JP7740715B2 - ペプチドおよびそれを含む複合体 - Google Patents

Description

本発明は、ペプチドおよびそれを含む複合体に関する。

筋ジストロフィーは、骨格筋の変性・壊死を主病変とし、筋力低下が進行する遺伝性疾患である。筋力の発現には、細胞内の筋原繊維で生じた張力を複数のタンパク質を介して細胞外の基底膜まで伝達する仕組みが必要である。これに携わるタンパク質群をコードする遺伝子の不具合は、筋ジストロフィー発症の原因となる。例えば、最も重篤なデュシェンヌ型の筋ジストロフィーでは、ジストロフィン遺伝子が変異し、当該タンパク質の欠失や機能不全が主因といわれている。そこで、筋ジストロフィーでの骨格筋の変性壊死に対抗する一手段として、骨格筋量を負に制御する因子であるマイオスタチン（増殖分化因子－８、ＧＤＦ－８）の機能を阻害することで筋肉量を増加させる治療法の開発が、特に有用と考えられている。

マイオスタチンは、ＴＧＦ－βファミリーに属し、骨格筋に多く発現する分泌性タンパク質であり、Ｎ末端側のプロドメインとＣ末端側の成熟ドメインとを含む前駆体タンパク質として細胞内で合成される。細胞から分泌されたマイオスタチンは、ｌａｔｅｎｃｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＡＰ）と呼ばれるプロドメイン由来のプロペプチドが、成熟ドメイン由来の活性ダイマーと会合し、骨格筋量を負に制御する主体である活性ダイマーを不活性化する。このように不活化状態で生体内にストックされたマイオスタチンは、必要時に、プロペプチドが酵素によって分解され、活性体となると考えられている。活性体となったマイオスタチンは、アクチビンタイプＩＩＢ受容体に代表される受容体との結合を介して、骨格筋量を負に制御するシグナル分子としての機能を果たす。

したがって、マイオスタチンプロペプチドに由来するペプチドを用いて生体内のマイオスタチンを阻害することで、骨格筋量の増大や、筋ジストロフィーに代表されるような筋萎縮性障害の治療といった効果が期待できる。例えば、国際公開第２０１８／０３０４３２号（米国特許第２０１９０１７７３７０号明細書に対応）には、マイオスタチンプロペプチドに由来する、マイオスタチン阻害ペプチドに関して記載されている。

国際公開第２０１８／０３０４３２号に記載のマイオスタチン阻害ペプチドは、高いマイオスタチン阻害活性を有している。一方で、高いマイオスタチン阻害活性に加えて、生体中での安定性の向上が望まれている。

そこで本発明は、高いマイオスタチン阻害活性を有し、かつ改善した生体中での安定性を有するペプチドを提供することを目的とする。

本発明者らは、上記の問題を解決すべく、鋭意研究を行った。その結果、すべてＤ体のアミノ酸で構成されるペプチドによって上記課題が解決されることを見出し、本発明の完成に至った。

本発明の一形態は、下記式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１５～１７である、ペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグに関する。

上記式（１）において、
Ｘ^０は、Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－ＧｌｙおよびＤ－２－アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ^１は、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ^２は、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^３は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^４は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^５は、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－２－ヒドロキシグリシン、Ｄ－ホモセリン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^６は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－３－（２－ナフチル）アラニン、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－ＰｈｅおよびＤ－３－（１－ナフチル）アラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^７は、Ｄ－２－フェニルグリシン、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^８は、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｄ－２，４－ジアミノブタン酸およびＤ－オルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^９は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基であり；
Ｘ^１０は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１１は、Ｄ－２－フェニルグリシン、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１２は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１３は、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１４は、Ｄ－２－フェニルグリシン、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１５は、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－ＴｒｐおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ^１６は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損である。

実施例および比較例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。 実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。 実施例および比較例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。 実施例のペプチドによる、マイオスタチン阻害活性を示す。 実施例のペプチドのウシ膵臓由来トリプシン溶液中での安定性評価の結果を示す。 実施例のペプチドのウシ膵臓由来α－キモトリプシン溶液中での安定性評価の結果を示す。 実施例のペプチドのデュシェンヌ型筋ジストロフィーモデルｍｄｘマウス前脛骨筋に及ぼす影響（ｉｎ ｖｉｖｏ評価）の結果を示す。 実施例のペプチドを用いたマイオスタチン酸素化評価の結果を示す。 実施例のペプチドの筋肉内投与によるがん悪液質モデルマウスの握力に及ぼす影響（ｉｎ ｖｉｖｏ評価）の結果を示す。 実施例のペプチドの筋肉内投与によるがん悪液質モデルマウスの腓腹筋量に及ぼす影響（ｉｎ ｖｉｖｏ評価）の結果を示す。 実施例のペプチドの筋肉内投与によるがん悪液質モデルマウスの筋線維面積に及ぼす影響（ｉｎ ｖｉｖｏ評価）の結果を示す。

以下、本発明の一形態に係る実施の形態を説明する。本発明は、以下の実施の形態のみには限定されない。

本明細書において、範囲を示す「Ｘ～Ｙ」は「Ｘ以上Ｙ以下」を意味する。また、特記しない限り、操作および物性等の測定は室温（２０～２５℃）／相対湿度４０～５０％ＲＨの条件で測定する。

本明細書において、「式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１５～１７である、ペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩」を、単に「本発明に係るペプチド」とも称する。

本発明における「アミノ酸残基」とは、ペプチドまたはタンパク質分子上で、ペプチドまたはタンパク質を構成しているアミノ酸の一単位に当たる部分を意味する。より具体的には、以下の式（５）のように表される、α－アミノ酸から誘導される２価の基を意味する：

