JPH0690745A

JPH0690745A - Ｌｐｓ産生菌、ｌｐｓ、ｌｐｓを含む医薬及び動物薬

Info

Publication number: JPH0690745A
Application number: JP4332205A
Authority: JP
Inventors: Genichiro Soma; 源一郎杣; Atsushi Yoshimura; 淳吉村; Daisuke Tsukioka; 大輔月岡; Denichi Mizuno; 伝一水野; Haruyuki Oshima; 治之大島
Original assignee: CHIBA SEIFUN KK
Current assignee: CHIBA SEIFUN KK
Priority date: 1990-08-20
Filing date: 1992-11-19
Publication date: 1994-04-05

Abstract

(57)【要約】【目的】経口、経皮、注射のいずれでも投与可能な新
規な免疫機能活性化剤、鎮痛剤、及びそれらの動物薬、
それらの活性成分である新規ＬＰＳ、及びそれらＬＰＳ
を産生する新規な細菌を提供する。【構成】次の物性を有する３種のＬＰＳを特徴とす
る。ＬＰＳ１主要分子量：５，０００±１，０００
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法）リン数：２±１／分子量５，０００ヘキソサミン数：９±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：２±１／分子量５，０００ＬＰＳ２主要分子量：６，５００±２，５００
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法）リン数：１〜２／分子量５，０００ヘキソサミン数：７±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：１〜２／分子量５，０００ＬＰＳ３主要分子量：６，５００±２，５００
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法）リン数：２±１／分子量５，０００ヘキソサミン数：５±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：２±１／分子量５，０００

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規なＬＰＳ産生菌、
新規なＬＰＳ、新規なＬＰＳを含む医薬及び動物薬に関
する。より詳細には、本発明は、ＬＰＳを産生する３種
の新規なブドウ糖発酵性のグラム陰性短桿菌、それに由
来する新規なＬＰＳ、及びそれらＬＰＳを含む新規な免
疫機能活性化剤、鎮痛剤、及び動物用の新規な免疫機能
活性化剤、鎮痛剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】生物には、生体の内部環境が外来性及び
内因性の異物によって攪乱されるのを防ぎ、生体の恒常
性を維持するための免疫機能が備わっている。従って、
免疫機能の低下は健康の悪化、各種疾病の発病、老化促
進の原因となり、その活性化は健康向上、各種疾病の発
病阻止、治癒、老化防止につながる。このため、免疫機
能を活性化させる物質の提供が要請されており、現在、
ＰＳＫ［別名クレスチン（呉羽化学株式会社の登録商
標）］、レンチナン（味の素株式会社の登録商標）、ベ
スタチン（日本化薬株式会社の登録商標）、ソニフィラ
ン（科研製薬株式会社の登録商標）、ＯＫ−４３２［キ
ャンサ− ケモセラピ−レポ−トゥパ−トゥ１（Ｃ
ａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙＲｅｐｏｒｔ
ｓＰａｒｔ１）、ｖｏｌ．５８、Ｎｏ．１、１０頁
（１９７２）、別名ピシバニ−ル（中外製薬株式会社の
登録商標）］等が知られている。

【０００３】鎮痛剤は麻薬系鎮痛剤と非麻薬系鎮痛剤と
に大別される。麻薬系鎮痛剤は、麻薬であることからし
て、投与に際しては最大限の注意が必要とされている。
（昭和５６年に株式会社メヂカルフレンド社が発行した
「痛みの臨床」の７０〜７４頁）一方、非麻薬系鎮痛剤の鎮痛作用は一般に麻薬系に比べ
て弱く、非習慣性であることが特徴であるが、長期使用
においては耐性、依存性がみられるなど、薬理学的には
麻薬系鎮痛剤と全く同様に取り扱われるべき薬剤である
と考えるべきとされている。（前掲「痛みの臨床」の７
４頁）

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従来の免疫機能活性化
剤のうちで、ＰＳＫ、レンチナン、ベスタチン、ソニフ
ィランはＴＮＦ産生能がないので、それらの免疫機能活
性化能は低い。一方、ＯＫ−４３２にはＴＮＦ産生能が
あるが、大量投与が必要であることから、発熱、悪寒、
血圧低下、血小板減少等の副作用の発生が避けられず、
従って化学療法係数が小さい。更に、簡便な経口投与や
経皮投与では効果がないので、投与上の便宜に欠ける。
ここで、「ＴＮＦ」とは、マクロファ−ジにより産生さ
れる腫瘍障害因子（ＴｕｍｏｒＮｅｃｒｏｓｉｓＦ
ａｃｔｏｒ）の総称［ザジャ−ナルオブバイオロジ
カルケミストリ−（ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆ
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、２６０、２３４５〜２３５４
頁（１９８５年）］であり、マクロファ−ジの活性が高
まるにつれてその産生量は増していく。「マクロファ−
ジ」は、免疫担当細胞の一種であり、動物体内のほとん
ど全ての組織に分布し、粒子状の異物や体内の老廃細胞
などを捕食して消化する大型のアメ−バ状細胞の総称で
ある。「化学療法係数」は、薬剤に対する宿主の最大耐
量と病原菌に対する薬剤の最小有効濃度の比をいい、こ
の値が大きい程すぐれた化学療法剤とされる。

【０００５】又、現在使用されている鎮痛剤には前記の
通り欠点があり、未だ満足すべきものは提供されていな
い。特に、慢性痛に対する鎮痛剤として、安全性が高
く、副作用がなく、安価で投与方法が簡便な薬剤の開発
が強く待たれている。

【０００６】本発明は、前記各従来技術の諸欠点が解消
された新規な免疫機能活性化剤、鎮痛剤、及び動物用の
新規な免疫機能活性化剤、鎮痛剤を提供すること、それ
らの活性成分である新規ＬＰＳを提供すること、及びそ
れらＬＰＳを産生する新規細菌を提供することを技術的
課題とするものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】前記技術的課題は、高い
免疫機能活性化能、鎮痛効果を有し、化学治療係数が高
く、長期使用が可能であり、経口、経皮、注射のいずれ
の経路でも投与可能であり、しかも、生産コストが安
く、大量に供給可能な新規なＬＰＳを提供すること、及
びそれらＬＰＳの供給源となる新規な細菌を提供するこ
とにより達成される。

【０００８】細菌分離源本発明の３種の細菌は、本発明者等が検討した小麦から
はその産地、種類を問わず分離されている。従って、い
ずれの産地、種類の小麦及びその加工品からも分離され
ると推定される。本発明者等がそれら３種の細菌を分離
できることを確認した小麦粉の産地、種類は次の通りで
ある。小麦粉の名称産地ダ−ク・ノザン・スプリングス米国１・カナディアン・ホイ−トカナダハ−ド・レッド・ウインタ−・セミハ−ド米国オ−ストラリアン・スタンダ−ド・ホイ−トオ−ストラリアホロシリ日本

