JPH07110232B2 - 遺伝子組換え大腸菌の遺伝子生産物を採取する方法および装置 - Google Patents
遺伝子組換え大腸菌の遺伝子生産物を採取する方法および装置Info
- Publication number
- JPH07110232B2 JPH07110232B2 JP60226785A JP22678585A JPH07110232B2 JP H07110232 B2 JPH07110232 B2 JP H07110232B2 JP 60226785 A JP60226785 A JP 60226785A JP 22678585 A JP22678585 A JP 22678585A JP H07110232 B2 JPH07110232 B2 JP H07110232B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substance
- culture
- escherichia coli
- cell
- growth
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/10—Protozoa; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2468—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on beta-galactose-glycoside bonds, e.g. carrageenases (3.2.1.83; 3.2.1.157); beta-agarase (3.2.1.81)
- C12N9/2471—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01023—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔発明の利用分野〕 本発明は、動物，植物及び微生物等から得た目的遺伝子
を導入した細胞を培養し、目的遺伝子を発現させてその
生産物を採取する方法および装置に関する。
を導入した細胞を培養し、目的遺伝子を発現させてその
生産物を採取する方法および装置に関する。
〔発明の背景〕 最近、宿主細胞のベクタープラスミド等に有用物質の生
産情報を有する遺伝子を組込んだ複合DNA（デオキシリ
ボ核酸）を保持する宿主細胞を用いて、当該細胞に上記
有用物質を大量生産させる遺伝子組換え技術が発展して
きた。この技術により既にヒトインターフエロンやイン
スリン等が生産されつつあり、大腸菌，酵母，枯草菌，
放線菌，動物細胞及び植物細胞等は宿主として利用され
てきている。
産情報を有する遺伝子を組込んだ複合DNA（デオキシリ
ボ核酸）を保持する宿主細胞を用いて、当該細胞に上記
有用物質を大量生産させる遺伝子組換え技術が発展して
きた。この技術により既にヒトインターフエロンやイン
スリン等が生産されつつあり、大腸菌，酵母，枯草菌，
放線菌，動物細胞及び植物細胞等は宿主として利用され
てきている。
しかし、目的遺伝子を保持する遺伝子組換え細胞を用い
て目的の生産物を大量に工業生産する方法はまだ開発さ
れておらず、遺伝子組換え細胞の効率的な培養方法の開
発が急がれている。
て目的の生産物を大量に工業生産する方法はまだ開発さ
れておらず、遺伝子組換え細胞の効率的な培養方法の開
発が急がれている。
遺伝子組換え細胞に目的の生産物を大量に生産させる方
法の一つとして、培養液中の細胞濃度を高めることが考
えられる。しかし、細胞濃度を上げるため基質を流加し
ても培養途中から菌体増殖が停止し、細胞濃度を上げる
ことが困難になる。そこで、菌体増殖を停止させる原因
となる抑制物質を除去するために、培養液を断続的又は
連続的に抜き出し遠心分離により菌体を回収して再び培
養槽に仕込む方法（特開昭53−29985号公報）が提供さ
れている。これは酵母を対象としたもので、細胞を大量
に生産させるためのプロセスであり、細胞に目的物質を
生産させるためのプロセスではない。
法の一つとして、培養液中の細胞濃度を高めることが考
えられる。しかし、細胞濃度を上げるため基質を流加し
ても培養途中から菌体増殖が停止し、細胞濃度を上げる
ことが困難になる。そこで、菌体増殖を停止させる原因
となる抑制物質を除去するために、培養液を断続的又は
連続的に抜き出し遠心分離により菌体を回収して再び培
養槽に仕込む方法（特開昭53−29985号公報）が提供さ
れている。これは酵母を対象としたもので、細胞を大量
に生産させるためのプロセスであり、細胞に目的物質を
生産させるためのプロセスではない。
本発明の目的は、効率的な遺伝子組換え細胞の培養方法
および装置を提供することにある。
および装置を提供することにある。
本発明は、目的遺伝子，ベクター及びプロモータから成
る複合DNAを細胞内に保持し、かつ目的遺伝子の発現能
を有する細胞を培養し、目的遺伝子を発現させその生産
物を採取するに際し、該遺伝子組換え細胞の培養中に増
