JPH0720884B2

JPH0720884B2 - 抗イデイオタイプ抗体によって誘発される、腫瘍およびウイルスに対する免疫応答

Info

Publication number: JPH0720884B2
Application number: JP59504224A
Authority: JP
Inventors: デフレイタス、エレイン; ハーリン、ドロシー; コプロフスキー、ヒラリー; リーガン、カルバン; ビクター、タデウツ
Original assignee: Wistar Institute of Anatomy and Biology
Current assignee: Wistar Institute of Anatomy and Biology
Priority date: 1983-11-07
Filing date: 1984-11-05
Publication date: 1995-03-08
Anticipated expiration: 2010-03-08
Also published as: PH25303A; ZA848713B; CA1341566C; JPS61500611A

Description

【発明の詳細な説明】〔技術分野〕この発明は、抗原、特に腫瘍がウイルスに対する免疫学
的反応を誘発することに関するものである。さらに詳細
には、この発明は、このような免疫学的反応の誘発に対
するアンチイデイオタイプ抗体の使用、並びに、抗体お
よびこれを産生するセルラインに関するものである。

〔発明の背景〕

免疫グロブリン（Ig）のＨ鎖（Ｖ_Ｈ）およびＬ鎖
（Ｖ_Ｌ）の可変領域中のアミノ酸配列は、抗原結合部位
（すなわちパロトープ）中に、特異的な抗原と上記抗体
とを相互作用させるコンホメーシヨンを形成する。異種
の受容体動物に免疫グロブリンを注射すると、抗ゼノタ
イプ（種に特異的な）、抗アイソタイプ（免疫グロブリ
ンのクラスに特異的な）および抗イデイオタイプ（抗体
の可変領域に特異的な）抗体を作ることになる。抗イデ
イオタイプの抗体には２種の機能的クラスが存在するこ
とができ、その１つはパロトープに作用するものであ
り、他の１つはＨ鎖および／またはＬ鎖のフレームワー
クに作用するもの（フレームワーク決定基）である。一
般的に、ジエーハ、ニユー・イングランド・ジヤーナル
・オブ・メデイシン（N.Engl.J.Med.）305巻25−28頁
（1981年）、ジエーン、アナレス・デ・イミノロジー
（Ann.Immunol.）125巻Ｃ、373−389頁（1974年）参
照。

〔発明の概要〕

この発明は、腫瘍、特に固形腫瘍のような腫瘍や狂犬病
ウイルスのようなウイルスに対する免疫学的応答を誘発
させる方法を提供することを目的とするものである。

この発明は、上記のような免疫学的応答の生起に抗イデ
イオタイプ抗体を使用することも目的としている。

さらに他のこの発明の目的は、腫瘍特に固形腫瘍や狂犬
病ウイルスのようなウイルスに対し、免疫学的応答を誘
導するのに有用なモノクローナル抗イデイオタイプ抗体
および上記抗体のためのイモータル（不死）Ｂリンパ球
源を提供することにある。

そして、本発明における上述および他の目的は、１ある
いはそれ以上の後述の実施態様によつて達成される。

実施態様の１つとして、この発明は、腫瘍またはウイル
スから選択した抗原に対する免疫学的応答を誘発する方
法において、（ａ）抗イデイオタイプ抗体をもたらし、上記抗イデイ
オタイプ抗体によつて同定されるエピトープは抗腫瘍ま
たは抗ウイルス抗体のパロトープであり、（ｂ）上記抗イデイオタイプ抗体をひとに投与すること
により腫瘍細胞またはウイルス粒子上のエイトープを同
定する抗（抗イデイオタイプ）抗体の産生を患者に促す
ことからなる方法を提供するものである。

この発明は、ポリクローナル抗イデイオタイプ抗体であ
つて、上記抗イデイオタイプ抗体によつて同定されるエ
ピトープが実質的に抗アイソタイプ抗体を含まない抗腫
瘍および抗ウイルス抗体のパロトープであるものをも提
供するものである。

他の実施態様としては、この発明は、抗イデイオタイプ
抗体であつて上記抗イデイオタイプ抗体によつて同定さ
れるエピトープが抗腫瘍および抗ウイルス抗体のパロト
ープである抗体を産生するイモータルＢリンパ球を提供
するものである。

この発明はまた、上記イモータルＢリンパ球が産生し実
質的に他の抗体を含まないモノクローナル抗体を提供す
るものである。

適当な腫瘍は、固形消化器系腫瘍のような固形腫瘍であ
る。適当なウイルスは、インフルエンザ、単純性ヘルペ
ス、肝炎、および特に狂犬病ウイルスである。

この発明にしたがつて抗イデイオタイプ抗体を投与する
と、対象、特に哺乳類、さらにひとを刺激して、腫瘍細
胞またはウイルス粒子上のエピトープを同定する抗（抗
イデイオタイプ）抗体を産生させる。

〔発明の詳細な記載〕

本発明は、がん療法およびウイルス免疫に対して独特な
方策を提供する。従来、腫瘍療法における方策は、腫瘍
を破壊しようと意図する患者に対し抗腫瘍抗体（すなわ
ち、固形腫瘍細胞上のエピトープを同定する抗体）を投
与することを意味した。従来、抗ウイルス療法は調製ワ
クチンによる免疫を意味した。しかしながら、本出願人
は、腫瘍またはウイルス抗原を認識する抗体に対して抗
イデイオタイプ抗体によつて、患者自身の腫瘍あるいは
ウイルスに対する免疫応答を引き起こさせうることを発
見した。この免疫応答を誘導するのは、治療法として有
益であり、少なくともウイルスの場合には、予防法とし
て有益である。

出願人は、実施に関するいかなる特定の理論とも結びつ
くことを望まないが、本発明によつて達成される上記免
瘍応答は、抗イデイオタイプ抗体分子と患者の免疫系と
の間の相互作用のため起こると思われる。抗イデイオタ
イプ抗体分子のイデイオタイプ（すなわち可変）領域
は、患者によつて抗原と見なされる抗原決定基（エピト
ープ）を含む。これは、患者に抗（抗イデイオタイプ）
抗体の産生を誘発させる。抗（抗イデイオタイプ）抗体
のセツトの中には、抗イデイオタイプ抗体のパロトープ
に対して直接相補的なものがある。抗−イデイオタイプ
抗体のパロトープは、イデイオタイプ抗体によつて同定
した（すなわち選択的に結合した）腫瘍細胞またはウイ
ルスのエピトープの「内部の」イメージを現出させ、し
たがつて、抗（抗イデイオタイプ）抗体は、腫瘍または
ウイルスの抗原にも結合すると考えられる。実際、本方
法は、患者の産生する抗体の一部に腫瘍またはウイルス
抗原と本質的に区別がつかない抗原（抗イデイオタイプ
抗体のパロタイプ）を出現させることにより、腫瘍およ
びウイルスに対する免疫応答を誘発する。