【０００９】ＬＰＳの分離上記細菌から本発明のＬＰＳを分離するには、ウェスト
ファル（Ｗｅｓｔｐｈａｌ）等が「メソッズインカ
−ボハイドレ−トケミストリ−（Ｍｅｔｈｏｄｓｉ
ｎＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ）
のｖｏｌ．Ｖ［米国ニュ−ヨ−クのアカデミックプレ
ス（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ）社が１９６５年に
発行］の８３頁に記載した熱フェノ−ル法を用い、更
に、陰イオン交換樹脂で精製すればよい。即ち、菌体を
蒸留水に懸濁した後、蒸留水と等容量の熱フェノ−ルと
共に攪拌し、次いで、遠心分離により水層を回収し、こ
の水層を透析に付してフェノ−ルを除去し、限外濾過に
より濃縮して粗ＬＰＳ画分を得、この画分を常法に従
い、例えば、ファルマシア社製のＦＰＬＣシステムでフ
ァルマシア社製のモノＱ−セファロ−ス（Ｓｅｐｈａｒ
ｏｓｅ）、Ｑ−セファロ−ス（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）を
使用して陰イオン交換クロマトグラフィ−に付して精製
し、更に、常法に従って脱塩すればよい。以上の操作に
より、純度９６％以上の精製標品が得られる。

【００１０】ＬＰＳの物性追って実施例中で詳述する如く、本発明の３種のＬＰＳ
（９６％以上純度標品）の物性は次の通りであった。
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法は実施例１で定義する）ＬＰＳ１主要分子量：５，０００±１，０００（Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥ法）リン数：２±１／分子量５，０００ヘキソサミン数：９±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：２±１／分子量５，０００ＬＰＳ２主要分子量：６，５００±２，５００（Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥ法）リン数：１〜２／分子量５，０００ヘキソサミン数：７±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：１〜２／分子量５，０００ＬＰＳ３主要分子量：６，５００±２，５００（Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥ法）リン数：２±１／分子量５，０００ヘキソサミン数：５±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：２±１／分子量５，０００

【００１１】提供の形態本発明のＬＰＳはそのまま、或いは任意の程度に濃縮し
た形で提供できる。又、保存性を高めるために、凍結乾
燥や噴霧乾燥などの任意の手段により乾燥粉末として提
供することもできる。これらはいずれも常法で生産でき
る。

【００１２】免疫活性化能の測定本発明のＬＰＳの免疫活性化能は、マクロファ−ジ活性
を通じての内因性ＴＮＦ産生能により確認した。

【００１３】動物体内にＴＮＦを産生させるためには、
産生前駆（プライミング）段階と産生開始（トリガリン
グ）段階とが必要であることは、カ−ズウェル（Ｃａｒ
ｓｗｅｌｌ）らにより、プロシ−ディングオブナシ
ョナルアカデミ− サイエンスオブユ−エスエ−
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ．）、７２、３６６６〜３６７０頁（１９７５年）に
報告されており、その後、各段階で使用出来る薬剤の検
討もすすめられている。プライミング段階開始のために
投与される薬剤が「プライマ−」（内因性ＴＮＦ産生促
進剤）であり、トリガリング段階開始のために投与され
る薬剤が「トリガ−」（内因性ＴＮＦ産生剤）である。

【００１４】ＴＮＦ活性は、Ｌ−９２９細胞［プロシ−
ディングオブナショナルアカデミ− サイエンス
オブユ−エスエ− ７２、３６６６〜３６７０頁］
に対する細胞毒性を基にして、次のようにして測定す
る。Ｌ９２９細胞を、５％仔牛胎児血清を加えたイ−グ
ルミニマムエッセンシャル培地（以下、ＭＥＭ培地と表
す）で育成し、８×１０⁴ 個の細胞が１００μｌの同上
培地に含まれる様にし、９６穴の平底プレ−トで育種す
る。育種条件は３７⁰Ｃ、２時間、５％ＣＯ₂、１００％
Ｈ₂Ｏであり、通常の細胞培養に用いられる方法でよ
い。その後、アクチノマイシンＤを培地中に終濃度１μ
ｇ／ｍｌとなるように加え、培養液の液量を１５０μｌ
とする。即座に、検体を適当にＭＥＭ培地で稀釈したも
のを５０μｌ加える（この際稀釈率を適宜調製し、ＥＤ
₅₀を求める事ができる）。更に、最終液量２００μｌと
なったＬ９２９細胞を上記条件で１８時間培養する。

【００１５】細胞障害活性を測定するには、まず全培地
を除去し、ついで０．１％クリスタルバイオレットを含
む１％メチルアルコ−ル溶液を加えて固定染色する。ク
リスタルバイオレットは全有核細胞を染色するが、死細
胞は染色後にプレ−ト底面より水洗で除去されるので、
生存細胞の結果から細胞障害活性を直接測定できる。こ
の染色度をＯＤ（５９０ｎｍ）での吸光度を指標として
測定し、対照群に対する染色度と比較する事で細胞障害
活性を測定する。活性の定義は次の様に行う。Ｌ９２９
細胞が５０％生存できる検体の稀釈率（Ｎ）を求める。
対照としてウサギＴＮＳ［腫瘍障害血清（Ｔｕｍｏｒ
ＮｅｃｒｏｓｉｓＳｅｒｕｍ）］を使用し、このウサ
ギＴＮＳの活性ｎ（単位／ｍｌ）を２．４×１０⁶ 単位
／ｍｇ／ｍｌのＴＮＦ−αを用いて決定する。このウサ
ギＴＮＳのＥＤ₅₀を与える稀釈率（Ｃ）を求める。検体
活性（単位／ｍｌ）はＮ／Ｃ × ｎで計算する。

【００１６】鎮痛効果の測定本発明のＬＰＳの鎮痛効果は、非麻薬系鎮痛剤検定法の
１つとして確立されている「酢酸−ライズィング（Ｗｒ
ｉｔｈｉｎｇ）法」（１９８２年に医歯薬出版株式会社
から発行された「炎症と抗炎症療法」の４１５頁）によ
る動物実験により確認した。

【００１７】本発明のＬＰＳは各別に使用できることは
もちろん、その意図される用途が阻害されない限り、そ
れらの２種以上を任意に組み合わせて、或いは、更に
は、他のいずれの物質とも組み合わせて使用できる。
又、免疫機能検査薬、動物用免疫機能検査薬、医薬部外
品、化粧品、食品、機能性食品、飲料、飼料等として、
或いはその一成分としても用いることができる。

