JPH06228002A

JPH06228002A - Ｐａｃａｐを含有するセクレトグラニンιι産生促進剤

Info

Publication number: JPH06228002A
Application number: JP5013589A
Authority: JP
Inventors: Haruo Onda; 治夫音田; Masaki Hosoya; 昌樹細谷
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1993-01-29
Filing date: 1993-01-29
Publication date: 1994-08-16

Abstract

(57)【要約】【目的】アルツハイマー病治療薬の提供。【構成】ＰＡＣＡＰまたはその塩を含有するセクレトグ
ラニンII産生促進剤。【効果】優れたセクレトグラニンII産生促進活性。アル
ツハイマー病治療薬として有用。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は下垂体アデニレートシク
ラーゼ活性化ペプチド（Pituitary Adenylate Cyclase
Activating Polypeptide、以下ＰＡＣＡＰと略称する)
を活性成分とするセクレトグラニンIIの産生促進剤に係
わり、例えばアルツハイマー病治療剤として医薬分野で
使用される。

【０００２】

【従来の技術】ＰＡＣＡＰは、ラット下垂体培養細胞に
おけるｃＡＭＰ産生促進を指標としてヒツジの視床下部
から単離された生理活性ペプチドである。その配列はＰＡＣＡＰ３８： His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys Gln Arg Val Lys Asn Lys（配列番号１）ＰＡＣＡＰ２７： His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu（配列番号２）で表される（Miyata,A らバイオケミカルアンドバイ
オフィジカルリサーチコミュニケーションズ 164: 567
-574; 1989、 Miyata,A らバイオケミカルアンドバイ
オフィジカルリサーチコミュニケーションズ 170: 64
3-648; 1990）。両者は共通の前駆体に由来し (Kimura,
C らバイオケミカルアンドバイオフィジカルリサー
チコミュニケーションズ 166: 81-89; 1990)、ＰＡＣ
ＡＰ３８配列中の −Ｌｅｕ²⁷−Ｇｌｙ²⁸−Ｌｙｓ²⁹−
Ａｒｇ³⁰− というアミド化プロセッシング構造部位で
の切断が起こることによってＰＡＣＡＰ２７が生じる。
この両者に共通の２７残基からなる配列に対して６８％
の相同性を有するものとしてＶＩＰ（Ｖａｓｏａｃｔｉ
ｖｅＩｎｔｅｓｔｉｎａｌＰｅｐｔｉｄｅ）が存在
するが、ｃＡＭＰ産生促進活性はＰＡＣＡＰの方が約１
０００倍強力である(Miyata,A らバイオケミカルアン
ドバイオフィジカルリサーチコミュニケーションズ
164: 567-574; 1989)。

【０００３】遺伝子レベルの解析から、ヒツジのものと
全く同じ構造のＰＡＣＡＰペプチドがヒト、ラットにも
存在することが明かになった(Kimura,C らバイオケミ
カルアンドバイオフィジカルリサーチコミュニケー
ションズ 166: 81-89; 1990、Ohkubo,S らＤＮＡアン
ドセルバイオロジー 11: 21-30; 1992、 Ogi,K らバ
イオケミカルアンドバイオフィジカルリサーチコミ
ュニケーションズ 173:1271-1279; 1990)。また、ＰＡ
ＣＡＰ成熟ペプチド部分だけでなく、その前駆体の一次
構造およびｃＤＮＡの塩基配列のレベルでも種間におけ
る保存性が極めて高いことが明かになった。これらの知
見は、ＰＡＣＡＰが生体にとって重要な意味をもつペプ
チドであることを示唆する。

