JPH07506404A - 綿含有織物をｃｂｈ ｉが多いセルラーゼで処理する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 産業上の利用分野 本発明は綿含有織物をセルラーゼで処理する改良された方法およびそれらの方法 を用いて作られた織物に関するものである。本発明の方法は、特に、エキソセロ ビオヒドロラーゼ夏型成分およびエンドグルカナーゼ型成分の組合せからなると 共に、エキソセロビオヒドロラーゼ夏型成分がエンドグルカナーゼ型成分と比較 して多く含まれる菌類セルラーゼ組成物を含有する水溶液に綿含有織物を接触さ せるものである。綿含有織物をそのような溶液に接触させた場合、得られた織物 は処理前の織物と比較して、例えば、感触、外観、および／または柔軟性等にお いて予期される改善がみられる。またその織物においては、完全セルラーゼ組成 物で処理した織物と比較して強度損失が小さい。

従来技術 織物に所望の特性を付与するために、織物は綿含有織物の製造中または製造直後 にセルラーゼで処理することができる。例えば、織物工業において、綿含有織物 の感触および／または外観を改善する目的で、綿含有ニットから表面の繊維を取 り除いて、ストーンウォッシュの外観を綿含有デニム等に与えるために、セルラ ーゼが用いられてきた。

特に、特開昭第５８−３６２１７号および同第５８−５４０３２号、並びに大君 等の「セルラーゼニヨル綿織物の改善」、およびＪＴＮ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　１ ９８８　ｊｏｕｒｎａｌ　ａｒｔｉｃｌｅ　ｒｆｈａｔ’ｓ　Ｎｅｗ−−Ｗｅｉ ｇｈｔ　Ｌｏｓｓ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｔｏ　５ｏｆｔｅｎ　ｔｈｅ　Ｔｏｕ ｃｈ　ｏｆ　Ｃｏｔｔｅｎ　Ｆａｂｒ奄メ@Ｊの各 々は、綿含有織物をセルラーゼで処理すると、織物の感触が改善できることを開 示している。このセルラーゼ処理は綿のけばおよび／または表面繊維を取り除き 、織物の重量を減少させるものと一般的には考えられている。これらの特性を組 み合わせると織物の感触を改善できる。すなわち、織物がよりシルクのような感 触となる。

さらに、綿含有ニット織物によくある切れた（ｂｒｏｋｅｎ）繊維および織り糸 を除去することを目的として、例えば、ジェットを用いることにより、撹拌およ びカスケージング（ｃａｓｃａｄｉｎｇ）条件下でこれらのニット織物をセルラ ーゼ溶液で処理することが従来知られている。そのように処理する場合、緩衝液 は選択した染料による染料色直しに悪影響を及ぼすと考えられているので、一般 的に緩衝液は用いられない。

さらに、撹拌およびカスケージング条件下で綿含有編物（ｗｏｖｅｎ　ｆａｂｒ ｉｃ）をセルラーゼ溶液で処理することが知られている。そのような処理を行な うと、処理後の綿含有編物は処理前の織物と比較して感触と外観が改善される。

最後に、綿含有染色デニムを撹拌およびカスケージング条件下、すなわち、回転 ドラム式の洗濯機中でセルラーゼ溶液により処理すると、「ストーンウォッシュ 」の外観がそれらのデニムに付与されることが従来より知られている。

そのような綿含有織物のセルラーゼ溶液による処理に関連する一般的な問題とし ては、処理後の織物は処理前の織物と比較して強度が著しく失なわれることが挙 げられる。このような強度の損失は、セルラーゼがセルロース（β−１，４−グ ルカン結合）を加水分解し、その結果として綿高分子の一部を破壊してしまうこ ともあるためである。綿高分子が破壊（こわされる）されればされるほど、織物 の引張り強さが減少する。

綿編物の処理に際してセルラーゼ溶液の撹拌とカスケージングを行なう方法では 反応時間が短いので、そのような方法は、撹拌とカスケージングを伴わないセル ラーゼを用いた処理方法と比較して強度損失の少ない綿含有編物を提供できると 考えられている。しかしながら、いずれにしても、そのような方法は以前として 著しく強度を損失させている。

したがって、セルラーゼによる処理によって得られた処理後の綿含有織物におい て、処理前の織物と比較して、所望の特性を高めつつ強度損失を小さくするよう に、上で述べたような従来のセルラーゼによる処理方法を改良することが特に望 ましい。

さらに、セルラーゼの菌類源は非常に大量のセルラーゼを分泌することが知られ ており、そのような菌類源の発酵方法並びにセルラーゼを単離する単離および精 製方法は従来からよく知られているので、感触および／または外観を改善する方 法にそのような菌類セルラーゼを使用することが特に好ましい。

発明の概要 本発明は、ＥＧ型セルラーゼ成分と比較してＣＢＨｌ型セルラーゼ成分を多く含 む菌類セルラーゼ組成物を用いることによって、綿含有織物を菌類セルラーゼで 処理する従来より知られている方法を改良できるという発見に関するものである 。驚いたことに、ＥＧ型成分に対するＣＢＨＩ型成分の重量比が約１０：１より 大きいセルラーゼ組成物を用いて織物を処理することにより、そのようなセルラ ーゼ組成物で処理する前の織物と比較して、感触、外観および柔軟性、色の向上 、および／またはストーンウォッシュの外観に関して改良を施すことができるこ とが分かった。したがって、本発明においては、綿含有織物を処理するのに用い られるセルラーゼ組成物を、強度損失に対しての抵抗性を有するように十分に高 濃度のＣＢＨＩ型成分を含有するように調製する。

上述点に関して、本発明の１つは、ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨｌ型セ ルラーゼ成分のタンパク質重量比が約１０：１より大きい、ＣＢＨＩ型セルラー ゼ成分およびＥＧ型セルラーゼ成分からなる菌類セルラーゼ組成物を用いること によって前述したような改良を行なう綿含有織物の菌類セルラーゼ組成物による 改良方法に関するものである。

好ましい実施態様において、ここに用いたセルラーゼ組成物はＣＢＨＩ型成分お よび１種類以上のＥＧ型成分からなり、ここで該セルラーゼ組成物は、２０：１ より大きい全ＥＧ型成分に対するＣＢＨＩ型成分のタンパク質重量比を有してい る。

本発明のもう１つは、綿含有織物を菌類セルラーゼ水溶液により処理する改良方 法に関し、その方法は、その織物に対して菌類セルラーゼ水溶液がカスケージン グ効果を生じるような条件下で菌類セルラーゼ水溶液の撹拌により行なわれる。

ここで、前述したような改良は、ＣＢＨＩ型成分および１種類以上のＥＧ型成分 からなる菌類セルラーゼ組成物を用いることにより行なわれ、そのような菌類セ ルラーゼ組成物は、全ＥＧ型成分に対するＣＢＨＩ型成分のタンパク質重量比が １０；１より大きいものである。好ましい実施態様においては、ここに用いる菌 類セルラーゼ組成物は、ＣＢＨＩ型成分および１種類以上のＥＧ型成分からなり 、全ＥＧ型成分に対するＣＢＨＩ型成分のタンパク質重量比は２０：１より大き い。

本発明の方法により処理した綿含有織物は、処理前の織物と比較して性質の向上 が予期される一方で、完全セルラーゼ組成物により処理した織物と比較して強度 損失が小さい。強度損失が小さいことは、本発明の方法が強度損失抵抗性である ことを証拠付けている。

本発明はまた、上述したような本発明の方法により処理した綿含有織物に関する ものである。

図面の簡単な説明 第１図は、ｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４の構築を説明する概略図である。

第２図は、ｐΔＥＧＩｐｙｒＧ−３の構築を説明する概略図である。

第３図は、トリコデルマ　リーセイ染色体のうちの１つのｅｇｌｌ座にｐΔＥＧ ＩｐｙｒＧ−３からのＨｉｎｄｌｌＩ断片を組み込むことによりｅｇｌｌ遺伝子 を欠失させたことを説明する概略図である。

第４図は、ｐＡΔＥＧＩＩ−１の構築を説明する概略図である。

好ましい実施態様の詳細な説明 上述したように、本発明の方法は綿含有織物をセルラーゼにより処理する従来の 方法の改良に関するものである。そのような改良は、織物に所望の改善を施す一 方で、織物の強度損失を最小限にする特定のセルラーゼ組成物を用いることによ り行なわれる。本発明の詳細な説明する前に、以下の用語を最初に定義する。

１、」 「綿含有織物」とは、細編物、綿ニット、綿デニム、綿織り糸等を含む純粋な綿 または綿混合物から作られた織物（縫われたかまたは縫われていない）を意味す る。綿混合物を用いる場合、織物に含まれる綿の量は、少なくとも締約４０重量 パーセント、好ましくは締約６０重量パーセントより多く、最も好ましくは締約 ７５重量パーセントより多い。混合物として用いる場合には、織物に用いられる 混合物質は、ポリアミド繊維（例えば、ナイロン６およびナイロン６６）、アク リル繊維（例えば、ポリアクリロニトリル繊維）、ポリエステル繊維（例えば、 ポリエチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール繊維（例えば、ビニロン ）、ポリ塩化ビニル繊維、ポリ塩化ビニリデン繊維、ポリウレタン繊維、ポリ尿 素繊維およびアラミド繊維のような合成繊維を含む１種類以上の非綿繊維を包含 することができる。レーヨンのような再生セルロースが本発明の方法における綿 の代替物として用いられると考えられている。

