JPH0480887B2

JPH0480887B2 -

Info

Publication number: JPH0480887B2
Application number: JP59010858A
Authority: JP
Inventors: Kyoshi Nara; Susumu Pponda
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1984-01-23
Filing date: 1984-01-23
Publication date: 1992-12-21
Also published as: ZA85496B; JPS60155137A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、高濃度ヒトγ型インターフエロン水
溶液の製造法に関する。

インターフエロン（以下IFNと略称することが
ある）は、高等動物の細胞がウイルスや核酸など
の刺激によつて誘発されて産生する蛋白であり、
抗ウイルス作用、抗腫瘍作用などを有する。

ヒトのインターフエロンには、現在α型、β型
およびγ型の３種の性状の異なるタイプが存在す
ることが知られている。

α型インターフエロン（以下IFN−αと略称す
る）、β型インターフエロン（以下IFN−βと略
称する）に関する研究は比較的すゝんでおり、精
製法もそれらの物性もかなり明らかになつて来て
いる。

γ型インターフエロン（以下IFN−γと略称す
ることがある。）はリンパ球の芽球化やリンホカ
イン産生が起るような状況下で、免疫担当細胞か
ら産生されるため免疫インターフエロンとも呼ば
れている。IFN−γはIFN−αやIFN−βと比較
して、抗細胞増殖活性や抗腫瘍活性が高いといわ
れており、臨床的応用面からより期待されてい
る。しかし、その産生に新鮮なリンパ球が必要で
あることなどの制約があるため、これまで効率の
よい産生系は確立されていない。また、異なる実
験系では、異なる細胞種が異なる分子種のIFN−
γを産生する可能性も示唆されており、その構造
や性質に関しても不明な点が数多く残されてい
る。

本発明者らは、遺伝子組換え技術により生産さ
れたヒトIFN−γの精製につき技術開発研究を行
なつている際、ヒトIFN−γが非常に多量化を起
しやすく、精製が困難であることを認め、これを
解決するために還元性硫黄化合物および蛋白変性
剤の共存下にゲル過することを特徴とするヒト
IFN−γ単量体の製造法を開発した（特願昭58−
186383号明細書（特開昭60−79000号公報）参
照）。この方法で得られたヒトIFN−γ単量体水
溶液には還元性硫黄化合物および蛋白変性剤が含
まれており、これらの低分子化合物のうち特に蛋
白変性剤は製剤には用いられないので除去する必
要があるが、該除去処理により得られる水溶液中
のヒトIFN−γは溶解度が低く、濃縮操作等にお
いて容易に析出するため、製剤原料としてはあま
り適切でないことが判明した。

本発明者らは、さらに鋭意研究を行ないヒト
IFN−γ難溶化の原因を究明し、高濃度ヒトIFN
−γ水溶液の製造法を確立した。

すなわち、本発明は、ヒトγ型インターフエロ
ンの非共有結合二量体を0.2〜1.5mg／mlの濃度で
含有する水溶液、および蛋白変性剤を含有するヒ
トIFN−γの希薄水溶液から蛋白変性剤を除去
し、該溶液を液体状態で24時間以上熟成させ、つ
いで濃縮することを特徴とする高濃度ヒトIFN−
γの非共有結合二量体を含有する水溶液の製造法
である。

上記、蛋白変性剤を含有するヒトIFN−γ水溶
液として、好ましくは、粗ヒトIFN−γを還元性
硫黄化合物および蛋白変性剤の共存下ゲル過し
て得られるヒトIFN−γ単量体水溶液が用いられ
る。

希薄水溶液は、例えば、単量化しているIFN−
γの溶液を凝集沈殿しないように緩衝液を用いて
30〜200μｇ／mlに稀釈して得られるが、凝集沈
殿しないようにすればどんな方法をとつてもかま
わない。通常、PH5.0−8.0の緩衝液のみで稀釈す
ると、ただちに白沈が出るので、好ましくは、こ
れに2M程度の蛋白変性剤を緩衝液に含ませたも
ので稀釈すると凝集沈殿のない稀薄な溶液を得る
ことができる。上記緩衝液には、さらに還元性硫
黄化合物を含有させてもよい。