【００１８】本発明のＬＰＳを含む免疫機能活性化剤等
のいずれもが常法の製剤技術或は動物薬製造の常法によ
り、経口薬として、或いは静注薬、筋注薬、経皮薬とし
て単独で、或いは他薬との配合物として、散剤、顆粒
剤、丸剤、錠剤、トロ−チ剤、カプセル剤、液剤、貼付
剤、軟膏剤、リニメント剤、ロ−ション剤、坐剤、注射
剤等の形態で提供できる。特に、皮膚にはマクロファ−
ジが多いので、皮膚塗布剤として投与するとより高い効
果が得られる。又、動物用としては、更に、飼料添加
剤、プレミックス製剤、飲水添加剤として調製すること
もできる。飼料添加剤とする場合には、粉剤か顆粒剤と
することが好ましい。なお、プレミックス製剤とは、飼
料との混合を容易にするために澱粉などの飼料成分で希
釈されたものを指す。

【００１９】本発明のＬＰＳを含む飼料添加剤、プレミ
ックス製剤を添加できる飼料は市販されている飼料のい
ずれでもよい。又、ミネラル、ビタミン、アミノ酸等の
飼料添加物を含む飼料であってもよい。

【００２０】これら製剤には、所望ならば、保存性、均
質性を保持するために、常法に従って、賦形剤、保存
剤、緩衝剤等の添加剤を加えることもできる。更に、矯
味剤、矯臭剤、着色剤を含めることもできる。賦形剤と
しては、例えば、乳糖、デンプンを使用できる。保存剤
としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオ
キシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等の
パラオキシ安息香酸エステル類、デヒドロ酢酸ナトリウ
ム、フェノ−ル、メチルパラベン、エチルパラベン、プ
ロピルパラベン等を使用できる。緩衝剤としては、例え
ば、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩等が使用できる。

【００２１】以下、実施例、製造例、実験例により、本
発明を更に詳細に説明する。なお、それらで使用された
「大腸菌ＬＰＳ］は、米国ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）社製
Ｏ１２８：Ｂ８である。

【００２２】実施例１５０ｍｌ容コ−ニングチュ−ブに、１．０９％の灰分
を含む硬質小麦粉（カナダ産の１・カナディアン・ホイ
−ト）１．０４ｇを秤量して入れ、２０ｍｌの蒸留水を
加えて５０ｍｇ／ｍｌの小麦粉液を調製した。

【００２３】この液を３７⁰Ｃの水浴中で振とう培養
し、経過時間０時、１時、２時、３時、４時、６時、８
時、１０時、１２時、２０時、２４時、４５時に各０．
５ｍｌを採取し、１０⁰〜１０⁵倍希釈して標準寒天培地
（日水製薬社製培地であり、下記の組成を持つ）に１０
０μｌ宛をまき込み、生菌数の測定、コロニ−の観察を
行った。

【００２４】標準寒天培地（日水製薬社コ−ド番号：０５６１８）１リットル中酵母エキス２．５ｇペプトン５．０ｇブドウ糖１．０ｇカンテン１５．０ｇｐＨ７．１±０．１

【００２５】種類が異なると考えられた、培養経過時
間８時間目、１０時間目に認められた黄〜クリ−ム色不
透明コロニ−（コロニ−１）、クリ−ム色不透明コロニ
−（コロニ−２）、黄色半透明コロニ−（コロニ−
３）、乳白色不透明コロニ−（コロニ−４）、白色不透
明な小さなコロニ−（コロニ−５）を上記と同種の別の
標準寒天培地にまき、植え継ぎ、一方で、コロニ−１〜
５の細菌のグラム染色性、リムラス活性を調べた。

【００２６】ここで「リムラス活性」とは、１９６８年
にレヴィン（Ｌｅｖｉｎ）により創案された、カブトガ
ニ血球抽出液と発色合成基質を用いたエンドトキシン定
量法であるリムラステストで陽性を示すことをさす。こ
のリムラステストはＬＰＳ検出法として知られており、
例えば、生化学工業株式会社からトキシカラ−システム
という名称で市販されている試薬セットを使用して実施
できる。

【００２７】上記コロニ−のうち、コロニ−４及びコロ
ニ−５（共にグラム染色性＋）のリムラス活性はコロニ
−１〜３（共にグラム染色性−）に比べて極めて低かっ
たので、以後の検討から除き、日水製薬社製の培地及び
ＩＤテスト・ＥＢ−２０を使用し、コロニ−１〜３の形
態、生化学的性状を観察した。次の結果が得られた。

【００２８】コロニ−１を形成する細菌（識別番号：９
００８１４−１）（通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に平成２
年８月１７日から微工研菌寄第１１６６４号として国内
寄託され、平成３年８月１２日より微工研条寄第３５０
９号としてブダペスト条約に従った国際寄託に移管され
た）

【００２９】以下に記載する形態、生化学的性状に基づ
き、本細菌は腸内細菌科のセラチア属に属すると推定さ
れる。 (a)形態短桿状運動性なしグラム染色性：− (b)生育状態標準寒天培地：黄〜クリ−ム色で丸形の不透明なコロ
ニ−を形成する。ＳＳ寒天培地：白色で半透明なコロニ−を形成する。［ＳＳ寒天培地：日水製薬社コ−ド番号：０５０３１］組成１リットル中肉エキス５．０ｇ胆汁酸塩９．０ｇペプトン７．５ｇラクト−ス１０．０ｇクエン酸ナトリウム８．５ｇチオ硫酸ナトリウム５．５ｇクエン酸第二鉄１．０ｇニュ−トラルレッド０．０２５ｇブリリアントグリン０．０３３ｇカンテン１３．５ｇｐＨ：７．１±０．１ＴＳＩ寒天培地：斜面部での変化はないが、高層部は
黄変する。ガスを生成する。［ＴＳＩ寒天培地：日水製薬社コ−ド番号：０５１０
３］組成１リットル中肉エキス５．０ｇＮａＣｌ５．０ｇペプトン１５．０ｇラクト−ス１０．０ｇシュクロ−ス１０．０ｇブドウ糖１．０ｇクエン酸第二鉄０．２ｇチオ硫酸ナトリウム０．２ｇフェノ−ルレッド０．０２ｇカンテン１５．０ｇｐＨ：７．６±０．１ (c)生理的性質フォ−ゲス・プロスカウエル反応：＋インド−ルの生成：− 硫化水素の生成：− クエン酸の利用：＋ウレア−ゼ：− オキシダ−ゼ：− Ｏ−Ｆテスト：＋ (d)炭素源の利用性ラクト−ス：＋アドニット：− ラムノ−ス：＋マンニット：＋エスクリン：＋イノシット：− ソルビット：＋アラビノ−ス：＋ラフィノ−ス：＋ (10)シュクロ−ス：＋ (e)その他リジンの脱炭酸反応：− マロン酸の利用：− アルギニンの分解：− フェニルアラニンの脱アミノ化反応：− オルニチンの脱炭酸反応：−