ここに用いている「仕上げ」とは、織物へのセルラーゼのセルロース分解活性を 実質的に妨げるように綿含有織物に十分な量の仕上剤を施すことを意味する。

仕上剤は一般的に、例えば、柔軟性、ドレープ適性（ｄｒａｐａｂｉｌｉｔｙ　 ）等のような織物の特性を高めることを目的として、織物の製造工程の最後また はその辺りで施される。そのように仕上剤を施すことにより、織物はセルラーゼ と反応しなｔｌように保護される。綿含有織物を仕上げるのに有用な仕上剤は従 来技術におｔｌて良く知られており、そのような例としては、メラミン、グリオ キサール、または尿素ホルムアルデヒド、並びにワックス、シリコン、フルオロ ケミカルおよび第４化合物（ｑｕａｒｎｅｒｎａｒｙ　）のような樹脂状物質が 挙げられる。

「セルラーゼ」または「セルラーゼ組成物」とは、菌類源から得られるセルラー 遺伝子のすべてまたは一部を包含し発現するように遺伝子的に修飾された微生物 または菌類源由来の酵素組成物を意味する（以後「菌類セルラーゼ」と称するこ ともある）。セルラーゼは、セルロースおよびその誘導体に作用してセルロース を加水分解し、主生成物であるグルコースとセロビオースを生成する。菌類セル ラーゼは、放線菌、滑走バクテリア（ｇｌｉｄｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ）　（ 変形）くクチリア：ｍｙｘｏｂａｃｔｅｒｉａ　）および真性バクテリア（ｔｒ ｕｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　）のような微生物を含む非菌類源から産生させるセル ラーゼとは区別される。ここに記載しているセルラーゼ組成物を調製するのに有 用なセルラーゼを産生できる菌類が英国特許第２，０９４、８２６Ａ号に開示さ れており、これをここに引用する。

はとんどのセルラーゼは一般的に、酸性または中性のｐＨ範囲において最適活性 を有しているが、ある菌類セルラーゼは、中性およびわずかにアルカリ性のｐＨ 範囲において著しい活性を有することが知られている。例えば、フミコラ　イン ソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ　１ｎｓｏｌｅｎｓ　）由来のセルラーゼは中性か られずかにアルカリ性のｐＨ範囲において活性を有することか知られている。

セルラーゼは、異なる基質特異性、酵素的行動パターン等を有するいくつかの酵 素分類からなることが知られている。さらに、各々の分類内の酵素成分は、異な る分子量、異なる糖鎖形成度（ｄｅｇｒｅｅｓ　ｏｆ　ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉ ｏｎ）　、異なる等電点、異なる基質特異性等を有し得る。例えば、セルラーゼ は、エンドグルカナーゼ（ＥＧ）、エキソセロビオヒドロラーゼ（ＣＢＨ）、β −グルコシダーゼ（ＢＧ）等を含むセルラーゼ分類を含み得る。一方で、バクテ リアセルラーゼ（ｂａｃｔｅｒｉａＩ　ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　）はＣＢＨ成分を ほとんどまたはまったく含まないと文献に報告されているが、バクテリアセルラ ーゼ由来のＣＢＨ状成分はエキソセロビオヒドロラーゼ活性を有することが報告 されている場合もいくらかある。

天然菌類源により産生され、１種類以上のＣＢＨ成分およびＥＧ酸成分含むセル ラーゼ組成物は（ここでＣＢＨ成分およびＥＧ酸成分各々は菌類源により産生さ れる比率で発見される）、分類物およびそこから単離されたセルラーゼの成分か ら、バクテリアおよびある菌類により産生される不完全セルラーゼ組成物から、 もしくはセルラーゼの１種類以上のＣＢＨ成分および／またはＥＧ酸成分過剰産 生ずるか、過少産生ずるかまたは産生しないように遺伝子的に修飾された微生物 より得られるセルラーゼ組成物からそのセルラーゼ組成物を区別するように、「 完全セルラーゼ系」または「完全セルラーゼ組成物」と称することもある。

セルラーゼを産生ずるための菌類を培養する発酵方法は従来技術において知られ ている。例えば、セルラーゼ系を、バッチプロセス、フェトバッチ（ｆｅｄ−ｂ ａｔｅｈ）プロセスおよび連続フロープロセスを含む、固体培養または液内培養 のいずれかにより産生ずることができる。セルラーゼ系の発酵ブイヨン（ｂｒｏ ｔｈ　）からの採取および精製は、従来技術で知られている方法によっても行な うことができる。

「エンドグルカナーゼ（ｒＥＧＪ　）型成分」とは、トリコデルマ　リーセイの エンドグルカナーゼ成分と同様の織物に対する活性の特性を有するセルラーゼ成 分の全てまたはそれら成分の組合せを意味する。この点に関して、トリコデルマ リーセイのエンドグルカナーゼ成分（特に、ＥＧ　Ｉ、ＥＧＩＩ、ＥＧ　ＩＩＩ 等の単独成分または組合成分）は、これらの成分を織物の処理媒質に含ませて綿 含有織物を処理する場合、綿含有織物に改善された感触、改善された外観、柔軟 性、色の向上、および／またはストーンウォッシュの外観を付与する（処理前の 織物と比較して）。したがって、エンドグルカナーゼ型成分は、これらの成分が 織物を処理するのに使用される媒質中に含まれるときに、綿含有織物に改善され た感触、改善された外観、柔軟性、色の向上、および／またはストーンウォッシ ュの外観を付与しく処理前の織物と比較して）、トリコデルマ　リーセイ由来の 完全セルラーゼ系による処理によって生じる綿含有織物に対する強度損失と比較 して、より低減された強度損失を付与するセルラーゼ成分である。

そのようなエンドグルカナーゼ型成分は、従来の生化学活性試験を用いてエンド グルカナーゼに従来より分類される成分を含んでいないがもしれない。例えば、 そのような従来の活性試験は、（ａ）成分のカルボキシメチルセルロース（ＣＭ Ｃ）のような溶性セルロース誘導体を加水分解し、それによりＣＭＣ含有溶液の 粘度を減少させる能力、および（ｂ）成分のリン酸膨潤セルロースのような水和 形態のセルロース（例えば、ワルセスセルロース）を容易に加水分解し、より高 度に結晶形態のセルロース（例えば、アビセル、アルカフロック等）をあまり加 水分解しない能力に基づくものである。一方、そのような活性試験により定義さ れるようなエンドグルカナーゼ成分の全てが、柔軟性、感触および色の保持もし くは復元を改善するわけではないと考えられている。したがって、ここでは、エ ンドグルカナーゼ型成分を、トリコデルマ　リーセイのエンドグルカナーゼ成分 が有するような同様の織物に対する活性の特性を有する菌類セルラーゼの成分と 定義するのがより適切である。

セルラーゼは１種類以上のＥＧ型成分を含有し得る。異なる成分は一般的に、異 なる等電点、異なる分子量、異なる糖鎖形成度、異なる基質特異性、異なる酵素 的行動パターン等を有する。それぞれの成分が異なる等電点を有することにより 、イオン交換クロマトグラフィー等によりそれらの成分を分離することができる 。実際、異なる菌類源からの成分の単離は従来技術において知られている。例え ば、５ｃｈｕｌｅｉｎ等の国際特許出願ＷＯ８９１０９２５９；　ｔｏａｄｓ等 のＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｃｅ１ｌｕｌ ｏｓｅ　Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ、　３１−５２頁（１９８８）　；　ｆｏｏｄ ｓ等のＣａｒｂｏｈｙр窒■ ｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ｓ　１９０巻、２７９−２９７頁（１９８９）　；　 ５ｃｈｕｌｅｉｎのＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌ盾■ ｙ　、　１６０巻、２３４−２４２頁（１９８８）等を参照のこと。これらの文 献の全てをここに引用する。

一般的に、ＥＧ型成分を組み合わせることにより、柔軟性、色の保持もしくは復 元および感触を改善する際に、単独のＥＧ型成分と比較して相乗反応が得られる かもしれないと思われている。一方で、単独のＥＧ型成分は、あるｐＨ範囲に亘 ってより広い活性スペクトルを有するかまたはより安定であるがもじれない。

したがって、本発明に使用されるＥＧ型成分は、単独のＥＧ型成分、または２種 類以上のＥＧ型成分の組合せのいずれであってもよい。成分の組合せを用いる場 合には、ＥＧ型成分は同一または異なる菌類源由来のものであってもよい。

ＥＧ型成分はバクテリア由来のセルラーゼから誘導することもできると考えられ ている。

「エキソセロビオヒドロラーゼ型（ｒＣＢＨＪ）成分」とは、トリコデルマリー セイのＣＢＨｌセルラーゼ成分および／またはＣＢＨＩＩｌセルラーゼ成分同様 な織物に対する活性の特性を有する菌類セルラーゼ成分を意味する。この点に関 して、ＥＧ型セルラーゼ成分（上述したような）が存在しない状況で用いる場合 、トリコデルマ　リーセイのＣＢＨｌセルラーゼ成分およびＣＢＨＩＩセルラー ゼ成分のみでは、それらにより処理した綿含有織物について、感触、外観、色お よび／またはストーンウォッシュの外観を著しく向上させることはできない。Ｅ Ｇ型成分の濃度が、約２．５：１の比率を有する全セルラーゼの比率に近付くと 、ＥＧ型成分に対するＣＢＨＩ型成分の比率が５．１より大きいセルラーゼ組成 物と比較して、強度損失が大きくなってしまう。

