JPH05310782A - 新規な発色団含有化合物及びそのインターロイキン−１βコンバーターゼ活性決定における使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】インターロイキン−１媒介による疾病の診断と
モニター、あるいはＩＣＥ阻害剤の評価において有用な
化合物の提供。 【構造】式Ｉ： （例えば で表わされる発色団含有化合物およびインターロイキン
−１β変換酵素（ＩＣＥ）活性決定におけるその使用。
ＩＣＥは、肺および気道、中枢神経系および周辺膜、目
および耳、関節、骨および結合組織、心膜を含む心臓血
管系、胃腸系および泌尿生殖器系、皮膚および粘膜の炎
症性疾病あるいは免疫に基づく疾病と関連している。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、インターロイキン−１
βコンバーターゼ活性の決定の際に有用な新規な発色団
含有化合物に関する。インターロイキン−１βコンバー
ターゼ（ＩＣＥ）は、前駆物質インターロイキン−１β
（ＩＬ−１β）の生物学上活性なＩＬ−１βへの変換に
関与する酵素であることが確認された。式ＩおよびＩＩ
で表わされる化合物は、ＩＬ−１媒介による疾病の診断
とモニター、あるいはインターロイキン−１βコンバー
ターゼの阻害剤の評価において有用である。

【０００２】

【従来の技術】ほ乳類インターロイキン−１（ＩＬ−
１）は、炎症反応の一部として細胞タイプによって分泌
される免疫調節性蛋白質である。ＩＬ−１産生の原因と
なる一次細胞タイプは抹消血液単球である。分子のよう
なＩＬ−１あるいはＩＬ−１を放出したり含むものとし
て、他の細胞タイプもまた記述されてきた。これらは上
皮細胞を含む。（Ｌｕｇｅｒ、ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ １２７：１４９３−１４９８（１９８１
年）、Ｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３
８：２５２０−２５２６（１９８７年）およびＬｏｖｅ
ｔｔおよびＬａｒｓｅｎ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓ
ｔ．８２：１１５−１２２（１９８８年）、結合組織細
胞（Ｏｌｌｉｖｉｅｒｒｅ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１４１：９０４−９１１
（１９８６年）、Ｌｅ他 Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３
８：２５２０−２５２６（１９８７年）、ニューロン基
原細胞（Ｇｉｕｌｉａｎ他Ｊ．Ｅｓｐ．Ｍｅｄ．１６
４：５９４−６０４（１９８６年）および白血球（Ｐｉ
ｓｔｏｉａ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：１６８８
−１６９２（１９８６年）、Ａｃｒｅ他、Ｍｏｌ．Ｉｍ
ｍｕｎｏ．２４：４７９−４８５（１９８７年）、Ａｃ
ｒｅ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：２１３２−２１
３６（１９８７年）．およびＬｉｎｄｅｎｍａｎｎ他、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １４０：８３７−８３９（１９８
８年）．生物学上活性なＩＬ−１は別個の２つの形態で
存在する。すなわち、約ｐＩ５．２の等電点を持つＩＬ
−１α、および、約７．０の等電点を持つＩＬ−１β
で、両形態とも約１７，５００の分子質量を持ってい
る。（Ｂａｙｎｅ他．，Ｊ．Ｅｓｐ．Ｍｅｄ．１６３：
１２６７−１２８０（１９８６年）およびシュミット、
Ｊ．Ｅｓｐ。Ｍｅｄ．１６０：７７２（１９８４年）．
ポリペプチドは、アミノ酸レベルで進化的に保存された
状態で出現し、約２７−３３％の相同性を示す。（クラ
ーク他、核酸Ｒｅｓ．１４：７８９７−７９１４（１９
８６年）。

【０００３】ほ乳類ＩＬ−１βは、約３１．４ｋＤａの
分子質量を持つ前駆物質ポリペプチド関連細胞として合
成される。（Ｌｉｍｊｕｃｏ他、Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡ
ｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８３：３９７２−３９７６
（１９８６年）．前駆物質ＩＬ−１βはＩＬ−１受容体
に結合させることができず、生物学上不活性である。
（Ｍｏｓｌｅｙ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ２６２：２
９４１−２９４４（１９８７年）．生物活性は、成熟１
７．５ｋＤａ形へ前駆物質３１．５ｋＤａ形を変換する
結果になる蛋白分解処理のある形に依存して現れる。Ｉ
Ｌ−１βを成熟させるために前駆物質ＩＬ−１βの変換
を禁じることによって、インターロイキン−１の活性を
有効に禁じることができるという証拠が強まっている。

【０００４】ＩＬ−１βを産生することができるほ乳類
細胞は、カラチノサイト、内皮細胞、糸球体間質細胞、
胸腺上皮細胞、皮膚繊維芽細胞、軟骨細胞、神経膠星状
細胞、神経膠腫細胞、単核食細胞、顆粒細胞、Ｔおよび
Ｂリンパ球、およびＮＫ細胞を含む（もっとも、これに
限定されるものではないが）。

【０００５】Ｊ．Ｊ．Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍなどによって
議論されたように（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａ
ｙ、ｖｏｌ．７（２）：４５−５６（１９８６年））、
インターロイキン−１の活性は多数ある。軟骨基質の分
解を促すカタボリンは、さらにＩＬ−１の胸腺細胞ｃｏ
ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ活性を示し、コラゲナーゼ中立プロ
テアーゼとプラズミノゲン活性化因子を放出するために
軟骨細胞を刺激する因子でもあることが観察された。さ
らに、蛋白質分解を引起す因子と名づけられたリンパ漿
因子は、順に、蛋白質分解、アミノ酸リリースおよび筋
肉消耗に結局は通じるプロスタグランジンを産生して、
筋細胞を刺激し、熱を引起し急性期反応と胸腺細胞共分
裂促進活性を持つＩＬ−１の分画を表すように思われ
る。

【０００６】ＩＬ−１は、炎症および創傷治癒に関係す
る細胞に対して多面的効果を持っている。ＩＬ−１の皮
下注射は、中性好性白血球の辺縁趨向、および多核白血
球（ＰＭＮ）の最大のリンパ管外浸潤に通じる。試験管
内の研究によって、ＩＬ−１がＰＭＮに対する白血球遊
走誘引物質であることが明らかになった。ニトロブルー
テトラゾリムを減少させかつそのリソゾーム酵素を放出
するために、グルコースをより急速に代謝するべくＰＭ
Ｎを活性化する内皮細胞は、刺激され、ＩＬ−１によっ
て増殖し、トロンボキサンを産生し、より癒着性を持
ち、かつプロコアギュラント活性を放出する。ＩＬ−１
は、さらに表皮細胞によってコラーゲンタイプＩＶの産
生を強め、骨芽細胞の増殖およびアルカリ性燐酸酵素の
産生を引起し、骨を再吸収する溶骨細胞を刺激する。大
食細胞でさえも、ＩＬ−１に走化的に誘引され、Ｌ−１
に反応してプロスタグランジンを産生しかつより持続性
のある活性な殺腫瘍性を示すことが報告された。

【０００７】計測形態学 Ｓａｂａｔｉｎｉ、Ｍ．他、
ＰＮＡＳ ８５：５２３５−５２３９、１９８８年 に
明らかにされているように、ＩＬ−１はまた、ハツカネ
ズミに注入したときカルシウム過剰血症を引き起こし、
骨吸収表面の増加の原因となる効力のある骨吸収剤でも
ある。

【０００８】従って、脳膜炎と卵管炎、敗血症性ショッ
クを含む伝染病の合併症、汎発性血管内凝固、および／
若しくは成人呼吸障害症候群；抗原、抗体および／若し
くは補体沈着による急性あるいは慢性の炎症、；関節
炎、胆管炎、大腸炎、脳炎、心内膜炎、腎炎、肝炎、心
筋炎、膵臓炎、心膜炎、再灌流創傷、および血管炎を含
む炎症性の状態のように、いかなる身体部位でも、活発
な伝染が存在する感染症と、ＩＬ−１は深く関係づけら
てきた。式ＩのＩＣＥ阻害剤に反応するかもしれない免
疫に基づく疾病は、急性および遅延型過敏症、移植片拒
絶反応、移植片対宿主疾患、Ｉ型糖尿病および多発性硬
化症を含む自己免疫疾患のようなＴ−細胞および／若し
くは大食細胞を含むが、それらに限定されるものではな
い。ＩＬ−ｌは、さらに、細胞外基質の過度の沈着に帰
着する疾病と同様に骨および軟骨再吸収の治療と深く関
係づけられてきた。そのような疾病は歯根膜疾病間質性
肺線維症、肝硬変、全身性硬化症およびケロイド形成を
含む。

【０００９】

【課題を解決するための手段】発明の要約 式Ｉで表わされる発色団含有化合物およびインターロイ
キン−１βコンバーターゼ（ＩＣＥ）活性を決定する際
のその使用が開示される。式ＩＩで表わされる化合物
は、ＩＬ−１媒介による疾病の診断とモニター、あるい
はインターロイキン−１βコンバーターゼの阻害剤の評
価において有用である。

【００１０】

【化１２】 発明の詳細な説明 １つの具体例において、この発明は下記の式Ｉの発色団
化合物に関する。

【００１１】

【化１３】 上記式中、ＡＡ₁は、次の（ａ）、（ｂ）から成るグル
ープから別個に選択される： （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩ

【００１２】

【化１４】 のアミノ酸。

【００１３】式ＡＩ中、Ｒ₁は次の（ａ）、（ｂ）、
（ｃ）からなるグループから選択される。

【００１４】（ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
１）から選択される） （１） 水素 （２） 水酸基 （３） ハロゲン （４） −Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５） ―ＳＨ （６） Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７） カルボキシ （８） −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９） Ｃ_1-4アルキルアミノ（アルキル部分は水素あ
るいは水酸基で置換され、アミノは水素またはＣＢＺで
置換される） （１０）グアニジノ （１１）アミノおよび （ｃ）アリールＣ_1-6アルキルあるいは置換アリールＣ
_1-6アルキル（アリールグループは次のものから成るグ
ループから選択される） （ａ） フェニル （ｂ） ナフチル （ｃ） ピリジル （ｄ） フリル （ｅ） チエニル （ｆ） チアゾリル （ｇ） イソチアゾリル （ｈ） イミダゾリル （ｉ） ベンズイミダゾリル （ｊ） ピラジニル （ｋ） ピリミジル （ｌ） キノリル （ｍ） イソキノリル （ｎ） ベンゾフリル （ｏ） ベンゾチエニル （ｐ） ピラゾリル （ｑ） インドリル （ｒ） プリニル （ｓ） イソオキサゾリル （ｔ） オキサゾリル および項目（ａ）〜（ｔ）中で上に定義されるようなモ
ノおよびジ−置換アリール（ここで、置換基は別個にＣ
_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
アルキルカルボニルである）。

【００１５】ＡＡ₂は、次の（ａ）、（ｂ）から成るグ
ループから別個に選択される： （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩＩ

【００１６】

【化１５】 のアミノ酸。

【００１７】ＡＡ₃は、次の（ａ）、（ｂ）から成るグ
ループからそれぞれ別個に選択される： （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩＩＩ

【００１８】

【化１６】 のアミノ酸。

【００１９】前記式中、Ｒ₂およびＲ₃は各々、次の
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から成るグループからそれぞれ
別個に選択される： （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
１）から選択される） （１）水素 （２）水酸基 （３）ハロゲン （４）−Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５）−ＳＨ （６）Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７）カルボキシ （８）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９）Ｃ_1-4アルキルアミノ（アルキル部分は水素ある
いは水酸基で置換され、アミノは水素またはＣＢＺで置
換される） （１０）グアニジノ （１１）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル、アリールは、直前に定
義した通りであり、また、アリールはモノおよびジ−置
換アリールであってもよく、置換基は別個にＣ_1-6アル
キル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミノ、Ｃ_1-6
アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6アルキルカ
ルボニルである。