ただし、上記Ｒ^０はアミノ酸の側鎖であり、例えばＧｌｙであれば水素原子、Ａｌａであればメチル基である。

「アミノ酸残基」は、天然もしくは非天然のα－アミノ酸に由来する。本発明に係るペプチドは、生体中での安定性を高めるとの観点から、Ｄ体のアミノ酸で構成される。

より具体的には、「アミノ酸残基」は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、およびＩｌｅ、ならびにこれらの類縁体が例示できる。上記の類縁体としては、例えば上記２０種のアミノ酸残基の側鎖が任意の置換基で置換された誘導体等であってもよく、例えば、上記２０種のアミノ酸残基のハロゲン化誘導体（例えば、３－クロロアラニン、４－フルオロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン）、２－アミノ酪酸、４－アミノ酪酸、ノルロイシン、ノルバリン、イソバリン、２－アミノイソ酪酸、ホモフェニルアラニン、２，３－ジアミノプロピオン酸、２，４－ジアミノブタン酸、オルニチン、２－ヒドロキシグリシン、ホモセリン、ヒドロキシリジン、ヒドロキシプロリン、３，４－ジデヒドロプロリン、ホモシステイン、ホモメチオニン、アスパラギン酸エステル（例えば、アスパラギン酸－メチルエステル、アスパラギン酸－エチルエステル、アスパラギン酸－プロピルエステル、アスパラギン酸－シクロヘキシルエステル、アスパラギン酸－ベンジルエステルなど）、グルタミン酸エステル（グルタミン酸－シクロヘキシルエステル、グルタミン酸－エチルエステル、グルタミン酸－プロピルエステル、グルタミン酸－メチルエステル、グルタミン酸－ベンジルエステルなど）、ホルミルトリプトファン、２－シクロペンチルグリシン、２－シクロヘキシルグリシン、２－フェニルグリシン、β－アラニン、３－シクロペンチルアラニン、３－シクロヘキシルアラニン、３－ピリジルアラニン、３－ピラゾリルアラニン、３－フラニルアラニン、３－チエニルアラニン、４－メトキシフェニルアラニン、および３－ナフチルアラニン（３－（１－ナフチル）アラニン、３－（２－ナフチル）アラニン）等のアミノ酸に由来するアミノ酸残基が例示できるが、これらに制限されない。また、ＩｌｅやＴｈｒのように、側鎖に不斉炭素を有するジアステレオマーが存在するものについては、天然型（例えば、（２Ｒ^＊，３Ｒ^＊）－２－アミノ－３－メチルペンタン酸、および（２Ｒ^＊，３Ｓ^＊）－２－アミノ－３－ヒドロキシブタン酸）および非天然型（例えば、（２Ｒ^＊，３Ｓ^＊）－２－アミノ－３－メチルペンタン酸、および（２Ｒ^＊，３Ｒ^＊）－２－アミノ－３－ヒドロキシブタン酸）が特に区別なく使用され得る。すなわち、「Ｉｌｅ」は（２Ｒ^＊，３Ｒ^＊）－２－アミノ－３－メチルペンタン酸および（２Ｒ^＊，３Ｓ^＊）－２－アミノ－３－メチルペンタン酸の両方を含む意味として使用され、「Ｔｈｒ」は（２Ｒ^＊，３Ｓ^＊）－２－アミノ－３－ヒドロキシブタン酸および（２Ｒ^＊，３Ｒ^＊）－２－アミノ－３－ヒドロキシブタン酸の両方を含む意味として使用される。好ましくは。天然型ジアステレオマー（すなわち、Ｉｌｅであれば（２Ｒ^＊，３Ｒ^＊）－２－アミノ－３－メチルペンタン酸、Ｔｈｒであれば（２Ｒ^＊，３Ｓ^＊）－２－アミノ－３－ヒドロキシブタン酸）が使用される。

本明細書に記載のアミノ酸配列は、特に言及がない限り、慣例に従ってＮ末端（アミノ末端）側からＣ末端（カルボキシル末端）側への方向に表記される。

各アミノ酸残基は、その側鎖の相違に基づいて、類似の性質を有するアミノ酸残基と置換し得ることが本技術分野において知られている（保存的置換）。例えば、脂肪族疎水性アミノ酸であるＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、２－アミノ酪酸（Ａｂｕ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、およびイソバリン（Ｉｖａ）は相互に置換し得る。側鎖が水素原子またはメチル基であるＧｌｙ、Ａｌａおよび２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）は相互に置換し得る。側鎖がフェニルアルキル基であるＰｈｅおよびホモフェニルアラニン（Ｈｐｈ）は相互に置換し得る。中性極性アミノ酸であるＡｓｎおよびＧｌｎは相互に置換し得る。塩基性アミノ酸であるＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、２，３－ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、２，４－ジアミノブタン酸（Ｄｂｕ）、およびオルニチン（Ｏｒｎ）は相互に置換し得る。酸性アミノ酸であるＡｓｐおよびＧｌｕは相互に置換し得る。側鎖がヒドロキシ基または短鎖のヒドロキシアルキル基であるＳｅｒ、２－ヒドロキシグリシン（Ｈｙｇ）およびホモセリン（Ｈｓｅ）は相互に置換し得る。Ｐｒｏと、その側鎖のピロリジル基が脱水素した構造の側鎖を有する３，４－ジデヒドロプロリン（Ｄｈｐ）とは、相互に置換し得る。側鎖が短鎖のチオールアルキル基であるＣｙｓおよびホモシステイン（Ｈｃｙ）は相互に置換し得る。側鎖が短鎖のスルフィド構造であるＭｅｔおよびホモメチオニン（Ｈｍｅ）は相互に置換し得る。側鎖が芳香族性であるＴｒｐ、ＴｙｒおよびＰｈｅは相互に置換し得る。