殖抑制物質を除去しまたは除去しながら細胞の増殖を図
る工程と誘導抑制物質を除去した後に目的物質の生産を
誘導させる工程より成ることを特徴とする遺伝子組換え
細胞の高効率培養方法および装置を提供するものであ
る。
る複合DNAを細胞内に保持し、かつ目的遺伝子の発現能
を有する細胞を培養し、目的遺伝子を発現させその生産
物を採取するに際し、該遺伝子組換え細胞の培養中に増
殖抑制物質を除去しまたは除去しながら細胞の増殖を図
る工程と誘導抑制物質を除去した後に目的物質の生産を
誘導させる工程より成ることを特徴とする遺伝子組換え
細胞の高効率培養方法および装置を提供するものであ
る。
本発明では遺伝子組換え細胞の高効率培養方法を示す具
体例として、プロモータにtrp（オリプトフアン）プロ
モータを用い、それにβ−gal（β−ガラクトシダー
ゼ）遺伝子を連結した複合プラスミドpTREZ1を保持する
大腸菌HB101株による培養方法および装置を示す。
体例として、プロモータにtrp（オリプトフアン）プロ
モータを用い、それにβ−gal（β−ガラクトシダー
ゼ）遺伝子を連結した複合プラスミドpTREZ1を保持する
大腸菌HB101株による培養方法および装置を示す。
第４図に遺伝子組換え大腸菌を用いて流加培養を行つた
結果を示す。溶存酸素濃度の上昇を指標として基質であ
るグルコース、カザミノ酸培地を流加した。18時間目に
は菌体濃度が13.1g/に達したが、これ以後菌体の増殖
は停止した。β−gal生産を誘導させるため、誘導剤のI
A（３−β−インドールアクリル酸）と栄養物質である
カザミノ酸を32時間目に添加したが、β−gal生産は誘
導されなかつた。このように、菌体増殖が停止するのは
培養上清液に菌体増殖やβ−gal生産を抑制する物質が
存在するためではないかと考えられた。そこで、菌体が
増殖している12時間目と停止した19時間目の上清液に新
しい培地と新鮮な菌体を添加して培養した。その結果を
第２図に示す。19時間目の上清液では菌体は全く増殖せ
ず、12時間目でも比増殖速度は対照の約半分であり極め
て増殖が悪かつた。一方、菌体の増殖活性を調べるため
凍結保存した菌体を新鮮培地に接種したところ、12時間
目と19時間目の菌体の比増殖速度は対照とほぼ同じであ
り、菌体増殖活性は低下していなかつた。また、β−ga
l生産も誘導剤の添加により誘導された。以上から、培
養の経過につれて菌体の増殖とβ−gal生産の誘導を抑
制する物質が蓄積することがわかつた。
結果を示す。溶存酸素濃度の上昇を指標として基質であ
るグルコース、カザミノ酸培地を流加した。18時間目に
は菌体濃度が13.1g/に達したが、これ以後菌体の増殖
は停止した。β−gal生産を誘導させるため、誘導剤のI
A（３−β−インドールアクリル酸）と栄養物質である
カザミノ酸を32時間目に添加したが、β−gal生産は誘
導されなかつた。このように、菌体増殖が停止するのは
培養上清液に菌体増殖やβ−gal生産を抑制する物質が
存在するためではないかと考えられた。そこで、菌体が
増殖している12時間目と停止した19時間目の上清液に新
しい培地と新鮮な菌体を添加して培養した。その結果を
第２図に示す。19時間目の上清液では菌体は全く増殖せ
ず、12時間目でも比増殖速度は対照の約半分であり極め
て増殖が悪かつた。一方、菌体の増殖活性を調べるため
凍結保存した菌体を新鮮培地に接種したところ、12時間
目と19時間目の菌体の比増殖速度は対照とほぼ同じであ
り、菌体増殖活性は低下していなかつた。また、β−ga
l生産も誘導剤の添加により誘導された。以上から、培
養の経過につれて菌体の増殖とβ−gal生産の誘導を抑
制する物質が蓄積することがわかつた。
これらの検討結果から遺伝子組換え細胞の増殖を活発に
させ、細胞濃度を上げるために培養中に蓄積する増殖抑
制物質を除去すること、さらには、細胞増殖後、該細胞
に目的物質の生産を誘導させるために、誘導を抑制する
物質を誘導前に除去することを特徴とする本発明を生む
に至つた。とくに、遺伝子組換え細胞に目的物質を誘導
生産させる前に誘導抑制物質を除去することにより、物
質生産を効率化する方法は本発明により初めて見い出さ
れたものであり、遺伝子組換え細胞培養においてきわめ
て重要な知見である。
させ、細胞濃度を上げるために培養中に蓄積する増殖抑
制物質を除去すること、さらには、細胞増殖後、該細胞
に目的物質の生産を誘導させるために、誘導を抑制する
物質を誘導前に除去することを特徴とする本発明を生む
に至つた。とくに、遺伝子組換え細胞に目的物質を誘導
生産させる前に誘導抑制物質を除去することにより、物
質生産を効率化する方法は本発明により初めて見い出さ
れたものであり、遺伝子組換え細胞培養においてきわめ
て重要な知見である。
本発明において増殖抑制物質や誘導抑制物質を除去する
方法として次のようなものがある。培養液の一部を抜き
出し遠心分離により細胞を回収し再び培養槽に戻す方
法、抑制物質が低分子物質である場合は透析膜や限外濾
