを見出だしたことに関するものである。本発明はまた、このような血液型 抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドが抗原チャレンジの応答に係わり哺乳動物に 投与された場合に、この投与が同一抗原からの追加のチャレンジに対する寛容性 を誘発させることを見出だしたことに関するものである。 従って、その方法の一態様において、本発明は哺乳動物における細胞性免疫応答 を抑制する方法に関するものであり、この方法は血液型抗原決定基関連オリゴ糖 グリコシドを当該免疫応答を抑制するのに有効な量で投与することからなる。 好適態様において、この方法によって抑制される免疫応答は、炎症応答である。 もう一つの好適態様では、この方法に使用する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドはまた、結合抑制性オリゴ糖グリコシド（下記で定義する）であると特 徴付けすることができる。その方法の態様のもう一つにおいて、本発明は哺乳動 物における抗原に対する細胞性免疫応答を処置する方法に関し、この方法は血液 型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを、約０．５ｍｇ／ｋｇ−約５０ｍｇ／ｋ ｇの量で当該哺乳動物に投与することからなる。その方法の態様のさらにもう一 つにおいて、本発明は抗原に対する哺乳動物の感受性を減少させる方法に関し、 この方法は、抗原にさらすと同時的に血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシド の有効量を哺乳動物に投与することからなる。 その組成物態様の一つにおいて、本発明は哺乳動物に非口経投与するのに適する 医薬組成物に関し、この組成物は当該哺乳動物における 細胞性免疫応答の処置に有効な量の血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドお よび調剤用不活性担体からなる。 図面の簡単な説明 図１は、ＬＩＩＩＳ一層（Ｓ−Ｌａｙｅｒ）蛋白質抗原１０μｇによりチャレン ジした後の２４時間の時点で測定した、免疫感作したマウスにおけるＤＴＨ炎症 応答から生じた足裏ふくらみ部の膨潤の増加を示すものである。この実験におい て、マウスの数匹は、このチャレンジ後の　５時間の時点て、種々の血液型抗原 決定基関連オリゴ糖グリコシド１００μｇにより処置した。 図２は、ＬＩＩＩＳ一層（Ｓ−Ｌａｙｅｒ）蛋白質抗原２０μｇによりチャレン ジした後の２４時間の時点て測定した、免疫感作したマウスにおけるＤＴＨ炎症 応答から生じた足裏ふくらみ部の膨潤の増ＩＪＤを示すものである。この実験に おいて、マウスの数匹は、このチャレンジ後の５時間の時点て、血液型抗原決定 基関連オリゴ糖グリコシドを含む種々の単糖グリコノドおよびオリゴ糖グリコン ドの種々の量で処置した。 図３は、Ｌｌｌｌ　５−ＩＮ蛋白質抗原による一次免疫感作後の２週間そしてチ ャレンジ後の１週間の時点における二次抗体応答（すなわち、４９０μｍにおけ る０−）工ニレンンアミン０．Ｄ、の定量分析により測定した抗体の量により決 定した）を示しており、この図はまた、マウスを、チャレンジ後の５時間の時点 て各種血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドにより処置した場合のこれらオ リゴ糖グリコシドのこれらの応答に対する効果を示している。 図４は、免疫感作したマウスにＬＩＩＩＳ一層重白質抗原をチャレンジした後に おける、ＤＴＨ炎症応答に対する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシド、す なわちシアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシド、化合 物Ｉ１１の効果を示すものであり、この場合に、マウスはチャレンジの前および 後の種々の時点て、ソアリルールイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリ コシド、化合物ｌｌ１ １００μｇにより処置した。 図５は、免疫感作したマウスにおいて、７日目に、Ｌｌｌｌ　Ｓ一層重白質抗原 ２０μｇをチャレンジした後の５時間の時点て、血液型抗原決定基関連オリゴ糖 グリコノド５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇを注射した後に生じた長期間（８週間）免疫 抑制を示すものである。 図６は、免疫感作したマウスにおいて、７日目に、ＬＩＩＩＳ一層重白質抗原２ ０μｇをチャレンジした後の５時間の時点て、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドを含む種々の単糖グリコシドおよびオリゴ糖グリコシドを種々の量で注 射した後に生じた長期間（６週間）免疫抑制を示すものである。 図７は、免疫感作したマウスにおいて、−日７日目に、ＬＩＩＩＳ一層重白質抗 原２０μｇでチャレンジする前、チャレンジした時点およびチャレンジした後の 種々の時点で、シアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシ ド、化合物ＩＩＩを５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの量で注射した後に生じた長期間（ １０週間）免疫抑制を示すものである。 図８は、シアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシト、化 合物ＩＩＩにより処置することにより予め抑制されている、免疫感作マウスにお けるＤＴＨ炎症応答のシクロホスファミド誘発回復を示すものである。 図９は、炎症応答の誘発に使用された抗原の種類が、シアリル−ルイスＸの８− メトキシカルボニルオクチルグリコシド、化合物］１１のＤＴＨ応答調整能力に 影響しないことを示すものである。 図１Ｏは、シアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシト、 化合物［１１が、ＴＮＦα活性化活性化ヒト篩脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）　へ のＵ９３７またはＨＬ６０の結合を阻止できることを示すものである。 図１１は、本発明に係わり使用するのに好適な血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドの「骨格」構造を示すものである。 図１２は、本発明に係わり使用される血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシド の構造を示すものであり、この式において、Ｒは−（ＣＨ，）Ｉ　Ｃ（０）ＯＣ Ｒ，である。 図１３は、いくつかの例で使用されている単糖グリコシドと一個の二糖グリコシ ドとの結合体の構造を示すものであり、この式において、Ｒは −（ＣＨＩ　）、Ｃ（０）ＯＣＨ，である。 図１４は、Ｎｅｕ５Ａｃの誘導体の合成に使用される一般合成経路を示すもので ある。 図１５は、単糖グリコシドおよびオリゴ糖グリコシド３ｂ−７ａの構造を示すも のである。 図１６は、例８に例示されているオリゴ糖グリコシド図１７は、βＧａ　Ｉ　（ １→３／４）βＧＩＣＮＡＣ（Ｚ（２→３′）シアリルトランスフェラーゼによ る、Ｎｅ　ｕ　５Ａｃおよびその類縁体（正確には、「シアリル酸」）のβＧａ １（１→３）βＧＩｃＮＡｃ−末端構造への酵素による転移を示すものである。 図１７はまた、Ｌ−フコースのシアリル化オリゴ糖グリコシドへの酵素による転 移を示している。 図１８は、βＧａ１（１→３／４）βＧＩｃＮＡｃα（２→３′）シアリルトラ ンスフェラーゼによる、Ｎｅｕ５Ａｃ、その類縁体（正確には、［シアリル酸」 ）のβＧａ　Ｉ　（１→４）βＧＩｃＮＡｃ−木端構造への酵素による転移を示 すものである。Ｕ！Ｊ１８はまた、Ｌ−フコースのシアリル化オリゴ糖グリコシ ド・＼の酵素による転移を示している。 図１９は、βＧａ１（１−−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃα（２→６゛）シアリルト ランスフェラーゼによる、Ｎｅｕ５Ａｃ、その類縁体（正確には、「シアリル酸 」）のβＧａ　Ｉ　（１→４）βＧＩｃＮＡｃ−末端構造への酵素による転移を 示すものである。 図２０は、βＧａ　Ｉ　（１−３／４）βＧＩＣＮＡＣ（２（２→３′）シアリ ルトランスフェラーゼによる、Ｎｅｕ５Ａｃ、その類縁体（正確には、「シアリ ル酸」）のβＧａ１（１→４）βＧｌｃ（ラクト−ス）末端構造への酵素による 転移を示すものである。 図２１は、βＧａ　Ｉ　（１−３）ａＧａ　ＩＮＡＣ（２（２→３゛）シアリル トランスフェラーゼによる、Ｎ　ｅ　ｕ　５　Ａ　ｃ　、その類縁体（正確には 、「シアリル酸」）のβＧａ　Ｉ　（１→３）ａＧａ　ｌＮＡｃ−じＴ“）末端 構造への酵素による転移を示すものである。 図２２および２３は、シアリル化ハプテンの化学修飾によるシアリルールイスＡ の類縁体の合成に含まれる反応経路を示すものである。 図２４は、シアリル化ハプテンの化学修飾によるシアリル−ルイスＸの類縁体の 合成に含まれる反応経路を示すものである。 図２５は、シアリルダイマー状ルイス”　（Ｓｉａｌｙｌｄｉｍｅｒｉｃ　Ｌｅ ｗｉｓ　’″）およびその内部モノフコシル化誘導体を導く合成経路を示すもの である。この図２５において、化合物６１ａで示されている化合物の名称はβＧ ａｌ　（＋−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃ　（１−３）βＧａ１（１−４）β　Ｇｌ ｃＮＡｃ−ＯＲであり、これはまたジーＮ−アセチルアセトサミニルテトラサツ カライドとも称される。同様に、図１の化合物６５ａおよび６５ｂに存在する木 簡部分は時には、ＶＴＭ−２エピトープまアリルダイマー状　ルイス１と称され る。 図２６は、ソアリルジーＮ−アセチルアセトサミニルハブテンの外部モノフコシ ル化誘導体を導く合成経路を示すものである。 図２７は、免疫感作したマウスにおいて、Ｈ３Ｖ抗原でチャレンジした後の２４ 時間の時点で測定した、ＤＴＨ炎症応答から生じた足裏ふくらみ部の膨潤の増加 を示すものである。マウスの数匹は、免疫感作の時点でシアリル−ルイスＸ、化 合物１］１て処置し、またマウスの数匹は、このチャレンジ後の５時間の時点て 、シアリル−ルイスＸ、化合物ＩＩＩにより処置した。 図２８は、−次免疫感作した後の２週間そしてＨ３Ｖ抗原によりチャレンジした 後の１週間の時点における二次抗体応答（すなわち、４９０ｎｍにおける０−フ ェニレンジアミン０．Ｄ、の定量分析により測定した抗体の量により決定した） を示しており、この図はまた、シアリル−ルイスＸ、化合物１１１の投与の時点 における、これらの応答に対する効果を示している。 図２９は、シアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシド、 化合物１１［による処置により予め抑制されている、免疫感作マウスにおけるＤ ＴＨ炎症応答のシクロホスファミド（ＣＰ）誘発　回復を示すものである。 図３０は、免疫感作したマウスにおいて、ＯＶＡ抗原でチャレンジした場合の、 ＤＴＨ炎症応答に対するシアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチル グリコシド、化合物ｉｌ＋の効果を示すものであり、この実験で、マウスは、種 々の異なる方法（ＩＶ静脈投与；ＩＮ鼻内投与）によりチャレンジした後の５時 間の時点で、化合物１１［で処置した。 図３１は、免疫感作したマウスにおいて、ＯＶＡ抗原でチャレンジした場合の、 ＤＴＨ炎症応答に対するシアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチル グリコシド、化合物ＩＩＩの効果を示すものであり、この実験で、マウスは、種 々の異なる方法（ＩＶ静脈投与：ＩＮ鼻内投与）によりチャレンジした後の５時 間の時点て、種々の投与量で化合物１Ｈにより処置した。 図３２は、免疫感作したマウスにおいて、ＯＶＡ抗原でチャレンジした場合の、 ＤＴＨ炎症応答に対するソアリルールイスＸの８−メトキシカルボニルオクチル グリコシド、化合物Ｉｌ＋の効果を示すものであり、この実験で、マウスは、そ の免疫感作の時点で、種々の異なる方法（ＴＶ静脈投与、ＩＮ鼻内投与；■Ｍ筋 肉内投与）により化合物Ｉ１１により処置した。 図３３は、ＬＰＳを鼻内投与され、その５時間後に、各種化合物を静脈投与され た、マウスの肺における炎症応答に対する各種オリゴ糖グリコシドおよび単糖グ リコシドの効果を示すものである。 図３４は、リンパ球増殖応答に係わる、種々の投与量のシアリル−ルイスＸおよ びシアリル−ルイスへの効果を示すものである。 好適態様の詳細な説明 本発明は、低分子量（約２０００ダルトンより小さいＭＷ）の成る種のオリゴ糖 グリコシドが、哺乳動物の細胞性免疫応答を抑制するのに有効であることを見出 だしたことに関するものであり、この細胞性免疫応答には哺乳動物における抗原 に対する免疫関連炎症応答（例えばＤＴＨ応答）および細胞性炎症応答が含まれ る。さらにまた、本発明は、これらのオリゴ糖グリコシドによる処置かまた、こ のように処置された哺乳動物における抗原に対する寛容性を誘発させることを見 出だしたことに関するものである。 Ａ、定義 本明細書で使用されるものとして、下記の用語に係わる定義を以下に示す。 ｒ　ｆｆ１ｉ乳動物における細胞性免疫応答」の用語は、細胞−細胞相互作用を 経由する哺乳動物における免疫応答を意味する。この用語には、抗原に対する細 胞性炎症応答、例えば遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答、例えば心筋炎症、ウィルス 誘発肺炎、ショックおよび後遺症（例えば多発性臓器不全）から生じる細胞性炎 症応答、成人呼吸器疾患症候群などが含まれる。好ましくは、細胞性免疫応答は 、白血球性応答である。 「血液型物質」の用語（よ、赤血球上の特異複合糖質抗原を意味し、これは血液 を免疫学的適合性にしたかい種種のクラスに分類する基礎となる。 「血液型抗原決定基Ｊの用語は、血液型物質のグリカン鎖を構成する非還元性− 末端、３−９グリコジル残基の各天然産生オリゴ糖セグメントを意味する。 ［血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシド」の用語は、（ａ）３−９個の糖単 位からなるオリゴ糖基を有するオリゴ糖グリコシド、（ｂ）末端に非還元性部上 のアグリコン基を有するオリゴ糖グリコシド、および（Ｃ）そのオリゴ糖基か血 液型抗原決定基（上記定義のとおりのもの）またはその類縁体であるオリゴ糖グ リコシドを意味する。 血液型抗原決定基の類縁体には、血液型抗原決定基の単糖単位の一個または二個 以上か化学的に修飾されて、糖用位の一つまたは二つ以上に、一種または二種以 上の官能性基が導入されているか、および（または）糖単位の一つまたは二つ以 上から、一種または二種以上の官能性基か取り除かれているものを包含する。例 えば、このような修飾は、−ＯＨ官能性基の除去、糖単位（−個または二個以上 ）の除去、アミン官能性基の導入、ハロ官能性基の導入、−個または二個以上の 糖単位の導入などをもたらすことができる。 このような血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、次式て表すことがてき る ＯＬ　ＩＧＯ３ＡＣＣＨＡＲＩＤＥ−Ｙ−Ｒ式中、オリゴ糖は３個−約９個の糖 単位を存し、血液型抗原決定基またはその類縁体を含有する炭水化物構造基を表 し：Ｙは０、Ｓ、＞ＮＨおよび結合からなるＩＴから選はれ、そしてＲは少なく とも一個の炭素原子を有するアグリコン部分を表す。 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、そのアグリコン部分かミセルを形 成てきる蛋白質または脂質を有しておらず、またはその他の大型凝集構造基を有 していないことから、血液型物質を含む複合糖質とは異なっている。 好適態様において、アグリコン部分Ｒは、−（Ａ）−Ｚ′からなる群から選はれ 、ここてＡは結合、炭素原子２−１０個を有するアルキレン基、および式−（Ｃ Ｈ２−ＣＲ４Ｇ）　、、（式中ｎは１−５に等しい整数であり：Ｒ４は水素、メ チルまたはエチルからなる群から選ばれ：そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、 フェニルおよび置換基として、アミン、ヒドロキシル、ハロ、炭素原子１−４個 を仔するアルキルおよび炭素原子１−４個を存するアルコキシからなる群から選 ばれる１−３個を有するフェニルからなる群から選ばれる）からなるｌ？ｌから 選ばれ：そしてＺ′は水素、メチル、フェニルおよびニトロフェニルからなる群 から選ばれるが、あるいはまたＧが酸素、硫黄または窒素ではなく、そしてＡが 結合ではない場合には、Ｚ′はまた一０Ｈ１−３Ｈ１，Ｎ　Ｈ２、ＮＨＲｓ　、 −Ｎ　（Ｒａ　）２、−Ｃ（０）ＯＨ１−Ｃ（０）ＯＲ＠　、−Ｃ（０）Ｎｌ（ −ＮＨ，、−Ｃ（０）ＮＨ２、−Ｃ（０）’ＮＨＲ，、および−Ｃ（０）Ｎ　（ Ｒ，）　２からなる群から選ばれることがてき、ここてＲ６はそれぞれ独立して 、炭素原子１−４個を佇するアルキルである。 多数のアグリコンか当技術で公知である。例えは、パラ−ニトロフェニル基（す なわち−ＹＲ＝ＱＣ＠　Ｈ４ｐＮＯ２）からなる結合手はＥｋｂｅｒｇ等により 開示されている５＠。合成の適当な時点て、ニトロ基をアミノ基に還元し、この アミノ基はＮ−１−リフルオロアセトアミドにより保護することができる。支持 体に結合させる曲に、このトリフルオロアセトアミド基を除去して、アミノ基を 提供することができる。 硫黄を含む結合手は、Ｄａｈｍｅｎ等により開示されている６７゜詳細には、こ の結合手は、２−ブロモメチル基がら誘導され、この２−ブロモメチル基は、請 求核性基との引き続く反応で、 ＯＣＨ＊　ＣＨｔ　Ｓ　ＣＨ＊　Ｓ　ＣＯ＊　ＣＯｓおよび一０ＣＨｚ　ＣＨｔ 　ＳＣ＠　Ｈ４ｐＮＨｚなどの種々の末端官能性基を有する結合手を導くことが 証明されている。 Ｒａ０８等６ｓは、ロートリフルオロアセトアミド）−ヘキシル結合手（−０（ ＣＨｔ　）＊　ＮＨＣＯＣＦｓ　）を開示しており、このトリフルオロアセトア ミド保護基は、除去でき、結合反応に使用される一部アミノ基を提供することか できる。 その他の公知の結合手の例には、７−メドキシカルボニルー３．６−シオキサヘ ブチル結合手６−−　（ＯＣＨｔ−ＣＨ２’）、０ＣＨ２Ｃｏｗ　ＣＨＩ　；２ −（４−メトキシカルボニルブタンカルボキシアミド）：ｘ、チルａ０（−ＱＣ ）−Ｉ２ＣＨ，ＮＨＣ（０）（ＣＨ□）、ｃｏ、ｃｏ３　＋適当なモノマーとの 基共重合によりコポリマーを導くアリル結合手６′（ＯＣＨ２ＣＨ＝　ＣＨｔ　 ）　；その他のアリル結合手６！［−０（ＣＨ２ＣＨ，Ｏ）、ＣＨ，ＣＨ＝ＣＨ ，］が包含される。さらに、アリル結合手は、２−アミノエタンチオールの存在 の下で誘導体化させて６３、結合手ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｓ　ＣＨ２ＣＨ２Ｎ　 Ｈ２を提供することもできる。 さらにまた、Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ等により示されているように６４、Ｒ基は還元 性糖末端に結合手を有する糖またはオリゴ糖であることもできる。 好適には、このアグリコン部分は疎水性基であり、最も好ましくは、−ＣＨ２） ８　Ｃ００ＣＲ，、−（ＣＨ２）６０ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ，、および−ＣＨ２’） ８　ＣＨ２０Ｈからなる群から選ばれる疎水性基である。特に、疎水性基、さら に特に−（ＣＨ２’）。 Ｃ００ＣＨ，、また１、ｔ−（ＣＨ２）Ｓ　０ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２あるいはまた −（ＣＨ２）ｓ　ＣＨ２０８基を使用すると、このシアリルトランスフェラーゼ によるシア１リル酸の転移に係わる受容性を幾分増強させることができる。 いかなる理論にも制限されないものとして、我々は、血液型抗原決定基関連オリ ゴ糖グリコンドが、抗原に対する免疫応答、特に炎症免疫応答を効果的に抑制し 、このような免疫応答を処置するために適する　手段を提供するものと信してい る。 好ましくは、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドはまた、結合抑制性オリ ゴ糖グリコシドであるという特徴を存する。すなわちこのオリゴ糖グリコシドは 細胞表面レクチンに対し、白血球が他の細胞と結合するのを阻止するのに充分に 結合する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドである。このような結合抑制 性オリゴ糖グリコシドは、白血球性免疫応答の抑制に特に有効である。 さらにまた、いかなる理論にも制限されないものとして、我々は、細胞表面への 白血球の結合（多分、ＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質および（または）細胞表面上のその 他の蛋白質による）が、白血球性炎症応答および免疫性炎症応答を包含する、白 血球性免疫応答の必要不可欠の一部であるものと信じている。従って、結合抑制 性オリゴ糖グリコシドは、白血球性免疫応答の処置に好適である。 細胞表面に充分に結合して、白血球がその細胞にヘテロタイプで、またはホモタ イプで結合するのを抑制する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの能力は 、簡単なインビトロ実験によって容易に測定することかできる。例えば、リンパ 球の抗原に対する応答能力を測定するインビトロのリンパ球増殖実験を、この応 答の阻止または増強に係わるオリゴ糖グリコシドの能力の評価に採用することが できる。この能力の中の必須部分は、抗原提供細胞の認識能力およびこの細胞に 対する結合能力であり、この認識がリンパ球増殖の引き金となる。このようなイ ンビトロ実験は、Ｚｉｏｌａ等により開示されているように５５、当技術で公知 である。さらに、白血球の細胞表面への結合能力を測定する、別のインビトロ実 験を採用して、このような細胞の表面にヘテロタイプで、またはホモタイプで、 白血球を結合させる当該細胞の能力を阻害することに係わる、候補者オリゴ糖グ リコシドの能力を評価することもできる。このようなインビトロ実験も当技術て 公知てあり、Ｃａｍｐａｎｅｒｏ等により２′およびまたＬｏｗｅ等により１８ 開示されている。