意外にも、上記方法は、腫瘍成長を抑制し、または、ウ
イルスに対する免疫応答を誘発するための効果的方法で
ある。さらに多くの従来方法に対していくつかの長所を
持つている。第１に、ほとんどの外来抗原を患者に投与
する必要がない。第２に、患者の抗イデイオタイプ応答
が、目的とする効果に対して有利であり、決定的であ
る。第３に、患者自身の抗体が抗腫瘍または抗ウイルス
抗体であり、したがつて、外因性抗腫瘍抗体を繰り返し
投与する必要性が除かれる。他の利点は当業者に容易に
理解される。

抗体のイデイオタイプは、抗体分子の可変領域またはイ
デイオタイプ領域における個々の明白な抗原決定基によ
つて定義される。これらのイデイオタイプ抗原決定基の
一部は抗体のパロトープ上またはその近傍位にあり、他
のものは可変領域のフレームワーク中にある。各々の抗
体がそれ自身のイデイオタイプを持つが、以下、特定の
抗体は下記の用語によつて示す。「イデイオタイプ抗
体」または「Id Ab」は、抗腫瘍または抗ウイルス抗体
（すなわち、イデイオタイプ抗体によつて同定されるエ
ピトープは腫瘍細胞またはウイルス粒子上に存在する）
を意味する。「抗イデイオタイプ抗体」または「抗Id A
b」は、イデイオタイプ抗体の可変領域上のエピトープ
を同定する抗体を意味する。そのような抗体の一部は、
イデイオタイプ抗体のパロトープであるエピトープを同
定し、従つて、イデイオタイプ抗体によつて同定される
腫瘍細胞上のエピトープの「内部」イメージを表わす。
「抗（抗イデイオタイプ）抗体」または「抗抗Id）Ab
は、抗イデイオタイプ抗体の可変領域上のエピトープを
同定する抵抗である。抗（抗イデイオタイプ）抗体の一
部は、（ｉ）抗イデイオタイプ抗体のパロトープおよび
（ii）腫瘍細胞上のエピトープに対応するエピトープを
同定する。

後記のように、この発明の方法は、宿主生物に抗イデイ
オタイプ抗体を投与することを企図している。抗イデイ
オタイプ抗体は生理学上適切な任意の担体（例えば、減
菌した発熱性物質不含の生理食塩水）中に入れて宿主に
投与し、その製剤は当業界で公知である。担体の選択
は、限定的なものではなく、抗体は、これを循環系に投
入する任意の方法（例えば静脈内、筋肉内または皮下注
射）によつて投与することができる。

宿主生物は、どんな動物でもよいが、最も一般にはひと
であり、ウイルスの場合ねこまたはいぬも加わる。宿主
に投与する大抵の抗体の量は、例えば用いられる個々の
抗体および接種される患者によつて、広範囲に変化す
る。患者の免疫系によつて抗（抗イデイオタイプ）抗体
が産生されるのを刺激するのに十分な量の抗イデイオタ
イプ抗体を投与することのみが必要条件である。しかし
ながら、免疫反応を誘発するにはほんの少量の抗体しか
必要としないので、用いる抗体の総量は極めて多い必要
はない。多くの場合、抗体の投与量は、数マイクログラ
ムから数ミリグラム（例えば約、50−200μｇから約１
−5mg）の範囲内で十分である。適当な投与量の決定は
当業者により容易になしうる。

１つの実施態様として、この発明は、ひとに抗イデイオ
タイプ抗体含有製剤を投与して、腫瘍、例えば固形腫瘍
（すなわち、白血病のような分散性循環性悪性細胞では
なく、がん、肉腫、メラノーマ等によつて生ずる悪性細
胞の固形塊）に対する免疫応答を起すことを意図してい
る。好ましい実施態様では、腫瘍は胃腸の腫瘍である。

上記のように抗イデイオタイプ抗体のサブクラスは、抗
腫瘍抗体のパロトープ（イデイオタイプ抗体）と選択的
に結合（すなわち同定）する。抗イデイオタイプ抗体を
含む製剤は、抗イデイオタイプ抗体のパロトープがウイ
ルス抗原の内部イメージである宿主に投与することがで
きる。このような抗体は、対応するイデイオタイプ抗体
のパロトープであるエピトープを認識する。腫瘍または
ウイルス抗体の内部イメージを現す抗イデイオタイプ抗
体は、数種の方法のうち任意のものによつてイデイオタ
イプ抗体の可変領域におけるフレームワーク決定基を認
識する抗イデイオタイプ抗体と識別することができる。
希望する抗イデイオタイプ抗体を同定する方法の１つに
は、腫瘍またはウイルス抗原（または入手可能であれ
ば、ハプテン）、イデイオタイプ抗体、および抗イデイ
オタイプ抗体との間の競合結合分析がある。もし抗原が
イデイオタイプ抗体に対する抗イデイオタイプ抗体の結
合を妨害するなら、抗イデイオタイプ抗体で同定される
エピトープは、イデイオタイプ抗体のパロトープと近い
関係にある。別の試験方法は、抗イデイオタイプ抗体に
対する抗血清が抗腫瘍またはウイルス抗体でもあるかど
うかを決定するものである。適当な抗イデイオタイプ抗
体を同定する上記および他の方法は、当業者に公知の範
囲内にある。宿主に投与する製剤は、フレームワーク決
定基に対する抗−イデイオタイプ抗体と共に、イデイオ
タイプ抗体のパロトープに対するサブクラスを包含する
ことができる。製剤が、イデイオタイプ抗体のパロトー
プに対するサブクラスを包含することだけが必要であ
る。

用いられた抗イデイオタイプ抗体は、宿主に対し同種ま
たは異種抗体であつてよい。しかしながら、ひとにとつ
て好ましい抗体は、抗体分子のＣ領域に対する免疫反応
が最小であるひと抗体である。しかし、この発明におい
ては比較的少量の抗イデイオタイプ抗体しか必要としな
いので、異種抗体（例えば、マウス、ラツト、やぎ、家
兎など）を用いてよい。また、異種抗イデイオタイプ抗
体に対して重要な反応がない場合には、このような抗体
は製造の容易さおよびコストの点から好ましい場合があ
る。さらに、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体と同
様に、ポリクローナル抗体イデイオタイプ抗体を用いる
ことができる。

