JPH0429916A - 皮膚外用剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、サイコサポニンｂ１および／またはサイコサ
ポニンｂ２と細胞成長因子を配合することにより、創傷
治癒の遅延や、肌荒れ、日光照射による光障害や加齢に
ともなう皮膚のしわ、たるみ、あるいはつやの消失など
を防いで、皮膚の老化を防止する効果に優れた皮膚外用
剤に関するものである。

〔従来の技術〕

サイコサポニンあるいは、細胞成長因子の１つであるウ
ロガストロン（通常は、表皮細胞成長因子とよばれてい
る）は、皮膚外用剤あるいは、皮膚病塗布剤として報告
されている。

（特開昭６０−２３３２５　、特開昭６１−７２１６）
。また、ウロガストロンと、生薬の甘草又は、柴胡との
組合せによる皮膚病塗布剤も報告されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかしながら、甘草や柴胡は、種々の成分の混合物であ
り、またサイコサポニンもいくつかのサポニン成分の混
合物であり、その内のどの成分による作用なのか未だ充
分に解明されていない。

特に、細胞成長因子との組合せにおいては、全く不明で
ある。

本発明者らは、細胞成長因子として、表皮細胞因子（Ｅ
ＧＦ）、線維芽細胞成長因子（Ｆ　Ｇ　Ｆ）、血小板由
来成長因子（ＰＤＧＦ）　、あるいはトランスフォーミ
ンククロースファクターβ（ＴＧＦβ）とサイコサポニ
ン成分のうちサイコサポニンｂ１あるいは、サイコサポ
ニンｂ２の組合せにおいて、相乗的に皮膚細胞の増殖を
著しく促進することを見い出し、このことに着目して、
サイコサポニンｂ＋および／またはｂ２と細胞成長因子
を配合した皮膚外用剤を経皮的に投与した場合、いかな
る効果を生しるか、鋭意研究を重ねた結果、創傷治療の
遅延や、肌荒れ、日光照射による光障害や加齢にともな
う皮膚のしわ、たるみ、あるいはつやの消失なとを防い
で、皮膚の老化を防止する効果に極めて優れることを見
い出し、本発明を完成するに至った。

〔課題を解説するための手段］ すなわち、本発明は、サイコサポニンｌ）　ｌおよび／
またはｂ２と細胞成長因子を配合することを特徴とする
皮膚外用剤を提供するものである。

以下、本発明の構成を詳述する。

本発明で用いるサイコサポニンは、式に示したサイコサ
ポニンｂ１とサイコサポニンｂ２である。細胞成長因子
との組合せで相乗効果を示すのは、サイコサポニンｂ１
と１〕２てあり、他のサイコサポニン成分であるサイコ
サポニンａ、ｂ、、ｂ。

ｃ、ｄには、相乗効果を示すものはない。

本発明におけるサイコサポニン１〕１　とｂ２の配合量
は、皮膚外用剤全量中０．０００１〜１重量％（１ｐｐ
ｍ〜１０１００００ｐｐか好ましく、０００１〜０．１
重量％（Ｉ　Ｏｐｐｍ　−１０１０００ｐｐかさらに好
ましい。０．０００１重量％未満ては本発明の効果か十
分発揮されず、１重量％を越えて配合してもそれ以上の
効果は望めない。

本発明で用いる細胞成長因子は、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤ
ＧＦおよびＴＧＦ−βであり、表皮細胞や真皮の線維芽
細胞の増殖を極めて低濃度（０，１ｎｇ／ｇ〜］００ｎ
ｇ　／　ｇ　）て著明に促進することが知られている。

また、これらの細胞成長因子を外用することにより、皮
膚の創傷治療が促進される傾向にあることが報告されて
いる。

次に上記細胞成長因子の分子性状や作用機序を述へると
、 ■　ＥＧＦは、５３個のアミノ酸よりなるポリペプチド
であり、分子量は、６０４５て、水にとけやすく、表皮
細胞や、線維芽細胞などの多くの種類の細胞の増殖を促
進する。

■　ＦＧＦは、２種類報告されており、酸性ＦＧＦは、
　１４０個のアミノ酸よりなるポリペプチドで、塩基性
ＦＧＦは、　１４６個のアミノ酸よりなるポリペプチド
である。両者とも、線維芽細胞や血管内皮細胞なとの増
殖を促進することが知られている。

■　ＰＤＧＦは、　１２５個のアミノ酸よりなるＡ鎖と
　１６０個のアミノ酸よりなるＢ鎖の複合体で、それぞ
れＡＡ、ＡＢおよびＢＢの組合せのポリペプチドである
。線維芽細胞のような結合組織の細胞の増殖を促進する
。

また、生体防御機構のなかで、創傷治癒過程で重要な役
割を果していることか知られている。

■　ＴＧＦ−βは、　１１２個のアミノ酸よりなるポリ
ペプチド鎖２本よりなる複合体であり、他の細胞成長因
子の作用を促進したり、阻害したりすることか−知られ
ている。線維芽細胞の増殖を促進し、コラーゲンやフィ
ブロネクチンなどの生体高分子成分の産生を促進するこ
とか知られている。

