JPH05503073A

JPH05503073A - ウイルス性疾患の治療に有用な６―アミノ―１，２―ベンゾピロン

Info

Publication number: JPH05503073A
Application number: JP2514064A
Authority: JP
Inventors: クン，アーネスト; オーリーリアン，ロール
Original assignee: オクタマー，インコーポレイテッド
Priority date: 1989-09-26
Filing date: 1990-09-25
Publication date: 1993-05-27
Also published as: EP0494231A1; WO1991004663A1; EP0494231A4; IL95813A0; AU6518890A; IL95813A; US5583155A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本出願は、「抗ウィルス薬としてのアミノ−１，２−ベンゾピロンおよびその取り扱い方法」および「ウィルス性疾患の治療に有用な６−アミノ−１，２−ベンゾピラン」という題名の米国特許出願に対応する応用に関する。

本発明は、米国国防総省のＡｉｒ　Ｆｏｒｃｅ　０ｆｆｉｃｅ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｇｒａｎｔｓ　ＡＦＯ３Ｆ−８６−００６４およびＡＦＯ３Ｒ−８９−０２３１によって援助された研究の一環としてなされた。米国政府は本発明にある種の権利を有し得る。

え肚立！見及艶旦笈団本発明は、一般に、抗ウィルス薬として６−アミノ−１，２−ベンゾピロンを用いた、ウィルス性疾患の治療方法に関する。より詳細には、哺乳類宿主におけるウィルスの増殖を抑制および阻害することへの６−アミノ−１，２−ベンゾピロン、その同族体および塩の使用に関する。これらの化合物は、ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルスおよびサイトメガロウィルスに対する特に有効な阻害剤であり、従って、エイズ、ヘルペス性症状の発現、およびサイトメガロウィルス感染症に対する治療に特に有用である。さらに、これらの化合物は、たとえあるとしても、非常に低い毒性しか有さない。

到達水準および関連した４示ウィルス感染は、現代社会における最も深刻な問題の１つとなった。それらの高度の伝染性および宿主生物内の迅速な再生サイクルは、非常に有毒なデオキシリボヌクレオチド相同体以外は利用できる有効な治療が本質的にないことと合わせて、ウィルスをヒト個体群が日常レベルで遭遇するやつがいな健康上の障害となるものにしている。

ウィルスは、タンパク質の外層膜で覆われた中心コア核酸から本質的に成る、細胞内寄生性の分子の粒子である。自己の再生について、ウィルスは宿主に完全に依存している。

数百種の異なるウィルスがヒトに感染するものとして知られている。その広汎な流行のために、ウィルス性疾患は重要な医療上および公共の健康上の問題を生じる。これらの中には、全てのウィルス性疾患のうちで最も一般的な、これ単独で米国だけで毎年十億もの罹患の原因となるインフルエンザ、または、はしか、水痘、狂犬病、ヘルペスウィルス性疾患、サイトメガロウィルスおよびエイズの原因となるヒト免疫不全ウィルスのような高度な感染性を有するウィルス性疾患が包含される。これらの全てのウィルスは、ヒト自身によって、主に呼吸性のおよび内臓の排出物を介して、または接触を介して速やかに広がる。さらに、ある種のウィルスは、いずれの治療に対しても非常に耐性があり、そしである種のウィルス、例えば、単純ヘルペスウィルスまたはサイトメガロウィルスは、体内に一度入れば、抵抗性が弱まるまで休眠状態のままで永久に残存し得る。その池の、例えば、ヒト免疫不全ウィルスは、はぼ常に致命的である。

ウィルス性疾患に対する簡単な治療はない。それらは抗生物質に感受性を示さず、宿主におけるウィルスの複製を抑制する化学療法以外にウィルス性疾患の有効な治療はない。測ｅ　Ｍｅｒｃｋ　Ｍａｎｕａｌ、１７０　（１９８２）。これらの化学薬剤の例としては、単純ヘルペス角膜炎の治療に有用なイドクスウリジン（ＩＤＵ）、およびインフルエンザＡウィルスに対して活性のあるメチサゾンが挙げられる。他の周知のウィルス複製のインヒビターとしては、アシクロビル、リバビリン、ビダラビン、ガンシクロビル、アデニンアラビノシド（ＡＲＡ− Ａ）およびＡＺＴが挙げられる。しかし、これら、および他のウィルス複製のインヒビターは、細胞毒性、肝毒性、神経毒性、腎毒性であることが知られており、そして催奇形性効果を宵することが示された。

１／１ｒｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ、ｌ−６（１９７８）、Ｃｒｏｗｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ニューヨーク。

このように、ウィルス性の疾患に有効で、しかも無毒性の治療が利用可能となることが非常に望まれている。

ヒト免疫不全ウィルス（［ＩＩＶ）感染は、現在世界中で最も緊急を要する健康上の危機の一つを構成する。後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）として知られている旧Ｖ感染症は、弱まった免疫抵抗性のために、はぼ常に致死的であり、それらは日和見感染、悪性腫瘍および神経障害を急速に随伴して早期の死を導く。

ＨＩＶという用語は、周知のヒトＴリンパ球性ウィルス■型（ＨＴＬＶ−Ｉ　Ｉ＋）、リンパ節疾患関連ウィルス（ｌｙｍｐｈａｄｅｎｏｐａｔｈｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｖｉｒｕｓ）（ＬＡＹ）およびレトロウィルス（ＡＲＶ）という名称で知られているレトロウィルスの一部を包含する。

レトロウィルスは、細胞質中のウィルス性ＲＮＡをＤＮＡに変換し得る逆転写酵素と呼ばれる酵素を含有する。それは染色体外の部位で複製され、または細胞核中に移行して宿主細胞ＤＮＡの一部となる。これらの組み込まれたウィルスの遺伝子は正常な細胞の遺伝子と共に複製され、そして初めに感染した細胞の全ての後代はウィルスの遺伝子を含有する。数種のレトロウィルスのウィルスの遺伝子の発現は、その細胞を癌に変換する腫瘍原性であり得るか、または正常の細胞の機能を改変し得るかまたは細胞死を生じ得る他の病的効果を有し得る。

エイズ患者は、リンパ節腫脹、体重減少、間欠性発熱、倦怠感、傾眠、慢性下痢、リンパ球減少、または貧血のような広範囲の急性または慢性の臨床上の問題を、上記のあらゆる徴候に全般的な日和見感染症、例えばそのいくつかを挙げると、ニューモンスティスカリニ肺炎、カンジダ症、ミツバクテリア感染症、サイトメガロウィルスまたは単純ヘルペスウィルス感染症、または例えばカボーノ肉腫および種々のリンパ腫のような二次的癌が組み合わされて成る完全なエイズ症候群とともに経験する。これらの日和見の二次的感染症は、エイズ患者において９０％より高い致死率をもたらす。

日和見感染症、新生物および池の合併症の治療以外は、エイズに対する有効な治療はない。入手可能な細胞増殖抑制性の（ＡＺＴ）および抗ウイルス性の（アシクロビル）薬剤は、はとんど極めて毒性が高く、従って、重篤な副作用をもたらす。

それが致死的であるために、およびエイズ患者の治療がないために、有効な抗旧Ｖ剤またはワクチンの開発に莫大な努力がなされている。目下研究されている全ての薬剤またはワクチンの内で最も有望であるのは、ウィルスの増殖酵素、逆転写酵素を何らかのかたちで抑制し得る、抗ウィルス薬であるように思われる。Ｔｈｅ　Ｍｅｒｃｋ　Ｍａｎｕａｌ、第１ＳＬ２８８（１９ｇ？）。

従って、ＨＩＶの増殖に影響を及ぼす、有効で、しかも無毒性の抗ウィルス薬を提供することは、非常に重要であり、何千人ものエイズの犠牲者の生命を救う方法となる。

単純ヘルペスウィルス１型および２型も同様に、広範囲に広がる感染症である。

それらは日和見感染の一つとしてエイズ患者において発症し得る。Ｉ（ＳＶ−２は子宮癌の発生に関連付けられてきた。

単純ヘルペス（熱性庖疹およびカゼの華とも呼ばれる）は、最も罹患率の高いウィルス性感染症の一つである。この感染をおこす病原因子は、比較的大きな単純ヘルペスウィルスであるヘルペスウィルスホミニス（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ　ｈｏｍｉｎｉｓ）（ＨＶＨ）である。２種のＨＶＨ株がある。１型株（ＨＳＶ− １）は、通常、唇に発症するヘルペス角膜炎を、およびヘルペス角膜炎、すなわち、角膜の炎症を引き起こす。２型は、通常、生殖器またはその付近に発症し、主としてヘルペスのびらんまたは傷に直接接触することによって一般に伝達される。

口部（ＨＳＶ−１）および生殖器（ＨＳＶ−２＞感染の推定の頻度およびその発症は、１型の初感染の症例が米国だけで１年間当り約５０万例であり、そして再発症例が１年間当り９千８百万例である。生殖器感染のＨＳＶ−２の症例は、米国において１年間当り初感染の陰部ヘルペスの症例は約５００．０００例てあり、そして再発症例は３百万例〜９百万例である。Ｌｉｖｉｎ　Ｗｉｔｈ　Ｈｅｒ　ｅｓ、１−１１゜（１９８３）、Ｄｏｕｂｌｅｄａｙ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ、ニューヨーク。

単純ヘルペスウィルスは、非常に感染力が強く、接触によって迅速におよび容易に伝達され得る。この極めて痛いウィルス感染に対する特別の治療法はない。コルチコステロイドは、早期に与えられるなら、重篤な患者において痛みを和らげ得る。アスピリンおよび池の抗炎症剤または抗ウィルス薬は、全身投与により痛みを緩和する。しかし、これらの薬剤は、前記で論ぜられたのと同様の望ましくない副作用を有する。Ｈ３Ｖ感染症の治療は、主として、例えば、高度に細胞毒性のＩＤＵおよびトリフルリジン（ＴＰＴ）、ＡＲＡ−Ａ、およびウィルスの複製の半時異的酵素インヒビターであるアシクロビルまたはブロモビニルチオキシウリジンのような抗ウィルス薬を全身投与することによる。

これらの薬剤の投与の第一の経路は全身投与であるので、このような治療には重篤な副作用が伴うことが示された。さらに、これらの薬剤は、単純ヘルペスウィルスの複製の選択的インヒビターではなく、正常細胞の複製にもまた影響を及ぼす。従って、知覚神経節において休眠している全てのヘルペスウィルスを捜し出し、破壊するのに十分な多量で用いる場合、これらの化合物はまた、ウィルスが増殖する宿主細胞中の正常なりＮＡに対してもを高度に破壊的であり得る。これはあまり望ましくない影響である。なぜなら、正常細胞の複製にも影響を及ぼすからである。

従って、ＨＳＶ感染症の有効な無毒性の治療を手に入れることが有利である。

サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）は、時折、ＨＩＶの危険な共感染（ｃｏｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）である。ヒトＣＭＶは、ヒトに潜伏し続ける傾向を有する高度に感染性のある病原体の小群である。ＣＭＶは成人個体群において非常に一般的であり、成人の９０％程度がＣＭＶ感染に曝され、感染している（ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｄ）ｏ　ＣＭＶは通常、血液、リンパ液、唾液、尿、ふん便、乳汁などのような体液中に存在する。先天性のＣＭ’／感染症は、流産、死産、出生後の出血死、貧血または重篤な肝臓障害またはＣＮＳ障害を引き起こす。成人においては、ｃｙｖｇ染症は、無症候であり得るだけでな（、肝炎、異型リンパ球増加症または失明をももたらし得る。エイズ患者に起こったＣＭＳ感染症は、ＣＭＶが肺、胃腸または腎臓の合併症をもたらし得、特に危険である。

ＣＭ’／に対する特別の治療法はない。ＨＳＶとは対照的に、ＣＭＶは強力で非常に毒性の強い抗ウィルス薬であるアシクロビルに対して、および他の周知の抗ウィルス薬に対して耐性である。