ポリクローナル抗体イデイオタイプ抗体は、当業界で知
られた従来法によつて製造できる。例えば、ポリクロー
ナル抗Id Abは、動物をモノクローナル抗腫瘍またはウ
イルス抗体（例えば、Id Ab）で免疫することによつて
産生できる。免疫した動物は、抗Id Abを産生する。こ
の抗血清中の抗イデイオタイプ抗体のサブクラスは、抗
腫瘍またはウイルス抗体のパロトープであるエピトープ
を同定する。例えば、動物から採取した抗血清は、
（ｉ）抗血清から抗アイソオタイプ抗体を除去するため
の、モノクローナルId Abとしては同じアイソタイプで
あるが、別のイデイオタイプの固定化抗体、および（i
i）そのサブクラスが腫瘍およびウイルス抗原の内部イ
メージを現す抗Id Abを除去するための、固定化モノク
ローナルId Ab、を用いた、系列吸収によつて精製でき
る。次いで、抗Id Abを結合モノクローナル抗腫瘍およ
びウイルス抗体から溶離して抗アイソタイプ抗体を実質
的に含まない溶液を得る。この溶液は、Id Abのパロト
ープを同定する抗Id Abの存否を分析することができ
る。

実質的に他の抗体を含まないモノクローナル抗イデイオ
タイプ抗体は、イモータルＢリンパ球を実質的に純粋培
養した上清から単離される。「イモータルＢリンパ球」
の語は、ハイブリドーマ（体細胞が、正常および悪性リ
ンパ球と交雑したもの）、およびウイルス（例えば、エ
プスタイン・バール・ウイルス）または発癌性DNAによ
つて形質転換された正常リンパ球のような、数ケ月間
（好ましくは無限に）培養物中に維持されうる比較的安
定した連続抗体産生細胞を包含する。抗イデイオタイプ
抗体を産生する正常Ｂリンパ球からイモータルＢリンパ
球を産生する技術は当業界で公知である。「モノクロー
ナル・アンテイボデイーズ」（アール・エイチ・ケネツ
ト、テイ・ジエイ・マクリーンおよびケイ・ビー・ビー
トル編,1980年）；エム・シユライヤーら著、「ハイブ
リドーマ・テクニツク」（コールド・スプリング・ハー
バー・ラドラトリー,1980年）；「モノクローナル・ア
ンテイボデーズ・アンド・テイーセル・ハイブリドーマ
ズ「ジー・ジエイーハーマーリング、ユー・ハーマーリ
ングおよびジエイ・エフ・キーネイ,1981年）；コズバ
ーら著、プロシーディング・オブ・ナシヨナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンス（アメリカ、1982年）79巻6651
−6655頁；ジヨナら著、「ハイブリドーマ」（1983年）
２巻124頁；「モノクローナル・アンテイボデイズ・ア
ンド・フアンクシヨナル・セル・ラインズ」（アール・
エツチ・ケネツト、ケー・ビー・ビートルおよびテイ・
ジエイ・マツキーン編,1983年）；コズバーら著、「イ
ムノロジー・ツデイ」（1983年）４巻72−79頁を参照。

抗Id Abを産生し、イモータルＢリンパ球の産生に適し
ている正常Ｂリンパ球は、当業界で公知な方法の変法で
提供される。例えば、ラツトまたはマウスのような動物
をモノクローナル抗腫瘍または抗ウイルス抗体で免疫
し、抗Id Abを産生するＢリンパ球を動物の脾臓から採
取することができる。抗Id Abを産生するひとＢリンパ
球は、モノクローナル抗腫瘍またはウイルス抗体を用い
て患者を免疫することによつて得られる。患者から末梢
血リンパ球を採取し、モノクローナル抗腫瘍またはウイ
ルス抗体によつて培養物を刺激して抗−Id Abを産生す
るＢリンパ球のインビトロでの生育を誘導する。デフレ
イテスら著、プロシーデイング・オブ・ナシヨナル・ア
カデミー・オブ・サイエンス（アメリカ,1982年）79巻,
6646−6650頁参照。従つて、抗Id Abを産生する、動物
またはひとのＢリンパ球は、当業界で公知の方法により
採取し固定することができる。もちろん腫瘍細胞または
ウイルス抗原の内部イメージを現出する抗Id Abを産生
するこれらのリンパ球は、イデイオタイプ領域上のフレ
ームワーク決定基に対する抗Id Abを産生するＢリンパ
球と区別されることが必要である。

腫瘍に適用するこの発明の方法はまた、アメリカ特許第
4108983号に記述されるウイルス性腫瘍細胞破塊ワクチ
ンの様な、腫瘍に対する免疫応答を誘発する他の方法と
共に実施することができる。ウイルスに関しては、ウイ
ルスの場合、所望により、宿主哺乳類でおこる免疫応答
は上述と同様に抗Id Abを投与することに加えて公知の
ウイルスワクチンで免疫することによつていつそうさか
んになる。抗（抗Id Ab）の産性が抗Id Abを投与するこ
とによつて宿主哺乳類に誘発された後（例えば投与後約
２週間）、宿主に当業界で公知の従来技術を用いてウイ
ルス・ワクチンの１回接種を行う（例えば、HDC狂犬病
ワクチンのような不活性ウイルスワクチン）。プロツキ
ンら著、アメリカン・ジヤーナル・オブ・エピデミオロ
ジー（1976年）103巻,75−80頁；ウイクターら著、ラビ
ーズ・ワクシン・フオー・ヒユーマン・ユース,40号３
−９頁（1978年）参照。投与におけるワクチンの型およ
び実験方法はこの分野の技術で公知である。次に示す例
は、本発明の説明であり、発明の範囲を限定するもので
はない。

実施例１腫瘍抗体（モノクローナルイデイオタイプ抗体）次に示す実験では、ひと消化器系癌細胞と結合するマウ
ス・モノクローナル抗体17−1A、C₄2032およびC₄1472を
使用した。これらは、ハーリンら著、プロシーデイング
・オブ・ナシヨナル・アカデミー・オブ・サイエンス
（アメリカ、1979年）76巻1438−1442頁およびコプロフ
スキー著、モノクローナル・アンテイボデイ・イン・キ
ヤンサーの中で「生体内でのモノクローナル抗体」とし
て；プロシーデイング・オブ・ザ・フオース・アーマン
ド・ハーマー・キヤンサー・シンポジウム（ビー・ボス
・アール・ラングマン、アイ・トロウブリツジおよびダ
ルベツコ編、1983年）に記述されている。モノクローナ
ル抗体（MAb）、C₄2032はMr180、160、50および40Kの結
腸直腸癌種（CRC）結合抗体に対する特異性を有してい
る。MAb C₄1742（IgG₂a）は、CRC結合抗原Mr50Kに対す
る特異性を有している。肝炎ウイルスに対するMAb A₅C₃
も用いられるが、これについてはバンズら著、プロシー
デイング・オブ・ナシヨナル・アカデミー・オブ・ザ・
サイエンス（アメリカ、1981年）78巻、1214−1218頁で
記述されている。Mab17−1A（IgG₂A、XL鎖）およびC₄20
32（IgG₂a、xL鎖）は、アイら著、イムノケミストリー
（1978年）15巻、429−436頁で記述されているようにプ
ロテインＡ・セフアロース・カラム（フアルマシア、ピ
スカトアウエイ、ニユージヤージー）でアフイニテイー
クロマトグラフイーにかけることによつて、ハイブリド
ーマ担持マウスから得た腹水から精製される。