【００３０】コロニ−２を形成する細菌（識別番号：９
００８１４−２）（通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に平成２
年８月１７日から微工研菌寄第１１６６５号として国内
寄託され、平成３年８月１２日より微工研条寄第３５１
０号としてブダペスト条約に従った国際寄託に移管され
た）

【００３１】以下に記載する形態、生化学的性状に基づ
き、本細菌は腸内細菌科のエンテロバクタ−属に属する
と推定される。 (a)形態短桿状運動性なしグラム染色性：− (b)生育状態標準寒天培地：クリ−ム色で不透明なコロニ−を形成
する。ＳＳ寒天培地：赤色で不透明なコロニ−を形成する。ＴＳＩ寒天培地：斜面部での変化はないが、高層部は
黄変する。ガスを生成する。 (c)生理的性質フォ−ゲス・プロスカウエル反応：＋インド−ルの生成：− 硫化水素の生成：− クエン酸の利用：＋ウレア−ゼ：− オキシダ−ゼ：− Ｏ−Ｆテスト：＋ (d)炭素源の利用性ラクト−ス：＋アドニット：− ラムノ−ス：＋マンニット：＋エスクリン：＋イノシット：− ソルビット：＋アラビノ−ス：＋ラフィノ−ス：＋ (10)シュクロ−ス：＋ (e)その他リジンの脱炭酸反応：− マロン酸の利用：＋アルギニンの分解：＋フェニルアラニンの脱アミノ化反応：− オルニチンの脱炭酸反応：＋

【００３２】コロニ−３を形成する細菌（識別番号：９
００８１４−３）（通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に平成２
年８月１７日から微工研菌寄第１１６６６号として国内
寄託され、平成３年８月１２日より微工研条寄第３５１
１号としてブダペスト条約に従った国際寄託に移管され
た）

【００３３】以下に記載する形態、生化学的性状に基づ
き、本細菌は腸内細菌科のパントエア属に属すると推定
される。 (a)形態短桿状運動性なしグラム染色性：− (b)生育状態標準寒天培地：黄色で丸形の半透明なコロニ−を形成
する。ＳＳ寒天培地：コロニ−を形成しない。ＴＳＩ寒天培地：斜面部での変化はないが、高層部は
黄変する。ガスを生成しない。 (c)生理的性質フォ−ゲス・プロスカウエル反応：＋インド−ルの生成：− 硫化水素の生成：− クエン酸の利用：＋ウレア−ゼ：− オキシダ−ゼ：− Ｏ−Ｆテスト：＋ (d)炭素源の利用性ラクト−ス：＋アドニット：− ラムノ−ス：＋マンニット：＋エスクリン：＋イノシット：− ソルビット：＋アラビノ−ス：＋ラフィノ−ス：− (10)シュクロ−ス：＋ (e)その他リジンの脱炭酸反応：− マロン酸の利用：＋アルギニンの分解：− フェニルアラニンの脱アミノ化反応：− オルニチンの脱炭酸反応：−

【００３４】コロニ−１、２、３をそれぞれ１リット
ルのＬ−肉汁培地に移し、３７⁰Ｃで一夜振とうし、
５，０００Ｇ、４⁰Ｃで２０分間遠心処理して集菌し
た。なお、このＬ−肉汁培地は、ディフコ（Ｄｉｆｃ
ｏ）社のポリペプトン１０ｇ、同社の酵母エキス５ｇ、
和光純薬社の特級ＮａＣｌ（５ｇ）を蒸留水に入れ、Ｎ
ａＯＨでｐＨ７．５に合わせ、オ−トクレ−ブし、別
途、予め調製済みの和光純薬社の特級グルコ−スの４０
％溶液を４００倍に希釈して加えて調製したものであ
る。

【００３５】各菌体をそれぞれ５０ｍｌの蒸留水に懸
濁し、これに５０ｍｌの９０％熱フェノ−ルを加えて６
５〜７０⁰Ｃで２０分間攪拌し、冷却後に、１０，００
０Ｇ、４⁰Ｃで２０分間遠心処理して、水層を回収し
た。フェノ−ル層を更に２回上記と同一の操作に付し
た。３つの水層を合わせ、一夜透析してフェノ−ルを除
去し、内液を、アドヴァンテック・ト−ヨ−（ＡＤＶＡ
ＮＴＥＣＴＯＹＯ）社のＵＫ−２００を使用して限外
濾過に付して分子量２０万カット−オフにより濃縮した
（Ｎ₂圧：２気圧）。

【００３６】この濃縮サンプルを、ファルマシア社製
のＱ−セファロ−スファストフロ−（Ｑ−Ｓｅｐｈ
ａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ）を使って陰イオン交
換クロマトグラフィ−に付した。即ち、１０ｍＭトリス
−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）と１０ｍＭのＮａＣｌを含む緩
衝液で試料をカラムに付した後、４００ｍＭＮａＣｌ／
１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）でリムラス活性
画分を溶出させた。この溶出液を上記と同じ条件で限外
濾過に付して脱塩、濃縮して、純度９６％以上のＬＰＳ
を得た。なお、核酸は１ＭＮａＣｌ／１０ｍＭトリス−
ＨＣｌ（ｐＨ７．５）で溶出した。

【００３７】各菌体の結果は次表１〜３の通りであっ
た。なお、ＬＰＳ量は、リムラステストによる大腸菌Ｌ
ＰＳ換算値であり、糖はフェノ−ル−硫酸法［エム．デ
ユボイス（Ｍ．Ｄｕｂｏｉｓ）等著、アナリテイカル
ケミストリ（ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ）、ｖｏｌ．２８、３５０頁、１９５６年］、蛋白は
ロ−リ−法［オ−．エイチ．ロ−リ−（Ｏ．Ｈ．Ｌｏｗ
ｒｙ）等著、ジャ−ナルオブバイオロジカルケミス
トリ（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）］、ｖｏｌ．１９３、６５頁、１
９５１年］で測定した。又、核酸量はＯＤ（２６０ｎ
ｍ）での測定値に基づき（１ＯＤ＝５０μｇ）、純度
（％）は次式に基づき計算した。

【００３８】

【数１】

【００３９】

【表１】

【００４０】

【表２】

【００４１】

【表３】

【００４２】分子量各菌体から得られたＬＰＳを各々蒸留水に溶解して２ｍ
ｇ／ｍｌ溶液を調製し、その１０μｌを１．５ｍｌ容プ
ラスチックチュ−ブに入れた。これに、別途、１８０μ
ｌの１０％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、４５μｌの５％β−メル
カプトエタノ−ル、９０μｌのＣＢＢ色素溶液、１１
２．５μｌの０．５Ｍトリス塩酸（ｐＨ６．８）及び２
２．５μｌの蒸留水を加えて調製したＳＤＳ処理液１０
μｌを加えてよく混合し、次いで５分間沸騰水浴中に浸
した。この加熱後直ちに氷水中に浸して急冷した。