したがって、ＣＢＨＩ型成分およびＣＢＨＩＩＩ型成分は、それぞれトリコデル マ　リーセイのＣＢＨＩ成分およびＣＢＨＩＩ酸成分同様な織物に対する活性の 特性を有する菌類セルラーゼ成分を意味する。上述したように、ＣＢＨ１型成分 の特徴としては、５：１がら１：５までの範囲の比率でＥＧ型成分とともに用い る場合、綿含有織物の強度損失を高める特性が挙げられる。好ましい実施態様に おいてＥＣ型成分と組み合わせて用いられる場合には、トリコデルマ　リーセイ のＣＢＨＩ型成分を用いることにより洗浄能力を増強させることができる。さら に、トリコデルマ　リーセイのＣＢＨＩ型成分を、単体でまたはＥＧ型成分と組 み合わせて用いると、柔軟化能力を向上させることができる。

ｒＣＢＨＩＩ型セルラーゼ成分」とは、トリコデルマ　リーセイ由来のＣＢＨＩ Ｉのエキソセロビオヒドロラーゼ活性と同様な活性を有する成分を意味する。し たがって、本発明の組成物に使用するセルラーゼ組成物は、ＣＢＨＩ型セルラー ゼ成分およびＥＧ酸成分加えて、ＣＢＨＩＩ型セルラーゼ成分を含有し得る。上 述したように用いた場合、ＣＢＨＩＩ型セルラーゼ成分の量は一般的に、組成物 中のＣＢＨＩ型セルラーゼ成分に対して、約０．００１重量パーセントから約３ ０重量パーセントまでの範囲に亘る。しかしながら、好ましい実施態様において は、セルラーゼ組成物はＣＢＨＩＩ型セルラーゼ成分をまったく含まない。実際 、研究の結果、ＣＢＨＩと同一の濃度でＣＢＨＩＩを用いると、ＥＧ酸成分組み 合わせて用いた場合、ＣＢＨＩ型セルラーゼ成分が示した洗浄力と同様の洗浄力 をＣＢＨＩＩは示さなかった。しかしながら、ＥＧ酸成分組み合わせて用いた場 合、ＣＢＨＩＩは柔軟性を付与するかもしれないと考えられている。

そのようなエキソセロビオヒドロラーゼ型成分は、トリコデルマ　リーセイがら のＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩを特徴付けるのに用いられる試験のような活性試験 を用いた場合には慣習的にエキソセロビオヒドロラーゼに分類されない成分を含 んでいてもよい。例えば、上記成分は：（ａ）セロビオース（Ｋｉは約１ｍＭ） により競合的に阻害され；（ｂ）カルボキシメチルセルロース等のような著しく 置換されたセルロースを加水分解することができず；（Ｃ）リン酸膨潤セルロー スを加水分解できるが高結晶性セルロースをわずかしか加水分解できない。一方 、そのような活性試験によりＣＢＨ成分として特徴付けられるある菌類セルラー ゼ成分は、これらの成分を洗浄剤組成物中に単独で用いると、強度損失を最小限 にして綿含有織物について感触、外観、柔軟性、色および／またはストーンウォ ッシュの外観が改善されると考えられている。したがって、ここでは、それらの エキソセロビオヒドロラーゼをＥＧ型成分と定義するのがより適切であると考え られる。というのは、そのようなエキソセロビオヒドロラーゼはトリコデルマ　 リーセイのエンドグルカナーゼ成分が有するような織物用途の機能的特性と同様 な特性を有するからである。

精製技術により、ＣＢ　Ｈ型成分を多く含む菌類セルラーゼ組成物を得ることが できる。具体的には、文献に公表されてよ（知られている分離技術（例えば、適 切なｐＨでのイオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィ ー、サイズ排除等）により完全セルラーゼ系を実質的に純粋な成分に精製するこ とができる。例えば、イオン交換クロマトグラフィー（通常は陰イオン交換クロ マトグラフィー）においては、ｐＨグラジェント（ｇｒａｄｉｅｎｔ）　、また は塩グラジェント、もしくはｐＨと塩のグラジェントの溶離によりセルラーゼ成 分を分離することができる。精製後、必要量の所望の成分を再度組み合わせるこ とができる。

ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨＩ型セルラーゼ成分の比が必要な値である セルラーゼ成分の混合物を、成分の単離と再組合せ（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏ ｎ　）以外の方法により調製することができる。この点に関して、ＥＧ酸成分対 するＣＢＨ成分の比較的大きい比を達成するために天然の微生物の発酵条件を変 更することもできるであろう。しかしながら、この点に関して、おそら＜　ＣＢ Ｈ成分とＥＧ酸成分微生物により同等に規制されているので、ＥＧ酸成分対する ＣＢＨ成分の比を比較的太き（するために天然の微生物の発酵条件を変更する多 くの試みが失敗に終わっている。

同様に、実施例に述べるような組換え技術を用いて、ＥＧ型成分に対するＣＢＨ １型成分の比が比較的大きいセルラーゼ成分の混合物を産生ずるようにＥＧ型成 分に対するＣＢＨＩ型成分の相対比を変更することができる。

上述点に関して、ＣＢＨ型成分を多く含むセルラーゼ組成物を調製する好ましい 方法は、好ましくはいかなる異種タンパク質をも産生ずることなく、１種類以上 のＥＧ型成分を産生できないように、および／またはＣＢＨＩ型成分を過剰産生 ずるように微生物を遺伝子的に修飾することにより行なわれる。そのような場合 、ＣＢＨＩ型成分および１種類以上のＥＧ型成分を含有し、全ＥＧ型成分に対す るＣＢＨＩ型成分のタンパク質重量比か１０：１より大きいセルラーゼ組成物を 得るように、上述した修飾された微生物により産生された必要量のセルラーゼを 、天然の微生物により産生されたセルラーゼ（すなわち、ＥＧ型成分を含有する ）と組み合わせることができる。

上述点に関して、１９９０年１０月５日に出願された米国特許出願第０７１５９ ３．９１９号の一部継続出願である、１９９１年１０月４日に出願された米国特 許出願第０７／７７０．０４９号（その両方のすべてをここに引用する）は、１ 種類以上のＥＧ酸成分産生できないように、および／またはＣＢＨＩ成分を過剰 産生ずるようにトリコデルマリーセイを遺伝子操作する方法を開示している。さ らに、それらの出願の方法は、どのような異種タンパク質をも産生じないトリコ デルマ　リーセイ菌株を産生じている。代理人番号第０１００５５−０１６番で 、１９９２年４月３日に出願され、「ポリエチレングリコールを用いた実質的に 純粋なＥＧＩＩＩを産生する方法」と題する米国特許出願（ここに引用する）は 、ＥＧ　ＩとＥＧＩＩの欠失したトリコデルマ　リーセイ菌株を産生ずる方法を 開示している。同様に、Ｍｉｌｌｅｒ等のｒＤｉｒｅａｔ　ａｎｄ　Ｉｎｄｉｒ ｅｃｔ　Ｇｅｎｅ　Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｉｎ　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　 ｎ１ｄｕｌａｎｓ　Ｊ　、Ｍｏ１■モ浮撃≠秩@ａｎ ｄ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、　１７１４−１７２１頁（１９８５） は、同種ＤＮＡ線状断片を用いたＤＮＡ媒介形質転換（ＤＮＡ　ｍｅｄｉａｔｅ ｄ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　）によりアスペルギルス　ニジュランス中 の遺伝子を欠失させる方法を開示している。

上述点に関して、ＥＧ　Ｉ型、ＥＧＩＩ型および／またはＥＧＩＩＩ型セルラー ゼ成分を産生ずることのできる遺伝子を欠失させることにより、セルラーゼ組成 物中に存在するＣＢＨＩ成分の量を多くする効果をもたらす。

さらに、ＥＧ型成分に対するＣＢＨＩ塑成分の特定の比を達成するように、従来 の方法により精製された必要量の１種類以上のＥＧ型成分を、ＥＧ型成分を産生 できないように遺伝子操作された微生物がら産生されたセルラーゼ組成物に加え ることができる。すなわち、ＣＢＨＩ塑成分が多くなるようにすべてのＥＧ型成 分を含まないセルラーゼ組成物を１重量パーセントのＥＧ型成分を癌湯用させる ように、対応する量の精製したＥＧ型成分を単に加えることにより調節すること ができる。

「β−グルコンダーゼ（ＢＧ）成分」とは、ＢＧ活性を有するセルラーゼの成分 を意味する。すなわち、そのような成分は、セロビオースおよび池の溶性セロオ リゴ糖（「セロビオース」）の非還元末端から作用し始め、唯一の生成物として グルコースを生成する。ＢＧ酸成分、セルロース高分子上には吸着されず、また セルロース高分子とは反応しない。さらに、そのようなりＧ成分はグルコース（ Ｋｉは約１ｍＭ）により競合的に阻害される。厳密な意味で言うと、ＢＧ酸成分 セルロースを分解しないので本当はセルラーゼではない。そのようなりＧ成分は 、ＣＢＨ成分およびＥＧ酸成分組み合わされた作用により生成される阻害セルロ ース分解生成物（特にセロビオース）をさらに分解することによって、全体的な セルロースの分解を促進させるので、セルラーゼ系の定義に含まれる。ＢＧ酸成 分存在しない場合には、結晶性セルロースは緩やかな加水分解またはわずかな加 水分解しかされない。ＢＧ酸成分しばしば、ｐ−二トロフェノールＢ−Ｄ−グル コシド（Ｐ　Ｎ　Ｐ　Ｇ）のようなアリール基質により特徴付けられ、しばしば アリール−グルコシダーゼと称される。あるアリール−グルコシダーゼはセロビ オースを加水分解しないので、すべてのアリール−グルコシダーゼがＢＧ酸成分 あるわけではないことに注意されたい。