過膜などを用いて除去する方法またはイオン交換樹脂を
用いる方法などがある。
方法として次のようなものがある。培養液の一部を抜き
出し遠心分離により細胞を回収し再び培養槽に戻す方
法、抑制物質が低分子物質である場合は透析膜や限外濾
過膜などを用いて除去する方法またはイオン交換樹脂を
用いる方法などがある。
目的物質の生産を誘導させるには、宿主が大腸菌の場合
にtrpプロモータに対しては上記のIA（３−β−インド
ールアクリル酸）の添加が、lacプロモータ、tacプロモ
ータに対してはIPTG（イソプロピル−β−ローチオガラ
クトシド）等の添加が、PLプロモータに対しては培養液
の温度を上昇させることが有効である。目的物質の生産
を誘導させる時に添加する栄養物質としては、アミノ酸
の混合物であるカザミノ酸，アミノ酸，グルコース，酵
母エキスなどが有効である。
にtrpプロモータに対しては上記のIA（３−β−インド
ールアクリル酸）の添加が、lacプロモータ、tacプロモ
ータに対してはIPTG（イソプロピル−β−ローチオガラ
クトシド）等の添加が、PLプロモータに対しては培養液
の温度を上昇させることが有効である。目的物質の生産
を誘導させる時に添加する栄養物質としては、アミノ酸
の混合物であるカザミノ酸，アミノ酸，グルコース，酵
母エキスなどが有効である。
上記した抑制物質除去方法、誘導方法及び添加する栄養
物質に関しては、用いた宿主、抑制物質及び生産する目
的物質に応じて選択すれば良い。
物質に関しては、用いた宿主、抑制物質及び生産する目
的物質に応じて選択すれば良い。
つぎに本発明方法を実施するに必要な装置の一例を第３
図に示す。培養槽１内に培地と種細胞を入れ、導管13に
より培養槽１内に空気を吹込みつつ撹拌機２により培養
液を撹拌しながら遺伝子組換え細胞を培養する。この
時、培養槽１に設置した溶存酸素センサ６と溶存酸素計
５を用いて培養液の溶存酸素濃度を測定する。測定した
データは制御器３に送られ、溶存酸素濃度の変化を監視
し、溶存損素濃度が急激に上昇した時点で定量ポンプ９
に信号を送り、基質槽７から基質を流加する。一定時間
の培養後、導管16により培養液を抜き出し、抑制物質除
去器４により抑制物質を除去した後の細胞液を導管15に
より培養槽に戻す。細胞が高密度に達した時点で、同じ
ように抑制物質除去器４により抑制物質を除去した後、
定量ポンプ10により誘導槽８から誘導剤と基質を添加
し、目的物質の生産を誘導させて、目的物質の大量生産
を行う。細胞内又は細胞外に生産された目的物質は分離
精製することにより製品となる。
図に示す。培養槽１内に培地と種細胞を入れ、導管13に
より培養槽１内に空気を吹込みつつ撹拌機２により培養
液を撹拌しながら遺伝子組換え細胞を培養する。この
時、培養槽１に設置した溶存酸素センサ６と溶存酸素計
５を用いて培養液の溶存酸素濃度を測定する。測定した
データは制御器３に送られ、溶存酸素濃度の変化を監視
し、溶存損素濃度が急激に上昇した時点で定量ポンプ９
に信号を送り、基質槽７から基質を流加する。一定時間
の培養後、導管16により培養液を抜き出し、抑制物質除
去器４により抑制物質を除去した後の細胞液を導管15に
より培養槽に戻す。細胞が高密度に達した時点で、同じ
ように抑制物質除去器４により抑制物質を除去した後、
定量ポンプ10により誘導槽８から誘導剤と基質を添加
し、目的物質の生産を誘導させて、目的物質の大量生産
を行う。細胞内又は細胞外に生産された目的物質は分離
精製することにより製品となる。
実施例１ 菌体：複合プラスミドpTREZ1を保持する大腸菌HB101
株。
株。
初発培地:M9−カザミノ酸培地、組成はNH4Cl 1g、Na2HP
O4 6g、K2PO4 3g、NaCl 5g、MgSO4・7H2O 0.1g、CaCl・
2H2O 15mg、チアミン塩酸塩0.1g.プロリン0.1g、トリプ
トフアン0.01g、グルコース5g、カザミノ酸2.5g、酵母
エキス1.5g、蒸留水１、pH7.0である。なお本培地に
は複合プラスミドを保持する大腸菌のみを増殖させるた
め、アンピシリン（Ap）を50m/添加した。
O4 6g、K2PO4 3g、NaCl 5g、MgSO4・7H2O 0.1g、CaCl・
2H2O 15mg、チアミン塩酸塩0.1g.プロリン0.1g、トリプ
トフアン0.01g、グルコース5g、カザミノ酸2.5g、酵母
エキス1.5g、蒸留水１、pH7.0である。なお本培地に
は複合プラスミドを保持する大腸菌のみを増殖させるた
め、アンピシリン（Ap）を50m/添加した。
流加用培地：グルコース200g、プロリン4g、カザミノ酸
100g、酵母エキス60g、トリブトフアン0.4g、蒸留水１
、pH7.0である。
100g、酵母エキス60g、トリブトフアン0.4g、蒸留水１
、pH7.0である。
培養条件：複合プラスミドを保持する大腸菌を50mlのM9
−カザミノ培養地を入れた500ml容振とうフラスコ４本
に接種し、振とう培養機により、振幅7cm、振とう回数1