【００４３】１０ｍｌの１０％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、１
７．９ｇのトリシン及び３．０３ｇのトリスを１リット
ルの蒸留水に溶解して調製した泳動緩衝液をマリソル社
製のスラブゲル電気泳動槽に入れた。２０％ポリアクリ
ルアミドゲルを泳動槽に固定し、サンプル溝に検体を入
れ、電圧を５０ｖに１時間、次いで、１５０ｖに固定し
て、色素がゲルより溶出するまで泳動を続けた（本明細
書でこの泳動法をＳＤＳ−ＰＡＧＥ法と称する）。泳動
終了後に、バイオラッド社の銀染色キット１６１−０４
４３を使い銀染色を室温で行って、挙動を確認した。

【００４４】同時に泳動させた蛋白分子量マ−カ−［フ
ァルマシア社製のＬＭＷキットＥ：ホスホリラ−ゼｂ
（９４ｋ）、アルブミン（６７ｋ）、オブアルブミン
（４３ｋ）、カ−ボニックアンヒドラ−ゼ（３０ｋ）、
トリプシンインヒビタ−（２０ｋ）、α−ラクトアルブ
ミン（１４ｋ）］、ペプチド分子量マ−カ−［ファルマ
シア社製の１８６０−１０１分子量マ−カ−：ミオグロ
ビン（１６．９ｋ）、ミオグロビンＩ＆ＩＩ（１４．４
ｋ）、ミオグロビンＩ（８．２ｋ）、ミオグロビンＩＩ
（６．０ｋ）、ミオグロビンＩＶ（２．５ｋ）］の泳動
位置から本発明のＬＰＳの分子量を計算したら、５，０
００±１，０００（菌体９００８１４−１に由来するＬ
ＰＳ１）、６，５００±２，５００（菌体９００８１４
−２に由来するＬＰＳ２及び菌体９００８１４−３に由
来するＬＰＳ３）であった。同様にして測定された大腸
菌ＬＰＳ（ディフコ社製の大腸菌０１２７：Ｂ８ＬＰ
Ｓ）の分子量は３０，０００±２０，０００であった。

【００４５】上記銀染色におけるＬＰＳ１、ＬＰＳ２、
ＬＰＳ３の染色帯を図１に示す。図１において、番号１
がＬＰＳ１の、番号２がＬＰＳ２の、番号３がＬＰＳ３
の染色帯である。図１に示されるように、ＬＰＳ１は分
子量３万付近にもややまとまった染色帯を示した。ＬＰ
Ｓ２は３０，０００から４３，０００の間にも染色帯が
認められるが、１４，０００以下の染色帯の染色度と比
較すると、高分子のものは極めて少ないと推定される。
後述する糖量、ヘキソサミン量から判断してもＬＰＳ２
は最も糖含有率が低く、ついでＬＰＳ３、ＬＰＳ１の順
で高くなり、電気泳動で観察されたパタ−ンと一致する
と考えられる。又、ＬＰＳ量／総乾燥収量の比もＬＰＳ
２、ＬＰＳ３、ＬＰＳ１の順に低くなっている。以上の
観察結果から、ＬＰＳ２は比較的低分子のＬＰＳが多
く、次いで、ＬＰＳ３、ＬＰＳ１の順にその割合は少な
くなると推定される。

【００４６】リン含有量チェン−トリバラ（Ｃｈｅｎ−Ｔｏｒｉｂａｒａ）法
［チェン等著、「アナリティカルケミストリ（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ）、ｖｏｌ．２
８、１７５６〜１７５８頁（１９５６年）に準拠して次
の通りに行った。

【００４７】ＬＰＳ１、ＬＰＳ２、ＬＰＳ３を各別に蒸
留水に溶解して、それぞれ、３１．６μｇ、５７．６μ
ｇ、１０３．６μｇのＬＰＳを含む２０μｌの溶液を調
製し、小試験管に入れた。２０μｌの５０ｖ／ｖ％硫酸
を添加し、１６０⁰Ｃで２時間加熱した。次いで、２０
μｌの１０ｖ／ｖ％過塩素酸を添加した後にガスバ−ナ
−で１分間加熱して灰化させた。その後に０．５ｍｌの
蒸留水、次いで０．５ｍｌの反応試薬（１ｍｌの６Ｎ硫
酸、２ｍｌの蒸留水、２ｍｌの２．５ｖ／ｗ％モリブデ
ン酸アンモニウム及び１ｍｌの１０ｖ／ｗ％のアスコル
ビン酸を混合して調製し、その０．５ｍｌを使用）を添
加して室温で３０分間放置した後に、８２０ｎｍでの吸
光度ＯＤ（８２０ｎｍ）を測定した。なお、検量線作成
用の試料としては、リン酸二水素カリウム（和光純薬社
製）を蒸留水で希釈し、リン酸重量としてそれぞれ２．
５μｇ、１μｇ、０．２５μｇ、０μｇを含む０．５ｍ
ｌの溶液を調製して使用した。なお、リン１ｇはリン酸
二水素カリウム４．３９ｇに相当する。結果を次表４に
示す。表中、吸光度を示す数値は、無機リンの混入（例
えば、リン酸緩衝液に由来する）による誤差を避けるた
めに、加熱処理をしていない対照のデ−タを減じた値で
ある。リン量（μｇ）は吸光度から計算された値であ
る。リン量（重量％）は、次式により計算した。なお、
式中の「０．６７」は、標準のリン１μｇのＯＤ値を指
し、サンプル濃度は、蒸留水に溶解した各ＬＰＳの濃度
（ｍｇ／ｍｌ）を指す。

【００４８】

【数２】

【００４９】リン数は、次式により計算した、分子量
５，０００当たりの換算数である。

【００５０】

【数３】

【００５１】

【表４】

【００５２】ヘキソサミン含有量エルソン−モルガン（Ｅｌｓｏｎ−Ｍｏｒｇａｎ）法
（東京化学同人出版「生化学実験講座」Ｎｏ．４の３７
７〜３７９頁）に準拠して次の通りに行った。

【００５３】ＬＰＳを蒸留水に溶解して１．５８ｍｇ
（ＬＰＳ１）、２．８８ｍｇ（ＬＰＳ２）、５．１８ｍ
ｇ（ＬＰＳ３）／ｍｌの溶液を調製し、その１００μｌ
をスクリュ−キャップ付きスピッツ（イワキガラス社
製）に入れ、これに１００μｌの８ＮＨＣｌを添加して
１１０⁰Ｃで１６時間加熱した。４ＮＮａＯＨを約２０
０μｌ添加してｐＨ７とした。その１００μｌを分取
し、別のスクリュ−キャップ付きスピッツに入れ、２０
０μｌの下記試薬Ａを加えた後に、１０５⁰Ｃで１．
５時間加熱し、次いで流水で冷却した。次いで、１００
μｌを分取し、６７０μｌの９６％エタノ−ルを加え、
更に、６７μｌの下記試薬Ｂを加えた後に室温で１時間
放置し、５３５ｎｍで吸光度を測定した。検量線作製用
試料としては０．２０〜２００μｇ／ｍｌのＮ−アセチ
ルグルコサミン（和光純薬社製）を使った。