【０００４】これまでにＰＡＣＡＰの作用として、(１)
ラット下垂体初代培養細胞におけるｃＡＭＰの産生促進
(Miyata,A らバイオケミカルアンドバイオフィジカ
ルリサーチコミュニケーションズ 164: 567-574; 198
9)、(２)ラット下垂体スーパーフュージョン法における
ＧＨ、ＡＣＴＨ、ＰＲＬ、ＬＨの分泌促進(Miyata,Aら
バイオケミカルアンドバイオフィジカルリサーチコ
ミュニケーションズ164: 567-574; 1989)、(３)副腎髄
質クロム親和性細胞腫由来細胞ＰＣ１２ｈにおけるｃＡ
ＭＰの産生と神経突起伸長促進(Watanabe,T らバイオ
ケミカルアンドバイオフィジカルリサーチコミュニ
ケーションズ 173: 252-258; 1990、 Okazaki,K らフェ
ブスレターズ 298: 49-56; 1992)、(４)下垂体培養細
胞におけるインターロイキン−６の産生促進(Tatsuno,I
らエンドクリノロジー 129: 1797-1804; 1991)、(５)
アストロサイトにおけるｃＡＭＰ産生促進と神経細胞死
阻止作用の促進(Tatsuno, I ら、バイオケミカルアン
ドバイオフィジカルリサーチコミュニケーションズ
168: 1027-1033; 1990)など様々なものが報告されてい
る。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】これまでに、ＰＡＣＡ
Ｐに対する特異的な結合部位がアストロサイトには存在
し、ＰＡＣＡＰを作用させることによってｃＡＭＰの産
生促進が起こることが報告されている(Tatsuno, I ら、
バイオケミカルアンドバイオフィジカルリサーチコ
ミュニケーションズ 168: 1027-1033; 1990)。アストロ
サイトは脳内における主要な構成細胞の一種であり、そ
のような細胞をＰＡＣＡＰが活性化することはＰＡＣＡ
Ｐが脳内において重要な役割を広く果たしていることを
示唆するものである。また、アストロサイトと神経細胞
との混合培養下においてＰＡＣＡＰを添加すると、エイ
ズウイルスの表面糖蛋白質ｇｐ１２０によって誘発され
るべき神経細胞死を阻止することが報告されている(Tat
suno, I ら、バイオケミカルアンドバイオフィジカル
リサーチコミュニケーションズ 168: 1027-1033;199
0)。

【０００６】本発明者らはＰＡＣＡＰを作用させて活性
化させたアストロサイトにおこる生理的な変化の解析を
おこない、そこから得られた情報をもとにしてＰＡＣＡ
Ｐの医薬品としての用途をさらに探索した。ＰＡＣＡＰ
の作用によってアストロサイトからの分泌が促進される
物質の発見は、その物質が減少することを特徴とする疾
患の治療薬として開発をおこなうために有用である。ま
た、アストロサイトから分泌される物質は、それ自体の
血液脳関門の通過効率を問題とする事なく、脳内におい
て効果的な濃度にまで高めることができることが期待で
きる。本発明者らは特に蛋白質成分に着目し、二次元電
気泳動によって蛋白質の組成の変化を比較することによ
って研究を進めた。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らはアストロサ
イトに対するＰＡＣＡＰの作用をタンパク質レベルで解
析した結果、ＰＡＣＡＰが予想外にもセクレトグラニン
IIの産生を促進することを見いだした。セクレトグラニ
ンIIは、アルツハイマー病において脳内の量が有意に減
少していることが報告されている(Lassmann,H らニュ
ーロサイエンス46: 1-8; 1992)。現在のところ、アルツ
ハイマー病の病因については十分に解明されておらず、
有効な治療法も存在しない。本発明は、アルツハイマー
病の症状の一つである脳内セクレトグラニンII量の低下
に着目し、これをＰＡＣＡＰの投与によって増加させ、
その結果として対症療法的にこの病気を治療するもので
ある。また、アルツハイマー病に限らずセクレトグラニ
ンII量が減少することが症状として報告されている他の
病気についても本発明は有効である。

【０００８】すなわち、本発明はＰＡＣＡＰを含有する
ことを特徴とするセクレトグラニンII産生促進用医薬組
成物および該医薬組成物を用いるアルツハイマー病等治
療に関する。