15回/min、37℃で一晩培養した。この種菌液200mlをM9
−カザミノ培養地の入つた５ジヤーフアーメンタに接
種し、初発液量２で37℃、pH7.0通気量２/minで培
養を開始した。培養中の溶存酸素濃度の変化を検知し、
溶存酸素濃度が急激に上昇した時点で流加用培地を50ml
流加した。
−カザミノ培養地を入れた500ml容振とうフラスコ４本
に接種し、振とう培養機により、振幅7cm、振とう回数1
15回/min、37℃で一晩培養した。この種菌液200mlをM9
−カザミノ培養地の入つた５ジヤーフアーメンタに接
種し、初発液量２で37℃、pH7.0通気量２/minで培
養を開始した。培養中の溶存酸素濃度の変化を検知し、
溶存酸素濃度が急激に上昇した時点で流加用培地を50ml
流加した。
第１図に示すように20時間目に遠心分離により培養上清
液を除き菌体を回収し再び新鮮培地に懸濁して基質を流
加したところ、28.5時間目に菌体濃度は19.2g/の高濃
度に達した。31時間目に再度遠心分離して菌体を回収し
た後、新鮮培地に懸濁し、グルコースが消費された時点
でIAを50mg/とカザミノ酸25mg/を添加したところβ
−gal生産量は添加前の1.4倍に向上した。
液を除き菌体を回収し再び新鮮培地に懸濁して基質を流
加したところ、28.5時間目に菌体濃度は19.2g/の高濃
度に達した。31時間目に再度遠心分離して菌体を回収し
た後、新鮮培地に懸濁し、グルコースが消費された時点
でIAを50mg/とカザミノ酸25mg/を添加したところβ
−gal生産量は添加前の1.4倍に向上した。
以上詳述したように、本発明によれば、培養中に増殖抑
制物質や誘導抑制物質を除去するのみで高密度の細胞濃
度を達成出来かつ目的物質の生産を誘導出来る。
制物質や誘導抑制物質を除去するのみで高密度の細胞濃
度を達成出来かつ目的物質の生産を誘導出来る。
第１図は遺伝子組換え細胞の流加培養中に培養上清液の
除去を行つた結果の一例を表わす図、第２図は培養液中
の増殖抑制物質により細胞増殖が抑制された例を表わす
図、第３図は本発明の培養装置例の概略図、第４図は遺
伝子組換え細胞の流加培養結果の一例を表わす図であ
る。 １……培養槽、２……撹拌機、３……制御器、４……抑
制物質除去器、５……溶存酸素計、６……溶算酸素セン
サ、７……基質槽、８……誘導槽、9,10……定量ポン
プ、11,12,13,14,15,16……導管。
除去を行つた結果の一例を表わす図、第２図は培養液中
の増殖抑制物質により細胞増殖が抑制された例を表わす
図、第３図は本発明の培養装置例の概略図、第４図は遺
伝子組換え細胞の流加培養結果の一例を表わす図であ
る。 １……培養槽、２……撹拌機、３……制御器、４……抑
制物質除去器、５……溶存酸素計、６……溶算酸素セン
サ、７……基質槽、８……誘導槽、9,10……定量ポン
プ、11,12,13,14,15,16……導管。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 藤森 清 東京都国分寺市東恋ヶ窪１丁目280番地 株式会社日立製作所基礎研究所内 (72)発明者 緒田原 蓉二 東京都国分寺市東恋ヶ窪１丁目280番地 株式会社日立製作所基礎研究所内 (56)参考文献 特開 昭59−175877（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−141796（ＪＰ，Ａ) 特表 昭58−501323（ＪＰ，Ａ)
Claims (2)
- 【請求項１】目的遺伝子、ベクターおよびプロモータよ
りなる複合DNAを細胞内に保持し、かつ目的遺伝子の発
現能を有する遺伝子組換え大腸菌を培養し、目的遺伝子
を発現させてその生産物を採取する方法において、該遺
伝子組換え大腸菌の培養中に蓄積する増殖抑制物質を除
去しまたは除去しながら細胞の増殖を図る工程、細胞の
増殖工程の後目的物質の誘導を抑制する物質を除去する
工程及び目的物質の誘導を抑制する物質を除去する工程
の後目的物質の生産を誘導させる工程をそれぞれ実行す
ることよりなることを特徴とする遺伝子組換え大腸菌の
生産物を採取する方法。 - 【請求項２】目的遺伝子、ベクターおよびプロモータよ
りなる複合DNAを細胞内に保持し、かつ目的遺伝子の発
現能を有する遺伝子組換え大腸菌と培地とを収容し所定
の増殖方向を適用されて遺伝子組換え大腸菌を増殖させ
るための培養槽、前記培養槽から前記培養液を抽出して
前記大腸菌の増殖を抑制する物質を除去して前記培養槽
に戻す手段、前記遺伝子組換え大腸菌の濃度が所定の高
濃度に達したとき、培養槽から前記培養液を抽出して前
記大腸菌の増殖を抑制する物質を除去するとともに、目
的遺伝子の発現を誘導する誘導剤と基質とを前記培養槽
に供給する手段とよりなることを特徴とする遺伝子組換
え大腸菌の生産物を採取する装置。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60226785A JPH07110232B2 (ja) | 1985-10-14 | 1985-10-14 | 遺伝子組換え大腸菌の遺伝子生産物を採取する方法および装置 |
