JPH0662674B2

JPH0662674B2 - 抗生物質クロロポリスポリンｂまたはｃ

Info

Publication number: JPH0662674B2
Application number: JP61001904A
Authority: JP
Inventors: 達生羽石; 尚夫岡崎; 顕雄鳥潟; 睦男中島; 竜三榎田; 敏昭片山; 誠吾岩藤
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1985-01-11
Filing date: 1986-01-08
Publication date: 1994-08-17
Anticipated expiration: 2009-08-17
Also published as: DE3684334D1; EP0187722A2; AU594319B2; CA1297825C; AR241275A1; AU5219886A; US5013550A; US4918054A; EP0187722A3; JPS61274696A; EP0187722B1

Description

【発明の詳細な説明】〔発明の目的〕本発明は新抗生物質クロロポリスポリンＢまたはＣ（Ch
loropolysporin ＢまたはＣ）またはその塩、その製造
法およびそれを有効成分とする抗菌剤に関するものであ
る。本発明者らは、栃木県で採取した土壌から分離した
ミクロポリスポラ属に属するSANK 60983株が、主として
グラム陽性細菌に対して有効な新抗生物質クロロポリス
ポリンＢおよびＣを生産することを見出した。

本発明のクロロポリスポリンＢおよびＣはその諸性状よ
りバンコマイシン(Vancomycin)、アボパルシン(Avoparc
in)あるいはＡ−35512群物質などと同様のグリコペプチ
ド系抗生物質に類縁の抗生物質であり、構成成分中、ア
ミノ酸組成および中性糖組成、高圧紙電気泳動、並び
にCl含量(%)などにより公知のグリコペプチド系抗生物
質とは明らかに区別され新抗生物質と判明した。

〔発明の構成〕

本発明のクロロポリスポリンＢおよびＣは下記の式を有
する。

式中、クロロポリスポリンＢはR₁がリストサミン(Risto
samine)を示し、R₂がマンノース(Mannose)を示し、R₃が
グルコース(Glucose)を示し、R₄がラムノース(Rhamnos
e)を示す。クロロポリスポリンＣはR₁がリストサミンを
示し、R₂がマンノースを示し、R₃がグルコースを示し、
R₄が水素原子を示す。

クロロポリスポリンＢおよびＣは下記のような理化学的
および生物学的性状を有する。

１．クロロポリスポリンＢ硫酸塩 1)物質の性状：両性水溶性、白色粉末 2)比旋光度：▲〔α〕²⁵ _D▼ -64.5゜（Ｃ，1.04，0.1Ｎ
塩酸溶液） 3)元素分析値(%)：Ｃ，48.33；Ｈ，5.05；Ｎ，5.48；C
l，5.11；Ｓ，1.00； 4)酸加水分解：中性糖；グルコース、マンノース、ラムノースアミノ酸；３−クロロ−４−ヒドロキシフエニルグリシ
ン、Ｎ−メチル−ｐ−ヒドロキシフエニルグリシン 5)紫外線吸収スペクトル：第１図に示す通り0.1Ｎ塩酸溶液では280nm に極大吸収を示す。

6)赤外線吸収スペクトル： KBrデイスクで測定した赤外線吸収スペクトルは第２図
に示す通りである。

7)核磁気共鳴吸収スペクトル：（δ：ppm）ジメチルスルホキシド中、内部基準にTMS（テトラメチ
ルシラン）を使用して測定したスペクトル（270 MHz）
は第３図に示す通りである。

8)溶解性：水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、酢酸エチル、
クロロホルム、ベンゼンに不溶。

9)呈色反応：ニンヒドリン、ライドンスミス反応に陽
性。

10)薄層クロマトグラフイー：R_f値0.65 吸着剤；イーストマンセルロースシート展開溶媒；ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（15：
10：３：12） 11)高圧紙電気泳動： 0.1Ｍトリス塩酸緩衝液（pH7.5）中で東洋紙No.５１
Ａを用いた高圧紙電気泳動（3300volt／60cm、１時
間）において、原点より陰極側への移動距離は４cmであ
つた。なお、移動距離はバチルス・ズブチリスPCI 219
を被検菌として、バイオオートグラムにより求めた。

