JPH0651641B2 - ガンマ・インターフェロン組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、安定なガンマ・インターフェロン（以下、Ｉ
ＦＮ−γという）組成物に関する。

技術水準 ＩＦＮ−γはヒト白血球にPhytohemagglutinin（ＰＨ
Ａ）やConcanavarin A(Con-A)等のマイトージェン(mito
gen)をインデューサーとして刺激することによって産生
される分子量約２万〜４万の糖蛋白質である。

ＩＦＮーγは顕著な免疫抑制作用、抗ウイルス作用、抗
細胞作用を有するほか、ＩＦＮーαおよびＩＦＮ−βの
活性に相乗効果を与え、さらに腫瘍細胞に対する抗増殖
効果はＩＦＮ−α、ＩＦＮ−βに比べて10〜100倍の効
果がある。このため、ＩＦＮ−γの医薬としての臨床効
果に期待がかけられるところは広大なものである。

ところで、ＩＦＮ−γは酸性条件（たとえば、ph２程
度）、熱に対して不安定である。また、ＩＦＮ−γは溶
液中での保存安定性にも欠けるので医薬品とする場合、
凍結乾燥品とすることが望ましいが、凍結乾燥時にもそ
の活性が失われるのが実情である。従って、ＩＦＮ−γ
はなんらかの形で安定化させておくことが要求される。

発明の開示 かかる実情下に本発明者らは鋭意研究を重ねて来たとこ
ろ、ＩＦＮ−γに一定量の糖類を共存させておいく、Ｉ
ＦＮ−γが安定化されること、ＩＦＮ−γ含有水溶液の
凍結乾燥に際してＩＦＮ−γの不活性化もなく、凍結乾
燥後の乾燥製材としての保存安定性も高まることを見い
だして本発明を完成した。

即ち、本発明は糖類を含有するＩＦＮ−γ組成物であっ
て、ＩＦＮ−γと糖類との配合比率が、ＩＦＮ−γが１
×１０^４〜１×１０^６単位に対して糖類が５〜１０mgと
なるに相当する比率であることを特徴とする、凍結乾燥
された安定なＩＦＮ−γ組成物に関する。

本発明に関するＩＦＮ−γとしては、一般にヒト白血球
をＰＨＡやCon-A等のマイトージエン(mitogen)をインデ
ューサーとして刺激することによって得られたものを抗
体カラム等によるクロマトグラフィーにより精製したも
のなどが使用されるが、その他遺伝子工学で大腸菌、酵
母等によって生産されたものなどその由来を問わずひろ
く使用可能である。

本発明に使用される糖類としては、単糖類、二糖類、こ
れらの混合物が好適である。単糖類としては、例えばグ
ルコース、マンノース、ガラクトース、果糖等が列挙さ
れ、二糖類としては蔗糖、麦芽糖、乳糖等が列挙され
る。

ＩＦＮ−γと糖類との配合比は、ＩＦＮ−γが１×１０
^４〜１×１０^６単位に対して糖類が５〜１０mgとなるに
相当する比率である。この配合比は固形状のＩＦＮ−
γ、水溶液状のＩＦＮ−γ等の安定化等のいずれの場合
にも適用されるものである。なおＩＦＮ−γ水溶液の凍
結乾燥に当たってはＩＦＮ−γの含有量にかかわりなく
ＩＦＮ−γ水溶液中に少なくとも5mg／ml、好ましくは1
0mg／mlの濃度に糖類を添加しておけばＩＦＮ−γの安
定化が達成される。

糖類による凍結乾燥処理は例えば次のようにして行われ
る。即ち、精製ＩＦＮ−γを含有する水溶液をph５〜９
に調整し、これに糖類を前記安定化量添加し、この水溶
液の除菌濾過をおこなった後、分注し、常法によって凍
結乾燥に付すことによって行われる。

かくして調整されたＩＦＮ−γの凍結乾燥製剤の好まし
い組成は、ＩＦＮ−γ１万〜５０万単位（好ましくは、
５万〜５０万単位）、糖類５〜２０mg（好ましくは、１
０〜２０mg）、食塩９〜１８mg程度に対応する比率の組
成より成るものである。

本発明の方法によって提供されたＩＦＮ−γ製剤は、経
口あるいは非経口的に投与され、その投与量は、対象と
する疾患、投与ルートなどにより異なるが、例えば注射
剤の場合は、通常注射用蒸留水によってＩＦＮ−γの約
１〜10％ｗ／ｖ溶液に調整し、症状に応じてＩＦＮ−γ
の２×１０^３〜１×１０^４単位／kgを静脈内、筋肉内に
投与する。