上記蛋白変性剤としては、例えば、グアニジン
塩（塩酸塩、硫酸塩）、尿素、チオシアン酸塩
（ナトリウム塩、カリウム塩）などがあげられる。

蛋白変性剤は、上記希薄水溶液を、ゲル過ま
たは限外膜過することにより除去されるが、ゲ
ル過するのが好都合である。

ゲル過の方法は、通常用いられるカラム法が
適している。

ゲル過の原液として上記ヒトIFN−γ希薄水
溶液が好ましいが、多少析出物があつてもゲル
過にさしつかえない程度であればかまわない。ま
たゲル過中に一部析出することもあるが、析出
物は、たとえば、0.22μのメンブレンで過すれ
ば、除去できる。

ゲル過用のゲルとしては市販のものなどから
自由に選択されるが、デキストラン、ポリアクリ
ルアミド、アガロースなどのゲル粒子が好まし
い。とりわけセフアデツクスＧ−25、トリスアク
リルGF−05など低分子化合物の除去に適したも
のがあげられる。

使用するゲルの量は、通常負荷するサンプルの
２〜100倍量（Ｖ／Ｖ）、好ましくは５〜20倍量で
ある。

展開溶媒は、通常PHについて5.0〜8.0、とりわ
け中性付近の緩衝液を用い、好ましくは還元性硫
黄化合物を１〜100mMとりわけ５〜20mMの濃
度で含有させる。

具体的には、展開溶媒であらかじめ平衡とした
ゲルカラムに上記希薄水溶液を負荷する。これを
展開溶媒により溶出する。溶出速度は、サンプル
の不純度、ゲルの種類、量により異なるが、通常
SV（スペースベロシテイ）0.1〜10、好ましく
は、SV 0.5〜３である。溶出液は通常の方法に
より分画する。

ヒトIFN−γの画分は、通常の方法、たとえば
O.D.280nmの吸収等で溶出曲線として表わすこと
により容易に検出することができりる。

蛋白変性剤を除去した希薄水溶液の液体状態で
の熟成は、該希薄溶液を適当な時間、温度で放置
することで達成できる。

熟成の温度、時間の両フアクターは適宜決めら
れるが、温度についてはヒトIFN−γの安定性、
雑菌汚染等の観点から低温、たとえば４℃附近が
好ましいが、０℃〜40℃附であれば、適当な温度
を選ぶことができる。時間については、ゲル過
直後を濃縮すると白濁してくるが、１時間も放置
しておけば、白濁はずつと少なくなる。通常24〜
72時間放置後濃縮すれば十分である。

なお、必要により、熟成を行う前またはその途
中で無菌過等の操作をすることもできる。

濃縮は、限外膜処理により好都合に行うことが
できる。限外膜はMWCO10000程度のものを用い
るのが好ましく、通常の操作によつて行うことが
できる。

上記により製造されるヒトIFN−γ水溶液は、
0.2〜1.5mg／mlのヒトIFN−γを含有し、前記の
製造法による0.05mg／ml程度のものに比し、易溶
化されたヒトIFN−γを含有する高濃度水溶液で
あり、ヒトIFN−γの大量製造中間体として好適
である。

本発明によるヒトIFN−γの易溶化は以下によ
り達成するものと考えられる。

すなわち粗ヒトIFN−γを還元性硫黄化合物お
よび蛋白変性剤の共存下にゲル過して得られる
原料のヒトIFN−γは、共有結合的にも非共有結
合的にも単量体であるが、蛋白変性剤を除去する
と非共有結合的に多量体となりその溶解度が低下
するものと推定される。これを希薄水溶液状態で
熟成させると、一度生じたヒトIFN−γ多量体
が、安定な非共有結合二量体となり、その易溶化
が達成され、容易に高濃度に濃縮が可能となつた
と考えられる。

本発明により製造される高濃度ヒトIFN−γ水
溶液は前記の方法で得られるヒトIFN−γ水溶液
に比し高濃度であるので、保存用凍結品や凍結乾
燥して得られる注射用製剤等の原液として、より
有利に使用される。

本発明により製造されるヒトIFN−γは、低毒
性で、従来の方法で得られるIFN−γと同様の目
的に同様の用法により使用でき、抗ウイルス、抗
腫瘍、細胞増殖抑制および免疫増強作用等を有す
るので、公知のIFN−γと同様にして投与するこ
とができる。