【０００９】本発明において用いられるＰＡＣＡＰは、
ヒト、ヒツジ、ラットなど何れの動物由来のものでもよ
く、例えば（１）ＰＡＣＡＰ２３ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu（配列番号３）（２）ＰＡＣＡＰ２４ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala（配列番号４）（３）ＰＡＣＡＰ２５ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala（配列番号５）（４）ＰＡＣＡＰ２６ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val（配列番号６）（５）ＰＡＣＡＰ２７ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu（配列番号７）（６）ＰＡＣＡＰ２８ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly（配列番号８）（７）ＰＡＣＡＰ２９ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys（配列番号９）（８）ＰＡＣＡＰ３０ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg（配列番号１０）（９）ＰＡＣＡＰ３１ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr（配列番号１１）（１０）ＰＡＣＡＰ３２ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys（配列番号１２）（１１）ＰＡＣＡＰ３３ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys Gln（配列番号１３）（１２）ＰＡＣＡＰ３４ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys Gln Arg（配列番号１４）（１３）ＰＡＣＡＰ３５ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys Gln Arg Val（配列番号１５）（１４）ＰＡＣＡＰ３６ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys Gln Arg Val Lys（配列番号１６）（１５）ＰＡＣＡＰ３７ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys Gln Arg Val Lys Asn（配列番号１７）（１６）ＰＡＣＡＰ３８ His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys Gln Arg Val Lys Asn Lys（配列番号１８）などが用いられる。また、上記各ＰＡＣＡＰのＮ末端の
アミノ酸が別のアミノ酸、例えばTyr、Pheまたはアセチ
ルで置換された誘導体も用いることができる。さらに、
本発明のＰＡＣＡＰは、上記したように下垂体アデニレ
ートシクラーゼを活性化するペプチドであるので、本願
明細書（特許請求の範囲）を通じてＰＡＣＡＰはＰＡＣ
ＡＰ活性を有するその前駆体をも包含する。このような
ＰＡＣＡＰ前駆体タンパクとしては、例えばＥＰ−Ａ３
−０４７０６０４に記載のものなどが用いられる。

【００１０】本発明のＰＡＣＡＰの塩としては、薬理的
に許容され得る塩などが用いられ、例えば無機酸（例え
ば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるい
は有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル
酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ
酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスル
ホン酸）との塩などが用いられる。

【００１１】本発明のＰＡＣＡＰまたはその塩の製造に
は、それ自体公知あるいはそれに準じる方法が用いら
れ、通常のペプチド合成法またはＰＡＣＡＰあるいはＰ
ＡＣＡＰ前駆体をコードするＤＮＡを発現させる方法な
どが用いられる。具体的には、ＥＰ-Ａ-０４６７２７
９、ＥＰ-Ａ-０４０４６５２、ＥＰ-Ａ-０４７０６０４
などに記載の方法などを用いることができる。

【００１２】以上のようにして得られる本発明のＰＡＣ
ＡＰは、セクレトグラニンII量の減少を症状の一つとし
て有するアルツハイマー病等の疾患に対する有効な治療
薬として用いることができる。また、ｃＡＭＰ産生促進
活性は微弱であるがＶＩＰ（Vasoactive Intestinal Pe
ptide: Said, S.ら、サイエンス 169:1217-1218;1970）
を同様に用いても良い。

【００１３】本発明のＰＡＣＡＰの投与に当たっては、
非経口投与、特に注射剤あるいは噴霧剤として用いるこ
とができる。このような剤の製造は、それ自体公知ある
いはそれに準じる方法によって製造することができる。
この場合、ＰＡＣＡＰの活性を阻害しないものであれば
何れの添加物をも混合することができる。例えば、生理
食塩水または生理的に許容し得る緩衝液のような担体な
どが用いられる。その際、生理食塩水または生理的に許
容し得る緩衝液のような担体と、０．０１〜５重量％、
好ましくは０．１〜２重量％の濃度で組み合わせて用い
ることができる。投与量としては、１回につき０．１n
mole/kg〜1μg/kg、好ましくは１n mole/kg〜0.1μg/kg
を。１日１〜３回投与するのが好ましい。

【００１４】以下に、実施例を示して本発明をより詳細
に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するもので
はない。

【００１５】

【実施例】

実施例１ラット新生児アストロサイト初代培養の調製無菌的に摘出し、髄膜を除去した生後１日齢のＳＤ（Ｓ
ｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットの大脳半球をメス
で小片にし、０.２５％トリプシンで３７℃、２０分間
消化して組織を解離した。組織片より遊離した細胞をピ
ペットで回収し、遠心にて集めた後、１５％ウシ胎児血
清、１／１００容２５％グルコース、アンホテリシン
Ｂ、ペニシリンＧを含むイーグルＭＥＭ培地中に再懸濁
した。これを１５０ｃｍ²フラスコ中で同培地を用いて
１０日間培養した。１０日目にフラスコを激しく震盪
し、接着性の弱い細胞をはがすことによって、相対的に
基質に対する接着性が強いアストロサイトを選別した。
基質に残った細胞を５ｍＭＥＤＴＡを含むＰＢＳによっ
てはがし、遠心によって集めた後、１５０ｃｍ²フラス
コ中で再び培養した。フラスコ中のアストロサイトは底
面が一杯になった後に増殖を停止するので、培養液を交
換しながら使用時まで維持した。