12)分子式 C₈₃H₈₉O₃₄N₈Cl₃・0.5H₂SO₄・10H₂O 13)分子量 FAB-MSによる実測の結果、1846(MH⁺1847)であつた。

14)抗菌力：一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するクロロポリス
ポリンＢの最小発育阻止濃度(MIC)はミュラー・ヒント
ン寒天培地（デイフコ社製）、嫌気性菌に対してはGAM
寒天培地（日本製薬（株）製）を用いた寒天培地稀釈法
によつて測定した。その結果は第１表および第２表に示
す通りである。

15)毒性：マウス（ICR、雄、５週令）に対するLD₅₀(i.V.)は215mg
/kgであつた。

２．クロロポリスポリンＣ硫酸塩 1)物質の性状：両性水溶性、白色粉末 2)比旋光度：▲〔α〕²⁵ _D▼ -64.4゜（Ｃ，1.08，0.1Ｎ
塩酸溶液） 3)元素分析値(%)：Ｃ，50.53；Ｈ，4.69；Ｎ，6.14；C
l，5.62；Ｓ，1.12； 4)酸加水分解：中性糖；グルコース、マンノースアミノ酸；３−クロロ−４−ヒドロキシフエニルグリシ
ン、Ｎ−メチル−ｐ−ヒドロキシフエニルグリシン 5)紫外線吸収スペクトル：第４図に示す通り0.1Ｎ塩酸溶液では280nm に極大吸収を示す。

6)赤外線吸収スペクトル： KBrデイスクで測定した赤外線吸収スペクトルは第５図
に示す通りである。

7)核磁気共鳴吸収スペクトル：（δ：ppm）ジメチルスルホキシド中、内部基準にTMS（テトラメチ
ルシラン）を使用して測定したスペクトル（400 MHz）
は第６図に示す通りである。

9)呈色反応：ニンヒドリン、ライドンスミス反応に陽
性。

10)薄層クロマトグラフイー：R_f値 0.65 吸着剤；イーストマンセルロースシート展開溶媒；ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（15：
10：３：12） 11)分子式 C₇₇H₇₉O₃₀N₈Cl₃・0.5H₂SO₄・5H₂O 12)分子量 FAB-MSによる実測の結果、1700(MH⁺1701)であつた。

13)抗菌力：一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するクロロポリス
ポリンＣの最小発育阻止濃度(MIC)はミュラー・ヒント
ン寒天培地（デイフコ社製）、嫌気性菌に対してはGAM
寒天培地（日本製薬（株）製）を用いた寒天培地稀釈法
によつて測定した。その結果は第１表および第２表に示
す通りである。

14)毒性：マウス（ICR、雄、５週令）に対するLD₅₀(i.V.)は250mg
/kgであつた。

以上から、クロロポリスポリンＢおよびＣはスタフイロ
コツカス・アウレウス、スタフイロコツカス・エピデル
ミデイス、エンテロコツカス・フエカリス、バチルス・
ズブチリス、ミコバクテリウム・スメグマチス等のグラ
ム陽性細菌及びユウバクテリウム・シリンドロイデス、
ペプトストレプトコツカス・サツカロリテイカス、プロ
ピオニバクテリウム・アクネス、クロストリデイウム・
シンビオーサム、クロストリデイウム・パーフリンゲン
ス、クロストリデイウム・デイフイシル等の嫌気性のグ
ラム陽性細菌に有効である。

本発明のクロロポリスポリンＢおよびＣは、常法にした
がって塩にすることができる。そのような塩としては例
えばリチウム、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金
属の塩；マグネシウム、カルシウム、バリウムなどのア
ルカリ土類金属の塩；メチルアミン、エチルアミン、ジ
メチルアミン、ジプロピルアミン、トリメチルアミンな
どの脂肪族第１乃至第３アミンの塩；リジン、アルギニ
ンなどの塩基性アミノ酸の塩；アンモニウム塩；弗化水
素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などのハロゲン
化水素酸の塩；硝酸塩；過塩素酸塩；硫酸塩；燐酸塩；
メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、エ
タンスルホン酸などの低級アルカンスルホン酸の塩；ベ
ンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などのアリ
ールスルホン酸の塩；グルタミン酸、アスパラギン酸な
どの酸性アミノ酸の塩；フマール酸、コハク酸、クエン
酸、酒石酸、酸、マレイン酸などのカルボン酸の塩；
等をあげることができる。

