JPH0622776A - 酵素法によるｎ−長鎖アシルアミノ酸の製造方法 - Google Patents
酵素法によるｎ−長鎖アシルアミノ酸の製造方法Info
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- JPH0622776A JPH0622776A JP4182553A JP18255392A JPH0622776A JP H0622776 A JPH0622776 A JP H0622776A JP 4182553 A JP4182553 A JP 4182553A JP 18255392 A JP18255392 A JP 18255392A JP H0622776 A JPH0622776 A JP H0622776A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 アミノアシラーゼを用いることによる種々の
Ｎ−長鎖アシルアミノ酸を効率よく生産する方法を得
る。 【構成】 アミノ酸および長鎖脂肪酸の混合物にペニシ
リウム (Penicillium)属に属する微生物が生産するアミ
ノアシラーゼまたはアミノアシラーゼを生産しうるペニ
シリウム (Penicillium)属に属する微生物を作用させる
ことによるＮ−長鎖アシルアミノ酸の製造方法。 【効果】 Ｎ−長鎖アシルアミノ酸、特に、Ｎ−長鎖ア
シルグリシン、Ｎ−長鎖アシルセリン等を簡単にかつ高
収量で合成することが可能になった。
Ｎ−長鎖アシルアミノ酸を効率よく生産する方法を得
る。 【構成】 アミノ酸および長鎖脂肪酸の混合物にペニシ
リウム (Penicillium)属に属する微生物が生産するアミ
ノアシラーゼまたはアミノアシラーゼを生産しうるペニ
シリウム (Penicillium)属に属する微生物を作用させる
ことによるＮ−長鎖アシルアミノ酸の製造方法。 【効果】 Ｎ−長鎖アシルアミノ酸、特に、Ｎ−長鎖ア
シルグリシン、Ｎ−長鎖アシルセリン等を簡単にかつ高
収量で合成することが可能になった。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、酵素法によるＮ−長鎖
アシルアミノ酸の製造方法に関するものである。詳しく
述べると、本発明は、アミノアシラーゼを用いた酵素法
またはアシルアミラーゼを生産しうる微生物を用いるこ
とによって、アミノ酸および長鎖脂肪酸よりＮ−長鎖ア
シルアミノ酸を製造する方法に関するものである。
アシルアミノ酸の製造方法に関するものである。詳しく
述べると、本発明は、アミノアシラーゼを用いた酵素法
またはアシルアミラーゼを生産しうる微生物を用いるこ
とによって、アミノ酸および長鎖脂肪酸よりＮ−長鎖ア
シルアミノ酸を製造する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】Ｎ−長鎖アシルアミノ酸は、天然の成分
からなる両親媒性物質であり、安全性や優れた生化学的
分解性が確認され、さらに、界面活性作用や殺菌作用等
を有している。このため、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸は、
安全で生化学的分解性に優れた界面活性剤として、さら
にはアミノ酸と脂肪酸との組み合わせにより抗酸化剤と
なりうるなど、注目を集めている物質である。そして、
現在、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸は、各種の石鹸、シャン
プー、洗剤、乳化剤、抗菌剤などへの利用が検討されて
おり、その一部は実用化されている。
からなる両親媒性物質であり、安全性や優れた生化学的
分解性が確認され、さらに、界面活性作用や殺菌作用等
を有している。このため、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸は、
安全で生化学的分解性に優れた界面活性剤として、さら
にはアミノ酸と脂肪酸との組み合わせにより抗酸化剤と
なりうるなど、注目を集めている物質である。そして、
現在、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸は、各種の石鹸、シャン
プー、洗剤、乳化剤、抗菌剤などへの利用が検討されて
おり、その一部は実用化されている。
【０００３】従来より、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸はアミ
ノ酸と脂肪酸とから化学合成法（エム タケハラ(M. Ta
kehara) ら、ジャーナル オブ ザ アメリカン オイ
ルケミスト ソサイエティ(Journal of The American O
il Chemist's Society.)、４９巻、ページ１５７〜１６
１（１９７２年）、ワイ ラピドット(Y. Lapidot)ら、
ジャーナル オブ リピッド リサーチ(Jounal of Lip
id Research)、８巻、ページ１４２〜１４５（１９６７
年）、特公昭３１−９，５６８号、特公昭４６−８，６
８５号など）により製造されていた。しかしながら、こ
れらの化学合成法は、厳しい温度、圧力、ｐＨなどの条
件下で行われ、副生成物が多いという欠点を有してい
る。また、これらの化学合成法は、合成に際して危険な
試薬を用いるため、その残存性の問題等の様々な欠点を
有している。
ノ酸と脂肪酸とから化学合成法（エム タケハラ(M. Ta
kehara) ら、ジャーナル オブ ザ アメリカン オイ
ルケミスト ソサイエティ(Journal of The American O
il Chemist's Society.)、４９巻、ページ１５７〜１６
１（１９７２年）、ワイ ラピドット(Y. Lapidot)ら、
ジャーナル オブ リピッド リサーチ(Jounal of Lip
id Research)、８巻、ページ１４２〜１４５（１９６７
年）、特公昭３１−９，５６８号、特公昭４６−８，６
８５号など）により製造されていた。しかしながら、こ
れらの化学合成法は、厳しい温度、圧力、ｐＨなどの条
件下で行われ、副生成物が多いという欠点を有してい
る。また、これらの化学合成法は、合成に際して危険な
試薬を用いるため、その残存性の問題等の様々な欠点を
有している。
【０００４】このような問題に対して、シュードモナス
・ディミイニュータ(Pseudomonas diminuta)、キサント
モナス・アルビニアンス、グルコノバクター・リクイフ
ァシエンス(Gluconobacter liquifaciens)の菌体を用い
てアミノ酸と脂肪酸よりＮ−長鎖アシルアミノ酸を合成
する方法（特開昭５７−１２９，６９６号）が提案され
ている。しかしながら、上記の方法では、使用した脂肪
酸のモル比で約１〜２％のＮ−長鎖アシルグルタミン酸
の生成しか認められない。また、上記の方法は、アミノ
酸がグルタミン酸に限定されているなど、工業化を考え
た場合、反応効率等の多くの問題を有してる。
・ディミイニュータ(Pseudomonas diminuta)、キサント
モナス・アルビニアンス、グルコノバクター・リクイフ
ァシエンス(Gluconobacter liquifaciens)の菌体を用い
てアミノ酸と脂肪酸よりＮ−長鎖アシルアミノ酸を合成
する方法（特開昭５７−１２９，６９６号）が提案され
ている。しかしながら、上記の方法では、使用した脂肪
酸のモル比で約１〜２％のＮ−長鎖アシルグルタミン酸
の生成しか認められない。また、上記の方法は、アミノ
酸がグルタミン酸に限定されているなど、工業化を考え
た場合、反応効率等の多くの問題を有してる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記のように、微生物
を用いてＮ−長鎖アシルアミノ酸を容易にかつ効率的に
合成する方法はいまだ発見されていない。
を用いてＮ−長鎖アシルアミノ酸を容易にかつ効率的に
合成する方法はいまだ発見されていない。
【０００６】したがって、本発明の目的は、アミノアシ
ラーゼを用いて種々のＮ−長鎖アシルアミノ酸を容易に
かつ効率よく生産する方法を提供することである。
ラーゼを用いて種々のＮ−長鎖アシルアミノ酸を容易に
かつ効率よく生産する方法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の問