さらに、鎖の配向に影響するアミノ酸残基であるＧｌｙおよびＰｒｏは相互に置換し得る。

本明細書において「薬学的に許容される塩」は、患者や被験体へ投与された後、望ましくない生理学的効果を生じさせない、金属塩、アンモニウム塩、有機酸塩、無機酸塩、または有機塩基もしくは無機塩基との塩である。より具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、アンモニウム塩、メチルアミン塩、エチルアミン塩、アニリン塩、ジメチルアミン塩、ジエチルアミン塩、ピロリジン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、ピペラジン塩、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、フタル酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびｐ－トルエンスルホン酸塩等が例示できるが、これらに限定されない。

本発明に係るペプチドのプロドラッグ（以下、「本発明に係るペプチドのプロドラッグ」を、単に「プロドラッグ」とも称する。）は、本発明に係るペプチドに変換するペプチド誘導体、すなわち、胃酸や酵素等により酸化、還元、加水分解等を起こして本発明に係るペプチドに変化するペプチド誘導体を指す。これらのペプチド誘導体は、例えばＢｕｎｄｇａｒｄ， Ｈ．， Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ， ｐｐ． ７－９， ２１－２４， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ａｍｓｔｅｒｄａｍ １９８５等に記載の従来公知の方法によって、本発明に係るペプチドから製造することができる。

プロドラッグとしては、本発明に係るペプチドの側鎖がカルボキシル基を有する場合には、当該カルボキシル基とアルコールとを反応させることによって得られるエステル誘導体、または当該カルボキシル基とアミンとを反応させることによって得られるアミド誘導体が例示できる。より具体的には、例えば、ペプチド側鎖のカルボキシル基を－ＣＯＯＲ（Ｒは、炭素数１～２０のアルキル基）で表されるエステル、または－ＣＯＮＨＲもしくは－ＣＯＮＲＲ’（ＲおよびＲ’は、それぞれ独立に、炭素数１～２０のアルキル基）で表されるアミド基に誘導体化したペプチドが挙げられる。

プロドラッグとしては、本発明に係るペプチドの側鎖が水酸基を有する場合には、当該水酸基と酸無水物等を反応させてアシル化させたアシルオキシ誘導体が例示できる。より具体的には、例えば、ペプチド側鎖の水酸基を－ＯＣＯＲ（Ｒは、炭素数１～２０のアルキル基）で表されるアシルオキシ基に誘導体化したペプチドが挙げられる。

プロドラッグとしては、本発明に係るペプチドの側鎖がアミノ基を有する場合には、当該アミノ基がアシル化、Ｎ－オキシド化、アルキル化、またはリン酸化された誘導体が例示できる。より具体的には、例えば、側鎖のアミノ基を－ＮＨＣＯＲ（Ｒは、炭素数１～２０のアルキル基）や－ＮＨＣＯＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_３で表されるアミド基に誘導体化したペプチドが挙げられる。

本発明に係るペプチドのＮ末端の構造は特に制限されず、例えば、水素原子（すなわち、未修飾）、または従来公知の手法により修飾基を導入した構造であってもよい。Ｎ末端の修飾基としては、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数１～２０のアルケニル基、炭素数１～２０のアルキニル基、炭素数６～２０の芳香族炭化水素基、複素環基、下記式（６）で表される基、スルホニル基、カルボキシル基、グリオキシル基、ホルミル基；ポリエチレングリコール基（ＰＥＧ化）、ポリオキシエチレングリコール基、ポリプロピレングリコール基；ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｚ基）、フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）のような保護基；シクロペンチルオキシカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基、ノルボルニルオキシカルボニル基、イソボルニルオキシカルボニル基等のシクロアルキルオキシカルボニル基；ピログルタミン酸やモロタン酸などのアミノ酸から誘導される保護基；カルバメート系保護基；ベンゼンスルホン酸などのスルホン酸やリン酸から誘導される保護基等、が例示できる。このうち、マイオスタチン阻害活性の観点から、ペプチドは、Ｎ末端が水素原子、アルキル基、芳香族炭化水素基、複素環基、下記式（６）で表される基、スルホニル基、カルボキシル基、グリオキシル基、ホルミル基またはポリエチレングリコール基であることが好ましく、水素原子、アシル基またはポリエチレングリコール基であることがより好ましく、水素原子であることがさらに好ましい。

ペプチドのＮ末端に存在し得るアルキル基の炭素数は、例えば１～２０であり、好ましくは１～１０である。アルキル基は飽和鎖、不飽和鎖、または環状の構造であって良く、分岐鎖構造を取っていても良い。より具体的には、アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、アミル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ－アミル基、ヘキシル基、シクロヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、２－エチルヘキシル基、ノニル基、デシル基等が例示できる。

ペプチドのＮ末端に存在し得る芳香族炭化水素基の炭素数は、例えば６～２０であり、より具体的には、フェニル基、ナフチル基、トリル基、およびフェナントリル基等が例示できる。ペプチドのＮ末端に存在し得る複素環基としては、環内に窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を１～３個含む、単環、縮合二環式または縮合三環式構造の置換基が例示でき、より具体的には、ピロリジル基、ピロール基、ピペリジル基、ピリジル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、モルホリル基、インドリル基、ベンゾイミダゾリル基、キノリル基、カルバゾリル基、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロチオフェニル基、フラニル基、チオフェニル基、テトラヒドロピラニル基、およびテトラヒドロチオピラニル基等が例示できる。これらの芳香族炭化水素基や複素環基は、炭素数１～６の直鎖もしくは分岐鎖のアルキル基、炭素数１～６の直鎖もしくは分岐鎖のアルコキシ基、アミノ基、カルボキシル基、エステル基、カルバモイル基、アミド基、ニトロ基、スルホ基、スルホンアミド基、および／またはハロゲン等のさらなる置換基によって置換されていてもよい。