従って、ＣＭＶ感染症を有効に阻害する薬物を手に入れることが非常に有利である。

大多数のウィルス感染症の現存の化学療法は、このように、非常に有毒な薬剤および抗ウィルス薬に主として制限される。

それゆえに、本発明の第一の目的は、毒性の無い、高度に有効な抗ウィルス薬を提供することである。６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（６−ＡＲＰ）は、このような基本型の抗ウィルス薬の一部であると考えられる。

この薬剤（６−ＡＢＰ）は、細胞培養物において、およびヒトの血液中において、著しく毒性が低いが、しかし高度に有効なウィルス抑制の薬剤であることが今回見いだされた。その抗ウイルス性スペクトルは、最も危険なウィルス性感染症、例えば旧■、ＣＭＶおよびＨＳＶによって引き起こされる上記の感染症の治療に特に有用であると考えられる。しかし、それは他のウィルス性疾患の治療においても等しく有効であり得る。

６−アミ／ベンゾピロンは既知であり、Ｊ、Ｐｈａｒｍ、Ｓｏｃ、Ｊａ　、、４９８：６１５−６２８（１９２３）に記載されている。しかし、この物質の医療用途についてはまれにしか報告されておらず、しかも、このテストは鎮静効果および催眠効果について行われたものであった（ｊ、Ｔ’ｈと１士エユ姐ａｎ、　７３：３５１（１９５３）および同誌、７４：２７１（１９５４））。降熱作用が研究されたが、６−アミ７基は降熱効果を低減することが見いだされたＹａｋｕ　ａｋｕ　Ｚａｓｓｈｉ、７８：４９１（１９５８）。数種の解熱、催眠、降血圧および抗アドレナリン性の作用が報告されたく同誌、８３：１１２４（１９６３））。

関連の分子、１．２−ベンゾピロン（クマリン）は、新生物細胞中に存在するＤＮＡ結合核タンパクである、アデノ／フジホスホリボーストランスフェラーゼ（ＡＤＰＲＴ）の抑制リガンドである７））。

６−ＡＢＰがＡＤＰＲＴに、触媒的に有効なりＮＡ末端に結合する部位と同じ部位において特異的に結合することが、さらなる研究によって示された。　従って、６−ＡＤＰとＤＮＡとは、ＡＤＰＲＴにおける同じ部位に対して競合する。これらの結果は、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、、２１２ニア３（１９８７）に開示されている。ここでは、ＡＤＰＲＴの合成リガンドを用いてＡＤＰＲＴの生物学的役割が広く研究されており、ＤＮＡの増殖を、特に腫瘍化細胞において、抑制することが示された。ウィルスの複製に対するこれらのリガンドの強力な抗ウイルス効果が今回研究され、それが本発明の課題である。

本発明の第一の目的は、単に限定された生物学上の有用性のみを有するものとして以前から知られている６−ＡＢＰが、特異的で、選択的で、強力な、そして無毒性の抗ウィルス薬であるということの発見にある。Ｈ＋ｖｇ染ヒトリンパ芽球を包含する種々のウィルス感染した培養組織においてこれらの化合物を試験することによって、６−ＡＢＰが旧■、ＨＳＶおよびＣＭＶ複製の抑制（こ特に有用であることが示された。

■ 本発明の一つの局面は、次式の化合物または薬学的に許容し得るそれらの塩の治療上有効な量を哺乳類に投与することを包含する、哺乳類におけるウィルス感染症を治療するための方法に関する：ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキ／、シクロアルキルか、またはアルキル、アルコキン、ヒドロキシまたはハロゲンで置換されていてもよいフェニル（ｐｈｅｎｏｌ＞から選択される。

本発明の他の局面は、次式の化合物または薬学的に許容し得るそれらの塩の治療上有効な量を哺乳類に投与することを包含する、哺乳類中でのウィルスの再生を阻害または抑制するための方法に関する：ここで、Ｒ１％　Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキルか、またはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで置換されていてもよいフェニル（ｐｈｅｎｏｌ）から選択される。

本発明のもう一つの局面は、次式を有する抗ウィルス薬または薬学的に許容し得るそれらの塩に関する：ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、アミ／、アルキル、アルコキシ、シクロアルキルか、またはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで置換されていてもよいフェニル（ｐｈｅｎｏｌ＞から選択されるが、但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は同時に水素ではあり得ないか、または同時にＲ１が非置換のフェニルではあり得ない。

本発明のさらにもう一方の局面は、次式の化合物または薬学的に許容し得るそれらの塩の治療上有効な量を哺乳類に投与することによる、ＨＩＶＳＨＳＶまたはＣＭＶによって引き起こされるウィルス性の疾患の治療方法に関する：ここで、Ｒ】、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、アミン、アルキル、アルコキシ、シクロアルキルか、またはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで置換されていてもよいフェニル（ｐｈｅｎｏｌ）から選択される。

区五！Ｊソ１勤疲肌図１は、前処理された細胞培養物中のＨＳＶ増殖に対する６−ＡＢＰの抑制効果を示す。ここで、図ＩＡは、ＨＳＶ−１のＦ株のウィルス増殖の抑制％を、外に加えた薬物濃度の関数として表し、そして図ＩＢは、ＨＳＶ−２のＧ株に対する同様の抑制効果の％を表す。

図２は、Ｉ（ＳＶ−１のＦ株く図２Ａ）の感染時、および感染４時間後に６−ＡＢＰで処置した効果およびＨＳＶ−２のＧ株（図２Ｂ）の、ウィルス接触の０時間後または４時間後にこの薬物をウィルスに加えたときの効果を比較している。

図３は、７　’）　０ファージ（Ｕ９３７細胞）における、ＨＩＶ１７）ＨＳＶ −ＩＥ−１１０との同時トランスフェクンヨンによる旧Ｖ活性化に対する６−ＡＢＰの効果を示す。

図４は、マクロファージ（０９３７細胞）における、１（ＩＶと低力価のＨＳＶ −ＩＥとの同時トラノスフェクンヨンによるＨＩＶ活性化に対する６−ＡＢＰの効果を例示している。

図５は、ＨＩＶ（ＴＲ−ＣＡＴ７　ノセイによッテ測定された、）ＩｓＩ／またはＣＭＶによる旧Ｖの活性化に対する６−ＡＢＰの阻害効果を示す。

図６は、旧■伝幡の時間経過に対する、細胞外に添加された６−ＡＢＰの効果を示す。

図７は、ＡＡ−２細胞における旧Ｖ増殖の抑制に対する、６−ＡＲＰの効果を示す。

図８は、ＨＩＶ複製に対する６−ＡＢＰの効果を、引き続いてｐ２４形成の慣例の分析を行って示したものである。

図９は、ＭＴ−２細胞におけるＨＩＶ再生およびシンシチウム形成に対する抑制効果を示す。

図１０は、エイズ患者由来のヒトリンパ芽球における旧Ｖ増殖に対する６−ＡＢＰの抑制効果を示す。

図１１は、６−ＡＢＰによる旧■複製の選択的な抑制を示す。

図１２は、抗ＡＤＰＲＴ抗体によッＴＡＤＰＲＴと共沈する、Ｈ３ｖタンパクＲＲ＋およびＩｃ５Ｐ　１１／１２のＳＤＳ’ゲルを示す。

本発Ｂの詳　な８Ｂ友致ここでは以下のように用いられる：ｒ　６−ＡＢＰＪとは、クマリン炭素の３位、４位、５位、７位および８位にそれぞれ相当するＲＩ％　Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５が、水素、ヒドロキシ、アミン、アルキル、アルコキシ、シクロアルキルあるいは、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで置換されていてもよいフェニルで置換されているかまたは置換されていない式（１）の６−アミノ−１，２−ベンゾピロンをいう。

「薬学的に許容し得る酸付加塩」とは、°遊離塩基の生物学的効果および特性を維持する、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素Ｌ　硫酸、硝酸、す／酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ４ルエンスルホ／酸、す１ノチル酸などの塩を１．）う。

ｒＡＤＰＲＴＪとは、ＡＤＰ−リボースの重合を触媒する真核生物の特異的なりＮＡ結合核タンノシクであり、ボ！Ｊ　（ＡＤＰ−！Ｊボース）ポリメラーゼ、（ＥＣ２，４，９９）としても知られるアデノシンジホスホリホーストランスフエラーゼを（Ｘう。

「アルキル」とは、飽和または不飽和の分枝鎖また（ま直鎖の炭化水素基をいう。典型的なアルキルエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソフ゛チル、第三級ブチル、ペンチル、ヘキシルなど力量挙１デられる。

「アルコキシ」とは、−０−アルキルアルコキシ基としては、メトキン、エトキン、プロポキシ、ブトキンおよびペントキンなどが挙げられる。

「シクロアルキル」とは、３〜８個の炭素原子を含有する飽和の単環式炭化水素基、例えば、ンクロブロビル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよび／クロオクチルをいう。

「置換フェニル」とは、アルキルノまたは７％Ｏゲノてなる群から選択される置換基で一つまたは二つ置換された全ての可能なフェニル基の異性体をし）う。

６−アミノベンゾピロンの−　１本発明のアミノベンゾピロンは、次の一般式を有する化合物である：ここで、Ｒ＋，　Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は、独立して、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで任意に置換され得る、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキルまたはフェニルである。

この群の化合物の内、２種の化合物、すなわち、６−アミノ−１．２−ベンゾピロンおよび６−アミノ−３−フェニル−１．２−ベンゾピロンだけは、以前、Ｌ胆肛り鋭しハ１，４９１１：６１５（１９２３）および■狐１’工む巳摺り盈す１拍，、　７１　：１０１０（１９６８＞にそれぞれ記載されていた。この化合物の数種の医療または薬理学上の使用は、上で引用された技術中に述べられた。

抗腫瘍形成の活性については、１９８８年２月１０日提出の米国特許出願第０７／１５４，　８５３号の「６−アミノ−１．２−ベンゾピロン抗腫瘍形成およびその方法」に開示されており、それはここで援用されている。しかし、本発明以前には、抗ウィルス活性については開示されていなかった。

Ａｌｄｒｉｃｈから入手した、６−ニトロクマリンの酢酸中の鉄粉による自動還元、次いで、濾過、酢酸のロータリー二バポレーション、エーテル中への抽出およびエタノールからの再結晶による、６−ＡＲＰの合成については、ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、２１２ニア３（１９８７）に記載されており、合成のよりよい様式は、実施例１に記載されている。

Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５が、水素、ヒドロキシ、アミン、アルキル、アルコキシ、ンクロアルキルまたはフェニルである６−ＡＲＰの調製の一般的な反応を、反応スキーム１に示す。

多くの置換した化合物は、市販の適当に置換したらｍ；トロ化合物（Ａ）を用いて、同様のまたは類似の方法で調製され得る。

置換した前駆物質が入手可能でない他の化合物は、以下に記載のような池の反応によって合成されなければならない。

６−ＡＢＰノフル牛ル、１導体は、典型的に、市販のアルキル化シた１、２−ベンゾピロンから調４されるか、または入手可能な化学文献に記載のように調製される。典型的に、例えば、Ａｂｌｒｉｃｈから市販されている７−メチル−１，２−ペンツピロン、および証皿ｌ臣ｉｓ、　５９９（１９７５）に従って調製した合成３−メチル−１，２−ベンゾピロン、および同誌、４６４（１９７７）による４−メチル−１，１，２−ベンゾピロンは、氷酢酸中で硝酸を用いて硝酸化しくＩｎｄｉａｎ　Ｊ。

Ｃｈｅｍ、　、７：４９（１９６９））、Ｅ　ｔｌ、ｃｈｅｍ、、２０：４５３（１９７７）に記載されているように主に６−二トロ誘導体が得られ、そしてそれを、Ｊ、Ｈｅｔｅｒｏｃ　ｌｉｅ　Ｃｈｅｍ、、２３：８７（１’Ｊ８６）に記載の方法を用いて水性メタノール中でＰｄ（Ｃ）触媒と共に水素化ホウ素ナトリウムを用いて６−アミン誘導体に還元する。他のアルキル化化合物も同様の方法で調製される。