クロロポリスポリンＢおよびＣを生産するSANK60983株
の菌学的性状は次の通りである。

SANK60983株の同定にあたつてはISP〔インターナシヨナ
ル・ストレプトミセス・プロジエクト(International S
treptomyces Project)〕規定の培地およびワツクスマン
(S.A.Waksman)の勧告〔ジ・アクチノミセイテス(The Ac
tinomycetes)、２巻〕の培地等を用いて培養した。培養
は通常２８℃で行つた。

1)形態学的特徴 SANK60983株は各種培地上で比較的良好な生育を示す。
気菌糸は肉眼上ほとんどの培地で認められないが、グリ
セロール・アスパラギン寒天培地やポテトエキス・人参
エキス寒天培地上では着生する場合もある。気菌糸およ
び栄養菌糸の先端あるいは中程に胞子の連鎖が観察さ
れ、その数は１〜２０個、時には２０個以上の場合もあ
る。菌糸の明瞭な断裂は認められないが、培養後期に断
裂が認められる場合もある。

2)各種培養基上の諸性状 SANK60983株はうす黄〜黄茶〜黄味灰に生育する。ほと
んどの培地上には気菌糸が認められないが、一部の培地
には白の気菌糸が着生する。可溶性色素の産生は認めら
れない。第３表に主な培地上での培養性状を示す。

色調の表示は日本色彩研究所版“標準色票”のカラーチ
ツプナンバーを表わす。

3)生理学的性質 SANK60983株の生理学的諸性質を第４表に示す。

4)菌体内成分についてエム・ピー・レシエバリヤー(M.P.Lechevalier)らの方
法〔エイ・デイーツ(A.Dietz)ら著、放線菌の分類(Acti
nomycete taxonomy)、225頁、1980年〕に従い、菌体の
酸加水分解物のペーパークロマトグラフイーによる分析
を行つた結果、メソジアミノピメリン酸およびアラビノ
ース、ガラクトースが認められ、細胞壁のタイプはIV型
であることが確認された。また全菌体糖型はＡ型であつ
た。さらに内田らの方法〔ジヤーナル・オブ・ジエネラ
ル・アプライド・マイクロバイオロジー(J.Gen.Appl.Mi
crobiol.)、２３巻、249頁、1977年〕に従い細胞壁のア
シル基を調べたところアセチル基型であつた。

ところで、現在知られている放線菌の中で、胞子を菌糸
の中間に形成するような属は報告されていない。そし
て、他の諸性質から類縁する属を検索するとアクチノポ
リスポラ(Actinopolyspora)属、サツカロポリスポラ(Sa
ccharopolyspora)属、シユードノカルジア(Pseudonocar
dia)属、ミクロポリスポラ(Micropolyspora)属等があげ
られる。

しかし、アクチノポリスポラ属およびサツカロポリスポ
ラ属は、両属とも気菌糸の先端にのみ胞子を着生するこ
との他、前者が高度好塩性属であること、後者がグリコ
リル基型のアシル基を有すること等からSANK60983株と
は属を異にする。また、シユードノカルジア属は本株と
同様、気菌糸および栄養菌糸に胞子を着生するが、その
位置は菌糸の先端のみであること、また出芽法による胞
子の発芽が認められること等によりSANK60983株と属を
異にするものと考えられる。ミクロポリスポラ属と本SA
NK60983株の相異は、胞子の着生位置が前者が菌糸の先
端のみに形成するのに対し、後者が先端および中間に形
成する点のみである。

胞子の着生位置が菌糸の先端、中間のいずれかによるこ
とが分類学的にどのような意味を持つかについては未だ
学界でも議論されたことがほとんどない現在、この差の
みをもつて属を分けることは適当でない。