【００５４】（試薬Ａ）７５μｌのアセチルアセトンと
２．５ｍｌの１．２５Ｎ炭酸ナトリウムを混合して調製
した。

【００５５】（試薬Ｂ）１．６ｇのｐ−ジメチルベンズ
アルデヒドと３０ｍｌの濃塩酸と３０ｍｌの９６％エタ
ノ−ルを混合して調製した。結果、ＬＰＳ１、ＬＰＳ
２、ＬＰＳ３のヘキソサミン数は各々９±１／分子量
５，０００、７±１／分子量５，０００、５±１／分子
量５，０００だった。

【００５６】(10)ＫＤＯ含有量ＫＤＯ（２−ケト−３−デオキシオクトネ−ト）含有量
をジフェニルアミン法［シャビア−ル（Ｓｈａｂｙ
Ｒ．）等著、アナリティカルバイオケム（Ａｎａｌｙ
ｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍ．）、５８（１）、１２３
〜１２９頁（１９７４年）］に準拠して次の通りに行っ
た。

【００５７】５００ｍｇのジフェニルアミン、５ｍｌの
エタノ−ル、４５ｍｌの氷酢酸、５０ｍｌの濃塩酸（全
て和光純薬社製）を合わせてＫＤＯ検出試薬を調製し
た。その５００μｌに、（１）０．５０５ｍｇ／ｍｌの
ＬＰＳ１を含む２５０μｌ蒸留水溶液；（２）０．５７
６ｍｇ／ｍｌのＬＰＳ２を含む２５０μｌ蒸留水溶液；
（３）０．５１８ｍｇ／ｍｌのＬＰＳ３を含む２５０μ
ｌ蒸留水溶液；のいずれかを合わせ、１００⁰Ｃの沸騰
水浴中で３３分間加熱後に冷水（２４．５⁰Ｃ）中で３
０分間冷却し、ついで日立分光光度計３２０を使い４２
０、４７０、６３０、６５０ｎｍでの紫外部吸収を測定
した（測定値を各々Ａ４２０、Ａ４７０、Ａ６３０、Ａ
６５０とする）。標準試料としては、０．５μモル／ｍ
ｌのＫＤＯアンモニウム塩［米国シグマ（Ｓｉｇｍａ）
社製］を含む蒸留水２５０μｌを使用した。

【００５８】検体試料、標準試料それぞれについて、次
式の値を求めた。Ｓ＝Ａ４２０−Ａ４７０＋Ａ６３０−Ａ６５０

【００５９】検体試料の値（Ｓ_T）はＬＰＳ１で０．１
０９、ＬＰＳ２で０．０７８、ＬＰＳ３で０．０９９で
あった。標準試料の値（Ｓ_S）は０．２４６であり、蒸
留水のみの値は０．００５であった。

【００６０】この値の比較により、ＬＰＳ１には２±１
／分子量５，０００、ＬＰＳ２には１〜２／分子量５，
０００、ＬＰＳ３には２±１／分子量５，０００のＫＤ
Ｏが含まれると推定された。

【００６１】なお、これらの値は、ＬＰＳ１を例にとる
と、次のように計算される。溶液に含まれるＫＤＤの濃
度をχ（μモル／ｍｌ）とすると、

【００６２】

【数４】

【００６３】上記式から、χ＝０．２２１となる。従っ
て、ＬＰＳ１の１モル（５，０００と仮定）に含まれる
ＫＤＤのモル数をｙとすると、次式により、ｙ＝２．１
９となる。

【００６４】

【数５】

【００６５】以下は、本発明のＬＰＳを含む製剤の処方
例である。なお、実施例２〜５におけるＬＰＳ量は、リ
ムラステストによる大腸菌ＬＰＳ換算量である。

【００６６】実施例２（錠剤）ＬＰＳ１０．０４ｇ６％ＨＰＣ乳糖１７８ｇステアリン酸タルク８ｇバレイショデンプン１４ｇ以上を混和し、打錠して、０．１ｍｇの小麦ＬＰＳを含
む０．５ｇの錠剤４００個を調製した。

【００６７】実施例３（内用液剤）ＬＰＳ１１ｍｇ精製水１００ｍｌ

【００６８】実施例４（軟膏剤）

【００６９】実施例５（注射剤）

【００７０】製造例１（百日咳菌ＬＰＳの製造）千葉県血清研究所から入手した試験用百日咳菌液（２．
０×１０¹⁰細胞／ｍｌ）を死菌体として用いた。

【００７１】上記死菌体を２５ｍｇ（乾燥重量）／ｍｌ
となるように滅菌水に懸濁した。これに等量の９０％熱
フェノ−ル液（６８〜７０⁰Ｃ）を添加し、６８⁰Ｃで１
時間振盪しながら抽出した。８，０００Ｇ、４⁰Ｃで２
０分間遠心分離して水層を分取した。残りのフェノ−ル
層に、上記水層と等量の滅菌水を加えて同様の抽出を行
った。得られた水層を先の水層と合わせて流水中で一晩
透析後に、ロ−タリ−エバポレ−タで１／１０に濃縮し
た。これを８，０００Ｇ、４⁰Ｃで２０分間遠心分離
した。上清を分取し、酢酸ナトリウムを少量加え、０〜
４⁰Ｃの冷エタノ −ルを６倍量加えて−２０⁰Ｃで一晩
放置した。４，０００Ｇ、４⁰Ｃで３０分間遠心分離し
て回収した沈殿物をエタノ−ルで２回、次いでアセトン
で１回遠心洗浄し、アスピレ−タで乾燥させた。

【００７２】残さを、２０ｍｇ／ｍｌとなるように蒸留
水に懸濁し、米国ブランソン（Ｂｒａｎｓｏｎ）社製の
ソニファイア１８５型で超音波処理（出力コントロ−ル
５、１５分、室温）に付した。次いで２，５００Ｇ、４
⁰Ｃで１０分間遠心分離し、上清を分取した。

【００７３】この上清を４⁰Ｃで、米国シグマ（Ｓｉｇ
ｍａ）社製の核酸分解酵素ＤＮａｓｅＩ、ＲＮａｓｅ
Ａで１５〜１６時間処理した（最終的には１０μｇ／ｍ
ｌのＤＮａｓｅＩと、２０μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅ
Ａを使用した）。更に同じ濃度の核酸分解酵素を加えて
３７⁰Ｃで２時間加温した。次いで２，５００Ｇ、４⁰Ｃ
で１０分間遠心分離し、上清を分取した。