題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、ペニシリウム(P
enicillium)属に属するペニシリウム・フニコロサム (p
enicillium funiculosum)の生産するアミノアシラーゼ
（特願平３−２，０９６号）がアミノ酸と長鎖脂肪酸よ
り、効率よく種々のＮ−長鎖アシルアミノ酸を合成する
ことを見出だし、本発明を完成するに至った。
題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、ペニシリウム(P
enicillium)属に属するペニシリウム・フニコロサム (p
enicillium funiculosum)の生産するアミノアシラーゼ
（特願平３−２，０９６号）がアミノ酸と長鎖脂肪酸よ
り、効率よく種々のＮ−長鎖アシルアミノ酸を合成する
ことを見出だし、本発明を完成するに至った。
【０００８】すなわち、上記目的は、アミノ酸および長
鎖脂肪酸の混合物にペニシリウム (Penicillium)属に属
する微生物が生産するアミノアシラーゼまたはアミノア
シラーゼを生産しうるペニシリウム (Penicillium)属に
属する微生物を作用させることによるＮ−長鎖アシルア
ミノ酸の製造方法によって達成される。
鎖脂肪酸の混合物にペニシリウム (Penicillium)属に属
する微生物が生産するアミノアシラーゼまたはアミノア
シラーゼを生産しうるペニシリウム (Penicillium)属に
属する微生物を作用させることによるＮ−長鎖アシルア
ミノ酸の製造方法によって達成される。
【０００９】また、本発明は、アミノアシラーゼが以下
の理化学的性質を有しているＮ−長鎖アシルアミノ酸の
製造方法を示すものである。
の理化学的性質を有しているＮ−長鎖アシルアミノ酸の
製造方法を示すものである。
【００１０】１）作用 Ｎ−長鎖アシルアミノ酸に作用し、Ｌ−アミノ酸を遊離
させる。
させる。
【００１１】２）基質特異性 炭素数４以上のアシル基を有するＮ−アシルアミノ酸の
Ｌ体に作用し、Ｄ体には作用しない。アシル基に対する
特異性は広く、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、芳香族カル
ボン酸からなるＮ−アシル化合物に作用する。
Ｌ体に作用し、Ｄ体には作用しない。アシル基に対する
特異性は広く、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、芳香族カル
ボン酸からなるＮ−アシル化合物に作用する。
【００１２】３）至適ｐＨおよびｐＨ安定性 Ｎ−オレオイル−Ｌ−グルタミン酸を基質としたときの
至適ｐＨは、３０℃、各種緩衝液（ｐＨ５．５〜６．
０：酢酸緩衝液、ｐＨ６．０〜８．０：リン酸緩衝液，
ｐＨ８．０〜９．５：ホウ酸−塩酸緩衝液、ｐＨ９．５
〜１１．０：炭酸緩衝液）中で約８．５である。同緩衝
液中、３０℃、５時間処理においてｐＨ６〜９まで安定
である。
至適ｐＨは、３０℃、各種緩衝液（ｐＨ５．５〜６．
０：酢酸緩衝液、ｐＨ６．０〜８．０：リン酸緩衝液，
ｐＨ８．０〜９．５：ホウ酸−塩酸緩衝液、ｐＨ９．５
〜１１．０：炭酸緩衝液）中で約８．５である。同緩衝
液中、３０℃、５時間処理においてｐＨ６〜９まで安定
である。
【００１３】４）至適温度および熱安定性 Ｎ−オレオイル−Ｌ−グルタミン酸を基質としたときの
至適温度は、リン酸緩衝液（ｐＨ７）を用いて測定した
ところ、２５〜３５℃である。２０ｍＭトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８）中、４０℃、１５分処理において全く失
活せず、４５℃、１５分処理後の残存活性は約８０％で
ある。
至適温度は、リン酸緩衝液（ｐＨ７）を用いて測定した
ところ、２５〜３５℃である。２０ｍＭトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８）中、４０℃、１５分処理において全く失
活せず、４５℃、１５分処理後の残存活性は約８０％で
ある。
【００１４】５）阻害剤の影響 パラクロロマーキュリーベンゾエートまたはジチオスレ
イトールにより阻害を受ける。
イトールにより阻害を受ける。
【００１５】６）金属イオンの影響 Ｎｉ2+、Ｃｕ2+、Ｍｇ2+などによって活性化され、Ｈｇ
2+により阻害を受ける。
2+により阻害を受ける。
【００１６】７）サブユニットの分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動では分子量約４
８，０００。
８，０００。
【００１７】８）分子量 ゲル瀘過法では約１９２，０００。
【００１８】さらに、本発明は、ペニシリウム (Penici
llium)属に属する微生物がペニシリウム・フニコロサム
(penicillium funiculosum)であるＮ−長鎖アシルアミ
ノ酸の製造方法を示すものである。
llium)属に属する微生物がペニシリウム・フニコロサム
(penicillium funiculosum)であるＮ−長鎖アシルアミ
ノ酸の製造方法を示すものである。
【００１９】
【作用】本発明は、アミノ酸水溶液に脂肪酸とアミノア
シラーゼを添加することにより、簡単にかつ高収量で種
々のＮ−長鎖アシルアミノ酸を合成するものである。
シラーゼを添加することにより、簡単にかつ高収量で種
々のＮ−長鎖アシルアミノ酸を合成するものである。
【００２０】本発明において使用されるアミノアシラー
ゼは、ペニシリウム (Penicillium)属に属する微生物に
よって生産されるが、好ましくはペニシリウム・フニコ
ロサム (penicillium funiculosum)によって生産され
る。
ゼは、ペニシリウム (Penicillium)属に属する微生物に
よって生産されるが、好ましくはペニシリウム・フニコ
ロサム (penicillium funiculosum)によって生産され
る。
【００２１】上記ペニシリウム・フニコロサム (penici
llium funiculosum)は微工研条寄第３１７６号（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−３１７６）として寄託されており、その菌学
的性質は以下のとおりである。
llium funiculosum)は微工研条寄第３１７６号（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−３１７６）として寄託されており、その菌学
的性質は以下のとおりである。
【００２２】（Ａ）各種培地における生育状態 （ａ）ツアペック培地 速やかに生育し、２５℃、７日間で直径３０〜４０ｍｍ
に達する。コロニーは、黄色の栄養菌糸体と灰色から黄
緑色の分生子柄の混在した緻密な菌糸層からなる。ま
た、コロニーの裏面は、ピンクから深紅色である。ま
た、形態学的性質は以下の通りである。
に達する。コロニーは、黄色の栄養菌糸体と灰色から黄
緑色の分生子柄の混在した緻密な菌糸層からなる。ま
た、コロニーの裏面は、ピンクから深紅色である。ま
た、形態学的性質は以下の通りである。
【００２３】分生子柄：気生菌糸から分枝している ２５〜４０×２．０〜３．０μｍ メトレ：５〜８本が輪生状となる １０〜１３×２．０〜３．０μｍ フィアライド：３〜６本が輪生状となる ほこ先形 １０〜１２×１．５〜２．５μｍ 分生子：亜球形〜楕円形で小さい 表面は滑面〜微細な粗面 ２．５〜３．５×２〜２．５μｍ （ｂ）麦芽エキス寒天培地 生育状態および形態学的性質は、ツアペック寒天培地の
ものとほぼ同様である。ただし、分生糸形成がツアペッ
ク寒天培地のものに比べて優れている。
ものとほぼ同様である。ただし、分生糸形成がツアペッ
ク寒天培地のものに比べて優れている。
【００２４】（Ｂ）各生理的、生態的性質 ｐＨ：約６付近で、最良好な生育を示す 温度：５℃では生育はほとんど認められない 約２５〜３７℃で最適な生育が認められる 本発明に用いる微生物としては、本菌株とその変種、変
異株に限定されるものではなく、上記性質の酵素を有す
るものであればよい。
異株に限定されるものではなく、上記性質の酵素を有す
るものであればよい。
【００２５】本発明におけるペニシリウム (Penicilliu
m)属に属する微生物は、発酵学の分野で公知の情報に従
って培養することができる。使用する培地としては炭素