セルラーゼ組成物中にＢＧ酸成分含有したりしなかったりすることにより、組成 物中のＣＢＨ成分の活性を調節することができると思われる。特に、セロビオー スはＣＢＨ成分によるセルロースの分解中に生成され、高濃度のセロビオースは ＣＢＨ活性を阻害することが知られており、さらにそのようなセロビオースはＢ Ｇ酸成分よりグルコースに加水分解されるので、セルラーゼ組成物中にＢＧ酸成 分存在しない場合には、セロビオースの濃度が阻害レベルに達するとＣＢＨ活性 を「消失」させてしまう。１種類以上の添加物（例えば、セロビオース、グルコ ース等）をセルラーゼ組成物に添加して、ある程度またはすべてのＣＢＨＩ型活 性、並びに他のＣＢＨ活性を直接的または間接的に、効果的に「消失」させるこ ともできると考えられている。一方、ｃＢＨ成分により分解されるセロビオース のレベルが、ＢＧ酸成分加えられながったときの全体的な加水分解の制限範囲に 達した場合、添加された量だけＢＧ酸成分含有するセルラーゼ組成物は、セルロ ースの全体的な加水分解を促進させるがもじれない。

セルラーゼ組成物中のＢＧ酸成分量を増加させたり減少させたりする方法が、１ ９９０年１２月１０日に出願された米国特許出願第０７／６２５．１４０号の一 部継続出願である、代理人番号０１００５５−０７７として１９９１年１２月１ ０日に出願され、「クローニングによるセルロースの改良糖化およびトリコデル マ　リーセイからのβ−グルコシダーゼの増幅」と題する米国特許出願第０７／ ８０７．０２８号に開示されている。これらの出願をここに引用する。

菌類セルラーゼは１種類以上のＢＧ酸成分含有し得る。異なる成分は一般的に異 なる等電点を有する。このような異なる等電点により、イオン交換クロマトグラ フィー等を用いて分離を行なうことができる。単独のＢＧ酸成分たはＢＧ酸成分 組合せのいずれを用いることもてきる。

ＢＧ酸成分洗浄剤組成物中に用いる場合、一般的に、ＣＢＨ成分およびＥＧ酸成 分より生じるセロビオース、特にＣＢＨＩ型セルラーゼ成分により生しるセロビ オースによる阻害を防ぐのに十分な量でＢＧ酸成分添加する。添加するＢＧ酸成 分量は、織物を処理する組成物の媒質中に生成されるセロビオースの量に依存し 、当業者によって容易に決定される。しがしながら、そのように用いた場合、セ ルラーゼ組成物中に存在するＣＢＨ型成分成分するＢＧ酸成分重量パーセントは 、好ましくは約０．２重量パーセントから約１０重量パーセントまでの範囲、よ り好ましくは約０．５重量パーセントから約５重量パーセントまでの範囲である 。

本発明に使用するセルラーゼ組成物を調製するのに使用される好ましいセルラー ゼは、トリコデルマ　リーセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｃｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ）、ト リコデルマ　コニンギイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉｉ）　、ペ ニシリウム　ｓ　ｐ、（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ、　）、フミコラ　イン ソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ　１ｎｓｏｌｅｎｓ　）等から得られる。あるセル ラーゼ、すなわち、セルキャスト（デンマーク、コペンハーゲン、ノボインダス トリーから得られる）、ラピダーゼ（オランダ、デルフト、Ｎ、Ｖｌ、ギストブ ロケーズから得られる）、シトラーゼ１２３（カリフォルニア州、サウスサンフ ランシスコ、ジエネンカーインターナショナルから得られる）等が市販されてい る。

他のセルラーゼも、従来技術において知られている発酵および単離方法により容 易に単離できる。

「緩衝液」とは、綿含有織物のセルラーゼ処理中において望ましくないｐＨの移 動に対してセルラーゼ溶液を安定にする、業界で知られている酸試薬と塩基試薬 を意味する。この点に関して、セルラーゼ活性はｐＨ依存性であることが従来よ り知られている。すなわち、特定のセルラーゼ組成物は、限定されたｐＨ範囲内 においてセルロース分解活性を示し、最適なセルロース分解活性は一般的にこの 限定された範囲の狭い範囲内に発見される。セルロース分解活性が発揮される特 定のｐＨ範囲は各々のセルラーゼ組成物により異なる。上述したように、多くの セルラーゼは酸性のｐＨ値から中性のｐＨ値までの範囲のプロファイル内におい てセルロース分解活性を示すが、アルカリ性のｐＨプロファイルにおいてセルロ ース分解活性を示すセルラーゼ組成物もある。

綿含有織物のセルラーゼ処理中において、セルラーゼ溶液の最初のｐＨがセルラ ーゼ活性に要求される範囲から外れることもある。さらに、例えば、溶液のｐＨ を変えてしまう反応生成物が生成されることにより、綿含有織物の処理中にｐＨ が変化することもある。いずれの場合においても、緩衝されていないセルラーゼ 溶液のｐＨは、セルロース分解活性に要求される範囲から外れてしまう。そのよ うな場合、セルラーゼ溶液内において、ヒルロース分解活性が望ましくなく小さ くなってしまうか、またはなくなってしまう。例えば、酸性のｐＨ範囲に活性プ ロファイルを有するセルラーゼを中性の緩衝していない水溶液に用いると、溶液 のｐＨのためにセルロース分解活性が小さくなってしまうかもしれない。一方で 、中性またはアルカリ性のｐＨプロファイルを有するセルラーゼを中性の緩衝し ていない水溶液に使用する場合、最初は著しいセルロース分解活性を示すはずで ある。

上述点に関して、セルラーゼ溶液のｐＨを、セルロース分解活性に要求される範 囲内に維持するべきである。このことを達成する１つの手段は、その系のｐＨを 単にモニタして、必要に応じて酸または塩基を加えてｐＨを調節することによる ものである。しかしながら、好ましい実施態様においては、セルラーゼ溶液中に 緩衝液を使用して所望のｐＨ範囲内に系のｐＨを好ましく維持する。一般的に、 使用するセルラーゼが活性を示す範囲内に溶液のｐｔ−ｉを維持するように、十 分な量の緩衝液を用いる。異なるセルラーゼ組成物においてはセルラーゼ活性を 示すｐＨ範囲が異なるので、使用する特定の緩衝液は使用する特定のセルラーゼ 組成物に関連して選択される。使用するセルラーゼ組成物に用いるために選択さ れた緩衝液は、使用するセルラーゼ組成物に最適なｐＨ範囲並びにセルラーゼ溶 液のｐ）（を考慮して当業者により容易に決定される。好ましくは、使用する緩 衝液は、セルラーゼ組成物と相溶性であり、最適活性に要求されるｐＨ範囲内に セルラーゼ溶液のｐＨを維持する緩衝液である。適切な緩衝液の例としては、ク エン酸ナトリウム、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム、 および従来技術において知られている他の緩衝液が挙げられる。

「分解抵抗性」とは、本発明のセルラーゼ組成物が綿織物を分解する能力が減少 した状態にあることを意味する。一般的には、セルラーゼ組成物による綿織物の 分解は、綿織物の薄くなる程度、弱くなる程度および／または裂ける程度により 測定される。

分解は、各々の衣類またはスヮッチの引張り強さを試験することにより測定され る。綿含有織物の引張り強さを、互いに直角な縦方向と横方向で測定することが できる。したがって、ここに用いている「縦引張り強さ」とは、綿含有織物の長 さに沿って測定した綿含有織物の引張り強さを意味し、一方「横引張り強さ」と は、綿含有織物の幅を横切って測定した綿含有織物の引張り強さを意味する。

処理による強度減少効果をめるために、セルラーゼ溶液により処理して得られた 綿含有織物の引張り強さを、セルラーゼ溶液で処理する前の引張り強さと比較す る。引張り強さがあまりに減少した場合には、得られた綿含有織物は容易に裂け る、および／または孔を形成してしまう。したがって、処理後の引張り強さく縦 および横）を処理前の引張り強さと比較して少なくとも約５０％に維持すること が望ましい。

綿含有織物の引張り強さの測定は、ＡＳＴＭ　Ｄ１６８２試験方法論にしたがっ て容易に行なうことができる。そのような織物の引張り強さを試験するのに適し た装置の例としては、スコツトテスターまたはインストロンテスター等が挙げら れる。その両方は市販されている。セルラーゼ溶液により処理した綿含有織物の 引張り強さを試験する際に、処理後でありなおかつ試験前の織物が収縮しるのを 防ぐように注意しなければならない。そのような収縮が生じると、引張り強さの データが誤ったものになってしまう。

ＣＢＨＩＩ成分は、ＣＢＨＩと同一の濃度で用いる場合、柔軟性を付与すると考 えられている。本発明のさらなる実施例として、柔軟性が望まれる場合、ＣＢＨ ＩＩ成分をＣＢＨＩ成分の代わりに用いてもよい。柔軟化に効果的な量を提供す るために、ＣＢＨＩ成分の代わりにまたはそれに加えてＣＢＨ１！を本発明に用 いる場合には、ＥＧ酸成分対するＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ酸成分比は好ましく は１０：１、より好ましくは２ｏ　１である。