【００７４】この上清を米国ゲルマン（Ｇｅｌｍａｎ）
社のアクロディスク（Ａｃｒｏｄｉｓｃ）を使い、孔径
０．２μｍで濾過した。濾液を分子篩にかけ［樹脂：米
国ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製セファロ−
ス（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）６Ｂ、カラムサイズ＝内径５
ｃｍ×長さ１００ｃｍ、緩衝液＝１０ｍＭのトリス−Ｈ
Ｃｌ、１０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．５）、流速＝約３
ｍｌ／ｃｍ²／時）、生化学工業社製のＬＳ−１キット
を用いてリムラス活性陽性画分を調べて合わせ、上記ゲ
ルマン社のアクロディスクを使い、孔径０．２μｍで濾
過した。濾液をイオン交換にかけ［装置：米国ファルマ
シア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製ＦＰＬＣ、樹脂：米国
ファルマシア社製モノＱＨＲ１０／１０、緩衝液＝１
０ｍＭのトリス−ＨＣｌ＋１０ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ
７．５）で１５分洗浄し、次いで、ＮａＣｌ量を１６５
ｍＭに増加して３０分洗浄し、次いで、２０分かけて、
ＮａＣｌ量が１６５ｍＭから１Ｍの濃度勾配になるよう
にＮａＣｌ量を増加させながら洗浄し、次いで、１Ｍの
ＮａＣｌ量で３０洗浄する、流速＝２ｍｌ／分］、生化
学工業社製のＬＳ−１キットを用いてリムラス活性陽性
画分を調べて合わせた。合わせた画分をカラムで脱塩し
［樹脂：米国ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製
セファデックスＧ−２５ファイン（ｆｉｎｅ）、カラム
サイズ＝内径２ｃｍ×長さ２５ｃｍ、溶出液＝蒸留
水］、次いで凍結乾燥した。

【００７５】この凍結乾燥標品（４．５０ｍｇ）に混入
している可能性の最も高い物質は核酸である。そこで、
紫外吸収曲線（２００〜４００ｎｍ）をとり、２６０ｎ
ｍでの吸光度を求めた。吸光度１のときの核酸濃度が５
０μｇ／ｍｌであることを用いて上記吸光度から核酸濃
度を算出したら１％以下であった。又、ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ法では蛋白質は明確には検出されなかった。従って、
検出感度を考慮すると、上記凍結乾燥標品に混入してい
る蛋白質は高々０〜３％と推定される。従って、上記凍
結乾燥標品の純度は９６％以上と推定された。

【００７６】実施例１に記載の方法と同様にして測定さ
れたこの百日咳菌ＬＰＳの物性は次の通りであった。百日咳菌ＬＰＳの物性主要分子量＝６，０００±１，０００（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ法による）リン数＝４／分子量６千ヘキソサミン数＝１２／分子量６千脂肪酸数＝４／分子量６千ＫＤＯ数＝２±１／分子量６千

【００７７】又、同様にして測定された大腸菌ＬＰＳの
物性は次の通りであった。大腸菌ＬＰＳの物性主要分子量＝４０，０００±１０，０００８，０００±４，０００（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法によ
る）リン数＝１２／分子量３万ヘキソサミン数＝４５±６／分子量３万脂肪酸数＝１８／分子量３万ＫＤＯ数＝５±１／分子量３万

【００７８】実験例１（免疫機能活性化効果）各群２匹又は３匹のマウス（７週齢のオスＣ３Ｈ／Ｈ
ｅ。平均体重２５ｇ。）の尾静脈に、１匹当たりリムラ
ス活性量で１、１０、又は１００μｇのＬＰＳ１、ＬＰ
Ｓ２、ＬＰＳ３を含む生理的食塩水０．２ｍｌを注射
し、その１時間後に血清を採取し、Ｌ９２９細胞に対す
る毒性に基づいてＴＮＦ活性を測定した。結果を、各群
２匹又は３匹の平均として次表５に示す。なお、表中、
（）内はマウスの匹数を表す。

【００７９】

【表５】

【００８０】実験例２（鎮痛効果）７〜１０週齢の各群５匹のＣ３Ｈ／Ｈｅ雄マウス（平均
体重約２８ｇ）に、ＬＰＳ換算でそれぞれ０、１、５、
２５、４００μｇ／匹ずつの本発明のＬＰＳ３或は大腸
菌ＬＰＳを含むように調製した２００μｌの蒸留水をゾ
ンデで経口投与した。その１．５時間後に５００μｌの
０．７％酢酸を５分かけて腹腔内投与し、その後３０分
間にわたり、各マウスの身もだえ回数を計数し、表６に
示す結果が得られた（各群５匹の平均）。表中、「−」
は該当量では測定しなかったことを示す。又、「身もだ
え阻止率（％）」は、次式により計算した。

【００８１】

【数６】

【００８２】

【表６】

【００８３】図２は表６に示した結果をグラフ化したも
のである。図２より、ＬＰＳ３の身もだえ阻止率ＥＤ50
は２．８μｇ／匹、大腸菌ＬＰＳのそれは１７μｇ／匹
と推定された。従って、鎮痛効果に関しては、ＬＰＳ３
は大腸菌ＬＰＳの約６倍の効果があると推定される。

【００８４】投与量、投与間隔、毒性値本発明のＬＰＳを免疫機能活性化剤或いは鎮痛剤とし
て、或いは、動物用の免疫機能活性化剤、或いは鎮痛剤
として投与するさいの量、投与間隔は、当然、担当医師
或いは獣医師の厳重な管理下、投与対象の年齢、症状、
体重、投与効果を勘案して個別に決定されるが、人間の
成人（６０ｋｇ）で、経口投与で１μｇ〜１００ｍｇ、
静脈投与で１０ｎｇ〜１０ｍｇ、経皮投与で１００ｎｇ
〜１ｍｇが１日１回の投与量の一応の目安となる。な
お、動物では、牛、馬等の大型動物は上記の量の６０分
の１を体重１ｋｇ当たりの量の目安とし、豚、犬、猫等
の中型、小型の動物ではその２倍量を体重１ｋｇ当たり
の量の目安とし、鶏等の鳥類では更にその２倍量を体重
１ｋｇ当たりの量の目安とし投与できる。