【００１６】実施例２無血清化とＰＡＣＡＰの添加実施例１で示した血清を含有する培地にて維持していた
アストロサイトを、無血清培地（ダルベッコ培地とハム
Ｆ１２培地の等量混合培地）で洗浄し、同無血清培地で
２４時間前培養した後、さらに同培地で洗浄して無血清
化をおこなった。１５０ｃｍ²フラスコ当たり５０ｍｌ
の無血清培地と、５０μｌのぺプチド溶液を加え、５％
ＣＯ２存在下、３７℃にて２４時間培養した。容器に対
する非特異的な吸着を防止するために、ペプチド溶液に
は終濃度０.1％のウシ血清アルブミンを加え、コントロ
ールもペプチドを含まない同溶液を用いた。ＰＡＣＡＰ
の作用の検出のため、終濃度１.０×１０-9ＭのＰＡＣ
ＡＰ２７を用いた。

【００１７】実施例３培養上清中の成分の解析培養上清を回収し、遠心にて浮遊物を除いた。これを凍
結乾燥し、もとの液量の１／１００の８Ｍグアジニン塩
酸を含む溶解液(Hirabayashi,T らジャーナルオブバ
イオケミストリー 93: 458-461; 1983)にて再溶解し
た。透析膜を用いて等電点電気泳動用の試料溶液（Oh-i
shi,M らフィジコケミカルバイオロジー32: 113-120;
1988）中で透析して脱塩とタンパク質成分の変性を行
った。次に平林の方法（Hirabayashi,T アナリティカル
バイオケミストリー 117: 443-451; 1981、 Oh-ishi,M
らフィジコケミカルバイオロジー 32: 113-120; 198
8）に従ってアンフォラインを配合した等電点電気用ア
ガロースゲルをガラス管内に作成し、ゲルの上部に透析
の完了した試料を重層して５００Ｖで１４時間通電し
た。

【００１８】通電後のアガロースゲルをガラス管より取
り出し、分離の完了した蛋白質の固定を１０％トリクロ
ロ酢酸、５％スルホサリチル酸中で行った。固定後のア
ガロースゲルは蒸留水で洗浄し、ＳＤＳポリアクリルア
ミドゲル電気泳動用の平板ゲル（１２％）の上に載せた
のち、引き続き平林の方法にしたがって二次元目の泳動
を行った（Hirabayashi,T アナリティカルバイオケミ
ストリー 117: 443-451; 1981）。

【００１９】電気泳動終了後に泳動槽からゲルを取り出
し、市販の銀染色キットを用いて染色を行った。１枚の
ゲル上にＰＡＣＡＰ添加、無添加（コントロール）のそ
れぞれのサンプルを泳動し、同時に染色、比較すること
によって、ＰＡＣＡＰの添加によって培養上清中の含有
量が増加した成分を検出した。同様に調製したゲルをク
ーマジー・ブリリアント・ブルー・Ｒ（ＣＢＢＲ）染色
液によって検出し、目的の成分がアミノ酸配列の決定に
十分な量を得ることが可能であることも確認した。