本発明における細胞成長因子の配合量は、皮膚外用剤全
量中０．００００１〜０１重量％（０，ｌｐｐｍ−１０
１００Ｏ１１１１か好ましく　、０．０００１〜０．０
１重量％（Ｌｏｐｐｍ−］００ｐｐｍ）かさらに好まし
い。０．００００１重量％未満ては本発明の効果か十分
発揮されず、０．１重量％を越えて配合してもそれ以上
の効果は望めない 本発明の皮膚外用剤は、前記の必須成分に加えて必要に
応して、本発明の効果を損わない範囲内で、化粧品、医
薬品等に一般に用いられる各種成分、すなわち、水性成
分、粉末成分、油分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防
腐剤、酸化防止剤、香料、色剤、薬剤等を配合すること
ができる。

また本発明の皮膚外用剤の剤型は任意であり、霊えば化
粧水等の可溶化系、乳液、クリーム等の乳化系あるいは
軟膏、分散液などの剤型をとることができる。

〔発明の効果〕

本発明の皮膚外用剤は、サイコサポニンｂ１および／ま
たはサイコサポニンｂ２と細胞成長因子を配合すること
により、創傷治癒の遅延や、肌荒れ、日光照射による光
障害や加齢にともなう皮膚のしわ、たるみ、あるいはつ
やの消失などを防いで、皮膚の老化を防止する効果に優
れた皮膚外用剤である。

〔実施例〕

以下に、実施例を示して本発明を詳述するが、本発明は
これにより限定されるものではない。

実施例に先立ち本発明にかかる皮膚外用剤の皮膚老化防
止効果を明らかにするために行った試験法、評価方法を
説明する。

皮膚細胞増殖作用 サイコサポニンｂ１および／またはサイコサポニンｂ２
と細胞成長因子を配合した皮膚外用剤の創傷治療促進や
肌荒れ防止、加齢にともなう、皮膚のしわやじみやつや
の消失の防止などの皮膚老化防止効果を示すために次の
皮膚細胞増殖促進作用の試験を、通常の培養シャーレを
用いた細胞培養系と、コラーゲン線維ゲル内での培養系
である真皮モデル内（Ｔ、　ＮｉＮ１５ｈｉｙａ　ｅｔ
　ａｌ、、　ＣｏｌｌａｇＣｏｌｌａ、　Ｒｅｓ、、８
．２５９−２７３．１９８８　、　Ｔ、　ＮｉｓｈＮ１
５ｈｉｙａ　ａｔ、、　Ｍａｔｒｉｘ　９１９３−１９
９、＋９８９）の培養系で試験した。

ヒト皮膚真皮より得た線維芽細胞を、ダルベツコ変法イ
ーグル培養液（ＤＭＥＭ）にｌθ％ウシ胎児血清（ＦＢ
Ｓ）を含む培地で培養し、実施に必要な細胞を得る。

■　培養シャーレを用いた系 細胞をトリプシンで分散し、単一細胞とし、細胞培養用
シャーレにｌＸｌ０’個の細胞を接着させる。接着後、
５時間５％ＣＯ□インキュベータ中で培養した後、０．
２％ＦＢＳを含むＤＭＥＭに培地交換してＣＯｔインキ
ュベータ中で培養する。

２４時間後、サイコサポニンｂ、またはｂ２　（最終濃
度ＩＯμｇ／Ｊ）　、細胞成長因子（最終濃度ｌＯｎｇ
／Ｊ）　、あるいは、サイコサポニンｂ１またはす、（
最終濃度１μｇ／ｍｌ）、細胞成長因子（最終濃度１０
ｎｇ／ｍ１）の両者を含む０．２％ＦＢＳ−ＤＭＥＭに
培地交換し、Ｃ０２インキユベータ中で３７℃でさらに
７日間培養する。その後、細胞をトリプシンで分散し、
細胞数を計測した。なお、０．２％Ｆ　Ｂ　Ｓ−ＤＭＥ
Ｍのみで培養したものをコントロールとした。

表 結果を表−１に示す。サイコサポニンｂ１または、ｂ２
と細胞成長因子との組合せにより、皮膚線維芽細胞の増
殖が、それぞれ単独の場合に比べ、相乗的に著しく促進
された。サイコサポニンの成分のうちａ、ｂ３、ｂ、　
、ｃ、ｄには、細胞成長因子との相乗作用は全くみられ
なかった。