本発明は、全セルラーゼまたは相当な量のＥＧ型成分を含有するセルラーゼによ り綿含有織物に従来付与された有利な特性は、ＥＧ型成分に対するＣＢＨＩ塑成 分の比が１０：１より太きく４００：１までの範囲、より好ましくは約１０：１ より太き（約１００：１までの範囲で、いくらかＥＧ酸成分含有するセルラーゼ 組成物によっても綿含有織物に付与されるという発見に関するものである。ＥＧ 型成分に対するＣＢＨＩ塑成分の比がより大きいときには、これらのセルラーゼ 組成物の有利な効果は、繰り返しの処理によって明確となる。所望の有利な特性 を付与するだけでなく、ここに記載したセルラーゼ組成物はそのような有利な特 性を強度損失が小さい状態で達成する。

綿含有織物を向上させることは、従来使用した方法により行なわれる。例えば、 感触の改善された綿含有織物は、特開昭５８−３６２１７号および同５８−５４ ０３２号、並びに大君等の「セルラーゼによる綿織物の改質」およびＪ　Ｔ　Ｎ 　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　１９８８　ｊｏｕｒｎａｌ　ａｒｔｉｃｌｅ　ｒＷｈａｔ ’　ｓ　Ｎｅｗ−−ｆｅｉｇｈｔ　Ｌｏｓｓ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｔｏ　５ｏ ｆｔｅｎ　ｔｈｅ　Ｔ盾浮モ■@ｏｆ Ｃｏｔｔｏｎ　Ｆａｂｒｉｃ　Ｊにより生産できる。これらの教示をここに引用 する。

同様に、綿含有織物の感触と外観の両方を改善する方法は、溶液が撹拌され、綿 含有織物に対してセルラーゼ溶液がカスケージング効果を達成するような条件下 でセルラーゼを含有する水溶液にその織物を接触させる。そのような方法を行な うと、得られた綿含有織物の感触と外観が改善される。そのような方法は、１９ ９０年１０月１６日に出願された米国特許出願第０７１５９８．５０６号に記載 されており、これをすべてここに引用する。

綿含有ニットを向上させる方法が、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｔｅｘｔｉｌ ｅ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、　Ｄｙｅｉｎｇ／Ｐｒｉｎｔｉｎｇ／Ｆｉｎｉｓｈｉｎ ｇ　、　５頁、第二四半期、１９９０に記載されており、ここに引用する。

同様に、ストーンウォッシュの外観を綿含有デニムに付与する方法が、米国特許 第４．８３２．８６４号に記載されており、このすべてを引用する。

セルラーゼ組成物による処理によって綿含有織物を向上させる他の方法は従来技 術において知られている。好ましくは、そのような方法において、綿含有織物の セルラーゼによる処理は、綿含有織物の仕上げの前に行なわれる。

上述したように、本発明は、処理した織物の強度損失を最小限にする特定のセル ラーゼ組成物を用いているので、本発明は綿含有織物を処理する従来技術の方法 を改良したものである。ここに用いたセルラーゼ組成物は、ＣＢＨＩ型成分色成 分型成分とからなる菌類セルラーゼ組成物であり、全ＥＧ型成分に対するＣＢＨ Ｉ塑成分の重量比は１０．１より大きいものである。

さらに、ここに記載したセルラーゼ組成物を使用すると、応力の加えられた綿含 有織物（ｓｔｒｅｓｓｅｄ　ｃｏｔｔｏｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｆａｂｒｉ ｃｓ）の織物と色の向上がみられる。

特に、綿含有織物の製造中に、織物に応力が加えられることがあり、そのような 場合には、切れたり乱れた繊維を含むこととなる。そのような繊維は、織物の外 観をすり切れてさえないものにしてしまう。しかしながら、本発明の方法により 処理を行なうと、そのように応力か加えられた織物は織物と色の向上が認められ る。このことは、切れて乱れた繊維のいくらかが除去され、それによって応力が 加えられる前の織物の外観に回復するためであると考えられている。

さらに、ＥＧ型成分がＥＧＩＩＩ型成分で島成分顔料型の染料により染色した織 物（例えば、デニム）を処理するに際して、ここに記載したセルラーゼ組成物を 用いることにより、染料の再付着か少なくなるかもしれないと考えられている。

上述したセルラーゼ組成物を、セルラーゼおよび他の必要に応じて含有できる成 分（例えば、緩衝液、界面活性剤、精練剤等）を含む水溶液に使用する。この溶 液に使用するセルラーゼ組成物の濃度は一般的に、意図する目的に十分な濃度で ある。すなわち、ある量のセルラーゼ組成物を使用して、綿含有織物の所望の特 徴を向上させる。使用するセルラーゼ組成物の量は、使用する器具、使用する工 程のパラメータ（セルラーゼ溶液の温度、セルラーゼ溶液にさらす時間等）、セ ルラーゼ活性（例えば、セルラーゼ溶液は、小さな活性のセルラーゼ組成物の場 合と比較して、より大きな活性のセルラーゼ組成物ではより低濃度であることが 必要である）等にも依存する。セルラーゼ組成物の正確な濃度は、上記要因並び に所望の効果に基づいて当業者により容易に測定できる。好ましくは、ここに使 用するセルラーゼ溶液中のセルラーゼ組成物の濃度は、セルラーゼ溶液の約０゜ ０１ｇ／ｌからセルラーゼ溶液の約５０．０ｇ／Ｉまでの範囲、より好ましくは セルラーゼ溶液の約０．０５ｇ／Ｉからセルラーゼ溶液の約１０．０ｇ／ｌまで の範囲である（上述したセルラーゼ濃度は全タンパク質の重量を意味する）。

緩衝液をセルラーゼ溶液に用いる場合、セルラーゼ水溶液中の緩衝液の濃度は、 使用するセルラーゼが、該セルラーゼの性質に基づく活性を示すｐＨ範囲内に溶 液のｐＨを維持するのに十分な濃度である。使用する緩衝液の正確な濃度は、当 業者が容易に考慮できるい（つかの要因に依存する。例えば、好ましい実施態様 において、緩衝液並びに緩衝液の濃度は、最適なセルラーゼ活性に必要なｐＨ範 囲内にセルラーゼ溶液のｐＨを維持するように選択される。一般的に、セルラー ゼ溶液の緩衝液濃度は約０．００５　Ｎ以上である。好ましくは、セルラーゼ溶 液中の緩衝液の濃度は、約０．０１　Ｎから約０．５Ｎまでの範囲、より好まし くは約０．０５Ｎから約０．１５Ｎまでの範囲である。セルラーゼ溶液中の緩衝 液の濃度を増加させて、処理した織物の引張り強さの損失速度を大きくすること も可能であろう。

湿潤性を改善するために、セルラーゼ溶液は、セルラーゼと緩衝液に加えて少量 の界面活性剤を必要に応じて含有することができる。使用する界面活性剤の量は 一般的に、約２重量パーセント未満であり、好ましくは約０．０１重量パーセン トから約２重量パーセントまでの範囲であるが、いずれの場合においても、洗浄 に効果的な量より少ない。適した界面活性剤は、セルラーゼおよび織物と相容性 であるどのような界面活性剤であってもよく、それら例としては、陰イオン界面 活性剤、非イオン界面活性剤および両性界面活性剤が挙げられる。

本発明に使用するのに適した陰イオン界面活性剤の例としては、線状または枝分 れアルキルベンゼンスルホネート；線状または枝分れアルキル基もしくはアルケ ニル基を有するアルキルまたはアルケニルエーテルスルフェート；アルキルまた はアルケニルスルフェート、オレフィンスルホネート；アルカンスルホネート等 が挙げられる。陰イオン界面活性剤にとって適した対イオンの例としては、ナト リウムおよびカリウムのようなアルカリ金属イオン：カルシウムおよびマグネシ ウムのようなアルカリ土類金属イオン：アンモニウムイオン：および炭素数２ま たは３のアルカノール基を１から３までの範囲で有するアルカノールアミンが挙 げられる。

両性界面活性剤の例としては、第４アンモニウム塩スルホネート、ベタイン型両 性界面活性剤等が挙げられる。上記両性界面活性剤は、同一の分子内に正に荷電 した基と負に荷電した基の両方を有する。

非イオン界面活性剤の例としては、ポリオキンアルキレンエーテル、高級脂肪酸 アルカノールアミドまたはそのアルキレン酸化物付加物、脂肪酸グリセリンモノ エステル等が挙げられる。

界面活性剤の混合物を用いることもできる。

ここに用いる溶液比、すなわち、織物の重量に対するセルラーゼ溶液の重量比は 一般的に、締金を織物の特徴を望ましく向上させるのに十分な量であり、使用す る工程および向上させる特徴に依存する。好ましくは、溶液比は一般的に、約０ ．１　・１より大きく、より好ましくは約１：１より大きく、さらにより好まし くは約１０゜１よりも大きい。約５０：１よりも大きい溶液比を用いることは、 経済的な見地から見て通常好ましくない。

セルラーゼ処理の反応温度は２つの競合要因により決定される。第１に、高温は 一般的に増大した反応運動学、すなわち、より速い反応に対応する。このことに より、低温に必要な反応時間と比較して反応時間が短くなる。したがって、反応 時間は一般的に少なくとも約３０℃以上である。第２に、セルラーゼは所定の反 応温度を越えてしまうと活性を失うタンパク質であり、その温度は使用するセル ラーゼの性質に依存する。そのため、反応温度が高すぎると、セルラーゼが変質 してしまい、その結果としてセルロース分解活性は失われる。その結果として、 ここに使用する最大反応温度は一般的に約６５℃である。上述点に関して、反応 温度は一般的に、約３０℃から約６５℃までの範囲、好ましくは約３５℃から約 ６０℃までの範囲、より好ましくは約３５℃から約５０℃までの範囲である。

