JPH0597703A - 改変型組織プラスミノーゲン活性化因子含有組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 改変型組織プラスミノーゲン活性化因子，メ
グルミンまたはその塩及びアルブミンまたはショ糖を含
有することを特徴とする改変型組織プラスミノーゲン活
性化因子含有組成物。 【効果】 改変型組織プラスミノーゲン活性化因子の溶
解性及び安定性が増し，臨床上使用しうるこれらの製剤
として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は，改変型組織プラスミノ
ーゲン活性化因子（改変型ｔ−ＰＡと略称する）を含有
する組成物に関する。更に詳しくは，改変型ｔ−ＰＡに
メグルミンもしくはその塩及びアルブミンまたはショ糖
を添加してなることを特徴とする溶解性及び安定性の高
められた組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】組織プラスミノーゲン活性化因子（以
下，ｔ−ＰＡと略称する）は，フィブリン親和性を有
し，フィブリンと結合したプラスミノーゲンを活性化し
極めて効率的に血栓を溶解するので，ストレプトキナー
ゼやウロキナーゼに代わる，出血傾向などの副作用の少
ない血栓溶解剤として注目されている。更に近年はこの
ｔ−ＰＡの構造を遺伝子工学的手法を用いて改変した改
変型ｔ−ＰＡの研究も盛んに行なわれており，ｔ−ＰＡ
に比べ in vivo における血中半減期が延長されること
により生物学的活性の高められた，優れた改変型分子が
見出されている。改変型ｔ−ＰＡは水に対して難溶な糖
タンパク質であり，水に溶解して投与する注射剤等とし
ての製剤化を極めて困難なものにしている。また，糖タ
ンパク質は一般に熱に不安定であり，改変型ｔ−ＰＡも
また例外ではない。このような物質を医薬品として開発
するためには安定化の技術が不可欠である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は，溶解
性及び安定性の低い糖タンパク質である改変型ｔ−ＰＡ
組成物を医薬品として使用し得る濃度の溶液とし，かつ
これらの物質の安定化された医薬品製剤を提供すること
にある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは，改変型ｔ
−ＰＡについて，これらの物質を安定に保つ中性ｐＨの
領域で溶解性を高め，かつ安定な製剤の検討を行った。
その結果，メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）または
その塩とアルブミンまたはショ糖を改変型ｔ−ＰＡに添
加して製剤化することにより，この改変型ｔ−ＰＡの溶
解性及び安定性を顕著に高めることに成功し，本発明を
完成させるに至った。すなわち，本発明は改変型ｔ−Ｐ
Ａ，メグルミンもしくはその塩，，並びにアルブミンま
たはショ糖を含有することを特徴とする改変型ｔ−ＰＡ
含有組成物を発明の構成とする。

【０００５】以下に，本発明の組成物につき詳述する。
本発明において改変型ｔ−ＰＡは，ヒト由来のｔ−ＰＡ
を改良しあるいはそのｔ−ＰＡの有する生物学的活性な
どを高めたものであって，本発明の組成物とすることに
より安定化ないし可溶化効果を達成できるものであれば
いずれの改変型ｔ−ＰＡであってもよい。このような改
変型ｔ−ＰＡとしては，本出願人の出願に係わる特願昭
６３−２７２０２０号，特願平１−３１９４３８号など
に示された改変型ｔ−ＰＡなどが挙げられるが，これら
に限定されるものではない。

【０００６】すなわち，本発明の改変型ｔ−ＰＡには， ｔ−ＰＡのＦ領域及びＧ領域が欠落し，１８３位の G
ly ，１８６位の Serがそれぞれ Ser 及び Thr に置換
された変異ｔ−ＰＡ， ｔ−ＰＡのＦ領域及びＧ領域が欠落し１１９位の Ser
が Metに置換された変異ｔ−ＰＡ， ｔ−ＰＡのＦ領域，Ｇ領域及びＫ２領域が欠落し，１
１９位の Ser が Metに置換された変異ｔ−ＰＡや， ｔ−ＰＡの８４位の Cys が Ser に置換された変異ｔ
−ＰＡ なども包含される。特に，本発明の組成物には前記本出
願人の出願に係る改変型ｔ−ＰＡ等が有利に適用でき
る。