６−ＡＢＰの／クロアルキル誘導体は一例として、次のような方法、針部上１皿、４７４（１９７７＞の４−メチル−１−１，２−ベンゾピロンの合成におけるメチル基をンクロヘキシル基に置き換えて、調製される。得られた４−ンクロへキンルー１．２−ベンゾピロンは、酸を用いて、好ましくは、氷酢酸中の硝酸を用いて６位を硝酸化し、そして次に、水性メタノール中でＰｄ（Ｃ）触媒と共に水素化ホウ素ナトリウムを用い、対応する６−アミン化合物に還元する。他の７クロアルキル類も同様の方法で調製される。

６−ＡＢＰのアリール誘導体は、Ｋｏ　ｏ　Ｋａ　ａｋｕ　Ｚａｓｓｈｉ、７１：１１０（１９６８）およびＣｈｅｍ、Ａｂｓｔｒ、、７０：３００２３（１９６９）に記載の方法を用いて調製される。例としては、６−アミ／−３−フェニル−１，２−ベンゾピロンの合成の、フェニル基をｐ−）リル基に置換し、６− アミノ−３−ｐ−トリル−１−２ベンゾピロンを得る。他のアリール誘導体も同じまたは類似の方法で調製される。

６−ＡＲＰのヒドロキシ誘導体は、典型的に、４−ヒドロ半ノーおよび７−ヒドロキシ−１，２−ベンゾピロン（Ａ　ｌｄｒ　１ｃｈ）のような市販の合成前駆物質から、Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ、Ｃｈｅｍ、、７：４９（１９６９）に従って氷酢酸中で硝酸を用い、これらの前駆物質を硝酸化することによって調製し、対応する６−ニトロ誘導体を得、それを次いで、水性メタノール中でＰｄ（Ｃ）触媒と共に水素化ホウ素ナトリウムによって、４−ヒドロキシ−および７−ヒトロキシー６−アミノー１．２−ベンゾピロンに還元する。他のヒドロキシル化した６− ＡＢＰも同様の方法で調製される。

アルコキシ誘導体は、典型的に、上記のヒドロキシ誘導体から容易に調製される。典型的には、上述の４−ヒドロキシ−および７−ヒドロキシ−１，２−ベンゾピロンの６−ニトロ誘導体をシ１ｔｈｅｓｉｓ、　１４４（１９１１７＞に従ってジメチル硫酸で処理し、そのヒドロ牛ン基をメト牛シ基に変換し、そして次いで、得られた化合物を水性メタノール中でＰｄ（Ｃ）触媒と共に水素化ホウ素ナトリウムを用いて４−メトキシ−および７−メドキシー６−アミノー１，２−ベンゾピロンに還元する。他のアルコキシ化合物も同じまたは類似の方法で調製される。

６−ＡＢＰのアミノ誘導体は、例えば、Ｒ１−Ｒ５にさらに（単数あるいは複数の）アミノ置換基を有する前駆物質を用いることによって調製される。その前駆物質は、例えば、Ａｒｃｈ、　Ｐｈａｒｍ＝、２９６：３５５（１９６３＞に従って調製される合成３−アミ／−６−ニトロ−１，２−ベンゾピロンであり、次いて、それを水性メタノール中でＰｄ（Ｃ）触媒と共に水素化ホウ素ナトリウムを用いて３．６−ジアミツー１．２−ベンゾピロンに還元する。他のンアミノ誘導体またはトリアミ／誘導体も同じ方法で調製される。

本発明の最も好ましい化合物は、６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（６−ＡＢＰ）である。しかし、６位のアミン置換基を１．２−ベンゾピロン（クマリン）の３位、４位、５位、７位および８位の親水性および疎水性の置換基Ｒ７、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５と組み合わせると、６−ＡＢＦのこれらの誘導体に同様のまたはより優れた生物学的活性が付与され、これらも、本発明の範囲内であると意図されている。

Ｌ１工土五匿並６−’ＡＢＰ化合物はウィルスのＤＮＡ複製を非常に特異的にそして有効に抑制する、強力でそして無毒性のプロドラッグであることが見い出された。実施例２〜８で要約された結果は、高度な特異的なメカニズムの存在を示唆しており、それによって６−ＡＢＰはウィルスのＤＮＡ複製を抑制する。６−ＡＢＰは、ｐＨ７，２〜７゜４において、はとんどの哺乳類の細胞に、生理学的に限られた程度まで浸透する「プロドラッグ」である。この細胞内で、６−ＡＲＰは、６位のアミ７基が速やかに酸化され、反応性の種類である６−ニトロン−１，２−ベンゾピロン（６−ＮＢＰ）となる。

細胞内で、この薬物６−ＡＢＰは、速やかに６−ニトロソ−１，２−ベンゾピロンに酸化される。６〜ＮＢＰは、酵素ＡＤＰＲＴの亜鉛フィンガーに特異的にそして高いアフィニティーで結合し、そして亜鉛フィンガーのＳＨ基を酸化することによって−５−３−基にし、それによって、ＡＤＰＲＴから亜鉛を除去または排除する。亜鉛の排除は、ＡＤＰＲＴを代謝的に不活性化し、そしてそれを選択的なりＮＡ結合タンパク質に変換する。次に、このタンパク質はＤＮＡ構造に結合し、ＤＮＡ複製を阻害する。ＡＤＰＲＴは６−ＡＢＰ部位を排他的に有するので、従ってウィルスの複製および腫瘍性の複製の非常に選択的なインヒビターとなる。

６−ＡＢＰ酸化生成物である６−ＮＢＰの高い反応性は、細胞のグルタチオンによる迅速な反応を引き起こし、その結果、それは還元されて６−ＡＢＰに戻される。このことにより、この薬物には非特異的な細胞毒性がないこと、およびそれ固有のＡＤＰＲＴ部位に特異的に結合することによる強い効力があることが説明される。６−ＡＢＰが結合する部位は、ＡＤＰＲＴに対してのみ存在するので、６−ＡＲＰによって活性化または抑制される他の酵素はなく、従って、６−ＡＲＰ薬物は完全に無毒性である。毒性の研究は、実施例８に記載されている。

６−ＡＲＰの明らかに低い毒性は、グルタチオンによる還元で細胞内に生じた６ −ＮＰＢ誘導体がヒドロキシルアミンに、そして最終的には６−ＡＢＰに還元される急速な代謝によって、さらに説明され得る。この無駄な還元−酸化サイクルは、肝細胞においては強いか、樟的細胞、例えば、リンパ細胞においては非常に弱い。

６−ＡＢＰは、ＨＩＶ、　ｌｌ５ＶおよびＣ’Ｍ　Ｖ　ノ特異的な、強力で、そして無毒性のインヒビターであることが見い出された。しかし、６−ＡＢＰは、特異的なレトロウィルスのインヒビターではない。

なぜなら、それは、ＨＳＶおよび他の非レトロウィルス性のウィルスにおいてもまた、有効であるからである。その抗ウイルス特異性は、特異的に結合する部位および組み込みステップの抑制、およびある種のウィルスにおける亜鉛フィンガー含有タンパク質に関する。従って、ＡＤＰＲＴの関与するＤＮＡによるいかなるウィルスの増殖も、６−ＡＢＰで抑制される。

６−ＡＢＰ化合物の抗ウィルス活性は、独立してヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルスおよびサイトメガロウィルスに感染した細胞培養物、および２種のウィルスでトランスフェクトされた数種の細胞培養物において試験された。実際の実験過程は実施例２〜８に記載されており、その結果は図１〜１２に示されている。

ＨＥｐ−２細胞培養物において増殖するＨＳＶに対する６−ＡＲＰ化合物の抑制効果は、液体を重層する条件下でプラークアッセイを用いてウィルス力価測定により決定された。この薬物の種々の濃度での効果および薬物に曝す条件を調べる以下の実験の結果は、図１〜５に要約されている。

図ＩＡは、細胞に曝した薬物６−ＡＢＰの効果を示している。この細胞は、予めこの薬物に２４時間曝され、細胞の内側の薬物の１度が外側の薬物のｘｉによって平衡化されるのに十分な時間保った。図ＩＡにおける曲線は、外側の薬物の濃度の関数として増殖するＨＳＶ−１の抑制％を例示している。この曲線かられかるように、２ｍＭ１Ｊ１度における６−ＡＢＰは、ＨＳＶ−１のＦ株の増殖を５０％を越えて抑制し得、一方、ＳｍＭＩＡ度では、ＨＳＶ−２のＧ株の約８０％を抑制する（図ＩＢ）。

曲線ＩＡおよびＩＢかられかるように、２４時間この薬物で前処理された１ＩＥｐ−２細胞において、増殖の５０％抑制は、ＨＳＶ−１のＦ株において２ｍＭの６−ＡＢＰ濃度で達成された。これに対して、０．２ｍＭの６−ＡＢＰで約４５％の抑制が達成され、そしてこの薬物１ｍＭで約９０％の抑制が達成され、そして１〜１０ｍＭの間の投与量でＨＳＶ−２のＧ株の増殖の９０〜９７％の抑制が達成されるというように、５−ＡＲＰの処置に対するＨＳＶ−２のＧ株の感受性はさらに強い。

上記の結果は、Ｈ３Ｖウィルスに対する６−ＡＲＰ薬物の高い効能を示し、その効能は、ウィルスの型（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）によって変化する。

図２Ａおよび２Ｂで示されている実験において、ＨＳＶ−１（Ｆ）および）ＩＳＶ−２（Ｇ）で感染させた細胞培養物にこの薬物を加えた時と感染時に加えた時との間で比較が行われた。ウィルス感染時（０時間）およびウィルス複製を導く初期のウィルスの機能が既に発現している感染４時間後に、細胞培養物に１ｍＭ、５ｍＭおよびｌｏｍＭＩｔの薬物６−ＡＲＰを加えた。図２Ａおよび２Ｂかられかるように、０時間に薬物に曝す場合にいく分高い薬物の効果が得られるが、薬物に曝すこれら２種の様式の間には本質的には違いはなかった。ＨＳＶ−２（Ｇ）に対するこの薬物の明らかに大きな効果は、図ＩＡおよびＩＢに見られる結果と一致する。

図３は、マクロファージ（０９３７細胞）中における旧ＶのＨＳＶ−ＩＥ　１１０との同時トランスフェクトによる旧Ｖの活性化に対する、薬物６−ＡＢＰの効果を示す。このアプローチを使用する理由および／フンチア形成アッセイは実施例３において記載されており、結果は表２に示されている。旧■増殖の活性化を抑制する６−ＡＲＰの能力を決定するために、２重複の細胞培養物を使用した。

実験１および２において、Ｕ９３７細胞をＨ３Ｖ遺伝子ＩＥ−１１０またはＣＭＶ遺伝子ＩＥでトランスフェクトし、そして感染させたＨＩＶの増殖は、ＩＥ− １１０で同時トランスフェクトされたＵ９３７細胞では４日間て２，５００　ＳＦＵ／ｍｌまでおよび２，５００　ＳＦＵ／ｍｌを越える量までに達し、そして、ＣＭＶ　ＩＥで同時トランスフェクションされたＵ９３７に対して４〜８日間で約１２００から１４００　ＳＦＵ／ｍｌに達したことが示されている。実験３において、１（ＳＶ−ＩＥ−１１０でトランスフェクトされ、モして旧Ｖに感染させたＵ９３７細胞は３ｍＭの６−ＡＢＰで処理された。この組み合せでは、この薬物処理は、実験１におけるフントロールのプラスミドｐＢＲ３２２でトランスフェクトされた細胞においても見られる（擬似のトランスフェクション）　１ｍｌ当り２５０〜３００　ＳＦＵのバックグラウンドレベルにまで、ＨＩＶ活性化を減じ得た。活性化するＨＳＶまたはＣ１＋ｕ／　ＤＮＡが存在しないとき、薬物のみでは（実験５および６）旧■の増殖に効果はない。６種の実験の結果を図３に示す。アクチベーターなしでは、ＨＩＶの増殖はほとんどないかまたは全くないということは、明らかである。この薬物は旧ＶのＩＥ−１１０（ＨＳＶ）に活性化された増殖を大いに抑えるということもまた、明らかである。ＣＭＶ− ＩＨによる活性化もまた、この薬物によって抑制される。