【００２０】ｎは０から１６までの整数であり、（Ａ
Ａ）_nは長さでｎ個（すなわち０から１６個の）アミノ
酸のペプチドであり、各アミノ酸はそれぞれ式

【００２１】

【化１７】 を有している。

【００２２】前記式中、Ｘは次の（ａ）、（ｂ）、
（ｃ）から成るグループから選択される： （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
２）から選択される） （１）水素 （２）水酸基 （３）ハロゲン （４）−Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５）―ＳＨ （６）Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７）カルボキシ （８）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９）アミノカルボニルアミノ （１０）Ｃ_1-4アルキルアミノ（アルキル部分は水素ま
たは水酸基で置換され、アミノは水素またはＣＢＺで置
換される） （１１）グアニジノ （１２）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル ここでアリール基は次の（１）〜（２０）から成るグル
ープから選択される： （１）フェニル （２）ナフチル （３）ピリジル （４）フリル （５）チエニル （６）チアゾリル （７）イソチアゾリル （８）イミダゾリル （９）ベンズイミダゾリル （１０）ピラジニル （１１）ピリミジル （１２）キノリル （１３）イソキノリル （１４）ベンゾフリル （１５）ベンゾチエニル （１６）ピラゾリル （１７）インドリル、 （１８）プリニル （１９）イソオキサゾリル （２０）オキサゾリル また、アリールはモノおよびジ−置換アリールであって
もよく、置換基は別個にＣ_1-6アルキル、ハロゲン、水
酸基、Ｃ_1-6アルキルアミノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6
アルキルチオおよびＣ_1-6アルキルカルボニルである。

【００２３】Ｒ₅は、 （ａ）置換Ｃ_1-12アルキル（置換基は次の（１）〜（２
０）から選択される）： （１）水素 （２）水酸基 （３）ハロゲン （４）Ｃ_1-6アルキルカルボニル； （ｂ）アリールＣ_1-6アルキル（アリールグループは次
の（１）〜（２０）から選択される）： （１）フェニル （２）ナフチル （３）ピリジル （４）フリル （５）チエニル （６）チアゾリル （７）イソチアゾリル （８）イミダゾリル （９）ベンズイミダゾリル （１０）ピラジニル （１１）ピリミジル （１２）キノリル （１３）イソキノリル （１４）ベンゾフリル （１５）ベンゾチエニル （１６）ピラゾリル （１７）インドリル （１８）プリニル （１９）イソオキサゾリル （２０）オキサゾリル および項目（１）〜（２０）中で上に定義されるような
モノおよびジ−置換アリール（ここで、置換基は別個に
Ｃ_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
アルキルカルボニルである）。

【００２４】Ｒ₆は、次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から
成るグループから選択される： （ａ）モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールアミノ、
（ｂ）モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールオキシ、
（ｃ）モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールチオ、ここ
でアリールグループは次のものから成るグループから選
択される：

【００２５】

【化１８】 置換基は次の（１）〜（２８）から成るグループから選
択される。

【００２６】（１）Ｈ （２）ＯＨ （３）ハロゲン （４）Ｃ_1-6アルキル （５）Ｃ_1-6アルキルオキシ （６）ＣＯ₂Ｈ （７）ＮＯ₂ （８）Ｓ０₃Ｈ （９）ホルミル （１０）ＮＨ₂ （１１）ＳＨ （１２）Ｃ_1-6アルキルチオ （１３）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （１４）フェニル （１５）フェニルＣ_1-6アルキル （１６）ＮＯ （１７）Ｃ_1-6アルキルカルボニル （１８）フェニルアゾ （１９）Ｃ_1-6スルフィニル （２０）Ｃ_1-6スルホニル （２１）フェニルスルフィニル （２２）フェニルスルホニル （２３）フェニルカルボニル （２４）フェニルオキシ （２５）フェニルチオール （２６）Ｃ_1-4アルキルアミノ （２７）ジＣ_1-4アルキルアミノ （２８）ＣＮ。

【００２７】Ｒ₈はアリールＣ_1-6アルキルあるいはＣ
_1-6アルキルであり、アリールはフェニルおよびナフチ
ルから選択される。

【００２８】上記の如く、（ＡＡ）_nは、長さにおいて
０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１
１、１２、１３、１４、１５、あるいは１６個のアミノ
酸よりなるペプチドを定義する。同様に、この明細書に
おいて、アミノ酸ＡＡＩ、ＡＡＩＩおよびＡＡＩＩＩは
各々、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロ
イシン、セリン、トレオニン、アスパラギン酸、アスパ
ラギン、グルタミン酸、グルタミン、リシン、ヒドロキ
シ−リシン、ヒスチジン、アルギニン、フェニルアラニ
ン、チロシン、トリプトファン、システイン、メチオニ
ン、オルニチン、β−アラニン、ホモセリン、ホモチロ
シン、ホモフェニルアラニンおよびシトルリンを包含す
るＬ―およびＤ−型アミノ酸から成るグループから別個
に選択され得る。

【００２９】第１具体例の１つのクラスにおいて、ｎは
０である。このクラス内には、以下のサブクラスがあ
る。すなわち ＡＡ₁は次式

【００３０】

【化１９】 で表わされるアミノ酸である。

【００３１】ＡＡ₂は次式

【００３２】

【化２０】 で表わされるアミノ酸である。

【００３３】ＡＡ₃は次式

【００３４】

【化２１】 で表わされるアミノ酸である。

【００３５】このサブクラス内には、Ｒ₂およびＲ₃が各
々、次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から成るグループから
それぞれ別個に選択される化合物がある： （ａ）水素 （ｂ）Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１１）
から選択される） （１）水素 （２）水酸基 （３）ハロゲン （４）−Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５）―ＳＨ （６）Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７）カルボキシ （８）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９）Ｃ_1-4アルキルアミノ、およびアルキル部分が水
酸基で置換されたＣ_1-4アルキルアミノ （１０）グアニジノ （１１）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル、（ここでいうアリール
とはフェニル、ナフチル、ピリジル、フリル、チエニ
ル、チアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾフリル、ベン
ゾチエニル、インドリル、イソオキサゾリルおよびオキ
サゾリルである）；そしてこのアリールは，モノおよび
ジ−置換アリールであってもよく、置換基は別個にＣ
_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
アルキルカルボニルである。

【００３６】Ｒ₆は、次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から
成るグループから選択される： （ａ） モノ、あるいはジ−置換アリールアミノ、
（ｂ） モノ、あるいはジ−置換アリールオキシ、
（ｃ） モノ、あるいはジ−置換アリールチオ、また、
このアリールグループは下記のものより成るグループか
ら選択される：

【００３７】

【化２２】 置換基は次の（１）〜（１０）から成るグループから選
択される： （１）Ｈ （２）ＯＨ （３）ハロゲン （４）Ｃ_1-6アルキル （５）Ｃ_1-6アルキルオキシ （６）ＣＯ₂Ｈ （７）ＮＯ₂ （８）ＳＯ₃Ｈ （９）ホルミル （１０）ＣＮ。

【００３８】特に、Ｒ₅がメチル、Ｒ₂がＣ_1-6アルキ
ル、そしてＲ₃が次の（ａ）〜（ｋ）である化合物が好
ましい： （ａ） 水素 （ｂ） Ｃ_1-6アルキル （ｄ） ベンジル （ｅ） ｐ−ヒドロキシ−ベンジル （ｆ） Ｎ−カルボベンズオキシ−アミノ―（ｎ−ブチ
ル）、 （ｇ） カルバミルメチル （ｈ） カルバミルエチル （ｉ） インドール−２−イル−メチル （ｊ） 置換フェニルＣ_1-6アルキル（置換基は水素、
水酸基、カルボキシあるいはＣ_1-4アルキルである） （ｋ） 置換インドリルＣ_1-6アルキル（置換基は水
素、水酸基、カルボキシあるいはＣ_1-4アルキルであ
る） （ｌ） 置換基が水素、水酸基、カルボキシあるいはＣ
_1-4アルキルである置換イミダゾリルＣ_1-6アルキル。

【００３９】第２具体例において、この発明は、式ＩＩ

【００４０】

【化２３】 で表わされる発色団含有化合物に関する。

【００４１】前記式中、ＡＡ₁は、次の（ａ）、（ｂ）
から成るグループから別個に選択される： （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩ

【００４２】

【化２４】 のアミノ酸。

【００４３】前記式中、Ｒ₁は次のものから成るグルー
プから選択される： （１）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基はつぎの（ａ）〜
（ｔ）から選択される） （ａ）水素 （ｂ）水酸基 （ｃ）ハロゲン （ｄ）Ｃ_1-6アルキルカルボニル （ｅ）アミノ、 （２）アリールＣ_1-6アルキルあるいは置換アリールＣ
_1-6アルキル（ここでアリールグループはつぎの（ａ）
〜（ｔ）から選択される） （ａ）フェニル （ｂ）ナフチル （ｃ）ピリジル （ｄ）フリル （ｅ）チエニル （ｆ）チアゾリル （ｇ）イソチアゾリル （ｈ）イミダゾリル （ｉ）ベンズイミダゾリル （ｊ）ピラジニル （ｋ）ピリミジル （ｌ）キノリル （ｍ）イソキノリル （ｎ）ベンゾフリル （ｏ）ベンゾチエニル （ｐ）ピラゾリル （ｑ）インドリル （ｒ）プリニル （ｓ）イソオキサゾリル （ｔ）オキサゾリル および項目（ａ）〜（ｔ）中で上に定義されるようなモ
ノおよびジ−置換アリール（ここで、置換基は別個にＣ
_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
アルキルカルボニルである）。

【００４４】ＡＡ₂は、次の（ａ）、（ｂ）から成るグ
ループから別個に選択される： （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩＩ

【００４５】

【化２５】 のアミノ酸。

【００４６】ＡＡ₃は、次の（ａ）、（ｂ）から成るグ
ループからそれぞれ別個に選択される： （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩＩＩ

【００４７】

【化２６】 のアミノ酸。

【００４８】前記式中、Ｒ₂およびＲ₃は各々、次の
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から成るグループからそれぞれ
別個に選択される： （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
１）から選択される） （１）水素 （２）水酸基 （３）ハロゲン （４）−Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５）−ＳＨ （６）Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７）カルボキシ （８）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ₂ （９）Ｃ_1-4アルキルアミノ（アルキル部分は水素ある
いは水酸基で置換され、アミノは水素またはＣＢＺで置
換される） （１０）グアニジノ （１１）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル、アリールは、直前に定
義した通りであり、また、アリールはモノおよびジ−置
換アリールであってもよく、置換基は別個にＣ_1-6アル
キル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミノ、Ｃ_1-6
アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6アルキルカ
ルボニルである。

【００４９】ＡＡ₄は、式ＡＩＶ

【００５０】

【化２７】 のアミノ酸である。

【００５１】前記式中、Ｒ₄は次の（ａ）、（ｂ）、
（ｃ）から成るグループから選択される： （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
１）から選択される） （１）水素 （２）水酸基 （３）ハロゲン （４）−Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５）―Ｏ−Ｃ_1-4アルキル （６）−ＳＨ （７）カルボキシ （８）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９）イミダゾリル （１０）グアニジノ （１１）アミノ。