（患者）患者は全て転移性で再発性の結腸直腸腺癌を持つてい
て、シアーズら著、ランセツト（1982年）762−765頁で
発表されている方法を用いて、Balb/Cマウスの腹水から
濃縮したMAb17−1Aの精製された発熱性物質不含の滅菌
製品を１回の投与で全身的に注射した。Mab17−1A 192m
g以下を注入した９患者のうち７患者は抗マイスグロブ
リン抗体を発生した。モノクローナル抗体200−1000mg
を受けた20患者のうち、３患者が抗マウスグロブリン抗
体を発生した。抗マイスグロブリン分子を発生した最初
のグループの３患者（患者番号07、08および09）の血清
および２番目のグループの２患者（番号14および23）の
血清を、抗イデイオタイプ抗体を単離するために選択ま
たは処理した。患者番号07、08および23から抗イデイオ
タイプ抗体を単離するために用いた血清は、３患者すべ
てが高濃度の抗マイスグロブリン抗体を示した時に得ら
れた。患者番号08は、最初の注射の後20ケ月目にモノク
ローナル抗体130mgの２回目の注射を受け２回目の注射
の後得られた血清を抗イデイオタイプ抗体の存否を調べ
るスクリーニングテストに用いた。

（ポリクローナル抗−イデイオタイプ抗体の製造）精製したMAb17−1A300μｇをフロイント混合アジユバン
トで乳化したものを、ニユージランド白うさぎの多部位
に皮下注射し、30日後モノクローナル抗体100μｇを筋
肉注射で増強した。二度目の反応の10日後血清を採取し
た。

抗血清を固定化MAb C₄2032およびMAb17−1Aで吸収させ
た。精製モノクローナル抗体（各々30mg）を、アフイ・
ゲル10〔バイオーラツド・ラボラトリーズ・リツチモン
ド、カリフオルニア（Bio−Rad Laboratories,Richmon
d,CA）〕2mlと結合させた。ついで、抗血清を、抗アイ
ソタイプおよび抗イデイオタイプ抗体をそれぞれ取り除
くために免疫吸着剤MAb C₁2032およびMAb17−1Aに連続
吸収させた。吸収した抗体を、0.1Mグリシン緩衝液（pH
2.8）で溶出し、直ちに燐酸緩衝液で中和し、燐酸緩衝
生理食塩水で透析し、蛋白質をの吸光度で定量した。

MAb17−1Aを１回注射した後患者から得られた抗血清
も、上に述べたと同様にして精製した。それぞれMAb17
−1Aを750mgを投与した患者番号23、およびMAb17−1Aを
133および125mg投与した患者番号08およびNo.07由来の
血清は、抗体を最初に注射した後、種々の時期に採取し
た。

ラジオイムノアツセイ法によつて抗ムリンIgG抗体を含
有していることが分かつた試料を、それぞれ上述と同様
に抗アイソタイプおよび抗イデイオタイプ抗体を除去す
るために、免疫吸着剤MAb C₄2032およびMAb17−1Aで十
分に吸収させた。血清から分離した抗イデイオタイプ抗
体は、¹²⁵Iでラベルした抗ひとＦ（ab′）_２フラグメン
トに結合することにより免疫グロブリンであることを示
した。血清試料から得た抗イデイオタイプ蛋白の収量は
それぞれ異なつて、No.08より13μg/ml、No.07より8.9
μG/ml、およびNo.23より43μg/mlであつた。最も高い
水準の抗マウス免疫グロブリン抗体を示した血清No.23
から最も多くの量が得られた。

（抗イデイオタイプ抗体の存否を調べるための血清スク
リーニング法）血清試料について抗イデイオタイプ抗体の存否を調べる
ために、競合分析を、¹²⁵IでラベルしたMAb17−1Aと予
備インキユベートした４種のひと血清と家兎抗イデイオ
タイプ抗体を用いて行なつた。

４分の１インチ（6.35mm）粒径のポリスチレン・ビーズ
〔プレシジヨン・プラステツク・ボール・コーポレイシ
ヨン、シカゴ、イリノイ（Precision Plastic Ball C
o.,Chicago,IL）〕を95％エタノールで３回洗浄した。
風乾したビーズを、0.02Mテトラほう酸ナトリウム（pH
8.2）で希釈した完兎またはひとの抗イデイオタイプ抗
体と共にインキユベートした。緩やかに振とうしながら
４℃で一夜培養した後、ビーズを燐酸緩衝生理食塩水で
３回洗浄し、２％うし血清アルブミンおよび0.04％NaN₃
を含有する燐酸緩衝生理食塩水を用いて、室温で少なく
とも３時間インキユベートした。ついで、ビーズをひと
抗イデイオタイプ抗体源と予備インキユベートしたイデ
イオタイプの基準として¹²⁵IでラベルしたMAb17−1Aに
露した。すなわち、ひと血清をCa²⁺およびMg²⁺を含まな
い燐酸緩衝生理食塩水で25％の濃度に希釈し、２％うし
血清アルブミンおよび0.04％NaN₃を補つた。さらに一夜
培養を続けた後、ビーズを洗浄し、ガンマー線測定器で
結合放射能を測定した。

モノクローナル抗体（番号23,09または14）１回注射後
に得られた血清中３つは、モノクローナル抗体注射前よ
り高いMAb17−1Aに対する結合阻害を示した。患者番号1
4のモノクローナル抗体注射後血清が得た結合阻害値
は、他の２種の血清に比べて低いが、同じ患者の血清が
示すモノクローナル抗体投与前の値よりも高かつた。モ
ノクローナル抗体を２回目に注射して７日後の患者番号
08から得た血清の阻害値は、既に高かつた。

（抗イデイオタイプ検出の競合分析）モノクローナル抗体C₄2032、C₄1472およびA₅C₃に対して
と同様にMAb17−1Aに対して、分離した抗イデイオタイ
プ抗体の結合を測定するために上述と同様な方法で競合
分析を行つた。