反応時間は一般的に、約０．１時間から約２４時間までの範囲、好ましくは約０ ．２５時間から約５時間までの範囲である。

上記セルラーゼ組成物を用いて上述した方法により処理した綿含有織物において は、完全セルラーゼ組成物により同様な方法により処理した同様の綿含有織物と 比較して強度損失が低減している。

好ましい実施態様において、ここに記載した方法に使用するために、濃縮物を調 製することもできる。そのような濃縮物は、濃縮した量の上記セルラーゼ組成物 、緩衝液、界面活性剤を、好ましくは水溶液中に含有する。上述したように配合 すると、これらの添加物を必要濃度で含有するセルラーゼ溶液を素早く正確に調 製するように、上記濃縮物を容易に水により希釈できる。好ましくは、そのよう な濃縮物は、約０．１重量パーセントから約５０重量パーセントの上記セルラー ゼ組成物（タンパク質）：約１０重量パーセントから約５０重量パーセントの緩 衝液；約１０重量パーセントから約５０重量パーセントの界面活性剤、および約 ０重量パーセントから約８０重量パーセントまでの水からなる。濃縮水溶液を配 合した場合、セルラーゼ溶液中で成分が必要な濃度となるように、これらの濃縮 物を約２倍から約２００倍までの範囲に希釈できる。明らかなように、そのよう な濃縮物を用いれば、セルラーゼ溶液を容易に配合でき、使用する場所まで便利 に持ち運びできる。上述したセルラーゼ組成物を、液体希釈物、細粒、エマルジ ョン、ゲル、ペースト等の濃縮物に添加することができる。そのような形態は当 業者によく知られている。

固体のセルラーゼ濃縮物を用いる場合、セルラーゼ組成物は一般的に、細粒、粉 末、凝集塊等である。細粒を用いる場合、好ましくは、セルラーゼ保護剤を過含 有するように細粒を配合する。例えば、代理人番号第０１００５５−０７３番で １９９１年１月１７日に出願され、「酵素および酵素保護剤の両方を含有する細 粒並びにそのような細粒を含有する洗浄剤組成物」と題する米国特許出願第０７ ／６４２．６６９号を参照のこと。この出願のすべてをここに引用する。同様に 、細粒の洗濯媒質中への溶解速度を遅くする物質を含有するように、細粒を配合 することもできる。そのような物質および細粒は、代理人番号第ＧＣ３１７１− ＵＳＩで１９９１年１月１７日に出願され、「粒状組成物」と題する米国特許出 願第０７／６４２．５９６号に開示されている。この出願のすべてをここに引用 する。

ここに記載したセルラーゼ組成物はさらに、液体かまたはスプレーの形態で、ブ リウォッシュ（ｐｒｅ−ｖａｓｈ）およびプリソーク（ｐｒｅ−ｓｏａｋ）に用 いられると考えられる。ここに記載したセルラーゼ組成物を、織物の外観と色を 向上させるのに適した独立型の組成物（ｓｔａｎｄａｌｏｎｅ　ｃｏｍｐｏｓｉ ｔｉｏｎ）として家庭用に使用することもできる。例えば、米国特許第４．７３ ８．６８２号を参照のこと。この特許をすべてここに引用する。

以下の実施例は本発明を説明することを意図したものであり、本発明の請求の範 囲を限定するものとして考えるべきではない。

実施例 実施例１−−セルラーゼ成分の分画 野生型トリコデルマ　リーセイ由来の市販されているセルラーゼ系（カリフォル ニア州、サウスサンフラッジスコ、ジエネンカーインターナショナル社）である シトラーゼ１２３を分画した。このセルラーゼ系におけるセルラーゼ成分の標準 的な分布は以下のとおりである： ＣＢＨＩ　４５−５５重量パーセント ＣＢＨＩＩ　１３−１５重量パーセントＥＧ　Ｉ　１１−１３重量パーセント ＥＧ　ＩＩ　８−１０重量パーセント ＥＧＩＩＩ　４重量パーセント未満 ＢＧ　０．５−１重量パーセント 分画は以下の樹脂を含有するカラムを用いて行なった：シグマケミカル社（ミズ ーリ州、セントルイス）から得られるセファデックスＧ−２５ゲル濾過樹脂、Ｉ ＢＦバイオテクニクス（メアリーランド州、サベージ）から得られるＱＡトリス アクリルＭ陰イオン交換樹脂およびＳＰトリスアクリルＭ陽イオン交換樹脂。１ ０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液でｐＨ６，８としたセファデックスＧ−２５ゲ ル濾過樹脂が充填された３リツトルのカラムを用いて、シトラーゼ１２３セルラ ーゼ０゜５ｇを脱塩させた。１０ｍ　Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液でｐＨ６，８ にしたＱＡトリスアクリルＭ陰イオン交換樹脂か充填された２０ｍ　ｌのカラム に、脱塩した溶液を装填した。このカラムに結合した分画はＣＢＨＩおよびＥＧ 　Ｉを含有していた。０から５００ｍＭの塩化ナトリウムを含有する水性グラジ ェント（ａｑｕｅｏｕｓ　ｇｒａｄｉｅｎｔ）を用いてグラジェント溶離により これらの成分を分離した。このカラムに結合した分画はＣＢＨＩＩ、ＥＧＩＩお よびＥＧＩＩＩを含有していた。

］ＯｍＭのクエン酸ナトリウムによりｐＨ４，５としたセファデックスＧ−２５ ゲル濾過樹脂のカラムを用いてこれらの分画を脱塩させた。この溶液２００　ｍ 　ｌを、ＳＰトリスアクリルＭ陽イオン交換樹脂が充填された２０ｍ　ｌのカラ ムに装填した。０から約２００ｍＭの塩化ナトリウムを含有する水性グラジェン トを用いてＣＢＨＩＩ、ＥＧＩＩ、およびＥＧＩＩＩを別々に溶離させた。

実施例１の方法と同様な方法により、それぞれ成分に分離できる他のセルラーゼ 系の例としては、セルキャスト（デンマーク、コペンハーゲン、ノボインダスト リーから得られる）、ラピダーゼ（オランダ、デルフト、Ｎ、Ｖ、　、ギストブ ロケードから得られる）、およびトリコデルマ　コニンギイ、ベニンリウム　５ ９９等由来のセルラーゼ系が挙げられる。

実施例２−−セルラーゼ組成物による柔軟化の検定この実施例の目的は、界面活 性剤を含まない状態でセルラーゼ組成物の柔軟化効果を測定することにある。

トリコデルマ　リーセイ微生物を１種類以上のＥＧ型成分を産生できないように 遺伝子的に修飾することによりあるセルラーゼ組成物を産生じた。そのような方 法では、いかなる異種タンパク質をも産生じない。セルラーゼ組成物を産生ずる のに用いた方法は、１９９０年１０月５日に出願された米国特許出願第０７１５ ９３．９１９号の一部継続出願である、１９９１年１０月４日に出願された米国 特許出願第０７／７７０．０４９号（その両方の出願のすべてをここに引用する ）に開示されている。これらの組合せを以下に示すスワッチ洗濯方法に用いた。

この方法は、異なるセルラーゼ組成物の綿スワッチを柔軟にする能力を試験する ものである。この方法において、柔軟性はパネリストのグループによる全体の織 物の感触により測定する。

洗濯機（ユニマック、容量５０ポンド、回転ドラム）を９．５ガロンの冷水で満 たした。洗濯機に緩衝液（４２グラムの無水クエン酸および１０１グラムの二塩 基リン酸ナトリウム）を加えた。洗濯液の温度を４０℃に調節し、試験するセル ラーゼ組成物を加えた。必要な場合には、クエン酸またはリン酸ナトリウムを加 えることにより、ｐＨ値を５．０に調節した。３枚のテリー織りの１００％綿タ オル（２５インチ×４６インチ）を６０−８０℃、３７ｒｐｍで４５分間に亘り 洗濯し、最大４６０ｒｐｍで２分間に亘り脱水した。それらのタオルを５分間に 亘り３４℃の２４ガロンの水で濯いだ。それらのタオルを最大４６０ｒｐｍで２ 分間に亘り再度脱水した。タオルを約６０−８０℃の高温に設定した従来の乾燥 機内で５０分間に亘り乾燥させた。

洗濯後、タオルにラベルを付け（織物をどのように処理したかをパネリストに知 らせないため）、パネリストのグループによる織物全体の感触により、および機 械化した試験方法により柔軟性についてタオルを試験した。パネリストは「柔ら かい」織物と「粗い」織物の選択肢により織物を評価した。

分析した最初の群の織物は、ＥＧ　ＩおよびＥＧＩＩを発現できないように、以 下に記載したのと同様な方法で遺伝子的に修飾したトリコデルマ　リーセイから 調製したＥＧ　ＩおよびＥＧＩＩ欠失セルラーゼ組成物により処理したものであ る。ＥＧ　ＩおよびＥＧＩＩはセルラーゼ組成物の約２３重量パーセントまでの 範囲を構成するので、この成分を欠失させることにより、全ＣＢＨ成分のレベル が多くなる。さらに、ＥＧＩおよびＥＧＩＩ以外のＥＧ酸成分、完全セルラーゼ 組成物の約５重量パーセントを構成するので、ＥＧ　ＩおよびＩＩ欠失セルラー ゼ組成物中のＥＧに対するＣＢＨの比は少なくとも約１２＝１であった。