Ｃａｍｐａｎｅｒｏ等は、白血球の別の白血球へのホモタイプ 結合の測定方法を開示しており、モしてＬｏｗｅ等は、白血球の別の細胞の表面 へのへテロタイプ結合の測定方法を開示している。 これらのインビトロ実験は一般に、候補者オリゴ糖グリコシドの存在または非存 在（対照）の下に、例えば約ｌＯμｇ／ｍｌの候補者オリゴ糖グリコシド濃度で 、細胞結合を測定することによって行われる。両方の場合に、細胞表面に対する 白血球結合の程度を測定し、その白血球結合を、対照と比較して少なくとも２０ ％（好ましくは少なくとも約３０％、さらに好ましくは少なくとも約５０％）減 少させる候補者オリゴ糖グリコシドを結合抑制性オリゴ糖グリコシドであると見 做す。本発明において使用される血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドに有 用な語単位（すなわち糖）には、例として、グルコース、ガラクトース、Ｎ−ア セチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、フコース、シアリル酸 （以下で定義する）、３−デオキシ−Ｄ、Ｌ−オクツロソン酸などのあらゆる天 然および合成誘導体が包含される。それらのピラノース壓に加えて、血液型抗原 決定基関連オリゴ糖グリコシド中の語単位はいずれも、そのＬ型であるフコース を除いて、それらのＤ型である。 好適な血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、３−８個の語単位を含有す るもの、特にβＧａ１（１→４）βＧＩｃＮＡｃ基またはβＧａｌ’（１→３） βＧＩｃＮＡｃ基を含有するものを包含する。本発明で使用するのに特に好適な 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドには、図ｉｔおよび１２に記載のもの が含まれる。図１１において、Ｒはアグリコン、好ましくは上記定義のとおりの アグリコンであり、Ｒ，はそれぞれ独立して、水素、糖および適合性糖からなる 群から選ばれ、モしてＲ２はそれぞれ独立して、水素、糖および適合性糖からな る群から選ばれ、そしてＲ１およびＲ２の少なくとも一方は糖である。 特に好適な血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは次式で示されるものを包 含する： 式中ＹおよびＲは上記定義のとおりである。 さらに特に好適な血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、特にオリゴ糖の 非還元性糖末端として、Ｎ−アセチルノイラミン酸残基を存するものである。 ［適合性糖Ｊ　（ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　５ａｃｃｈａｒｉｄｅ　）の用語は、 存在する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドが置換基を有する場合に、生 成する構造体が依然として免疫応答を干渉して、免疫応答を減少もしくは阻止す ることができる置換基を有する語単位を意味する。明白なように、特定の糖また は糖組み合わせの置換か血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの特性を変更 させて、免疫応答を阻止することかできないような構造が生成される場合には、 このような糖置換基または糖組み合わせ置換基は、少なくとも血液型抗原決定基 関連オリゴ糖グリコシド構造のこの点に関して、不適合性置換基であると見做す 。 「シアリル酸」の用語は、（Ｎ−アセチル化）５−アミノ−３，５−ジデオキシ ーＤ−グリセローＤ−ガラクトーノヌロソン酸（ｎｏｎｕｌｏｓｏｎｉｃ　ａｃ ｉｄ）　（”Ｎｅｕ５Ａｃ”）およびその誘導体を表す。シアリル酸の誘導体を 表すために、本明細書で使用されている命名法は、Ｒｅ１Ｊｔｅｒ等により開示 された方法２５によるものである。 Ｂ、　オリゴ糖グリコントの製造 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを包含するオリゴ糖グリコシドは、完 全化学合成により、または化学／酵素合成により、容易に製造することかできる 。化学／酵素合成方法では、グリコシルトランスフエラーセを使用して、糖また はオリゴ糖に、−個または二個以上の語単位を順次付加する。化学合成は、完全 オリゴ糖グリフントの製造に二または引き続いてオリゴ糖グリコシドに化学的に 、または酵素を用いて結合させることがてきる語単位の製造に、または−個また は二個以上の語単位を酵素により結合させることがてきるオリゴ糖グリコシドの 化学的製造に適する方法である。 語単位の化学的修飾は当技術で周知である。−例として、９−アジｌ”　−Ｎｅ ｕ５Ａｃ、９−アミノ−Ｎｅｕ５ＡＣ１９−デオキシ−Ｎ　ｅ　ＩＩ　５　Ａ　 ｃ、９−フルオロ−Ｎｅｕ５Ａｃ、９−ブロモ−Ｎｅｕ５Ａｃ、８−デオキシ− Ｎｅｕ５Ａｃ、８−エビ−Ｎｅｕ５Ａｃ、７−デオキ’／−Ｎｅｕ５Ａｃ、　７ −ニビーＮｅｕ５Ａｃ、　７．　８−ビス−エビ−Ｎｅｕ５Ａｃ、　４−０−メ チル−Ｎｅｕ５Ａｃ、　４−Ｎ−アセチル−Ｎｅｕ５Ａｃ、４，７−シーデオギ シーＮｅｕ５Ａｃ、４−オキソ−Ｎｅｕ５Ａｃ、　３−ヒト°ロキンーＮｅｕ５ Ａｃ、３−フルオロ−Ｎｅｕ５Ａｃ酸、ならびにＮｅｕ５Ａｃの６−チオ類縁体 を包含する化学修飾されたＮｅｕ５Ａｃは、当技術で知られている。 その他の語単位の化学的修飾も当技術で知られている。 さらにまた、オリゴ糖グリコシドを製造するための化学的方法も当技術で周知で あり、この方法は一般に、個個の構造の合成に適しており、また個々の構造の合 成を最適にすることかできる。一般に、オリゴ糖グリコシドの全体または一部の 化学合成は、初めに還元性糖の芳香族炭素原子にグリコシド結合を形成すること を包含する。 詳細に言えば、適当に保護されている形態の天然産生の、または化学修飾された 糖溝造体（グリコジル供与体）をその還元性単位の芳香族中心で修飾して、ハラ イド、トリクロロアセトイミデート、チオグリコシドなどを含む脱離性基を導入 する。この供与体を次いて、当技術で周知の接触条件の下に、アグリコンまたは グリコシド結合を生成させる位置に一個の遊離ヒドロキシル基を有する相当する 形態の炭水化物受容体と反応させる。多数の種種のアグリコン部分は当技術で知 られており、還元性単位の芳香族中心に、適当な配置で付加することかできる。 炭水化物合成技術において周知の、適応する保護基を適当に使用すると、合成さ れた構造を選択的に修飾することができ、あるいはこの受容構造体に追加の糖単 位または糖ブロックを付加することかできる。グリコシド結合を生成させる従来 の方法の詳細な検討は、アトーニイトケット（Ａｔｔｏｒｎｅｙ　Ｄｏｃｋｅｔ ）　Ｎｏ、ＯＯＯ４７５−０１１および０００４７５−０２９として、それぞれ ［修飾シアリルルイス５化合物」および「修飾シアリルルイス１化合物」の題名 で、両方ともに１９９２年５月２２日付けて出願された、Ｖｅｎｏｔ等による　 Ｕ、　Ｓ、　５ｅｒｉａｉＮｏ、　０７／　およびＵ、　Ｓ、　Ｓｅｒ　ｉａ　 ｌＮｏ、　７／に記載されている。これらの場合の両方の記載をそれらの全体を 引用してここに組み入れる。 グリコシド結合を生成させた後に、この糖グリコシドを使用して、追加の糖単位 （一つまたは二つ以上）の結合を行うか、または選択された位置における化学的 修飾を行うことかでき、あるいは慣用の保護基の分離の後に、酵素を用いる合成 に使用することかてきる。一般に、天然産生の、または化学的に修飾された、糖 単位を糖グリコシド゛に化学的に結合させるには、刊行物中で充分に報告され、 確立されている化学的方法を採用して、達成される。例として、次の刊行物を参 照することがてきる：Ｏｋａｍｏｔｏ等２７、Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ等”、　Ａｂ ｂａｓ等２９、Ｐａｕｌｓｏｎ”　、Ｓｃｈｍｉｄｔ”　、Ｆｕｅｇｅｄｉ　等 ３２、Ｋａｍｅｙａｍａ等３３、およびＲａｔｃｌｉｆｆ等６４゜これらの刊行 物のそれぞれの記載を、それらの全体を引用してここに組み入れる。 他方、酵素を用いる結合は、グリコジルトランスフェラーゼを使用することによ って達成される。この酵素は、それらの相当するヌクレオチド供与体として活性 化されている糖単位を、一般に糖またはオリゴ糖の非還元性糖部分の部位で、特 定の糖またはオリゴ糖受容体に転移させる。例えば、Ｔｏｏｎｅ等３４を参照で きる。さらにまた、糖またはオリゴ糖受容体の、糖供与体の、または酵素反応生 成物の、選択的化学修飾を行うこともでき、これにグリコトランスフェラーゼの 代表例には、シアリルトランスフェラーゼがあり、この酵素は、そのシチジンモ ノホスフェート（ＣＭＰ）誘導体として活性化されているＮ−アセチルノイラミ ン酸を、糖脂質または糖蛋白質の末端オリゴ糖構造基に転移させる酵素群を構成 するものである。複合糖質に下記の末端構造基を構築する特別のトランスフェラ ーゼが同定されている：ｏＮｅｕ５Ａｃ（２−６）ａＧａｌＮＡｃ−ｃ＃ｅｕ５ Ａｃ（２−６）ノ９Ｇ署ｃＮＡｃ−。 Ｎｅｕ５Ａｃおよびその類縁体の酵素による転移には、先立ってそれらのヌクレ オチド（ＣＭＰ）誘導体を合成する必要がある。Ｎｅｕ５Ａｃの活性化は通常、 酵素ＣＭ　Ｐ−シアリル酸シンターゼを使用することによって行われる。このン ンターゼは容易に入手することができ、Ｎｅｕ５Ａｃの各種類縁体、例えば９− 置換Ｎｅｕ５Ａｃ、　７−　：ｒ−ビーＮｅｕ５Ａｃ、７．８−ビス−エビ−Ｎ ｅｕ５Ａｃ、４−０−メチル−Ｎｅｕ５Ａｃ。 ４−デオキシ−Ｎｅｕ５Ａｃ、４−アセトアミド−Ｎｅｕ５Ａｃ、７−ジオキシ −Ｎｅｕ５Ａｃ、４．７−シブオキシ−Ｎｅｕ５ＡＣならびにＮｅｕ５Ａｃの６ −チオ誘導体の活性化の例は刊行物に記載されている。別法として、Ｎｅｕ５Ａ ｃの類縁体かＣＭＰ−シアリル酸ソンターゼによる活性化を施されていない場合 に、このＮｅｕ５Ａｃの類縁体を、当技術で公知の化学的手段によりオリゴ糖に 結合させることもてきる。 Ｎｅｕ５Ａｃまたはその類縁体のヌクレオチド誘導体と糖受容体とを、Ｎｅυ５ Ａｃまたはその類縁体か受容体に転移される条件の下に、適当なシアリルトラン スフェラーゼを存在させて、相互に配合する。明白なように、使用する糖受容体 は、使用される特定のシアリルトランスフェラーゼの基質として機能するもので なければならない。 この点に関して、Ｎｅｕ５Ａｃは通常、天然の受容体（すなわち、糖蛋白質およ び酵素により認識される末端受容性三糖構造基およびアグリコンを有していない 末端受容性三糖を存するグリｈン鎖を有する、他の複合糖質、これらの場合に、 Ｒ＝Ｈである）に酵素により転移されるか、若干のシアリルトランスフェラーゼ は、受容体の構造中の成る種の修飾に耐えることができるが、別のシアリルトラ ンスフェラーゼは、−ｍの受容体に対してのみの特異性を有するものと認識され ている。化学的に修飾された受容体（「人工受容体」）、例えばオリゴ糖部分が 修飾されていてもよいオリゴ糖グリコシドは、幾つかの場合に、シアリルトラン スフェラーゼにより許容される。 他方、受容体のあらゆる化学的修飾が許容されるわけではない。例えは、βＧａ １（１→３／４）βＧＩｃＮＡＣα（２→３）シアリルトランスフェラーゼはＮ ｅｕ５Ａｃを末端βＧａ１（１→４）βＧＩｃＮＡｃ−二糖構造基に転移させる ことができる。しかしながら、この場合に、βガラクト−スの３．４および６　 位置に存在するヒドロキシル基は、この酵素による認識に必要不可欠であり、従 ってこれらの位置の一つまたは二つ以上の部位での化学的修飾は酵素による認識 の欠落をもたらすことができる。 同様に、Ｎｅｕ５Ａｃの類縁体を酵素により転移させようとする場合には、この 類縁体のＣＭＰ誘導体がまた、シアリルトランスフェラーゼにより認識される必 要がある。 シアリルトランスフェラーゼは、Ｎｅｕ５Ａｃを転移もしくは供与するように自 然に設計されているので、Ｎｅｕ５Ａｃの修飾はいづれも、「人工受容体」の生 成をもたらす。この点に関して、成る種のシアリルトランスフェラーゼは、Ｎｅ ｕ５ＡＣに対するいくらかの修飾を許容することかでき、依然としてこのＮｅｕ ５Ａｃを、適当な末端受容体構造基を存する１％！詣質に転移させることができ るものと認識される。 驚くべきことに、シアリルトランスフェラーゼは、人工供与体を人工受容体に転 移させるに充分の認識柔軟性を有することが見出だされた。このような柔軟性は 、オリゴ糖グリコシドを含有する多数のシアリル酸の合成を容易にすることがで きる。 上記したように、Ｎｅｕ５Ａｃまたはその類縁体の適当なヌクレオチド誘導体は 、Ｎｅｕ５Ａｃまたはその類縁体か受容体に転移される条件の下に、適当なシア リルトランスフェラーゼを存在させて、適当な受容体（すなわち、シアリルトラ ンスフェラーゼにより認識される非還元性末端に末端糖単位（１個または２個以 上）を有するオリゴ糖グリコシド）と相互に配合する。当技術で知られている適 当な条件には、適当な緩衝液、例えば０．１Ｍナトリウムカ゛コシレート（ｃａ ｃｏｄｙｌａｔｅ）中の糖受容体とシアリル酸のＣＭＰ誘導体との混合物に、適 当なｐＨおよび温度条件、例えば６．５−７．５のｐＨおよび２５−４５°Ｃ１ 好ましくは３５−４０°Ｃの温度て、１２時間ないし４日間の条件の下に、適当 なシアリルトランスフェラーゼを添加することが包含される。生成するオリゴ糖 は、ＨＰＬＣ、ゲル−、イオン交換−１逆相−または吸着−クロマトグラフィを 含む慣用の方法によって単離し、また精製することかできる。 同様に、シアリルトランスフェラーゼによる転移に係わり上記した方法と同様の 方法によって、適当なグリコジルトランスフェラーゼを使用して、別種の糖を糖 またはオリゴ糖構造中に転移させることもできる。この点に関して、シアリルト ランスフェラーゼおよびまたその他のグリコジルトランスフェラーゼは、当業者 に周知であり、Ｔｏｏｎｅ等″４およびＢｅｙｅｒ等１ｓにより記載されている 。 Ｃ１効用 いかなる理論にも制限されないものとして、オリゴ糖グリコシドは、多数の方法 で細胞性免疫応答に作用するものと信じられる。オリゴ糖グリコシドは、免疫系 が最初に抗原にさらされた時点で同時的にこのオリゴ糖グリコシドか投与される と、その免疫応答がその抗原に係わり教育される能力を阻害することができる。 また、オリゴ糖グリコシドは、免疫系が抗原に二次またはそれ以上さらされた後 に投与されると、細胞性免疫応答（例えば、ＤＴＨ応答の炎症部分）のエフェク ター相を抑制することがてきる。さらにまた、オリゴ糖グリコシドは、免疫系か 抗原に二次またはそれ以上さらされた後に投与されると、その抗原に対する寛容 性を誘発させることができる。 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドによる免疫応答の炎症部分の抑制は、 二次免疫応答（すなわち、抗原に対する二回目の露呈）の開始に必要であるもの と信じられる。血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは一般に、炎症エピソ ード後の少なくとも約０．５時間、好ましくは炎症エピソード後の少なくとも約 １時間、最も好ましくは炎症エピソード後の少なくとも約５時間の時点で、患者 に投与する。 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、約０．５ｍｇ−約５０ｍｇ／体重 ｋｇ、好ましくは約０．５−約５ｍｇ／体重ｋｇの用量範囲で投与されると、抗 原に対する細胞性免疫応答（例えばＤＴＨ応答の炎症部分）の抑制に有効である 。使用する特定の投与量は、処置しようとする特定の細胞性免疫応答により、お よびまたＹ１害な免疫応答の　重篤度、患者の年齢および一般健康状態なとの因 子に依存して担当医師の判断により、調節される。本発明に係わる血液型抗原決 定基関連オリゴ糖グリコシドは一般に、非口紅投与、例えば鼻内投与、肺投与、 経皮投与および静脈投与されるか、その他の投与形態も意図される。好適態様に おいて、哺乳動物に対するチャレンジ投与後の２４時間の時点て、そして本発明 に係わるオリゴ糖グリコシド投与後の１９時間の時点て測定して、細胞性免疫応 答、例えばＤＴＨ応答の炎症部分の抑制は、対照に対して少なくとも約１０％減 少される。 抗原に対する細胞性免疫応答の炎症部分の抑制に加えて、本発明に係わる血液型 抗原決定基関連オリゴ糖グリコノドの投与はまた、同一抗原の追加のチャレンジ に対する寛容性を付与する。この点に関して、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドの投与後の数週間における、同一抗原の再チャレンジは、有意に減少さ れた免疫応答をもたらす。 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを、抗原への最初の露呈と同時的に投 与すると、この抗原に対する細胞性免疫応答か抑制され、この抗原に対する追加 のチャレンジに対する寛容性かもたらされる。この点に関し”て、「感受性を減 少させる」の用語１よ、免疫応答を誘発させるのに充分の有効量の抗原とともに 、有効量て哺乳動物に投与された場合に、当該化合物か、この哺乳動物の免疫系 を、化合物と同時に投与された抗原に対して教育され、感作されるようになる免 疫系の能力を減少させることを意味する。化合物の「有効量」の用語は、足裏ふ くらみ部チャレンジ試験により試験して、ＤＴＨのような抗原に対する細胞性免 疫応答の減少により測定されたものとして、同時的に投与された抗原に対する哺 乳動物の感受性（免疫学的教育）を減少させる量を意味する。 好適態様において、この感受性の減少は、少なくとも約２０９６、さらに好まし くは少なくとも約３０％である。 一般に、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、約０．５ｍｇ−約５０ｍ ｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０．５ｍｇ−約５ｍｇ／体重ｋｇの用量範囲で投与 された場合に、感受性の減少に有効である。使用される特定の投与量は、処置さ れる感作、および患者の年齢および一般状態によって担当医師の判断により調節 される。感受性の抑制に係わる、化合物の抗原との「同時的」投与は、当該化合 物を抗原の投与後の３時間以内の時点で、１回または連続的に、投与することを 表し、好ましくは当該化合物は抗原投与後の１時間以内に投与する。 上記の本発明の方法は一般に、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの有効 量を非口経投与するのに適する医：Ｊｉ組成物の使用により達成される。これら の組成物は、水、緩衝されている塩類溶液などの調剤用不活性担体および患者に 投与された時に、上記用量のオリゴ糖グリコシドが付与されるような、有効量の 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドからなる。適当な医薬組成物は、助剤 、保存剤などの任意の成分をさらに介在することかできるものとする。 その他の適当な医薬組成物どしては、経Ｌ１組成物、経皮組成物またはハントエ イジなとを包含でき、これらは当技術で公知である。 以下の例は、本発明を説明するものであり、いがなる方法でも、本発明の範囲を 制限しようとするものではない。 これらの例において、別段の定義が以下でなされていないかぎり、使用されてい る略語は、一般に受入れられている下記の意味を存するものとする：ＢＳＡ　＝ ウソ血清アルブミン ｄ　＝二重線 ｄｄ　＝＝二重線の二重線 ｄｄｄ　＝二重線の二重線の二重線 ＤＴＨ：＝遅延型過敏症 ｅｑ　＝エカトリアル ｉ、ｒ、　＝赤外部 ｍ　＝多重線 ｑ　＝四重線 ｔ、Ｉ、’ｃ、　：薄層クロマトグラフィＡＧ］Ｘ８（ホーメート形）　＝Ｂｉ ｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。 Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、　ＣＡがら入手できるイオン交換樹脂ＡＧＩＸ８（ホーメー ト形）ドーペックス（Ｄｏｗｅｘ）　５０　ｘ　８　（Ｈ”形）　＝＝Ｄｏｗ　 Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｍｉｄｌａｎｄ、Ｍｌから入手できるイオン交換樹脂ドーペ ックス５０Ｘ８（Ｈ４形） ＩＲ−Ｃ５０樹脂（Ｈ”形）　＝Ｒｏｈｍ　＆　Ｈａａｓ、Ｐｈ１ｌａｄ２０ｅ ｌｐｈｉａ、ＰＡがら入手てきるイオン交換樹脂ＩＰＵ−Ｃ５０’（Ｈ“形） 市販されているものは、製造業者によるリストに記載されており、また相当する 場合に、注文番号を記載する。 利用した製造業者の例を以下に示す： ａｐａｎ メルク（Ｍｅｒｃｋ　）　＝Ｅ、Ｍｅｒｃｋ　ＡＧ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅ ｒｍａｎｙミリボール（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　）　＝Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏ ｒｐ、Ｂｅｄｆｏｒｄ。 ＭＡ つオーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）　＝Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ、　Ｉ ｎｃ、。 Ｍｉ　１ｆｏｒｄ、ＭＡ 例 下記の例において、例１−１９は、多くのオリゴ糖グリコツトの合成を例示する ものてあり、一方例２０−３７は、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの 投与による抗原に対する細胞性免疫応答の抑制および同一抗原による後続のチャ レンジに対する寛容性の誘発を例示するものである。例１−１３において、使用 したオリゴ糖グリコシドは、図１４−２４に記載されているアラビア数字で示さ れており、また例２０−３５のオリゴ糖グリコシドは、図ｌｌ−１３に記載され ているローマ数字て示されている。 例１−１３の一つまたは二つ以上において、分析用ｔ。 １、ｃには、シリカゲル（Ｍｅｒｃｋ　、　６０　Ｆ２％４　）の予めコートし たプレートを使用し、またスポットはエタノール中の５９６硫酸溶液の噴霧後の 炭化により検出した。カラムクロマトグラフィには、シリカゲル６０（λ（ｅｒ ｃｋ、４０−６３μｍ）を使用した。イアトロビーズ（Ｉａｔｒｏｂｅａｄｓ） はイアトロンからのものであった（注文番号６Ｒ３−８０６０）　、ミレックス （Ｍｉ　ｌ　１ｅｘ）　−Ｇ　Ｖフィルター（０２２μｍ）はミリボールからの ものであった。 