源、窒素源、無機物およびその他の栄養素を適量含有す
る培地ならば、合成培地または天然培地のいずれでも使
用可能であり、液体培地または固体培地を用いて培養す
ることができる。具体的には炭素源として、グルコー
ス、フラクトース、マルトース、ガラクトース、澱粉、
澱粉加水分解物、糖蜜、廃糖蜜等の糖類、麦、米などの
天然炭水化物、グリセロール、メタノール、エタノール
等のアルコール類、酢酸、グルコン酸、ピルビン酸、ク
エン酸等の脂肪酸類、ノルマルパラフィン等の炭化水素
類、グリシン、グルタミン、アスパラギン等のアミノ酸
類等の一般的な炭素源より使用する微生物の資化性を考
慮して、一種または二種以上選択して使用すればよい。
窒素源としては、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、大
豆加水分解物、ミルクカゼイン、カザミノ酸、各種アミ
ノ酸、コーンスティープリカー、その他の動物、植物、
微生物の加水分解物等の有機窒素化合物、アンモニア、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム等のアンモニウム塩、硝酸ナトリウム等の硝酸塩、尿
素等の無機窒素化合物より使用微生物の資化性を考慮し
て、一種または二種以上選択して使用する。
m)属に属する微生物は、発酵学の分野で公知の情報に従
って培養することができる。使用する培地としては炭素
源、窒素源、無機物およびその他の栄養素を適量含有す
る培地ならば、合成培地または天然培地のいずれでも使
用可能であり、液体培地または固体培地を用いて培養す
ることができる。具体的には炭素源として、グルコー
ス、フラクトース、マルトース、ガラクトース、澱粉、
澱粉加水分解物、糖蜜、廃糖蜜等の糖類、麦、米などの
天然炭水化物、グリセロール、メタノール、エタノール
等のアルコール類、酢酸、グルコン酸、ピルビン酸、ク
エン酸等の脂肪酸類、ノルマルパラフィン等の炭化水素
類、グリシン、グルタミン、アスパラギン等のアミノ酸
類等の一般的な炭素源より使用する微生物の資化性を考
慮して、一種または二種以上選択して使用すればよい。
窒素源としては、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、大
豆加水分解物、ミルクカゼイン、カザミノ酸、各種アミ
ノ酸、コーンスティープリカー、その他の動物、植物、
微生物の加水分解物等の有機窒素化合物、アンモニア、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム等のアンモニウム塩、硝酸ナトリウム等の硝酸塩、尿
素等の無機窒素化合物より使用微生物の資化性を考慮し
て、一種または二種以上選択して使用する。
【００２６】また、本発明において使用されるアミノア
シラーゼを効率的に生産させるために、誘導物質とし
て、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸であるアミソフトＣＳ−１
１、ＬＳ−１１、ＧＳ−１１、ＨＳ−１１（味の素
（株））およびその類似物質を一種または二種以上選択
して使用することができる。
シラーゼを効率的に生産させるために、誘導物質とし
て、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸であるアミソフトＣＳ−１
１、ＬＳ−１１、ＧＳ−１１、ＨＳ−１１（味の素
（株））およびその類似物質を一種または二種以上選択
して使用することができる。
【００２７】さらに、無機塩として微量のマグネシウ
ム、マンガン、カルシウム、ナトリウム、カリウム、
銅、亜鉛等のリン酸塩、塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩等より
一種または二種以上を選択して使用することができる。
また、必要に応じて植物油、界面活性剤等の消泡剤を添
加してもよい。
ム、マンガン、カルシウム、ナトリウム、カリウム、
銅、亜鉛等のリン酸塩、塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩等より
一種または二種以上を選択して使用することができる。
また、必要に応じて植物油、界面活性剤等の消泡剤を添
加してもよい。
【００２８】培養は前記培地成分を含有する液体培地中
で振盪培養、通気撹拌培養、連続培養などの通常の培養
法を用いて行うことができる。
で振盪培養、通気撹拌培養、連続培養などの通常の培養
法を用いて行うことができる。
【００２９】培養条件は、培地の種類、培養法により適
宜選択すればよく、本菌株が増殖し、アミノアシラーゼ
を産生できる条件であれば特に問題はない。通常は、培
養開始時のｐＨを６ぐらいに調節し、２５〜３５℃の温
度条件下で培養することが望ましい。培養日数は５リッ
トルの三角フラスコを用いて培養を行う場合、４〜６日
が適当である。
宜選択すればよく、本菌株が増殖し、アミノアシラーゼ
を産生できる条件であれば特に問題はない。通常は、培
養開始時のｐＨを６ぐらいに調節し、２５〜３５℃の温
度条件下で培養することが望ましい。培養日数は５リッ
トルの三角フラスコを用いて培養を行う場合、４〜６日
が適当である。
【００３０】本発明において用いられるアミノアシラー
ゼは菌体内に蓄積されるので、上記培養条件下で培養終
了後、菌体そのものを酵素剤として使用しても、また菌
体より抽出後のどの段階の酵素を使用してもよい。菌体
よりアミノアシラーゼを抽出する方法としては以下の方
法が具体的に挙げられる。菌体を瀘過、遠心分離等の方
法で集め、緩衝液等で菌体を洗浄後、例えば凍結融解処
理、超音波処理、加圧処理、浸透圧差処理、磨砕処理等
の物理的手段、もしくはリゾチーム等の細胞壁溶解酵素
処理のような生化学的処理もしくは界面活性剤との接触
処理等の化学的処理を単独または組み合わせて行うこと
により菌体を破砕し、アミノアシラーゼを抽出すること
ができる。こうして得られた粗アミノアシラーゼは塩
析、有機溶媒による分別沈殿、イオン交換クロマトグラ
フィー、ゲル瀘過クロマトグラフィー、疎水クロマトグ
ラフィー、色素クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタ
イトクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラ
フィー等のクロマトグラフィーや高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）および電気泳動等の手段を単独もし
くは組み合わせて用いて精製することができる。
ゼは菌体内に蓄積されるので、上記培養条件下で培養終
了後、菌体そのものを酵素剤として使用しても、また菌
体より抽出後のどの段階の酵素を使用してもよい。菌体
よりアミノアシラーゼを抽出する方法としては以下の方
法が具体的に挙げられる。菌体を瀘過、遠心分離等の方
法で集め、緩衝液等で菌体を洗浄後、例えば凍結融解処
理、超音波処理、加圧処理、浸透圧差処理、磨砕処理等
の物理的手段、もしくはリゾチーム等の細胞壁溶解酵素
処理のような生化学的処理もしくは界面活性剤との接触
処理等の化学的処理を単独または組み合わせて行うこと
により菌体を破砕し、アミノアシラーゼを抽出すること
ができる。こうして得られた粗アミノアシラーゼは塩
析、有機溶媒による分別沈殿、イオン交換クロマトグラ
フィー、ゲル瀘過クロマトグラフィー、疎水クロマトグ
ラフィー、色素クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタ
イトクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラ
フィー等のクロマトグラフィーや高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）および電気泳動等の手段を単独もし
くは組み合わせて用いて精製することができる。
【００３１】本発明において用いられるアミノアシラー
ゼをペニシリウム・フニコロサム (penicillium funicu
losum)より得る方法の具体例を以下に示す。６０ｍｌの
培地（ペプトン ２．０％、グルコース ０．５％、硝
酸アンモニウム ０．３％、リン酸二水素カリウム
０．４％、リン酸水素二カリウム ０．１％、塩化ナト