分析した２番目の群の織物は、セルラーゼ組成物を含有しない対照溶液により処 理したものであった。

ＥＧ　ＩとＩＩの欠失したセルラーゼ組成物により処理した綿織物は、セルラー ゼ組成物を含まない対照溶液により処理した綿織物と比較すると、柔軟性が増大 していた。ＥＧ　ＩとＩＩの欠失したセルラーゼ組成物は、ＣＢＨＩ成分とＥＧ 酸成分含有するセルラーゼ組成物からなり、ここでＥＧ酸成分対するＣＢＨ！成 分の重量比は少なくとも１０：１である。この予期された結果は、界面活性剤の 存在下でＥＧ酸成分対するＣＢＨＩ成分の重量比が少なくとも１０：１である、 ＣＢＨＩ成分およびＥＧ酸成分らなるセルラーゼ組成物が綿含有織物を柔軟にす るという発見により示唆されている。代理人番号０１００５５−１０３番で１９ ９２年５月１日に出願され、［セルラーゼに基づく分解性低減洗浄剤組成物］と 題する米国特許出願を参照のこと。この出願をここに引用する。

実施例３−一トリコデルマ　リーセイのｐｙｒ４−誘導体の選択ｐｙｒ４遺伝子 は、ウリジンの生合成に必要な酵素であるオロチジン−５′−モノホスフェート デカルボキシラーゼをコード化する。毒性抑制因子５−フルオロオロチン酸（Ｆ ＯＡ）は、野生型細胞によってウリジンに取り込まれ、細胞の力をなくさせる。

しかしながら、ｐｙｒ４遺伝子の欠損した細胞は、この抑制因子に対して抵抗性 を有するが、成長のためにはウリジンを必要とする。したがって、ＦＯＡを用い てｐｙｒ４誘導体菌株を選択することが可能である。実際には、トリコデルマ　 リーセイ菌株ＲＬ−Ｐ３７の胞子（Ｓｈｅｉｒ−Ｎｉｅｓｓ、　Ｇ、およびＭｏ ｎｔｅｎｅｃｏｕｒｔ、Ｂ、ｓ、　、Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｂｉ ｏｔｅｃｈｎｏｌ、、２０．４６−５３頁（１９８４）　）を、２ｍｇ／ｍ＋の ウリジンおよび１．２　ｍ　ｇ／ｍ　ｌのＦＯＡを含有する凝固した培地の表面 上に広げた。３．４日以内に自発的なＦＯＡ抵抗性コロニーが発生し、成長のた めにウリジンを必要とするＦＯＡ抵抗性誘導体を同定することができた。特に欠 損ｐｙｒ４遺伝子を有する誘導体を確認するために、プロトプラストを調製し、 野生型ｐｙｒ４遺伝子を含有するプラスミドにより形質転換した（実施例５およ び６を参照のこと）。形質転換後、プロトプラストをウリジンの欠落した培地上 に平板培養させた。形質転換したコロニーの続いての成長は、プラスミド生れの （ｐｌａｓｍｉｄ−ｂｏｒｎｅ　）　ｐ　ｙ　ｒ　４遺伝子による欠損ｐｙｒ４ 遺伝子の補完（ｃｏｉｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　）を示した。このようにして 、菌株ＧＣ６９を菌株ＲＬ−Ｐ３７のｐｙｒ４−誘導体として確認した。

実施例４−−ＣＢＨＩ欠失ベクターの調製ＣＢＨＩタンパク質をコード化するｃ ｂｈｌ遺伝子を、既知のプローブ合成方法（Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ等、１９８３ｂ 　）を用いてこの遺伝子について公表されている配列に基づいて設計したオリゴ ヌクレオチドプローブによる雑種形成により、トリコデルマ　リーセイ菌株ＲＬ −Ｐ３７のゲノムＤＮＡからクローニングした。ｃｂｈ１遺伝子は、６．５ｋｂ のＰｓｔｌ断片上にあり、Ｐｓｔｌ切断ｐＵＣ４Ｋ　にュージャージー州、ピス キャタウェイ、ファーマシア社から購入した）中に挿入し、従来技術で知られて いる技術を用いてこのベクターのＫａｎ’遺伝子を置換した。そのような技術は Ｍａｎｉａｔｉｓ等（１９８９）に記載されており、これをここに引用する。得 られたプラスミドｐＵＣ４に：　：ｃｂｈｌをＨ４ｎｄｌ　Ｉ　Ｉにより切断し 、約６ｋｂの大きな断片を単離して再連結しｐＵｃ４に：　：ｃｂｈｌΔＨ／Ｈ を得た（第１図参照）。この方法により、金縁ｃｂｈｌ暗号配列および約１．２ ｋｂ上流と１．５ｋｂ下流のフランキング配列を除去する。元のＰｓｔｌ断片の いずれかの末端から約１ｋｂのフランキングＤＮＡは残存している。

前出のＭａｎｉａｔｉｓ等の方法にしたがって、トリコデルマ　リーセイｐｙｒ ４遺伝子をｐＵｃ１８内のゲノムＤＮＡの６．５ｋｂのＨｉｎｄｌｌｌ断片とし てクローニングし、ｐＴｐｙｒ２を形成させた（Ｓｗｉｔｈ等、１９９１）　、 プラスミドｐＬｌｃ４に：　：　ｃｂｈｌΔＨ／ＨをＨｉｎｄｌｌｌにより切断 し、両末端をウシ腸内アルカリ性ホスファターゼにより脱リン酸化させた。この 末端脱リン酸化ＤＮＡを、トリコデルマ　リーセイｐｙｒ４遺伝子を含有する６ □５ｋｂのＨｉｎｄｌ１１断片と連結しｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４を得た。第１図は 、このプラスミドの構築を説約５Ｘ１０’のトリコデルマ　リーセイＧＣ６９胞 子（ｐｙｒ４−誘導体菌株）を存する５００　ｍ　ｌのフラスコ内に１００　ｍ 　ｌのＹＥＧ（０，５％の酵母抽出物、２％のグルコース）を接種することによ り、菌糸体を得た。次いでフラスコを約１６時間に亘り振とうさせながら３７℃ で培養させた。２，７５０Ｘｇでの遠心分離により菌ｇ／ｍｌのノボサイム（登 録商標）２３４溶液（コネチカット州、ダンノくり−、ノボバイオラボスから得 られる、１，３−アルファーグルカナーゼ、１．３−ベーターグルカナーゼ、ラ ミナリナーゼ、キシラナーゼ、キチナーゼおよびプロテアーゼを含有する多成分 酵素の商標である）；５ｍｇ／ｍｌのＭ　ｇ　Ｓ　Ｏ４・７Ｈ２０；０．５　ｍ ｇ／ｍ　Ｉのウシ血清アルブミン；１．２Ｍのソルビトールを含有する４０ｍ　 ｌの溶液中に再懸濁させた。プロトプラストを、ミラクロス（カリフォルニア州 、ラジョラ、カルバイオケム社）に通す濾過により細胞ブイヨン（ｄｅｂｒｉｓ ）から除去し、２．０００　Ｘ　ｇの遠心分離により採集した。プロトプラスト を１．２Ｍのソルビトール中で３回、１．２Ｍのソルビトールと５０ｍＭのＣａ Ｃｌ□中で１回洗浄し、遠心分離して、１．２Ｍのソルビトールと５０ｍＭのＣ ａＣｌ２で１ｍｌ当たり約２Ｘ１０’のプロトプラストの濃度に再懸濁させた。

実施例６−一菌類プロトプラストのｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４による形質転換実施例 ８において調製したプロトプラスト懸濁液２００μｌを、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭ のトリス、ｐＨ７，４；　１ｍＭのＥＤＴＡ）中の２０μｍのＥｃｏＲＩ切断ｐ ΔＣＢＨ］ｐＶｒ４　（実施例７において調製した）および２５％のＰＥＧ４０ ００゜０．６ＭのＫＣＩおよび５０ｍＭのＣａＣｌ２を含有する５０μｌのポリ エチレングリコール（ＰＥＧ）溶液に加えた。この混合物を２０分間に亘り氷上 で培養した。この培養後、上述したＰＥＧ溶液２、Ｏｍｌをこの混合物に加え、 溶液をさらに混合し、５分間に亘り室温で培養した。この２回目の培養後、１． ２Ｍの゛ノルビトールおよび５０ｍＭのＣａ　Ｃｌ　２を含有する溶液４．Ｏｍ ｌを上記溶液に加え、得られた溶液をさらに混合した。このプロトプラストの溶 液を直ちに、１％のグルコース、１．２Ｍのソルビトールおよび１％のアガロー スを含有するボゲルの培地Ｎ（ＩＩＪットル当たり、３グラムのクエン酸ナトリ ウム、５グラムのＫＨ２ＰＯ４，２グラムのＮＨ４ＮＯ３，０，２グラムのＭｇ ＳＯ４拳７Ｈ２０，０，１グラムのＣａＣｌ２　−２Ｈ２０，５μｇのα−ビオ チン、５ｍｇのクエン酸、５ｍｇのＺｎ５ＯＪ’７Ｈ２０，１ｍｇのＦｅ　（Ｎ Ｈ４）２　・６Ｈ２０，０，２５ｍｇのＣｕＳＯ４−５Ｈ２０，５０μｇのＭｎ ＳＯ４・４Ｈ２０）の溶解アリコートに加えた。プロトプラストと培地との混合 物を、上述したものと同様なボゲルの培地を含有する固体培地上に注いだ。ウリ ジンは培地中には存在せず、したがって、ｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４内の野生型ｐｙ ｒ４遺伝子挿入物による菌株ＧＣ６９のｐｙｒ４突然変異の補完の結果として、 形質転換されたコロニーのみが成長できた。続（１てこれらのコロニーを移して 、添加物として１％のグルコースを含有する固体のボゲル培地Ｎ上で精製し、さ らなる分析のために安定な形質転換体を選択した。