【００５２】ｎは０から１６までの整数で、（ＡＡ）_n
は長さにおいてｎ個（０から１６個の）アミノ酸のペプ
チドであり、各アミノ酸は式

【００５３】

【化２８】 を有している。

【００５４】前記式中、Ｘは次の（ａ）、（ｂ）、
（ｃ）から成るグループから選択される。

【００５５】（ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
２）から選択される） （１）水素 （２）水酸基 （３）ハロゲン （４）−Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５）―ＳＨ （６）Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７）カルボキシ （８）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９）アミノカルボニルアミノ （１０）Ｃ_1-4アルキルアミノ（アルキル部分は水素ま
たは水酸基で置換され、アミノは水素またはＣＢＺで置
換される） （１１）グアニジノ （１２）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル アリールグループは次の（１）〜（２０）から成るグル
ープから選択される： （１） フェニル （２） ナフチル （３） ピリジル （４） フリル （５） チエニル （６） チアゾリル （７） イソチアゾリル （８） イミダゾリル （９） ベンズイミダゾリル （１０） ピラジニル （１１） ピリミジル （１２） キノリル （１３） イソキノリル （１４） ベンゾフリル （１５） ベンゾチエニル （１６） ピラゾリル （１７） インドリル （１８） プリニル （１９） イソオキサゾリル （２０） オキサゾリル、また、アリールはモノおよび
ジ−置換アリールであってもよく、置換基は別個にＣ
_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
アルキルカルボニルである。

【００５６】Ｒ５は、 （ａ） 置換Ｃ_1-12アルキル（置換基は次の（１）〜
（２０）から選択される） （１） 水素 （２） 水酸基 （３） ハロゲン （４） Ｃ_1-6アルキルカルボニル； （ｂ） アリールＣ_1-6アルキル（アリールグループは
次の（１）〜（２０）から選択される） （１） フェニル （２） ナフチル （３） ピリジル （４） フリル （５） チエニル （６） チアゾリル （７） イソチアゾリル （８） イミダゾリル （９） ベンズイミダゾリル （１０） ピラジニル （１１） ピリミジル （１２） キノリル （１３） イソキノリル （１４） ベンゾフリル （１５） ベンゾチエニル （１６） ピラゾリル （１７） インドリル （１８） プリニル （１９） イソオキサゾリル （２０） オキサゾリル および項目（１）〜（２０）中で上に定義されるような
モノおよびジ−置換アリール（ここで、置換基は別個に
Ｃ_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
アルキルカルボニルである）。

【００５７】Ｒ₆は、次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から
成るグループから選択される： （ａ） モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールアミノ、
（ｂ） モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールオキシ、
（ｃ） モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールチオ、ア
リール基は次のものから成るグループから選択される。

【００５８】

【化２９】 置換基は次の（１）〜（２８）から成るグループから選
択される： （１） Ｈ （２） ＯＨ （３） ハロゲン （４） Ｃ_1-6アルキル （５） Ｃ_1-6アルキロキシ （６） ＣＯ₂Ｈ （７） ＮＯ₂ （８） ＳＯ₃Ｈ （９） ホルミル （１０） ＮＨ₂ （１１） ＳＨ （１２） Ｃ_1-6アルキルチオ （１３） −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （１４） フェニル （１５） フェニルＣ_1-6アルキル （１６） ＮＯ （１７） Ｃ_1-6アルキルカルボニル （１８） フェニルアゾ （１９） Ｃ_1-6スルフィニル （２０） Ｃ_1-6スルホニル （２１） フェニル スルフィニル （２２） フェニル スルホニル （２３） フェニル カルボニル （２４） フェニル オキシ （２５） フェニル チオール （２６） Ｃ_1-4アルキルアミノ （２７） ジＣ_1-4アルキルアミノ （２８） ＣＮ。

【００５９】Ｒ₈はアリールＣ_1-6アルキルあるいはＣ
_1-6アルキルであり、アリールはフェニルおよびナフチ
ルから成るグループから選択される。

【００６０】この明細書において、（ＡＡ）_nは、長さ
において０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１、１２、１３、１４、１５、あるいは１６個の
アミノ酸よりなるペプチドを定義する。同様に、この明
細書において、アミノ酸ＡＡＩ、ＡＡＩＩおよびＡＡＩ
ＩＩは各々、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、
イソロイシン、セリン、トレオニン、アスパラギン酸、
アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、リシン、ヒ
ドロキシ−リシン、ヒスチジン、アルギニン、フェニル
アラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、メ
チオニン、オルニチン、β−アラニン、ホモセリン、ホ
モチロシン、ホモフェニルアラニンおよびシトルリンを
包含するＬ―およびＤ−型アミノ酸から成るグループか
ら別個に選択され得る。

【００６１】第２具体例の１つのクラスにおいて、ｎは
０である。このクラス内には、以下のサブクラスがあ
る。すなわちＡＡ₁は次式

【００６２】

【化３０】 で表わされるアミノ酸である。

【００６３】ＡＡ₂は次式

【００６４】

【化３１】 で表わされるアミノ酸である。

【００６５】ＡＡ₃は次式

【００６６】

【化３２】 で表わされるアミノ酸である。

【００６７】このサブクラス内には、Ｒ₂およびＲ₃が各
々、次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から成るグループから
それぞれ別個に選択される化合物がある： （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
１）から選択される） （１） 水素 （２） 水酸基 （３） ハロゲン （４） −Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５） ―ＳＨ （６） Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７） カルボキシ （８） −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９） Ｃ_1-4アルキルアミノ、およびアルキル部分が
水酸基で置換されたＣ_1-4アルキルアミノ （１０）グアニジノ （１１）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル、（ここでいうアリール
とはフェニル、ナフチル、ピリジル、フリル、チエニ
ル、チアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾフリル、ベン
ゾチエニル、インドリル、イソオキサゾリルおよびオキ
サゾリルである）；そしてこのアリールは，モノおよび
ジ−置換アリールであってもよく、置換基は別個にＣ
_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
アルキルカルボニルである。

【００６８】Ｒ₆は、次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から
成るグループから選択される： （ａ） モノ、あるいはジ−置換アリールアミノ、
（ｂ） モノ、あるいはジ−置換アリールオキシ、
（ｃ） モノ、あるいはジ−置換アリールチオ、アリー
ル基は下記の中から選択される：

【００６９】

【化３３】 置換基は次の（１）〜（１０）から成るグループから選
択される： （１） Ｈ （２） ＯＨ （３） ハロゲン （４） Ｃ_1-6アルキル （５） Ｃ_1-6アルキロキシ （６） ＣＯ₂Ｈ （７） ＮＯ₂ （８） ＳＯ₃Ｈ （９） ホルミル （１０）ＣＮ。

【００７０】特に、Ｒ₅がメチル、Ｒ₂がＣ_1-6アルキ
ル、そしてＲ₃が次の（ａ）〜（ｋ） （ａ） 水素 （ｂ） Ｃ_1-6アルキル （ｄ） ベンジル （ｅ） ｐ−ヒドロキシ−ベンジル （ｆ） Ｎ−カルボベンズオキシ−アミノ―（ｎ−ブチ
ル） （ｇ） カルバミルメチル （ｈ） カルバミルエチル （ｉ） インドール−２−イル−メチル （ｊ） 置換フェニルＣ_1-6アルキル（置換基は水素、
水酸基、カルボキシあるいはＣ_1-4アルキルである） （ｋ） 置換インドリルＣ_1-6アルキル（置換基は水
素、水酸基、カルボキシあるいはＣ_1-4アルキルであ
る） （ｌ） 置換基が水素、水酸基、カルボキシあるいはＣ
１−４アルキルである置換イミダゾリルＣ_1-6アルキル
である化合物が好ましい。

【００７１】第３具体例において、この発明は、サンプ
ルのインターロイキン−１β変換酵素活性を決定するた
めの、式Ｉで表わされる発色団含有化合物の使用方法に
関する。この方法には、次の（ａ）および（ｂ）から成
る： （ａ） 任意の順序で、水溶液中につぎの（１）〜
（３）を加えること； （１） 式Ｉで表わされる化合物 （２） インターロイキン−１β変換酵素 および （３） 前記サンプル、並びに （ｂ）光度計測手段によってステップ（ａ）の生成物の
インターロイキン−１β変換酵素活性を測定する。

【００７２】水溶液中の式Ｉの化合物の有効濃度は１μ
Ｍから１０ｍＭまでである。典型的には、原液は、ＤＭ
Ｓ０、エタノールあるいはイソプロパノールのような有
機溶媒中で調製され、反応混和物中に所望の基質濃度を
達成するために、水溶液中で少なくとも２０倍に希釈さ
れる。酵素は、酵素活性の有意のロスを伴わない２０％
（ｖｏｌ／ｖｏｌ）までのいくつかの有機溶媒（エタノ
ール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ）の濃度を許容す
る。溶媒の選択は、もっぱらアッセイにおいて要求され
る濃度、および基質の溶解度によって指示される。ある
いは、基質原液は希薄濃度で緩衝液中で調製され、大き
な割合の最終反応混和物を含むことができよう。

【００７３】同様に、水溶液に緩衝液が含まれることが
望ましい。

【００７４】ＩＣＥに対する最適ｐＨは、６．５と７．
５の間である。従って、適切な緩衝液は、我々が研究の
中で使用しているＨＥＰＥＳのように、６．５と７．５
の間のｐＫａを持つことになろう。一般に、６と９の間
の反応ｐＨを維持する濃度の非反応緩衝液であれば使用
可能である。

【００７５】酵素を安定させたり、反応速度を早める他
の構成要素が、反応に付け加えられてもよい。例として
は、スクロース（１０％）、ＣＨＡＰＳ（０．１％）、
ＤＴＴ（１〜１００ｍＭ）、ＢＳＡ（０．１〜１０ｍｇ
／ｍｌ）である。これらはすべて酵素を安定させること
が実証されている。他に含まれていてもよい構成要素は
グリセロール、ＥＤＴＡおよび様々な標準的プロテアー
ゼ阻害剤である。

【００７６】ＩＣＥの濃度は非常に可変的であり、特別
な実験目的や選択基質のための動力学的パラメータにも
っぱら依存し、１ｐＭから１μＭに及ぶこともある。特
別の反応に加えられる量はごく少量でもよいし、あるい
は所望の濃度を達成するのに必要とされる基質量より少
ない反応の全体量を含むものであってもよい。

【００７７】この方法において使用できる酵素は、発明
の背景にリストされたようなＩＬ１βを分泌することが
できるものであればどんな細胞から得られたものであっ
てもよい。調製によって、基質の開裂に対してＩＣＥと
拮抗する汚染プロテアーゼを含まないものである限り、
どんな状態の純度のＩＣＥでも容認可能である（粗細胞
溶解産物を含む）。この場合であっても、汚染プロテア
ーゼの阻害剤が反応に含まれていれば、このアッセイを
使用することは可能である。

【００７８】サンプルは、典型的には、１ｐＭから１Ｍ
まで濃度の推定上のＩＣＥ阻害剤、若しくは、ＩＣＥ活
性の他の任意の活性調節因子のどちらかを含む。

【００７９】このアッセイは典型的には２５度から３７
度の間で行なわれる。これより高い温度での使用は、酵
素の安定性に依存し、また、低い温度でこのアッセイを
実行することは、現実的な考慮によっておそらく行なわ
れよう。

【００８０】当業者によって認識されているように、付
加ステップ（ａ）は、特に記述されたアスパラギン酸と
その隣接グループＲ₆との間の、式Ｉで表わされる化合
物の開裂をもたらす。発色団基Ｒ₆の遊離は分光光度計
測的方法あるいは蛍光測定的方法によってモニターする
ことができる。

【００８１】検出方法は、Ａｓｐ−Ｘ結合の加水分解で
放出される発色団に依存する。蛍光測定脱離基（たとえ
ばＡＭＣ）は、Ｇｉｌｆｏｒｄ Ｆｌｕｏｒｏ ＩＶの
ような蛍光測定器を必要とする。発光および励起波長
は、基質および生成物発色団の発光および励起スペクト
ルに基いて選択される。Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ
−Ａｓｐ−ＡＭＣの場合には、励起波長が３８０ｎｍで
あり、発光波長は４６０ｎｍである。

【００８２】分光光度計測脱離基（例えば、ｐＮＡ）を
持つ基質は、ケアリー２１０分光光度計のような分光光
度計を必要とする。この場合、反応は、基質および生成
物発色団の吸光度スペクトルに基にて選択される波長で
モニタされる。Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ
−ＰＮＡの場合には、選択波長は４１０ｎｍである。た
だし、これはアッセイ感度におけるマイナーな妥協によ
ってかなり変ることもある。