なお、原料の蛋白変性剤を含有するヒトIFN−
γ水溶液は、例えば粗ヒトIFN−γを還元性硫黄
化合物および蛋白変性剤の共存下にゲル過する
ことにより製造できる。

ここで粗ヒトIFN−γはヒトIFN−γを含有す
るものであればいかなるものでもよい。天然に存
在するヒトIFN−γを濃縮、分離したものや遺伝
子組み換え技術によつて得られるヒトIFN−γ生
産能を有する微生物の培養により製造されたヒト
IFN−γ〔特開昭58−189197号公報；ヌクレイツ
クアシツドリサーチ，第10巻，2487−2501頁
（1982年）ネイチヤ，第295巻，503−508頁（1982
年）参照〕を用いることができる。実用面から
は、上記ヒトIFN−γ生産能を有する微生物を培
養して得られる菌体抽出液，硫安分画液，抗体カ
ラム溶出液，イオン交換溶出液を粗ヒトIFN−γ
として用いるが、不純蛋白量が多いほど還元性硫
黄化合物の量が多く必要になり経済的ではないた
め、一般には抗体カラムあるいはイオン交換カラ
ム溶出液等を適用するのが好ましい。また粗ヒト
IFN−γは多量化していてもさしつかえない。

還元性硫黄化合物としては、例えばシステイ
ン，Ｎ−アセチルシステイン，Ｎ−アセチルホモ
スシテイン，還元型グルタチオン，チオエタノー
ルアミン，モノチオグリセロール，ジチオスレイ
トール，炭素数１〜７のチオアルカン，ロンガリ
ツトなどの有機含硫黄化合物やメタ重亜硫酸塩
（ナトリウム塩，カリウム塩）などの無機含硫黄
化合物があげられる。

蛋白変性剤としては、前記したものがあげられ
る。

ゲル過用のゲルとしては市販のものなどから
自由に選択されるが、デキストラン，ポリアクリ
ルアミド，アガロースなどのゲル粒子が好まし
い。また、例えば遺伝子組み換え技術により製造
されるヒトIFN−γに適用するばあい、その分子
量が17143であることやその他の不純蛋白との分
離効率を考え、分画範囲1000〜80000程度の性能
を有するものから選択して使用するのが好都合で
ある。具体的にはとりわけセフアデツクスＧ−
50，Ｇ−75，セフアクリルＳ−200，バイオゲル
Ｐ−10，Ｐ−30，Ｐ−60等があげられる。

使用するゲル量は、通常負荷するサンプルの５
〜100倍（Ｗ／Ｗ）好ましくは10〜30倍（Ｗ／Ｗ）
量である。

ゲル過の方法は、通常用いられるカラム法が
適している。

すなわち、粗ヒトIFN−γを緩衝液などに溶解
し水溶液となし、展開溶媒であらかじめ平衡とし
たゲルカラムに負荷する。これを展開溶媒により
溶出する。溶出速度は、サンプルの不純度，ゲル
の種類，量により異なるが、通常SV（スペース
ペロシテイ）0.1〜10、好ましくはSV0.5〜３であ
る。溶出液は通常の方法により分画する。

ヒトIFN−γと還元性硫黄化合物および蛋白変
性剤を共存させるのは上記ゲル過操作のいずれ
の工程においてでもよいが、ヒトIFN−γをゲル
に負荷するための水溶液および展開溶媒に還元性
硫黄化合物および蛋白変性剤を加えておくのが好
ましい。

なお蛋白変性剤は、抽出，抗体カラム処理など
前処理で使用している場合には、カラムに負荷す
るための水溶液に改めて加えることなくその溶液
のまま使用することが可能である。

上記負荷用水溶液および展開溶媒は、PHについ
ては5.0〜8.0、とりわけ中性付近で、還元性硫黄
化合物を１〜100mMとりわけ５〜20mMの濃度
で含有させるのが好ましく、蛋白変性剤を0.1〜
7Mとりわけ１〜2Mの濃度で含有させることが好
ましい。

本願明細書中、IFN−γの活性としての抗ウイ
ルス活性；国際単位（IU）は、単位（ユニツト）
の確定した国際標準IFN−γと目的とする資料
を、ヒト羊膜由来FL細胞株に対するシンドビス
ウイルス（Sindbis Virus）の細胞変性効果阻
止試験を用いて測定し、その比率から力価を算出
して求めたものである。溶液中の蛋白量は、Ｅ：
280nm＝1.0を１mgとして計算して求めた。