ＨＩＶの増殖に対する薬物の直接の効果を示すかどうかを評価するために、比較的低いウィルス価が検知されるように、ウィルス力価（ＳＦＵによる）の状態を改善した以外は図３において示されている実験を繰り返した。図４において示されているこれらの結果は、このアｌセイ条件がアクチベーターの存在しない状態での旧■のみの増殖に対する薬物の効果を検知することを可能にすること以外は、図３に示された結果と本質的に同一である。ＨＩＶの増殖に対して重大な効果が存在し、このことは、この薬物の作用のメカニズムには、活性化する（ＨＳＶまたはＣＭＶ）および標的（ｌ（ＩＶ　ＤＮＡ）の両方が含まれるらしいことを示す。

図３および４に示される全ての実験で、細胞は３ｍＭの薬物に２４時間曝された。しかし、ＨＳＶの場合と同様に、この薬物の感染後の添加は、細胞が感染前に処置された場合と同様に有効であった。この時、この薬物の処置から、この薬物によってＩＥ−１１０の発現およびＨＩＶ　ＤＮＡが同時に抑制され得ることが示唆される。

ＨＩＶ−ＬＴＲ−ＣＡＴアッセイによって測定された、旧■複製に対するこの薬物の阻害効果を図５に示す。図５に示されるように、ＩＥ−１１０オヨびＣＭＶ −ＩＥ　ＤＮＡ（７）４度を０３〜ｌμｇの範囲で変化サセた。ＩＥ−１１０ｉ：よるＨＩＶ−ＬＴＲ−ＣＡＴノ最大活性化は、０．１μｇのＪＩ度で起こり、そごでは、３４４倍の活性化が観察された。この活性化は、６−ＡＢＰ　２ｍＭで処理することにより、０．４〜０．９倍の活性化に弱められた。同様に、ＣＭＶ　ＩＥ（０，１μｇ）による活性化は、６−ＡＢＰがない状態で１５（＠であり、２ｍＭの６−ＡＢＰの存在下で１倍に減少する。

細胞内の薬物濃度および薬物輸送のメカニズムの両方を決定することは重要である。１２種の異なる細胞系を薬物の種々の濃度を加えて種々の時間インキュベートし、そして細胞内の薬物濃度を、［５３旧で標識した６−ＡＢＰを用いて分析した。このテストを１２種の異なる確立された細胞系において行ったとき、６− ＡＲＰの輸送は、薬物の／Ｊ１度およびインキュベーシヨンの時間に依存すること、そして、１８〜２４時間で、細胞外に適用される薬物濃度の１０〜２０％でプラトーに達するということがわかった。従って、細胞膜を介する重要な輸送調節がある。

１ｍＭの細胞外投与を行うと、細胞内の薬物の濃度は、細胞系に依存して、６５〜２００μＭの間で変化したが、ＡＤＰＲＴに対する６−ＡＢＰのＫｉを常に越えていた（１９５の４７μＭ）。このことは、ＡＤＰＲＴ部位の特異的な結合および飽和が実際に起こることを示す。

ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の発現は、５ｃｉｅｎｃｅ、　１０８：１１７（１９４８）：および同誌、２３０：８５０（１９８６）に記載されているように、ホルボールエステルおよびレクチンによるインデューサーＴ細胞の活性化後に増加する。この刺激は、ＨＩＶエンハンサ−の２回繰り返される１ｌ−ｂｐ　ｋＢのモチーフに結合する、転写を調節する因子であるＮＦ−ｋＢによって仲介される（Ｎａｔｕｒｅ、　３２６．７１１（１９８７）。ＮＦ−ｋＢの結合を排除するこの部位内の変異はまた、活性化したＴ細胞における旧■遺伝子の発現の増加を消し去る。しかし、ＨＩＶは、その中で低レベルで複製を示すマクロファージ中で生き残る。

エイズ疾患は、多量の旧■の複製を伴う。このような高度な複製は、数種の活性化因子かこれらの細胞における旧■活性化に含まれることを示唆する。これらの観察は５ｃｉｅｎｃｅ、　２４０：８０、　（１９８８）および■胆包■、　１６７　：２９９．　（１９８８）において発表された。

霊長類のウィルス（ＨＳＶおよびＣＭＶを包含する）由来のＤＮＡは、クロラムフェニフールアセチルトランスフエラーセ（ＣＡＴ）　遺伝子に連結された旧Ｖプロモーターを含むプラスミドと共に線維芽細胞中に同時トランスフェクトした時、）ＩＩＶ発現を誘発する。

ｒｏｅ、　Ｎａｔ　１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、８３　：９７５９　（１９８６）。）ＩＳＶは、他の遺伝子の転写を活性化する数種の遺伝子産物をコードする。−組のＩ（Ｓｖトランスアクチベーターは、感染後、ただちに合成されて、極初期遺伝子（ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−ｅａｒｌｙ　ｇｅｎｅ）産物を生じるＯ　これらには、ＨＩ　Ｖ−ＬＴＲｃａ　ｔを活性化するトランス−活性化遺伝子（ｔｒａｎｓ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｇｅｎｅｓ）が包含され、その活性化は明らかにＮＦ−ｋＢ活性の誘導に関与している。ＣＭＶもまた旧■の発現を活性化する。これはＣＭＶ　ＩＥ遺伝子によって媒介される。しかし、ＮＦ−ｋＢの活性は必要としないようである。

実験は、確立されている細胞培養における、ＨＩＶに対する６−ＡＢＰの直接の効果を決定するために行われた。この結果を図６および７、および表４に示す。

これらの結果は、ＭＯＬＴ　ＩＩ＋細胞の上演をウィルスの供給源として培養中のＡＡ−２およびＭＴ２細胞に対して用いた、ＭＯＬＴＩ１１細胞の高度に病毒性な旧Ｖ株の、直接の広幅に対する６−ＡＢＰの効果を示す。

種々のＤＮＡによる潜伏性の旧Ｖの活性化および６−ＡＢＰによるその予防が上記で示されたが、一方、以下の実験はＭｏ１ｔ　Ｉｌｌ細胞において旧Ｈから得られた高度に悪性の１７株の直接の広幅に対する６−ＡＢＰの効果を、ＡＡ−２およびＭＴ２細胞培養物に対して、ウィルスの供給源として細胞上清を用いて、調べている。６０を越える数のテストがウィルスの力価、曝す時間、および６− ＡＢＰに曝すことを変化させて行われた。

この薬物（６−ＡＢＰ）のその活性代謝物６−ニトロン−１，２−ベンゾピロン（６−ＮＢＰ）への変換の割合が、細胞への６−ＡＢＰの浸透割合に依存するのか、および細胞内での酸化による６−ＡＢＰの６−ＮＢＰへの変換割合に依存するのかは知られていない。従って、細胞外の薬物の濃度は、６−ＮＢＰの細胞内での発生に依存する生物学的作用に対して、間接的にのみ関与する。この考え方は全ての細胞培養物系の実験法に対して有効である。

図６かられかるように、６−ＡＢＰの効果は外部に添加した薬剤の濃度１ｍＭと３ｌＭとの間で顕著に増加し、このことは、全ての細胞タイプについて特徴的な２種の生物学的パラメータ、すなわち、薬物の保持状態、および酸化の触媒反応の影響を受ける。固定した初めのウィルス濃度を一定にして、細胞変性試験によって測定された場合、３ｍＭの６−ＡＢＰは６日目でさえ、Ｈｌｖの広幅を完全に排除し、一方、１ｍＭの６−ＡＢＰは、コントロールに対してただわずかに旧Ｖの繁殖を抑制し得るのみであることが明らかである。

図６は、培養中のＡＡ−２細胞におけるウィルスの広幅の時間の過程に対する、外部から、すなわち、細胞外から添加された２種の′Ｉｓ度の６−ＡＢＰの効果を示す。）ＩＩＶの伝播速度に対するｌおよび３ＩＩＩＭの６−ＡＢＰノ効果は、一定の旧Ｖの希釈１：１６００ニて細胞病変性によって分析される。

図７は、３日後および６日後の、ＡＡ−２細胞における旧■増殖の抑制に対する３ｍＭの６−ＡＲＰの効果を示す。培養物は種々の旧Ｖの希釈度でこの薬物の３ｍＭに曝した。ＡＡ−２細胞に３日間または６日間連続して作用させた６−ＡＢＰの濃度をウィルスの濃度（横座標において旧■の希釈度として与えられる）の関数として示す。

ウィルスの濃度の関数として示された薬物の効果は、予期され得るように、３日目には７０％から１００％の抑制までその大きさが変化し、または６日目には２５％から１００％まで変化した。

このことは、６−ＡＢＰまたは、むしろその代謝物である６−ＮＤＰが有効な抗旧Ｖ薬であることを明確に示す。

図７について行ったのと同様の実験を用いた、ＡＡ−２細胞における旧Ｖ複製に対する３ｍＭの６−Ａ　ＲＰの効果を、引続き自動化したＥＬＩＳＡテストによるｐ　２４形成の慣用の分析によって分析した。

この結果を図８に示す。グラフに示すように、図７と同様に感染させる旧■希釈度をＩ：１００からｌ：１６００まで種々のＨＩＶｆｉ度に変化させた影響、またはｐ２４のインプットを追跡した。

３ｍＭの６−ＡＢＰは、抗ＨＩＶｍとして有効であった。４日目において、３ｍＭの６−ＡＢＰは、ｌ　：＋４００の希釈度でｐ　２４の発生を完全に抑制し、そしてｌ・ｌ　４００のウィルスの希釈以上で旧Ｖの複製を顕著に抑制した。

図９に示されるように、同等の結果がＭＴ−２細胞によって得られた。図９では、シンジチアの形成の抑制は、定量的に測定した。図９から、３ｄの６−ＡＢＰが旧Ｖの生成をほぼ完全に抑制することは明らかである。それは、シンジチアの形成のほぼ完全な抑制を証拠に示された。非常に高い旧Ｖ力価では、１：１００の希釈度における無処理の／シンチアの形成は、処理された培養物においてよりも１５０倍高い。

図６．７．８．９および表４において示される結果は、はぼ３０シリーズの実験において再現され、そして６−ＡＲＰの一定した抗ウイルス効果が得られた。

確立されている細胞培養物における薬物の抗ウイルス試験は、高度に有意で再現可能な結果を生じる一方で、培養、不滅化、代謝改変などによって何らかの形で細胞が修飾を受けていることに関係する生来の問題を有する。従って、ヒトの疾病との直接の相互関係には、起こるかもしれない細胞膜の浸透性およびｃｙｔ　ｐ　４５０含有量の変化を考慮にいれなければならない。それらは６−ＡＢＰおよびその誘導体の医療上の効果を評価する際の決定的なパラメータである。

このような相互関係は、ヒトエイズ患者から得られるリンパ芽球を用いて行われた。この結果を図１Ｏおよび図１１に示す。

図１０において、ヒトのリン／く芽球は、６−ＡＢＰに１８時間曝した。調べた薬物の濃度は、０．０１ｍＭからｌｏｍＭの間であった。ＨＩＶの生成は２種の時間間隔において、すなわち、薬物除去後、６日目および１２２日目、研究された。６日目および１２２日目両方において、ＨＩＶの生成は０１μＭの６−ＡＢＰを用いた処理で、劇的に減少し、非常に低濃度（０１μＭ）の６−ＡＲＰがエイズリン／ｆ芽球における旧■の増殖を実質的に抑制するのに十分であることを示している。