Ｃ＋ｓセブーバック（Ｓｅｐ−Ｐａｋ）カートリッジおよびバルクＣＩＩシリカ ゲルはウォータース　アソシエーツからのものであった。 化学反応には、市販の試薬を使用し、溶剤は慣用の方法で精製し、乾燥させた。 別段の記載がないかぎり、反応混合物は、ジクロロメタンにより稀釈し、桶型炭 酸ナトリウム溶液により、次いで水により洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥 させた後に、溶剤を減圧の下に、３５°Ｃの浴温度または必要な場合には、それ 以下の温度で、蒸発により除去した。 ’　Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、は、内部標準として、Ｄ、Ｏ中で２．２２５にセットした アセトン、またはＣＤＣｌ２中のテトラメチルシランを用いて、別段の記載がな いかぎり、室温において、３００　Ｍ　Ｈｚ　（ＢｒｕｋｅｒＡＭ−３００）で 測定した。 化学シフトおよび結合定数（スプリットにより測定）は、これらが−次オーダー であるものとして記録し、部分ｎ。 叱「、データのみを記録した。＋３（：、叱「、スペクトルは、対照としてり、 Ｏ中で６７．４にセットしたジオキサンまたはＣＤＣｌ２中のテトラメチルシラ ンを用いて、７５．５ＭＨｚで記録した。 Ａ、　Ｎｅｕ５Ａｃの誘導体の合成 別設の記載がないかぎり、Ｎｅｕ５Ａｃの誘導体は、必要に応じて出発物質を適 当に置換して、公知方法にしたがい製造した。刊行物に記載されている方法を適 当に変更して、次の誘導体を製造した： 図１４は、Ｎｅｕ５Ａｃの誘導体の合成に使用された一般合成経路を示すもので ある。下記の例１−４において、下線付きのアラビア数字で示されている化合物 は、表Ｉおよび図１４に記載されている。 例１ ５−アセトアミド−９−アジド−３，５，９−１−リゾオキシ−Ｄ−グリセロ− Ｄ−ガラクト−２−ノヌロビラノシロン酸（９−Ｎ、　−Ｎｅｕ５Ａｃ）　１　 ｂの合成乾燥ジクロロメタン（１３ｍｌ）中のグリコジルクロライド３８　（２ ，８３ｇ、５．５７ミリモル）を、ジクロロメタン（８ｍｌ）中のベンジルアル コール（５，０ｍ１．４８．２ミリモル）、分子ふるい４オングストローム（１ ８，５ｇ、粉砕したもの）、乾燥炭酸銀（４，２ｇ、１５．２ミリモル）の混合 物中に添加した。 この混合物を暗所で４日間攪拌し、ジクロロメタン（５０ｍｌ）により稀釈し、 次いでセライトに通して濾過した。慣用の仕上げ処理の後に、残留物を、溶出剤 としてヘキサンと酢酸エチルとの３＝２混合物を使用するシリカゲルにおけるク ロマトグラフィに付した。生成物を次いて、同一溶剤の４：５混合物により溶出 し、純粋な物質（１，９６ｇ、６０％）および少量の不純物を含有する物質０． ３３ｇ（１０％）を得た。 ’Ｈｎ、ｍ、ｒ、　：　５．　４３６　（ｄｄｄ、Ｉ　Ｈ，Ｊｌ、＊８．５．Ｊ ｓ、２．５．Ｊｓ、ｓ　５．５Ｈｚ、Ｈ８）　。 ５．３１７　（ｄｄ、ＩＨ，、Ｌ、ｆｆ　１．８）ｔＺ、Ｈ−７）。 ５．１１０　（ｄ、ＩＨ，Ｊｓ、＋、ｓ９．５Ｈｚ、ＮＨ）。 ４．８４９　（ｄｄｄ、Ｌ　Ｈ，Ｊｘ−−、ａ　’Ｉ　２．０゜Ｊｉ、、４４． ５．Ｊｌ、５９．５Ｈ２，Ｈ−４）。 ４．７８８および４．３９７　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、。 １２．０Ｈｚ、ベンジル）、３．６４２　（Ｓ。 ｃｏ、ｃ旦２　）、　２．６２９　（ｄｄ、ＩＨ，、Ｌ、、、３．。 １２．５Ｈｚ、Ｈ−３ｅｑ）、２．１４０．２．１１３゜２．０１７．１．９９ ７．１．８５７．（５ｓ、１５Ｈ。 ４０Ａｃ、ＩＮＡｃ）、１．９８６　（ｄｄ、ＩＨ，Ｈ−３ａｘ）。 上記物質（１，５ｇ、２．５８ミリモル）を触媒量のナトリウムメトキシドを含 有する乾燥メタノール（２０ｍｌ）中で、２２°Ｃにおいて５時間、脱０−アセ チル化させた。ドーペックス５０Ｘ８（Ｈ’形）により脱イオン化させた後に、 溶剤を蒸発させ、生成物３９（１，０ｇ、９４％）を得た。この生成物を次の工 程で使用した；　’Ｈｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＩｓ　）　：　４８１５および４ 、　６１９　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、−１１，５Ｈｚ、ベンジル）、３．８０２　 （Ｓ、ＣＯ２ＣＨ２）　、３．５８２（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、ａ　９．Ｏ，、Ｌ、 ｔ　０．５Ｈｚ、Ｈ−６）、２．７５２　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ３−１．３．、＋２ ．５゜Ｊｌ、、、４　４．　５Ｈ２，Ｈ−３ｅｑ）、２．　０３９　（ｓ。 ３Ｈ，Ｎ　Ａｃ）、１．　８６　１　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ３−−．４１　１、　０ Ｈｚ、Ｈ−３ａｘ）。 ピリジン（０，１ｍ１）中のパラ−トルエンスルホニルクロライド（０，１２５ ｇ、０．６５ミリモル）の溶液を、ソリンジにより０°Ｃにおいて、ピリジン（ １，１ｍ１）中の４−ジメチルアミノピリジン（０，０１ｇ）、溶液−と９　（ ０，２４８ｇ、０．６０ミリモル）に加えた。 ０°Ｃて４時間攪拌した後に、メタノール（０，０１ｍ１）を加え、この混合物 を乾燥ｌ−ルエンとともに共蒸発させた。この残留物を迅速に、溶出剤としてア セトニトリルを使用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付し、依然とし て若干の不純物を含有するトシレート（０．２１ｇ，６２９６）を得た。この生 成物（０．２１ｇｔ　ｏ．３７ミリモル）のジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ ）溶液に、ナトリウムアジド（０．１９ｇ。 ２、９２ミリモル）を＋ＪＩ＋えた。この混合物を６５°Ｃにおいて１８時間攪 拌し、引き続いてセライトに通し、次いて溶剤を減圧の下に、蒸発させた。この 残留物を、溶出剤として酢酸エチルとアセトニトリルとの６．１混合物を使用す るシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付し、生成物４０　（０．１３６ｇ， ８５９６）を得た；ｉ．ｒ．θｃｍ−’２１　１０　（Ｎ３　）　；　’Ｈーｎ ．ｍ．ｒ．：５．　７７５（ｄ，Ｉ　Ｈ，ＪｓＮＩ＋９．０Ｈｚ，ＮＨ）、４． 、８　１　６および４．４７０　（ＡＢ，２Ｈ，Ｊ，。、　Ｉ　１．　５Ｈｚ。 ベンジル）、３．７　３　８　（Ｓ，ＣＯ２　ＣＨ２　）　。 ２、８　７　１　（ｄｄ，　ＩＨ，Ｊｚ−−　４　４．８，Ｊｚ−、ｚ−１３、 ０Ｈｚ，Ｈ−３ｅｐ）、２．　０８６　（ｓ，　３Ｈ。 ＮＡｃ）、１．　９６４　（ｄｄ．　ＩＨ，、Ｌ．、、４　１　１．　５Ｈｚ， 　Ｈ−３ａｘ）。 上記化合物上０　（０．１０５ｇ．０．２４ミリモル）を、０．２５Ｎ水酸化す ｌ・リウム（２ｍｌ）中で、２２°Ｃで３時間放置した。ドーペックス５０Ｘ８ （Ｈ″″形）の添加によりｐＨを６に調整し、次いて濾過した後に、生成物を凍 結乾燥させて採取し、次いで溶出剤としてクロロホルム、メタノールおよび水の ６５：３５：５混合物を使用するイアトロビーズにおけるクロマトグラフィに付 した。相当するフラクションから生成物（０．０８７ｇ，８６％）を得た。この 化合物（０．ｔｏｏｇ。 ０、２３５ミリモル）を、０．０２５Ｎ塩酸（３ｍｌ）中で、８０°Ｃて６時間 加熱した。この溶液を水酸化ナトリウムにより中和し、次いて凍結乾燥させた。 この生成物を溶出剤としてクロロホルム、メタノールおよび水の６５：３５：５ 混合物を使用するイアトロビーズ（０．６０ｇ）におけるクロマトグラフィに付 し、１ｂ（０．０６７ｇ，８５％）を得た；　’Ｈーｎ．ｍ．ｒ．：４、１０６ −３．８９５　（ｍ，５Ｈ）、３．６３９（ｄｄ，ＩＨ，Ｊｉ．＊　３．０，Ｊ ｓ．＊Ｉ　３．ＯＨｚ．Ｈ−９）、３．５２８　（ｄｄ，ＩＨ．Ｊ．、　６．０ Ｈｚ。 Ｈ−９“）、２．２４９　（ｄｄ，ＩＨ，Ｊ３。ｓ　４．５。 Ｊｓ、、、ｓ、、Ｉ　２．　５Ｈｚ、Ｈ−３ｅｑ）、２．　０９０（ｓ、３Ｈ， ＮＡｃ）、１．　８５２　（ｄｄ、ＩＨ。 Ｊｌａｍ、１　１　１．　ＯＨｚ、Ｈ−３ａｘ）。 例２ ５−プロピオンアミド−３，５−ジデオキソーＤ−グリセロ−Ｄ−がラクト−２ −ノヌロビラノシロン酸５ｇ、０．１８ミリモル）の溶液を２２°Ｃで０．５時 間、次いて９５°Ｃて７時間放置した。ＩＲ−Ｃ５０ｔ１脂（Ｈ”形）の添加に よりｐＨを７．５に調整した。この樹脂の濾過後に得られた濾液を減圧の下に蒸 発させ、この残留物を五酸化リン上で乾燥させた。 ０°Ｃて攪拌した、乾燥メタノール（１，５ｍ１）とトリエチルアミン（０，２ ｍ１）との混合物中の−Ｌ記生成物の懸濁液に、無水プロピオン酸（０゜１２　 ｍ　ｌ　。 ０．９４ミリモル）を次いて、シリンジにより添加した。 ３時間後に、無水プロピオン酸（０，０２５ｍ１゜０．１９５ミリモル）をさら に添加し、このｌ昆合物をＯｏＣてさらに２時間攪拌した。この混合物をメタノ ールとともに共蒸発させ、残留物の水（２ｍ　ｌ　）中の溶液を、トー・＼ソク ス５０Ｘ８（Ｈ’形、６ｇ）に通した。採取したフラクションを減圧の下に蒸発 させ、この残留物を溶出剤としてクロロホルムとメタノールとの３：１混合物を 使用するイアトロヒーズ（５ｇ）におけるクロマトグラフィに付し、土工（０， ０６４６ｇ、８６．５％）を得た；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　：　４．８００，４ ．５７８　（ＡＢ。 ２Ｈ，Ｊ、、、ｌ　１．ＯＨｚ、ベンジル）、３゜５８０（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、 ｓ　９．　０．　Ｊａ、ｔ　１．　０Ｈｚ。 Ｈ６）２．　７７６　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊｚ−、ａ　４．５゜、Ｌ、＠、３．． １２．５Ｈ２，Ｈ−３ｅｑ）、２．３１６（ｑ、２Ｈ，Ｊ７．５Ｈ２，ＣＨ２Ｃ ｏ）、、１．７６２（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｚ＝−、−１２，０Ｈ２）、　１．　１２ ９（ｔ、３Ｈ，ＣＨ３）。 上記ベンジルグリコシド（０，ｌｌ５ｇ、０．２７８ミリモル）の水（５ｍｌ） 中の溶液を、木炭（１０ｍｇ）上の５９６パラジウムの存在の下に、大気圧で、 ２２°Ｃにおいて５時間、水素添加した。セライトに通し、次いてミリボールに 通して濾過した後に得られた溶出液を凍結乾燥させ、化合物上±（０，０７４ｇ 、８２．５９６）を得た；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、：３．　７２−４．　１０　（ ｍ。 Ｈ−４，−５，−７，−８，−９）、３．６１４　（ｄｄ。 ＩＨ，Ｊｇ、ｓ、Ｇ、５．　Ｊ！ａ、ｌｌｂ　Ｉ　１．　７５Ｈｚ、＋　Ｈ−９ ａ）、３．５３０　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、ｓ　９．ＯＪｓ、７１．０Ｈｚ、Ｈ− ６）、２．２５０−２．４００　［ｍ。 ２Ｈ１ｎｃ１．ｃ旦２　Ｃｏ　（ｑ、２．　３１５゜Ｊ７．５Ｈｚ）およびＨ３ ｅ　ｑ　（ｄ　ｄ　、Ｊ　２ｓｑ、　２６ｍ１１．５Ｈ２，Ｊ３゜４４．５Ｈｚ ）］、１．．８８０（ｔ、ＩＨ，Ｊａ、、、３．、Ｉ　１．５Ｈｚ、Ｈ３ａｘ） ＋例３ ５−アセトアミＩ’−３，５−ジデオキソーＤ−ガラクト−２−オクッロフン酸 （Ｃ８−Ｎｅｕ５Ａｃ）　Ｉ　ｉの合成３９からのＩｉの合成は基本的に、Ｈａ ｓｅｇａｗａ等の発行された方法３８に従うが、ここに記載されているものとは 異なる出発物質を使用する。特に、２，２−ジメトキソプロパン（３ｍｌ）中の −と９　（０，５２ｇ。 ０．１２５ミリモル）の懸濁液を２２°Ｃにおいて１．　５時間、パラトルエン スルホン酸（０，５ｍｇ）の存在の下に、攪拌した。若干のトリエチルアミンに より中和した後に、この混合物を蒸発させ、残留物を溶出剤としてクロロホルム とメタノールとの１６：１＃昆合物を使用するシリカゲルにおけるクロマトグラ フィに付し、４２（０，０４９ｇ、８８％）を得た。 土２　（０，０５４ｇ、０．１８５ミリモル）を、無水酢酸Ｃｌ　ｍ　ｌ　）と ピリノンとの２．１混合物中で５０”Ｃにおいて５時間保持した。慣用の仕上げ 処理後に、この残留物を溶出剤として酢酸エチルを使用するシリカゲルにおける クロマトグラフィに付し、アセチル化生成物（０，０９１ｇ、９２９６）を得た ；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、：５．４２０　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、ｔ　１．５．Ｊ７ ．８３．５Ｈｚ、Ｈ７）、５．１９６　（ｄ、ＩＨ，ＪＲ，−−９，０Ｈｚ、Ｎ Ｈ）、５．００９　（ｄｄｄ、ＩＨ，Ｊ、３．。 １３．０．Ｊ４．３．．５．Ｏ，Ｊ４．６　１０．０Ｈｚ、Ｈ−４）、４．７９ ７および４．４９８　（ＡＢ、２Ｈ。 Ｊ、、、Ｉ　１．５Ｈｚ、ヘンシル）、３．７７６　（ｓ。 ３Ｈ，ＣＯ□　ＣＨ２）、２．　７２４　（ｄｄ、ＩＨ。 Ｊｊａｍ、ｆｆ＋ｏ　１３．　ＯＨ２，Ｈ３ｅｑ）、２．　１５１゜２、　０３ ２．　１．　８９５　（３ｓ、９Ｈ，２０Ａｃ。 ＩＮＡｃ）、２．　０３２　（ｔ、ＩＨ，Ｈ−３ａｘ）。 １．３６３および１．３５０　（２ｓ、６Ｈ，メチル）。 上記生成物（０，０９１ｇ、０．１６９ミリモル）を、７０％水性酢酸中で４０ °Ｃにおいて４時間加熱した。この混合物を減圧の下に、トルエンとともに共蒸 発させた。 この残留物を乾燥させ、乾燥メタノール中に溶解し、次いて２２°Ｃにおいて２ 時間、ナトリウムメタペリオデ−１・（０゜０５９ｇ、０．ｊ７５ミリモル）の 存在の下に攪拌した。この混合物を、メタノールにより洗浄したセライトのバッ ドに通した。濾液を集め、ホウ水素化ナトリウｌ、（０，０３６ｇ、０．９５ミ リモル）の存在の下に、０°Ｃて２５分間攪拌した。この混合物を、若干量の酢 酸（０，２ｍ１）とともに０°Ｃて攪拌し、次いて溶剤を蒸発させ、残留物を減 圧の下に１５分間乾燥させ、次いてピリジンと無水酢酸との５：１混合物（６ｍ ｌ）中で、２２°Ｃにおいて２０時間アセチル化させた。慣用の仕上げ処理後に 、この残留物を採取し、溶出剤として酢酸エチルを使用するシリカゲルにおける クロマトグラフィに付し、依然として若干量の非分離夾雑物を３存する、生成物 を得た。乾燥させた、この生成物（０，０７４ｇ。 依然として若干量の非分離夾雑物を３存する）を、乾燥メタノール（５ミリ）中 に溶解し、次いでナトリウム（３ｍｇ）の存在の下に、室温で３時間攪拌した。 ドーペックス５０Ｘ８（Ｈ＋形）により脱イオン化し、次いで濾過した後に、溶 剤を減圧の下に蒸発させ、この残留物を溶出剤としてクロロホルムとメタノール との１５：ｌ混合物を使用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付し、純 粋な生成物土工（０，０４７ｇ、７８％）を得た；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　＋　 （ＣＤ＊　ＯＤ）　：　４．　７２４および４．　４１６　（ＡＢ、　２Ｈ，Ｊ 、、、　Ｉ　１．５Ｈｚ、べＨｚ、Ｈ−６）、２．６４２　（ｄｄ、ＩＨ，ＬＬ ｅａ、４４．５．Ｊ３．、、！、、１２．５Ｈ２，Ｈ−３ｅｑ）。 １、　９３８　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．　６９９　（ｔ。 ＩＨｌ　Ｊｚｓｘ、＜　１　２．　５Ｈｚ、Ｈ３ａ　ｘ）。 上記生成物（０，０２２ｇ、０．０５７ミリモル）を、０．２５Ｎ水酸化ナトリ ウム（２ミリ）中で２２°Ｃにおいて５時間攪拌し、この溶液をトーペックス５ ｏ×８（Ｈ’形）により中和し、次いて濾液を凍結乾燥させて、白色固形物（０ ，０１９ｇ、９０％）を得た。この生成物を、水（２ミリ）中に溶解し、次いで 木炭（４ｍｇ）上の５％パラジウムの存在の下に、２２℃において３時間、水素 添加した。この混合物をセライトに通し、次いてミリボールに通して濾過した。 この濾液を凍結乾燥さた；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　：　３．　４６２−４．　０ ９３　（ｍ。 ６Ｈ）、２．　２８７　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ、、、、、、４．　５゜＋ｌ＊ａ、３ ａｍ　ｌ　２．　５Ｈｚ、Ｈ−３ｅｑ）、２．　０５２（ｓ、３Ｈ＋　ＮＡｃ） 、１．　８５３　（ｔ、ＩＨ。 Ｊｌ、。ｓ　１　２．　５Ｈｚ、Ｈ−３ａｘ）。 例４ ５−アセトアミド−３，５，７−）リゾオキシ−β−Ｄ−ガラクトー２−ノヌノ ビラノシロン酸（７−ｄ−Ｎｅｕ５Ａｃ）　１　ｄの合成 １ｄの合成は基本的に、Ｚｂｉｒａｌ等の発行された方法３１に従うが、異なる 出発物質を使用する。特に、ジメチルホルムアミド（２ミリ）中の４２（０，１ １ｇ。 ０．１９ミリモル）の溶液に、イミダゾール（０，１３ｇ、１．９３ミリモル） およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライｌ’（０，１３５ｇ、０．８９ ミリモル）を添加する。室温で４時間後に、溶剤を減圧の下に蒸発させ、この残 留物をクロロホルムに溶解し、次いで慣用の仕上げ処理に付した。この生成物を 酢酸エチルとへキサンとの１・１混合物を使用するシリカゲルにおけるクロマト グラフィに付し、モノシリル化誘導体（０，１０１ｇ、９２９６）を得た：　［ α］。−”２．６６　（ｃ、０．６．　クロロホルム）；’Ｈ−ｎ、ｍ。 ｒ、：　５．Ｉ　９５　（ｄ、ＩＨ，ＪｓＮＨ７Ｈｚ、ＮＨ）　。 ４．８５３および４．６０３　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、。 １１．５Ｈｚ、ベンジル）、３．７３６　（ｓ。 Ｃｏｔ　ＣＨ２）、２．　６９２　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ３ｅａ、４４、　５．　Ｊ ｚ−、、＊−ｗ　１３．　ＯＨｚ、Ｈ３ｅｑ）。 ２、　０２２　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．　８８４　（ｄｄ。 ＩＨ，Ｊ３−−．４　１　１．　０Ｈｚ、Ｈ３ａｘ）１１．４０５，１．３７５ 　（２ｓ、６Ｈ，メチル）。 ０．８６８　（ｓ、９Ｈ，ｔ−ブチル）、０．０９３および０．０８４　（２ｓ 、６Ｈ，メチル）９乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中の上記化合物（０， ４３７ｇ、０．７７ミリモル）の溶液に、−３０℃で、５ｅｃ−ブチルリチウム （シクロヘキサン中の１．３Ｍ、０．６５ｍ１，０．８５ミリモル）を、次いで 二硫化炭素（１，２５ｍ１．２０．８ミリモル）を滴下して添加した。−２５° Ｃで０．５時間攪拌した後に、ヨウ化メチル（１，６ｍ１．２５．６ミリモル） をゆっくり加え、室温までゆっくり温めた。蒸発後に、この残留物を、溶出剤と してヘキサンと酢酸エチルとの４：ｌ混合物を使用するシリカゲルにおけるクロ マトグラフィに付し、相当するキサンチー）　（０，３２７ｇ、６５９６）を得 た。［Ｄコα＝９３．９　（ｃ、０．６５５．　クロロホルム）　；　’Ｈ−ｎ 、ｍ、ｒ、：　６．　３８８　（ｄｄ、ＩＨＪｇ７１．０．ＪＴ。２．５Ｈｚ、 Ｈ−７）、５．（３１０（ｄ、ＩＨ，Ｊ５Ｎ、７．ＯＨ２，ＮＨ）、４，７７８ ゜４．４６６　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、、Ｉｌ、５Ｈｚ、ベンツル）、３．７’７ ８　（Ｓ、ＣＯ２Ｃ旦、）、２．６６２（ｄｄ、Ｉ　Ｈ，Ｊ、、、４４．５．Ｊ 、、、、、、、１２．５Ｈｚ、Ｈ−３ｅｑ）、２．　５８４　（ｓ、３Ｈ。 ０ＣＨｚ　）、１．　８８３　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）　。 １、　６　９　３　（ｄｄ、　［Ｈｌ　Ｊ２ａｍ、４　１　１．　５Ｈｚ、Ｈ− ３ａｘ）、１．３１５　（ｓ、６Ｈ，メチル）０．８２５（９Ｈ，ｔ−ブチル） 、０．０２５．０．０９２　（２ｓ。 ６Ｈ，メチル）。 乾燥トルエン（３ミリ）中の上記キサンテート（０，３２ｇ、０．４８ミリモル ）の溶液に、アゾビスイソブチロニトリル（０，００４ｇ）およびトリーｎ−ブ チルスズ水素化物（０，５ミリ、１．８６ミリモル）を添加した。１００°Ｃて ７時間加熱し、溶剤を乾燥トルエンとともに共蒸発させ、次いてこの残留物を、 溶出剤としてヘキサンと酢酸エチルとの３：２混合物、次いで１：１混合物を使 用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付し、７−デオキシ生成物（０， ２６０ｇ、７０％）を得た：　’Ｈｎ−ｍ−ｒ、　：　５．　３３４　（ｄ、ｌ 　Ｈ＊Ｊい、７．０Ｈｚ、ＮＨ）、４．７４０，４．４５５（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、 、、１１．６Ｈｚ、ベンジル）。 ３．６９０　（ｓ、Ｃｏ□ＣＨ，）、２．６２８　（ｄｄ。 ＩＨ，Ｊ、＠。４４．　２．　Ｊ２ｍ、、２ｍ１１２．９Ｈｚ。 Ｈ−３ｅｑ）、１．９１４　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）。 １、　８０５　（ｄｄ、ｌ　Ｈ１Ｊ３−．４　１０．　９Ｈｚ。 Ｈ−３ａｘ）、１．７１８および１．５９７　（ｍ、２Ｈ。 Ｈ−７およびＨ−７’）、１．３２５　（Ｓ、６Ｈ，メチル）、０．８０４　（ ９Ｈ，ｔ−ブチル）、０．０１０゜０．００９　（２ｓ、、６Ｈ，メチル）。 上記生成物（０，２６０ｇ、０．４７ミリモル）を、７０％酢酸中で７５°Ｃに おいて７．５時間加熱した。トルエンとともに共蒸発させた後に、この残留物を 、クロロホルムとメタノールとのＩＯ：１混合物を使用するシリカゲルにおける クロマトグラフィに付し、４３（０，１５７ｇ、ｉ３４％）を得た；　’Ｈ−ｎ 、ｍ、ｒ、：４．８６０および４，６５５　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、。 Ｉｌ、５Ｈｚ、ベンジル）、３．８３４　（ｓ。 Ｃ０２Ｃ旦、）、２．８０６　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ２−＠４４．５．Ｊ、、。３− １２．５Ｈｚ、Ｈ３ｅｑ）　。 ２．０６９　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．