【００８３】一般に、蛍光測定的アッセイは分光光度計
測的アッセイより１０倍高感度である。従って、酵素が
貴重な場合、蛍光アッセイのほうが好まれる。しかしな
がら、大量の活性な組換え型蛋白質が利用可能になる場
合、分光光度計測アッセイのほうが好まれる。このアッ
セイは、反応の連続的あるいは不連続的サンプリングで
調べることができる。アッセイはまた、多数のアッセイ
を同時に実行するための９６−穴プレートフォーマット
で調べることができる。

【００８４】例えば、蛍光測定脱離基（たとえばＡＭ
Ｃ）に関しては、サンプルの活性は、蛍光変化の割合に
比例し、次のように計算される。

【００８５】ＩＣＥ触媒反応速度＝（ｄ蛍光収量／ｄ
ｔ）×（１μＭＡＭＣ／蛍光収量）＝ｄ ＡＭＣ／ｄｔ 当業者によって認識されているように、上記の使用は、
Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｏｎ動力学上のパラメー
タを決定したり、酵素（例えば、サンプルが推定上の阻
害剤を含んでいない場合）に関する他の特性記述情報を
決定したり、推定上のＩＣＥ阻害剤を遮蔽したり、ある
いは、精製分留物を測定するために、非常に有効である
こともある。

【００８６】第４具体例において、この発明は、サンプ
ルのインターロイキン−１β変換酵素活性を決定するた
めの、式ＩＩで表わされる発色団含有化合物の使用方法
に関する。この方法には、次の（ａ）および（ｂ）から
成る： （ａ） 任意の順序で、水溶液中につぎの（１）〜
（３）を付加すること； （１） 式Ｉで表わされる化合物 （２） インターロイキン−１β変換酵素 （３） サンプル、および （４） アミノペプチダーゼ、並びに （ｂ） 分光光度計測あるいは蛍光測定的解析によるス
テップ（ａ）の生成物のインターロイキン−１β変換酵
素活性を測定すること。

【００８７】式ＩＩの化合物、および、成分の選択と濃
度を除いて、第３具体例のために述べたものと同じであ
る。ペプチダーゼに関して、ＡＡ₄とＲ₆間の結合を分解
することができるいかなるペプチダーゼでも、満足のい
く結果を示すものになる。

【００８８】本出願人は、腎臓ミクロソーム（ＳＩＧＭ
Ａ ＣＨＥＭＩＣＡＬ社製 Ｎｏ．Ｌ−０６３２）から
分離されたロイシンアミノペプチダーゼ（ＬＡＰＭ）
が、非常に満足な結果を示すものであることを発見し
た。

【００８９】サンプルとＬＡＰＭが同時に加えられるこ
とは本質的に不可欠なことではない。ＬＡＰＭによる加
水分解速度が全体の反応の速度制限ステップでないとい
うことが不可欠である。我々は、反応を連続的にモニタ
することが有効であることを知った。アッセイ中典型的
に使用されるＬＡＰＭの濃度は１μＬである。しかしな
がら、その使用量は、広く変わってもよい。（たとえば
置換物および／若しくはサンプルによって１μｌ当り
０．０１ユニット〜１００ユニット）。［１ユニット
は、１．０μモルのＬ−ロイシン−ｐ−ニトロアニリン
を、ロイシンとｐ−ニトロアニリンに１分当り、ｐＨ７
で、３７℃で加水分解する。］

【００９０】

【化３４】 さらに、スキームＩに示されるような適切に保護された
アスパラギン酸誘導体に発色団をカップリングすること
ができる。クルチウス転位を達成するために、ｐ−ニト
ロ安息香酸はトリエチルアミンの存在下でＤＰＰＡで処
理される。生成されるｐ−ニトロフェニルイソシアネー
トは、Ｎ−トリメチルシリルエチルオキシカルボニルア
スパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエステルと反応し、対応す
るｐ−ニトロアニリドを形成する。ウレタンはテトラブ
チルアンモニウムフッ化物で取除かれ、ＤＣＣとＨＯＢ
ｔを用いて、生成アミンが（Ｎ−アセチル−チロシニル
―バリニル−アリン）にカップリングされる。その後、
ｔ−ブチルエステルはトリフルオロ酢酸で取除かれ、所
望の色素産性ペプチドを提供する。

【００９１】

【化３５】 さらに、スキームＩＩに示されるように適切に保護され
たアスパラギン酸誘導体に発色団をカップリングするこ
とができる。６−アミノキノリンは、ＦＭＯＣ−アスパ
ラギン酸Ｂ−ｔ−ブチルエステルと反応し、ＥＤＣとＤ
ＭＡＰの存在下において対応するアミドを形成する。Ｆ
ＭＯＣグループは、ジエチルアミンで取除かれ、ＤＣＣ
およびＨＯＢｔを用いて、生成アミンは（Ｎ−アセチル
−チロシニル）−バリニル−アラニンにカップリングさ
れる。その後、ｔ−ブチルエステルは、トリフルオロ酢
酸で取除かれ、所望の色素産性ペプチドを提供する。

【００９２】

【化３６】 さらにスキームＩＩＩに示されるように、発色団は適切
に保護されたアスパラギン酸誘導体にカップリングする
ことができる。７−アミノ−４−メチルキノリンは、Ａ
ｌｌｏｃ−アスパラギン酸Ｂ−ｔ−ブチルエステルと反
応し、ＥＤＣの存在下において対応するアミドを形成す
る。Ａｌｌｏｃグループはテトラキストリフェニルホス
フィンパラジウムおよびｄｉｍｅｄｏｎｅで取除かれ、
ＤＣＣおよびＨＯＢｔを用いて、生成アミンは（Ｎ−ア
セチル−チロシニル）−バリニル−アラニンにカップリ
ングされる。その後、ｔ−ブチルエステルは、トリフル
オロ酢酸で取除かれ、所望の色素産性ペプチドを提供す
る。

【００９３】

【化３７】 スキームＩＶに示されるように、ＩＬ−１β変換酵素に
対する色素産性ペプチド基質も調製することができる。
（Ｎ−アセチル−チロシニル）―バリニル−アラニニル
−アスパラギン酸Ｂ−ｔ−ブチルエステルはＤＣＣとＨ
ＯＢｔを使用して、市販のグリシン７−アミノ−４−メ
チルクマリンアミドにカップリングすることができる。
その後、ｔ−ブチルエステルはトリフルオロ酢酸で取除
かれ、所望の色素産性ペプチドを提供する。

【００９４】以下の実施例は、この発明を例示説明する
ために意図されたものであり、添付の請求の範囲に述べ
られているような発明に制限を加えるためのものとして
意図されたものではない。

【００９５】

【実施例】実施例１Ａ 直接測定 ：ＤＥＡＥ精製されたＴＨＰ−１細胞溶解産物
の活性のインターロイキン１β活性。

【００９６】酵素：ＤＥＡＥ−陰イオン交換クロマトグ
ラフィを使用して、ほぼ１００倍精製されたＴＨＰ−１
細胞溶解産物。

【００９７】ストック濃度＝５ユニット／ｕｌ （１ユニットは、基質（≧５０μＭ）の飽和レベルを使
用して、２５度で１分当たりＡＭＣ１ｐモルを産生する
のに必要とする酵素の量として定義される）。

【００９８】基質：Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシニル）
―バリニル−アラニニルアスパラギン酸７−アミノ−４
−メチルクマリンアミド （すなわちＡｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａ
ＭＣ） ＤＭＳＯ中に５ｍＭの原液 緩衝液：１００ｍＭのＨｅｐｅｓ １０％スクロース ０．１％ Ｃｈａｐｓ １ｍＭ ＤＴＴ １ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ ｐＨ ７．５。

【００９９】２５℃で、基質５μｌと酵素５μｌが、上
に定義されるような緩衝液４９０μｌに加えられた。

【０１００】Ｇｉｌｆｏｒｄ Ｆｌｕｏｒｏ ＩＶ 分
光蛍光計を使用して、３８０ｎｍの励起波長および４６
０ｎｍの発光波長を用い、７−アミノ−４−メチルクマ
リン（ＡＭＣ）の遊離がモニタされた。１μＭ ＡＭＣ
＝１００％ 相対蛍光収量。

【０１０１】結果：１００％相対蛍光収量を２０分（す
なわち、速度＝０．００５ｍＭ ＡＭＣ／分）で達成。

【０１０２】実施例１Ｂ 直接測定 ：酵素阻害剤の存在下における、ＤＥＡＥ精製
されたＴＨＰ−１細胞溶解産物の活性のインターロイキ
ン１β活性。

【０１０３】酵素：ＤＥＡＥ−陰イオン交換クロマトグ
ラフィを使用して、ほぼ１００倍精製されたＴＨＰ−１
細胞溶解産物。

【０１０４】ストック濃度＝５ユニット／ｕｌ （１ユニットは基質（≧５０μＭ）の飽和レベルを使用
して、２５度で１分当たりＡＭＣ１ｐモルを産生するの
に必要とする酵素の量として定義される）。

【０１０５】基質：Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａ
ｓｐ−ＡＭＣ ＤＭＳＯ中に５ｍＭの原液 緩衝液：１００ｍＭのＨｅｐｅｓ １０％スクロース ０．１％ Ｃｈａｐｓ １ｍＭ ＤＴＴ １ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ ｐＨ ７．５。

【０１０６】サンプル：化合物Ｚ（つまりＮ−（Ｎ−ア
セチル−チロシニル−バリニル−アラニニル）−３−ア
ミノ−４−オキソ ブタン酸） Ｈ₂Ｏ中に２μＭ。

【０１０７】２５℃で、基質５μｌ、酵素５μｌおよび
サンプル５μｌが、上に定義されるような緩衝液４８５
μｌに加えられた。

【０１０８】Ｇｉｌｆｏｒｄ Ｆｌｕｏｒｏ ＩＶ 分
光蛍光計を使用して、３８０ｎｍの励起波長および４６
０ｎｍの発光波長を用い、ＡＭＣの遊離がモニタされ
た。１μＭ ＡＭＣ＝１００％相対蛍光収量。

【０１０９】結果：化合物Ｚは反応の緩慢な、強固結合
阻害剤である。その結果、蛍光光度計からの連続的な出
力では、無阻害初速として、また最終的には１００％に
接近するが緩慢な阻害発現を示すものとして現われる。
初速は０．０５ｕＭ ＡＭＣ 産性物／分であり、阻害
速度定数は、０．２５／分で、２．７分という緩慢な阻
害発現に対する半減期に対応する。

【０１１０】実施例２ 直接測定 ：ＤＥＡＥ精製されたＴＨＰ−１細胞溶解産物
の活性のインターロイキン１β活性。

【０１１１】酵素：ＤＥＡＥ−陰イオン交換クロマトグ
ラフィを使用して、ほぼ１００倍精製されたＴＨＰ−１
細胞溶解産物。

【０１１２】ストック濃度＝５ユニット／ｕｌ （１ユニットは、基質の飽和レベルを用いて２５度で１
分当たりｐ−ＮＡ１ｐモルを産生するのに必要とされる
酵素の量として定義される。ｐ−ＮＡはパラ−ニトロア
ナリンである）。

【０１１３】基質：Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａ
ｓｐ−ｐ−ＮＡ ＤＭＳＯ中の５ｍＭの原液 緩衝液：１００ｍＭのＨｅｐｅｓ １０％スクロース ０．１％ Ｃｈａｐｓ １ｍＭ ＤＴＴ １ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ ｐＨ ７．５。