この段階で、ウリジンが欠落した固体培養培地上のでこぼこと０うよりもむしろ 滑らかな輪郭を有する円形コロニーの形成およびより速い成長速度により、安定 な形質転換体は、不安定な形質転換体とは区別される。ある場合には、固体の非 選択的培地（すなわち、ウリジンを含有する）上で形質転換体を成長させ、この 培地から胞子を収穫し、後に発芽してウリジンが欠落した選択的培地上で成長す るこれらの胞子の百分率をめることにより、安定性についてさらなる試験をｐΔ ＥＧＩｐｙｒ−３の構築 公表されている配列（Ｐｅｎｔｉｌｌａ等、１９８６、Ｇｅｎｅ、　４５：２５ ３−２６３　；　ｖａｎ　Ａｒ５ｄｅｌ１等、１９８７、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏ ｌｏｇｙ、　５：６０−６４　）にしたがって合成したオリゴヌクレオチドによ る雑種形成によって、トリコデルマ　リーセイｅｇｌｌ遺伝子（ＥＧＩをコード 化する）を菌株ＲＬ−Ｐ３７からのゲノムＤＮＡの４．２ｋｂのＨｉｎｄｌｒｌ 断片としてクローニングした。

このＤＮＡ断片をｐＵｃｌｏｏのＨｉｎｄ１１１部位に挿入した。ＥＧＩ暗号配 列の中間に近い位置からその暗号配列の３′末端を越えた位置までにおよぶ内［ １ｋｂ　ＥｃｏＲＶ断片を酵素の消化により除去し、連結により、クローニング された黒色アスペルギルスｐｙｒＧ遺伝子（１１ｉ１ｓｏｎ等、１９８８、Ｎｕ ｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５１．１６．２３３９頁）を含有する２、２ｋｂのＢ ａｍＨＩ−Ｈｉｎｄｌｌｌ断片と置き換えて、ｐΔＥＧＩｐｙｒＧ−３を得た（ 第２図）ｏｐΔＥＧＩｐｙｒ−３をＨ４ｎｄｌ１１により切断して、いずれの末 端でのｅｇｌｌからのフランキング領域を有するｐｙｒＧ遺伝子を含有する断片 を放出した後に、実施例８および９に記載した方法によりトリコデルマ　リーセ イのｐｙｒ４欠失菌株（菌株ＧＣ６９）をｐΔＥＧＩｐｙｒ−３により形質転換 して、第３図に概略を示した機構によりゲノムｅｇｌｌ遺伝子が分断された形質 転換体を得た。ＤＮＡを形質転換体から抽出してＨｉｎｄｌ　Ｉ　Ｉにより切断 し、そのＤＮＡにアガロースゲル電気泳動を行なって、膜フィルター上にブロッ ティングした。そのフィルターを放射線標識付きｐΔＥＧＩｐｙｒ−３により雑 種形成させた。トリコデルマ　リーセイの非形質転換菌株において、ｅｇｌｌ遺 伝子はＤＮＡの４．２ｋｂのＬ（ｉ　ｎ　ｄ　Ｉ　Ｉ　Ｉ断片上に存在した。し かしながら、ｐΔＥＧＩｐｙｒ−３からの所望の断片の組込みによるｅｇ１１遺 伝子の欠失後、この４．２ｋｂのＨｉｎｄｌｌｌ断片は消失し、大きさで約１． ２ｋｂ大きいＨｉｎｄｌ　Ｉ　Ｉ断片により置き換えた。この様子は、ΔＥＧＩ −３と称する１つの形質転換体に見られた。

実施例８−−ＥＧ　ＩＩ遺伝子の欠失およびＰＡΔＥＧＩＩ−１の構築公表され た配列（Ｓａｌｏｈｅｉｍｏ等、１９８８、Ｇｅｎｅ、　６３：１ｌ−２１）に したがって合成したオリゴヌクレオチドによる雑種形成によって、ＥＧＩＩ（文 献においてはＥＧ　ＩＩＩと称されることもある）をコード化するｅｇ１３遺伝 子をトリコデルマ　リーセイ菌株ＲＬ−Ｐ３７から４ｋｂのＰｓｔｌゲノムＤＮ Ａ断片としてクローニングした。このＤＮＡ断片をｐＵｃ１８のＰｓｔ１部位に 挿入した。このプラスミドｐＥＧＩＩを続いてＥｃｏＲＶにより切断して、ＥＧ ＩＩ暗号領域の５′末端の約１８０ｂｐの位置からその暗号領域の末端を数百塩 基対越えた位置までにおよぶ約２ｋｂのセグメント上に金縁ＥＧＩＩ暗号領域を 除去した。このセグメントを、ａｍｄＳ遺伝子を含有する黒色アスペルギルスゲ ノムＤＮＡの５ｓｐｌ断片（Ｃｏｒｒｉｃｋ等、１９８７、Ｇｅｎｅ、　５３： ６３−７１）により置き換えて、プラスミドＰＡΔＥＧＩＩ−１を産生じた（第 ４図参照）。

トリコデルマ　リーセイの野生型菌株は唯一の窒素供給源とてのアセトアミド上 では成長できない。ａｍｄｓ遺伝子により形質転換によりこの能力が付与される 。このことが、この遺伝子を含有する形質転換体の選択システムの原理である。

ｐΔＥＧ工ｐｙｒＧ−３へ達成■ Ｆ工Ｇ、２ ｐＡ八へＧエニー１の橋へ回 Ｆ工Ｇ、４ 国際調査報告 、−、＋＋−＋　ＰＣＴ／ＵＳ　９３１０４１４９フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号（Ｃ１２Ｎ　９／４２ Ｃ１２Ｒ１：８８５） Ｄ　０６　Ｍ　１０１：０６ （７２）発明者　コリア−、キャリー アメリカ合衆国　カリフォルニア州 ９４０１０　ヒルスポロ−ウェスト　サンタイネズ２００ Ｉ （７２）発明者　ラット、プシュカラージ　ジェイアメリカ合衆国　カリフォル ニア州 ９４４０３　サン　マテオ　シーゲート　ドライヴ１３７ （７２）発明者　ワイス、ジェフリー　エルアメリカ合衆国　カリフォルニア州 ９４１１７　サン　フランシスコ　ナンバー６グラツテン　アヴエニュ−２７５

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．綿含有織物をセルラーゼ組成物で処理する方法であって、ＣＢＨＩ型セルラ ーゼ成分およびＥＧ型セルラーゼ成分からなる菌類セルラーゼ組成物を用いるこ と、およびその際にＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨＩ型セルラーゼ成分の タンパク質重量比が１０：１より大きいことを特徴とする方法。
2. ２．前記セルラーゼ組成物がＣＢＨＩＩ型セルラーゼ成分を実質的に含まないこ とを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
3. ３．全ＥＧ型セルラーゼ成分に対する全ＣＢＨＩ型セルラーゼ成分の前記タンパ ク質重量比が１０：１より大きく４００：１までの範囲にあることを特徴とする 請求の範囲第２項記載の方法。
4. ４．ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨＩ型セルラーゼ成分の前記タンパク質 重量比が約４０：１以上であることを特徴とする請求の範囲第３項記載の方法。
5. ５．綿含有織物をセルラーゼ水溶液で処理する方法であって、綿含有織物に対し てセルラーゼ水溶液がカスゲージング効果を生じさせるような条件下で前記セル ラーゼ水溶液を撹拌しながら行なう方法において、ＣＢＨＩ型セルラーゼ成分お よび１種類以上のＥＧ型セルラーゼ成分からなるセルラーゼ組成物を用いること 、および該セルラーゼ組成物は全ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨＩ型セル ラーゼ成分のタンパク質重量比が１０：１より大きいことを特徴とする方法。
6. ６．前記セルラーゼ組成物は全ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨＩ型セルラ ーゼ成分のタンパク質重量比が２０：１より大きいことを特徴とする請求の範囲 第５項記載の方法。
7. ７．前記セルラーゼ組成物は全ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨＩ型セルラ ーゼ成分のタンパク質重量比が４０：１より大きいことを特徴とする請求の範囲 第５項記載の方法。
8. ８．請求の範囲第１項記載の方法により処理された綿含有織物。
9. ９．請求の範囲第５項記載の方法により処理された綿含有織物。
10. １０．約０．１重量パーセントから約２０重量パーセントまでの範囲の量のセル ラーゼ組成物、約１０重量パーセントから約５０重量パーセントまでの範囲の量 の緩衝液、約１０重量パーセントから約５０重量パーセントまでの範囲の量の界 面活性剤、および約８０重量パーセント以下の量の水からなる濃縮物であって、 前記セルラーゼ組成物はＣＢＨＩ型セルラーゼ成分および１種類以上のＥＧ型セ ルラーゼ成分からなると共にその全ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨＩ型セ ルラーゼ成分のタンパク質重量比が１０：１より大きいことを特徴とする濃縮物 。
11. １１．前記セルラーゼ組成物がＣＢＨＩ型セルラーゼ成分および１種類以上のＥ Ｇ型セルラーゼ成分からなると共にその全ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨ Ｉ型セルラーゼ成分のタンパク質重量比が２０：１より大きいことを特徴とする 請求の範囲第１０項記載の濃縮物。
12. １２．前記セルラーゼ組成物がＣＢＨＩ型セルラーゼ成分および１種類以上のＥ Ｇ型セルラーゼ成分からなると共にその全ＥＧ型セルラーゼ成分に対するＣＢＨ Ｉ型セルラーゼ成分のタンパク質重量比が４０：１より大きいことを特徴とする 請求の範囲第１１項記載の濃縮物。