従つて、本発明者らはSANK60983株をミクロポリスポラ
属の一新種とするのが最も妥当であると考え、ミクロポ
リスポラエスピー・(Micropolyspora sp.)SANK60983
（微工研条寄第538号；FERM BP-538）と命名した。

以上、クロロポリスポリンＢおよびＣの生産菌について
説明したが、放線菌の諸性質は一定したものでなく、自
然的、人工的に容易に変化することは周知の通りであ
り、本発明で使用しうる菌株はミクロポリスポラ属に属
する、クロロポリスポリンＢおよびＣを生産するすべて
の菌株を包含するものである。

本発明における培養は一般放線菌における培養方法に準
じて行われ、液体培地中での振盪培養あるいは通気攪拌
培養によるのが好ましい。培地成分としては、たとえば
炭素源としてブドウ糖、マルトース、シユクロース、マ
ンニツト、糖蜜、グリセリン、デキストリン、澱粉、大
豆油、綿実油などが、窒素源として大豆粉、落花生粉、
綿実粉、フアーマミン、魚粉、コーン・スチーブ・リカ
ー、ペプトン、肉エキス、イースト、イースト・エキ
ス、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム
などが、また、無機塩として食塩、燐酸塩、炭酸カルシ
ウム、微量金属塩などが必要に応じて適宜添加される。
液体培養に際してはシリコン油、植物油、界面活性剤等
が消泡剤として適宜使用される。

培地のpHは中性附近、培養温度は２４℃から３０℃、特
に２８℃前後が好ましい。培養の経過に伴つて生産され
るクロロポリスポリンＢおよびＣの力価の経時的変化
は、バチルス・ズブチリスPCI 219及びスタフイロコツ
カス・アウレウスFDA 209 PJC-1を被検菌としたペーパ
ーデイスク（東洋科学産業（株）製、直径８mm、Thic
K）検定法により測定される。通常５５〜７０時間の培
養でクロロポリスポリンＢおよびＣの生産量は最高値に
達する。主として培養液中の液体部分に存在するクロロ
ポリスポリンＢおよびＣは、培養終了後、菌体その他の
固型部分をけいそう土等を過助剤とする過操作、あ
るいは遠心分離によつて除去し、その液あるいは上清
中から抽出・精製することによつて得られる。

クロロポリスポリンＢおよびＣはその物理化学的性状を
利用することにより、たとえば吸着剤を用いて採取する
ことができる。吸着剤としてはたとえば、活性炭、ある
いは吸着用樹脂であるアンバーライトXAD-2，XAD-4，XA
D-7等（ローム・アンド・ハース社製）やダイヤイオンH
P10，HP20，CHP20P，HP50（三菱化成工業（株）製）、
ポリアミドゲル等が使用され、クロロポリスポリンＢお
よびＣを含む液を上記の如き吸着剤の層を通過させてク
ロロポリスポリンＢおよびＣを含む液に含まれる不純物
を吸着させて取りのぞくか、またはクロロポリスポリン
ＢおよびＣを吸着させた後、メタノール水、アセトン
水、ｎ−ブタノール水などを用いて溶出させることによ
つて得られる。

このようにして得られたクロロポリスポリンＢおよびＣ
を分離・精製するためには、アビセル（旭化成工業
（株）製）などのセルロースあるいはセフアデツクスLH
-20（フアルマシア社製）などを用いた分配カラムクロ
マトグラフイー；逆相用担体を用いた逆相カラムクロマ
トグラフイー；またはクロロポリスポリンＢおよびＣと
混在する不純物との溶媒に対する分配率の差を利用した
抽出法、あるいは向流分配法などが有効な方法といえ
る。以上の分離・精製手段を単独あるいは適宜組み合
せ、反復用いることによりクロロポリスポリンＢおよび
Ｃを分離・精製することができる。クロロポリスポリン
ＢおよびＣは、また一般の脂溶性抗生物質と同じく、培
養条件によつては培養液中の菌体部分に存在する。この
場合は、アルコール類、アセトン等の親水性有機溶媒に
よつて抽出し、抽出液より溶媒を除去し、次いで水溶液
とした後、培養液からと同様の方法で抽出精製するこ
とができる。