リウム ０．１％、硫酸マグネシウム ０．０２％、ｐ
Ｈ６．０）を５００ｍｌ容量の坂口フラスコに入れ、ペ
ニシリウム・フニコロサム (penicillium funiculosum)
の一白金耳を接種し、３０℃で４８時間培養し、種培養
液を得る。上記培養組成の培地にアミソフトＧＳ−１１
（味の素（株））０．５％を加え、ｐＨを６．０に調整
した培地１リットルを５リットル容量の三角フラスコに
入れ、これに種培養液６０ｍｌを加え、３０℃で約１２
０時間培養を行う。このようにして計９リットルの本培
養を行い、培養した菌体を吸引濾過によって集めると、
約５７０ｇ（湿重量）の菌体が集められる。次に、この
菌体を０．８５％塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、菌体
の湿重量に対して５倍量の５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）に菌体を懸濁させ、４分間の磨砕処理
（ビード・ビーター(Bead-Beater) 、バイオスペック
プロダクト(BIOSPEC PRODUCTS)社製）により菌体を破砕
する。このようにして得られた処理液を遠心分離（２
０，０００×ｇ、３０分間）することにより、アミノア
シラーゼ抽出液を得る。この時のアミノアシラーゼの総
活性は２０，８１７Ｕ、比活性は１．５Ｕ／ｍｇであ
る。なお、タンパク質の定量は、色素結合法に準じて行
った。この粗アミノアシラーゼ抽出液を硫安３０％飽和
にし、セライトを用いて沈殿を除去した後、得られた上
澄み液を硫安８０％飽和にし、遠心分離（１２，０００
×ｇ、３０分間）により沈殿を回収する。次に、この沈
殿を２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解
させ、同緩衝液に対して透析した。このアミノアシラー
ゼ溶液を同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−トヨパール６
５０Ｍに通過させ、アミノアシラーゼを吸着させた後、
同緩衝液で充分洗浄することによって、非吸着物質を除
き、さらに、０〜０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液の直線
的濃度勾配溶出法により、アミノアシラーゼを溶出し
た。さらに、このアミノアシラーゼ活性画分を濃縮し、
水に対して透析し、さらに凍結乾燥する。このようにし
て得られたアミノアシラーゼ標品の総活性は１４，００
０Ｕ、比活性は７９Ｕ／ｍｇである。
ゼをペニシリウム・フニコロサム (penicillium funicu
losum)より得る方法の具体例を以下に示す。６０ｍｌの
培地（ペプトン ２．０％、グルコース ０．５％、硝
酸アンモニウム ０．３％、リン酸二水素カリウム
０．４％、リン酸水素二カリウム ０．１％、塩化ナト
リウム ０．１％、硫酸マグネシウム ０．０２％、ｐ
Ｈ６．０）を５００ｍｌ容量の坂口フラスコに入れ、ペ
ニシリウム・フニコロサム (penicillium funiculosum)
の一白金耳を接種し、３０℃で４８時間培養し、種培養
液を得る。上記培養組成の培地にアミソフトＧＳ−１１
（味の素（株））０．５％を加え、ｐＨを６．０に調整
した培地１リットルを５リットル容量の三角フラスコに
入れ、これに種培養液６０ｍｌを加え、３０℃で約１２
０時間培養を行う。このようにして計９リットルの本培
養を行い、培養した菌体を吸引濾過によって集めると、
約５７０ｇ（湿重量）の菌体が集められる。次に、この
菌体を０．８５％塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、菌体
の湿重量に対して５倍量の５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）に菌体を懸濁させ、４分間の磨砕処理
（ビード・ビーター(Bead-Beater) 、バイオスペック
プロダクト(BIOSPEC PRODUCTS)社製）により菌体を破砕
する。このようにして得られた処理液を遠心分離（２
０，０００×ｇ、３０分間）することにより、アミノア
シラーゼ抽出液を得る。この時のアミノアシラーゼの総
活性は２０，８１７Ｕ、比活性は１．５Ｕ／ｍｇであ
る。なお、タンパク質の定量は、色素結合法に準じて行
った。この粗アミノアシラーゼ抽出液を硫安３０％飽和
にし、セライトを用いて沈殿を除去した後、得られた上
澄み液を硫安８０％飽和にし、遠心分離（１２，０００
×ｇ、３０分間）により沈殿を回収する。次に、この沈
殿を２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解
させ、同緩衝液に対して透析した。このアミノアシラー
ゼ溶液を同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−トヨパール６
５０Ｍに通過させ、アミノアシラーゼを吸着させた後、
同緩衝液で充分洗浄することによって、非吸着物質を除
き、さらに、０〜０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液の直線
的濃度勾配溶出法により、アミノアシラーゼを溶出し
た。さらに、このアミノアシラーゼ活性画分を濃縮し、
水に対して透析し、さらに凍結乾燥する。このようにし
て得られたアミノアシラーゼ標品の総活性は１４，００
０Ｕ、比活性は７９Ｕ／ｍｇである。
【００３２】なお、本アミノアシラーゼの活性測定法
は、１０ｍＭ Ｎ−オレオイル−Ｌ−グルタミン酸を含
んだ１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）２５０μｌに蒸
留水２００μｌを加え、３０℃において５分間インキュ
ベートした後、酵素液５０μｌを加え、１５分間反応さ
せ、生成したＬ−グルタミン酸をニンヒドリン−ヒドリ
ンダンチン法（ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー (Journal ofBiological Chemistry)、第２
１１巻、９０７頁（１９５７））に従って測定した。な
お、１Ｕは、１分間に１μｍｏｌのＬ−グルタミン酸の
生成を触媒する酵素量とした。
は、１０ｍＭ Ｎ−オレオイル−Ｌ−グルタミン酸を含
んだ１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）２５０μｌに蒸
留水２００μｌを加え、３０℃において５分間インキュ
ベートした後、酵素液５０μｌを加え、１５分間反応さ
せ、生成したＬ−グルタミン酸をニンヒドリン−ヒドリ
ンダンチン法（ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー (Journal ofBiological Chemistry)、第２
１１巻、９０７頁（１９５７））に従って測定した。な
お、１Ｕは、１分間に１μｍｏｌのＬ−グルタミン酸の
生成を触媒する酵素量とした。
【００３３】本発明において使用することができるアミ
ノ酸としては、Ｌ−体、Ｄ−体、ＤＬ−体のアミノ酸お
よびそれらの塩またはエステルである。具体的には、ア
ラニン、β−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシ
ン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、
グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシ
ン、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒスチジン、
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキ
シリシン、ドーパー、オルニチンおよびそれらの塩、エ
ステルが挙げられる。
ノ酸としては、Ｌ−体、Ｄ−体、ＤＬ−体のアミノ酸お
よびそれらの塩またはエステルである。具体的には、ア
ラニン、β−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシ
ン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、
グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシ
ン、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒスチジン、
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキ
シリシン、ドーパー、オルニチンおよびそれらの塩、エ
ステルが挙げられる。
【００３４】脂肪酸としては、炭素数６から２４、好ま
しくは６から２０の飽和または不飽和脂肪酸およびその
塩であり、例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン
酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステア
リン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキ
ジン酸およびそれらの塩が挙げられる。
しくは６から２０の飽和または不飽和脂肪酸およびその
塩であり、例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン
酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステア
リン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキ
ジン酸およびそれらの塩が挙げられる。
【００３５】本発明においてＮ−長鎖アシルアミノ酸を
アミノ酸と脂肪酸より合成する方法は、アミノ酸水溶液
に脂肪酸を加え、それにアミノアシラーゼまたはアミノ
アシラーゼを生産しうる微生物を添加し、所定温度で振
盪または攪拌することにより達せられる。このときのア
ミノ酸水溶液のｐＨは、６〜９、好ましくは７〜８．５
である。アミノ酸の濃度は、用いるアミノ酸の飽和濃度
に近いことが好ましい。また、脂肪酸の量は、アミノ酸
水溶液１ｍｌに対して、５０〜２００ｍｇが好ましい。
さらに、添加するアミノアシラーゼの酵素量は、アミノ
酸水溶液１ｍｌに対して５０Ｕ以上が好ましい。反応温
度は、２０〜５０℃、好ましくは３０〜４０℃である。
また、反応中は脂肪酸を分散させることが好ましく、そ
の方法は、振盪法、攪拌法が具体的に挙げられる。反応
時間は、上記の方法を満たしていれば３０時間以上でほ
ぼその反応の平衡時間に達する。ラウリン酸、ミリスチ
ン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸など
の融点の高い脂肪酸を用いるときは、用いた脂肪酸を均
一に分散する程度のヘキサン等の不活性有機溶媒を反応
液に添加してもよい。
アミノ酸と脂肪酸より合成する方法は、アミノ酸水溶液
に脂肪酸を加え、それにアミノアシラーゼまたはアミノ
アシラーゼを生産しうる微生物を添加し、所定温度で振
盪または攪拌することにより達せられる。このときのア
ミノ酸水溶液のｐＨは、６〜９、好ましくは７〜８．５
である。アミノ酸の濃度は、用いるアミノ酸の飽和濃度
に近いことが好ましい。また、脂肪酸の量は、アミノ酸
水溶液１ｍｌに対して、５０〜２００ｍｇが好ましい。
さらに、添加するアミノアシラーゼの酵素量は、アミノ
酸水溶液１ｍｌに対して５０Ｕ以上が好ましい。反応温
度は、２０〜５０℃、好ましくは３０〜４０℃である。
また、反応中は脂肪酸を分散させることが好ましく、そ
の方法は、振盪法、攪拌法が具体的に挙げられる。反応
時間は、上記の方法を満たしていれば３０時間以上でほ
ぼその反応の平衡時間に達する。ラウリン酸、ミリスチ
ン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸など
の融点の高い脂肪酸を用いるときは、用いた脂肪酸を均
一に分散する程度のヘキサン等の不活性有機溶媒を反応
液に添加してもよい。
【００３６】反応液中に生成したＮ−長鎖アシルアミノ
酸は、各種抽出法および結晶化法を用いることにより、
容易に精製することができる。
酸は、各種抽出法および結晶化法を用いることにより、
容易に精製することができる。
【００３７】
【実施例】つぎに、実施例により本発明を説明するが、
これらにより本発明の範囲がなんら制限されるものでな
いことはいうまでもない。
これらにより本発明の範囲がなんら制限されるものでな
いことはいうまでもない。
【００３８】実施例１ ６０ｍｌの培地（ペプトン ２．０％、グルコース
０．５％、硝酸アンモニウム ０．３％、リン酸二水素
カリウム ０．４％、リン酸水素二カリウム ０．１
％、塩化ナトリウム ０．１％、硫酸マグネシウム
０．０２％、ｐＨ６．０）を５００ｍｌ容量の坂口フラ
スコに入れ、ペニシリウム・フニコロサム (penicilliu
m funiculosum)の一白金耳を接種し、３０℃で４８時間
培養し、種培養液を得た。上記培養組成の培地にアミソ
フトＧＳ−１１（味の素（株））０．５％を加え、ｐＨ
を６．０に調整した培地１リットルを５リットル容量の
三角フラスコに入れ、これに種培養液６０ｍｌを加え、
３０℃で約１２０時間培養した。
０．５％、硝酸アンモニウム ０．３％、リン酸二水素
カリウム ０．４％、リン酸水素二カリウム ０．１
％、塩化ナトリウム ０．１％、硫酸マグネシウム
０．０２％、ｐＨ６．０）を５００ｍｌ容量の坂口フラ
スコに入れ、ペニシリウム・フニコロサム (penicilliu
m funiculosum)の一白金耳を接種し、３０℃で４８時間
培養し、種培養液を得た。上記培養組成の培地にアミソ
フトＧＳ−１１（味の素（株））０．５％を加え、ｐＨ
を６．０に調整した培地１リットルを５リットル容量の
三角フラスコに入れ、これに種培養液６０ｍｌを加え、
３０℃で約１２０時間培養した。
【００３９】このようにして計９リットルの本培養を行
い、培養した菌体を吸引濾過によって集めると、約５７
０ｇ（湿重量）の菌体が集められた。
い、培養した菌体を吸引濾過によって集めると、約５７
０ｇ（湿重量）の菌体が集められた。
【００４０】次に、このようにして集められた菌体５７
０ｇ（湿重量）を０．８５％塩化ナトリウム水溶液で洗
浄し、菌体の湿重量に対して５倍量の５０ｍＭトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に菌体を懸濁させ、４分間の
磨砕処理（ビード・ビーター(Bead-Beater) 、バイオス
ペック プロダクト(BIOSPEC PRODUCTS)社製）により菌
体を破砕した。このようにして得られた処理液を遠心分
離（２０，０００×ｇ、３０分間）することにより、ア
ミノアシラーゼ抽出液を得た。この時のアミノアシラー
ゼの総活性は２０，８１７Ｕ、比活性は１．５Ｕ／ｍｇ
であった。なお、タンパク質の定量は、色素結合法に準
じて行った。
０ｇ（湿重量）を０．８５％塩化ナトリウム水溶液で洗
浄し、菌体の湿重量に対して５倍量の５０ｍＭトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に菌体を懸濁させ、４分間の
磨砕処理（ビード・ビーター(Bead-Beater) 、バイオス
ペック プロダクト(BIOSPEC PRODUCTS)社製）により菌
体を破砕した。このようにして得られた処理液を遠心分
離（２０，０００×ｇ、３０分間）することにより、ア
ミノアシラーゼ抽出液を得た。この時のアミノアシラー
ゼの総活性は２０，８１７Ｕ、比活性は１．５Ｕ／ｍｇ
であった。なお、タンパク質の定量は、色素結合法に準
じて行った。
【００４１】この粗アミノアシラーゼ抽出液を硫安３０
％飽和にし、セライトを用いて沈殿を除去した後、得ら
れた上澄み液を硫安８０％飽和にし、遠心分離（１２，
０００×ｇ、３０分間）により沈殿を回収した。次に、
この沈殿を２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）
に溶解させ、同緩衝液に対して透析した。このアミノア
シラーゼ溶液を同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−トヨパ
ール６５０Ｍに通過させ、アミノアシラーゼを吸着させ
た後、同緩衝液で充分洗浄することによって、非吸着物