| DE86114159T DE3688311T2 (de) | 1985-10-14 | 1986-10-13 | Verfahren zum Züchten von rekombinanten Zellen. |
| EP86114159A EP0219791B1 (en) | 1985-10-14 | 1986-10-13 | Process for culturing recombinant cells |
| KR1019860008553A KR890004020B1 (ko) | 1985-10-14 | 1986-10-13 | 재조합균세포의 배양방법 |
| US08/124,075 US5445948A (en) | 1985-10-14 | 1993-09-21 | Process for culturing recombinant cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60226785A JPH07110232B2 (ja) | 1985-10-14 | 1985-10-14 | 遺伝子組換え大腸菌の遺伝子生産物を採取する方法および装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6287086A JPS6287086A (ja) | 1987-04-21 |
| JPH07110232B2 true JPH07110232B2 (ja) | 1995-11-29 |
Family
ID=16850574
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60226785A Expired - Lifetime JPH07110232B2 (ja) | 1985-10-14 | 1985-10-14 | 遺伝子組換え大腸菌の遺伝子生産物を採取する方法および装置 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5445948A (ja) |
| EP (1) | EP0219791B1 (ja) |
| JP (1) | JPH07110232B2 (ja) |
| KR (1) | KR890004020B1 (ja) |
| DE (1) | DE3688311T2 (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE84568T1 (de) * | 1985-08-15 | 1993-01-15 | Amgen Inc | Gaerverfahren zur herstellung von hepatitisimpfstoff. |
| PT84991B (pt) * | 1986-06-06 | 1990-03-08 | Genentech Inc | Processo para a producao de actividador do plasminogenio biologicamente activo |
| JP2676511B2 (ja) * | 1987-03-23 | 1997-11-17 | 株式会社日立製作所 | 酢酸を指標とした培養方法及びその装置 |
| CA1322735C (en) * | 1987-11-07 | 1993-10-05 | Shinichiro Haze | Microorganism having low acetate forming capability, and process for production of useful substrate using same |
| JPH0227993A (ja) * | 1988-07-15 | 1990-01-30 | Nippon Shinyaku Co Ltd | ｈＥＧＦの製法 |
| US5955323A (en) * | 1996-08-01 | 1999-09-21 | American Home Products Corporation | Automated high-yield fermentation of plasmid DNA in Escherichia coli |
| US20030017554A1 (en) * | 2000-11-15 | 2003-01-23 | Mechthild Rieping | Process for the fermentative preparation of L-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family |
| US20030054503A1 (en) * | 2001-04-03 | 2003-03-20 | Degussa Ag | Process for the production of L-amino acids using strains of the family enterobacteriaceae that contain an attenuated dgsA gene |