結果は、３種の血清（番号08、07および23）由来の抗イ
デイオタイプ抗体のMAb17−1Aに対する結合性は、他の
３種のモノクローナル抗体に対するより顕著に高いこと
を示し、他の２種のモノクローナル抗体（C₄2032および
C₄1472）も、結腸直腸の癌腫細胞上の抗原部位を検出し
た。しかし、これらの部位はNAb17−1A認識部位となつ
ていた。MAb17−1Aにさらす前に３人の患者すべての血
清から分離した免疫グロブリンを約2.5μg/mlに濃縮
し、ポリスチレン・ビーズに結合した。しかしながら、
上記製品は試験したどのモノクローナル抗体とも結合せ
ず、処理前の血清中に抗イデイオタイプ抗体が存在しな
いことを示した。

（ひと抗イデイオタイプ抗体同志の交叉反応性）ひと抗イデイオタイプ抗体同志の交叉反応があるか否か
を決定するために競合分析を行つた。

競合分析の結果は、下に示すように、患者番号07および
23の抗イデイオタイプ抗血清間で顕著な交叉反応を示
し、患者番号08および23の抗イデイオタイプ抗体間の交
叉反応は少し弱い（しかし、それでも重要である）。同
様の交叉反応が、患者番号08から得たモノクローナル抗
体処理前血清と患者番号07の抗イデイオタイプ血清との
間に見られた（結果は示さない）。上述の結果は、他の
患者が産生した抗イデイオタイプ抗体が、同じ抗原部位
に向けられることを示している。

（抗イデイオタイプ抗体によつて検出されたエピトー
プ） MAb17−1Aに対するひと抗イデイオタイプ抗体の結合の
パプテン阻害は、抗イデイオタイプ抗体がイデイオタイ
プ抗体のパロトープに対するものであることを示すため
に行なつた。

結腸直腸の癌から得た細胞株、SW1222の3M KCl抽出物
を、ハーリンら著、〔ジヤーナル・オブ・クリニカル・
イムノロジー（J.Clin.Immunol.）２巻135−140頁〕で
述べられているのと同様に調製した。この製剤はMAb17
−1Aに結合し、この材料が可溶性の抗原を含有すること
を示した。¹²⁵IでラベルしたMAb17−1AをCRC細胞抽出物
およびMAb17−1Aに結合しないメラノーマ3M KCl抽出物
とインキユベートした。それから、抗体抗原混合物を、
患者番号23から得た抗イデイオタイプ抗体で被覆したビ
ーズに加え、その結合を放射性同位原素で標識したモノ
クローナル抗体のみの結合と比較した。これらの実験
は、少量の競合ハプテンによる結合の変化を検出するた
めに、非飽和量のよう化モノクローナルを用いて行つ
た。対照として、よう化MAb17−1AをMAb17−1Aとは結合
しないことが知られているメラノーマ由来の抽出物と混
合した。濃度0.1または0.5mg/mlのCRC細胞抽出物は、そ
れぞれ39％および68％で、患者番号23由来の抗イデイオ
タイプ抗体がよう化MAb17−1Aと結合するのを阻害する
ことが分かつた。メラノーマ由来の抽出物は、0.5mg/ml
以下の濃度では、顕著にはモノクローナル抗体結合に効
果を表わさない。

この結合反応のハプテン阻害は、抗イデイオタイプ抗体
上のCRCエピトープの「内部イメージ」の現出を示す。
このことは、CRC細胞抽出物が抗イデイオタイプ抗体と
結合しないが、予想したようにMAb17−1Aに結合するこ
とによつても確認された。

（ひとＢリンパ球による抗イデイオタイプおよび抗（抗
イデイオタイプ）抗体の産生） MAb17−1Aを注射後、各々12および６か月目の患者番号0
8および23から軟膜細胞を得た。デフレイタスら著、プ
ロシーデイング・オブ・ナシヨナル・アカデミー・オブ
・サイエンス（アメリカ、1982年）79巻6646−6650頁に
述べられているように17−1Aの10ng/mlF（ab′）_２フラ
グメントで細胞を刺激した。続く７日間、細胞の一定量
を２−アミノエチルイソウロニウムブロミドで処理した
ひつじ赤血球でロゼツト化することによつてＴおよびＢ
細胞ポピユレーシヨンに分離した。〔ペロリーノら著、
クリニカル・イムノロジー・アンド・イムノパスオロジ
ー（1975年）３巻324−333頁を参照。〕どちらの細胞ポ
ピユレーシヨンも17−1AのＦ（ab′）_２フラグメントま
たは抗−インフルエンザ・モノクローナル抗体およびや
ぎ抗マウスIg−FITCで着色された。ついで細胞ポピユレ
ーシヨンをシトフルオログラフで分析した。さらに、同
一患者由来の末梢血単核細胞を17−1AのＦ（ab′）_２フ
ラグメントまたは抗インフルエンザ・モノクローナル抗
体でデクレイタスら著（上述の文献）に述べられている
特異的ひとIgを産生修飾ミツシエルーダツトン培養基中
で９日間刺激した。これらの培養物から得た上清を特異
的ひとIgGに対する固相酵素結合免疫吸収分析で分析し
た。〔ケイ・ピー・エル・ラボラトリーズ、ゲテルスブ
ルグ、エム・デイ（KPL Laboratories,Gaithersburg,M
D）〕患者番号08の17−1A F（ab′）_２に初めに結合するリン
パ球の比率は1.2％であり患者番号23のリンパ球は0.2％
であつた。MAb17−1Aとインキユベートした７日間で17
−1AのＦ（ab′）_２と特異的に結合する患者番号23のリ
ンパ球の比率は、0.2％から13％に増加した。17−1Aと
結合する細胞すべては、Ｂ細胞ポピユレーシヨン中に存
在した。さらに９日後、ひと抗−MAb17−1A IgGが検出
された。同条件下で抗インフルエンザ・モノクローナル
抗体を用いて同じ患者由来のリンパ球をインキユベート
してもMAb17−1Aまたは抗インフルエンザ・モノクロー
ナル抗体に対する検出可能なひとIgを全く産生しなかつ
た。

別の実験で、抗（抗イデイオタイプ）抗体を産生するた
めにひとＢリンパ球を刺激した。Ｂリンパ球を集め、イ
デイオタイプ抗体ではなく自家性抗イデイオタイプ抗体
で刺激した点を除いて、上述の方法を用いてインビトロ
で刺激した。刺激したＢリンパ球によつて抗（抗イデイ
オタイプ）抗体を産生し、これらの抗（抗Id）AbはCRC
細胞抽出物および全細胞上にあるエピトープを同定する
ことが示された。こうして、ひと免疫系は抗イデイオタ
イプ抗体で刺激するのに応答して抗腫瘍抗体を産生す
る。