質を除き、さらに、０〜０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液
の直線的濃度勾配溶出法により、アミノアシラーゼを溶
出した。さらに、このアミノアシラーゼ活性画分を濃縮
し、水に対して透析し、さらに凍結乾燥した。このよう
にして、総活性が１４，０００Ｕ、比活性が７９Ｕ／ｍ
ｇであるアミノアシラーゼの酵素標品を得た。
％飽和にし、セライトを用いて沈殿を除去した後、得ら
れた上澄み液を硫安８０％飽和にし、遠心分離（１２，
０００×ｇ、３０分間）により沈殿を回収した。次に、
この沈殿を２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）
に溶解させ、同緩衝液に対して透析した。このアミノア
シラーゼ溶液を同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−トヨパ
ール６５０Ｍに通過させ、アミノアシラーゼを吸着させ
た後、同緩衝液で充分洗浄することによって、非吸着物
質を除き、さらに、０〜０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液
の直線的濃度勾配溶出法により、アミノアシラーゼを溶
出した。さらに、このアミノアシラーゼ活性画分を濃縮
し、水に対して透析し、さらに凍結乾燥した。このよう
にして、総活性が１４，０００Ｕ、比活性が７９Ｕ／ｍ
ｇであるアミノアシラーゼの酵素標品を得た。
【００４２】実施例２〜５ 表１に示されるアミノ酸溶液１ｍｌおよび脂肪酸として
オレイン酸１００ｍｇにそれぞれ実施例１で得られたア
ミノアシラーゼ８０Ｕを加えた。この混合溶液を、４０
℃においてマグネチックスターラーを用いて、７５０ｒ
ｐｍで攪拌した。
オレイン酸１００ｍｇにそれぞれ実施例１で得られたア
ミノアシラーゼ８０Ｕを加えた。この混合溶液を、４０
℃においてマグネチックスターラーを用いて、７５０ｒ
ｐｍで攪拌した。
【００４３】２０時間攪拌後、残存する脂肪酸をｎ−ヘ
キサン：イソプロパノール（３：２（ｖ／ｖ））の混合
溶液で完全に抽出し、水酸化ナトリウムを用いた滴定法
によって、脂肪酸の減少量を調べた。結果を表１に示
す。
キサン：イソプロパノール（３：２（ｖ／ｖ））の混合
溶液で完全に抽出し、水酸化ナトリウムを用いた滴定法
によって、脂肪酸の減少量を調べた。結果を表１に示
す。
【００４４】なお、表１に示されるアミノ酸溶液のｐＨ
は、ｐＨ８．５の場合、１００ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．５）、ｐＨ７．０の場合、１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）を用い、アミノ酸を溶解後、４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を用いてそれぞれの所定のｐＨ
に調整した。
は、ｐＨ８．５の場合、１００ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．５）、ｐＨ７．０の場合、１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）を用い、アミノ酸を溶解後、４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を用いてそれぞれの所定のｐＨ
に調整した。
【００４５】
【表１】
【００４６】実施例６〜７ 表１に示されるアミノ酸溶液１ｍｌおよび脂肪酸として
オレイン酸１００ｍｇのかわりに、表２に示されるアミ
ノ酸溶液１ｍｌおよび脂肪酸としてカプリン酸１００ｍ
ｇを用いる以外は、実施例２〜５と同様にして実験を行
った。
オレイン酸１００ｍｇのかわりに、表２に示されるアミ
ノ酸溶液１ｍｌおよび脂肪酸としてカプリン酸１００ｍ
ｇを用いる以外は、実施例２〜５と同様にして実験を行
った。
【００４７】結果を表２に示す。
【００４８】実施例８〜９ 表１に示されるアミノ酸溶液１ｍｌおよび脂肪酸として
オレイン酸１００ｍｇのかわりに、表２に示されるアミ
ノ酸溶液１ｍｌおよび脂肪酸としてミリスチン酸１００
ｍｇを用いた以外は、実施例２〜５と同様にして実験を
行った。
オレイン酸１００ｍｇのかわりに、表２に示されるアミ
ノ酸溶液１ｍｌおよび脂肪酸としてミリスチン酸１００
ｍｇを用いた以外は、実施例２〜５と同様にして実験を
行った。
【００４９】結果を表２に示す。
【００５０】
【表２】
【００５１】実施例１０ １００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）を用いて
調整した３Ｍグリシン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、オレイン酸５００ｍｇおよび実施例１で得られ
たアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃において、
マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反応液
を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終了
後、ヘキサン抽出により残存するオレイン酸を除去し、
塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−オレオイルグリシンを酢
酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、１７０
ｍｇのＮ−オレオイルグリシンを得た。
調整した３Ｍグリシン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、オレイン酸５００ｍｇおよび実施例１で得られ
たアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃において、
マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反応液
を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終了
後、ヘキサン抽出により残存するオレイン酸を除去し、
塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−オレオイルグリシンを酢
酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、１７０
ｍｇのＮ−オレオイルグリシンを得た。
【００５２】実施例１１ １００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）を用いて
調整した３Ｍグリシン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、カプリン酸５００ｍｇおよび実施例１で得られ
たアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃において、
マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反応液
を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終了
後、ヘキサン抽出により残存するカプリン酸を除去し、
塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−カプリノイルグリシンを
酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、１２
３．５ｍｇのＮ−カプリノイルグリシンを得た。
調整した３Ｍグリシン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、カプリン酸５００ｍｇおよび実施例１で得られ
たアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃において、
マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反応液
を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終了