| WO2003008606A2 (en) * | 2001-07-18 | 2003-01-30 | Degussa Ag | Process for the preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family which contain an enhanced phob or phor gene |
| EP1424558A4 (en) * | 2001-08-17 | 2004-12-15 | Eisai Co Ltd | REAGENT FOR TESTING LAMININE-5-ANTIGENS IN A BIOLOGICAL SAMPLE AND TEST PROCEDURE |
| EP1498475A1 (en) * | 2003-07-18 | 2005-01-19 | Meristem Therapeutics S.A. | Continuous plant cell bioreactor and method for continuous plant cell culture |
| GB0704025D0 (en) * | 2007-03-02 | 2007-04-11 | Ekb Technology Ltd | Inhibitory product removal |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS49126882A (ja) * | 1973-04-19 | 1974-12-04 | ||
| US4282255A (en) * | 1979-06-28 | 1981-08-04 | State Of Oregon, By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University | Method and starter compositions for the growth of acid producing bacteria and bacterial compositions produced thereby |
| US4420398A (en) * | 1981-08-13 | 1983-12-13 | American National Red Cross | Filteration method for cell produced antiviral substances |
| JPS58141796A (ja) * | 1982-02-18 | 1983-08-23 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ペプチドの製造法 |
| ZA839242B (en) * | 1982-12-15 | 1984-09-26 | Bio Response Inc | A method and system for culturing and treating substances disposed in a flowing culture fluid |
| BG49718A3 (bg) * | 1983-07-15 | 1992-01-15 | Bio- Technology General Corp | Метод за получаване на полипептид със супероксиддисмутазна активност |
| DE3585176D1 (de) * | 1984-06-22 | 1992-02-27 | Hitachi Ltd | Verfahren zum kontrollieren der zuechtung von rekombinanten. |
| JPH078231B2 (ja) * | 1985-03-25 | 1995-02-01 | 株式会社日立製作所 | 培養制御方法及び培養制御装置 |
-
1985
- 1985-10-14 JP JP60226785A patent/JPH07110232B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-10-13 DE DE86114159T patent/DE3688311T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-10-13 KR KR1019860008553A patent/KR890004020B1/ko not_active Expired
- 1986-10-13 EP EP86114159A patent/EP0219791B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-09-21 US US08/124,075 patent/US5445948A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3688311T2 (de) | 1993-10-28 |