以下実施例および参考例により本発明をより具
体的に説明するが、これらにより本発明は制限さ
れるものではない。

なお参考例中に記載した抗体カラムAb（Moγ20
−11.1）は特願昭58−176091号（昭和58年９月22
日出願）明細書（特開昭59−80646号公報）記載
の方法で調製した。

実施例１参考例２（）でえたIFN−γ（モノマー）含有
溶出画分530mlのうちの26ml（9.85mg含有）に
10mMシステイン塩酸塩，150mM塩化ナトリウ
ム，0.5M塩酸グアニジンおよび0.01％ツイーン
20を含む25mM酢酸緩衝液（PH6.0）の希釈液174
mlを添加，混合し、タン白含量0.05mg／mlの低濃
度溶液を調製した。この溶液を予め10mMシステ
イン塩酸塩，150mM塩化ナトリウムおよび0.01
％ツイーン20を含む25mM酢酸緩衝液（PH6.0）
で平衡化したセフアデツクスＧ−25のカラム（５
×60cm）に負荷し、同一緩衝液で溶出し、塩酸グ
アニジンを除去したIFN−γの溶出画分190ml
（9.12mg含有）をえた。この溶液のタン白含量は
0.048mg／mlで、澄明であつた。タン白回収率は
92.5％で、IFN−γの比活性は3.7×10⁶IU／mgタ
ン白であつた。

実施例２実施例１でえたIFN−γの溶出画分40ml（1.92
mg含有）を４℃で24時間熟成したのち、ダイアフ
ローPM−10，43mmφ（アミコン社製限外過膜）
を用い限外過により４mlまで濃縮した。この濃
縮液は澄明で、タン白含量は0.470mg／mlであつ
た。またタン白回収率は98％（1.88mg）であつ
た。このIFN−γの比活性は6.8×10⁶IU／mgタン
白であつた。

実施例３実施例１でえたIFN−γの溶出画分40ml（1.92
mg含有）を４℃で100時間熟成したのち、実施例
２と同様の方法で４mlまで濃縮した。この濃縮液
は澄明で、タン白含量は0.475mg／mlであつた。
またタン白回収率は99％（1.9mg）であつた。な
おIFN−γの比活性は7.3×10⁶IU／mgタン白であ
つた。

実施例４参考例２（）と同様の方法でえたIFN−γ溶
出画分510ml（0.388mg／ml）に、実施例１と同様
の希釈液3447mlを添加，混合しタン白含量0.05
mg／ml濃度の溶液を調製した。次いで、この溶液
を予め実施例１と同様の平衡化緩衝液で平衡化し
たセフアデツクスＧ−25のカラム（14×100cm）
に負荷し、同一緩衝液で溶出し、塩酸グアニジン
を除いたIFN−γの溶出画分3760mlをえた。この
溶液のタン白含量は0.048mg／mlであり、その
IFN−γの比活性は3.5×10⁶IU／mgタン白であつ
た。この溶液を４℃で48時間熟成したのち、ダイ
アフローPM−10，150mmφ膜を用い188mlまで濃
縮し、タン白含量は0.96mg／mlの澄明なIFN−γ
溶液をえた。このIFN−γの比活性は6.7×10⁶
IU／mgタン白で、SDS−PAGEではモノマーに
収斂した。

実施例５参考例４でえたIFN−γ（モノマー）の溶出画
分450mlに10mM還元型グルタチオン，150mM塩
化ナトリウム，0.5M塩酸グアニジンおよび0.01
％ツイーン20を含む25mM酢酸緩衝液（PH6.0）
の希釈液3241mlを添加，混合し、タン白含量0.05
mg／mlの低濃度溶液を調製した。この溶液を予
め、10mM還元型グルタチオン，150mM塩化ナ
トリウムおよび0.01％ツイーン20を含む25mM酢
酸緩衝液（PH6.0）で平衡化したセフアデツクス
Ｇ−25のカラム（14×100cm）に負荷し、同一緩
衝液でゲル過を行い、塩酸グアニジンを除去し
たIFN−γの溶出画分3180ml（155.8mg）をえた。
この溶液のタン白含量は0.048mg／mlであつた。
タン白回収率は84.4％であつた。その比活性は
3.5×10⁶IU／mgタン白であつた。この溶液を４℃
で48時間熟成したのち、実施例２と同様の方法で
159mlで濃縮した。この濃縮液は澄明で、そのタ
ン白含量は0.92mg／mlであつた。タン白回収率は
93.9％（146.3mg）であつた。なおヒトIFN−γの
比活性は6.8×10⁶IU／mgタン白であつた。