Ｎ末端の修飾基は、例えば下記式（６）で表される官能基であってもよい。

ただし、式（６）において、
Ｘ^０Ａは単結合、酸素原子もしくは硫黄原子であるか、または、アミノ基、アセチルアミノ基およびプロピオニルアミノ基からなる群から選択される置換基を有してもよい、炭素数１～３のアルキレン基（例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基およびプロピレン基）、炭素数１～３のオキシアルキレン基（例えば、オキシメチレン基、オキシエチレン基、オキシトリメチレン基およびオキシプロピレン基）および炭素数１～３のアルキレンオキシ基（例えば、メチレンオキシ基、エチレンオキシ基、トリメチレンオキシ基およびプロピレンオキシ基）からなる群から選択される２価の連結基であり；
Ｒ^１Ａは、置換基を有していてもよい炭素数１～２０のアルキル基、ならびに

からなる群から選択され、
上記Ｒ^１１～Ｒ^３０はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子）、炭素数１～３のアルキル基（すなわち、メチル基、エチル基、プロピル基）、炭素数１～３のアルコキシ基（すなわち、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基）、水酸基、およびアミノ基からなる群から選択される。

上記式（６）において、Ｒ^１Ａが置換基を有していてもよい炭素数１～２０のアルキル基である場合、その脂肪鎖は飽和鎖、不飽和鎖、または環状の構造であって良く、分岐鎖構造を取っていても良い。Ｒ^１Ａのアルキル基の炭素数は、２～１２であることが好ましい。

Ｒ^１Ａの置換基としては、ヒドロキシ基、炭素数１～５以下のアルコキシ基（例えばメトキシ基、エトキシ基など）、アミノ基、カルボキシル基、エステル基、カルバモイル基、アミド基、ニトロ基、スルホ基、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）などが例示できる。

上記式（６）において、好ましくは、Ｘ^０Ａは単結合であるか、または、アミノ基およびアセチルアミノ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい、炭素数１～３のアルキレン基および炭素数１～３のオキシアルキレン基からなる群から選択される２価の連結基である。

一実施形態では、上記式（６）で表される基は、アシル基である。アシル基としては、種々のカルボン酸から誘導されるアシル基が含まれる。より具体的には、脂肪鎖、芳香族環または複素環を有するアシル基であってもよく、あるいは、アミノ酸、アシル基を有するビタミン、アシル基を有する核酸塩基よりなる群から選択される化合物から誘導されるアシル基であってもよい。

上記式（６）におけるＲ^１Ａが置換基を有していてもよい炭素数１～２０のアルキル基であるアシル基としては、より具体的には、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレル基、ピバロイル基、カプロイル基、カプリノイル基、メチルヘキサノイル基、シクロプロパンカルボニル基、アミノシクロプロパンカルボニル基、シクロヘキサンカルボニル基、シクロヘキシルアセチル基、シクロペンチルプロピオニル基、シクロヘキシルプロピオニル基、シクロペンチルブタノイル基、シクロヘキシルブタノイル基、アダマンチルアセチル基、ラウロイル基、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、オキサリル基、マロニル基、スクシニル基、グルタリル基、アジポイル基、グリコール基、ラクトイル基、グリセロイル基、ピルボイル基、アセトアセチル基等が例示できるが、これらに限定されない。

アシル基を有するビタミンとしては、例えば、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、プテロイルグルタミン酸（葉酸）、オロチン酸、フルオロオロチン酸、α－リポ酸、ピリドキシン酸、ビオシチン、プテロイン酸、１０－ホルミルプテロイン酸、７，８－ジヒドロ葉酸、ホモプテロイン酸、プテリン－６－カルボン酸、ジヒドロリポ酸、ハイドロオロチン酸などが挙げられる。

アシル基を有する核酸塩基誘導体は、ヌクレオチドを構成する塩基成分およびその誘導体を指し、好ましくはピリミジン誘導体等、例えば５－カルボキシメチルウラシル、５－カルボキシチオウラシル等を例示することができる。

ペプチドのＮ末端に存在し得るスルホニル基としては、例えば、上記したアシル基におけるカルボニル構造をスルホン構造に変換した構造を有するものが例示できる。

ペプチドのＮ末端に存在し得るポリエチレングリコール基は、エステル結合、アミン（－ＮＨ－）、アシル基（例えば、炭素数１～１２のアシル基）等や、これらの組み合わせを介して、ポリエチレングリコールまたはその類似体が連結された構造である。ポリエチレングリコール基の炭素数は、例えば２～２０（すなわち、－（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｎ－で表される構造単位を有し、ｎ＝１～１０である。）、好ましくは４～１６（すなわち、－（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｎ－で表される構造単位を有し、ｎ＝２～８である。）である。ポリエチレングリコール基におけるペプチドのＮ末端と連結している側とは反対側の末端は、炭素数１～６のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、アミル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ－アミル基、ヘキシル基）のような、一般的に水酸基の保護に使用される保護基やアミノ基で修飾されていてもよい。