（抗イデイオタイプ抗体を産生するイモータルＢリンパ
球）モノクローナル抗体を分泌するイモータルＢリンパ球を
産生する多くの方法は既知技術である。コズバーら著、
〔イムノロジー・ツデイ（Immunology Today）４巻72−
79頁〕を参照。したがつて、上述のように末梢血リンパ
球から得た抗（抗イデイオタイプ）抗体を分泌するひと
Ｂリンパ球は、既知技術の１つによりイモータル化する
ことができる。

容易に使用できる方法の１つは、EBウイルス（EBV）を
用いてイモータル化することである。この方法による
と、上述の正常リンパ球をインビトロでEBVに感染さ
せ、イモータル細胞株が、例えば栄養層上で限界希釈す
ることによつて確立される。コジバーら著、〔上述の文
献（1983年）〕を参照、およびその中で引用された参照
文51−60頁を参照。

別の方策としては、ひとプラズマサイトーマまたはリン
ポブラストイド融合パートナーと、上述の抗−Id Ab分
泌リンパ球またはEBV形質転換リンパ球のどちらかを融
合するものがある。例えば、抗−Id Abを分泌するEBV−
形質転換Ｂリンパ球は、ひとリンポブラストイドセルラ
インKR−４などと融合できる。ついで目的とするハイブ
リドーマが親の細胞を除外するウアバイン含有ハイポキ
サンチン−アミノプテリン−チミジン培地中で選択され
る。ハイブリドーマの特異的抗体産生を試験する。そし
て陽性ハイブリドーマを免疫抑制した哺乳動物（例え
ば、ヌード・マウス）の腹腔または大量の培地中でクロ
ーン化、再クローン化および増殖する。コツバーら著、
プロシーデイング・オブ・ナシヨナル・アカデミー・オ
ブ・サイエンス（1982年）79巻6651−6655頁を参照。

実施例２ウイルス抗体（抗イデイオタイプ抗体の製造）狂犬病ウイルスグリコプロテイン（Ｇ）のエピトープを
再構成するために種々のモノクロナール抗体（mAb）に
対応して作られた抗イデイオタイプ抗体（抗−Id Ab）
の能力を研究した。このＧは、ウイルス中和抗体（VN
A）を誘発することを含めて、多数の狂犬病ウイルスの
重要な生物学的特性に応答する。Ｇのどの部分が上記の
機能に応答するかということについては現在では正確に
は知られていない。ラーフンら、ジヤーナル・オブ・ゼ
ネラル・バイラロジー（1983年）64巻843−851頁は、タ
イプ特異性VNAに対し少なくとも３つの主な抗原部位の
存在を示唆する、狂犬病ウイルスＧのチヤレンジ・ウイ
ルス・スタンダード（CVS）株に対する機能性エピトー
プマツトを記載している。

機能的エピトープマツトにより定義される狂犬病ウイル
ス上の結合部位およびアイソタイプ（プロテインＡ・セ
フアロース・クロマトグラフイによつて精製可能）に基
づいて大パネルのハイブリドーマの中から５つの抗G mA
bを選び出した。抗狂犬病ウイルスG mAbの509−6,101−
1,507−１および719−３はすでに記載されている。ラー
フンら著；〔上述の文献〕、およびウイクターら著〔ジ
ヤーナル・オブ・エクスペリメンタル・メデイシン（19
80年）152巻:99−112頁参照。狂犬病ウイルスの感染を
強力に中和するこれらのmAbは、以下に示す性質を有し
ている。:509−６（エピトープマツプ部位I;IgG₂a）、1
01−１（エピトープマツプ部位IIb;IgG₂a）。507−１
（エピトープマツプ部位IIIb;IgG₁）および719−３（エ
ピトープマツプ部位IIc;IgG₂a）抗GmAb1104−２（Ig
G₁）はP3x63Ag8マウスミエローマ細胞の変位株653と狂
犬病ウイルスで免疫したBALB/cマウス由来の脾臓細胞を
付加的に融合して得られた。ウイクターら著；〔プロシ
ーデイング・オブ・ナシヨナル・アカデミー・オブ・サ
イエンス（アメリカ、1978年）75巻3938−3942頁による
カーネイら著；〔ジヤーナル・オブ・イムノロジー（19
79年）123巻:1548−1550頁〕。抗Ｇ分泌ハイブリドーマ
細胞を選択し、限界希釈およびウイクターら著；（上述
の文献）（1978年）にすでに記述されている様に調製し
た腹水でクローン化する。1104−2mAbはERAウイルスと
非常によい結合性を示すが中和性に乏しいので選ばれ
た。抗狂犬病ウイルスのヌクレオカプシドmAb515−３
（IgG₂a）および389−１（IgG₁）を、同様の技術でケル
ブのウイルスで免疫したBALB/cマウスから分離した。

用いた狂犬病ウイルスのERAまたはCVS株のストツクは標
準方法によりBHK−21中で増殖させた。ウイクターら
著、ラボラトリー・テクノロジー・イン・ラビーズ101
−123頁（エム・キヤプラン・アンド・エイチ・コプロ
スキー（第３版編集、1973年）を参照。狂犬病抗原変異
株であるERA RV194−２およびRV509−６はそれぞれ抗−
G mAb194−２および509−６による中和に耐性であるウ
イルスを表わすものとして報告されている。デイーツス
コルドら著、プロシーデイング・オブ・ナシヨナル・ア
カデミー・オブ・サイエンス（アメリカ、1983年）80巻
70−74頁を参照。狂犬病グリコプロテイン（Gs）は、デ
イーツスコルドらがバイオロジー（1983年）124巻330−
337頁に記載しているように免疫吸収クロマトグラフイ
を用いてウイルス粒子涸渇培地から精製した。

抗GmAbは全て腹水から精製した。アイソタイプIgG₂aの
抗体はブリトン−ロビンソン緩衝液（pH.8.0）で約30分
の１に希釈した。ゲルハードら著、モノクローナル・ア
ンテイボデイ317−333頁、（アール．ケネツト・テイ．
マツキーン・アンド・ケイ．ベツチトル編（1980年）を
参照。BRB中のmAbはナエイルジン0.45μ紙を通し、プ
ロテインＡセフアロース4B吸着カラム〔フアルマシア・
ピスカトアウエイ，ニユージヤージー（Pharmacia,Pisc
ataway,N.J.）にかけた。抗体をpH3.0でBRBに溶出する
前にBRB（pH8.0）30mlでカラムを洗浄した。最初にアイ
ソタイプIgG₁の抗GmAbを最終濃度18％（重量比）になる
まで硫酸で沈殿させた。Ig分画を溶解し、BRB（pH8.0）
で透析し、前と同様にプロテインＡセフアロース・カラ
ムに通した。カラムから溶出したIgを、抗原としてERA
ウイルスを使うラジオイムノアツセイ（RIA）によつて
検出した。デイツスコールドら著〔ジヤーナル・オブ・
バイラロジー（1982年）44巻595−602頁〕を参照。抗体
を燐酸緩衝生理食塩水（PBS），（pH7.4）で真空透析し
て濃縮した。蛋白濃縮物は基準としてうし血清アルブミ
ンを用いて定量した。ブラムホールら著、アナリテイカ
ル・バイオケミストリ（1969年）31巻146−148頁参照。