８８１　（ｄｄ。 ＩＨ，Ｊｘ、ｗ、＜　１２．５Ｈｚ、Ｈ−３ａｘ）、１．６９８および（ｍ、２ Ｈ，Ｈ−７およびＨ−７’）。 化合物上ユ（０，４５７ｇ、０．３９６ミリモル）を、０．２５Ｎ水酸化すｌ〜 リウム（６ｍｌ）中で、室温に５時間保持した。トーヘツクス５　ｏｗｘ　８　 （Ｈ”形）により中和し、次いて濾過し、この溶液を真空凍結乾燥させて、生成 物（０，１４９ｇ、９７％）を得た。この生成物（０，１４６ｇ、０．３８ミリ モル）を、木炭（０，０１０ｇ）上の５９６パラジウムの存在下に水（５ｍｌ） 中で、室温において５時間、水素添加した。この混合物をセライトに通し、次い でミレックスーＧＶ（０，２２μｍ）フィルターに通して濾過した。この濾た； ’Ｈ−ｎｍｒはＣｈｒｉｓｔｉａｎにより報告されているとおりである３９゜ 下記表１は、製造されたＮｅｕ５Ａ（の誘導体をまとめて示すものである。 表１つづき シアリル化オリゴ糖の化学修飾により得られたシアリル化部分： １１′ＩＩＩ′ Ｂ、　Ｎｅｕ５Ａｃおよびその類縁体のＣＭＰ誘導体の合成例５ Ｎｅｕ５ＡｃのＣＭＰ誘導体の合成 ＣＭＰ−シアリル酸シンターゼは、ウシの脳から抽出し、Ｈｉｇａ等のオリジナ ルな方法４Ｇを僅かに改良した方法により、４°Ｃて部分的に精製した。慣例に 従し１、脳組織〜２００ｇをクッシュナー（Ｃｕｉｓｉｎａｒｔ）ブレンダーで 、２５ｍＭ）リス（Ｔｒｉｓ）／　ＨＣ］、ｐＨ７，５，１０ｍＭ塩化マグネシ ウム、１０ｍＭ塩化ナトリウム、２．５ｍＭジチオエリスリトール、０．５ｍＭ フェニルメチルスルホニルフルオライドの４００ｍ１とともにホモゲナイズした （３０秒の作動を１分の間隔て３回）。 この均一化生成物を、１時間攪拌し、次いて２３．００ＱＸｇで１５分間、遠心 処理した。この上澄液をデカンテーションにより分離し、このペレ・ノド状物を 上記と同一の緩衝液によりもう一度抽出した。この上澄液を集め、次いで２８． ＯＯＯＸｇて１５分間、遠心処理した。この上澄液をガラスウールに通して濾過 し、粗製抽出液（５１５ｍｌ、４．７ｍｇ蛋白質／ｍｌ酵素　〜９０Ｕ）を辱だ 。 固形の塩化カリウムにより、塩濃度を０．４Ｍに調整した後に、この粗抽出液を 攪拌し、次いて３５％飽和まで、固形硫酸アンモニウムを１５分間にオつたって 添加した。この溶液を、さらに１５分間攪拌し、氷上に１時間保持し、次いて２ ８，０００Ｘｇて３０分間、遠心処理した。この沈殿は捨て、上澄液を攪拌し、 次いで６０％飽和まで、固形硫酸アンモニウム（ｔ６３ｇ／ｌ）を１５分間にわ たって添加した。 さらに１５分間攪拌した後に、この懸濁液を一夜にわたり放置し、次いで」二記 のとおりに遠心処理した。生成するペレット状物を６０％硫酸アンモニウム溶液 １５０ｍ１により洗浄して、共沈殿物を除去した。この洗浄したペレット状物は 、ｏ、ｏｓｕ、”ｍｇ蛋白質の比活性を有する酵素７０＝８０Ｕを含有していた 。この酵素は、Ｋｅａｎ等により開示された方法により４′分析した：酵素活性 の１単位は、３７゛Ｃて１分間あたりて生成された生成物のＩμｍｏｌとして定 義される。 このペレツ）・状物中に存在する酵素は、冷たい室内で数週間保存することかで きた。この酵素を合成に使用する前に、このペレット状物を最少量の５０ｍＭト リス／ＨＣＩ、ｐＨ９，０，３５ｍＭ塩化マグネシウム、３ｍＭ２〜メルカプト エタノール（活性化緩衝液）中に懸濁し、次いで同一緩衝液＋００容量に対して 透析した。この透析した酵素を、９，０００Ｘｇで１０分間、遠心処理した。９ ０％以上の酵素活性を含有する、この上澄液を、合成に直接使用した。 シアリル酸のＣＭＰ誘導体は、上記と同様にして合成し、Ｈｉｇａ等４０および Ｇｒｏｓｓ等４２により開示された方法により精製した。例えば、７−　ｄ　− Ｎｅｕ５Ａｃ　Ｉ　ｄ　（表１．２０ｍｇ、６９μｍｏｌ）は、上記の透析した 酵素１５Ｕを用いて、上記活性化緩衝液１２ｍ１中て３７°Ｃにおいて５−６時 間、４倍過剰員のンチジントリホスフエ−１・の存在の下に、活性化させた。相 当する場合に、シアリル酸類縁体の変換は、にｅａｎ等４′により開示されてい るように、ホウ水素化すトリウムにより還元した後に、シアリル酸に係わる慣用 のチオバルビッール酸分析によって評価した。生成物は、Ｇｒｏｓｓ等４！によ り開示されているように、冷アセトンを用いて抽出した。アセトンを減圧の下に （〜１５°Ｃにおいて）蒸発させた後に、この濃縮溶液を、平衡化したパイオー ゲル（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ）　Ｐ　−２（２，５ｘ９１ｃｍ）に負荷し、４°Ｃにお いて、６０ｍ１／時間の流速で１０ｍＭ水酸化アンモニウムにより溶出した。フ ラクション（１ｍｌ）を、２３７ｎｍにおける吸光によりシチジンに係わり分析 し、第一のピークに相当するフラクションを集め、減圧の下に濃縮し、次いで残 留物を凍結乾燥させて、ＣＭ　Ｐ　−７、−ｄ　−Ｎｅｕ５Ａｃ（２ｄ、３０ｍ ｇ、　〜９４％）を得た。この生成物は、’Ｈ−ｎｍｒにより非常に少量の夾雑 物を示した（表２）。この生成物をシアリルトランスフェラーゼとか若干の未反 応シアリル酸を含有することを示した。 下記の表２は、表１に記載のｊＪｅｕ５Ａｃ類縁体から製造されたＮｅｕ５Ａｃ 類縁体のＣＭＰ誘導体およびこれらの化合物に係わる部分的’Ｈ−ｎｍｒデータ を示すものである。 Ｃ，オリゴ糖グリコシドの合成 例６−７は、オリゴ糖グリコンドの合成を例示するものである。３ｂ−７ａの構 造は、図１５に示されている。 オリゴ糖グリｍｌ　：／　ｌ’　４　ｂ、５ｂ、５ｆ、６ａおよび７ａはそれぞ れ、Ｌｅｍｉｅｕｘ等４２、Ｌｅｍｉｅｕｘ等４４、Ｐａｕｌｓｅｎ等４５．５ ａｂｅｓａｎ等４“、およびＬｅｍｉｅｕＸ等４７の方法によりコソドー先」− および５ｂの合成に係わり開示されている方法に従うか、８−メトキシカルボニ ルオクチルの代わりに、メタノールを使用して、合成した。 オリゴ糖グリコンドにおよび土９ｇは、Ｐａｕｌｓｅｎ等４ｓおよびＡｌａｉｓ 等４＠の方法に従うが、メタノールの代わりに、８−メトキシカルボニルオクタ ツールを使用して、合成した。すへての場合に、オリゴ糖グリコシドは、適当な 溶剤混合物を使用してイアトロビーズにおけるクロマトグラフィににＪすことに よって精製し、採取された生成物をバイオゲルＰ２またはセファデックス（Ｓｅ ｐｈａｄｅｘ）ＬＨ２０におけるクロマトグラフィに付し、水により溶出した。 採取された生成物は、水から真空凍結乾燥させ、この生成物を五酸化リン上でさ らに乾燥させた。 例６ ９−ヒドロキソノニル−２−アセトアミド−２−デオキソ−［β−Ｄ−ガラクト ピラノシル−（１−３）−〇−］−β−Ｄ−グルコ ピラノノド４ａの合成 ＋４°Ｃに冷却した水とメタノールとのＩＯ：１混合物（２０ｍｌ）中ノ二糖化 合物上互（０，１００ｇ、０゜１８９ミリモルノの溶液に、酢酸ナトリウム（０ ，２００ｇ）およびホウ水素化ナトリウム（０，０６０ｇ）を添加した。２４時 間後に、＋４°Ｃに維持されているこの反応混合物に、ホウ水素化ナトリウム（ ０，０２０ｇ）をさらに加えた。同一温度で４８時間の後に、酢酸の添加により 、ｐＨを５−６にした。この溶液を次いて、過剰のメタノールとともに共蒸発さ せた。この残留物を水（１０ｍｌ）に溶解し、次いてＣ＋ｓシリカゲルのカラム に通し、水でさらに洗浄した。メタノールにより溶出した後に、溶剤を減圧の下 に蒸発させた。この残留物を水とメタノールとのＩＯ：ｌ混合物中に溶解し、そ のｐＨをＩＮ水酸化すトリウムの添加により、＋３−１４にした。この混合物を 、ｔｉｃ（６５：３５：５−クロロホルム、メタノールおよび水）が未反応出発 物質４ｂの消失を示すまで、室温で放置した。この混合物を次いで、１・−ヘノ クス５０Ｘ８（Ｈ”形）の添加により中和し、次いてこの樹ｌ旨を濾別した。生 成する溶液をＡＧＩＸ８（ホーメート形）のカラムに通した。この溶出液を凍結 乾燥させ、残留物を水とエタノールとの１：１混合物を用いて、セファデックス 　ＬＨ２０に通した。相当するフラクションを集め、濃縮し、４ａ　（０，０６ ０ｇ、６５％）を得た；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｄ２０）　：　４．　５４５ （ｄ、ＩＨ，Ｊｌ、２　８．ＯＨ２，Ｈ−１）、４．４３０（ｄ、　ＩＨ，＋１ ２．７．５Ｈｚ、　Ｈ−１’　）　。 ２．０２５　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．５４３　（ｍ。 ４Ｈ）、および１．３０４　（ｍ、ｌ０Ｈ）：メチレン；１３Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、 　（Ｄ２０）　：　Ｉ　７５．　３　（Ａｃ）　。 １０４、３６　（Ｃ−１’）、　１０１．７２　（Ｃ−１）。 ６７．７２，６１．８５．６１．６０　（３個のＣＨ２０Ｈ）。 例７ ９−ヒドロキシノニル２−アセトアミド−２−デオキシ−［β−Ｄ−ガラクトピ ラノシル−（＋−４）−Ｏ旦から製造した（６０９６）　；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ 、　（Ｄ２０）　：４．５２０　（ｄ、ＩＨ，Ｊｌ　□７．５Ｈｚ、Ｈ−１）。 ４．４７３　（ｄ、ＩＨ，、Ｌｌ、２．７．６Ｈｚ。 Ｈ−１’　）、２．０３３　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）。 １．５４３　（ｍ、４Ｈ）および１．３０２（ｍ。 １０Ｈ）：メチレン：ロＣ−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｄ２０）　：１７５．２３　（Ａ ｃ）、１０３．７１および１０１．８８（Ｃ−１およびＣ−１’）、６０．９３ ゜６１．８５および６２．７１　（３個のＣＨ２０Ｈ）。 例８ ５−アリルオキシペンチル２−アセトアミド−２−デオキシー［β−Ｄ−ガラク トピラノシル−（１−３）−〇−］−β−Ｄ−グルコピラノシド４ｃの合成この 例および例９の合成経路は、図１６に記載されて乾燥ジメチルホルムアミド中の 水素化ナトリウム（１，２ｇ、８０％油中分散液）およびｌ、５−ベンタンジオ ール（３ｇ、０．０２９モル）の混合物に、アリルブロマイド（２，５ｍｌ、０ ．０２９モル）を滴下して加えた。室温で一夜にわたり攪拌を続けた。ｔｉｃ（ ２：ｌトルエンおよび酢酸エチル）は、依然として若干の未反応ベンタンジオー ルの存在を示した。未反応の水素化ナトリウムを、メタノールの添ＩＪ１１によ り分解した。 この混合物を減圧の下での蒸発により５０ｍ１まで濃縮した。塩化メチレン（１ ５０ｍｌ）により稀釈した後に、この溶剤を水により洗浄しく３回）、硫酸マグ ネシウム上で乾燥させ、次いて減圧の下で蒸発させた。この残留物を、溶出剤と して１−ルエンと酢酸エチルとの２：１混合物を使用するシリカゲルにおけるク ロマトグラフィに付した。相当するフラクションから、化合物２９（０，９３１ ｇ、３０９６）を得た。 ’Ｈ−ｎ、ｍ、、（ＣＤＣ１，）：　５．８３　（ｍ、ＩＨ。 ＣＨ＝）、５．２０　（ｍ、２Ｈ，＝ＣＨ２）　。 ３、　９５　（ｄｃｌ、ＩＨ，Ｊ＝５．　５および１．　ＯＨ２゜アリル）、３ ．６６および３．４６（２つのｔ、それぞれ２Ｈ）　、　Ｊ＝６．５Ｈｚ、　Ｏ ＣＲ２）　、　１．６４（ｍ、４Ｈ）および１．４４　（ｍ、２Ｈ）：　（メチ レン）　；　”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＬ　）　：　ｌ　３４．　７および ２９．２および２２．２（メチレン）。 ８．５−了りルオキシペンチル２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グル コピラノシド３２の合成ジクロロメタン（５ｍｌ）中の３．４．６−１リーＯ− アセチルー２−デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド ３０　（５，０ｇ、１０．０ミリモル）の溶液に、−７０“Ｃで、ジクロロメタ ン（１０ｍｌ）中の、アルコール化合物２９　（１，３３ｍ１．１０ミリモル） 、銀トリフルオロ−メタンスルホネート（２，５７ｇ、１０．０ミリモル）およ びコリジン（１，２３ｍ１．９．０ミリモル）の混合物を滴下して加えた。−７ ０°Ｃて３時間攪拌した後に、ｔｉｃ（２：ｌトルエンおよび酢酸エチル）は、 出発ブロマイドと反応生成物とか同一のＲｆを有することを示した。若干量のト リエチルアミンを添加した後に、この反応混合物をジクロロメタンにより稀釈し 、次いて慣用の方法で仕上げ処理した。シロップ状残留物を、１〜ルエンと酢酸 エチルとの５．１混合物を使用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィにイｊ し、化合物３１　（４，０ｇ、７１％）を　ｅＩ　ｔこ。 ’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣ］　３　）　：　５．　８　０　（ｍ、　２Ｈ。 −ＣＨ＝およびＨ−３）、５．３６　（ｄ、ＩＨ，Ｊｌ、２８、　５Ｈｚ、Ｈｌ ）、５．　１　８　（ｍ、３Ｈ，＝ＣＨｚおよびＨ−４）、２．　１３．　２． ０６．　１．　８７　（３ｓ。 それぞれ３Ｈ，３０Ａｃ）、１．４０　（２Ｈ）および１、Ｉ　５　（ｍ、４Ｈ ）：メチレン。 ０°Ｃに冷却した、乾燥メタノール（３０ｍｌ）中の化合物ｌ±（４，００ｇ、 ７．１ミリモル）の溶液に、メタノール中のすトリウムメトキシド ５００ｍｌ）に滴下して加えた。この混合物を０°Ｃて２時間、ｔｌｃ（１０： Ｉクロロホルムおよびメタノール）か出発物質の消失を示すまで、攪拌した。こ の反応混合物を０°Ｃてドーヘツタス５０（Ｈ＋形、乾燥したもの）により脱イ オン化した。濾過し、溶剤を蒸発させ、得られた残留物を、溶出剤としてクロロ ホルムとメタノールとの１００・５１昆合物を使用するシリカゲルにおけるクロ マトグラ１イにより精製し、化合物３２（２．３６ｇ、７６９６）を得た。　’ Ｈ−ｎ．ｍ．ｒ．　（ＣＤＣ　］　ｚ　）　ニア、７０および７．　８０　（ｍ ，　４８，芳香族）。 ５、８２　（ｍ．ＩＨ，−ＣＨ＝）、５．１７　（ｍ，３Ｈ。 二ＣＨ．およびＨ−１）、１．３８および１．１０（ｍ。 ６Ｈ．　メチレン）　：　”Ｃ　−ｎ．ｍ．ｒ．　（ＣＤＣ　］　３　）　：１ ３４、９および１１６．６（メチレン）、９８．３（Ｃ−１）、５６．６　（Ｃ −２）。 Ｃ．５−アリルオキシペンチル４．６−０−ベンジリデン−２−デオキシ−２− フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド３３の合成 乾燥ジメチルホルムアミＦ中の３２　（１．０ｇ。 ２、３ミリモル）およびα，αージメトキシトルエン（０．６９０ｍｌ、４．６ ミリモル）の溶液に、パラトルエンスルホン酸−水和物（０．０２５ｇ）を添加 した。 ４０°Ｃて２時間攪拌した後に、ｔｌｃ（１０：Ｉクロロホルムおよびメタノー ル）は、反応の完了を示した。少量のトリエチルアミンを添加した後に、溶剤の 大部分を減圧の下で蒸発させ、次いて残留物を、ジクロロメタンにより稀釈し、 次いで慣用の方法で仕上げ処理した。溶剤を蒸発させ、残留物を、トルエンと酢 酸エチルとの９・１混合物を使用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付 し、化合物３３　（１．３６ｇ，９０．１％）を得た。 ［α］　”ｏ　＋２４．１　（ｃＯ．５クロロホルム）；　’Ｈ−ｎ．ｍ．ｒ． 　（ＣＤＣ　Ｉ３）　：　７．　１　５−７．　９　０　（ｍ。 ９Ｈ，芳香族）、５．８３　（ｍ．ＩＨ，−ＣＨ＝）。 ５、５６　（ｓ．ＬＨ．ベンジリデン）、５．１０−５　、３　７　［ｍ，３　 Ｈ，＝　Ｃ　Ｈ２およびＨ−１　（５．２５。 ｄ，Ｊｌ．２　８．５Ｈｚ）］　、１．４　０　（ｍ．２Ｈ）および１．ｌ　７ 　（ｍ，４Ｈ）：メチしン。 Ｄ．５−アリルオキシペンチル４．６−０ーヘンジリデン−２−デオキシ−［２ ，３，４．６−チトラーＯーアセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−３ ）−０−］−］２−フタルイミドーβ−〇−グルコピラノシド３５の合成 トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートの溶液（ジクロロメタン１． ０ｍｌ中の、この試薬０゜０５０　ｍ　ｌから調製した溶液０，１ｍ１）を、− ２０°Ｃに冷却したトルエンとジクロロメタンとのｌ：ｌ混合物（３０ｍｌ）中 の、粉砕した分子ふるい（０’、’５００ｇ）、２．　３．　４．　６−チトラ ーＯ−アセチル−α−Ｄ２．２９ミリモル）の混合物中に、シリンジで添加した 。 この混合物を一２０°Ｃて０．５時間攪拌し、次いで１時間の間に０°Ｃまてゆ っくり高めた。ｔｉｃ（１：１へキサンおよび酢酸エチル）は、反応の完了を示 した。若干量の１−リエチルアミ〉を添加し、次いて塩化メチレンにより稀釈し 、濾過した後に、この溶液を慣用の方法で仕上げ処理した。蒸発させ、残留物を 、トルエンを使用してノリ力ゲルのカラムに通し、次いてヘキナンと酢酸エチル との２・１混合物を用いて、溶出を続けた。相当するフラクションから、三糖化 合物３５　（１，６３ｇ、７４９６）を１忰た。［ｃｒ］　”ｏ　＋４．１　（ ｃ、０．５゜ＣＨＣｌ２）；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣＩａ　）：　７．４ ０−８．　００　（ｍ、９Ｈ，芳香族）、５．８５　（ｍ、ＩＨ。 Ｈ−４′およびＨ＝　１）、５．ｏ　ｏ　（ｄａ、’　ＩＨ。 Ｊｌ　２８・　０・　ｔＪ２’、ｆｆ　１０．ＯＨ２，Ｈ−２’）。 ２、ｌ　１．’！、９０，１．８５．１．５８　（４ｓ、１２Ｈ，４０Ａｃ）、 １．３７および１．　１２　（ｍ、６Ｈ。 メチレン）　：　ｌ３Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＩａ　）　：　Ｉ　３４．　 ６および１１７．０（エチレン）、＋０２．Ｉ。 １０１、　２．　９９．　４　（’＜ンシＩＪデン、Ｃ−１およびＣ−１’）。 Ｅ、５−アリルオギノペンチル２−デオキシ−［２，３゜４．６−チトラー０− アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノツルー（１−３）−０−１−２−フタルイミ （１，６３ｇ、１．９１ミリモル）ノ溶液を、７ｏ″Ｃで１時間加熱した。この 時点て、ｔｌｃ（１００：５クロロホルムおよびメタノール）は、反応の完了を 示した。 残留物を過剰の１ルエンとともに共蒸発させ、残留物を溶出剤としてクロロホル ムとメタノールとの１００：２を昆合物を使用するシリカゲルにおけるクロマト グラフィに（１し、化合物３６（１，１２ｇ、７６％）を得た。 ［α］　”ｏ　＋　９．３　（ｃ、０．５５ＣＨＣＩ＊　）；　’Ｈ−ｎ、ｍ、 ｒ、（ＣＤＣＩ　３　）　：　７．　７０−７．　９５　（ｍ、　４５．３３　 （ｄｄ、ＩＨ，Ｊ、、、、、３．５．Ｊ４．、。 １．０Ｈｚ、Ｈ−４’）、５．１０−５．２７　（ｍ、３Ｈ，ｉ　ｎｃ　１．　 ：ＣＩｒ２およびＨ−２’）、５．０７（ｄ、ＩＨ，Ｊ、□　８．　５Ｈｚ、Ｈ −１）、４．　８４（ｄｄ、ｌ　Ｈ，Ｊｚ　３　１０．　ＯＨｚ、Ｈ−３’　） 。 ２、　１０．　２．　０８．　１．　９０　（３ｓ、９Ｈ，３０Ａｃ）、１．　 ０５−１．　４７　（ｍ、９Ｈ，１ｎｃ１、Ｉ　０Ａｃ）　、”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ 、　（ＣＤＣＩｚ　）　：１００３および９７．５Ｃ−１およびＣ−１’、元素 分析、計算値　Ｃ，５６，８８、Ｈ，６，＋７．　Ｎ。 １．８３　実測値・Ｃ，５５，５９；Ｈ，６，２０；Ｎ。 １、　８４゜ Ｆ、５−アリルオキソペンチル２−アセトアミｌ’　−２−デオキソ−［β−Ｄ −がラクトピラノシル−（１−３）−０−］　−］β−Ｄ−グルコピラノシトの 合成 イソプロパツールと水との５・１混合物（２０ｍｌ）中の三糖化合物３Ｇ　（０ ，７００ｇ、０．９１ミリモル）に、ポウ水素化す１〜リウム（０，６９０ｇ、 １８ミリモル）を添＋ＪＩＩ　した。この混合物を、室温で２４時間攪拌した。 この時点て、ｔｌｃ（６５：３５：５クロロホルム、メタノールおよび水）は、 出発物質の消失を示した。酢酸Ｃ８，２ｍ１）の添加後に、この混合物を１００ °Ｃて３時間ＪＪＩ＋熱した。この混合物を、過剰のトルエンとともに共蒸発さ せ、残留物を乾燥させ。次いてピリジンど無水酢酸との３．２混合物（５ｍｌ） 中で、ジメチルアミノピリジンの存在の下に、２２℃で２４時間、アセチル化さ せた。若“干量のメタノールを加え、この混合物をジクロロメタンにより稀釈し 、次いて慣用の方法で仕」ユげ処理し、？Ｌトられた残留物を、若干量のトルエ ンとともに共蒸発させた。最終のシロップ状生成物を、クロロホルムとメタノー ルとの１００＋２混合物を使用するノリ力ゲルにおけるクロマ１−グラフィに付 し、パラアセチル化されている三糖化合物（０，５００ｇ、７１％）を得た。　 ’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＩ　ｓ　）　：　５．　９０　（ｍ。 ＩＨ，−Ｃ旦＝）　、５．　７７　（ｄ、Ｉ　Ｈ，ＪｘＮＨ７，５Ｈｚ、ＮＨ） 、５．３７　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ、、、・３．５゜Ｊ４　、１．ＯＨ２，Ｈ４’） 、５．１５　５．２３（ｍ、２Ｈ，＝ＣＣ２０，１，９５２，１８（７ｓ。 ２１Ｈ，６０Ａｃ、ＩＮＡｃ）、１．５８　（ｍ、４Ｈ）および１．４１　（ｍ 、２Ｈ）：メチレン。 ナトリウムメトキシドの０．５Ｎ溶液（０，３００ｍ１）を、乾燥メタノール（ ２０ｍｌ）中の上記化合物（０，５００ｇ、０．６２３　ミリモル）の溶液中に 、シリンジにより添加した。室温で一夜にわたり攪拌した後に、この混合物をド ーヘツクス５０（Ｈ’″形、乾燥したちの）により脱イオン化し、次いて減圧の 下に蒸発させた。この残留物をメタノール中に溶解し、溶剤の蒸発によりセライ ト（３ｇ）上に付着させた。このセライトを次いて、イアトロヒーズ（３０ｇ） のカラムの頂上に導入し、生成物でクロロホルム、メタノールおよび水の（０， ２６６ｇ、８０％）を得た；　［α］　＋１０．−０．１６４　（ｃ、ｌ、水） 　；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｄｔ　Ｏ）　二Ｈ１）、４．　４２６　（ｄ、Ｉ Ｈ，Ｊ＋　、２．７．　７Ｈｚ。 Ｈ−１’）、４．　０３１　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｌ、０゜１１．５Ｈｚ、アリル） 、２．０２３　（Ｓ、３Ｈ。 ＮＡｃ）、１．５８　（ｍ、４Ｈ）および１．３８（ｍ。 ２Ｈ）：メチレン；　”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｄｔ　０）　：１７５．２４　（ カルボニル）、１３４．７０および１１９．０５（エチレン）、１０４．３３　 （Ｃ−１’）。 １０１．６８　（Ｃ−１）、５５．４２　（Ｃ−２）。 例９ ５−アリルオキシペンチル２−アセトアミド−２−デオキソ−β−Ｄ−グルコピ ラノシドー褐１−の合成を分離した。この　粗製生成物をバラアセチル化し、得 られた生成物をヘキサンと酢酸エチルとのｌ：ｌ混合物を用いて、シリカゲルに おけるクロマトグラフィに付し、バラアセチル化されている誘導体（０，１８０ ｇ、５５９６）を得た。［αコ２０ｏ　＋　１１．　５　（ｃ、０．　７．　ク ロロポルム）　；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＩ　３　）　：　５．　９０ ７．５Ｈｚ、Ｈ−１）、１．９５．２．０３　（２個。 ２、　０５　（３ｓ、１２Ｈ，３０Ａｃ、１ＮＡｃ）。 １．５８　（ｍ、４Ｈ）および１．４１　（ｍ、２Ｈ）：メチレン１元素分析： 計算値　Ｃ，５５，８゜Ｈ，７，５、Ｎ、２．０５．実測位：Ｃ＋　５５．８２ ；Ｈ，７，５３：Ｎ、２．９８゜ この生成物を、メタノール中で脱Ｏ−アセチル化し、ここにメタノール中のナト リウムメトキシドの０．５Ｎ溶液（０，１００ｍ１）を加えた。室温で一夜の後 に、この混合物をＩＲ−Ｃ５０樹脂（Ｈ＋形、乾燥したもの）により脱イオン化 し、次いて溶剤を蒸発させた。この残留物をクロロホルムとメタノールとの７＝ １混合物を用いてイアトロヒーズに通し、純粋な３７（０，１０３ｇ、８０９６ ）を得た、［α］１０．−０．１７　（ｃ、１．水）　；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、 　（Ｄｔ　０）　：Ｈ−１）、４．０３　（ｄ、２Ｈ，Ｊ６．ＯＨｚ、アリル） 、２．０３３　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．５８　（ｍ。 ４Ｈ）および！、３６　（ｍ、２Ｈ）：メチレン、＋２０−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｉ ）２０）　：　Ｉ　７５．　２　（カルボニル）。 １３４．７および１１９．１（エチレン）、１０１．９（Ｃ−１）、６１．６　 （Ｃ−６）、５６．４　（Ｃ−２）。 ２９．１．２３．０および２２．６（メチレン）、。 Ｄ、オリゴ糖構造へのシアリル酸およびその他の糖の転倒１０ グリコツル１−ランスフェラーゼによるオリゴ糖構造へのソアリル酸石よびその 他の糖の転移 この例は、Ｎｅｕ５Ａｃ、その類縁体（正確には、「シアリル酸」）およびその 他の糖の、グリコジルＩ−ランスフェラーゼによるオリゴ糖グリコシド構造への 酵素による転移を例示するものである。図１７．１８．１９．２０および２１は 、これらの転移を示しており、下線付きのアラビア数字で示されている、製造さ れた化合物の構造をまた示している。例１０ａ−１０ｅにおいて、予備シアリル 化およびフコシル化は、下記のとおりにして行った・ １、予備シアリル化 それらのＣＭ　Ｐ誘導体として活性化されているシアリル酸を、哺乳動物シアリ ルートランスフェラーゼを使用して、βＧａｌ　（１−３）　βＧＩｃＮＡｃ− １βＧ、ａｌ（Ｉ−４）βＧＩｃＮＡｃ−１βＧａ１（１−３）ａＧａ　ｌＮＡ ｃ−１およびβＧａｌ　（１−４）βαＧｌｃ−１末端配列を存する合成オリゴ 糖構造に転移させた（例１０ａ−ｅ）。ラット肝臓からのβＧａ１（１−３／４ ）βＧＩｃＮＡｃ−α（２−３）シアリルトランスフエラーセ（ＥＣ２，４，９ ９，５）およびβＧａｌ　（１−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃ−ａ　（２−６）　シ アリルトランスフェラーセ（ＥＣ２，４，９９，１）を、Ｍａｚｉｄ等の方法４ ９（この刊行物の記載を引用してここに組み入れる）に従い、当技術で公知の方 法により活性化されたセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）に、ハブテンβＧａ １（１−３）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃｏ　（ＣＨ２）ｓ　Ｃ０２Ｈ”（Ｃｈｅｍｂｉ ｏｍｅｄ　Ｌｔｄ、　、　Ｅｄｍｏｎｔｏｎ、　Ｃａｎａｄａ）を共有結合させ ることによって得られるマトリックスにおけるアフィニテイクロマトグラフィに より均質に精製した。βＧａ１（１−３）ａＧａ　ＩＮＡｃ−ａ　（２−３）シ アリルトランスフエラーセ（ＥＣ２，４，９９，４）は、Ｇｅｎｚｙｍｅ、　Ｉ Ｃｏｒｐｏｒａｔ　ｉｏｎ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴから入手した。 予備シアリル化反応のすへてにおいて、受容体オリゴ１１（５−２０ｍｇ）は、 適当するシアリルトランスフェラーセ（１０−！’；ＯｍＵ）およびウシ腸アル カリホスファ　ターゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｍａｎｎｈ ｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）１５のｑ在の下に、ｔＪｎｖｅｒｚａｇｔ等５０の方 法と同様に、３７℃で２４−４８時間、５０ｍＭナトリウム力コジレートｐＨ６ ，５，０，５％トリＩ−ン（Ｔｒｉｔｏｎ）ＣＦ　−５４，１ｍｇ／ｍ　Ｉ　Ｂ ＳＡ　（ｒシアリル転移緩衝液」）中で、選択されたＣＭＰ−シアリル酸（５− ２０ｍｇ）とともにインキュベートした。例えば、ソアリルオリゴ糖７−ｄ−ａ 　Ｎｅｕ５Ａｃ　（２−６）βＧａ　Ｉ　（１−４）４．６ｍｇ）および ＣＭＰ　−７−ｄ　−Ｎｅｕ５Ａｃ　（２ｄ、１５．６ｍｇ）を、βＧａｌ　（ １−４）βＧ　ｌ　ｃＮＡｃ−ａ　（２−６）シアリル１、ランスフェラーゼ（ ５１ｍＵ）およびウシ腸アルカリホスファターゼ（２，４０）の存在の下に、シ アリル転移緩衝液２．５ｍｌ中で３７℃において２８時間、インキュベ−１・す ることにより合成された（例１−５参照）。完了後に、この反応混合物をｌ０ｍ １に稀釈し、次いて製造業者により指示されているように条件調整されている、 ３個のセブーバックＣ１１カートリッジに通した。これらのカートリッジはそれ ぞれ、水（４×５ｍ１）により、次いでメタノール（３ｘ５ｍｌ）により洗浄し た。このメタノール溶出液を、減圧の下に蒸発乾燥させ、残留物をクロロホルム 、メタノールおよび水の６５：３５：３ａ合物（０，５ｍ１−溶剤１）中に溶解 し、次いで同一溶剤により平衡化したイアトロビーズ（５００ｍｇ）の小型カラ ムに通した。このカラムを、溶剤ｉ、次いでクロロ、ホルム、メタノールおよび 水の６５：３５：５ａ合物（溶剤ｒ　Ｉ）　、次いでクロロホルム、メタノール および水の（ｉ５：３５：８ａ合物（溶剤ｌ１１）により順次溶出した。シリカ ゲルプレートにおけるｔｌｃ（溶出剤として、クロロホルム、メタノールおよび ０．２９６塩化カルシウム溶液の　６５：３５：８ａ合物を使用）により同定し て、生成物を介在する相当するフラクション（３０滴）を集め、次いて減圧の下 に濃縮乾燥させた。この残留物をＡＧ５０Ｗ−Ｘ８　（Ｎａ”形）の小型カラム に通し、溶出液を凍結乾燥させ、採取された生成物を’Ｈ−ｎｍｒにより確認し た。生成物はいずれの場合にも、良好な純度を示した。 ｉｉ予予備フコシル クイプ■およびタイプＩＩオリゴ糖のシアリル化類縁体は人乳βＧＩｃＮＡｃα （１−３／４）フコシルトランスフェラーゼによりさらにフコシル化することが できる。この酵素は、Ｐａｌｃｉｃ等５１により開示されたＧＤＰ−ヘキサノー ルアミン　セファロースにおけるアフィニティクロマトグラフィを用いる方法に 従い、人乳から精製した。フコシル化オリゴ糖の合成および精製は、Ｐａ１ｃｉ ｃ等の方法ｓ＋の変法により行った。例えば、フコシル化構造体９−Ｎｚ　−α Ｎｅｕ５Ａｃ　（２−３）βＧａｌ　（１−３）−［（Ｚ−Ｌ−Ｆｕｃ　（１− ４）−βＧ１ｃＮＡｃ−０−（ＣＨ２）、ＣＨ，ＯＨＩ　７ｂは、ＧＤＰ−フコ ース（２，５ｍｇ）および９−Ｎ、　−αＮｅｕ５Ａｃ（２−３）βＧａｌ　（ １−３）βＧＩｃＮＡｃ−０−（ＣＨｚ　）ｓ　ＣＨａ　ＯＨ８ｂ　（１，７ｍ ｇ）を、１００ｍＭすトリウムカコジレート（ｐＨ６，５）、１０ｍＭ塩化マグ ネシウム、１．６ｍＭＡＴＰ、１．６ｍＭナトリウムアジドの１．３ｍｌ中で、 アフィニティ精製したβＧＩＣＮＡＣ（２（＋−３／４）フコシルトランスフェ ラーゼとともにインキュベートすることによって合成された。３７°Ｃて２７時 間の後に、この反応混合物にＧＤＰ−フコース２．５ｍｇおよびフコシルトラン スフェラーゼ２．３ｍｔＪを加え、３７゛Ｃてさらに２１時間維持した。この生 成物を、シアリル化に係わり上記したとおりにして単離した。この粗製生成物の ｔ　Ｉ　ｃ’　（上記のとおり）は、このフコシル化がほとんど完了しているこ とを示した。精製およびＡＧ“５０Ｗｘ８（Ｎａ”形）におけるクロマトグラフ ィの後に、この生成物１７ｂ（１，Ｏｍｇ）の’Ｈ−ｎｍｒは、非常□に良好な 純度（表５）を示した。フコシルトランスフェラーゼが高度に精製されていない 若干の場合には、結合手のメチルエステルの部分的加水分解が生した。 例１０ａ−ｅは以下のとおりにして行った：　。 例１０ａ この例は、４ａおよび４ｂのようなβＧａｌ゛（ｌ−３）βＧｌｃＮＡｃ−（ル イス０またはタイプＩ）末端構造を存する受容体の末端　βＧａｌの３−ＯＨに 、ラソ）−肝臓からのβＧａ１（１−３／４）βＧＩｃＮＡｃα（２−３）シア リルトランスフェラーゼのようなシアリルトランスフェラーゼを用いて、上記の 開示されている実験方法に従いＩａ−Ｈのような修飾シアリル酸を転移させるこ とに関するものである。上記のとおりにして精製された、各反応生成物の’Ｈ− ｎｍｒデータを示す（表３および４）。 例１０ｂ この例は、５ａ、ｂ、ｄｇのようなβＧａ１（１−４）βＧ　ｌ　ｃＮＡｃ−（ Ｌａ　ｃＮＡｃまたはタイプ■１）末端構造を有する受容体の末端βＧａｌの３ −ＯＨに、ＩＯａで使用したもののようなシアリルトランスフに、受容体を溶解 させるために、ジメチルスルホキシド（５９６容量）を添加することがてきる。 上記のとおりにして精製された、各反応生成物の’Ｈ−ｎｍｒデータを示す（表 ６および８）。各反応混合物は上記の方法で仕上げ処理した。 βＧａｌ　（１−４）βＧｌｃ　（ラクトース）末ＩＩＭｌｉｌｌ造を有する受 容体の末端βＧａｌの３−ＯＨ構造基に１例１Ｏａで使用したもののようなシア リルトランスフェラーゼを用いて、Ｉｃのような修飾シアリル酸を転移させるこ とに関するしのである。′上記のとおりにして精製された、各反応生成物の’Ｈ −ｎｍｒデータを示す（表６）。 例１０ｄ この例は、５ｂ、ｄ−ｇのようなβＧａＬ（１−４）βＧ１ｃＮＡｃ−（Ｌａｃ ＮＡｃまたはタイプ夏Ｉ）末端単位を有する受容体の末端βＧａｌの６−ＯＨに 、公知のβＧａｌ　（１−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃａ　（２−６）シアリル］・ ランスフェラーゼのようなシアリルトランスフェラーゼを用いて、ｌ　ｂ−ｈの ような修飾シアリル酸を転移させることに関するものである。上記のとおりにし て精製された、各反１ｉ；土成物の’Ｈ−ｎｍｒデータを示す（表７および８） 。 例１０ｅ 、−の例は、７ａのようなβＧａ１（１−３）αＧａ１ＮＡｅ　（”］゛）木端 １１位を有する受容体のｋＱβＧａｌの３−〇Ｈに、βＧａ’！（１−３）ａＧ ａ　ＩＮＡｃｃｒ　（２−３）シアリルトランスフェラーゼのようなシアリルト ランスフェラーゼを用いて、：Ｃのよ−）な修飾〉アリル酸を、公知の実験方法 に従い、転移させる二とに関するものである。、Ｉ：、記のとおりにしてｔｉｓ 製された、各反応生成物の’Ｈ−ｎｍｒデータを示す（表９）。 Ｅ、完全オリゴ糖グリコシド構造の化学修飾によるオリゴ糖グリコシド類縁体の 製造 例ｌｌ−１３は、完全オリゴ糖グリコシド構造（酵素を用いて、または化学的手 段により製造）の化学修飾によるオリゴ糖グリコシド類縁体の製造を例示するも のである。図２２−２４は、これらの類縁体の製造に含まれる反応経路を示して おり、また下線付きアラビア数字により示されている、製造された類縁体の構造 を示すもの９−ヒドロキシノニル（５−アセ１−アミド−３，５−シデオキシー β−Ｌ−アラビノ−２−ヘブッロビラノンロン酸）−、、（２−３）−〇−β− Ｄ−ガラクトピラノツルー（１−３）−０−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１− ４１）−０−Ｊ−２−アセトアミド−２−デオ酸すトリウム溶液およびＩＭ過ヨ ウ化すトリウム溶液１７ｍｌ中て、→−４°Ｃて２４時間攪拌した。過剰の過ヨ ウ化ナトリウムを次いて、若干量のエチレングリコールの添加により分解した。 ホウ水素化すトリウム（２０ｍｇ）を次いて加え、攪拌を４°Ｃて２４時間続け た。この反応混合物のｐＨを、酢酸の添加により６にし、次いて溶媒をメタノー ルとともに共蒸発させた。この残留物を、水（１ｍｌ）中に溶解し、次いでセブ ーパックヵーｌ・リッジに通し、水で、次いてメタノールで、さらに洗浄した。 このメタノール溶出液を蒸発させ、この残留物を溶出剤としてクロロホルム、メ タノールおよび水の６５：３５：５混合物を使用する、イアトロビーズ（２００ ｍｇ）におけるクロマトグラフィに付した。相当するフラクションを集め、次い て蒸発させ、生成物８ｍ（１ｍｇ）を得た；’Ｈ−ｎｍｒ：上記表３参照。 三糖化合物８ａを、徊１０に記載の方法に従い、酵素を用いてフコシル化し、生 成物は同一の方法により精製参照。 ９−ヒドロキシノニル（５，９−ジアセトアミド−３゜５．９−１−リープオキ シ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）−（２−３ ）−〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１−３）−０−［α−Ｌ−フコピラノ シル−（１−４）−０−］　−］２−アセトアミドー２−デオキシβ−Ｄ−グル コビラの溶液を、リンドラ−（Ｌｉｎｄｌａｒ）の触媒（１，０ｍｇ。 Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗ ｌ）の存在の下に、２２°Ｃにおいて１５分間水素添加した。ｔｉｃ（６５：３ ５：８−クロロホルム、メタノールおよび０２９６　塩化カルシウム）は、完全 転移を示した。こ洗浄した。この濾液を濃縮し、ミリボールフィルターに通して 濾過し、この溶出液を凍結乾燥させ、三糖化合物−望」−を？１ｔた：’Ｈ−ｎ ｍｒ：上記表３参照。 ０．００２Ｎ水酸化ナトリウムとメタノールとのｌ：ｌ溶液（０，３００ｍ１） 中の８ｊ（約１ｍｇ）の溶液に、０℃でメタノール（１０μｍ）中の無水酢酸（ 約０．２ｒｒ＋ｇ）をＩＪｌｌえた。ｔｌｃ（上記　溶剤）は、完全反応を示し た。次いて溶剤を蒸発させた。この残留物を水（２ｍ　ｌ　）に溶解し、セブー パノク力−トリッジに通したつこのカートリノンを、水で洗浄し、次いで生成物 をメタノールで溶出し、三糖化合物８ｋ（約１ｍｇ）を得た：’Ｈ−ｎｍｒ：Ｊ 二記表３参照。 三糖化合物８ｋを、例１０に記載の方法に従い、酵素を用いてフコシル化し、生 成物を同一方法により精製しく約０．５ｍｇ）か？１トられたジＨ−ｎｍｒ：上 記表５８−Ｎ−メチルアミドオクチル（５−アセトアミド−３，５−ノデオキシ ーα−Ｄ−グリセロ−ガラクト−２−ノヌロピラノンロン酸Ｎ−メチルアミド） −（２−３）−０−β−Ｄ−ガラクトピラノツルー（＋−５）−０−［α−Ｌ− フコピラノシル−（１−４）−０−］−］２−アセトアミドー２−デオキシβ− Ｄ−ス５０Ｘ８（Ｎａ”形）樹脂に導入し、水で溶出した。 相当するフラクションを凍結乾燥させ、引き続いて五酸化リン上てさらに乾燥さ せた。この残留物をジメチルスルホキシドに溶解し、ここにヨウ化メチル（０， ０５０ｍ１）を加えた。暗所で２０時間攪拌した後に、この溶液を減圧の下に蒸 発させ、水（Ｉｌｍｌ）により稀釈し、次いてセブーバックＣ，＠カートリッジ に導入した。水（１０ｍｌ）により洗浄してから、この生成物をメタノールによ り溶出した。相当するフラクションを蒸発させ、残された残留物をクロロホルム 、メタノールおよび水の６５：３５：５ｉ昆合物を使用する、イアトロビーズ（ ０，５ｇ）におけるクロマトグラフィに付し、化合物１８ａのメチルエステル（ ００２５ｇ）を得た：’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、：　５．　０９９　（ｄ、　ＩＨ，Ｊ ｌ、２　３．　７５Ｈｚ、Ｈ−１αＦＵＣ）、４．５１７　（ｄ、２Ｈ。 Ｊｌ、２７．　５Ｈ２，Ｈ，ｌβＧ　ａ、ＩおよびβＧ１ｃＮＡｃ）、３．８６ ６および３．　６８３　（２ｓ。 ＣＯ２ＣＨａ　）、２．７８１　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ３．、、ａ、。 １２．５Ｈｚ、Ｊ２．、．４４．５Ｈ２，Ｈ−３ｅｑＮｅｕ５Ａｃ）、”２．． ０３２および２．　０１８　（２ｓ。 ６Ｈ，２ＮＡｃ）、１．　９１３　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ！、、、４１２．　５Ｈｚ 、Ｈ−３ａｘ　Ｎｅｕ５Ａｃ）。 １、　１６０　（ｄ、３Ｈ，Ｊｓ、＊　６．　５Ｈｚ。 Ｈ−６αＦｕｃ）。 この生成物を、Ｎ−メチルアミンの４０％溶液（１ｍり中で５０°Ｃにおいて３ ．５時間加熱した。減圧の下に蒸発させた後に、この残留物を水（１ｍｌ）に溶 解し、次いでセブーパックカートリッジに通し、水でさらに洗浄した。この生成 物をメタノールにより溶出し、溶剤を蒸発させ、次いて残留物を凍結乾燥させ、 生成物１８１（０，００２５ｇ）を得た：’Ｈ−ｎｍｒ：（表５）。 Ｆ、ジーＮ−アセチルラクトサミニル構造を末端に有するモノフコシル化オリゴ 糖の合成 以下の例１４−１９は、血液型抗原決定基の類縁体がまた、免疫原性および寛容 原性を有することを例示する目的で示すものである。詳細に言えば、使用する血 液型抗原決定基の類縁体はＣＤ６５である。このＣＤ６５はシアリル　ルイスＸ の還元性糖に結合したβＧａ１（１−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃ−ＯＲ二糖グリコ シドを存するシアリル　ルイスＸ誘導体である。ｒＭｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔ ｈｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　λＩｏｎｏｆｕｃｏｓｙ［ａｔｅｄ　Ｏｌｉｇ ｏｓａｃｃｈａｒｉｅｄｅｓＴｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ　ｉｎ　Ｄｉ−Ｎ−ａｃｅ ｔｉｌｌａｃｔｏｓａｍｉｎｙｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　Ｊと題する、１９９Ｉ 年１０月２日出願のり。 Ｓ、　５ｅｒｉａｌＮｏ、　０７／７７１２５９をさらに参照でき、これらの記 載をここに引用して組み入れる。上記したように、これらの化合物は、シアリル 　ルイスＸが、本明細書で定義されている血液型抗原決定基であることがら、血 液型抗原決定基の類縁体である。　′ 以下の例１４−１９において、予備シアリル化は下記のとおりにして行った： クツ１−肝臓βＧａ１（１−３／４）βＧ］ｃＮＡｃα（２−３）シアリルトラ ンスフェラーゼは、当技術で公知の方法によって、活性化セファロースにハブテ ンβＧａ　Ｉ　（１−３）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃｏ　（ＣＨ２）−ＣＯ２Ｈ”（Ｃ ｈｅｍｂｉｏｍｅｄ　Ｌｔｄ、、Ｅｄｍｏｎｔｏｎ、Ｃａｎａｄａ）を共有結合 させることにより得られたマトリックスにおけるアフィニティクロマトグラフィ により精製した。上記アフィニティカラムの通過物に含まれるβＧａｌ　Ｎ−４ ）βＧｌｃＮＡｃα（２−６）シアリルトランスフェラーゼは、開示されている とおりに５２、ＣＤＰ−ヘキサノールアミンセファロースにおけるクロマトグラ フィにさらに付した。 酵素を用いるシアリル化は、トリトンＣＦ−５４（０，５９６）　、ＢＳＡ　（ Ｉｍｇ／ｍｌ）およびウソ腸アルカリホスファターゼを介在するすトリウムヵコ ジレート緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６，５）を使用して、プラスティック管て３７ °Ｃて行った５０゜この最終反応混合物をＨ２Ｃて稀釈し、次いて開示されてい るように’ｓｃ＋ｓセブーパックカートリッジに導入した。Ｈ２Ｃて洗浄した後 に、生成物本ＣＨ２０Ｈにより溶出し、次いて溶剤を蒸発させた。この残留物を ＣＨＣｌ　、　、ＣＨ２０ＨおよびＨ２Ｃの６５：３５：５混合物中に溶解し、 イアトロビーズ（０，２００−０，５００ｇ）の小型カラムに導入した。同一溶 剤混合物により洗浄してから、この生成物を同一溶剤のｆ３５：３５：８混合物 および（または）６５・４０：ＩＯ１昆合物により溶出した。相当するフラクシ ョンを集め（ｔｉｃ）、溶剤を減圧の下に蒸発させ、【（２０中のこの残留物を ＡＣ３０Ｗｘ８　（Ｎａ”形）の小型カラムに通し、生成物を減圧の下に凍結乾 燥させて採取した。ずへての場合に、８−メトギシカルポニルオクチルグリコシ トか、相当する８−カルボニルオクチルグリコシドから分離された。 以下の例＋４−１９において、予備フコシル化は下記のとおりに行った一βＧａ 　ＩＮＡｃ（Ｚ　（１−３／４）フコツルトランスフェラーゼは、開示されてい るように５′、ヒト乳から精製した。この酵素反応は、ナトリウム力コジレー１ −緩衝液（Ｉ　ＯＯｍｔ’ｖｌ、ｐＨ６，５）、ＭｎＣＬ　（Ｉ　ＯｍＭ）　、 ＡＴＰ　（１，６ｍＭ）、ＮａＮｘ　（１，６ｍ〜１）を使用して、プラスティ ック管で、３７°Ｃにおいて行った。この反応生成物は、上記のとおりに単離し 、精製した。 以下で使用するものとして、ＧＤＰ−フコースは、ｒｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｙｎ ｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ＧＤＰ−ｆｕｃｏｓｅ」　と題する１９９２年３Ｊ］９日 出願のＵ、　Ｓ、　５ｅｒｉａｌ　Ｎｏ、０７／　８４８２２３に記載の方法に よって好ましく製造される。この特許出願を引用してここに組み入れる。 詳細に言えは、ＧＤＰ−フコースは下記のとおりにして製造した。 