図１１は、リンパ芽球のＤＮＡ合成に作用することなく、旧■の復製が選択的に抑制されることを示す。図１１は、６−ＡＢＰは、それを１８時間曝した後に、遺伝子のＤＮＡ合成に影響を及ぼさないことを示す。

図１１において、ＰＨＡで刺激された正常なリンパ芽球を、ＨＩＶに感染させ、同時に０−１０ｍＭの６−ＡＢＰの種々の濃度に曝す。

短時間（１８時間）＠シた後、パネルＡ、　Ａ’、およびＡ”では旧Ｖおよび６ −ＡＢＰの両者を除去し、パネルＢおよびＢｏにおいて示される培養物には４日目まで同濃度における６−ＡＢＰが再添加される。

４日目に、パネルＡおよび已において３Ｈ−チミジン混合物（ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）によって測定された増殖指標が決定された。／イネルＡかられかるように、６−ＡＢＰでの１８時間の処理は、細胞増殖によって測定されるＤＮＡ合成に影響を及ぼさない。細胞培養物が、さらなる６−ＡＲＰ処理に曝されたパネルＢにおいては、ＨＩＶは抑制され、そしてＤＮＡの合成もまた一時的に抑制される。パネルＡ°およびＢでは、ウィルスの合成または抑制は、ｐ　２４アツセイによって測定される。ＡｏおよびＢｏの培養物の両方に対して、ウィルスの増殖はほぼ完全に抑制された。上記結果はノ（ネルＡ”において確認され、ここで、逆転写酵素のアッセイがウィルスの抑制を示すために用いられた。

白血球が効率のよい０２発生／ステムを宵することは周知である。従って、６− ＡＢＰから６−ＮＢＰへの変換は、適合した細胞培養物においてより、白血球細胞において、より効率よくもたらされる。それゆえ、プロドラッグである６−ＡＢＰの活性種への変換は、非常に効率がよく、従って、それはより高い化学療法活性を有する。それゆえ、肝臓における６−ＡＲＰから６−ＮＢＰへの迅速な代謝変換と、グルタチオン依存の無益な（不活化）サイクルによる６　−Ａ　ＢＰの再変換とを避けるような投与の様式が、静脈注入によって処置されるなら、６ −ＡＲＰは、エイズにかかつている患者において特に高い効果がある。

図１０に示される結果は、旧■に感染した患者の全血中で本質的に再現され、従って、臨床上の効果がある程度保証される。

６−ＡＢＰがＨＳＶの増殖を抑制するという発見は、ＡＤＰＲＴがウィルスの複製に関与していることを意味する。この疑問を明らかにするために、２種のさらなるシリーズの実験が行われた。

この結果を図１２および実施例６に示す。

図１２に示される第一のシリーズにおいて、ＡＤＦ’ＲＴに対する抗体は、存在するかもしれない、ＤＮＡ複製に関与するＡＤＰＲＴとウィルスタンパクとの間の関係を決定するために計画された免疫沈降実験において用いられた。これらの実験でＣよ、ＨＥｐ−２細胞をＨＳＶ−２に感染させ、そして感染後０から１２時間において、３５Ｓメチオニンで標識した。前に記載したＪ、Ｖｉｒｏｌ、、６３：３３８９（１９８９）の方法を用いて、抽出物を調製し、そしてＡＤＰＲＴに対する抗体で免疫沈降を行った。リボヌクレオチド還元酵２は、ウィルスのＤＮＡ合成に関与する酵素の一つであり、その発現はウィルス増殖のために必要である。従って、抗ＡＤＰＲＴ抗体に対するコントロールとして、ＨＳＶ−２リボヌクレオチド還元酵素（ＲＲＩ）の大サブユニ、ｌ−中の１３個のアミノ酸残基からなる合成ペプチド（ＬＡＩ）に対する抗血清が用いられた。ＨＳＶ−２に感染後すぐ、ＬＡＩ抗体は、ＨＳＶ　ＲＲＩのみを沈澱させることが示された。

感染後遅くに、Ｈ３Ｖリボヌクレオチド還元酵素（ＲＲ２）の小サブユニットが合成される場合には、ＬＡＩ抗体がＲＲ２および、ＲＲＩと共に合成されたまだ特徴的でない細胞タンパクの両方をも沈澱させる。これは図１２の第４レーンにおいて示されている。

ＬＡＩ抗体は同様に標識化された非感染細胞由来のいかなるタンパクも沈澱しないことが示されている（図１２、第３レーン）。ＡＤＰＲＴに対する抗体は非感染細胞由来のＡＤＰＲＴを沈澱させる（図１２、第ル−ン）。ＨＳＶに感染した細胞では（図１２、第２レーン）、それはＡＤＰＲＴだけでなく　ＲＲＩおよびＩＣ３ＰＩＩ／１２　（これは、ＤＮＡの巻戻しおよび？Ｊ！製に必要とされる主要なＨＳＶ　ＤＮＡ結合夕／バクである）も沈澱させる。

これらのデータは、ＡＤＰＲＴがＨＳＶ？！ｌに必要とされるＨ３Ｖタンパクと複合体を形成し、それによってウィルスの増殖に寄与することを示している。

効月− ６−アミノ−１，２−ベンゾピロン類は、有効で、特異的かつ非毒性の抗ウィルス剤であり、ＨＩＶＳｌ（ＳＶおよびＣＭＶのようなウィルスの増殖を選択的に阻害する。従って、これらの薬剤はこれらのウィルスによって引き起こされるウィルス性疾病、つますＡＩＤＳ、ヘルペス性の病変およびサイトメガロウィルスの感染の処置、に有用である。６−ＡＢＰによる処置は他のウィルス性疾病に対してもまた有効であると期待される。

実施において、本発明の化合物、つまり式Ｉの置換されたあるいは置換されていない６−ＡＢＰ、あるいはその任意の薬学的に許容され得る塩は、宿主細胞中でのウィルスの発現を阻害するのに充分な量で投与され、そしてこのような目的のために最も適する薬学的形態で投与される。

本明細書に記載されている活性化合物および塩は、治療薬として許容され得る任意の投与形態によって投与され得る。

これらの方法には、全身投与あるいは局所投与、例えば、経口的、非経口的、経皮的、皮下的あるいは局所的な投与形態が含まれる。これらの薬剤の好ましい投与方法は静脈内投与であるが、被験者がＨＳＶ病変および潰瘍のような局所的な病変を有する場合には、局所的な投与が適切であり得る。場合によっては、組成物を他の非経口的あるいは経口的形態で投与する必要があり得る。

意図される形態によって、組成物は、好ましくは投薬単位量で、例えば、注射剤、錠剤、坐薬、丸剤、除放性カプセル、粉末、液体、懸濁剤等のような固体、半固体あるいは液体の投薬形態であり得る。組成物は、式■の活性６−ＡＲＰ化合物あるいはその薬学的に許容され得る塩を含み、そしてそれに加え、任意の従来の薬学的な賦形剤および他の医薬物質あるいは薬学的物質、キャリアー、アジユバント、希釈剤などを含み得る。

投与される活性化合物の量は、当然、処置される被験者、被験者の体重、病気の程度、投与形式および処方する医師の判断に依存する。しかし、有効な投薬量は０，０１〜５０００　ｍｇ／ｋｇＺ日の範囲内であり、好ましくは０．１〜１０００　ｍｇ／ｋｇ７日、より好ましくは１〜１ｏｏ　ｍｇ／ｋｇ　／日である。

その上限は、当然、患者に毒性作用が現れるときである。しかし、本発明の化合物が実用的には無毒性であるため、投与量は必要なだけ多くし得る。

固体組成物では、式Ｉの活性６−ＡＲＰ化合物に加え、賦形剤、例えば、製薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンンーダ、タルカム、セルロース、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウム等力用い得る。上述で定義した活性６−ＡＲＰ化合化合物言た、例えばプロピレングリコールのようなポリアルキレングリコールをキャリアーとして用いた坐薬としても処方し得る。

液体、特に注射剤組成物は、例えば水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール等のような薬学的な溶液に、活性６−ＡＢＰ化合物工を例えば、溶解したり、分散することなどによって調製し得、その結果、注射剤溶液あるいは懸濁剤が作製される。

非経口注射剤の投与は、皮下、筋向あるいは静脈内の注射および注入に一般的に用いられる。注射剤は、液体溶液あるいは懸濁液のいずれかの従来の形態、あるいは、注射前に液体に溶解するのに適した固体形態として調製し得る。

最近考案された非経口投与のためのアプローチは、一定の投薬レベルの持続を確実する除放性あるいは持続性の放出系の移植片を利用する。例えば、この明細書に参考文献として援用されている米国特許第３，７１０，７９５号を参照のこと。

肝臓内でニトロン誘導体は迅速に解毒されるため、通常、６−ＡＲＰは経口的には有効でないであろう。しかし、肝臓内でのこのような迅速な代謝を防ぐグルタチオン抑制薬剤を同時投与するのに相当する６−ＡＲＰの適切な化学的修飾法が開発されると予期され、そして全ての他の可能な薬学的組成物と同様に、本発明の範囲内にある。

所望するならば、投与される薬学的組成物はまた、少量の無毒性補助物質、例えば湿潤剤あるいは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、および、例えば、酢酸ナトリウム、オレイン酸トリエタノールアミンなどのような他の物質を含有し得る。

このような投薬形態の実際の調製方法は、公知であるか、あるいは当業者に明白であり、そしてＲｅｍ１ｎ　ｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａ、　１７ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、　１９８５に詳細に記載されている。投与される組成物あるいは調合剤は、いずれにしても、患者に治療上有効な量が供給されることを確実するような量で、活性化合物あるいは複数の活性化合物を含有する。治療上有効な量とは、処置される被験者に症状の発生を妨げるが、あるいは存在する症候を軽減するのに有効な量を意味する。

任意の薬学的な組成物は、活性６−ＡＲＰ成分を０．１〜９９％含有し、好ましくは１〜７０％含有し得る。

６−ＡＢＰの作用形管のかなり詳細な知識に基づき、６−ＡＢＰの医療的な有用性に関する予測を明確に述べることが可能である。

６−ＡＢＰ、好ましくはその薬学的に許容され得る任意の塩の形態、例えば塩酸塩は、水性溶媒中ではがなり良く溶解する分子である。ｐＨ７，２〜７．９で１０〜１２　ｍＭ溶液を形成し得る。この溶液は、暗所下で保存するならば、室温で、僅がな分解（０，１０２より少ない）はあるが、数カ月安定である。このような溶液は静脈注入の調合剤として用いる場合かなり安定である。静脈注入は、いかなる病期の旧Ｖに対しても、おそらく最も有効な投与形態である。６−ＡＢＰは庇液脳関門を通過することが知られているため、ＡＩＤＳ神経障害の処置に有効である。６−ＡＢＰはまた、Ａ　ＩＤｓ関連の内部器官のカボジ肉腫の処置にも有効である。

適切に処方すると、皮膚疾患に対しても有効である。

ＡＩＤＳ患者において、約１ｇの６−ＡＲＰ／平均注入体重は典型的に有効な化学療法を提供する。化学療法は、ＨＩＶが検出されるとき、あるいはまだ検出されないときでも、間欠的に繰り返し得る。

その上、無毒性であるため、６−ＡＲＰ治療は、単独で供給し得るか、あるいは他の抗ウィルス剤または他の薬剤、例えばＡＺＴ２抗生物質、フルチフステロイド、ビタミンおよびその他の薬剤、と組み合わせて供給し得る。作用形態がかなり異なり、かつ６−ＡＢＰと池の薬剤との可能な相乗作用が予想可能であるため、Ａ　ＺＴ、他のこのような毒性の薬剤でも、６−ＡＲＰと共に使用することは禁忌ではない。