【０００７】本発明において使用されるメグルミンの塩
としては，塩酸，臭化水素酸，リン酸，硫酸，硝酸など
の鉱酸，ギ酸，酢酸，プロピオン酸，シュウ酸，マロン
酸，コハク酸，フマール酸，マレイン酸，乳酸，リンゴ
酸，クエン酸，酒石酸，炭酸，ピクリン酸，メタンスル
ホン酸，エタンスルホン酸，グルタミン酸，アスパラギ
ン酸などの有機酸との塩酸やアンモニウム塩が挙げられ
る。なお，本発明の組成物には，メグルミンをそのまま
配合して，上記酸を更に配合してもよい。また，本発明
で用いられるアルブミンは種々のものが使用可能である
が，本組成物を人の医薬として使用することを考慮に入
れると，ヒト血清アルブミンが特に好適である。

【０００８】本発明における組成物は，通常滅菌下改変
型ｔ−ＰＡと，メグルミンまたはその塩とアルブミンま
たはショ糖を配合して調製され，改変型ｔ−ＰＡの液剤
あるいはこれを更に凍結乾燥などの手段で乾燥して用時
溶解型の製剤とする。ここに，改変型ｔ−ＰＡの濃度は
少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ以上であり，一方メグル
ミンまたはその塩の濃度は０．０１〜０．５Ｍ，好まし
くは０．０５〜０．２Ｍである。また，アルブミンの濃
度は０．１〜５％，特に０．１〜２％が，ショ糖の濃度
は１〜４０％特に３〜１０％が好適である。

【０００９】必要により添加される添加剤としては，ト
リス塩酸緩衝液，リン酸，炭酸，ホウ酸，クエン酸，バ
ルビツール酸やアミノ酸などの緩衝液としうる緩衝化
剤，塩化ナトリウム，塩化カリウム，リン酸一水素ナト
リウム，リン酸二水素ナトリウムなどの無機塩類の電解
質などで構成される等張化剤，ポリオキシエチレンソル
ビタンモノステアレートやポリオキシエチレンソルビタ
ンモノパルミテートなどのポリオキシエチレンソルビタ
ン脂肪酸エステル，ソルビタンモノステアレート，ソル
ビタンセスキオレートなどのソルビタン脂肪酸エステ
ル，ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油，ポリオキシエチ
レンポリオキシプロピレン縮合物などの界面活性化剤，
セルロース，メチルセルロース，エチルセルロース，ヒ
ドロキシメチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロー
ス，ヒドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシメチル
エチルセルロースなどの賦形剤などが挙げられる。

【００１０】

【発明の効果】改変型ｔ−ＰＡ，メグルミン及びアルブ
ミンもしくはショ糖の含有組成物は，中性ｐＨ領域にお
いて改変型ｔ−ＰＡの優れた溶解性及び高い安定性を備
えており，改変型ｔ−ＰＡの臨床上使用しうる製剤の提
供を可能するものとして有用である。本発明組成物によ
る改変型ｔ−ＰＡの溶解性の向上は，以下の試験法によ
って確認されたものである。

【００１１】実験例 １ 改変型ｔ−ＰＡについて，次の組成の溶液を調製し，こ
れを濾過して濾液中のタンパク質濃度を求めた。 １） ０．１Ｍメグルミン（ｐＨ７．２） メグルミンを０．１Ｍの濃度となるように水に溶かし
た。ｐＨは塩酸で７．２とした。 ２） ０．２Ｍメグルミン（ｐＨ７．２） メグルミンを０．２Ｍの濃度となるように水に溶かし
た。ｐＨは塩酸で７．２とした。