Ａ、ヒス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）水素リン酸エステルの製造 テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム水酸化物（４０％水性重量／重量、約１５０ｇ ）を、ｐＨが７に達するまで、水（１５０ｍｌ）中のリン酸（８５％水性重量／ 重量、１８ｇ、０．１５５ミリモル）の溶液に滴下して添加した。次いて水を減 圧の下に蒸発させ、得られたシロップ状物を乾燥アセトニトリル（２Ｘ４００ｍ ｌ）とともに、次いて乾燥ｌ・ルエン（２Ｘ４００ｍｌ）とともに共蒸発させた 。精製する白色固形物（７５ｇ）を、減圧の下に乾燥させ、使用時まで減圧の下 に五酸化リン上で保存した。 Ｂ、β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェートの製造乾燥アセトニトリル（３ ００ｍｌ）中のビス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）水素リン酸エステル（ ５８ｇ、１２７．８ミリモル）の溶液を、窒素雰囲気の下に分子ふるい（４オン ゲス１−ローム、２０ｇ）を存在させて室温で約１時間攪拌した。この溶液をｏ ′Ｃに冷却し、ここに約０．５時間以内に、乾燥トルエン（１００ｍｌ）中のト ＩＪ　−０−アセチルフコシル−１−ブロマイド（これは、Ｎｕｎｅｚ等の方法 ６６て、Ｌ−フコーステトラアセテート３１ｇ、９３ミリモルから新しく製造し た）のｆｄ液を滴下して添加した。０“Ｃてさらに１時間後に、この混合物を室 温にし、次いで３時間攪拌した。ｔｉｃ（１：　Ｉ　）ルエン：酢酸エチル）は 、ベースライン上に主要スポットおよび数個の迅速に移動する　小さいスポット を示した。 この混合物をセライトのバット（これはアセトニトリルによりさらに洗浄する） に通し、次いで溶剤を減圧の下に蒸発させ、赤色シロップ状物を得た。この生成 物を水（４００ｍｌ）中に溶解し、次いて酢酸エチル（２５０ｍｌ、２回）によ り溶出した。この水性相を次いで、減圧の下に蒸発さ、せ、得られた帯黄色シロ ップ状物に水酸化アンモニウム（２５％水性、２００ｍ１）を加えた。 この混合物を室温で３時間　攪拌した。この時点でｔｉｃ　（６５：３５：８ク ロロホルム：メタノール：水）はヘースラインスポットを示した。溶剤を減圧の 下に蒸発させ、得られた帯黄色シロップ状物を水（４００ｍｌ）により稀釈した 。この溶液のｐＨを検査し、必要に応して、少量の塩酸の添加により７にした。 この溶液を、イオン交換樹脂ドーベツクス２Ｘ８　［２００−４００メッシュ、 ５Ｘ４５ｃｍ、樹脂をメタノール（８００ｍｌ）、水（１２００ｍｌ）、重炭酸 アンモニウム（１Ｍ、１６００ｍ１）、次いで水（１２００ｍｌ）により順次洗 浄して調製された重炭酸塩形］のカラムにゆっくりと吸着させた。次いてこのカ ラムに、水（１０００ｍｌ）を、次いて重炭酸アンモニウムの溶液（０，５Ｍ、 ２．３ｍｌ／分、−夜）を通した。この溶出液を分別して（１５ｍｌ）採取し、 ｔｉｃブレー１・上にスポットを生成させてから、炭化（ｃｈａｒｒｉｎｇ）に より検出した。フラクション２０−５７を集め、減圧の下に蒸発させ、得られた ０色固形物を水（３Ｘ３００ｍｌ）とともにさらに共蒸発させ、次いて最後の５ ０ｍ１を凍結乾燥させ、この残留物を減圧ポンプを用いて、乾燥させ、’Ｈ−ｎ ｍｒスペクトル分析てδ＝１．９４０の部位の一重項により同定される竹子の酢 酸アンモニウムを含有する、βアノマーとαアノマーとの＋　２　：　’１混合 物として、β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェート（９，５ｇ１４０９６） を得た。この生成物を、ドーヘックス５×８樹脂（＋００−２００メツシユ、ト リエチルアンモニウム形）のカラムに通し、次いて水で溶出し、この溶出液を凍 結乾燥させた１糸に、β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェ−１・のビス−ト リエチルアンモニウム塩を粘着性のガム状物として得た。　’Ｈ＝ｎ、ｍ、ｒ、 δ：４．．８４０（ｄｄ、Ｊ、□−Ｊ、、、＝７．５Ｈｚ、Ｈ−１）。 ３、　８　２　（ｑ、　ＩＨ、Ｊｓ、ｓ　６．　５Ｈｚ、　Ｈ５）　。 ３．７５０　（ｄｄ、ＩＨ，、Ｊ、、４３．５．Ｊ４．６１．０Ｈｚ、Ｈ−，４ ）、３．６７９　（ｄｄ、ｌＨ，Ｊ２．。 １０．０Ｈｚ、Ｈ−３）、３．５２０　（ｄｄ、ＪＨ，Ｈ−２）、１．９４０　 （ｓ、アセテート）、１．２６　（ｄ。 １．２８０および１．２　Ｇ　Ｏ（ＮＣＨ２ＣＨｚおよびＨ−６）におけるシグ ナルの完全性は、この生成物が過度の乾燥によって若干のトリエチルアミンを失 っていることがあるしスートリエチルーアンモニウム塩であることを示している 。”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、δ：　９８．　３　（ｄ、ＪＣ，ＩＦ５．４Ｈｚ、Ｃ−１ ）、７２．８　（ｄ、ＪＣ２，７，５β−Ｌ−フコピラノンルー１−ホスフェ− １・は、２２°Ｃにおいて水中で長期間保存すると（ｌ土日）、ゆっくり分解す るようにみえる。従って、この物質は２２°Ｃまたはそれ以上に高い温度におい て、水性溶液中では、放置、取扱い、または保存すべきてはない。本例の場合に 、この物質は一１８°Ｃて保存し、後続の工程て使用する前に、五酸化リン状で 乾燥させた。 Ｃ，５’−（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフエ−１・の製造 グアノノン５゛−（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフェートは、以下に示 す認められている２種の異なる方法を使用して、β−Ｌ−７コピラノシルー１− ホスフェートから製造した： 方法−１ β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェ−１・とグアノフン５′−モノホスホ −Ｎ．Ｎ−−シーソクロへキシル−カルボキシアミジン塩、これはＳｉｇｍａ， 　Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，から人手できる、“ＧＭＰ−モルホリ ゾート”）とを、Ｎｕｎｅｚにより最初に開示された方法６５の最近の変法６４ ６６に従い反応させた。すなわち、トリーｎ−オクチルアミン（０．８００ｇ１ 　これは、Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｉｌｗａｕ ｋｅｅ。 Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎから人手てきる）を、窒素雰囲気の下に、乾燥ピリジン（Ｉ Ｏｍｌ）中のβーＬーフコピラノシルー■ーホスフェ−１〜（トリエチルアンモ ニウム塩、１．００ｇ、約２．２０ミリモル）の混合物に加え、溶剤を減圧の下 に分離した。フラスコ中には乾燥した空気のみが入るように注意しながら、この 方法を３回反復した。 Ｇ　Ｍ　Ｐ−モルホリゾート（２．４ｇ，約３．３０ミリモル）を乾燥ジメチル ホルムアミドとピリジンとのｌ：１混合物（ＩＯｍｌ）に溶解した。この溶剤を 減圧の下に蒸発させ、この処理を上記のとおりに３回反復した。この残留物を同 一溶剤混合物（２０ｍｌ）に溶解し、この溶液を粉砕した分子ふるい（２ｇ、４ オングストローム）とともに、反応フラスコにゆっくり加えた。この混合物を、 窒素雰囲気の下に室温で攪拌した。ｔｉｃ（３：５：２　２５９６水性水酸化ア ンモニウム、イソプロパツールおよび水）は、出発ＧＭＰーモルホリゾート（Ｒ ｆ〜０．８、Ｕ，Ｖ．）　、グアノシン５′−（β−Ｉ−フコピラノシル−）− ジホスフェート（Ｒｆ〜０、５、Ｕ．Ｖ，および炭化）に相当するスポット、引 き続き出発フコース−１−ホスフェート（Ｒｆ〜０．４４、炭化）のティリング スポットを示した。追加のＵ。 ■、活性の小さいスポットもまた存在した。室温で４日間攪拌した後に、得られ た帯黄色混合物を減圧ポンプを用いてさらに一夜乾燥させ、濃厚な残留物（２， ４３ｇ）を得た。このフラスコに、水（ｌｏｍｌ）を加え、得られた黄色の濁っ た溶液をＡＣ３０Ｗ−Ｘ　ｌ　２（Ｂｉｏｒａｄから）樹脂（１００−２００メ ツツユ、２５Ｘ１．５ｃｍ５Ｎａ’形）のカラムの頂」二部に導入した。 生成物は、水で溶出し、次いでこの水は除去した。 ｔｌｃｌリプレート上ポット生成させた後に、Ｕ、Ｖ。 および炭化の両方で活性なフラクションを採取し、この溶液を減圧の下に一夜、 凍結乾燥させ、粗製生成物（１，９６ｇ）をｊ１トた。 この残留物を水（全部で１０ｍ１）に溶解し、次いで水、メタノールおよび水（ それぞれ２５０ｍ１）により洗浄することによって条件　調整されている疎水性 ｃｐｓシリカゲル（Ｗａｔｅｒｓ、２．５Ｘ３０ｃｍ）のカラムにゆっくり吸着 させ７°−０次いてこのカラムに水を通しく０．４ｍｌ／分）、溶出液を分留し く０．８ｍ１）、それぞれｔｌｃ（３：５：２　２５％水性水酸化アンモニウム 、イソプロパツールおよび水）に　より検査した。 β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェ−１−（Ｒｆ〜０．５４、炭化）はワラ クシ９ン２９−４５に溶出された。強力なＵ、Ｖ、活性スポラ１−（Ｒｆ〜０． ５１）を示す生成物は主として、フラクション４６−６５に溶出された。さらに 大きいＲｆまたはさらに小さいＲｆの、その池の微少Ｕ、Ｖ、活性ス活性スーツ 見出だされた。グアノシン５″−（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフェー ト（Ｒｆ〜０．６２）を含有するフラクション５９−８６はまた、狭いＵ、Ｖ、 活性スポット（Ｒｆ〜０．５７）を示した。フラクション５９−８６を集め、− 夜凍結乾燥させ、グアノシン５′−（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフェ ー！−に富む生成物０．３５３ｇを得た。’Ｈ−ｎｍｒは、この生成物が、δ＝ ４．１２およびδ＝５．０５にシグナルを示す、少量の夾雑物により汚染されて いることを示した。 フラクション２９−４５および４７−５７は別々に集め、凍結乾燥させて、β− Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェートを採取した（それぞれ０．２６４ｇおよ び０．２２３ｇ、２番目のフラクションは若干の夾雑物を含有していた）。場合 により、相当するフラクションを集めることによって、若干量のグアノシン５′ −（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフェートか良好な純度で（’Ｈ−ｎｍ ｒ）得られる。一般に、グアノシン５′−（β−１−フコピラノシル−）−ジホ スフェートに富む生成物はいづれも、少量の水に溶解し、大量のメタノール、次 いて水による洗浄により再生させた、同一カラムに通した。純粋なグアノシン５ ′−（β−Ｉ−フコピラノシル−）−ジホスフェートを含有するフラクション（ ｔｉｅ）を集め、減圧で凍結乾燥させて、白色の綿毛状生成物（１８７ｇ、１６ ９６）を得た。’Ｈ−ｎｍｒは、公知のデータと一致した。 方法−２ β−Ｌ−フコピラノンルー１−ホスフェ−Ｉ・とグアノノン５′−モノホスホモ ルホリゾート（４−モルホリン−Ｎ、Ｎ−一ソーソクロへキンルーカルボキシア ミジン塩、”　Ｇ　Ｍ　Ｐ−モルホリゾート”）とを、最初に開示された方法＠ ５に従い乾燥ピリジン中で反応させた。すなわち、β−Ｌ−フコピラノツルー１ −ホスフェート（トリエチルアンモニウム塩、０．５２８ｇ、約１．１８ミリモ ル）を乾燥ピリジン（２０ｍｌ）中に溶解し、次いて溶剤を減圧の下に分離した 。フラスコ中には乾燥した空気のみか入るように注意しなから、この方法を３回 反復した。この反応フラスコに、ＧＭＰ−モルホリゾート（１２ｇ、１．６５　 ミリモル）およびピリジン（２０ｍｌ）をＩＪＩ＋え、次いて溶剤を減圧の下に 蒸発させ、この処理を上記のとおりに３回反復した。最終残留物にピリノン（２ ０ｍｌ）を加え、次いて不均一のｌ見合物を、室温で窒素雰囲気の下に３−４０ 間攪拌した。不溶性生成物か生成された。この生成物は、場合により音波により 分解させねばならない。 この反］、Ｌ：はｔｉｃにより追跡し、方法−１に記載のとおりに仕上げ処理し 、ＧＤＰ−フコース（１２０ｍ　ｇ、１６９６’）を得た。 例１４ ８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシーα −Ｄ−グリセロ−Ｄ−がラクト−２−ノヌロピラノシロン酸）−（２−６）−０ −β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１−４）−０−２−アセトアミド−２−デオ キシ−グルコピラノシルー（１−３）−０−β−Ｄ−ガラク１ヘピラノシルー（ １−４）−０−２−アセトアミド−２−デオキシ−グルコピラノシト（６２ａ） の製造 βＧａｌ　（］−４）βＧＩｃＮＡｃ　（１−３）βＧａｌ　（１−４）βＧ　 Ｉ　ｃＮＡ　ｃ−ＯＲ（化合物６１見、６．５ｍｇ）　、ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃ （１７ｍｇ）、βＧａｌ　（１−４）βＧｌ　ｃＮＡｃａ　（２−６）シアリル トランスフェラーセ（５０ｍＵ）およびアルカリホスファターゼ（＋５Ｕ）を、 上記溶媒２．５ｍｌ中て、４８時間インキュへ−１−した。単離し、精製して、 ６２ａ（３，０ｍｇ）を得た。 例１５ ８−メＩ・キソカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジデオギンー α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロビラノシロン酸）−（２−６）− ０−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１−４）−０−２−アセトアミド−２−デ オキシ−グルコピラノシル−（＋−５）−０−β−Ｄ−ガラクトピラノツルー（ ｌ−４）−０−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１−３）０　］２−アセトアミド − ラノシド（６３ａ）およびその８−カルボキシオクチルグリコシド（６３ｂ）の 製造 化合物６２ａ　（３，０ｍｇ）　、ＧＤＰ−フコース（５，０ｍｇ）　、βＧｌ 　ｃＮＡｃａ（１−３／４）’：）コシルトランスフェラーゼ（ＩＯｍＵ）を、 緩衝液（０，５ｍｇ）　を　？忰　Ｉこ。 例１６ ８−メトキシカルボニルオクチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−４）　− 〇−２−アセトアミドー２−デオキソ−β−Ｄ−グルコビラノンルー（１−３） −〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−４）−０−［α−Ｌ−フコピラノシ ル−（１−３）−０−１２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラ ノシド（６４ａ）およびその８−カルボキシオクチルグリコシド（６４ｂ）の製 造 化合物６３ａおよび６３ｂ　（１，７ｍｇ）を、アガロース」二に不動化されて いるクロストリジウム　ペルフリンゲンス（Ｃｌｏｓｊｒｉｄｉｕｍ　Ｐｅｒｆ ｒｉｎｇｅｎｓ　）ノイラミニダーゼ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍ ｐａｎｙ、　を几ｏｕｉｓ、Ｍｏ、　ＩＵ）とともに、ナトリウムカコンレート 緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ５，２，２ｍ１）中で、３７°Ｃにおいてインキュベー トした。２４時間後に、この混合物を水（１０ｍｌ）により稀釈し、次いてアミ コン（Ａｍｉｃｏｎ）　Ｐ　Ｍ　−１０膜に通して濾過した。この通過液および 洗浄液を凍結乾燥させ、残留物を水（３ｍｌ）に溶解し、２木のＣ１１カートリ ッジに通した。各カートリッジを水（１０ｍｌ）により洗浄し、次いてメツノー ル（２０ｍ　ｌ　）により溶出した。 溶剤を蒸発させてから、この残留物を上記のとおりに、イアトロビーズ（２１０ ｍｇ）におけるクロマトグラフィにけし、６４ａ　（０，８ｍｇ）および６４ｂ （０，７ｍｇ）を得た。６４ｂを乾燥メタノールに溶解し、次いでｔｌｃか６４ ａへの完全な変換を示すまで、ジアゾメタンにより処理した。 例１７ ８−メＩ・キシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ− α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）　−（２，−， ３）　−〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（＋−４）−Ｏ＝２−アセトアミド ー２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（＋−５）−０−β−Ｄ−ガラク トピラノシルー（１−４）−０−［α−Ｌ−フコピラノシル−（Ｌ−３）−０− １２−アセトアミド−２−デオキソ化合物６４ａ　（１，５ｍｇ）　、ＣＭＰ− Ｎｅｕ５Ａｃ（８ｍｇ）、βＧａ　Ｉ　（１−３／４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃａ　 （２−３）シアリルト゛１ンスフエラーセ（＋７ｍＵ）、アルカリホスファター ゼ（５Ｕ）を、シアリル化緩衝液（１゜５ｍ１）中て４０時間インキュへ一トシ た。単離し、精製して、６５ａ　（０，７ｍｇ）および６５ｂ　（０，５５ｍｇ ）を？【トた。 例１８ ８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ノデオキシーα −Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノンロン酸）−（２−３）−０ −β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１−４）−’０−２−アセトアトー ノツルー（＋−３）−０−βーＤーガラクトピラノシルー（１−４）−０−２− アセトアミド−２−デオキｍｇ）　、βＧａｌ（１−３／４）βＧｌ　ｃＮＡｃ ａ　（２−３）シアリルトランスフエラーゼ（４　（３ｍＵ）　、およびアルカ リホスファターゼ（１５Ｕ）を、シアリル化緩衝液（２．５ｍｌ）中で４８時間 インキュベー１１ｊこ。 （１（離し、精製して、６６ａ　（２．５ｍｇ）を得た。 例１９ ８−メトキンカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３．５−ジデオキシ−α ーＤーグリセローＤーガラクトー２−ノヌロビラノシロン酸）−　（２−３）− ０−βーＤーガラク１ーピラノシルー（１−４）−０−［α−Ｌ−フコピラノン ルー（１−３）−０−］　］２ーアセトアミドー２ーデオキシグルコピラノシル −（１−３）−０−βーＤーガラクトピラノシルー（１−４）−０−　［α−Ｌ −フコピラノシル−（１−３）−Ｏ−］　］２ーアセトアミドー２ーデオキソグ ルコピラノシｌ”　（　Ｇ　７　ａ　）の製造化合物６６ａ　（２．５ｍｇ）　 、ＧＤＰ−フコース（８ｍｇ）およびβＧｌ　ｃＮＡｃａ　（１−”３／４）フ コシルトランスフェラーゼ（＋９　ｍＵ）を、酵素処理用緩衝液（２．０ｍｌ） 中で４８時間インキュベートした。単ＭＬ、精製して、６７ｂ　（１．７ｍｇ） を得た。 上記例１−６で製造された化合物の’Ｈ−ｎｍｒデー表　ＩＱ Ｇ２２％阻害性オリゴ糖グリコシドの免疫抑制性例２０−３４は、血液型抗原決 定基関連オリゴ糖グリコシドの免疫抑制性を証明するものである。これらの例に おいて使用されたオリゴ糖グリコシドは図１２および１３に示されている。これ らの図において、これらの化合物の構造は、ローマ数字で示されている。 例２０ Ｄ　Ｔ　Ｈ炎症応答の抑制 ＤＴＨ炎症応答の抑制を、Ｓｍ１ｔｈおよびＺｉｏｌａにより開示されたマウス 足裏ふくらみ部膨潤検定法２１を使用して測定した。簡単に言えば、Ｂａ１ｂ／ ｃマウスの群を、クロストリジュウム　テルモヒドロサルフリクム（Ｃｌｏｓｔ ｒｉｄｉｕｍ　ｔｈｅｒｍｏｈｙｄｒｏｓｕｌｆｕｒｉｃｕｍ　）　Ｌ　−１１ １−６９からのＬｌ　ｌ　ｌＳ一層（Ｌａｙｅｒ）蛋白質、バクテリア表面蛋白 質０、ＩＯμｇにより免疫感作した。このＬ−１１１−６９は、強力な炎症ＤＴ Ｈ応答を誘発させるものとして証明されている。７日後に、各群のマウスの足裏 ふくらみ部を、ＬＩＩＩＳ一層重白質ｌＯμｇによるチャレンジに付した。チャ レンジ後の２４時間の時点て、生じる炎症による足裏ふくらみ部の膨潤をミツト ヨ　エンジニアリング　マイクロメーター（Ｍｉｔｕｔｏｙ。 Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｍｉｃｒｏｍｅｔｅｒ）を用いて測定した。 図１２に示されている血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドＩＩＩ−Ｖｌｌ の炎症ＤＴＨ応答に係わる効果を評価するために、マウスの群に、チャレンジ後 の５時間の時点て、化合物ｌ１ｌ−ＶＩＩ１００μｇを尾静脈中に注射すること によって投与した。対照群は、処置しないか、またはリン酸塩緩衝塩類溶液（Ｐ ＢＳ）１００μｍを没！−ｊした。この実験の結果を図１に示す。オリゴ糖グリ コンドＩＩＩを注射したマウスは、対照マウスの足裏ふくらみ部膨潤の約４０９ ６を示したのみてあった。 オリゴ糖グリコンドＩＶ−Ｖｌｒ（シアリル−ルイスＸ、図１２の化合物ＩＩ＋ に関連した構造を存する）を注射したマウスは、対照マウスの足裏ふくらみ部膨 潤の５５−７０９６を示した。図２から判るように、糖ｖＩＩＩおよび■Ｘを注 射されたマウスおよび図１３に記載の三糖化合物Ｘを注射されたマウスは、実質 的に対照マウスに見出たされた足裏ふくらみ部膨潤と同程度の足裏ふくらみ部　 膨潤を示した。 例２１ ＤＴＨ炎症応答の抑制に係わる投与量依存性６群のマウスを、例２０に記載のＬ ｌｌｌ−３一層重白質による一次兄疫感作およびチャレンジに付した。チャレン ジ後の５時間の時点て、各群に図１２に記載の血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドＩＴＩを１Ｏ１２５，５０，７５または１００μｇの量て含有する溶液 １００μｍを、あるいはＰＢＳを、静脈投与した。チャレンジ後の２４時間の時 点て、各投与量肝におけるＤＴＨｃｉ；答を測定し、図２に示す。ＰＢＳまたは オリゴ糖グリコシドＩＩＩ　１０μｇか投与された群は、ＰＢＳ処置対照群と実 質的に同一程度の足裏ふくらみ部膨潤を示したのに比較して、オリゴ糖グリコシ ｌ’　Ｉ　Ｉ　１を２５．