【０１１４】２５℃で、５ｍｌの基質と５ｍｌの酵素
が、上に定義されるような緩衝液４９０ｍｌに加えられ
た。

【０１１５】反応は、４１０ｎｍの波長でケアリー２１
９分光光度計で連続的にモニタされる。

【０１１６】結果：これらの条件下での反応速度は０．
００５吸光度ユニット／分であり、０．５ｕＭ ｐＮＡ
産生量／分に対応する。

【０１１７】実施例３ 共役活性測定 ：ＤＥＡＥ精製されたＴＨＰ−１細胞溶解
産物の活性のインターロイキン１β活性。

【０１１８】酵素：ＤＥＡＥ−陰イオン交換クロマトグ
ラフィを使用して、ほぼ１００倍精製されたＴＨＰ−１
細胞溶解産物。

【０１１９】ストック濃度＝５ユニット／ｕｌ （１ユニットは、基質（≧５０μＭ）の飽和レベルを使
用して、２５度で１分当たりＡＭＣ１ｐモルを産生する
のに必要とする酵素の量として定義される）。

【０１２０】共役 酵素：ロイシンアミノペプチターゼ ミクロソーム（タ
イプＩＶ） （ＬＡＰＭ）（ブタの腎臓ミクロソームから精製） ＥＣ ３．４．１１．２ Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｌ−０６３２ ＤＭＳ０中で１２．５ユニット／ｍｌの原液 基質：Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ
−ＡＭＣ ＤＭＳＯ中で５ｍＭの原液 緩衝液：１００ｍＭのＨｅｐｅｓ １０％スクロース ０．１％ Ｃｈａｐｓ １ｍＭ ＤＴＴ １ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ ｐＨ ７．５。

【０１２１】２５℃で、基質５μｌ、ＬＡＰＭ５０μ
ｌ、ＩＣＥ５μｌが緩衝液４４０μｌに加えられた。

【０１２２】反応は、Ｇｉｌｆｏｒｄ Ｆｌｕｏｒｏ−
ＩＶ 分光蛍光計で連続的にモニタされる。

【０１２３】励起波長＝３８０ｎｍ 発光波長＝４６０ｎｍ １ｕＭ ＡＭＣ＝１００％ 相対蛍光収量 結果：ラグ相は、定常状態速度の達成より以前に現れ
る。定常状態（０．４４＋０．０１ｍｉｎ^-1）へのアプ
ローチについて記述する速度定数は、反応に存在する共
役酵素量によって決定され、定常状態速度はＩＣＥによ
って触媒された反応の測定値である。その結果、ＩＣＥ
反応の定常状態の９９％に達するのに、１１分（７ ｘ
ｔ １／２）を要する。定常状態反応速度は０．０５
ｕＭ ＡＭＣ／分である。

【０１２４】実施例４ ステップＡ：細胞成長：ＡＴＣＣ（受け入れ番号ＡＴＣ
Ｃ ＴＩＢ２０２）から得られたＴＨＰ．１細胞が、１
〜２ｘ１０⁶細胞／ｍｌ（３〜４ ダブリング／週）で
毎週回収する、ＷＨＥＡＴＯＮ ＴＵＲＢＯＬＩＦＴ
４６リットルの懸垂フラスコ、あるいは７５あるいは２
００あるいは３００リットルの発酵槽のどちらかのロー
ラーボトルに入った９％の馬の血清を含む、ＩＳＣＯＶ
Ｅ’Ｓ ＭＯＤＩＦＩＥＤ ＤＵＬＢＥＣＣＯの媒質中
に、もしくは、ＤＵＬＢＥＣＣＯ’Ｓ ＭＯＤＩＦＩＥ
ＤＥＥＡＧＬＥＳ媒質（ＪＲＨ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ
Ｓ）中に懸濁培養された。懸垂フラスコあるいは発酵槽
中で使用される媒体にはさらに、細胞に対する剪断力を
減らすために、０．１〜０．３％のＦ６８プルロニック
が含まれていた。細胞は、典型的には、ＡＴＣＣガラス
びんからの初期の開始に続いてわずか３〜４ヶ月間培養
された。

【０１２５】ステップＢ：細胞剪断および分留：細胞
は、ＰＢＳ中で３回洗浄され、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、
ｐＨ７．５、５ｍＭのＭｇＣｌ₂および１ｍＭのＥＧＴ
Ａを含む低張緩衝液中で１０⁸細胞／ｍｌで０℃で２０
分間懸濁された。プロテアーゼ阻害剤が加えられ（ＰＭ
ＳＦ１ｍＭおよびペプスタチンとロイペプチン１０μｇ
／ｍｌ）、細胞は、それぞれ９０〜９５％の剪断（ｂｒ
ｅａｋａｇｅ）を産出するために２５あるいは１５スト
ロークを使用して、１００乃至３００ｍｌのしっかりと
固定したＤＯＵＮＣＥホモジナイザー中で剪断された。
剪断された細胞は、核および非剪断細胞を取除くため、
３０００ｒｐｍで、１０分間、５℃で、ＢＥＣＫＭＡＮ
ＧＰＲ遠心器により遠心分離された。生成したペレッ
トは、プロテアーゼ阻害剤を含む低張緩衝液の原量の約
１／４中に再び懸濁され、懸濁体は、１０ストロークに
再びダウンスされ、再び遠心分離された。この第２核除
去後の上清は第１のものに加えられた。

【０１２６】核除去後の上清は、ＳＳ３４回転子を持つ
ＳＯＲＶＡＬ遠心器で２０分間１６，０００ｒｐｍ遠心
分離にかけ、続いてＢＥＣＫＭＡＮ遠心器（５０．２Ｔ
ｉ回転子）中で５０，０００ｒｐｍあるいは４５，００
０ｒｐｍ（４５Ｔｉ回転子）で６０分間第２スピンし
た。２ｍＭのＤＴＴを付加後、生成上清は、ＩＣＥが精
製されるまで−８０℃で保存された。

【０１２７】ステップＣ：ＩＣＥのＨＰＬＣカラム精
製：解凍上清は、０．２２μ中空糸ろ過によって清澄さ
れ、ＡＭＩＣＯＮ ＹＭ３らせんカートリッジで１０〜
２０倍濃縮され、一晩、２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．
８、１０％スクロース、０．１％Ｃｈａｐｓ、２ｍＭの
ＤＴＴを含む緩衝液に対して透析された（８０００分子
量カットオフ透析膜）。透析上清（ｃａ．３〜５ｇ合計
蛋白質、１０００ｍｌの細胞質ゾル抽出に対応）は、蒸
留水で ５００未満のＭＩＣＲＯＳＩＥＭＡＮＳ導電率
に調整され、４７５ｍｌのベッド量ＤＥＡＥ−５ＰＷ
ＨＰＬＣ（ＢＩＯＲＡＤ）カラムに注がれた。ＩＣＥ
は、同じ緩衝液を用いて約４０ｍＭのＮａＣｌでグラジ
エント溶出され、０．５Ｍ ＮａＣｌ及び２２０ｍＭ
Ｔｒｉｓ ＨＣｌの割合を増加した。ＩＣＥ活性分留物
は、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０％スクロ
ース、０．１％Ｃｈａｐｓおよび２ｍＭ ＤＴＴを含む
緩衝液中に１００μＭ ＹＶＡＤ−ＡＭＣ基質を含む１
００μｌ量で、９６穴プレート蛍光測定を使用して、測
定された。

【０１２８】実施例５ Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリニル−アラニニ
ル―アスパルチル−グリシニル）―７−アミノ−４−メ
チルクマリンステップ Ａ ：Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリ
ニル−アラニニル―（アスパルチル−ｂ−ｔ−ブチル−
エステル）−グリシニル）―７−アミノ−４−メチルク
マリン

【０１２９】

【化３８】 ０℃のＤＭＦ２ｍｌ中のＮ−アセチル−チロシニル−バ
リニル−アラニニル−アスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエ
ステル（１００ｍｇ、０．１６３ｍＭｏｌ）溶液に、Ｎ
−（グリシニル）―７−アミノ−４−メチルクマリン
（４１．７ｍｇ、０．１８ｍＭｏｌ）、ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（６６ｍｇ、０．４８９ｍＭｏｌ）、お
よびジシクロヘキシルカルボジイミド（６７ｍｇ、０．
３２６ｍＭｏｌ）が加えられた。２４時間後、外界温度
で、混和物は、セファデックス”ＬＨ−２０クロマトグ
ラフィ（１Ｍｘ５０ｍｍカラム、メタノール溶出液）に
より濾過、精製された。結果として生じた生成物は、更
に、ＭＰＬＣによって、シリカゲル（２２ｘ３００ｍｍ
カラム、ジクロロメタン中の１０％メタノールに対する
ジクロロメタンの直線勾配溶出法で溶出）で精製され、
無色の固体として表題の化合物を生じた。：¹Ｈ ＮＭ
Ｒ（２００ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ₇）ｄ ８．５〜７．６
（ｍ １０Ｈ），７．１（ｂｒ ｄ，２Ｈ），６．７５
（ｂｒ ｄ，２Ｈ），６．３（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝１Ｈ
ｚ），４．８〜３．９（ｍ，６Ｈ），３．１〜２．７
（ｍ，４Ｈ），２．４８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝１Ｈｚ），
２．１（ｍ，１Ｈ），１．９（ｓ，３Ｈ），１．４４
（ｓ，９Ｈ），１．４１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ），０．９３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．９
１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。

【０１３０】ステップＢ：Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシ
ニル−バリニル−アラニニル―アスパルチル−グリシニ
ル）―７−アミノ−４−メチルクマリン

【０１３１】

【化３９】 Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリニル−アラニニ
ル―（アスパルチル−ｂ−ｔ−ブチル−エステル）−グ
リシニル）―７−アミノ−４−メチルクマリンが、トリ
フルオロ酢酸中に溶解され、２０分間熟成された。混和
物は真空下に濃縮された。生成固体は、メタノール中に
懸濁され、真空下で濃縮され、この手順が繰り返され
て、無色の固体として表題の化合物を生じた。：¹Ｈ
ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ₇）ｄ ８．５〜
７．６（ｍ １０Ｈ），７．１（ｂｒｄ，２Ｈ），６．
７５（ｂｒ ｄ，２Ｈ），６．３（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝１Ｈ
ｚ），４．８〜３．９（ｍ，６Ｈ），３．２〜２．７
（ｍ，４Ｈ），２．４８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝１Ｈｚ），
２．１２（ｍ，１Ｈ），１．９（ｓ，３Ｈ），１．４１
（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），０．９３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝
６．５Ｈｚ），０．９１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈ
ｚ）。

【０１３２】実施例６ Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリニル−アラニニ
ル−アスパラギン酸 ｐ−ニトロアニリド）ステップＡ ：Ｎ−（２−トリメチルシリルエチルオキシ
カルボニル）―アスパラギン酸−ｂ−ｔ−ブチルエステ
ル ｐ−ニトロアニリド。

【０１３３】

【化４０】 １，２−ジクロロエタン１０ｍｌ中の、ｐ−ニトロ安息
香酸（１．４５ｇ、８．６９ｍＭｏｌ）およびトリエチ
ルアミン（１．２１ｍｌ、８．６９ｍＭｏｌ）の溶液に
対して、ジフェニルホスホリル アジド（２．３９ｇ、
８．６９ｍＭｏｌ）が加えられた。外界温度で２時間、
その後１５分環流した後、１，２−ジクロロエタン１５
ｍｌ中のＮ−（２−トリメチルシリルエチルオキシカル
ボニル）―アスパラギン酸−ｂ−ｔ−ブチルエステル
（１．４５ｇ、４．３５ｍＭｏｌ）が加えられ、混和物
は１時間還流された。混和物は冷却され、真空下で濃縮
され、４：１エチルアセテート：ベンゼン５００ｍｌ中
で溶解され、１Ｎのクエン酸、水、飽和重炭酸ナトリウ
ム、水およびブラインで洗浄された。混和物は硫酸ナト
リウム上で乾燥され、真空下で濃縮された。混和物は酢
酸エチルとともにすり潰され、固形物は廃棄された。溶
液は、濃縮され、ＭＰＬＣによって、シリカゲル（３５
ｘ３００ｍｍカラム、溶離液として２０％の酢酸エチル
／ヘキサン）で精製され、無色の固体として表題の化合
物を生じた。：¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣ
ｌ₃）ｄ ９．０５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ
ｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．３３，９．２１Ｈｚ），７．６８
（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．２９，９．２１Ｈｚ），５．９
２（ｂｒ ｄ，１Ｈ），４．６３（ｍ，１Ｈ），４．２
１（ｍ，２Ｈ），２．９５（ｄｄ，１Ｊ，Ｊ＝４．１
３，１７．１５Ｈｚ），２．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝
６．５６Ｈｚ，１７．０７Ｈｚ），１．４４（ｓ，９
Ｈ），０，９９（ｍ，２Ｈ），０．０３（ｓ，９Ｈ）。