６−ＡＢＰ化合物は、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２の両者により引き起こされるヘルペス性の病変の処置に同様に有用である。この薬剤は、好ましくは、静脈注入あるいは他の非経口的または全身的投与形態によって投与される。潰瘍の場合、この薬剤はまた局所的にも投与し得る。ＣＭＶによる感染は、好ましくはＡＩＤＳの処置のために提案したと同じ様式で処置される。

６−ＡＢＰの一つの主な利点は毒性がないことである。この薬剤が、ウィルス増殖に関与する酵素ＡＤＰＲＴに対してのみ非常に特異的に作用するが他のいかなる酵素には作用しないため、好ましくない副作用を全く有さない。

副作用および毒性が全（ないため、この薬剤は、存在しているＨＩＶ、　ＨＳＶおよびＣＭＶあるいは他のウィルス感染の処置にだけでなく、このような感染の予防にも都合よく用いられ得る。

また免疫抵抗性が低下した場合、二次ウィルス感染の発生を防ぐためにも、予防的に投与され得る。

より親油性の分子を生成するＲ１−Ｒ６上の置換を有する置換６−ＡＢＰ類は、より容易に細胞壁を透過し、そして６−ＡＲＰよりもさらに高い効力を有し得、従ってより低い濃度でより有効であり得る薬剤を与える。

以下の調製および実施例は本発明を例示するためのものである。これらは本発明を狭めるもの、あるいは本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

６−ＡＲＰの様々な置換基（式に示されているように）は、細胞透過に関する脂肪溶解速度を、従って臨床の投薬スケジュールをおそらく改変するが、上記の生化学的な機構は置換によって分子レベルではおそらく変化しない。

友直見よ区且旦ウィルス　・なおよびウィルスＶｅｒｏ　（アフリカミドリザルの腎臓）細胞およびＭＲＣ−５（ヒト肺繊維芽細胞）細胞（Ｍ、Ａ、　Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、　Ｍａｒｙｌａｎｄ）を、２５　ｍＭのＨｅｒｐｅｓバッファーおよび１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むイーグル最小必須培地（ＭＥＭ）中で増殖させた。

ヒトの類表皮癌Ｎｏ、　２　（ＨＥｐ−２）細胞を、１０％　ＦＢＳ含宵１９９培地中で増殖させた。Ｍ、Ａ、　Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓから市販されているアカゲザルの腎臓（、ＲＭＫ）細胞をイーグルのＭＥＭ中で増殖させ、２％のＦＢＳで維持した。Ｕ９３７ヒト単球性細胞を、１０％ＦＢＳおよび１％ピルビン酸ナトリウム含有のＲＰＭＩ中で増殖した。元来ＮＩＢから得られた、Ｔ細胞白血病細胞、ＭＴ２をｉｏ％ＦＢＳ含有のＲＰＭ［１６４中で増殖させた。

単純ヘルペスウィルス（ＨＳＶ）　１型および２型（それぞれ、ＦおよびＧ株）をＨＥｐ−２細胞中で増殖させ、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

」二ｉ、、　８３：２７８７　（１９８６）に記載されているように液体オーバーレイ下でプラークアッセイして力価を測定した。

アデノウィルス、呼吸シンシチウムウイルス（Ｒ３ｖ）、インフルエンザウィルス、エンテロウィルスおよびサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）は、臨床医療機関で得られた患者からのオリジナル単離株である。ＣＭＶは、１０％ＦＢＳ含有のＭＥＭ中のＭＲＣ−５細胞中で増殖させ、ＨＳＶは、２％ＦＢＳ含有のＭＥＭ中のＨＥｐ−２細胞中で、増殖させ、アデノウィルス、インフルエンザウィルスおよびエンテロウィルスは、０．８％ウシ血清アルブミン（Ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｖ）および２５　ｍＭ　［１ｅｒｐｅｓバツフアー（インフルエンザ）あるいは２％ＦＢＳ　（アデノウィルス、エンテロウィルス）含有のＭＥＭ中のＲＭＫ細胞中で増殖させた。ＨＩＶ−１は元来ＮＩＨから得られ、Ｍｏ１ｔ３細胞中で増殖させた。

ＣＭ’／およびＲＳＶアデノウィルスおよびエンテロウィルスのウィルス力価は、５０％細胞変性効果（ＴＣＩＤ５０）をもたらす最大希釈として表現される。

［１ＳＶ−１および）ＩＳＶ−２のウィルス力価は、ｌ　ｍｌ当たりのシンシチウム形成単位（ＰＦＵ）で表現される。■ＩＶ力価は、ＭＴ２細胞でアッセイしたシンシチウム形成単位（ＳＦＵ／ｍｌ）で表現される。インフルエンザウィルスは赤血球凝集反応でアッセイし、その力価は５０％赤血球凝集を引き起こす最大希釈として表現される。このアッセイでは、感染したＲＭＫ細胞を入れたチューブを、１．５時間４°Ｃで、ハンクスの平衡塩類溶液中の０．５ｚギニアビッグ赤血球細胞懸濁液に曝して、洗浄し、付着細胞を計数する。

プラスミド全てのキメラＣＡＴ構築物は、真核性のプロモーター配列のないＣＡＴ構造遺伝子を含むｐＣＡＴＢ’で調製された。プラスミドｐｌＧＡ１５内のウィルス配列の標的位置には、Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　６３：２７７３　（１９８９）１．：記載されティるＨＳＶ−１＋７）　１Ｅ１７５およびＩＥＩＩＯタンハク質の遺伝子を含む。

ＤＮＡ　）ランスフェクションＤＮＡ　トランスフェクションをＤＥＡＥデキストランで行った。要するに、Ｕ９３７細胞（５Ｘ１０’）を、６０分３７℃で、１５　ｍｌのスナップキ＋　ツブ６Ｘ３５ｍｍポリエチレン皿（Ｃｏｓｔａｒ、　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、　Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）中で、５ＴＢＳバツフｙ　−（１３７ｍＭ　ＮａＣ１，０，５Ｍｇｃ＋２．０．７　ｍＭ　ＣａＣｌ２、および５　ｍＭ　ＫＣＩ含有の２５ｍＭ）リスＨＣＩ。

ｐＨ７，５、および０．６　ｍＭ　Ｎａ２１（ＰＯ４）中のＤＥＡＥデキストラン（１゜０５　ｕｇ／＋１）およびＤＮＡ混合物に、１ウエル当たり５ＸＩＯ’ 細胞を曝した。慣例的に、トランスフェクション混合物は、核酸濃度効果を均等にするために１．Ｏｕｇの標的スーパーコイルプラスミドおよびＯ，ｌｕｇのＤＮＡを含ませた。トランスフェクトされた細胞を、トランスフェクション後の４０〜４４時間に、ＣＡＴ採集バッフｙ　−（１５０ｍＭ　ＮａＣ１，１ｍＭ　ＥＤＴＡ含有の４０ｍＭ）リス、ｐｔ＋７．４）で採集して、アッセイまで一２０ ℃で保存した。

でセライトを通して吸引濾過して触媒を除去し、そしてローハ、０．２　ｕｃｉの［＋４ｃ］−クロラムフェニコール基質を用い、インキュベーション時間は６０分である。ＣＡＴ活性および活性化倍率の定量的測定では、適切な切片を薄層クロマトグラフィーから切り取り、シンチレーション液体を加え、そして放射活性をシンチレーションカウンターで測定した。酵素濃度および時間に伴うクロラムフェニコール−酢酸生成物量の測定によって定量的比較を行った。ｐｓｖ　ＣＡＴをポジティブコントロールとして、そして親（ｐＣＡＴＢ’　）をネガティブコントロールとして用いた。

大ＩＬＬ６−アミノ−１２−ベンゾピロン　の−この実施例は６−アミノ−１，２−ベンゾピロン類の調製を例示する。

６−アミノ−１２−ベンゾピロン　の−１６−ＡＢＰの調製に用いた方法は、Ｊ、　Ｈｅｔｅｒｏｃ　ｃｌｉｃ　Ｃｈｅｍ、、　２３：８７　（１９６８）に報告された方法の改変法である。

フード内で、１２５Ｉｌｌのフラスコ中の、３０　ｍｌの水に懸濁した０、５０ｇの活性化カーボン上の１０％のパラジウム触媒に、３５ｍ１の水中の水素化ホウ素カリウム水溶液（２，７０ｇ、、　０．０５０モル）をゆっくり加えた。次に、組み合わせた混合物を、マグネチノクスターラーを備えた２リツトルのフラスコに移し、市販の６−二トロー１，２−ベンゾピロン（３，８２ｇ、、　０．０２０モル）の１０１００Ｏのメタノール溶液を室諷にて徐々に添加した。添加を終了した後、この混合物をさらに１５分間攪拌し、ブフナー漏斗上ＡＢＰに、ＨＳＶ−１あるいはｌｌ５Ｖ−２（５〜１０　ＰＦＵ／細胞）による感染タリーエバポレーターによりメタノールを除去した。残留物を冷水に懸濁し、ブフナー漏斗上に注いで回収した。乾燥した後、この物質をエタノールで再結晶し、２．１８　ｇ　（６８％収量）の黄色の生成物（ｍ、ｐ、　１６６〜１６９°Ｃ）を得た。質量スペクトル：　１６１　（Ｍ＋）　、１３３．１０４．７８．５２゜そして／あるいは調製方法の項の記載に従って修飾を導入した。

塩酸６−アミノ−１２−ベンゾピロンの一製６−アミノー１．２−ベンゾピロン（１，６１ｇ、、０．０１０モル）の２０ｍ１の水の懸濁液を攪拌しながら、アミンが溶解するＣｐＨ３〜４）まで２Ｍの塩酸水溶液を滴下した。次に、この溶液を濾過し、ロータリーエバポレーターおよび真空ポンプにより水を除去した。

次に、乾燥残留物を熱無水メタノールに溶解し、活性化脱色剤で処理し、塩酸塩の薄い黄色の結晶（ｍ、ｐ、　２８０〜２８５°Ｃ１分解）を得た（１．６０ｇ、、８１％収量）。質量スペクトル：　１６１　（Ｍ−ＨＣＩ）　＋、１３３．１０４．７８．５２．５１゜他の塩類は、同方法あるいは類似の方法によって、塩酸の代わりに他の適切な酸を代用して調製される。

Ｋ血丘主ＨＳＶおよびＣＭＶＩ：ｌする６−ＡＢＰノこの実施例は、）ＩＳＶあるいはＣＭＶのいずれかに感染させた培養細胞中でのＦＩＳＶおよびＣＭＶの複製に対する６−ＡＲＰの阻害活性を例示する。

Ｖｅｒｏ％ＭＲＣ−５細胞のＨＥｐ−２を、０．１〜１０ｍＭの種々の濃度の６ −の前（２４時間）、感染の間（０時間）および感染後（４時間）の種々の時点で曝し、そして２４時間後にウィルス力価を測定した。

その結果は既に図ＩＡ、　ＩＢ、　２Ａおよび２Ｂの項で論じられている。感染前、感染中および感染後に処理した場合、６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（６−ＡＢＰ）はＨＳＶの増殖を阻害した。同様の結果がＣＭＶに関して得られた。

感染ノ２４時間前テノ６−ＡＲＰノ添加は、ＨＳＶ−１あるいはＩ’１ＳＶ−２の力価を投与量に依存して低下させた。この両方の場合では、ＨＳＶ−２はＨＳＶ−１よりかなり感受性であった。すなわち、１　ｍＭの６−ＡＲＰの添加はＩ（ＳＶ−１の増殖の５０％阻害をもたらしたが、１　＋ｉＭの６−ＡＲＰで処理した細胞でＨＳＶ−２の増殖の９０％阻害が観察された。

１０　ｍＭより高い濃度の６−ＡＢＰに曝した培養物では、阻害は著しく増加しなかったことにより、ウィルス増殖を著しく阻害するには１０　ｍＭの投与量で充分であることが示された。