後、ヘキサン抽出により残存するカプリン酸を除去し、
塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−カプリノイルグリシンを
酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、１２
３．５ｍｇのＮ−カプリノイルグリシンを得た。
【００５３】実施例１２ １００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）を用いて
調整した２．９Ｍセリン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、オレイン酸５００ｍｇおよび実施例１で得られ
たアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃において、
マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反応液
を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終了
後、ヘキサン抽出により残存するオレイン酸を除去し、
塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−オレオイルセリンを酢酸
エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、１９６ｍ
ｇのＮ−オレオイルセリンを得た。
調整した２．９Ｍセリン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、オレイン酸５００ｍｇおよび実施例１で得られ
たアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃において、
マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反応液
を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終了
後、ヘキサン抽出により残存するオレイン酸を除去し、
塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−オレオイルセリンを酢酸
エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、１９６ｍ
ｇのＮ−オレオイルセリンを得た。
【００５４】実施例１３ １００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）を用いて
調整した２．９Ｍセリン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、カプリン酸５００ｍｇおよび実施例１で得られ
たアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃において、
マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反応液
を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終了
後、ヘキサン抽出により残存するカプリン酸を除去し、
塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−カプリノイルセリンを酢
酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、２４
０．５ｍｇのＮ−カプリノイルセリンを得た。
調整した２．９Ｍセリン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、カプリン酸５００ｍｇおよび実施例１で得られ
たアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃において、
マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反応液
を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終了
後、ヘキサン抽出により残存するカプリン酸を除去し、
塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−カプリノイルセリンを酢
酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、２４
０．５ｍｇのＮ−カプリノイルセリンを得た。
【００５５】実施例１４ １００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）を用いて
調整した３Ｍグリシン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、ミリスチン酸５００ｍｇおよび実施例１で得ら
れたアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃におい
て、マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反
応液を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終
了後、ヘキサン抽出により残存するミリスチン酸を除去
し、塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−ミリストイルグリシ
ンを酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、
１４３．７ｍｇのＮ−ミリストイルグリシンを得た。
調整した３Ｍグリシン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、ミリスチン酸５００ｍｇおよび実施例１で得ら
れたアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃におい
て、マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反
応液を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終
了後、ヘキサン抽出により残存するミリスチン酸を除去
し、塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−ミリストイルグリシ
ンを酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、
１４３．７ｍｇのＮ−ミリストイルグリシンを得た。
【００５６】実施例１５ １００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）を用いて
調整した２．９Ｍセリン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、ミリスチン酸５００ｍｇおよび実施例１で得ら
れたアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃におい
て、マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反
応液を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終
了後、ヘキサン抽出により残存するミリスチン酸を除去
し、塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−ミリストイルセリン
を酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、１
６５．８ｍｇのＮ−ミリストイルセリンを得た。
調整した２．９Ｍセリン溶液５ｍｌ（最終のｐＨは４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨ８．５に調整し
た）に、ミリスチン酸５００ｍｇおよび実施例１で得ら
れたアミノアシラーゼ４００Ｕを加え、４０℃におい