本発明に係るペプチドのＣ末端の構造もまた特に制限されず、カルボン酸の保護に一般的に使用される保護基で修飾された構造であってもよい。より具体的には、本発明に係るペプチドのＣ末端の構造は、例えば、カルボキシル基（－ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（－ＣＯＯ^－）、アミド（－ＣＯＮＨ_２）、アルキルアミド（－ＣＯＮＨＲ^３１、－ＣＯＮＲ^３１Ｒ^３２）、エステル（－ＣＯＯＲ^３１）、ピバロイルオキシメチル基のようなアシルオキシアルキル（－Ｒ^３３－ＯＣＯＲ^３１）、炭素数１～４のアルキル基もしくはアルコキシ基で置換されてもよいフタリジル基（例えば、フタリジル基、ジメチルフタリジル基、ジメトキシフタリジル基）、または（５－メチル－２－オキソ－１，３－ジオキソレン－４－イル）メチル基であり得る。このうち、ペプチドのＣ末端はアミドであることが好ましい。上記のアルキルアミド、エステル、およびアシルオキシアルキルにおけるＲ^３１およびＲ^３２は、それぞれ独立に、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、アミル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ－アミル基、ヘキシル基、シクロヘキシル基等の炭素数１～６のアルキル基；フェニル基、ナフチル等の炭素数６～１０のアリール基；ベンジル基、フェネチル基、ベンズヒドリル基等の炭素数７～１８のアラルキル基；グルコース等の糖；炭素数１～６のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、アミル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ－アミル基、ヘキシル基）で修飾されていてもよいポリエチレングリコール基などが挙げられる。アシルオキシアルキルにおけるＲ^３３は、メチレン基、エチレン基、ｎ－プロピレン基、イソプロピレン基、ｎ－ブチレン基、イソブチレン基、ｓ－ブチレン基、ｔ－ブチレン基のような炭素数１～４のアルキレン基である。

本発明に係るペプチドには、ポリマー、脂質等との共有結合によって化学的に修飾されたペプチド誘導体や、ペプチド内に含まれるα－へリックス性をさらに強化した誘導体も包含される。α－へリックス性をさらに強化した誘導体としては、アミノ酸配置としてｉ，ｉ＋４位等に塩橋を形成した誘導体や、ジスルフィド結合、炭素－炭素結合などによる架橋構造を有する誘導体が例示できる。

本発明に係るペプチドのアミノ酸残基数は１５～１７である。アミノ酸残基数が１７以下であることにより、合成および生体内での利用率の両面から有利となる。アミノ酸残基数が１４未満であると、本発明の効果を発揮することができない。

＜ペプチド＞
本発明の一形態は、下記式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１５～１７である、ペプチド、もしくはその薬学的に許容される塩、またはそれらのプロドラッグである：

上記式（１）において、
Ｘ^０は、Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－ＧｌｙおよびＤ－２－アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ^１は、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ^２は、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^３は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^４は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^５は、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－２－ヒドロキシグリシン、Ｄ－ホモセリン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^６は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－３－（２－ナフチル）アラニン、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－ＰｈｅおよびＤ－３－（１－ナフチル）アラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^７は、Ｄ－２－フェニルグリシン、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^８は、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｄ－２，４－ジアミノブタン酸およびＤ－オルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^９は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基であり；
Ｘ^１０は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１１は、Ｄ－２－フェニルグリシン、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１２は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１３は、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１４は、Ｄ－２－フェニルグリシン、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１５は、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－ＴｒｐおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ^１６は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損である。

本発明によれば、高いマイオスタチン阻害活性を有し、かつ改善した生体中での安定性を有するペプチドを提供することができる。

より具体的には、本発明に係るペプチドは、高いマイオスタチン阻害活性を有し、加えてすべてＤ体のアミノ酸で構成されるため、生体内酵素に対する安定性を有しており、生体への投与時において持続的な高い効果を示すことができる。

好ましい実施形態では、マイオスタチン阻害活性の観点から、上記式（１）において、
Ｘ^０は、Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－ＧｌｙおよびＤ－２－アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ^１は、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ^２は、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^３は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^４は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^５は、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－２－ヒドロキシグリシン、Ｄ－ホモセリン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^６は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－３－（２－ナフチル）アラニン、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－ＰｈｅおよびＤ－３－（１－ナフチル）アラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり、より好ましくはＤ－Ｔｒｐ、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^７は、Ｄ－２－フェニルグリシン、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^８は、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｄ－２，４－ジアミノブタン酸およびＤ－オルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^９は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基であり；
Ｘ^１０は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１１は、Ｄ－２－フェニルグリシン残基であり；
Ｘ^１２は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１３は、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１４は、Ｄ－２－フェニルグリシン残基であり；
Ｘ^１５は、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－ＴｒｐおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ^１６は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり、より好ましくはＤ－Ｔｒｐ、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損である。

好ましい実施形態では、マイオスタチン阻害活性の観点から、上記式（１）において、
Ｘ^０は、Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－ＧｌｙおよびＤ－２－アミノイソ酪酸からなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ^１は、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり；
Ｘ^２は、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^３は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基であり；
Ｘ^４は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^５は、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－２－ヒドロキシグリシン、Ｄ－ホモセリン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^６は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－３－（２－ナフチル）アラニン、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－ＰｈｅおよびＤ－３－（１－ナフチル）アラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^７は、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^８は、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｄ－２，４－ジアミノブタン酸およびＤ－オルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^９は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基であり；
Ｘ^１０は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１１は、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１２は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１３は、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－オルニチン、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｈｉｓ、Ｄ－２，３－ジアミノプロピオン酸およびＤ－２，４－ジアミノブタン酸からなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１４は、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－ノルロイシン、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－２－アミノ酪酸、Ｄ－ノルバリンおよびＤ－イソバリンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１５は、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－ＴｒｐおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；ならびに
Ｘ^１６は、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基または欠損であり、より好ましくはＤ－Ｔｒｐ、Ｄ－ホモフェニルアラニン、Ｄ－ＴｙｒおよびＤ－Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸残基である。