感染時（０時間）あるいは感染後の４時間での６−ＡＢＰ処理は、本質的に同様の阻害パターンをもたらした。つまり、ＨＳＶ−２の増殖の８５％および７２％阻害が、感染後の０および４時間に１　ｍＭの６−ＡＲＰで処理した細胞でそれぞれ観察された。１０　＋ｕＭの６−ＡＲＰで同様に処理した細胞では、阻害は著しく増加しなかった。２４時間前処理した細胞で観察された結果と一致して、感染後Ｏおよび４時間に１　ｍＭの６−ＡＢＰで処理した細胞では、ｌ’１ｓＶ −１の増殖に対する阻害効果は幾分低く、それぞれ６０〜６５％阻害をもたらした。１０　ｍＭの６−ＡＲＰで処理した細胞では、阻害は約８０％であった。

これらのデータは、１　ｍＭはどの低い濃度の６−ＡＢＰで前処理あるいは処理した細胞中でのＨｓｖ−ｉおよびＨＳＶ−２の増殖に対して、６−ＡＢＰが著しい阻害効果を及ぼすことを示している。感染４時間後ではウィルスの復製を導く早期ウィルス機能のほとんどが既に発現しているが、このような遅い時に細胞を処理しても、阻害はまだ観察される。

ＨＥｐ−２、ＶｅｒｏおよびＭＲＣ−５細胞におけるウィルスの増殖を比較する研究から、本質的に同一の結果が得られたように、６−ＡＢＰの阻害効果は細胞のタイプに影響されない。

ＣＭＶ感染の培養細胞を用いて、上記に述べた研究と同じような研究を行った。

表１に示されているように、６−ＡＢＰ処理はＣＭＶの増殖をも効果的に阻害する。しかし、ＲＳＶ、インフルエンザウィルス、アデノウィルスおよびエンテロウィルスのような他のウィルスを６−ＡＢＰ処理する研究において、このような処理は、表１に示されているように、ＨＳＶ、インフルエンザウィルス、アデノウィルスおよびエンテロウィルスの増殖に対して効果を持たないようである。

この実験では、細胞をｌ　ｍＭの６−ＡＢＰに２４時間曝してから、感染させた。ウィルス力価を最大ＣＰＨのときに測定した。エンテロウィルスはＥＣＨＯ− １１であった。

（以下　余白）表　１ウィルスのｔ４　＋１声−１−クー謁６−ＡＢ’Ｐだ１里の勧ウィルス　＋６− ＡＢＰ　−６−ＡＢＰ　士　阻害率ＣＭＶ　：ＬＸ１０３１ｘｌＯ’　９０Ｒ５Ｖ　１．　ｘ　１０５１　ｘ　１０５０・イ′／フルニー／１−　１　ｘ　１０ ’　１　ｘ　１０’　０アプーノ→イルス　：Ｌ　Ｘ　１０２　１　Ｘ　１０２　０Ｈ５Ｖ−２２ｘ　１０５１６　ｘ　１０６Ｂ７．５エソテロライＩレス　１．６　Ｘ　１０６　Ｌ６　Ｘ、１．０６　０実ＪＬ［ｌ一定のＤＮＡによる旧Ｖの活性化に夕・する６−ＡＢＰの阻　を果この実施例は特定のＤＮＡによる旧■の活性化に対する６−ＡＢＰの阻害効果を例示する。

一つの実験の／リーズでは、ＭＴ２細胞における旧Ｖの増殖の指標であるシンシチウム形成のアッセイを用いて、［ｆｌＶの複製に対するＨＳＶ　ＩＥＩＩＯおよびＣＭＶ　ＩＨ２の遺伝子発現の効果を調べた。旧■の増殖活性化に対する６ −ＡＲＰの阻害能力を２つの培養物テ調へた。Ｕ９３７細胞をＨＳＶ　ＩＥＩＩＯあるいはＣＭＶ　ＩＨ２）遺伝子でトランスフェクトし、あるいはｐＢＲ３２２プラスミドで疑似トランスフェクトし、モしてＨＩＶで感染させた。その後の種々の時期に、ウィルス（ＨＩＶ）の増殖をアッセイした。）ＩＩＶ力価はノン／チウム形成単位／ｍｌで表現される。

トランスフェクションは旧■感染の２４時間前に行った。ＨＩＶ感染後の３．５．６、および８日目にサンプリングした。細胞間の６−ＡＢＰ濃度を外部の薬剤 ′ａ度と平衡化するため、６−ＡＢＰ処理をトランスフェクションの２４時間前に行った。選んだ時期および投薬量は薬剤の透過性に関連している。ＳＦＵア、セイは、５ｃｉｅｎｃｅ、　２９９：５６３　（１９８５）に記載されているＨａｒａｄａの方法であり、顕微鏡でシンシチウムを直接定量するために■二匡■ 。

１６７：２９９　（１９８８）の記載に従って改変した。

結果は、表２に示され、６および８日目（グループ４）にＨＳＶＩＥＩＩＯでＵ９３７細胞をトランスフェクションすることによって、ＨＩＶの複製が１００倍促進されることを示している。別の実験は、ＣＭＶ　ＩＨに曝すことによっても複製が７倍活性化されることを示す。ｌ　ｍＭの６−ＡＲＰに曝すと、ＨＳＶ　ＩＥＩＩＯによる活性化は事実上打ち消される。これはおそら＜ＨＳＶ　ＩＥＩＩＯの遺伝子発現に対する阻害効果によるものであろう。これらの知見はＣＡＴアッセイで得られた結果と実質的に同一である。

（以下　余白）ゑ　２６−ＡＢＰＴ”　ｒＬｆｆＬｒ：に＋ｖ　？Ｌ中７−のＨＬＶｎＸ　３３＝Ｕ９］７　ＳＦＵ／ｍｌｌ　Ｕ９３７　＠、％ｆｉ　２７　ユ０７　１０７　１３３２　Ｕ９３７＋６− ＡＢＰ　１３　１０　１０　１゜３　Ｕ９３７＋ｐＢＲ３２２３２２５０２５０２５０’Ａイエ又）ラン又フェクシタソ４　Ｕ９３７＋　ＨＳＶ　工ＥＩＩＯ１６０３５０１５，０００１５，０００５Ｕ９３７＋Ｈ５ＶｒＥｌｌＯ＋３２　６４　１００　１００６−ＡＲＰ　（ｌ　ｍＭ）ＨＩＶ力価はシンシチウム形成単位／ｍｌで表現される。

６−ＡＲＰは、活性化Ｈ３Ｖ遺伝子が存在しないときでも、ＨＩＶの増殖を著しく減少させた。これは６−ＡＢＰがＦＩＩＶの増殖に対して高い阻害効果を有するという知見と一致する。

夫立五土この実施例はマクロファージ中でのＨＳＶおよびＣＭＶ媒介のＨ［Ｖ活性化に対する６−ＡＲＰの効果を例示する。

マクロファージ中でのＨＳＶおよび／あるいはＣＭＶ媒介の■Ｉ＋／活性化に対する６−ＡＢＰの効果を調べるために、Ｕ９３７細胞を、ＨＳＶおよびＣＭＶの公知のトランスアクティベーター遺伝子である■ＩＶ−ＬＴＲｃａｔで同時トランスフェクションして、方法および材料の項に記述した方法を用いてＣＡＴ発現をアッセイした。その結果を表３に要約した。

表　３ＨＩＶ−Ｌ　Ｒの３′ト主イ乙ｌ−”、する６−ＡＢ’Ｐｍｉ釆Ｅｘｐ　ｋｓｒｘｂＴ；ｏＮＡ　％・）ｔにチも」トド　ｐＢＲ３２２（コントロール）　０２、　ＨＳＶ−工Ｅ−１１０１２５３、ＨＳＶ−工Ｅ−１７５１４、ＨＳＶ−工Ｅ−４１０＋　６−ＡＲＰ　（５ｍＭ）　２０５、　ｐＢＲ：３２２　＋６−ＡＢＰ　０表３に示したように、Ｕ９３７細胞の旧Ｖ−ＬＴＲｃａｔおよびＨＳＶ−ＩＥｌｌｏあるいはＣＭＶ　ＩＥ２遺伝子による同時トランスフェクションは、１２５倍の著しい旧Ｖ−ＣＡＴ発現の活性化をもたらした（実験２）。実験２と４との比較から見られるように、この活性化は０〜ｌＯ倍に著しく減少した。実験３から見られるように、ＨＳ’／　ＩＥ１７Ｓの導入は、これらの細胞中でのＨＩＶ−ＣＡＴ発現を促進しなかった。

大Ｊｌｔ主立　中の　立　の生　数に・　る６−ＡＲＰの　Ｉ（＋’／効果この実施例は樹立した培養細胞中での旧Ｖの複製に対する６−ＡＢＰの直接阻害効果を例示する。

ＡＡ−２細胞に対する６−ＡＢＰＢＰＯ４果を、細胞計数および、クローニング効率およびトリパンブルー取り込みを含む細胞生死判別テストにより直接分析した。１ウエル当たり０．５Ｘ１０５の出発細胞数を有するＡＡ−２培養細胞を３　ｍＭの６−ＡＢＰで処理し、そしてそれを無処理（コントロール）培養細胞と比較した。

６−ＡＢＰＢＰＯ４日後に細胞数を計数した。その結果を表４に示した。

表　４出シ乙め釉蛸己言を含虻／！ｃｍ＠Ｚ＊＋を−し　斗日電０．５　ｘ　１０’　（±　２０４）　１．５　ｘ　１０５　（士　コ０Ｎ）６ −５　１　・７　５４生死判別テストでは、６−ＡＢＰの毒性作用は全く見られなかりた。

６−ＡＲＰが細胞増殖に対して阻害効果を及ぼすこと、そしてその効果が一時的であり、可逆的で、かつＨＩＭ複製の完全排除と同時に起こることが両方明かである。しかし、ＡＡ−２細胞では、細胞分裂の減速は、他の薬剤の細胞増殖抑制性の抗癌作用を予測する現象である任意の検出可能な細胞毒性とは同時に起こらない。細胞毒性を伴わないため、これは独特である。

Ｋ血匠立１部　に　ムするＨＳＶこの実施例は複製（ｏｒｉ、）開始部位のＡＤＰＲＴに結合するＨ３ｖＤＮＡを例示する。

Ｉｓ’／−１の２３０　ｂｐのＸｂａｌ−Ｈｉｎｄｌｌｌ　ｏｒｉ、　ＤＮＡをプラスミドｐＫＣ４から単離し、そしてＥ、　ｃｏＨのＤＮＡポリメラーゼのフレノウ断片によるｆｉｌｌ−ｉｎ反応によって［３２Ｐ］ｄＣＴＰで放射標識した。ムＶｉｒｏ１．．６３：２７７３　（１９８９）に以前記載された方法に従って、標識したＤＮＡフラグメントを精製した。

Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２６３＋１５０５　＜１９８８）に記載の方法に基づくニトロセルロースフィルター結合アッセイヲ用いて、ｏｒｉ、　ＤＮＡへのＡＤＰＲＴの特異的な結合を調べた。ニトロセルロースフィルター（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　ａｎｄ　５ｃｈｕｅｌｌ、　ＢＡ　８５．０．４７　ｕｎのポアサイズ、直径２７　ｍｍ）を結合バッフｙ　（２５０ａ＋Ｍ）リス−Ｃ１，ｐＨ８，０，１００ｍＭ　ＭｇＣｌ□、ｌｏｏｏｍＭ　ＮａＣｌ５Ｏ，６ｍＭ　ＤＴＴ、　０．１　ｍｇ／ｍｌ　ＢＳＡ、　０．１　ｍＭ　ＰＭＳＦおよびＱ、　Ｌ　ｍＭ　ＴＬＣＫ）に６０分間予め浸した。