〔発明の効果〕

クロロポリスポリンＢおよびＣはグラム陽性細菌に対し
て強い抗菌力を示すことから、ヒトおよび動物のこれら
の細菌に起因する疾病の予防および治療に用いられる。
また、グリコペプチド系公知抗生物質の中には反すう動
物および家畜における飼料効率を増大させるための補足
的手段として利用されているものもあるが、本物質につ
いても同様の効果が期待される。

以上から、クロロポリスポリンＢおよびＣは各種細菌感
染性疾患を対照とする抗菌剤として使用される。その投
与形態としては皮下注射、静脈内注射、筋肉注射、坐剤
などによる非経口投与法あるいは錠剤、カプセル剤、散
剤、顆粒剤などによる経口投与法があげられる。投与量
は対象疾患、投与経路および投与回数などによつて異な
るが、例えば成人に対して通常は１日0.1ｇ乃至１０ｇ
を１回または数回に分けて投与するのが好ましい。

次に実施例、製剤例をあげて本発明をさらに具体的に説
明する。

実施例1. ミクロポリスポラ・エスピーSANK60983株をＡ培地８０m
lを含む500ml容三角フラスコに一白金耳接種し、220rpm
の回転振盪培養機により２８℃で８４時間培養した。こ
の培養液２５mlをＢ培地500mlを含む２容三角フラス
コ４本に接種し、220rpmの回転振盪培養機により２８℃
で２４時間培養した。この培養液750mlを、Ｂ培地１５
を含む３０容ジヤーフアーメンター２基に接種し、
２８℃、回転数１５０rpm／分、通気量１５／分で６
９時間通気攪拌培養した。この培養液３０に過助剤
としてセライト545を加えて過すると、液３０が
得られた。この液をダイヤイオンHP20，３に吸着さ
せ、水洗し５０％アセトン水で溶出し、得られた活性分
画より減圧下でアセトンを留去後、凍結乾燥すると粗粉
末４４ｇが得られた。得られた粗粉末４１ｇを水に溶解
しダイヤイオンHP20，1.8に吸着させ水５、次いで
１０％アセトン水２で洗浄後、５０％アセトン水４
で溶出した。溶出液を減圧下で１に濃縮し、5000rpm
で遠心分離し、得られた沈澱を乾固するとクロロポリス
ポリンＢおよびＣを含む粉末9.6ｇが得られた。得られ
た粉末9.6ｇを５０％メタノール水１に溶解し、あら
かじめ５０％メタノール水で調製した酸性アルミナ（ウ
エルム社製）200mlに吸着させ同一溶媒で溶出すると活
性分画1.1が得られた。得られた活性分画をDowex21K
(OH^-)６０mlに通過させ、更に得られた活性分画1.2を
減圧下で３０mlに濃縮し凍結乾燥すると、粉末1.23ｇが
得られた。得られた粉末1.23ｇをpH4.0の塩酸水に溶解
し、水で充填したポリアミド（ウエルム社製）５６ｇに
吸着させ、水400mlとメタノール1.2を用いてグラジエ
ント溶出により１分画２０mlでフラクシヨン８０まで溶
出した。次いで、フラクシヨン３０から６０までを集
め、減圧下でメタノールを留去し、次いで凍結乾燥する
とクロロポリスポリンＢおよびＣを含む白色粉末738mg
が得られた。