【０１３４】ステップＢ：アスパラギン酸 ｂ−ｔ−ブ
チルエステル−ｐ−ニトロアニリド

【０１３５】

【化４１】 アセトニトリル２．５ｍＬ中のＮ−（２−トリメチルシ
リルエチルオキシカルボニル）―アスパラギン酸 ｂ−
ｔ−ブチルエステル ｐ−ニトロアニリド溶液（５３６
ｍｇ、１．２４ｍＭｏｌ）に、テトラヒドロフラン
（２．４８ｍＭｏｌ）中の テトラブチルアンモニアフ
ルオライドの溶液２．４８ｍｌが加えられた。その後、
混和物は、酢酸エチル中に注がれて、１６時間、５０℃
で保持された。混和物は、１Ｎ塩酸で３回抽出され、結
合した水性層を飽和重炭酸ナトリウムで塩基化され、酢
酸エチルで抽出された。有機層は、飽和重炭酸ナトリウ
ムで２度洗浄され、蒸留水で２度洗浄されてから、硫酸
ナトリウム上で乾燥され、濃縮された。混和物は、シリ
カゲル（３５ｘ３００ｍｍカラム、０．５％アンモニア
とジクロロメタン中の５％メタノールに対するジクロロ
メタンの勾配溶出法で溶出）ＭＰＬＣによって精製さ
れ、青白いオレンジの固体として表題化合物を生じ
た。：¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ₃０Ｄ）ｄ
８．２１（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝１．６９，９．１３Ｈ
ｚ），７．８５（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．２２，９．０２
Ｈｚ），３．７７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．１４Ｈｚ），
２．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０７，１６．７２Ｈ
ｚ），２．６３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１７，１６．１
２Ｈｚ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。

【０１３６】ステップＣ：Ｎ（Ｎ−アセチル−チロシニ
ル−バリニル−アラニニル−アスパラギン酸 ｂ−ｔ−
ブチルエステル ｐ−ニトロアニリド

【０１３７】

【化４２】 メタノール３ｍｌ中のＮ−（Ｎ−アセチル−チロシニル
−バリニル−アラニンベンジルエステル（１０６ｍｇ、
０．２１９ｍＭｏｌ）溶液に、１０ｍｇのパールマン触
媒（炭素にＰｄ（ＯＨ）₂）が加えられた。２時間後、
水素ガス雰囲気下で、混和物はろ過され濃縮された。ア
スパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエステルｐ−ニトロアニリ
ド（８１．４ｍｇ、０．２６３ｍＭｏｌ）が加えられ、
その後ハイドロキシベンゾトリアゾール（８９ｍｇ、
０．６６ｍｍｏｌ）と２ｍｌのジメチルホルムアミドが
続けて加えられた。混和物は０℃に冷却され、ジシクロ
ヘキシカルボジイミド（９０ｍｇ、０．４３８）が加え
られた。１６時間後、外界温度で、混和物は濾過され、
セファデックス”ＬＨ−２０クロマトグラフィ（１Ｍｘ
５０ｍｍカラム、メタノール溶出液）により精製され
た。結果として生じた生成物は、更に、ＭＰＬＣによっ
て、シリカゲル（２２ｘ３００ｍｍカラム、ジクロロメ
タン中の２０％メタノールに対するジクロロメタンの直
線勾配溶出法で溶出）で精製され、無色の固体として表
題の化合物を生じた。：¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，
ＤＭＦ−ｄ₇）ｄ ８．３〜７．９（ｍ ９Ｈ），７．
０９（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ），６．７３
（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６１Ｈｚ），４．８２（ｂ
ｒ ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．０３Ｈｚ），４．６（ｍ，１
Ｈ），４．４〜４．１５（ｍ，２Ｈ），３．１〜２．７
（ｍ，４Ｈ），２．１（ｍ，１Ｈ），１．８７（ｓ，３
Ｈ），１．４３（ｄ，１．５Ｈ，Ｊ＝６．８８Ｈｚ），
１．４１（ｓ，９Ｈ），１．３７（ｄ，１．５Ｈ，Ｊ＝
６．８８Ｈｚ），０．９２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６０Ｈ
ｚ），０．９１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．１２Ｈｚ）。

【０１３８】ステップＤ：Ｎ（Ｎ−アセチル−チロシニ
ル−バリニル−アラニニル−アスパラギン酸 ｐ−ニト
ロアニリド

【０１３９】

【化４３】 Ｎ（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリニル−アラニニル
−アスパラギン酸 ｂ−ｔ−ブチルエステルｐ−ニトロ
アニリド（１３８．９ｍｇ）が、トリフルオロ酢酸６ｍ
ｌ中に溶解された。１５分後、混和物は濃縮され、その
後、メタノールで希釈され、数回濃縮された。混和物
は、ＭＰＬＣによって、シリカゲル（２２ｘ３００ｍｍ
カラム、０．２％ＴＦＡおよびジクロロメタン中の２０
％メタノールに対するジクロロメタン中の０．２％ＴＦ
Ａの直線勾配溶出法で溶出）で精製され、さらに、セフ
ァデクスＬＨ〜２０クロマトグラフィ（１Ｍｘ２５ｍｍ
カラム、メタノール溶離液）によって精製された。結果
として生じた生成物はエーテルですり潰され、無色の固
体として表題の化合物を生じた。：¹Ｈ ＮＭＲ（２０
０ＭＨｚ，ＣＤ₃０Ｄ）ｄ ８．１７（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ
＝２．２６， ９．０６Ｈｚ），７．８８（ｄｔ，２
Ｈ，Ｊ＝２．１５，９．０６Ｈｚ），７．０１（ｂｒ
ｄ，２Ｈ），６．６５（ｂｒ ｄ，２Ｈ），４．７５
（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｍ，１Ｈ），４．３〜４．０
（ｍ，３Ｈ），３．０〜２．６（ ｍ，４Ｈ），１．９
８（ｍ，１Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．３５
（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８１Ｈｚ），０．８９（ｄ，６
Ｈ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ）。

【０１４０】実施例７ Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリニル−アラニニ
ル−アスパラギン酸 ａ−６−アミノキノリンアミドステップ Ａ ：Ｎ−（９−フロレニルメチルオキシカル
ボニル）―アスパラギン酸 ｂ−ｔ−ブチルエステル
ａ−６−アミノキノリンアミド。

【０１４１】

【化４４】 Ｎ−（９−フロレニルメチルオキシカルボニル）−アス
パラギン酸 ｂ−ｔ−ブチルエステル（１．００ｇ、
２．４３ｍＭｏｌ）、６ーアミノキノリン（３８５ｍ
ｇ、２．６７ｍＭｏｌ）並びに０℃のジクロロメタン１
０ｍｌ中のジメチルアミノピリジン２０ｍｇの溶液に、
エチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド（６９９
ｍｇ、３．６５ｍＭｏｌ）が加えられた。１．５時間
後、０℃で、混和物は酢酸エチルで希釈され、飽和重炭
酸ナトリウムで３回、および蒸留水で３回洗浄され、そ
の後、硫酸ナトリウム上で乾燥され濃縮された。その
後、混和物は、シリカゲル（３５ｘ３００ｍｍカラム、
溶離液として５０％の酢酸エチル／ジクロロメタン）で
ＭＰＬＣによって精製され、無色の泡状体として表題の
化合物を生じた。：¹ＨのＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ
Ｃｌ₃）ｄ ８．８（ｍ，２Ｈ），８．２６（ｄ，１
Ｈ），８．０８（ｂｒ ｄ，１Ｈ），８．０４（ｄ，１
Ｈ），７．７５（ｄ，１Ｈ），７．５８（ｍ，３Ｈ），
７．４５〜７．２（ｍ，６Ｈ），６．１（ｂｒ ｓ，１
Ｈ），４．７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．５２（ｄ，２
Ｈ），４．２４（ｔ，１Ｈ），２．９８（ｄｄ，１
Ｈ），２．７０（ｄｄ，１Ｈ），１．４７（ｓ，９
Ｈ）。

【０１４２】ステップＢ：アスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチ
ルエステルａ−６−アミノキノリンアミド。

【０１４３】

【化４５】 アセトニトリル２０ｍｌ中のＮ―（９−フロレニルメチ
ルオキシカルボニル）アスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエ
ステルａ−６−アミノキノリンアミド溶液に、ジエチル
アミン２０ｍｌが加えられた。外界温度で、１時間後、
ＭＰＬＣによって、シリカゲル（ジクロロメタン中で、
３５ｘ３００ｍｍカラム、１％のアンモニアと１０％の
メタノールに対するジクロロメタンの勾配溶出法で溶
出）で精製され、濃縮されて、混和物は表題の化合物を
生じた。：¹ＨのＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ₃０Ｄ）ｄ
８．７３（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．５２，３．９２Ｈ
ｚ），８．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６８Ｈｚ），８．
２７（ｂｒ ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１１Ｈｚ），７．９７
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２４Ｈｚ），７．８４（ｄｄ，１
Ｈ，Ｊ＝２．１２，８．６８），７．４９（ｄｄ，１
Ｈ，Ｊ＝４．５５，８．１８Ｈｚ）３．８１（ｄｄ，１
Ｈ，Ｊ＝６．１０，７．３０Ｈｚ），２．７９（ｄｄ，
１Ｈ，Ｊ＝６．２４，１６．１９Ｈｚ），２．６６（ｄ
ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６３，１６．１９Ｈｚ），１．４３
（ｓ，９Ｈ）。

【０１４４】ステップＣ：Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシ
ニル−バリニル−アラニニル−アスパラギン酸 ｂ−ｔ
−ブチルエステルａ−６−アミノキノリンアミド

【０１４５】

【化４６】 メタノール３ｍｌ中のＮ−（Ｎ−アセチル−チロシニル
−バリニル−アラニンベンジルエステル（１０２ｍｇ、
０．２１１ｍＭｏｌ）溶液に、１０ｍｇのパールマン触
媒（炭素にＰｄ（ＯＨ）₂）が加えられた。２時間後、
水素ガス雰囲気下で、混和物はろ過され濃縮された。ア
スパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエステルａ−６−アミノキ
ノリンアミド（１００ｍｇ、０．３２ｍＭｏｌ）が加え
られ、その後ハイドロキシベンゾトリアゾール（５７ｍ
ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）と２ｍｌのジメチルホルムアミ
ドが続けて加えられた。混和物は０℃に冷却され、ジシ
クロヘキシカルボジイミド（６５ｍｇ、０．３１６）が
加えられた。１６時間後、外界温度で、混和物は濾過さ
れ、セファデックス”ＬＨ−２０クロマトグラフィ（１
Ｍｘ５０ｍｍカラム、メタノール溶出液）により精製さ
れた。結果として生じた生成物は、更に、ＭＰＬＣによ
って、シリカゲル（２２ｘ３００ｍｍカラム、２％のア
ンモニアと２０％のメタノールに対するジクロロメタン
の直線勾配で溶出）で精製され、無色の固体として表題
の化合物を生じた。：¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、Ｄ
ＭＦ−ｄ₇）ｄ ８．８２（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．４
８，４．０６Ｈｚ），８．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９
０Ｈｚ），８．３２（ｍ，３Ｈ），８．２〜８．０
（ｍ，５Ｈ），７．４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０２，
８．１８Ｈｚ），７．０９（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．
６４Ｈｚ），６．７３（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．００
Ｈｚ），４．８７（ｂｒ ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．０３Ｈ
ｚ），４．６５（ｍ，１Ｈ），４．５〜４．２（ｍ，２
Ｈ），３．２〜２．８（ｍ，４Ｈ），２．１８（ｍ，１
Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ），
１．３８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．９５Ｈｚ），０．９４
（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．３４Ｈｚ）。