５ｕｌの［３２Ｐ］　ａｒｔ、　ＤＮＡを２１０　ｕｌの冷した結合バッファーに加え、１分間インキュベートした。次に、ＡＤＰＲＴ　（２００ｎｇ）あるいはＨＳＶ−１感染Ｖｅｒｏ細胞の抽出物（Ｖｅｒｏ（Ｆ）、２　ｕｇ）のいずれか２　ｕｌを、このＤＮＡ溶液に加え、そして２５℃で１０分間インキコベートした。サンプルを氷に移し、次いでニトロセルロースフィルターを通して濾過した。次に、２５ｍＭ）リス−Ｃ１，ｐＥＩ　８．０Ｓ１０　ｍＭ　ＭｇＣｌ２．０．５　ｍＭ　ＤＴＴ、　１００　ｍＭ　ＮａＣ１，５％ＤＭＳＯ含有の冷した洗浄バッファーでこのフィルターを４回洗浄した。フィルターを乾燥し、そしてフィルターに結合している放射性物質の量をシンチレーションスペクトロフォトメトリーで測定した。

その結果は２つのサンプルの平均で表現され、表５に示されている。投入ｏｒｉ、　ＤＮＡは８．０００／サンプルであった。

（以下　余白）ゑ　５Ｍ　７７’　ＩＶ　７＜＋ｎ−１１給に　％ＣＰＭ　１璽りワ斥右４ドセＯｒｉ、　ＤＮＡ　ｉＱ　１７２０ｒｉ、ＤＮＡ　十　Ｖｅｒｏ　（Ｆ）　１２２０　１３．２０ｒｉ　ＤＮＡ　十　ＡＤＰＲＴ　６フＢ４　７８．にの結果は、ＨＳＶ−１のｏｒｉ、　ＤＮＡフラグメントへのＡＤＰＲＴの結合が特異的であり、そしてＨＳＶ−１起点結合タン、ｆり質を含む感染細胞の抽出物で以前観察された（　Ｐｒｏｃ、　ＮａｔニーＡｃａｄ、　Ｓｅｔ、−、８５：２９５９　（１９８＆））結果より、著しく強（Ａことを示して０る。

試験した条件下では、フィルターへのＤＮＡ単独の結合は最小であるが、利用できる１）ＨＡの８０％近くを結合させるのに充分な様式で、ＡＤＰＲＴはｏｒｉ、　ＤＮＡと複合した。

宜ｆｆ１ＡＩＤＳ患　から′８られたヒトリンパ　球　での旧Ｖ　のこの実施例は、ＡＩＤＳ患者から得られたヒドリン、ｆ芽球中での旧Ｖ増殖↓二対する６−ＡＲＰの阻害効果を例示する。

これらの実験に用いたＨＩＭ単離株は感染患者の血液力）ら単離された。単離後、ＨＩＶ感染をＣＥＭ細胞で樹立した。組織培養物に対する感染必要量＜　Ｔｃ　ＩＤ）の濃度を測定するためにその力価が測定されたＨＩＶウィルスの株を生産するのに、これらの感染細胞は用いられた。

６　ＡＢＰは、必要に応じてさらに希釈し得る量で食塩本に溶解−１そして細胞を含む培地に、表示した濃度で添加された。

非感染の正常個体由来のヒト末梢血単核細胞を、組織培養中で、ファイトへマグルチニンで２〜３日間刺激し、洗浄し、小分けし、そして２０．０丁ＣＩＤあるいは５０７ＣＩＤのＩ（ＩＶと共に一晩培養し、そして無処理か、あるいは０．０１．０．１．１．０あるいは１０、Ｏｄの６−ＡＲＰで処理した。旧Ｖの非存在下で、別のコントロールを１０　ｍＭの６−ＡＲＰと共にインキユベートした。−晩のインキニベーシゴン後、残査を取った。追加の６−ＡＲＰは無しで、ＩＬ−２を含んだ培地で細胞を培養し、６日および１２日に、旧Ｖ−９２４コア抗原の産生、あるいは粒子化した逆転写酵素に関する測定で、モニターした。これらの旧Ｖの指標のいずれかの量の減少は、６−ＡＢＰが正常なヒトリンパ芽球中での旧Ｖの複製能力を阻害することを示している。

ＨＩＶ　ｐ２４抗原をＥＬＩＳＡで、Ｓ　ｐｇ＋ｎ／＋ｏｌをカットオフとして測定した。組織培養液からの遊離のウィルスを遠心沈降し、界面活性剤、マグネシウム、Ｈ３で標識したｄＴＴＰおよびポリｒＡ、オリゴｄＴプライマーを含有するバッファー中で旧Ｖを溶菌し、１時間インキュベートし、そして沈降可能な放射活性を測定することにより、粒子化した逆転写酵素を測定し、ＨＩＶ含有培地の単位容積当たりのｃｐｍとして表した。

培養の６日月に、ＩＬ−２、ＨＩＶおよびＨ３−チミジンと一緒の６−ＡＲＰに６時間曝した細胞をインキユベートして、そして培養中の１００．０００細胞当たりに取り込まれたＣｐＩｌｌの量を測定して、リンパ芽球の生存能力を測定した。

結果は図１０に示され、これは薬剤に１８時間だけ曝したヒトリンパ芽球の生存を表す典型的な実験を現している。［１ＩＶ（１）２４テスト）の激烈な減少は、感染の６日後（下の曲線）あるいは１２日後（上の曲線）に、０．１ｍＭの６ −ＡＲＰ濃度で既に起こっている。横軸は６−ＡＢＰＪ度を表している。

ヒトリンパ芽球を１８時間という比較的短い時間曝すことが、ＨＩＶ複製を選択的にブロックし、そしてリンパ芽球のＤＮＡ合成に対しては最小の影響しか与えないことを確かめるために、図１１に示した増殖、ｐ２４および逆転写酵素の実験も行った。

パネルＡ（−格上）では、リンパ芽球のＤＮＡ合成を６−ＡＢＰ濃度に関連する変化としてアッセイした。パネルＡ’　（その下の曲線）では、旧■複製の退化を同時に測定し、そしてＡ″パネルでは逆転写酵素をアッセイした。これら全ては容認されたＩ（Ｉ’／複製のアッセイである。

図１１により、６−ＡＢＰに曝した１８時間の間、６−ＡＢＰがＨＩＶ複製に対して非常に選択性であり、細胞のＤＮＡ合成には事実上影響しないままであることが明かである。

リンパ芽球を４日間続けて種々の濃度の６−ＡＲＰに曝すこと（パネルＢおよびＢ’）は、チミジンの取り込みにより測定したリンパ芽球のＤＮＡ合成に対しても阻害効果を有した。しかし、細胞の死滅が起こらず、従って、阻害は一時的、かつ可逆的であるので、リンパ芽球の生死は薬剤に影響されない。すなわち、６ −ＡＢＰの増殖阻害作用は、任意の現在用いられるあるいは入手可能な細胞増殖抑制物質と異なり、検出可能な細胞損傷あるいは細胞の死滅なしで達成し得る。

このことにより、当然、６−ＡＲＰによるＡＩＤＳ患者の適切な静脈注入処置が、リン、＜芽球に対する強い毒性効果なしで行われ得ることになる。

夫立五主６−ＡＢＰの　に　る　７この実施例はマウスに６−ＡＢＰを腹腔内投与した後、毒性がないことを例示する。

マウスに６−ＡＲＰを投与する２つの毒性テストを下記の条件で５匹のマウスからなる１つのグループに腹腔内注射で１　ｇ／ｋｇの量の６−ＡＲＰを与えた。

マウスを２４時間観察した。このグループのうち、４匹のマウスには中毒症状はなかった。１匹のマウスは、注射の４時間後に、発作および後脚の虚弱を発生したが、１８時間のうちに完全に回復した。

Ｋ版主：５０匹のホワイトマウスのグループに毎日６−ＡＢＰを２５０ｍｇ／ｋｇで１２日間腹腔内注射した。目に見える毒性作用はなかった。

マウスの行動は全く正常であった。通常の体重増加に途絶はなかった。

Ｆ工ＧＵＲＥ　Ｌｒ工ＧＵＲΣ　２Ｆ工ＧＵＲＥ　３ｒＬ１、　ローロ　ＨＩＶ　＋　Ｕ９”３７　＋　工Ｅ−１１０２、Ｘ−Ｘ　！（工Ｖ　＋　Ｕ９３７　＋　ＣＭＶ　工Ｅ３、　◆−◆　ＨＩＶ　＋　Ｕ９３７＋工Ｅ−１１０＋６−ＡＲＰ　（３ｍＭ）４、　４−ム　ｌ（工Ｖ　〒　Ｕ９３７　＋　ＰＢＲ−３２２（４ｉｐｊ−＋）−ランスλ７）ン〕５．０−ＯＨ工ｖ　＋　Ｕ９３７　＋　６−ＡＲＰ　（３ｍＭ）６、　ｍ−ｉ＋　Ｈ工ｙ　＋　Ｕ９３７　シント０−＋しｒ工ＧＵＲＥ　４１、ムーム　ＨＩＶ　＋　Ｕ９３７　＋工Ｅ−１１０２、　ローロ　ＨＩＶ　＋　Ｕ９３７　＋　ＣＭＶ工Ｅ３、・−・　ＨＩＶ　＋　０９３７　＋　ＰＢＲ− ３２２４、Δ−△　ＨＩＶ　＋　Ｕ９３７　コントロール５、ＩＩ−閣　ＨＩＶ　＋　Ｕ９３７＋工Ｅ−１１０＋６−ＡＢＰＰ工ＧＵＲＥ　５Ｆ工ＧＵＲＥ　６＋　クンドローｌレロ６−ＡＢＰ　（１ｍＭ）０６−ＡＢＰ　（３ｍＭ）ｒ工ＧＵＲＥ　７０＝　６５０Ｆ工Ｇ円ミ８６象　Ｈ工Ｖの永釈彦一一Δ−−：ｌ＋シト０−ルＯａ目 −→−−Ｐ！、処理４ｅ目 −−０−−６−ＡＲＰ　（３ｍｍｏｌ）６　Ｂ　！！ＦＩＧｔ７ＲＥ　９ −−４１−−　＠矧理　−６Ｆ３ヨー−△−−６−ＡＢＰ　（３ｍｍｏｌ）　’ｆｅ＃）ＦＩＧＵＲＥ　１０ＦＩＧＵＲＥ　工１

Claims

【特許請求の範囲】

１．哺乳動物のウィルス感染の治療方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に下式の化合物：（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、フェニルまたはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシあるいはハロゲンで置換されたフェニルから選択される；あるいは、それらの薬学的に許容し得る塩；の有効量を投与することを包含する、方法。
２．前記治療が静脈注射により効能を示す、請求項１に記載の方法。
３．前記化合物（Ｉ）が１日当たり１キログラム当たり０．１から１０００ｍｇの量で投与される、請求項２に記載の方法。
４．前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が水素である、請求項３に記載の方法。
５．前記投与量が１日当たり１キログラム当たり１から１００ｍｇである、請求項５に記載の方法。
６．下式を有する抗ウィルス物質：（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は、少なくとも１つのＲ置換基が必ず水素と異なり、そして、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が水素であるときには、Ｒ１はフェノールではないという条件で、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、フェニルまたはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシあるいはハロゲンで置換されたフェニルから選択される；あるいは、それらの薬学的に許容し得る塩；である抗ウィルス物質。
７．前記治療が静脈注射により効能を示す、請求項６に記載の物質。
８．前記化合物（Ｉ）が１日当たり１キログラム当たり０．１から１０００ｍｇの量で投与される、請求項７に記載の物質。
９．前記投与量が１日当たり１キログラム当たり１から１００ｍｇである、請求項８に記載の物質。
１０．ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルスあるいはサイトメガロウィルスによって引き起こされる哺乳動物のウィルス性の疾病の治療方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に下式の化合物：（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、アミノ、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、フェニルまたはアルキル、アルコキシ、ヒドロキシあるいはハロゲンで置換されたフェニルから選択される；あるいは、それらの薬学的に許容し得る塩；の有効量を投与することを包含する、方法。