【００２０】実施例４部分アミノ酸配列の決定による
分子種の同定ＰＡＣＡＰの添加によって上清中の含有量が増加する蛋
白質のスポットをＣＢＢＲ染色によって検出し、ゲル中
からカミソリの刃で切り出し、凍結乾燥をおこなった。
７０％ギ酸に溶かした臭化シアンを添加し、室温で１６
時間静置した。凍結乾燥によってギ酸と臭化シアンを除
いた後、限定分解後のペプチド断片を１％トリフルオロ
酢酸にてゲル中から溶出した。溶出したペプチドは凍結
乾燥によって濃縮し、これを逆相ＨＰＬＣによって分離
した。逆相ＨＰＬＣ用のカラムは、ABI社 Spheri-5RP-1
8(2.1×30mm)を用い、溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ（トリフ
ルオロ酢酸）から溶媒Ｂ：７０％アセトニトリル−０．
１％ＴＦＡへ３０分間でＢの割合が７０％となるように
直線状の濃度勾配をかけて行なった。カラムの流速は３
００μl／分に設定し、ＨＰＬＣシステムはABI 130A so
lvent delivery systemを用いた。２１０ｎｍの波長の
吸光度によって検出した溶出ピークを、それぞれ分取
し、各ピークに含まれるペプチドのアミノ酸配列を気相
アミノ酸シーケンサー(アプライドバイオシステムズ
モデル 477A) によって解析した。その結果、２番目の
ピークより配列ＦＱＳＫＴＬＳＫＧＧＹＰを
得た。この配列をもとに、ＮＢＲＦ−ＰＩＲデーターベ
ースを検索したところ、この配列がラットのセクレトグ
ラニン (Gerdes,H-H らヌクレイックアシッズスリ
サーチ16: 11811; 1988)の部分配列に一致することが判
明した。また、ＣＮＢｒによる限定分解(メチオニン残
基のあとで切断される)によって理論的に生じるペプチ
ド断片のＮ末端の配列に一致した。

【００２１】実施例５ノザンブロッティングによる転
写レベルでの作用の解析既知のラットのセクレトグラニンIIｃＤＮＡの塩基配列
をもとに、以下の配列の２本の合成ＤＮＡプローブを合
成した。

【００２２】配列：５’−ＧＡＡＧＣＴＧＡＣＡＴＡＧＡＣＣＧＣＣＣＡＧＡＣＡＴＧＴＴＴＣＡＡＡＧＴＡＡＧＡＣＧＣＴＣＴＣＣＡＡＧ−３’（配列番号１９）５’−ＧＴＴＴＣＡＴＴＣＴＧＣＧＡＧＡＧＧＴＴＣＣＣＡＣＣＣＡＴＡＧＧＧＴＴＣＣＧＴＧＧＡＣＣＡＧＣＴＣＣＡ−３’（配列番号２０）これらを等量混合し、加熱、徐冷することによってお互
いにアニールさせた後、オーバーラップしない部分をＤ
ＮＡポリメラーゼにて修復する際に［α−³²Ｐ］ｄＣＴ
Ｐを用いて放射標識を行った。

【００２３】実施例２において行った方法と同様の方法
でアストロサイトを調製し、１５０ｃｍ²の培養用フラ
スコにて培養した。これを無血清化したものと、血清を
含む培地のまま維持したものの２種類を調製し、ＰＡＣ
ＡＰ３８、ＰＡＣＡＰ２７、ＶＩＰをそれぞれ、培地中
に終濃度１．０×１０^-9Ｍとなるように加えた。５ｍＭ
のＥＤＴＡを含む生理的リン酸緩衝液を用いて細胞を培
養容器より回収し、遠心にてペレットにした。市販のｍ
ＲＮＡ調製キット（インビトロゲン社）を用いて添付の
プロトコールに従ってｐｏｌｙ（Ａ）+ＲＮＡ分画を調
製した。各５μｇをグリオキサールを含むバッファー
（１Ｍグリオキサール、５０％ジメチルスルフォキシ
ド、０．０１Ｍリン酸ナトリウムｐＨ７．０）中で５０
℃で１時間保温し、変成させた。これを1.2%アガロース
ゲルを用いて電気泳動し、ニトロセルロースフィルター
上に転写した。ＲＮＡを転写したフィルターを８０℃で
２時間処理したのち、５０％ホルムアミド、５×デンハ
ルト液、１０×ＳＳＣ、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐ
Ｈ６．５）、加熱変成した１００μｇ／ｍｌサケ精子Ｄ
ＮＡからなるバッファー中で先に標識したプローブと一
緒に一晩インキュベートし、ハイブリダイズさせた。洗
浄は２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで５５℃で１時間行
い、その後−８０℃でオートラジオグラフィーを行って
ハイブリダイズするバンドを検出した。