以下に実施例・実験例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらにより何ら限定されるものでな
い。

実施例１ 白血球にＰＨＡを刺激剤として産生したＩＦＮ−γをモ
ノクローナルＩＦＮ−γ抗体−sepharoseカラムにより
比活性10^６Ｕ／mg以上に精製したＩＦＮ−γをリン酸ー
塩化ナトリウム緩衝液（ph７）に対して透析した。その
後、このＩＦＮ−γを１×１０^４単位／ml、１×１０^５
単位／ml、１×１０^６単位／ml含む各種力価の溶液群を
調整し、それぞれの溶液群にグルコース、マンノース、
ガラクトース、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖を各々10mg／
ml量づつ加えた。これらの溶液を除菌濾過し、2mlずつ1
0ml容の管瓶に分注し、最終到達温度２５℃の乾燥条件
で凍結乾燥した。

得られた乾燥品の含湿度を生物学的製剤基準、一般試験
法に準じて試験したところ、いずれも約0.2％であっ
た。いずれの乾燥品についても2mlの注射用蒸留水を加
えると直ちに溶解し、溶解液は無色透明であった。これ
らの溶解液についてＩＦＮ−γ残存率を求めたところ、
いずれも凍結乾燥前と何ら変化なかった。

実施例２ ＰＨＡで刺激した人白血球から、ｍ−ＲＮＡを得、その
ｍ−ＲＮＡを鋳型として、0kayama and Berg法により、
ｃＤＮＡを合成した。これをｐＢＲ３２２誘導体である
ｐＹＮ６に挿入し、これにより大腸菌を形質転換した。
この形質転換体を培養し、菌体内に産生させたＩＦＮ−
γを溶菌して得た。この粗製ＩＦＮ−γ溶液をモノクロ
ーナルＩＦＮ−γ抗体ーSepharoseカラム（溶出液２Ｍ
ＫＳＣＮ〔ph８〕）により精製した。さらに、リン酸
ー塩化ナリトウム緩衝液（ph７）に対して透析し、比活
性10^６Ｕ／mg以上のＩＦＮ−γを得た。その後、このＩ
ＦＮ−γを１×１０^４単位／ml、１×１０^５単位／ml、
１×１０^６単位／ml含む各種力価の溶液群を調整し、そ
れぞれの溶液群にグルコース、マンノース、ガラクトー
ス、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、マンニット、キシリッ
トを各々10mg/ml量づつ加えた。これらの溶液を除菌濾
過し、2mlずつ10ml容の管瓶に分注し、最終到達温度25
℃の乾燥条件で凍結乾燥した。

得られた乾燥品の含湿度を生物学的製剤基準、一般試験
法に準じて試験したところ、いずれも約0.2％であっ
た。いずれの乾燥品についても2mlの注射用蒸留水を加
えると直ちに溶解し、溶解液は無色透明であった。これ
らの溶解液についてＩＦＮ−γ残存立を求めたところ、
いずれも凍結乾燥前と何ら変化なかった。

実施例１ 本発明による安定化効果を確認するための実験を行っ
た。精製ＩＦＮ−γの溶液（１×10^４単位／ml：力価の
測定はＦＬ−Sindvis virus系のＣＰＥ阻止法によっ
た。）にグルコース、蔗糖（１mg／ml、５mg／ml、10mg
／ml）を各々添加し、次いで凍結乾燥を行った。凍結乾
燥品の力価は凍結乾燥直前、凍結乾燥直後および室温に
て６カ月保存後に測定し、糖類添加直後の力価に対する
活性残存率を第１表に示した。

製剤例 実施例に準じて以下の組成から成る凍結乾燥製剤を調整
した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 須山 忠和 京都府綴喜郡田辺町松井ケ丘４丁目３―７ (56)参考文献 特開 昭58−92619（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−181223（ＪＰ，Ａ) 欧州特許公開82481（ＥＰ，Ａ) 根井外喜男編「凍結・乾燥と保護物質」 （1972−３−20），東京大学出版会発行第 １頁〜第39頁 生科学，54［11］，（1982），第1255〜 1259頁 ＳＥＮ−Ｉ ＧＡＫＫＡＩＳＨＩ（繊維 と工業）37［12］，（1981）上平初穂 第 436〜443頁

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】単糖類または二糖類を含有するガンマ・イ
   ンターフェロン組成物であって、ガンマ・インターフェ
   ロンと糖類との配合比率が、ガンマ・インターフェロン
   が１×１０^４〜１×１０^６単位に対して糖類が５〜１０
   mgとなるに相当する比率であることを特徴とする、凍結
   乾燥された安定なガンマ・インターフェロン組成物。