Ａ培地グルコース３％生イースト１％大豆粉３％炭酸カルシウム 0.4 ％硫酸マグネシウム 0.2 ％ニツサンCB-442（消泡剤） 0.01 ％ (pH7.0) Ｂ培地グルコース５％イーストエキス 0.1 ％大豆粉１％ポリペプトン 0.4 ％牛肉エキス 0.4 ％塩化ナトリウム 0.25 ％炭酸カルシウム 0.5 ％ニツサンCB-442（消泡剤） 0.01 ％ (pH7.2) このようにして得られたクロロポリスポリンＢおよびＣ
を含む白色粉末4.4ｇを８０mlのアセトニトリル：緩衝
液（0.2％ヘプタルスルホン酸ナトリウム、2.5％酢酸及
び0.5％濃アンモニア水を含む）＝15：85よりなる混合
溶媒に溶解し、システム500（ウオーターズ社製）のプ
レツプパツクC₁₈カートリツジに吸着させ、同混合溶媒
系で100〜150ml／分の流速で展開溶出するとクロロポリ
スポリンＢは溶出液量800mlから1700mlの間に、クロロ
ポリスポリンＣは溶出液量1700mlから4700mlの間にそれ
ぞれ溶出された。前者の活性分画を集めpHを7.0に調整
後減圧下濃縮し、アセトニトリルを留去した。この濃縮
液を、ダイヤイオンHP 20のカラム（100ml）に吸着さ
せ、水で洗浄後、７０％アセトン水500mlにて溶出し
た。溶出液を減圧下で濃縮し、凍結乾燥することによ
り、粉末としてクロロポリスポリンＢのヘプタンスルホ
ン酸塩を得た。この粉末200mgを５mlの水に溶解し、１
０％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液を滴下し、生ずる沈
澱を3000rpmで１０分間遠心分離し回収した。更にこの
沈殿を水に懸濁し、同様に遠心分離を行なつて沈澱を洗
浄した。この操作を更に３回くり返して、沈澱を洗浄
後、３mlのメタノールに溶解した。不溶物を過し、そ
の液に0.5Ｍトリエチルアミン硫酸塩のメタノール溶
液を滴下し、生ずる沈澱を3000rpmで１０分の遠心分離
により、回収した。この沈澱を新たに少量のメタノール
に懸濁し、同様の遠心分離によつて沈澱を得た。この操
作を更に３回くりかえしたのち、得られた沈澱を水1.5m
lに溶解し、不溶物を除去後、凍結乾燥することにより
クロロポリスポリンＢ硫酸塩６５mgが得られた。

一方、後者の活性分画は、これを集めpHを7.0に調整
後、減圧下濃縮しアセトニトリルを留去した。この濃縮
液をダイヤイオンHP 20のカラム（50ml）に吸着させ、
水で洗浄後、７０％アセトン水300mlにて溶出した。溶
出液を減圧下濃縮し凍結乾燥することにより、クロロポ
リスポリンＣのヘプタンスルホン酸塩を含む粉末1.0ｇ
が得られた。この粉末を１０mlの前述のシステム500で
使用した混合溶媒系に溶解し、１回当り２mlずつローバ
ーカラムRP-18（Ｂサイズ、メルク社製）に吸着させ、
前述のシステム500で使用した混合溶媒系で１３ml／分
の流速で展開溶出すると、混在するクロロポリスポリン
Ｂが１８分から２０分に溶出され、クロロポリスポリン
Ｃが３０分から４０分の間に溶出された。この操作を５
回くりかえし、クロロポリスポリンＣ分画を集め、pHを
5.8に調整後減圧下濃縮した。４０mlのダイヤイオンHP
20に吸着させ、水洗後200mlの５０％アセトン水で溶出
した。溶出液を減圧下濃縮後、凍結乾燥し、250mgのク
ロロポリスポリンＣの粗粉末を得た。この粉末を５mlの
５０％メタノール水に溶解し、あらかじめ５０％メタノ
ール水で平衡化したトヨパールHW40F（東洋曹達工業
（株）製）150mlのカラムに吸着させ、同溶媒系で流速
0.6ml／分で展開溶出し、溶出液を2.5mlずつ分画してい
くと、フラクシヨンNo.５１から６４までにクロロポリ
スポリンＣのヘプタンスルホン酸塩が溶出された。この
ものの硫酸塩を得るために更に以下の如き操作を行なつ
た。すなわち、トヨパールカラムの溶出液を減圧下濃縮
し、１０％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液を滴下し、生
ずる沈澱を3000rpmで１０分の遠心分離により回収し
た。更にこの沈澱を水に懸濁し、同様に遠心分離を行な
つて沈澱を洗浄した。この操作を更に３回くりかえして
沈澱を洗浄後、３mlのメタノールに溶解した。不溶物を
過した後、液に0.5Ｍトリエチルアミン硫酸塩のメ
タノール溶液を滴下し、生ずる沈澱を3000rpmで１０分
の遠心分離により回収し、更にメタノールに懸濁し、遠
心分離によつて上清を除き洗浄した。この操作を３回く
りかえし、得られた沈澱を水１．５mlに溶解し、不溶物
を除去後、凍結乾燥することによりクロロポリスポリン
Ｃ硫酸塩５４mgが得られた。