【００２４】

【発明の効果】本発明によって、ＰＡＣＡＰが優れたセ
クレトグラニンII産生促進活性を有することが明らかに
なった。このことから、アルツハイマー病を代表とする
ようなセクレトグラニンIIの減少を病状として有する疾
病に対する治療法として、ＰＡＣＡＰを用いることが有
効であることが明かになった。

【００２５】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：３８配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 Gln Arg Val Lys Asn Lys 35 配列番号：２配列の長さ：２７配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu 20 25 配列番号：３配列の長さ：２３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu 20 配列番号：４配列の長さ：２４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala 20 配列番号：５配列の長さ：２５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala 20 25 配列番号：６配列の長さ：２６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val 20 25 配列番号：７配列の長さ：２７配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu 20 25 配列番号：８配列の長さ：２８配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly 20 25 配列番号：９配列の長さ：２９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys 20 25 配列番号：１０配列の長さ：３０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg 20 25 30 配列番号：１１配列の長さ：３１配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr 20 25 30 配列番号：１２配列の長さ：３２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 配列番号：１３配列の長さ：３３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 Gln 配列番号：１４配列の長さ：３４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 Gln Arg 配列番号：１５配列の長さ：３５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 Gln Arg Val 35 配列番号：１６配列の長さ：３６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 Gln Arg Val Lys 35 配列番号：１７配列の長さ：３７配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 Gln Arg Val Lys Asn 35 配列番号：１８配列の長さ：３８配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys 20 25 30 Gln Arg Val Lys Asn Lys 35 配列番号：１９配列の長さ：５１配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸合成DNA 配列 GAAGCTGACA TAGACCGCCC AGACATGTTT CAAAGTAAGA CGCTCTCCAA G 10 20 30 40 50 配列番号：２０配列の長さ：５１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸合成DNA 配列ＧＴＴＴＣＡＴＴＣＴＧＣＧＡＧＡＧＧＴＴＣＣＣＡＣＣＣＡＴＡＧＧ
ＧＴＴＣＣＧＴＧＧＡＣＣＡＧＣＴＣＣＡ１０２０３０
４０５０

【図面の簡単な説明】

【図１】ＰＡＣＡＰ２７を１．０×１０−９Ｍ添加し
た場合と無添加の場合のアストロサイト無血清培養上清
中のタンパク質成分の比較を２次元電気泳動パターンを
用いて行ったもの。白の矢印で示した分子量約８０ｋＤ
のスポットに量的な差が見られる。

【図２】第１図で示した８０ｋＤのタンパク質のスポ
ットをゲルごとＣＮＢｒ処理し、切断されたぺプチド断
片を酸で抽出したものの逆相ＨＰＬＣの分画パターン。
下向きの矢尻はアミノ酸配列の解析をおこなったピーク
を示し、＊はアミノ酸配列の情報が得られたものを示
す。

【図３】８０ｋＤのスポットから得られたアミノ酸配
列と、それに一致するラットのセクレトグラニンIIの部
分を示したもの。上向きの矢尻はＣＮＢｒ処理によって
切断される可能性のあるメチオニン残基の位置を示す。

【図４】ＰＡＣＡＰ２７を培地中に１．０×１０-9Ｍ
加えたものと、コントロールの無血清培養アストロサイ
トのノザンブロッティングによる比較。プローブはラッ
トのセクレトグラニンIIのｃＤＮＡの配列の一部を合成
したもの。約２．４ｋｂのバンドがＰＡＣＡＰ２７処理
したもので増加している。

【図５】無血清、血清添加の各条件においてＰＡＣＡ
Ｐ２７、ＰＡＣＡＰ３８、ＶＩＰ添加によるセクレトグ
ラニンIIｍＲＮＡ量の増加を示したもの。いずれのペプ
チドの添加においても約２．４ｋｂのバンドに増加がみ
られる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ 8214−4ＢＣ０７Ｋ 99:00

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ＰＡＣＡＰまたはその塩を含有することを
特徴とするセクレトグラニンII産生促進剤。
【請求項２】ＰＡＣＡＰがＰＡＣＡＰ２７またはＰＡＣ
ＡＰ３８である請求項１記載のセクレトグラニンII産生
促進剤。
【請求項３】アルツハイマー病治療剤である請求項１記
載のセクレトグラニンII産生促進剤。