抗Id Abは、スタウトら著、ジヤーナル・オブ・エクス
ペリメンタル・メデイシン（1983年）157巻687−704頁
で述べられている様に調製した。簡単に言えば、雌ニユ
ージーランド白兎を、フロイントの完全アジュバンド
（FCA）で乳化させたプロテインＡセフアロース精製mAb
300μｇで、乳房鎖にそつて多数の部位に皮下注射し
た。PBS中の抗体100μｇで２回の追加抗原を７および30
日筋肉内投与し、血清はその10日後採取した。抗アイソ
タイプAbを除去するためにmAb515−３（IgG₂a）または3
89−１（IgG₁）のいずれかと結合させたセフアロース4B
カラムにかけて、各々の抗イデイオタイプ抗血清をイデ
イオタイプ領域に対して特異的にさせた。上記カラムか
ら得た溶出物はイデイオタイプ決定基に対し反応性のあ
る抗体を含有していた。一定領域に対する抗体を、0.1M
ジエチルアミン（pH11.5）でmAb515−３および389−１
免液吸収カラムから溶出した。各々の抗Id Ab由来のIgG
を上述と同じ様にプロテインＡセフアロース・クロマト
グラフィーによつて分離した。カラム流出液の非イデイ
オタイプ決定基に対する反応性は無視できるものであつ
た。

（抗イデイオタイプ抗体の確認）上で調整した抗Id Abの特異性および種々の抗GmAbの中
でのイデイオタイプ交叉反応の存在は、RIAで各抗Id Ab
製品について測定した。

固相RIAを固定MAbに対する抗Id Abの結合を測定するた
めに使用した。個々のmAbを次に示すように炭酸塩−炭
酸水素塩緩衝液（pH8.9）中で腹水濃度に応じて希釈し
た。509−６（1:3000）,101−１（1:6000）,719−３
（1:6000）,507−１（1:6000）,1104−２（1:16000）。
ついで、各25μｌずつポリビニル微量摘定平板（ダイナ
テク・ラボラトリーズ製）のウエルに加えた。これらの
抗体は37℃で一夜インキユベートしウエルに乾かした。
ウエル上の遊離結合部位は少なくとも１時間0.08％アジ
化ナトリウムを添加した燐酸緩衝生理食塩水（PBSN）中
で10％無ガンマ・うま血清（ギブコ・ラボラトリーズ
製）でブロツクした。抗Id Abの希釈液25μｌを加え、
室温で１時間後プレートを充分洗浄した。結合した抗Id
Abは、よう素化法で標識した¹²⁵Iやぎ抗家兎IgG（カツ
ペル・ラボラトリーズ製）を25μｇ（30000カウント／
分）加えることによつて検出し、室温でさらに１時間イ
ンキユベートした。Markwellら著、〔バイオケミストリ
ー（Biochemistry、1978）17巻:4800−4817頁参照。抗I
d Ab希釈液または放射能標識したプローベの全てをPBSN
中に10％無ガンマ・うま血清で作つた。非結合プローベ
がなくなるまでプレートを洗い、それぞれのウエルに結
合した放射能をガンマ線カウンターで測定した。

同種および異種mAbで各々の抗Id Ab製品を滴定した結果
各抗Id Abが同種Id mAbに対して特異的であることがわ
かつた。

（イデイオタイプ抗体のパロトープに対する抗イデイオ
タイプ抗体の定量）競合RIA法を、Id Abおよび抗Id Ab間の相互作用に対す
る狂犬病ウイルスＧの阻害能を試験するために考案し
た。Chaflinら著、ジヤーナル・オブ・イムノロジー
（J.Immumol.、1974年）112巻:1747−1756頁〕、およ
び、Sherら著、ジヤーナル・オブ・イムノロジー（J.Im
mumol.、1972年）109巻:176−178頁参照。

狂犬病Gsを競合抗原として用いた。標準抗Id Ab希釈液
を添加する前に、Gsの２倍系列希釈液と共に予備滴定レ
ベルのmAbを１時間インキユベートした。結合抗血清の
量を¹²⁵Iで標識したやぎ抗家兎抗体を結合させることに
よつて定量した。対応する抗GmAb（509−６、507−１、
および1104−２）に対する５種中３種の抗Id Abの結合
をGsが阻害した。最大阻害は、６μg/ml Gsの量で20〜5
0％に変化するが、僅か0.75μg/ml Gs程度でも少なくと
も15％の減少が観察された。抗Id Abの結合を全面的に
阻害するのが不可能なことは、フレームワークとパロト
ープ部位の両特異性が３種のポリクローナル抗Id血清に
存在することを示す。このことは、還元または非還元状
態でドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（SDS−PAGE）を用いて分離したmAbと抗Id Ab
の反応性を測るウエスタン・プロツト測定法によつて確
認された、抗原結合部位はmAbの還元によつて除去され
るので、還元mAbに対するId Abの反応性はフレームワー
ク決定基に対する特異性を示したことになる。Gsによる
抗Id101−1Abまたは抗Id719−3Abの有意な結合阻害が存
在しないことは、上記血清におけるパロトープ特異性ポ
ピユレーシヨンが微弱あるいは欠如していることを示唆
している。

（抗（抗イデイオタイプ）抗体の製造）次に示す例は、抗G mABの抗原結合部位に対して反応性
を有する抗Id Abが上述の抗G mAbに認識されたウイルス
のエピトープをまねたサブボビユレーシヨンを含有し、
Ｇに対する免疫応答を誘発しうることを示している。

４つのグループに分けたICRマウスの皮下にFCAで乳化し
たプロテインＡセフアロース精製抗Id IgGを１匹当り40
μｇずつ接種した。追加抗原刺激皮下接種は７日目と32
日目とにそれぞれフロイント完全アジユバント中に40μ
ｇの抗Id IgGを入れて行つた。最後の追加抗原刺激接種
に続く５日間眼窩後方叢より採血し、集めた血清につい
て狂犬病ウイルス中和抗体（VNA）を調べた。対照とし
て別のグループのマウスには、プロテインＡ・セフアロ
ースで精製した正常家兎IgGで免疫した。