５０．７５または１００μｇの量で投与された肝はそ れぞれ、減少された足裏ふくらみ部膨潤を示した（それぞれ、ＰＢＳ対照の７８ ％、６９％、７５９６および５６Ｌｌｌｌ−３一層重白質に対する抗体応答の抑 制の欠落 例２０に記載のとおりに、免疫感作し、チャレンジに付し、次いてオリゴ糖グリ コシドＩＩＩ−Ｖｌｌて処置したマウス肝からの血清において、Ｌｌｌｌ−Ｓ一 層重白質に対する二次抗体応答を、−次免疫感作後の２週間（チャレンツ後の１ 週間）の時点て、測定した。 抗体力価は、Ｚｉｏｌａ等により開示された２１固相酵素免疫検定？１（ＥＩＡ ）を使用して測定した。簡単に言えば、Ｌｌｌｌ−３−［蛋白質２μｇを、マキ シソルブ（Ｍａ＼１ｓｏｒｂ）　Ｅ　Ｉ　Ａプレート（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａ ｔｏｒｉｅｓ、　ｌｌＩｃ、　。 Ｍｃｌｅａｎ、ＶΔ）の各四部にＩＪＩＩえた。室温て一夜にわたりインキュへ −１−１，た後に、四部を逆さにすることにより未吸着抗原を除去した。次いて 各凹部に、２９６（重量／容量）ウソ血清アルブミンおよび２％（容量／容量） ツイーン２０を含有するリン酸塩緩衝塩類溶液を用いて調製した種々の稀釈段の マウス血清２００μｍを加えた。室温で１時間の後に、四部を逆さにすることに より溶液を除去し、これらの凹部を蒸留した脱イオン水により室温で４回洗浄し た。ホースラディシュバーオキシダーゼー精合したヤギ抗マウス免疫グロブリン 抗体を次いて、各四部に加えた（リン酸塩＆ｌ＃塩類溶液／アルブミン／ツイー ン２０溶液中て調製したｌ　二２０００稀釈度の溶液２００μｌ）、、室温て１ 時間の後に、これらの凹部を再度逆さにし、洗浄し、次いで各四部に酵素基質溶 液（０，１Ｍクエン酸ナトリウム／リン酸Ｉｊ！緩衝液、ｐＨ５，５、中に新た に溶解した、０−フェニレンジアミン３ｍｇ／ｍｌおよび０．０２９１容量／容 量）過酸化水素）２００μｍを加えた。暗所で室温において３０分間、酵素反応 を進行させた後に、各四部に２Ｎ塩酸５０　／１１を加え、次いてそのＯＤ　４ 　！。値を測定した。 付したマウスから採取した血清の６稀釈系を用いて測定し、上記例２０に記載の 足裏ふくらみ部膨潤に係わり評価した力価をグラフで示すものである。図３に示 されている稀釈曲線は、Ｌｌｌｌ　Ｓ一層重白質に対する抗体の発現かオリゴ糖 グリコンドＩＩＩ−Ｖｌｌによる処置によって抑制されないか、あるいは別設の 悪影響を受けないことを示している。 例２３ 抗原チャレンジに係わる化合物ＩＩ＋の投与時期例２０に記載のとおりにして、 ＬＩ　Ｉ　Ｉｓ一層重白質に対して免疫感作し、Ｌｌ　ｌ　Ｉｓ一層重白質をチ ャレンジさせたＢａ１ｂ／ｃマウスの群に、図１２に記載の血液型抗原決定基関 連オリゴ糖グリコシド］　Ｉ　Ｉ　１００μｇのＰＢＳ（１００μｌ）中の溶液 を、抗原チャレンジに関して異なる時点て注入した。１８１には、抗原チャレン ジの１時間前に、オリゴ糖グリコシドＩＩＩを投与し１、他の１群には、チャレ ンジの直後に投与し、第３の群には、チャレンジ後の１時間の時点で投与し、そ して第４の群には、チャレンジ後の５時間の時点て投与した。対照群は、チャレ ンジの直後のＰ’Ｂ　Ｓ　（１，００μｌ）投与を包含した。 この実験の結果を図４に示す。抗原チャレンジの１時間前に、またはチャレンジ 直後に、オリゴ糖グリコシドＩ１１を投与したマウスでは、このＤ　Ｔ　Ｈ応答 は抑制されなかった。チャレンジ後の５時間の時点てオリゴ糖グ９％のみを示し た。 」二記例２０−２３は、抗原によるチャレンジ後における仔効量の血液型抗原決 定基関連オリゴ糖グリコシドによる処置か、この抗原に対する免疫応答（すなわ ちＤＴトＩ応答）を抑制し、これによりチャレンジ後の２４時間の時点て測定さ れた炎症のレベルが、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドにより処置され た動物においては、対照動物が示すレベルに比較して少なくとも２０％減少され ることを示している。 例２４ チャレンツ後の６．８または１０週間の時点におけるＤ　Ｔ　Ｈ炎症応答の抑制 の持続性 １９例２０の血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドＩＩＩ−ＶＴＴにより処 置されたものと同一１１１のマウスを、−次免疫感作後の８週間の時点て、ＬＩ ＩＩＳ一層重白質による＋＋）チャレンジに付した。未処置対照は、通常の程度 の足裏ふくらみ部膨潤を伴い応答した。これに対して、他の群はいづれも、下記 のとおりの減少された足裏ふ（らみ部膨潤を示した。 一回ｌ」のチャレンツ後の５時間の時点て与られた、こ（シアリル基をイ丁して いない山−の誘導体）は、再チャレンツの時点ても、−回目のチャレンジの時点 と同様に強力であった。細胞性免疫応答の抑制か付与されるのに和えて、上記デ ータはまた、本発明に係わるオリゴ糖グリコシドによる処置かまた、同一抗原の 追加のチャレンジに対する寛容性を付与することを証明している。 １１、ソアリルールイスＸ、化合物ＩＩＩ（１０μｇ、２５μｇ、５０μｇ、７ ５μｇ、１００μｇ）、または８−メトキシカルボニルオクタツールのβ−シア リルグリコシド（図１３の単糖化合物Ｖｌｌｌ、ＩＸ；１００μｇ）、またはＴ −三糖化合物の８−メトキシカルボニルオクチルグリコシド（図１３の三糖化合 物Ｘ）１００μｇにより処置されている、例２１と同−Ｄｉのマウスを、−次免 疫感作後の６週間の時点で、再チャレンジに付した。−回目のチャレンジ後の５ 時間の時点て、糖化合物に見出たされたものと同様の足裏ふくらみ部膨潤か見出 だされた。ＩＩＩの１０−１００μｇて、初めに処置されているマウスは、−回 目のチャレンジ後の２４時間の時点て生じた膨潤の９０−６５％の範囲の足裏ふ くらみ部膨潤を示した。 １１１−回目のチャレンジ後の１時間の時点で、または−回目のチャレンジ後の ５時間の時点て、オリゴ糖グリコント１１１１００μｇにより処置されている、 例２２と同一！！■のマウスを、−次免疫感作後の１０週間の時点て、抗原によ る再チャレンジに付した。チャレンジ後の短時間て、またはチャレンジの前に、 処置したマウスの足裏ふくらみ部膨潤は実験誤差の範囲内で、ＰＢＳ処置マウス のものと同一であった。これに対して、チャレンジ後の１時間または５時間の時 点て、初めから処置されていたマウスは、ＰＢＳ処置対照で見出だされた数値の 約６６％のみを示した。 この実験の結果か、図５−７に示されており、これらの図は、血液型抗原決定基 関連オリゴ糖グリコシドが、処ｒＩＬ後の少なくとも１０週間の期間にわたり、 同一抗原によるチャレンジに対する寛容性を付与することを証明している。 例２５ 化合物ＩＩＩの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシドにより誘発される抑 制に対するシクロホスファミド処置が有する効果 ソクロホスファミド（ＣＰ）でマウスを処置することによって、サプレッサー細 胞か消去されることは、刊行物で証明されている。ＣＰが化合物ＩＩＩの８−メ トキシカルボニルオクチルグリコシドにより誘発される細胞性免疫応答の抑制を 変えることかできるが否かを証明するために、実験を行った。 詳細に言えば、この例では、上記方法と同様の方法で、化合物ＩＩＩの８−メト キシカルボニルオクチルグリコシドによる処置により、ＤＴＨ炎症応答が予め抑 制され、かつまたＤＴＨ炎症応答に対して寛容性にされている、免疫感作したマ ウスを使用する。免疫感作後の１４日ロー、ＣＰ２Ｏ０ｍｇ／ｋｇを、次いて免 疫感作後の１７日ロー、ＣＰ２０　ｏｍｇ／ｋｇを、マウスに注射した。 これらのマウスを、ＬＩ　Ｉ　ＩＳ一層上白質２０μｇにょるチャレンジにＩＩ シた。このチャレンジ後の２４時間の時点で、足裏ふくらみ部膨潤の増加を測定 する（ｍｍ−’）ことにより、ＤＴＨ応答の程度を評価した。 この実験の結果か図８に示されている。この図８は、化合物ＩＩＩの８−メトキ シカルボニルオクチルグリコシドによる免疫抑制処置を　事前に受けたマウスで は、ＬＩＩＩＳ一層上白質によるチャレンジ前のＣＰの注射により、ＤＴＨ炎症 応答が復元されることを示している。 これらの結果は、図３の化合物ＩＩＩの８−メトキシカルボニルオクチルグリコ シドにより誘発される寛容性かＣＰ感感受性サプレッサー−細胞により仲介され ることを示唆している。 例２６ 化合物ＩＩＩの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシドにより誘発された抑 制効果に対するＤＴＨ炎症応答を推進する抗原の効果この例では、化合物ＩＩＩ により誘発された抑制効果に対するＤＴＨ炎症応答を推進する抗原の作用を評価 する。例２０に既述されているように、マウスをＳ一層Ｌｕ１ｌ、ヘルペス　シ ンプレックス　ウィルスＩ　（Ｈ３ＶＩ）および陽イオン付加ウシ血清アルブミ ン［１，−バー　キャリアー（５ｕｐｅｒＣａｒｒｉｅｒ　）商標名、Ｐｉｅｒ ｃｅ、　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、　［ＬＩにより免疫感作した。図９に示されている ように、この炎症応答に使用された抗原の種類は、この応答を調節する化合物Ｉ ＩＩの能力に影響するようには見えない。 例２７ 活性化血管内皮に対するＥＬＡＭ−１依存性細胞液着に対する合成化合物ＩＩＩ の効果 この例では、合成血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドＩＩＩか、活性化し た血管内皮に対するＥＬＡＭ−１依存性細胞液着を抑制することかできるか否か を評価する。詳細には、Ｌｏｗｅ等により開示された１ｓ、インビトロ細胞結合 検定法を行った。簡単に言えば、ヒト請血管内皮細胞（Ｃｅｌｌ　Ｓｙｓｔｅｍ ｓ、５ｅａｔｔｌｅ、ＷＡから入手したＨＵＶＥＣｓ）を、ＴＮＦａ　（１０ｎ ｇ／ｍｌ）により刺激して、ＥＬＡＭ−１を発現させた。ＥＬＡＭ−１依存性様 相て、ＨＵＶＥＣｓに結合することか証明されているヒト腫瘍セルライン、Ｕ９ ３７またはＨＬ６０を使用して、ＨＵＶＥＣｓに対するＥＬＡＭ−１依存性結合 に係わり化合物ＩＩ＋か有する効果を測定した。図１Ｏは、この実験の結果を示 すものであり、化合物ＩＩＩかＨＵＶＥＣｓに対するＥＬＡＭ−１依存性結合を 抑制することを示している。 」二記例２０−２６のデータは、呻乳動物（マウス）における抗原に対する免疫 応答の処置およびまた抗原に対する寛容性の誘発、における血液型抗原決定基関 連オリゴ糖グリコシドの効果を証明している。マウスの免疫系はヒト免疫系に係 わる良好なモデルであることから、これらのオリゴ糖グリコシドはヒ１−免疫応 答の処置にも有効であるしのと見做される。このことは、血液型抗原決定基関連 オリゴ糖グリコシドかＨＵＶＥＣｓに対するＥＬＡＭ−１依存性結合を抑制する ことを証明している例２７の結果により支持されている。 例２８ 免疫感作または抗原チャレンジに係わる５１ｅＸの投与時期の効果 例２０に記載のとおりにするか、下記の点て修正して、４　ＨｆｆのＢａ１ｂ／ ｃ雌マウスをＨ３Ｖ抗原による一次免疫感作およびチャレンジに付した。 １）第１群は、２０μｇ／マウスの未活性化ヘルペスシンプレックス　ウィルス 　タイプＩ　（Ｈ３Ｖ）により免疫感作し、次いて７日後に２０μｇＨ３Ｖによ るチャレンジに付した。 ２）第２群は、２０μｇ／マウスのＨ３Ｖにより免疫感作し、次いて７日後に２ ０μｇ／マウスのＨ３Ｖによるチャレンジに付し、次いてこのチャレンジ後の５ 時間の時点て、１００μｇ／マウスの５ＩｅＸ（シアリル　ルイスＸ、化合物Ｉ 　Ｉ　Ｉ）を静脈注射した。 ３）第３群は、２０μｇ／マウスのＨ３Ｖにより免疫感作し、次いてＰＢＳ　ｌ 　００μｌ中の１００μｇ／マウス５ＩｅＸを同一部位に筋肉内注射した。７日 後に、マウスの足裏ふくらみ部において２０μｇ／マウスのＨ３Ｖ単独によるチ ャレンジを行った。 ４）第４群は、ＰＢＳ　ｌ　００μｍにより免疫感作し、次いで７０後に、２０ μｇ／マウスのＨ３Ｖによりチャレンジを行った。これにより抗原チャレンジ中 の足裏ふくらみ部に生じる、肉体的損傷から生じる足裏ふくらみ部膨潤のバック グランドレヘルの尺度か得られる。 ＤＴＨ炎症応答の程度は、チャレンジ後の２４時間の時点て、ミツトヨ　エンジ ニャリング　マイクロメーターによる足裏ふくらみ部膨潤を測定することによっ て測定した。 図２７は、見出たされた足裏ぶくらみ部膨潤度を示すものである。減少パーセン トは、下記の式により計算した： 「処置マウス」は、抗原に加えて、化合物を投与されたマウス”Ｃある。「未処 置マウス」は、化合物を投与されていないマウスである。ハックグランド膨潤は 、抗原または化合物による免疫感作を行わず、ＰＢＳ単独で免疫感作したマウ１ において見出たされた膨潤度である。 Ｈ３Ｖによる免疫感作と同時に、かつまた同一部位に、５ＩｅＸをｉｔ射したマ ウスは、Ｈ３Ｖで免疫感作し、次いてＨＳ　Ｖによるチャレンジに付したマウス に比較して、足裏ふ二らみ部膨潤の８８９６減少を示した。足裏ふくらみ部をＨ ３Ｖによるチャレンジに付した後の５時間の時点て５ｌｅＸを注射したマウスは 、ＨＳ　Ｖで免疫感作し、次いてＨＳ　Ｖによるチャレンジに付したマウスに比 較して、足裏ふくらみ部膨潤の約８６．７％の減少を示した。 この実験結果は、オリゴ糖グリコシドＩ”ＩＩが、抗原によるチャレンジ後の５ 時間の時点てマウスに投与された場合に、抗原に対する免疫応答を抑制できるこ とを示している前記例を支持している。この例はまた、免疫感作と同時にマウス に投与されたオリゴ糖グリコシドＩＩＩか、この抗原に対する免疫系の感作を抑 制できることを示している。いずれの理論にも制限されないものとして、５Ｉｅ Ｘ（化合物１１１）は、Ｔヘルパー細胞の抗原提供細胞に係わる認識ｆ１ヒカを 干渉し、また免疫系か該当抗原に対して教育されるようになることを抑制するも のと考えられる。 例２９ ＨＳ　Ｖに対する抗体応答に係わるシアリルＬｅＸの効果 ４群のマウスを、例２８に記載のとおりに処置した。 ＨＳＶ抗原　に対する二次抗体応答を、例２８に記載のマウスの８１からの血清 において、−次免疫感作後の２週間（チャレンジ後の１週間）の時点て、測定し た。 ＬＩ　Ｉ　１３層蛋白質の代わりにＨ３Ｖ抗原を使用した以外は、例２２に記載 のとおりにして、抗体力価を測定した。 図２８は、例２８に記載の免疫感作したマウス群からの血清の６稀釈系で測定さ れた力価を、グラフで示すものである。初めの２１１１の結果は、ＬＩ　Ｉ　１ ３層蛋白質に係わる例２２て１１）られた結果と相関関係を有していた。 チャレンジ後の５時間の時点でＳ］ｅＸにより処置されたマウスの抗体応答は影 響を受けなかった。しかしながら、免疫感作時点で５ＩｅＸにより処置されたマ ウスは、Ｈ３Ｖ抗原に対する抗体応答のイｒ、ｆ！、の減少を示した。いずれの 理論にも制限されないものとして、５１ｅＸ（化合物Ｉ　Ｉ　＋）は、抗体応答 に含まれるＴヘルパー細胞を干渉し、また免疫系か該当抗原に対して教育される ようになることを　抑制するものと考えられる。 例３０ ＳＩｅＸ免疫抑制の誘発に対するシクロホスファミド処置の効果 例２５に記載されているように、シクロホスファミド（ＣＰ）によるマウスの処 置により、サプレッサー細胞を消去することかできる。詳細には、ＬＩ　Ｉ　１ ３層抗原による処置によりＤＴＨ炎症応答に対して予め抑制され、寛容性にされ ている免疫感作したマウスを使用する。 Ｂａ１ｂ／ｃのｌ　Ｆ４１を、ＬＩＩＩＳ層蛋白質２ｏμｇ／マウスにより免疫 感作した。７日後に、この群のマウスの足裏ふくらみ部に、ＬＩ　Ｉ　Ｉｓ層蛋 白質２０μｇをチャレンジさせた。第２の群のマウスは、同一部位で、ＬＩＩ＋ 蛋白質２０　μｇおよび５ＩｅＸＩ００μｇにより免疫感作し、次いて７日後に 、足裏ふくらみ部にＬｌ１１２０μｇをチャレンジさせた。第３のＪＩＰのマウ スには、免疫感作前の２目の時点で、ＣＰ２Ｏ０ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射した。 この群には次いて、第２群に係わり上記した免疫感作およびチャレンジを行った 。第４の群のマウスは、同一部位で、Ｌｌ　１１２０μｇ／マウスおよびＴ−三 糖化合物１００μｇ／マウスにより免疫感作し、次いて第１群に係わり記載した とおりに、足裏ふくらみ部チャレンジを行った。第５の群のマウスは、ＰＢＳＩ ００μｌにより免疫感作し、次いて第１群に係わり記載したとおりに、足裏ふく らみ部チャレンジを行った。 これらの結果を図２９に示す。これらの結果は、免疫感作と同時点て５ＩｅＸに より処置すると、抗原に対する免疫応答が抑制できるという、例２８に記載の結 果を確認するものである。さらにまた、この例は、免疫感作と同時点のＳ］ｅＸ による処置による免疫応答の抑制が、免疫感作する前のシクロホスファミド処置 により解除できることを示しており、これはシクロホスファミド感受性サプレッ サーＴ−細胞の関与を示唆している。 例３１ ＯＶＡにより３１発されたＤＴＨ炎症応答の抑制に係わる、足裏ふくらみ部チャ レンジ後の化合物投与部位の効果 体重約２０−２５ｍｇの８−１２週令のＢａ１ｂ／ｃ雌マウスのｆｆｆを、ＰＢ Ｓ　（リン酸塩緩衝塩類溶液）１００μｍ中のＯＶＡ　（アルブミン、鶏卵、Ｓ ｉｇｍａ、　Ｓｔ。 Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）　Ｉ　００　ｕ　ｇおよびＤＤＡ　＜ジメチルジオクタシル アンモニウムブＣＩフィト、Ｅａｓｔｍａｎ　Ｋｏｄａｋ。 Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）　２０　ｐ　ｇを、このマウスの後肢筋肉に筋肯内 投与することにより、免疫感作した。 免疫感作後の７０目に、各群のマウスの足裏ふくらみ部にＰＢＳ２０μｌ中の０ ＶＡ２０μｇをチャレンジさせた。生じる足裏ふくらみ部の膨潤を、チャレンジ 後の２４時間の時点で、ミツトヨ　エンジニアリング　マイクロメーターにより 測定した。 炎症ＤＴＨ応答の抑制に係わる５１ｅＸの投与方法の効果を評価するために、化 合物１１１（ＳｌｅＸ）を異なる経路で投与した。成る群のマウスには、足裏ふ （らみ部チャレンジの後の５時間の時点で、ＰＢＳ２００μＩ中の５ｌｅＸ１０ ０μｇ／マウスを静脈投与し、またはマウスを軽い麻酔状態にして、ＰＢＳ２０ μｌ中のＳＩｅ’１００μｇ／マウスを鼻内に投与した。 鼻経路による化合物の投与方法は、Ｓｍ１ｔｈ等により開示されており６３、こ の刊行物を引用してここに組み入れる。簡単に言えは、マウスをメトファン（λ １ｅｔｏｆａｎ；Ｐｉｔｍａｎ−Ｍｏｏｒｅ　Ｌｔｄ、、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇ ａ、０ｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）により麻酔し、次いてマウスの鼻の近くに 、滴状の化合物５０μＩを置き、吸引させる。対照群は、未処置のままに置くか 、またはＰＢ３２００μｍを静脈投与するか、またはＰＢＳ５０μｍを州内投与 した。この実験の結果か図３０に示されている。この図は、チャレンジ後の５時 間の時点て、Ｓｌｅ”化合物を鼻に投与した場合に、免疫応答の抑制が得られた ことを示している。 例３２ ＯＶＡ誘発ＤＴＨ炎症応答の抑制に係わる足裏ふくらみ部チャレンジ後の投与時 機依存性 体重約２０−７５ｇの８−１２週令のＢａ１ｂ／ｃ雌マウスの群を、ＰＢＳ　Ｉ 　００μｍ中のＯＶＡ　（アルブミン、鶏卵、Ｓｉｇｍａ、）　Ｉ　００　ｕ　 ｇおよびＰＢＳ１００μｍ中のＤＤＡ２０μｇを、このマウスの後肢筋肉に筋肉 内投与することにより、免疫感作した。免疫感作後の７日目に、各群のマウスの 足裏ふくらみ部にＰ　Ｂ、Ｓ　２０μｌ中の０ＶＡ２０μｇをチャレンジさせた 。足裏ふくらみ部チャレンジ後の、５時間、７時間、または１ｏ時間の時点て、 マウス＋：ＰＢＳ　２００　ｕ　Ｉ中（７）ＳｌｅＸ１００μｇ／マウスを静脈 投与するが、またはＰＢＳ　２００μｍのみを静脈投与するか、またはマウスを 軽い麻酔状態にして、ＰＢ３５０μｌ中（７）Ｓ　Ｉ　ｅＸ　ｌ　００μｇ／７ ウスを鼻に投与するか、またはＰＢ３５０μｍのみを鼻に投与した。足裏ふくら み部の膨潤を、チャレンジ後の２４時間の時点て、ミツ］・ヨ　エンジニアリン グ　マイクロメーターにより測定した。 図３１は、この実験の結果を示している。ＯＶＡチャレンジ後の　７時間の時点 て投与された（鼻内投与および静脈投与の両方）ＳＩｅＸは、例２８に記載の式 を用いて計算して、陽性対照マウスの足裏ふくらみ部膨潤の７０−７４％を示し た。足裏ふくらみ部チャレンジ後の５時間の時点て、鼻内投与または静脈投与に より投与された５ＩｅＸは、それぞれ膨潤の６３％および５４９６の減少を示し た。足裏ふくらみ部　チャレンジ後の１０時間の時点て、鼻内投与または静脈投 与により投与された５ＩｅＸは、それぞれ膨潤の５８％および３２％の減少免疫 感作した部位とは異なる部位にオリゴ糖グリコシドを投与した場合に係わる抑制 効果 Ｂａ１ｂ／Ｃ雌マウスの群をＰＢＳ１００ｕｌ中のＤＤＡ　２０μｇ／マウスお よびＯＶＡ　Ｉ　００μｇ／マウスの後肢筋肉中への筋肉内投与により免疫感作 し、同時に５ＩｅＸ１００μｇ／マウスを筋肉内投与、鼻内投与または静脈投与 により投与した。７０目に、マウスをＰ　Ｂ　Ｓ　２　Ｏｕ　Ｉ中（７）ＯＶＡ 　２０　μｇ／７ウスニよるチャレンジに付した。足裏ふくらみ部膨潤を、チャ レンジ後の２４時間の時点て、ミツトヨ　エンジニアリング　マイクロメーター により測定した。 ［２Ｊ３２は、免疫感作時点でのマウスへの５ＩｅＸ投与か、５ＩｅＸ投与方法 に関係なく、同程度のＤＴＨ炎症［、Ｌ：答の抑制をもたらすことを示している 。これは、５ＩｅＸ化合物か静脈投与に加えて、その池の方法によっても、患者 の処置に投与できることを示唆している。 例３４ 師障害を生じさせるＬＰＳに対するオリゴ糖グリコシドの効果 マウスにＬＰＳ　（リポポリサッカライド）を鼻内投与した後の２４時間の時点 て、犠牲にしたマウスの肺の重量を測定することによって、Ｌ　Ｐ　Ｓが肺に障 害を生じさせることを実証した。簡単に言えは、８−１０週令の５μｇ／マウス の軽い麻酔下での鼻内投与により感作した。５時間後ニ、ＰＢＳ２００μｌ中（ ７）ＳＩｅＸ、Ｃ１９−９、Ｔ−三糖（＃２７）を　マウスに静脈投与した。 ２４時間後に、マウスを犠牲にし、その肺を　取り出し、重量を測定した。 図３３の結果は、Ｓ］ｅＡ（化合物ＶＩＩ）および５ＩｅＸ（化合物１１１）か 肺におけるＤＴＨ炎症応答を少なくとも約３０９６減少させたことを示している 。この結果は、５１ｅＡおよびＳ］ｅＸ化合物が、抗原にさらされた肺における 炎症、例えば急性呼吸障害症候群（Ａｃｕｔｅ　Ｒｅ５ｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｄｉ ｓｔｒｅｓｓ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ　）　、の炎症の減少に任用でありうることを 示唆している。 