■　真皮モデル系 細胞をトリプシンで分散し、単一細胞とし、Ｉ型コラー
ゲン（１ｍｇ／　ｍｌ　）を含むｌＯ％ＦＢＳ−ＤＭＥ
Ｍ中に２ＸＩＯ’個の細胞を分散する。この細胞とコラ
ーゲンを含む溶液を培養シャーレに注入し、直ちに３７
℃のＣ０２インキユベータ中で培養する。１０分後に、
コラーゲンが線維を形成しゲル化し、細胞かゲル内に内
包される。培養とともに、このゲルは、収縮し、７口辺
」二たつと、コラーゲン線維密度が真皮に相当する程度
（１０〜２０％）まで高くなり、細胞の増殖が全く停止
する。この状態の細胞を、サイコサポニンｂ１またはｂ
２　（最終濃度１０μｇ／ｍｊ’）　、細胞成長因子（
最終濃度３Ｑｎｇ／　ｍｌ　）　、あるいはサイコサポ
ニンｂ１またはｂ２　（最終濃度１μｇ／Ｊ）　、細胞
成長因子（最終濃度３０ｎｇ／ｉ）の両者を含む１０％
ＦＢＳ−ＤＭＥＭで、さらに３日間、３７°ＣてＣ０２
インキユヘータ中で培養する。その後、コラ−ケンゲル
をコラゲナーゼで分解し、細胞を回収して、細胞数を求
めた。なお、１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭのみて培養したも
のをコントロールとした。

表 結果を表−２に示す。真皮モデル系では、サイコサポニ
ンｌ′Ｊ１、ｂ２あるいは細胞成長因子（ＰＤＧ　Ｆを
除＜　）ｌ独ては、皮膚線糺芽細胞の増殖を促進しなか
った。しかもながらサイコサポニン１）１あるいはｂ２
と細胞成長因子の両者の組合せにより、細胞の増殖は、
相乗的に著明に促進された。

サイコサポニンの成分のうちａ、ｂ３、ｂ、　、ｃ。

ｄには、細胞成長因子との相乗作用は全くみとめられな
かった。

更に皮膚に対する創傷治癒効果を示すために次の試験を
行った。

老齢ラット皮膚への創傷治癒効果 生後７０週齢のウィスター系ラットを５匹１群として毛
刈後、試験に供した。ラットは、エーテル麻酔後、正中
線にそって、約３ｃｍ背部皮膚を切開し、ただちに切開
部をミツヘル縫合し、サイコサポニンｂ１あるいは、ｂ
２を１００μｇ／−の濃度で含む生理食塩水溶液、細胞
成長因子を１μｇ　／　＝ｎｌの濃度で含む生理食塩水
溶液、あるいは両者を含む生理食塩水溶液を１日１回、
０．１−ずつ１０日間連続塗布した。１０日後、ラット
をエーテル麻酔死させ、縫合側を外し、断面２ｃｍとな
るように皮膚切片を作製した。張力測定には、テンンロ
ンＵＴＭ４（東洋測器株式会社製）を用い、創傷治癒面
の切断張力を測定した。なお、コントロールは、生理食
塩溶液を塗布した皮膚切片を用いた。

表 表−３の結果から、サイコサポニンｌ）　ｌおよびｂ２
単独塗布の方か、細胞成長因子単独の場合より、創傷治
癒を促進する。さらに両者の組合せにより相乗的に創傷
治癒が促進されることか認められた。

肌荒れ改善効果 実施例１で得た化粧水とブランク化粧水〔サイコサポニ
ンｂ１とＰＤＧＦを配合しないもの（精製水で置換）〕
、サイコサポニンｂ１配合化粧水［ＰＤＧＦを配合しな
いもの（精製水で置換）〕およびＰＤＧＦ配合化粧水〔
サイコサポニンｂを配合しないもの（精製水で置換）〕
を用いて人体パネルで肌荒れ改善効果試験を行った。

すなわち、女性健常人（顔面）の皮膚表面形態をミリス
ン樹脂によるレプリカ法を用いて肌のレプリカを取り顕
微鏡（７倍）にて観察する。

皮紋の状態及び角層の剥離状態から表−４に示す基準に
基づいて肌荒れ評価１．２と判定された肌荒れパネルを
２５名ずつ、次の３種類の実験に用いた。

＋１］　　顔面左右半々に、実施例１で得た化粧水とブ
ランク化粧水を塗布。

（２）　　顔面左右半々に実施例１で得た化粧水とサイ
コサポニンｂ１配合化粧水を塗布。

（３）顔面左右半々に実施例１で得た化粧水とＰＤＧＦ
配合化粧水を塗布。

（１１〜（３）各２５名ずつ、１日１回４週間、それぞ
れの化粧水を塗布した。

４週間後、再び上述のレプリカ法にて肌の状態を観察し
、表−４の判定基準に従って評価した。

表 表 表 表 これらの結果より、サイコサポニン１つ、配合およびＰ
ＤＧＦ配合の化粧水にも改善効果か認められるが、サイ
コサポニンｂ１とＰＤＧＦの両者を配合した化粧水では
、相乗効果により顕著な肌荒れ改善効果が認められた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 次式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるサイコサポニンｂ＿１（Ｒ＝β−ＯＨ）お
   よび／またはサイコサポニンｂ＿２（Ｒ＝α−ＯＨ）に
   細胞成長因子を添加してなることを特長とする皮膚外用
   剤。