【０１４６】ステップＤ：Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシ
ニル−バリニル−アラニニル−アスパラギン酸ａ−６−
アミノキノリンアミド

【０１４７】

【化４７】 Ｎ―（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリニル−アラニニ
ル−アスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエステル ａ−６−
アミノキノリンアミドはトリフルオロ酢酸中に溶解さ
れ、１５分間保持された。その後、混和物は濃縮され、
メタノールとトルエンで希釈され、無色の固体として表
題の化合物を生じた。：¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、
ＤＭＦ−ｄ₇）ｄ ８．９９（ｂｒ ｄ １Ｈ，Ｊ＝
５．０１Ｈｚ），８．９２（ｂｒ ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．
１８Ｈｚ），８．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２２Ｈ
ｚ），８．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１５，９．１４
Ｈｚ），８．１２（ｄ，１Ｈ，９．１３Ｈｚ），７．９
３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４７，８．１１Ｈｚ），７．
０２（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５７Ｈｚ），６．６４
（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５７Ｈｚ），４．８（ｍ，
１Ｈ），４．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９６，８．５
０Ｈｚ），４．２６（ｍ，１Ｈ），４．１２（ｍ，１
Ｈ），３．１２〜２．７（ｍ，４Ｈ），２．０５（ｍ，
１Ｈ），１．９０（ｓ，３Ｈ），１．４０（ｄ，３Ｈ，
Ｊ＝６．８１Ｈｚ），０．９１（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．６
７Ｈｚ）。

【０１４８】実施例８ Ｎ―（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリニル−アラニニ
ル）―アスパラギン酸ａ−７−アミノ−４−メチルクマ
リンアミド。

【０１４９】ステップＡ：Ｎ−アリルオキシカルボニル
アスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエステルａ−７−アミノ
−４−メチルクマリンアミド。

【０１５０】

【化４８】 無水ジオキサン１５ｍｌ中の、Ｎ−アリルオキシカルボ
ニルアスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエステル（３．４４
ｇ １２．６ｍＭｏｌ）と７−アミン−４−メチルクマ
リン（２．００ｇ、１１．４２ｍＭｏｌ）の溶液に、エ
チルジメチルアミノプロピル カルボジイミド（２．６
６ｇ、１３．８６ｍＭｏｌ）が加えられた。環流７５分
後に、混和物は酢酸エチルで希釈され、１Ｎの塩酸で３
回洗浄され、飽和重炭酸ナトリウムで３回洗浄された。
溶液は硫酸ナトリウム上で乾燥され、真空下で濃縮され
た。混和物は、シリカゲル（３５ｘ３００ｍｍカラム、
溶離液としてジクロロメタン中の１０％の酢酸エチル）
でＭＰＬＣによって精製され、無色の泡状体として表題
の化合物を生じた。：¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，Ｃ
Ｄ₃０Ｄ）ｄ ７．７７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３９Ｈ
ｚ），７．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０６Ｈｚ），７．
４９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３６，９．１０Ｈｚ），
６．２１（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝１．３０Ｈｚ），５．９５
（ｍ，１Ｈ），５．４〜５．１５（ｍ，２Ｈ），４．７
２〜４．５８（ｍ，３Ｈ），２．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ
＝６．１７，１５．７３Ｈｚ），２．６５（ｄｄ，１
Ｈ，Ｊ＝７．６２，１６．３７Ｈｚ），２．４３（ｄ，
３Ｈ，Ｊ＝１．４４Ｈｚ），１．４３（ｓ，９Ｈ）。

【０１５１】ステップＢ：アスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチ
ルエステルａ−７−アミノ−４メチルクマリンアミド。

【０１５２】

【化４９】 無水テトラヒドロフランの１０ｍｌ中の、Ｎ−アリルオ
キシカルボニルアスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエステル
ａ−７−アミノ−４−メチルクマリンアミド（４３５ｍ
ｇ、１．０１ｍＭｏｌ）とジメドン（１．１３ｇ、８．
０８ｍＭｏｌ）の溶液に、テトラキストリフェニルホス
フィンパラジウム（１１７ｍｇ、０．１ｍＭｏｌ）が加
えられた。４５分後、混和物は酢酸エチルで希釈され、
硫酸ナトリウム上で乾燥され、真空下で濃縮されて、飽
和重炭酸ナトリウムで５回洗浄された。混和物は、シリ
カゲル（３５ｘ３００ｍｍカラム、０．２５％のアンモ
ニアとジクロロメタン中の２．５％のメタノールに対す
るジクロロメタンの勾配溶出法で溶出）でＭＰＬＣによ
って精製され、無色の発泡体として表題の化合物を生じ
た。：¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ₃０Ｄ）ｄ
７．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ），７．８２
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ），７．６３（ｄｄ，１
Ｈ，Ｊ＝２．４０，９．１０Ｈｚ），６．３４（ｑ，１
Ｈ，Ｊ＝１．３１Ｈｚ），３．８９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝
６．３５Ｈｚ），２．８８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０
３，１６．７２Ｈｚ），２．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝
６．７７，１６．７５Ｈｚ），２．５６（ｄ，３Ｈ、Ｊ
＝１．３７Ｈｚ），１．５４（ｓ，９Ｈ）。

【０１５３】ステップＣ：Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシ
ニル−バリニル−アラニニル）―アスパラギン酸ｂ−ｔ
−ブチルエステルａ−７−アミノ−４−メチルクマリン

【０１５４】

【化５０】 ０℃のジメチルホルムアミド２ｍｌ中の、Ｎ−（Ｎ−ア
セチル−チロシニル−バリニル−アラニン（２８８ｍ
ｇ、０．７３３ｍＭｏｌ）、アスパラギン酸ｂ−ｔ−ブ
チルエステルａ−７−アミノ−４−メチルクマリン（２
４２ｍｇ、０．６９８ｍＭｏｌ）、およびハイドロキシ
ベンゾトリアゾール（１４９ｍｇ、１．１０ｍＭｏｌ）
溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（１５１ｍ
ｇ、０．７３３）が加えられた。１６時間後、外界温度
で、混和物は濾過され、セファデックス”ＬＨ−２０ク
ロマトグラフィ（１Ｍｘ５０ｍｍカラム、メタノール溶
出液）により精製された。結果として生じた生成物は、
メタノールとともにすり潰され、無色の固体として表題
の化合物を生じた。：¹Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，Ｄ
ＭＦ−ｄ₇）ｄ ８．３〜７．５（ｍ，７Ｈ），７．０
９（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６１Ｈｚ），６．７２
（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ），６．２７
（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝１．３１Ｈｚ），４．８４（ｍ，１
Ｈ），４．６２（ｍ，１Ｈ），４．４４〜４．１４
（ｍ，２Ｈ），３．１５〜２．７（ｍ，４Ｈ），２．４
５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝１．３７Ｈｚ），２．１３（ｍ，１
Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ），
１．３７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．３８Ｈｚ），０．９４
（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．１２Ｈｚ），０．９３（ｄ，３
Ｈ，Ｊ＝７．１２Ｈｚ）。

【０１５５】ステップＤ：Ｎ−（Ｎ−アセチル−チロシ
ニル−バリニル−アラニニル）―アスパラギン酸ａ−７
−アミノ−４−メチルクマリンアミド

【０１５６】

【化５１】 Ｎ（Ｎ−アセチル−チロシニル−バリニル−アラニニ
ル）−アスパラギン酸ｂ−ｔ−ブチルエステルａ−７−
アミノ−４−メチルクマリンアミドが、トリフルオロ酢
酸中に溶解された。１５分後、混和物は真空下に濃縮さ
れ、無色の固体として表題の化合物を生じた。：¹Ｈ
ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＤＭＦ−ｄ₇）ｄ８．３〜７．
５（ｍ，７Ｈ），７．０９（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．
６１Ｈｚ），６．７２（ｂｒ ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６４
Ｈｚ），６．２７（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝１．３１Ｈｚ），
４．８４（ｍ，１Ｈ），４．６２（ｍ，１Ｈ），４．４
４〜４．１４（ｍ，２Ｈ），３．１５〜２．７（ｍ，４
Ｈ），２．４５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝１．３７Ｈｚ），２．
１３（ｍ，１Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ），１．４１
（ｓ，９Ｈ），１．３７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．３８Ｈ
ｚ），０．９４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．１２Ｈｚ），０．
９３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．１２Ｈｚ）。Ｃ₃₃Ｈ₃₉Ｎ₅Ｏ
₁₀・１．６５ Ｈ₂０に対して計算された微量分析：
Ｃ，５７．００，Ｈ，６．１３，Ｎ，１０．０７； 実験値：Ｃ，５６．９７，Ｈ，５．８４、Ｎ １０．１
６。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マルコルム・マツクコス アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07728、フリーホールド、ローズ・コー ト・48 (72)発明者 リチヤード・エイ・マムフオード アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07701、レツド・バンク、サウス・ストリ ート・62 (72)発明者 ナンシー・エイ・ソーンベリイ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07090、ウエストフイールド、セント・マ ークス・アベニユー・647 (72)発明者 ジエフリー・アール・ウエイドナー アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 08830、イゼリン、チエリル・ドライブ・ 911 (72)発明者 ウイリアム・ケイ・ヘイグマン アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07090、ウエストフイールド、シヤツカマ コン・ドライブ・871