【００１２】また，改変型ｔ−ＰＡは，国際公開８９／
０３８７４号に記載の改良型ＴＰＡ［ＶＩ］を精製した
ものを用いた。以後，改変型ｔ−ＰＡをＴＰＡとする。
実験の結果，ＴＰＡはメグルミンを用いない場合には
０．２ｍｇ／ｍｌ程度しか溶解しないが，ＴＰＡについ
てはこれらの溶液中での溶解性はせれぞれ１．３１ｍｇ
／ｍｌおよび３．６４ｍｇ／ｍｌであった。この結果よ
り，メグルミン及びその塩がＴＰＡの溶解度を高める効
果を有することは明らかである。なお，実験方法中，中
和を塩酸でなくリン酸あるいはクエン酸で処理すること
もできる。

【００１３】実験例 ２ 後記実施例１及び実施例２の凍結乾燥品について種々の
温度条件に放置し，安定性を調べた。

【００１４】 表１ ＴＰＡ製剤の安定性 １．ＴＰＡ メグルミン／ヒト血清アルブミン含有製剤（実施例１） 放置条件 外観 溶状 力価残存率（％） Initial 白色 無色透明の液 − ２５℃，１Ｍ 白色 無色透明の液 ９８ ４０℃，１Ｍ 白色 無色透明の液 ９７ ２Ｍ 白色 無色透明の液 １０３ ５０℃，１Ｍ 白色 無色透明の液 ９５ ２Ｍ 白色 無色透明の液 ９７

【００１５】 ２．ＴＰＡ メグルミン／ショ糖含有製剤（実施例２） 放置条件 外観 溶状 力価残存率（％） Initial 白色 無色透明の液 − ２５℃，１Ｍ 白色 無色透明の液 ９９ ４０℃，１Ｍ 白色 無色透明の液 １００ ２Ｍ 白色 無色透明の液 １０１

【００１６】なお，表中Initialは初期条件，Ｍは月を
示す。実施例２に示されるように，メグルミンにより可
溶化されたＴＰＡにヒト血清アルブミンまたはショ糖を
添加し凍結乾燥することにより安定性の高い製剤を作製
することが可能となった。

【００１７】

【実施例】次に，本発明の実施例を挙げて本発明を具体
的に説明する。 実施例 １ ＴＰＡ ０．５ｍｇ／ｍｌ リン酸１ナトリウム／２ナトリウム ０．０２５Ｍ メグルミン ０．０５Ｍ ヒト血清アルブミン １％ ツィーン８０ ０．０１％ ４ｍｌ／Ｖｉａｌ

【００１８】ＴＰＡを０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む，
０．０５Ｍメグルミン，ヒト血清アルブミン及び０．０
１％ツィーン８０含有０．０２５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７．２）を調製し，その液をガラス製バイアルに４ｍｌ
ずつ分注した後，共和真空技術社製の凍結乾燥機を用い
て用時溶解型の凍結乾燥品を製造した。得られた凍結乾
燥品を注射用水で再溶解したところ，透明な液となっ
た。また，クロットリシス法による力価試験の結果，主
剤の力価は保たれていた。

【００１９】実施例 ２ ＴＰＡ ０．５ｍｇ／ｍｌ クエン酸ナトリウム ０．０１７Ｍ メグルミン ０．０５Ｍ ショ糖 ５％ ツィーン８０ ０．０１％ ４ｍｌ／Ｖｉａｌ

【００２０】ＴＰＡを０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で含む，
０．０１７Ｍクエン酸，０．０５Ｍメグルミン，５％シ
ョ糖及び０．０１％ツィーン８０含有水溶液（ｐＨ７．
２）を精製し，実施例１と同様に処理した。クロットリ
シス法による力価試験の結果，主剤の力価は保たれてい
た。なお，ツイーン８０は花王アトラス（株）製，ポリ
オキシエチレン高級脂肪酸エステルの商品名である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 47/26 Ｈ 7329−4Ｃ 47/42 Ｈ 7329−4Ｃ (72)発明者 中村 勝利 静岡県焼津市三ケ名368−２ 山之内製薬 株式会社するが寮

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 改変型組織プラスミノーゲン活性化因
   子，メグルミンもしくはその塩，ならびにアルブミンま
   たはショ糖を含有することを特徴とする改変型組織プラ
   スミノーゲン活性化因子含有組成物