て、マグネチックスターラーを用いて７５０ｒｐｍで反
応液を攪拌させながら、６０時間反応を行った。反応終
了後、ヘキサン抽出により残存するミリスチン酸を除去
し、塩酸で反応液を酸性にし、Ｎ−ミリストイルセリン
を酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル中で結晶化させ、１
６５．８ｍｇのＮ−ミリストイルセリンを得た。
【００５７】
【発明の効果】以上述べたように、本発明は、ペニシリ
ウム・フニコロサム (penicillium funiculosum)の生産
するアミノアシラーゼを用いることによって、Ｎ−長鎖
アシルアミノ酸、特に、Ｎ−長鎖アシルグリシン、Ｎ−
長鎖アシルセリン等を簡単にかつ高収量で合成すること
が可能になった。さらに、本発明は、Ｎ−長鎖アシルア
ミノ酸をより安価に提供することを可能とするものであ
る。これらのことにより、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸の用
途開発はより活発になっていくことが期待できる。
ウム・フニコロサム (penicillium funiculosum)の生産
するアミノアシラーゼを用いることによって、Ｎ−長鎖
アシルアミノ酸、特に、Ｎ−長鎖アシルグリシン、Ｎ−
長鎖アシルセリン等を簡単にかつ高収量で合成すること
が可能になった。さらに、本発明は、Ｎ−長鎖アシルア
ミノ酸をより安価に提供することを可能とするものであ
る。これらのことにより、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸の用
途開発はより活発になっていくことが期待できる。
Claims (3)
- 【請求項１】 アミノ酸および長鎖脂肪酸の混合物にペ
ニシリウム (Penicillium)属に属する微生物が生産する
アミノアシラーゼまたはアミノアシラーゼを生産しうる
ペニシリウム (Penicillium)属に属する微生物を作用さ
せることによるＮ−長鎖アシルアミノ酸の製造方法。 - 【請求項２】 該アミノアシラーゼが以下の理化学的性
質を有するアミノアシラーゼである請求項１記載のＮ−
長鎖アシルアミノ酸の製造方法。 １）作用 Ｎ−長鎖アシルアミノ酸に作用し、Ｌ−アミノ酸を遊離
させる。 ２）基質特異性 炭素数４以上のアシル基を有するＮ−アシルアミノ酸の
Ｌ体に作用し、Ｄ体には作用しない。アシル基に対する
特異性は広く、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、芳香族カル
ボン酸からなるＮ−アシル化合物に作用する。 ３）至適ｐＨおよびｐＨ安定性 Ｎ−オレオイル−Ｌ−グルタミン酸を基質としたときの
至適ｐＨは、３０℃、各種緩衝液（ｐＨ５．５〜６．
０：酢酸緩衝液、ｐＨ６．０〜８．０：リン酸緩衝液，
ｐＨ８．０〜９．５：ホウ酸−塩酸緩衝液、ｐＨ９．５
〜１１．０：炭酸緩衝液）中で約８．５である。同緩衝
液中、３０℃、５時間処理においてｐＨ６〜９まで安定
である。 ４）至適温度および熱安定性 Ｎ−オレオイル−Ｌ−グルタミン酸を基質としたときの
至適温度は、リン酸緩衝液（ｐＨ７）を用いて測定した
ところ、２５〜３５℃である。２０ｍＭトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８）中、４０℃、１５分処理において全く失
活せず、４５℃、１５分処理後の残存活性は約８０％で
ある。 ５）阻害剤の影響 パラクロロマーキュリーベンゾエートまたはジチオスレ
イトールにより阻害を受ける。 ６）金属イオンの影響 Ｎｉ2+、Ｃｕ2+、Ｍｇ2+などによって活性化され、Ｈｇ
2+により阻害を受ける。 ７）サブユニットの分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動では分子量約４
８，０００。 ８）分子量 ゲル瀘過法では約１９２，０００。 - 【請求項３】 該ペニシリウム (Penicillium)属に属す
る微生物がペニシリウム・フニコロサム (penicillium
funiculosum)である請求項１記載のＮ−長鎖アシルアミ
ノ酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4182553A JPH0622776A (ja) | 1992-07-09 | 1992-07-09 | 酵素法によるｎ−長鎖アシルアミノ酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4182553A JPH0622776A (ja) | 1992-07-09 | 1992-07-09 | 酵素法によるｎ−長鎖アシルアミノ酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0622776A true JPH0622776A (ja) | 1994-02-01 |
Family
ID=16120292
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4182553A Pending JPH0622776A (ja) | 1992-07-09 | 1992-07-09 | 酵素法によるｎ−長鎖アシルアミノ酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0622776A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6514742B1 (en) | 1998-07-29 | 2003-02-04 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | D-aminoacylases, method for producing the same, and method for producing D-amino acids using the same |
| JP2018085969A (ja) * | 2016-11-29 | 2018-06-07 | 公立大学法人 富山県立大学 | Ｎα−アシル−Ｌ−アミノ酸の製造方法 |
| WO2021070942A1 (ja) * | 2019-10-10 | 2021-04-15 | 味の素株式会社 | Ｎ－アシル化活性を有する改変酵素 |
-
1992
- 1992-07-09 JP JP4182553A patent/JPH0622776A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6514742B1 (en) | 1998-07-29 | 2003-02-04 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | D-aminoacylases, method for producing the same, and method for producing D-amino acids using the same |
| US6905861B2 (en) | 1998-07-29 | 2005-06-14 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | D-aminoacylases, method for producing the same, and method for producing D-amino acids using the same |
| JP2018085969A (ja) * | 2016-11-29 | 2018-06-07 | 公立大学法人 富山県立大学 | Ｎα−アシル−Ｌ−アミノ酸の製造方法 |
| WO2021070942A1 (ja) * | 2019-10-10 | 2021-04-15 | 味の素株式会社 | Ｎ－アシル化活性を有する改変酵素 |
| JPWO2021070942A1 (ja) * | 2019-10-10 | 2021-04-15 | ||
| CN114761554A (zh) * | 2019-10-10 | 2022-07-15 | 味之素株式会社 | 具有n-酰化活性的修饰酶 |
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