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式Ｉ： 【化１】 で表わされる化合物においてＡＡ₁が、次の（ａ）、
   （ｂ）から成るグループから別個に選択され、 （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩのアミノ酸 【化２】 式ＡＩ中、Ｒ₁が次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）からなる
   グループから選択され、 （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
   １）から選択される） （１） 水素 （２） 水酸基 （３） ハロゲン （４） −Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５） ―ＳＨ （６） Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７） カルボキシ （８） −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９） Ｃ_1-4アルキルアミノ（アルキル部分は水素又
   は水酸基と置換され、アミノは水素またはＣＢＺと置換
   される） （１０）グアニジノ （１１）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキルあるいは置換アリールＣ
   _1-6アルキル （アリールグループは次のものから成るグループから選
   択される） （ａ） フェニル （ｂ） ナフチル （ｃ） ピリジル （ｄ） フリル （ｅ） チエニル （ｆ） チアゾリル （ｇ） イソチアゾリル （ｈ） イミダゾリル （ｉ） ベンズイミダゾリル （ｊ） ピラジニル （ｋ） ピリミジル （ｌ） キノリル （ｍ） イソキノリル （ｎ） ベンゾフリル （ｏ） ベンゾチエニル （ｐ） ピラゾリル （ｑ） インドリル （ｒ） プリニル （ｓ） イソオキサゾリル （ｔ） オキサゾリル および項目（ａ）〜（ｔ）中で上に定義されるようなモ
   ノおよびジ−置換アリール（これらの項目中で、置換基
   は別個にＣ_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アル
   キルアミノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよ
   びＣ_1-6アルキルカルボニルである）ＡＡ₂が、次の
   （ａ）、（ｂ）から成るグループから別個に選択され、 （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩＩのアミノ酸 【化３】 ＡＡ₃が、次の（ａ）、（ｂ）から成るグループからそ
   れぞれ別個に選択され、 （ａ）単結合、および （ｂ）式ＡＩＩＩのアミノ酸 【化４】 上記式中、Ｒ₂およびＲ₃が各々、次の（ａ）、（ｂ）、
   （ｃ）から成るグループからそれぞれ別個に選択され、 （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基が次の（１）〜（１
   １）から選択される） （１）水素、 （２）水酸基、 （３）ハロゲン、 （４）−Ｓ−Ｃ_1-4アルキル、 （５）−ＳＨ （６） Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７） カルボキシ （８） −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９） Ｃ_1-4アルキルアミノ（アルキル部分は水素ま
   たは水酸基と置換され、アミノは水素またはＣＢＺと置
   換される） （１０）グアニジノ （１１）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル、 アリールが、直前に定義されたように定義され、また、
   アリールがモノおよびジ−置換アリールであってもよ
   く、置換基が別個にＣ_1-6アルキル、ハロゲン、水酸
   基、Ｃ_1-6アルキルアミノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6ア
   ルキルチオおよびＣ_1-6アルキルカルボニルであり、ｎ
   が０から１６までの整数であり、（ＡＡ）_nが長さでｎ
   （すなわち０から１６個の）アミノ酸のペプチドであ
   り、各アミノ酸が下記式から独立しており、 【化５】 上記式中、Ｘが次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から成るグ
   ループから選択され、 （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
   ２）から選択される） （１）水素 （２）水酸基 （３）ハロゲン （４）−Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５）―ＳＨ （６）Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７）カルボキシ （８）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９）アミノカルボニルアミノ （１０）Ｃ_1-4アルキルアミノ（アルキル部分は水素ま
   たは水酸基と置換され、アミノは水素またはＣＢＺと置
   換される） （１１）グアニジノ （１２）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル アリールが直前に定義されたように定義され、またアリ
   ールがモノおよびジ−置換アリールであってもよく、置
   換基が別個にＣ_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6
   アルキルアミノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオ
   およびＣ_1-6アルキルカルボニルであり、Ｒ₅が次の
   （ａ）、（ｂ）から成るグループから選択され、 （ａ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜
   （４）から選択される） （１）水素、 （２）水酸基、 （３）ハロゲン、 （４）Ｃ_1-6アルキルカルボニル、 （ｂ）次の（１）〜（２０）から成るグループから選択
   されるアリールグループ をもつアリールＣ_1-6アルキル （１） フェニル （２） ナフチル （３） ピリジル （４） フリル （５） チエニル （６） チアゾリル （７） イソチアゾリル （８） イミダゾリル （９） ベンズイミダゾリル （１０） ピラジニル （１１） ピリミジル （１２） キノリル （１３） イソキノリル （１４） ベンゾフリル （１５） ベンゾチエニル （１６） ピラゾリル （１７） インドリル （１８） プリニル （１９） イソオキサゾリル （２０） オキサゾリル、 および、アリールが項目（１）〜（２０）で上に定義さ
   れるようなモノおよびジ−置換アリールであり、置換基
   は別個にＣ_1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アル
   キルアミノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよ
   びＣ_1-6アルキルカルボニルであり、Ｒ₆が、次の
   （ａ）、（ｂ）、（ｃ）から成るグループから選択さ
   れ、 （ａ） モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールアミノ、 （ｂ） モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールオキシ、 （ｃ） モノ、ジ−あるいはトリ置換アリールチオ、ア
   リールグループが次のものから成るグループから選択さ
   れ、 【化６】 置換基が次のものから成るグループから選択され、 （ａ） Ｈ （ｂ） ＯＨ （ｃ） ハロゲン （ｄ） Ｃ_1-6アルキル （ｅ） Ｃ_1-6アルキルオキシ （ｆ） ＣＯ₂Ｈ （ｇ） ＮＯ₂ （ｈ） ＳＯ₃Ｈ （ｉ） ホルミル （ｊ） ＮＨ₂ （ｋ） ＳＨ （ｌ） Ｃ_1-6アルキルチオ （ｍ） −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （ｎ） フェニル （ｏ） フェニルＣ_1-6アルキル （ｐ） ＮＯ （ｑ） Ｃ_1-6アルキルカルボニル （ｒ） フェニルアゾ （ｓ） Ｃ_1-6スルフィニル （ｔ） Ｃ_1-6スルホニル （ｕ） フェニルスルフィニル （ｖ） フェニルスルホニル （ｗ） フェニルカルボニル （ｘ） フェニルオキシ （ｙ） フェニルチオール （ｚ） Ｃ_1-4アルキルアミノ （ａａ）ジＣ_1-4アルキルアミノ （ａｂ）ＣＮ Ｒ₈がアリールがフェニルあるいはナフチルからなるグ
   ループから選択されるアリールＣ_1-6アルキルあるいは
   Ｃ_1-6アルキルであることを特徴とする前記化合物。
2. 【請求項２】 ｎが０であり、ＡＡ₁が下記の式のアミ
   ノ酸であり 【化７】 ＡＡ₂が下記の式のアミノ酸であり 【化８】 ＡＡ₃が下記の式のアミノ酸 【化９】 であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
3. 【請求項３】 Ｒ₂とＲ₃が次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）
   から成るグループからそれぞれ別個に選択され、 （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜（１
   １）から選択される） （１） 水素 （２） 水酸基 （３） ハロゲン （４） −Ｓ−Ｃ_1-4アルキル （５） ―ＳＨ （６） Ｃ_1-6アルキルカルボニル （７） カルボキシ （８） −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （９） Ｃ_1-4アルキルアミノ、およびアルキル部分が
   水酸基と置換されるＣ_1-4アルキルアミノ （１０）グアニジノ （１１）アミノ （ｃ）アリールＣ_1-6アルキル ここで、アリールとは （１）フェニル （２）ナフチル （３）ピリジル （４）フリル （５）チエニル （６）チアゾリル （７）イソチアゾリル （８）ベンゾフリル （９）ベンゾチエニル （１０）インドリル （１１）イソオキサゾリルおよび （１２）オキサゾリル と定義されるものであって、このアリールが，モノおよ
   びジ−置換アリールであってもよく、置換基が別個にＣ
   _1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
   ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
   アルキルカルボニルであり、Ｒ₆が、次の（ａ）、
   （ｂ）、（ｃ）から成るグループから選択され、 （ａ） モノ、あるいはジ−置換アリールアミノ （ｂ） モノ、あるいはジ−置換アリールオキシ （ｃ） モノ、あるいはジ−置換アリールチオ ここでアリールグループが下記のものより成るグループ
   から選択され、 【化１０】 置換基が次の（１）〜（１０） （１） Ｈ （２） ＯＨ （３） ハロゲン （４） Ｃ_1-6アルキル （５） Ｃ_1-6アルキルオキシ （６） ＣＯ₂Ｈ （７） ＮＯ₂ （８） ＳＯ₃Ｈ （９） ホルミル （１０）ＣＮから成るグループから選択されることを特
   徴とする請求項２に記載の化合物。
4. 【請求項４】 Ｒ₂およびＲ₃が各々、次の（ａ）、
   （ｂ）、（ｃ）から成るグループから別個に選択され、 （ａ）水素 （ｂ）置換Ｃ_1-6アルキル（置換基は次の（１）〜
   （７）から選択される） （１） 水素 （２） 水酸基 （３） カルボキシ （４） −Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ₂ （５） Ｃ_1-4アルキルアミノ、およびアルキル部分が
   水酸基と置換されるＣ_1-4アルキルアミノ （６） グアニジノ （７） アミノ （ｃ）アリールＣ_1-3アルキル（アリールは下記のもの
   と定義される） （１） フェニル （２） ナフチル （３） チエニル （４） チアゾリル、および （５） ベンゾチエニル ここでアリールが、モノおよびジ−置換アリールであっ
   てもよく、置換基が別個にＣ_1-6アルキル、ハロゲン、
   水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ
   _1-6アルキルチオおよびＣ_1-6アルキルカルボニルであ
   り、Ｒ₆が、次の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）から成るグル
   ープから選択され、 （ａ） モノ、あるいはジ−置換アリールアミノ （ｂ） モノ、あるいはジ−置換アリールオキシ （ｃ） モノ、あるいはジ−置換アリールチオ ここでアリールグループが下記のものより成るグループ
   から選択され、 【化１１】 置換基が次の（１）〜（７） （１） Ｈ （２） ＯＨ （３） Ｃ_1-3アルキル （４） Ｃ_1-3アルキルオキシ （５） ＣＯ₂Ｈ （６） ホルミル （７） ＣＮから成るグループから選択されることを特
   徴とする請求項３に記載の化合物。
5. 【請求項５】 Ｒ₁がアリールＣ_1-6アルキルであって、
   アリールが次のものから成るグループから選択され、 （１） フェニル （２） ナフチル （３） ピリジル （４） フリル （５） チエニル （６） チアゾリル （７） イソチアゾリル （８） ベンゾフリル （９） ベンゾチエニル （１０） インドリル （１１） イソオキサゾリル （１２） オキサゾリル および上記（１）から（１２）項に定義されたようなモ
   ノおよびジ−置換アリールであって、置換基が別個にＣ
   _1-6アルキル、ハロゲン、水酸基、Ｃ_1-6アルキルアミ
   ノ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオおよびＣ_1-6
   アルキルカルボニルであることを特徴とする請求項４に
   記載の化合物。
6. 【請求項６】 Ｒ₁がアリールＣ_1-6アルキルであって、
   アリールが次のものから成るグループから選択され、 （１） フェニル （２） ナフチル （３） チエニル （４） ベンゾチエニル アリールが置換されていてもよく、置換基が別個に水素
   および水酸基であることを特徴とする請求項４に記載の
   化合物。
7. 【請求項７】 Ｒ₅がメチルであり、Ｒ₂がＣ_1-6アルキ
   ルであり、Ｒ₃が （ａ） 水素 （ｂ） Ｃ_1-6アルキル （ｃ） Ｎ−カルボベンズオキシ−アミノ―（ｎ−ブチ
   ル） （ｄ） インドール−２−イル−メチル （ｅ） 置換フェニルＣ_1-6アルキル（置換基は水素、
   水酸基、カルボキシあるいはＣ_1-4アルキルである） （ｆ） 置換インドリルＣ_1-6アルキル（置換基は水
   素、水酸基、カルボキシあるいはＣ_1-4アルキルであ
   る） （ｇ） 置換イミダゾリルＣ_1-6アルキル（置換基は水
   素、水酸基、カルボキシあるいはＣ_1-4アルキルであ
   る）であることを特徴とする請求項６に記載の化合物。
8. 【請求項８】 Ｒ₅がメチルで、Ｒ₂がＣ_1-6アルキル
   で、Ｒ₃が （ａ） 水素 （ｂ） Ｃ_1-6アルキル （ｃ） Ｎ−カルボベンズオキシ−アミノ―（ｎ−ブチ
   ル） （ｄ） カルバミルメチル （ｅ） カルバミルエチル （ｆ） インドール−２−イル−メチル、あるいは （ｇ） 置換フェニルＣ_1-3アルキル（置換基は水素ま
   たは水酸基）であることを特徴とする請求項７に記載の
   化合物。
9. 【請求項９】 下記 （ａ）（Ｎ−アセチル−チロシニル）−バリニル−アラ
   ニニル−アスパラギン酸ｐ−ニトロアニリド； （ｂ）（Ｎ−アセチル−チロシニル）−バリニル−アラ
   ニニル−アスパラギン酸６−アミノキノリンアミド；お
   よび （ｃ）Ｎ−（（Ｎ−アセチル−チロシニル）−バリニル
   −アラニニル）−７−アミノ−４−メチルクマリンアミ
   ドから成るグループから選択される化合物。
10. 【請求項１０】 サンプルのインターロイキン―１β変
    換酵素活性を決定するための、請求項１に記載の化合物
    の使用方法において、 （ａ） 任意の順序で、水溶液中に、 （１） 式Ｉで表わされる化合物 （２）インターロイキン−１β変換酵素および （３）サンプル；を加え、 （ｂ） 分光光度計測的あるいは蛍光測定的手段によっ
    て、ステップ（ａ）の生成物のインターロイキン−１β
    変換酵素活性を測定することを含むことを特徴とする前
    記方法。