実施例６参考例２と同様の方法でえたヒトIFN−γ（モ
ノマー）溶出画分435ml（0.392mg／ml）に
150mM塩化ナトリウム，0.5M塩酸グアニジンお
よび0.01％ツイーン20を含む25mM酢酸緩衝液
（PH6.0）の希釈液2975mlを添加し、タン白含量
0.05mg／mlの溶液を調製した。この溶液を予め窒
素ガスを注入し、十分に脱気した150mM塩化ナ
トリウムおよび0.01％ツイーン20を含む25mM酢
酸緩衝液（PH6.0）で平衡化したセフアデツクス
Ｇ−25カラム（14×100cm）に負荷したのち同一
緩衝液でゲル過を行い、塩酸グアニジンおよび
還元型グルタチオンを除去したヒトIFN−γの溶
出画分3280ml（138mg含有）をえた。この溶液の
タン白含量は0.042mg／mlであつた。タン白回収
率は81％で、そのヒトIFN−γの比活性は2.8×
10⁶IU／mgタン白であつた。この溶液を４℃で24
時間熟成させたのち、実施例２と同様の方法で
300mlまで濃縮した。そのタン白含量は0.239mg／
mlであつた。タン白回収率は52％（71.8mg）で、
ヒトIFN−γの比活性は1.1×10⁶IU／mgタン白で
あつた。

実施例７本発明の製造法で得られるヒトIFN−γの性状
は以下のとおりであつた。

(1) ドデシル硫酸ナトリウムのスラブ電気泳動法
（SDS−PAGE）による分子量測定見かけ上の分子量約18000でモノマーに収斂し
た。

測定条件：SDS濃度，0.1％；アクリルアミド
濃度６％（濃縮ゲル），12.5％（分離用ゲル）；
電圧，60V（濃縮時），180V（分離時）；濃縮60
分，分離2.5−3.0時間；発色剤，クマシーブリ
リアントブルー (2) ゲル過による量測定見かけ上の分子量は約40000であつた（第１
図）。

測定条件 (1) 資料：本発明の高濃度ヒトIFN−γ水溶液
（タン白濃度＝1.231mg／ml，但しツイーン20
を含まない）標準タン白：牛血清アルブミン（M.
W.68000），卵白アルブミン（M.W.45000），
キモトリプシノーゲンＡ（M.W.25000），チ
トクロームＣ（M.W.12500） (2) ゲル過：25mM酢酸アンモニウム，
150mMNaClおよび10mM還元型グルタチオ
ンを含むPH6.0の緩衝液で平衡化したセフア
デツクスＧ−100カラム（2.7×87cm）に資料
2.46mg／２mlおよび各標準タン白５mg／２ml
を負荷し、溶出速度21ml／時間，フラクシヨ
ン4.5mlでゲル過を行つた。

本発明で製造されるヒトIFN−γは、SDS−
PAGEでは単量体（見かけ上の分子量約18000）
として検出され、ゲル過では二量体（見かけ上
の分子量約40000）として検出されることから、
分子量約18000のサブユニツトからなる二量体で
あり、その結合は非共有結合であることが判明し
た。

参考例１特開昭58−189197号公報実施例８記載の発現用
ヒトIFN−γ遺伝子を有する菌株RRI（pRK 248
cIts，pRC 231／IFI−900）をM9−グルコース
培地で30℃で菌体濃度が３−４×10⁸細胞／mlに
なるまで培養した後、グルコース，カザミノ酸を
濃度がそれぞれ1.0％，0.5％になるように加えて
42℃で１時間誘発させた。得られた培養液を遠心
分離にかけて菌体を集め、凍結して保存した。