| KR890004020B1 (ko) | 1989-10-16 |
| US5445948A (en) | 1995-08-29 |
| JPS6287086A (ja) | 1987-04-21 |
| EP0219791A3 (en) | 1988-09-07 |
| KR870004130A (ko) | 1987-05-07 |
| EP0219791A2 (en) | 1987-04-29 |
| DE3688311D1 (de) | 1993-05-27 |
| EP0219791B1 (en) | 1993-04-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Shimizu et al. | Fed-batch cultures of recombinant Escherichia coli with inhibitory substance concentration monitoring | |
| RU2008152445A (ru) | Процесс периодической ферментации с подпиткой при высокой плотности клеток для получения рекомбинантного белка | |
| EP0052861B1 (en) | Extraction of interferon from bacteria | |
| JPH07110232B2 (ja) | 遺伝子組換え大腸菌の遺伝子生産物を採取する方法および装置 | |
| JPH06261772A (ja) | Ｄ−パント酸、ｄ−パントテン酸およびそれらの塩の製造法 | |
| CN116904379A (zh) | 一种高产四氢嘧啶的基因重组菌株及其构建方法和应用 | |
| JP2676511B2 (ja) | 酢酸を指標とした培養方法及びその装置 | |
| AU632753B2 (en) | Extraction of human interleukin-4 from bacteria | |
| ATE265539T1 (de) | Verfahren zur isolierung von ccc plasmid dna | |
| SU974817A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
| JPH05137585A (ja) | エリスリトール連続培養法 | |
| CA2246538C (en) | Crystalline protease and method for producing same | |
| RU2118366C1 (ru) | Способ промышленного получения человеческого лейкоцитарного интерферона-альфа-2 | |
| JPS62134086A (ja) | 動物細胞の培養方法 | |
| SU904325A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
| KR890003714B1 (ko) | 유전자 조작 미생물에 의한 l-페닐알라닌 제조방법 | |
| JPS62111693A (ja) | α−ケトカルボン酸からＬ−アミノ酸を発酵により製造する方法 | |
| RU2143002C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ γ-АМИНОМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ | |
| JPS63141579A (ja) | 高効率培養制御方法 | |
| SU1449579A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани АRтнRовастеR LUтеUS - продуцента рестриктазы AI и I | |
| US20060286631A1 (en) | Method for preparating t-20 peptide by high cell density cultivation of recombinant e. coli containing t-20 peptide coding gene | |
| CN121426934A (zh) | 一种重组人纤连蛋白及其制备方法和应用 | |
| JPS6170982A (ja) | 遺伝子組換え菌の培養制御方法 | |
| CN120059983A (zh) | 一种合成功能性脂肪酸的毕赤酵母工程菌的构建方法及其应用 | |
| CN119220527A (zh) | 在蛋白发酵生产中减少包涵体的方法 |