【００８５】なお、ベ−レンスケルバ−（Ｂｅｈｒｅ
ｎｓＫ

【外１】ｒｂｅｒ）法により測定した、７週齢の平均体重２２ｇ
のＣ３Ｈ／Ｈｅ雄マウスにおけるＬＰＳ１、ＬＰＳ２、
ＬＰＳ３のＬＤ５０はそれぞれ１５０、１８０、１８０
μｇ／匹であり、大腸菌ＬＰＳの値３００μｇ／匹の６
０％以下であった。又、大腸菌ＬＰＳ、百日咳菌ＬＰＳ
（製造例１）の毒性値ＬＤ₅₀ （１群２匹の雄ＢＡＬＢ
／Ｃマウス、平均体重４５ｇ、における平均値）は静脈
内投与でそれぞれ３．４、１１ｍｇ／ｋｇであり、皮内
投与でそれぞれ１６、３２ｍｇ／ｋｇだった。

【００８６】

【発明の効果】本発明により新規な細菌、それに由来す
る新規なＬＰＳ、及びそれを含む新規な免疫機能活性化
剤、鎮痛剤、動物用の免疫機能活性化剤、鎮痛剤が提供
される。

【００８７】又、本発明のＬＰＳは、常法により容易に
医薬、動物薬、検査薬、医薬部外品、化粧品、食品、機
能性食品、飲料、飼料その他の主成分として或は一成分
として配合することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のＬＰＳの、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法におけ
るパタ−ンを示す図である。

【図２】本発明のＬＰＳの鎮痛効果を、大腸菌ＬＰＳと
の対比で示すグラフである。

【符号の説明】

図１において、１はＬＰＳ１の、２はＬＰＳ２の、３は
ＬＰＳ３のパタ−ンを示す。図２において、□は本発明
のＬＰＳの、○は大腸菌ＬＰＳのデ−タを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 37/20 ＡＤＲＡＥＲＣ０８Ｂ 37/00 Ｐ 7329−4ＣＣ１２Ｐ 19/04 Ｃ 7432−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者月岡大輔千葉県千葉市春日１−21−17 (72)発明者水野伝一神奈川県鎌倉市岡本18 (72)発明者大島治之東京都八王子市館町1097館ケ丘団地２−１ −513

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の性質を有するＬＰＳ産生グラム陰性
短桿菌。 (a)形態短桿状運動性なしグラム染色性：− (b)生育状態標準寒天培地：黄〜クリ−ム色で丸形の不透明なコロ
ニ−を形成する。ＳＳ寒天培地：白色で半透明なコロニ−を形成する。ＴＳＩ寒天培地：斜面部での変化はないが、高層部は
黄変する。ガスを生成する。 (c)生理的性質フォ−ゲス・プロスカウエル反応：＋インド−ルの生成：− 硫化水素の生成：− クエン酸の利用：＋ウレア−ゼ：− オキシダ−ゼ：− Ｏ−Ｆテスト：＋ (d)炭素源の利用性ラクト−ス：＋アドニット：− ラムノ−ス：＋マンニット：＋エスクリン：＋イノシット：− ソルビット：＋アラビノ−ス：＋ラフィノ−ス：＋ (10)シュクロ−ス：＋ (e)その他リジンの脱炭酸反応：− マロン酸の利用：− アルギニンの分解：− フェニルアラニンの脱アミノ化反応：− オルニチンの脱炭酸反応：−
【請求項２】次の性質を有するＬＰＳ産生グラム陰性
短桿菌。 (a)形態短桿状運動性なしグラム染色性：− (b)生育状態標準寒天培地：クリ−ム色で不透明なコロニ−を形成
する。ＳＳ寒天培地：赤色で不透明なコロニ−を形成する。ＴＳＩ寒天培地：斜面部での変化はないが、高層部は
黄変する。ガスを生成する。 (c)生理的性質フォ−ゲス・プロスカウエル反応：＋インド−ルの生成：− 硫化水素の生成：− クエン酸の利用：＋ウレア−ゼ：− オキシダ−ゼ：− Ｏ−Ｆテスト：＋ (d)炭素源の利用性ラクト−ス：＋アドニット：− ラムノ−ス：＋マンニット：＋エスクリン：＋イノシット：− ソルビット：＋アラビノ−ス：＋ラフィノ−ス：＋ (10)シュクロ−ス：＋ (e)その他リジンの脱炭酸反応：− マロン酸の利用：＋アルギニンの分解：＋フェニルアラニンの脱アミノ化反応：− オルニチンの脱炭酸反応：＋
【請求項３】次の性質を有するＬＰＳ産生グラム陰性
短桿菌。 (a)形態短桿状運動性なしグラム染色性：− (b)生育状態標準寒天培地：黄色で丸形の半透明なコロニ−を形成
する。ＳＳ寒天培地：コロニ−を形成しない。ＴＳＩ寒天培地：斜面部での変化はないが、高層部は
黄変する。ガスを生成しない。 (c)生理的性質フォ−ゲス・プロスカウエル反応：＋インド−ルの生成：− 硫化水素の生成：− クエン酸の利用：＋ウレア−ゼ：− オキシダ−ゼ：− Ｏ−Ｆテスト：＋ (d)炭素源の利用性ラクト−ス：＋アドニット：− ラムノ−ス：＋マンニット：＋エスクリン：＋イノシット：− ソルビット：＋アラビノ−ス：＋ラフィノ−ス：− (10)シュクロ−ス：＋ (e)その他リジンの脱炭酸反応：− マロン酸の利用：＋アルギニンの分解：− フェニルアラニンの脱アミノ化反応：− オルニチンの脱炭酸反応：−
【請求項４】次の物性を示す、請求項１記載の細菌に
由来するＬＰＳ。主要分子量：５，０００±１，０００（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ法による）リン数：２±１／分子量５，０００ヘキソサミン数：９±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：２±１／分子量５，０００
【請求項５】次の物性を示す、請求項２記載の細菌に
由来するＬＰＳ。主要分子量：６，５００±２，５００（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ法による）リン数：１〜２／分子量５，０００ヘキソサミン数：７±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：１〜２／分子量５，０００
【請求項６】次の物性を示す、請求項３記載の細菌に
由来するＬＰＳ。主要分子量：６，５００±２，５００（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ法による）リン数：２±１／分子量５，０００ヘキソサミン数：５±１／分子量５，０００ＫＤＯ数：２±１／分子量５，０００
【請求項７】請求項４〜６のいずれかの項に記載のＬ
ＰＳ及びそれらの混合物からなる群から選択されるＬＰ
Ｓを含む免疫機能活性化剤。
【請求項８】請求項４〜６のいずれかの項に記載のＬ
ＰＳ及びそれらの混合物からなる群から選択されるＬＰ
Ｓを含む鎮痛剤。
【請求項９】請求項４〜６のいずれかの項に記載のＬ
ＰＳ及びそれらの混合物からなる群から選択されるＬＰ
Ｓを含む動物用免疫機能活性化剤。
【請求項１０】請求項４〜６のいずれかの項に記載の
ＬＰＳ及びそれらの混合物からなる群から選択されるＬ
ＰＳを含む動物用鎮痛剤。