さらに好ましい実施形態では、マイオスタチン阻害活性の観点から、上記式（１）において、
Ｘ^０は、Ｄ－Ａｌａ残基または欠損であり；
Ｘ^１は、Ｄ－Ｌｅｕ残基、Ｄ－ノルロイシン残基または欠損であり；
Ｘ^２は、Ｄ－Ａｒｇ残基またはＤ－オルニチン残基であり；
Ｘ^３は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基またはＤ－ノルロイシン残基であり；
Ｘ^４は、Ｄ－Ｌｙｓ残基、Ｄ－Ａｒｇ残基またはＤ－オルニチン残基であり；
Ｘ^５は、Ｄ－Ｓｅｒ残基またはＤ－Ａｒｇ残基であり；
Ｘ^６は、Ｄ－Ｔｒｐ残基またはＤ－３－（２－ナフチル）アラニン残基であり；
Ｘ^７は、Ｄ－２－フェニルグリシン残基またはＤ－Ｉｌｅ残基であり；
Ｘ^８は、Ｄ－Ｇｌｎ残基またはＤ－Ａｒｇ残基であり；
Ｘ^９は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基であり；
Ｘ^１０は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－ＡｒｇおよびＤ－オルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ｘ^１１は、Ｄ－２－フェニルグリシン残基またはＤ－Ｉｌｅ残基であり；
Ｘ^１２は、Ｄ－Ｔｒｐ残基またはＤ－ホモフェニルアラニン残基であり；
Ｘ^１３は、Ｄ－Ａｒｇ残基またはＤ－オルニチン残基であり；
Ｘ^１４は、Ｄ－２－フェニルグリシン残基またはＤ－Ｉｌｅ残基であり；
Ｘ^１５は、Ｄ－Ｔｙｒ残基であり；ならびに
Ｘ^１６は、Ｄ－Ｔｒｐ残基、Ｄ－ホモフェニルアラニン残基または欠損である。

本発明に係るペプチドにおいて、マイオスタチン阻害活性の観点から、上記式（１）で表されるペプチドは、好ましくは配列番号１～２５で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む。

本発明に係るペプチドにおいて、マイオスタチン阻害活性の観点から、上記式（１）で表されるペプチドは、さらに好ましくは配列番号１～４、６、８～２３および２５で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含み、特に好ましくは配列番号１９～２３および２５で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む。

（ペプチドの製造方法）
本発明に係るペプチドは、化学的合成法や組換え技術を含む従来公知の手法によって製造することができる。ペプチドを化学合成により調製するには、各アミノ酸をペプチド化学において通常用いられる方法、例えば、「ザ ペプチド（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）」第１巻〔Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ａｎｄ Ｌｕｈｋｅ著， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９６６年）〕、「ペプチド合成の基礎と実験」（泉屋信夫ら著丸善株式会社、１９８５年）等に記載されている方法によって製造することが可能であり、液相法および固相法のいずれによっても製造できる。さらに、カラム法、バッチ法のいずれの方法も用いることができる。

本発明に係るペプチドはまた、例えば下記のＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ １６に記載されるような手法により、動物細胞、昆虫細胞、または微生物等を利用した組み換え技術により製造してもよい。ペプチドは、培養細胞や微生物によって生成された後、従来公知の方法によって精製し得る。ペプチドの精製および単離法は当分野の技術者に公知であり、例えばＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ １６（Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、２００６年）等に記載の手法により行うことができる。

ペプチド結合を形成するための縮合方法として、アジド法、酸ハライド法、酸無水物法、カルボジイミド法、カルボジイミド－アディティブ法、活性エステル法、カルボニルイミダゾール法、酸化還元法、酵素法、ウッドワード試薬Ｋ、ＨＡＴＵ試薬、Ｂｏｐ試薬を用いる方法等を例示することができる。なお、固相法での縮合反応は上記した方法のうち、酸無水物法、カルボジイミド法、および活性エステル法が主な方法として挙げられる。

さらに、固相法でペプチド鎖を延長するときは、用いる有機溶媒に対して不溶な樹脂等の支持体に、Ｃ末端アミノ酸を結合する。かような樹脂としては、アミノ酸を樹脂に結合させる目的で官能基を導入した樹脂や、樹脂と官能基の間にスペーサーを挿入したもの等を目的に応じて用いることもできる。より具体的には、例えば、クロロメチル樹脂などのハロメチル樹脂、オキシメチル樹脂、４－（オキシメチル）－フェニルアセトアミドメチル樹脂、４－（オキシメチル）－フェノキシメチル樹脂、Ｒｉｎｋアミド樹脂などを挙げることができる。なお、これらの縮合反応を行う前に、通常公知の手段によって当該縮合反応に関与しないカルボキシル基やアミノ基や水酸基やアミジノ基等の保護手段を施すことができる。また逆に当該縮合反応に直接関与するカルボキシル基やアミノ基を活性化することもできる。

各ユニットの縮合反応に関与しない官能基の保護手段に用いる保護基としては有機化学において通常用いられている保護基、例えば、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｇｒｅｅｎｅ著、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．（１９８１年））等に記載されている保護基によって保護することが可能である。より具体的には、カルボキシル基の保護基としては、例えば、各種のメチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステル、ｐ－ニトロベンジルエステル、ｔ－ブチルエステル、シクロヘキシルエステル等の通常公知の保護基を挙げることができる。アミノ基の保護基としては、例えば、ベンジルオキシカルボニル基、ｔ－ブトキシカルボニル基、イソボルニルオキシカルボニル基、９－フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）等を挙げることができる。

カルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば、当該カルボキシル基に対応する酸無水物；アジド；ペンタフルオロフェノール、２，４－ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、ｐ－ニトロフェノール、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ－ヒドロキシ－５－ノルボルネン－２，３－ジカルボキシミド、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール等との活性エステル等が挙げられる。アミノ基の活性化されたものとしては、当該アミノ基に対応する燐酸アミド等を挙げることができる。

ペプチド合成の際の縮合反応は、通常溶媒中で行われる。当該溶媒としては、例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ピリジン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ－メチルピロリドン、水、メタノール等、または、これらの混合物を挙げることができる。また、当該縮合反応の反応温度は、通常の場合と同様に、－３０℃～５０℃の範囲で行なうことができる。