参考例２（）参考例１でえた凍結菌体1000ｇに7M塩
酸グアニジンおよび2mMフエニルメチルスル
ホニルフルオライドを含む100mMトリス塩酸
緩衝液（PH7.0）を3000ml加え、４℃で１時間
攪拌したのち遠心分離機（17000rpm／30分）
に付し、澄明な上清液をえた。この上清液を
137mM塩化ナトリウム，27mM塩化カリウム，
8mMリン酸二ナトリウムおよび147mMリン酸
−カリウムから成る緩衝液（以下P.B.STと略
す）で70倍に希釈し、生じてくる沈澱物をシヤ
ープレス遠心分離機（10000rpm）に付して除
去した。次いでえられた上清液220をペリコ
ン（ミリポア社製，分画分子量：10000）で15
にまで濃縮した。この濃縮液を４℃で一夜放
置し、生じた沈澱物をさらにシヤープレス遠心
分離機にかけて除去した。この上清液を予め充
填した抗体カラム（Ab（Mo γ2−11.1）；５×
30cm）に流速1000ml／時間で負荷したのち、
PBSの2500ml，1M塩化ナトリウムおよび0.1％
ツイーン20を含んだ10mMリン酸緩衝液（PH
7.0）の5000ml，PBSの2500mlおよび0.5M塩酸
グアニジンを含んだ20mMリン酸緩衝液（PH
7.0）の2500mlの各洗浄液を遂次抗体カラムを
通過させたのち、2M塩酸グアニジンを含む
20mMリン酸緩衝液（PH7.0）で溶出し、抗ウ
イルス活性を有する溶出画分500mlを集めた。

（）参考例２（）で得た溶出画分にシステ
イン塩酸塩を10mM量添加し、ヒトIFN−γを
モノマーに収斂させた。

このヒトIFN−γ水溶液500mlを予め1mMエ
チレンジアミン四酢酸塩，150Mm塩化ナトリ
ウム，10mMシステイン塩酸塩および2M塩酸
グアニジンを含んだ25mM酢酸緩衝液（PH6.0）
で平衡化したセフアクリールＳ−200（フアルマ
シア社製）のカラム（９×100cm）に負荷し、
同一緩衝液で溶出し、モノマー溶出画分530ml
を集めた。このようにしてえられた画分はドデ
シル硫酸ナトリウムのスラブ電気泳動法（以下
SDS−PAGEと略す）でもモノマーに収斂し
た。（見かけ上の分子量約18000）。この分子ふ
るい操作により比活性3.3×10⁶IU／mgタン白の
ヒトIFN−γを201mgえた。

参考例３参考例２（）でえたヒトIFN−γ（モノマー）
溶出画分530ml（0.379mg／ml）のうち200ml
（75.8mg）を予め10mMシステイン塩酸塩，
150mM塩化ナトリウムおよび0.01％ツイーン20
を含む25mM酢酸緩衝液（PH6.0）の平衡化緩衝
液で平衡化したセフアデツクスＧ−25のカラム
（５×60cm）に負荷し、同一緩衝液で溶出し、塩
酸グアニジンを除去したヒトIFN−γの溶出画分
180mlをえた。この溶出液は溶出直後に白濁を生
じ沈澱したので、遠心分離（10000rpm／30分）
に付しその上清液のタン白含量を測定したところ
0.05mg／mlであつた。タン白回収率は11.9％（９
mg）であつた。なおヒトIFN−γの比活性は3.3
×10⁶IU／mgタン白であつた。

参考例４参考例２（）の方法で得た溶出画分420mlに還
元型グルタチオンを10mM量添加し、ヒトIFN−
γをモノマーに収斂させた。

このヒトIFN−γ水溶液420mlを予め1mMエチ
レンジアミン四酢酸塩，150mM塩化ナトリウム，
10mM還元型グルタチオンおよび2M塩酸グアニ
ジンを含んだ25mM酢酸緩衝液（PH6.0）で平衡
化したセフアクリールＳ−200（フアルマシア社
製）のカラム（９×100cm）に負荷し、同一緩衝
液で溶出し、モノマー溶出画分450mlを集めた。
本操作により比活性3.4×10⁶IU／mgタン白のヒト
IFN−γ（0.410mg／ml）を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例７のゲル過の結果を示す。
●は本発明のヒトIFN−γを、○は標準タン白
（Ａ：キモトリプシノーゲンＡ，Ｂ：卵白アルブ
ミン，Ｃ：牛血清アルブミン）を示す。

Claims

【特許請求の範囲】１ヒトγ型インターフエロンの非共有結合二量
体を0.2〜1.5mg／mlの濃度で含有する水溶液。２蛋白変性剤を含有するヒトγ型インターフエ
ロンの希薄水溶液から蛋白変性剤を除去し、該水
溶液を溶液状態で24時間以上熟成させ、ついで濃
縮することを特徴とする高濃度ヒトγ型インター
フエロンの非共有結合二量体を含有する水溶液の
製造法。