例３５ リンパ球増殖応答に対する種々の量の５ＩｅＡおよびＳＩｅＸの効果 Ｂａ１ｂ／ｃ雌マウスの群をＭＵＭＰＳ（不活性化マンブス（Ｍｕｍｐδ＼ウィ ルスおよびＤＤＡ２０μｇ／マウスの後肢筋肉中−＼の注射によって、免疫感作 した。７日後に、マウスを犠牲にし、次いてリンパ節および牌臓を取り出し、次 いでリンパ球を単離した。このリンパ球を５％ハイベルミックス（Ｈｙｂｅｒｍ ｉｘ；　Ｓｉｇｎ＋ａ、Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ。 ＭＯ）で補強されているＲＰＭＩＩ６４０培地（Ｇ　ｉ　ｂｃｏ。 Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ　０ｎｔａｒｉｏ、ａｎａｄａ）中の種々の濃度のマンブ スウイルスおよび種々の濃度の化合物とともに、５％ＣＯ２中で３７°Ｃにおい て３日間、２ＸｌＯ’細胞／凹部のａ度で培養した。３日後に、細胞に２Ｈ−チ ミジン／凹部（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｃａｎａｄａ　Ｌｔｄ、、０ａｋｖ目１ｅ、 　０ｎｔａｒｉｏ。 Ｃａｎａｄａ）　１．　Ｏμキュウリイを６時間パルス照射した。 これらの細胞をＰｈＤ細胞収穫機を用いて収穫し、ｃｐｍをベックマン（Ｂｅｃ ｋｍａｎ　）　３０００シンチレーシヨンカウンターで測定した。抗原に対する 応答に係わるリンパ球の能力と３Ｈ−チミジン取り込み量との間に直接的相関関 係か存在することは従来から証明されているこの例ては、Ｔ−ヘルパー細胞応答 のインヒドロ測定に、リンパ球増殖応答を使用した。３Ｈ−チミジンの取り込み は、抗原にさらされたマウスからのリンパ球に比較して減少されることから、図 ３４は、５ＩｅＡおよびＳ　Ｉ　ｅＸ　（Ｃｌ　９−９）がまた抗原特異性リン パ球増殖応答を抑制することかできることを示している。いろれの理論にも制限 されないものとして、５ｌｅＡおよび５ＩｅＸはイン上１−ロ増殖応答を得るの に要するマクロファージニー細胞を干渉できるものと考えられる。 例３６および３７は木簡グリコシド６５ａの免疫抑制性を例示するものである。 例３６ ＤＴＨ炎症応答の抑制 例２０に記載のマウス足裏ふくらみ部膨潤検定法を使用して、ＤＴＨ炎症応答を 測定した。簡単に言えば、Ｂａ１ｂ／ｃマウスの群を、ＬｌｌｌＳ層蛋白質１Ｏ μｇにより免疫感作した。７日後に、各群のマウスの足裏ふくらみ部に、ＬＩＩ ＩＳ層蛋白質ｌ０μｇをチャレンジさせた。生じる炎症性足裏ふくらみ部膨潤を 、チャレンジ後の２４時間の時点で、ミツトヨ　エンジニアリングマイクロメー ターにより測定した。 例１７て合成された木簡グリコシド６５ａの炎症ＤＴＨ応答に係わる効果を評価 するために、チャレンジ後の５時間の時点て、その尾静脈への注入により、マウ スの群にこの化合物１００μｇを投与した。対照群には、リン酸塩緩衝塩類溶液 （ＰＢＳ）１００μｍを投与した。 この実験の結果を下記表１１に示す。この表において、足裏ふくらみ部膨潤の対 照との比較に係わる小さい増加は、被験化合物か免疫抑制性を有する、すなわち 被験化合物か抗原に対する応答としての足裏ふくらみ部膨潤度を減少させること を証明している。 表１１ 対照　３．３ ウスが、対照マウスに比較して、５０９６より少ない足裏ふくらみ部膨潤度を有 していたことを示している。 例３７ チャレンジ後の１１週間におけるＤＴＨ炎症応答の抑制の持続 １４例７の木簡グリコツドロ５ａで処置されている、同一１′＃のマウスに、− 次免疫感作後の１１週間の時期にＬＩ　Ｉ　１３層蛋白質による再チャレンジを 行った。 ＰＢＳ対照て処置したマウスは通常の程度の足裏ふくら置されたマウスは、ＰＢ Ｓ処置マウスが示した足裏ふくらみ部膨潤の約６０９６を示したのみてあった。 −次チャレンジ後の５時間の時点（−次免疫感作後の１週間の時点）で投与され た木簡グリコシド６５ａの、この抗炎症′Ａｈ果は、−次免疫感作後の１１週間 の時点て幾分弱められたか、ＰＩ３５処置対照に比較すれば依然として炎症の有 意の減少を示した。 細胞性免疫応答の抑制の提供に加えて、上記データはまた、本発明に係わる木簡 グリコシド化合物が同一抗原からの追加のチャレンジに対する寛容性を付与する ことを証明している。 上記例３６および３７のデータは、咄乳動物（マウス）における　抗原に対する 免疫応答の処置およびまた抗原に対する寛容性の誘発に係わる、本明細書に記載 の木簡グリコシド化合物の効果を実証している。マウスの免疫系かヒト免疫系の 良好なモデルであることから、これらの木簡グリコシド化合物はまたヒト免疫応 答の処置にも有効であるものと見做される。 上記語例に記載の方法に従うことにより、これらの例に記載のオリゴ糖グリコシ ドを単に置き換えることよって、その他の血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコ シドが、抗原に対する細胞性免疫応答の抑制に使用することができる。 浄書（内容に変更なし） ０　１．０　２．０　３．０ 足裏ふくらみ部膨潤の増加（ｍｍ−１）０　１．０２．０　３．０　４．０ 足裏ふくらみ部膨潤の増加（ｍｍ−１）Ｆｉｇ、３ 稀釈度 免疫付与抗原 １１１＋＠パーセント Ｆｉｇ、１０ 工 工工 αＦｕｃ シアリルルイスＸ（シアリノ吐ｅ　Ｘ）１■ 日９．１２ ａＮａｕｓ人ａ（２−４−３）βＧａ１．（１−ａ−４）βＧ１ｃＨλｃ−ＯＲ ａＮａｕ５λｃ（２−ａ−３）βＧａｌ　（１−ａ−３）　（３ＧｌｃＮＡｃ− ＯＲノアリル　ルイスＣ（シアリル　ＬｅＣ）Ｖエニ シアリル　ルイス″（ＣＡ　工９９−９）Ｆｉ、１２　（ｃｏｎ”ヒ） ａＮａｕ５Ａｃ−ＯＲ βＮａｕＳλＣ−０Ｒ βＧａｌ　（１−＞３　）　ＣＥＧａＬＮＡｃ　−ＯＲＦｉｇ、１３ シ Ｆｉｇ、１５ 社り上５ｍ Ｆｉｇ、１７ ムよ１ １−一エＩ Ｆｉｇ−１８ Ｆｉｇ、２０ １旦 Ｆｉｇ、２：Ｌ Ｆｉｇ、２２ 二ｍ Ｈ３Ｖに対するＤＴ１１応答に対するＳＬｅＭＩ！の効果免疫付与抗原　チャレ ンジ抗原 Ｆｉｇ、２７ Ｈ３Ｖに対する抗体応答に係るシアリルＬｅＸの効果Ｆｉｇ、２Ｂ Ｓ　Ｌ　ｃ　Ｘ免疫抑制の誘発にス・１するＣＰの効果Ｆｉｇ、２９ ＯＶＡ誘発ＤＴＨに対し、７日目に化合物による処置足裏ふくらみ部膨潤の増加 　（１０−１ｍｍ　）Ｆｉｇ、３０ Ｆｉｇ、３１ ＯＶＡ誘発ＤＴＨに対する、００目の化合物第ｎＦｉｇ、３２ ＬＰＳ誘発肺障害に月するＳ　Ｌ、　ｅ　Ｘお、Ｌび５ＬｅＡの効果Ｆｉｇ、３ ３ ＰＭ Ｆｉ　３４ ｑ・ 手続補正書（方式）胃 免疫抑制性および寛容原性のオリゴ糖誘導体事件との間係　特許出願人 氏名（名称）　グライカムド　インコーホレイテッド図面の翻訳文の浄書（内容 に変更なし）国際調査報告 国際調査報告 フロントページの続ぎ （３１）優先権主張番号　８８９，０１７（３２）優先臼　１９９２年５月２６ 日（３３）優先権主張国　米国（ＵＳ） （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。 ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、ＣＡ、ＪＰ （７２）発明者　ベノット、アンドレ、ピー。 カナダ国ティー６ジー　０ジー９　アルバータ、エドモントン、セブンティファ イブアベニュー　１０９６８ （７２）発明者　カシエム、モハメッド、エイ。 カナダ国ティー６ケイ　１ブイ４　アルバータ、エドモントン、トウイン　チラ ス１７ディー

Claims (40)

【特許請求の範囲】
1. １．血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを細胞性免疫応答抑制有効量で、 哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物における細胞性免疫応答を抑制する 方法。
2. ２．免疫応答の抑制が炎症の抑制である、請求項１に記載の方法。
3. ３．免疫応答の抑制がＤＴＨ応答の抑制および抗原に対する寛容性の誘発のであ る、請求項１に記載の方法。
4. ４．免疫応答の抑制が抗原に対するリンパ球応答の抑制である、請求項１に記載 の方法。
5. ５．血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを、０．５ｍｇ／ｋｇ−約５０ｍ ｇ／ｋｇの量で哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物における抗原チャレ ンジに対する細胞性免疫応答の処置方法。
6. ６．血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを、抗原チャレンジ後の少なくと も０．５時間の時点で投与する、請求項５に記載の方法。
7. ７．上記オリゴ糖グリコシドを、非口経投与する、請求項１−５のいづれか一項 に記載の方法。
8. ８．血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドが、結合抑制性オリゴ糖グリコシ ドとしての特徴をさらに有する、請求項１−５のいづれか一項に記載の方法。
9. ９．上記オリゴ糖グリコシドが、グルコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグル コサミン、Ｎ−アセチルーガラクトサミン、フコースおよびシアリル酸からなる 群から選ばれる、２個または３個以上の糖単位からなる、請求項１−５のいづれ か一項に記載の方法。
10. １０．上記オリゴ糖グリコシドが、β−Ｄ−ガラクトース単位の３または６位置 に、あるいはβ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位の６位置に、αグリコシ ド結合により結合しているシアルリ酸を含有している、請求項９に記載の方法。
11. １１．上記オリゴ糖グリコシドが、図１１に記載の式１または式ＩＩを有してお り、これらの式において、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨおよび結合からなる群から選ばれ、 そしてＲはアグリコン基であり、Ｒ１はそれぞれ独立して、水素、糖および適合 性糖からなる群から選ばれ、そしてＲ２はそれぞれ独立して、水素、糖および適 合性糖からなる群から選ばれ、ただしＲ１およびＲ２の少なくとも一方は糖であ る、請求項１−５のいづれか一項に記載の方法。
12. １２．Ｒは−（Ａ）−Ｚ′からなる群から選ばれ、この式において、Ａは結合、 炭素原子２−１０個を有するアルキレン基、および式−（ＣＨ２−ＣＲ４Ｇ）ｎ −（式中ｎは１−５に等しい整数であり；Ｒ４は水素、メチルまたはエチルから なる群から選ばれ；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、フェニルおよび１−３ 個の置換基を有し、この置換基がアミン、ヒドロキシル、ハロ、炭素原子１−４ 個を有するアルキルおよび炭素原子１−４個を有するアルコキシからなる群から 選ばれるフェニルからなる群から選ばれる）で示される基を表わし；そしてＺ′ は水素およびメチルからなる群から選ばれるか、あるいはＧが酸素、硫黄または 窒素ではなく、そしてＡが結合ではない場合に、Ｚ′はまた、−ＯＨ、−ＳＨ、 −ＮＨ２、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、 −Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ５および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｒ５）２からな る群から選ばれることができ、ここでＲ５はそれぞれ独立して、炭素原子１−４ 個を有するアルキルである、請求項１１に記載の方法。
13. １３．Ｙが、−Ｏ−であり、そしてＡが炭素原子２−１０個を有するアルキレン であり、そしてＺ′が−Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５からなる群から選 ばれる、請求項１２に記載の方法。
14. １４．Ｙが−Ｏ−であり、そしてＲ１がそれぞれ独立して、水素あるいはα−Ｌ −フコースおよびα−Ｌ−フコースの誘導体からなる群から選ばれる適合性糖で ある、請求項１１に記載の方法。
15. １５．Ｒ２がそれぞれ独立して、水素あるいはα−シアリル酸およびα−シアリ ル酸の誘導体からなる群から選はれる適合性糖である、請求項１４に記載の方法 。
16. １６．上記オリゴ糖グリコシドが、図１２に記載の式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩま たはＶＩＩを有しており、これらの式において、Ｒは水素、メチルおよび−（Ａ ）−Ｚ′（式中、Ａは炭素原子２−１０個を有するアルキレンであり、そしてＺ ′は水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ） ＮＨＲ５および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｒ５）２からなる群から選ばれ、ここでＲ５は それぞれ独立して、炭素原子１−４個を有するアルキルである）からなる群から 選ばれる、請求項１−５のいづれか一項に記載の方法。
17. １７．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＩＩＩを有しており、この式において 、Ａはオクチレンであり、Ｚ′は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であ り、そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。
18. １８．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＩＶを有しており、この式において、 Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、 そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。
19. １９．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式Ｖを有しており、この式において、Ａ はオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、そ してＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。
20. ２０．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＶＩを有しており、この式において、 Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、 そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。
21. ２１．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＶＩＩを有しており、この式において 、Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり 、そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。
22. ２２．哺乳動物における細胞性免疫応答調整有効量の血液型抗原決定基関連オリ ゴ糖グリコシドおよび調剤用不活性担体からなる、哺乳動物に非口経投与するの に適する医薬組成物。
23. ２３．上記オリゴ糖グリコシドが、グルコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグ ルコサミン、Ｎ−アセチルーガラクトサミン、フコースおよびシアリル酸からな る群から選はれる、２個または３個以上の糖単位からなる、請求項２２に記載の 医薬組成物。
24. ２４．上記オリゴ糖グリコシドが、β−Ｄ−ガラクトース単位の３または６位置 に、あるいはβ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位の６位置に、αグリコシ ド結合により結合しているシアリル酸を含有している、請求項２２に記載の医薬 組成物。
25. ２５．上記オリゴ糖グリコシドが、図１１に記載の式Ｉまたは式ＩＩを有してお り、これらの式において、Ｙは−Ｏ−、−Ｓ−または＞ＮＨあるいは結合であり ；Ｒはアグリコン基であり、Ｒ１はそれぞれ独立して、水素および適合性糖から なる群から選ばれ、そしてＲ２はそれぞれ独立して、水素および適合性糖からな る群から選ばれる、請求項２２に記載の医薬組成物。
26. ２６．Ｙは−Ｏ−であり；そしてＲは−（Ａ）−Ｚ′からなる群から選ばれ、こ の式において、Ａは結合、炭素原子２−１０個を有するアルキレン基、および式 −（ＣＨ２−ＣＲ４Ｇ）ｎ−（式中ｎは１−５に等しい整数であり；Ｒ４は水素 、メチルまたはエチルからなる群から選はれ；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒 素、フェニルおよび１−３個の置換基を有し、この置換基がアミン、ヒドロキシ ル、ハロ、炭素原子１−４個を有するアルキルおよび炭素原子１−４個を有する アルコキシからなる群から選ばれるフェニルからなる群から選ばれる）で示され る残基を表わし；そしてＺ′は水素およびメチルからなる群から選ばれるか、あ るいはＧが酸素、硫黄または窒素ではなく、そしてＡが結合ではない場合に、Ｚ ′はまた、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２、−Ｃ（Ｏ ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ５および−Ｃ （Ｏ）ＮＨ（Ｒ５）２からなる群から選ばれることができ、ここでＲ５はそれぞ れ独立して、炭素原子１−４個を有するアルキルである、請求項２５に記載の医 薬組成物。
27. ２７．Ａが炭素原子２−１０個を有するアルキレンであり、そしてＺ′が−Ｃ（ Ｏ）ＯＨおよび−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５からなる群から選ばれる、請求項２６に記載の 医薬組成物。
28. ２８．Ｒ１がそれぞれ独立して、水素あるいはα−Ｌ−フコースおよびα−Ｌ− フコースの誘導体からなる群から選はれる適合性糖である、請求項２５に記載の 医薬組成物。
29. ２９．Ｒ２がそれぞれ独立して、水素あるいはα−シアリル酸およびα−シアリ ル酸の誘導体からなる群から選はれる適合性糖である、請求項２８に記載の医薬 組成物。
30. ３０．上記オリゴ糖グリコシドか、図１２に記載の式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩま たはＶＩＩを有しており、これらの式において、Ｒは水素、メチルおよび−（Ａ ）−Ｚ′（式中、Ａは炭素原子２−１０個を有するアルキレンであり、そしてＺ ′は水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ） ＮＨＲ５および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｒ５）２からなる群から選はれ、ここでＲ６は それぞれ独立して、炭素原子１−４個を有するアルキルである）からなる群から 選はれる、請求項２２に記載の医薬組成物。
31. ３１．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＩＩＩを有しており、この式において 、Ａはオクチレンであり、Ｚ′は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であ り、そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物 。
32. ３２．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＩＶを有しており、この式において、 Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、 そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物。
33. ３３．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式Ｖを有しており、この式において、Ａ はオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、そ してＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物。
34. ３４．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＶＩを有しており、この式において、 Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、 そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物。
35. ３５．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＶＩＩを有しており、この式において 、Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり 、そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物。
36. ３６．抗原にさらすと同時的に、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの有 効量を哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物の抗原に対する感受性を減少 させる方法。
37. ３７．上記オリゴ糖グリコシドを非口経投与する請求項３６に記載の方法。
38. ３８．上記オリゴ糖グリコシドを肺内に経投与する請求項３６に記載の方法。
39. ３９．上記オリゴ糖グリコシドを肺内に経投与する請求項１−５のいづれか一項 に記載の方法。
40. ４０．上記オリゴ糖グリコシドが、図２５に記載の式６５ａを有する請求項９に 記載の方法。