さらに、本発明のペプチドの製造工程における保護基の脱離反応の種類は、ペプチド結合に影響を与えずに保護基を脱離させることができる限りにおいて、用いる保護基の種類に応じて選択することができる。例えば、塩化水素、臭化水素、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、またはこれらの混合物等による酸処理、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ヒドラジン、ジエチルアミン、ピペリジン等によるアルカリ処理、液体アンモニア中におけるナトリウム処理やパラジウム炭素による還元および、トリメチルシリルトリフラート、トリメチルシリルブロマイド等のシリル化処理等が挙げられる。なお、上記の酸またはシリル化剤処理による脱保護基反応においては、アニソール、フェノール、クレゾール、チオアニソール、エタンジチオール等のカチオン捕捉剤を添加するのが、脱保護基反応が効率的に行われるという観点から好ましい。

なお、固相法で合成した本発明のペプチドの固相からの切断方法も通常公知の方法に従う。例えば、上記の酸またはシリル化剤による処理等を当該切断方法として挙げることができる。このようにして製造された本発明のペプチドに対しては、上記の一連の反応の終了後に通常公知の分離、精製手段を駆使することができる。例えば、抽出、分配、再沈澱、再結晶、固相抽出、カラムクロマトグラフィー等によって、より高純度で本発明のペプチドを収得することができる。

得られたペプチドは、アミノ酸自動分析機、キャピラリー電気泳動、逆相高速液体クロマトグラフィー、質量分析法等によって解析できる。また、ファージディスプレイ法、ツーハイブリッド法、アフィニティークロマトグラフィー、表面プラズモン共鳴法、共免疫沈降法、プロテインチップ法、立体構造解析、ファーウェスタン法、蛍光消光法等の各種生体分子相互作用解析手法を利用し、マイオスタチンとの相互作用を指標としてペプチドを選別してもよい。

本発明に係るペプチドは、単離または精製されていてもよい。「単離または精製」とは、目的とする成分以外の成分を除去する操作が施されていることを意味する。単離または精製された本発明に係るペプチドの純度は、通常５０％以上（例えば、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上、１００％）である。

＜複合体＞
本発明の一形態は、下記式（２）で表される複合体またはその薬学的に許容される塩である。

式（２）中、
Ｙは、下記式（３）：

［式３中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ハロゲノアルキル基またはハロゲン原子を表し、
Ｒ^３は、臭素原子、ヨウ素原子またはセレン原子を表し、
Ｒ^４およびＲ^５は、それぞれ独立して、水素原子または置換もしくは非置換のアルキル基を表し、
Ｒ^６およびＲ^７は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基または置換もしくは非置換のアルキル基を表し、この際Ｒ^４およびＲ^６またはＲ^５およびＲ^７が一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成してもよく、
Ｒ^８は、水素原子または置換もしくは非置換のアルキル基を表し、
Ｒ^９およびＲ^１０は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基または置換もしくは非置換のアルキル基を表し、この際Ｒ^８とＲ^９またはＲ^１０とが一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成してもよく、
ｍおよびｎは、それぞれ独立して、１～３の整数を表し、
＊は、Ｌとの結合部位である］
で表される化合物であり；
Ｌは、ＹおよびＺ間のリンカーを表し；
Ｚは、上記本発明に係るペプチドである。

本明細書において、「式（２）で表される複合体またはその薬学的に許容される塩」を、単に「本発明に係る複合体」とも称する。

以下、本発明に係る複合体を構成する要素について説明する。ただし、本発明に係るペプチドＺについては、上記と同様であるため、ここでは説明を省略する。

（式（３）で表される化合物Ｙ）
上記式（２）において、Ｙは、上記式（３）で表される化合物である。式（３）で表される化合物は、ターゲット選択的光酸素化を可能とするｏｎ／ｏｆｆスイッチ触媒である。式（３）で表される化合物と本発明に係るペプチドとを連結して複合体を形成することにより、当該複合体は、波長６５０～８００ｎｍの光により活性化し、マイオスタチンを選択的に酸素化することで、さらに高いマイオスタチン阻害活性を発揮することができる。

式（３）において、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ハロゲノアルキル基またはハロゲン原子を表す。

ハロゲノアルキル基は、好ましくは直鎖または分岐鎖の炭素数１～６のハロゲノアルキル基であり、より好ましくは直鎖または分岐鎖の炭素数１～４のハロゲノアルキル基であり、さらに好ましくはトリフルオロメチル基またはペンタフルオロエチル基であり、特に好ましくはトリフルオロメチル基である。

ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子が挙げられ、好ましくはフッ素原子である。

式（３）において、好ましくはＲ^１がハロゲン原子であり、前記Ｒ^２がハロゲノアルキル基である。

式（３）において、Ｒ^３は、臭素原子、ヨウ素原子またはセレン原子を表し、好ましくは臭素原子である。

式（３）において、Ｒ^４およびＲ^５は、それぞれ独立して、水素原子または置換もしくは非置換のアルキル基を表す。Ｒ^６およびＲ^７は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基または置換もしくは非置換のアルキル基を表す。この際Ｒ^４およびＲ^６またはＲ^５およびＲ^７が一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成してもよい。

式（３）において、Ｒ^８は、水素原子または置換もしくは非置換のアルキル基を表す。Ｒ^９およびＲ^１０は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基または置換もしくは非置換のアルキル基を表す。この際Ｒ^８とＲ^９またはＲ^１０とが一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成してもよい。

式（３）において、好ましくはＲ^４およびＲ^６、Ｒ^５およびＲ^７ならびにＲ^８およびＲ^１０が一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成し、この際前記アルキレン基またはアルケニレン基の炭素数が２または３である。