免疫したマウスにおけるVNAの濃度を迅速螢光フオーカ
ス阻害試験法の変法によつて測定した。スミスら著ラボ
ラトリー・テクニツクス・ラビース（Laboratory Techn
iques in RabIes M.カプランおよびH.コプロフスキ、ら
編、第３版、1973年）:354−357頁参照。マウス血清を
二倍系列希釈物をマイクロタイターII平板（フアルコン
・プラスチックス製）（50μl/ウエル）で作り、10⁴PFU
/50μｌを含有する、同量のウイルスを用いて37℃で１
時間インキユベートした。インキユベーシヨン後、新た
にトリプシン処理したBHK−21細胞（２×10⁶個／μｌ）
50μｌをそれぞれのウエルに加え、混合した。そして血
清・ウイルス・細胞混合物の10μｌづつをテラサキ平板
（フアルコン・プラスチツクス製）のウエルに（２回に
分けて）移した。20時間インキユベーシヨン後平板を最
初、PBSで次いで蒸留水中80％（容量比）アセトンで洗
い、室温において80％アセトン中で30分間固定処理し
た。平板を乾燥し、螢光コンジユゲート家兎由来抗狂犬
病ヌクレオカプシド抗体５μl/ウエルと37℃で30分間細
胞染色した。ウイクトル著シンポジウム・オン・シリー
ズ・イムノバイオロジカル・スタンダード（Symp.Serie
s Immunobiol.Standard）21巻102−118頁を参照。対照
ウエル（ウイルスを含むが抗体を含まない）は狂犬病ウ
イルス特異性内容物を包含する細胞をほぼ40％示した。
ウイルス中和の終点は、狂犬病ウイルスに感染した細胞
数を50％減少しうる最大血清希釈レシプロカルとして定
義した。

迅速螢光フオーカス阻害試験の結果は以下の表に示す。
抗Id509−6 Abおよび抗Id1104−2Abで免疫したマウスに
ERA株狂犬病ウイルスに対する顕著なVNA力価を生じた。
他の３種の抗（抗Id）AbはERAウイルスを中和しなかっ
た。対照の実験は、免疫するのに用いた抗Id Abと同様
にマウス抗（正常家兎IgG）Abが狂犬病ウイルス中和活
性を持つていないことを示した。さらに、抗Id509−6Ab
と共に抗（抗Id509−６）血清を予備インキユベートす
ると中和活性を失つた。しかし正常家兎血清で予備イン
キユベートしても活性を失わなかつた。

生じたVNAの特異性を試験するために、他の狂犬病ウイ
ルスを中和測定に用いた。狂犬病のCVS株はmAb509−６
および1104−２の両方と結合した（ここではデータは示
さない）、そして表は、CVSが抗（抗Id509−６）血清お
よび抗（抗Id1104−２）血清の両方によつて中和される
ことを示している。他方、ERAウイルスの変異株であるR
V509−６は、509−６エピトープが変異した結果mAb509
−６による結合および中和活性を失つているが（ラトン
ら著ジヤーナル・オブ・ゼネラル・バイロロジー（J.Ge
n.Virol.1983）64巻:843−851頁参照）、そのウイルス
は抗（抗Id509−６）血清によつて中和されなかつた。
別の中和耐性変異株RV−194−２は、抗（抗Id509−６）
血清によつて中和された。先の結果は、抗GmAb509−６
および194−２に認識される抗原部位が完全に独立して
いることを示す。ラトン等、前掲参照。このデータは、
抗（抗Id509−６）血清が抗GmAb509−６に認識されたエ
ピトープとのみ反応し、したがつて上記エピトープは抗
Id509−6Abにまねられたのであることを示す。

上記実験は説明の目的のみで表わされたのであつてこの
発明を限定するものではなく、この発明は請求の範囲の
みによつて定義されるものである。

フロントページの続き (72)発明者コプロフスキー、ヒラリーアメリカ合衆国ペンシルベニア 19096、ウインウツド、フエアーヒル・ロード 334番 (72)発明者リーガン、カルバンアメリカ合衆国デラウエアー 19809、ウイクリフ、サウス・クリフ・ドライブ 21 番 (72)発明者ビクター、タデウツアメリカ合衆国ペンシルベニア 19096、ウインウツド、ダウンズ・サークル９番 (56)参考文献ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．121，ｎｏ．６（1978），ＰＰ．2358−2362 Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．79（1982），ＰＰ. 6651−6655 Ｊ．Ｅｘｐ，Ｍｅｄ，ｖｏｌ．157 （1983），ＰＰ．687−704 ＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．21（1981），ＰＰ．397− 406

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】生体内で腫瘍に対する免疫応答を誘発する
ことが出来る、抗腫瘍抗体のパロトープであるエピトー
プを同定する抗イデイオタイプ抗体。
【請求項２】モノクローナルである請求の範囲第１項記
載の抗イデイオタイプ抗体。
【請求項３】他の抗体を実質的に含まない請求の範囲第
２項記載の抗イデイオタイプ抗体。
【請求項４】ポリクローナルである請求の範囲第１項記
載の抗イデイオタイプ抗体。
【請求項５】抗アイソタイプ抗体を実質的に含まない請
求の範囲第４項記載の抗イデイオタイプ抗体。
【請求項６】イモータルＢリンパ球により産生された請
求の範囲第１〜５項のいずれかに記載の抗イデイオタイ
プ抗体。
【請求項７】イモータルＢリンパ球がハイブリドーマで
ある請求の範囲第６項記載の抗イデイオタイプ抗体。
【請求項８】腫瘍が固体腫瘍である請求の範囲第１項記
載の抗イデイオタイプ抗体。
【請求項９】抗腫瘍抗体がモノクローナル抗体である請
求の範囲第１項記載の抗イデイオタイプ抗体。
【請求項１０】生体内で腫瘍に対する免疫応答を誘発す
る、抗腫瘍抗体のパロトープであるエピトープを同定す
る抗イデイオタイプ抗体を含有することを特徴とする、
腫瘍に対する免疫応答誘発用組成物。
【請求項１１】異種宿主（ひとを除く）に対して抗腫瘍
抗体を投与し、当該宿主の血清から生体内で腫瘍に対す
る免疫応答を誘発する抗イデイオタイプ抗体を分離する
ことを特徴とする、抗腫瘍抗体のパロトープであるエピ
トープを同定する抗イデイオタイプ抗体の製造法。
【請求項１２】抗腫瘍抗体がモノクローナル抗体である
請求の範囲第11項記載の製造法。
【請求項１３】エピトープが固体腫瘍上のものである請
求の範囲第11項記載の製造法。