実施例2. ミクロポリスポラ・エスピーSANK60983株を実施例１の
Ａ培地８０mlを含む500ml容三角フラスコに一白金耳接
種し、220rpmの回転振盪培養機により２８℃で７２時間
培養した。この培養液２５mlをＢ培地500mlを含む２
容三角フラスコ６本に接種し２４時間培養後、更にこの
培養液全量を同培地６０を含む100容タンクに接種
し２４時間培養した。この種培養液１５ずつを300
の同培地を含む600容タンク２基にそれぞれ接種し、
通気量３００／分、内圧1.0kg/cm²、D.O.３〜５ppm、
６７時間で通気攪拌培養を行なつた。この培養液に過
助剤としてセライト545を加えて過すると、液550
が得られた。この液をダイヤイオンHP２０カラム（６
０）に通しクロロポリスポリンＢを吸着させ、水洗
し、５０％アセトン水で溶出した。得られた活性分画57
0を減圧下アセトンを留去し濃縮液280を得た。この
濃縮液を200のｎ−ブタノールで２回抽出し、不純物
を除去後、減圧下で水層を５まで濃縮した。この濃縮
液のpHを1N NaOHでpH5.8に調整後、4.2のポリアミド
カラム（ウエルム社製）に吸着させ水で展開溶出した。
通過液をすて溶出液を１ずつ分画するとクロロポリス
ポリンＢは分画３から９に溶出された。活性分画７を
1N HClにてpHを4.0に調整後、減圧下で濃縮し凍結乾燥
することによりクロロポリスポリンＢ塩酸塩４２ｇが得
られた。

次に製剤例を示す。

製剤例1.経口用カプセル剤クロロポリスポリンＢ 100mg 乳糖 100 トウモロコシ澱粉 148.5 ステアリン酸マグネシウム 1.5 350mg 上記処方の粉末を混合し、３０メツシユのふるいを通し
た後、この粉末350mgを２号ゼラチンカプセルに入れ、
カプセル剤とした。

製剤例2.経口用カプセル剤クロロポリスポリンＣのカプセル剤については、製剤例
１のクロロポリスポリンＢの代りにクロロポリスポリン
Ｃを用いて、同一の組成により製造し、カプセル剤とし
た。

【図面の簡単な説明】

第１図はクロロポリスポリンＢの紫外線吸収スペクトル
を示し、第２図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示
し、第３図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す。第４図はクロロポリスポリンＣの紫外線吸収スペクトル
を示し、第５図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示
し、第６図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者中島睦男東京都品川区広町１丁目２番58号三共株式会社内 (72)発明者榎田竜三東京都品川区広町１丁目２番58号三共株式会社内 (72)発明者片山敏昭東京都品川区広町１丁目２番58号三共株式会社内 (72)発明者岩藤誠吾東京都品川区広町１丁目２番58号三共株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式を有するクロロポリスポリンＢまたはＣあるいはその
塩。但し、式中、クロロポリスポリンＢはR₁がリストサミン
を示し、R₂がマンノースを示し、R₃がグルコースを示
し、R₄がラムノースを示す。クロロポリスポリンＣはR₁
がリストサミンを示し、R₂がマンノースを示し、R₃がグ
ルコースを示し、R₄が水素原子を示す。
【請求項２】ミクロポリスポラ属に属するクロロポリス
ポリンＢまたはＣ生産菌を培養し、その培養液よりクロ
ロポリスポリンＢまたはＣを採取することを特徴とする
クロロポリスポリンＢまたはＣの製造法。
【請求項３】ミクロポリスポラ属に属するクロロポリス
ポリンＢまたはＣ生産菌がミクロポリスポラエスピー・
SANK 60983株（微工研条寄第538号）である特許請求の
範囲第２項記載の製造法。
【請求項４】クロロポリスポリンＢおよび／またはＣを
有効成分とする抗菌剤。