Ｒ^４～Ｒ^１０におけるアルキル基としては、好ましくは直鎖または分岐鎖の炭素数１～６のアルキル基であり、より好ましくは直鎖または分岐鎖の炭素数１～４のアルキル基である。アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基などが挙げられる。これらのアルキル基を置換し得る基としては、好ましくはカルボキシ基、スルホン酸基、ヒドロキシ基、アミノ基、－ＣＯ－、－ＣＯＮＨ－およびトリアゾール基から選択される１～３個の基である。アルキル基を置換し得る基は、水溶性を高めるとの観点から、より好ましくはカルボキシ基、スルホン酸基、ヒドロキシ基およびアミノ基から選択される。

Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^９およびＲ^１０におけるアルコキシ基としては、好ましくは直鎖または分岐鎖の炭素数１～６のアルコキシ基であり、より直鎖または分岐鎖の炭素数１～４のアルコキシ基である。具体的には、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基などが挙げられる。また、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^９およびＲ^１０におけるハロゲン原子としては、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、フッ素原子などが挙げられる。

好ましい実施形態では、Ｒ^４およびＲ^６、Ｒ^５およびＲ^７ならびにＲ^８およびＲ^１０が一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成し、この際前記アルキレン基またはアルケニレン基の炭素数が２または３である。アルキレン基としては、エチレン基、トリメチレン基などが挙げられる。アルケニレン基としては、ビニレン基、プロペニレン基などが挙げられる。

これらの基が一緒になって形成する環構造としては、以下の構造が挙げられる。

上記ａ－１～ａ－９およびｂ－１～ｂ－８の構造中、Ｒ^４～Ｒ^７およびＲ^９～Ｒ^１０は、アルキレン基またはアルケニレン基を形成しない基を示す。

式（３）において、ｍおよびｎは、それぞれ独立して、１～３の整数を表す。ｍおよびｎは、それぞれ独立して、好ましくは１または２であり、より好ましくは１である。

式（３）において、＊は、Ｌとの結合部位である。

式（３）で表される化合物が不斉炭素原子を有する場合、光学異性体が存在するが、式（３）で表される化合物は、光学異性体およびラセミ体のいずれも含む。

（リンカーＬ）
式（２）において、Ｌは、式（３）で表される化合物Ｙおよび本発明に係るペプチドＺ間のリンカーを表す。

本発明に係るペプチドＺへのリンカーＬの結合部位は、特に制限されず、本発明に係るペプチドＺのＮ末端またはＣ末端でもよく、本発明の効果を奏する限り、ペプチドＺを構成するアミノ酸残基の側鎖でもよい。好ましい実施形態では、リンカーＬは、本発明に係るペプチドＺのＮ末端に結合している。

このようなリンカーユニットの具体的な構造について特に制限はないが、例えば、置換または非置換の炭素数１～２０のアルキレン基、置換または非置換の炭素数２～２０のアルケニレン基、置換または非置換の炭素数２～２０のアルキニレン基、置換または非置換の炭素数３～２０のシクロアルキレン基、置換または非置換の炭素数３～２０のシクロアルケニレン基、置換または非置換の炭素数６～２０のアリーレン基、置換または非置換の炭素数３～２０のヘテロアリーレン基、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、ポリオキシアルキレン基、アミノ酸残基、ペプチド鎖、ポリエチレングリコールおよびこれらの組み合わせが挙げられる。

一実施形態では、Ｌは、下記式（４）で表される構造を有する。

ここで、Ｖは、－ＣＯ－、－ＣＯＮＨ－またはトリアゾール環を表す。また、Ｏは、０または１の整数を表す。トリアゾール環としては、１，２，３－トリアゾール－１，４－ジイル基、１，２，４－トリアゾール－１，３－ジイル基などが挙げられる。ｌおよびｐは、それぞれ独立して、１～６の整数を表す。ｌは、好ましくは１～６の整数を表し、より好ましくは１～４の整数を表す。ｐは、好ましくは１～６の整数を表し、より好ましくは１～４の整数を表す。Ｗは、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ－または－Ｃ（＝Ｏ）－を表す。

式（４）において、＊１は、式（３）で表される化合物との連結部位であり、＊２は、本発明に係るペプチドとの連結部位である。

（複合体の製造方法）
本発明に係る複合体の製造方法について特に制限はない。当業者であれば、後述する実施例の欄の記載に基づき、本願の出願時における技術常識を参酌して、本発明に係る複合体を製造することが可能である。

例えば、Ｈ．Ｏｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１９，５５，９１０８－９１１１．、国際公開第２０１７／１６４１７２号などの記載を適宜参照して合成することができる。

以下では、本発明に係る複合体のうち、以下の式（２－１）で表される複合体を例に挙げて、その製造方法を説明する。

式（２－１）において、Ｒ^１～Ｒ^７およびＺは、上記式（２）について定義した通りである。

式（２－１）で表される複合体は、以下の反応式に従って製造することができる。

化合物ａと化合物ｂとを縮合させて、化合物ｃを得、次いで化合物ｃに化合物ｄを反応させることにより式（２－１）で表される複合体を得ることができる。

化合物ａと化合物ｂとの反応は、アルドール縮合反応である。

化合物ｃと化合物ｄとの反応は、アルキンとアジドとの１，３－双極子付加反応であり、銅触媒の存在下、ジメチルホルムアミドなどの極性溶媒中、室温で容易に進行する。

化合物ａ～ｄは、上述のＨ．Ｏｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１９，５５，９１０８－９１１１．、国際公開第２０１７／１６４１７２号などの記載を適宜参照して合成することができる。

得られた式（２－１）で表される複合体は、クロマトグラフィーなどの公知の手段により、精製することができる。

＜マイオスタチン阻害剤、予防剤／治療剤、予防方法／治療方法＞
本発明の一実施形態では、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体を含む、マイオスタチン阻害剤が提供される（以下、「本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体を含むマイオスタチン阻害剤」を、単に「マイオスタチン阻害剤」とも称する。）。上記マイオスタチン阻害剤の有効量を対象に投与することにより、筋肉量や筋力の維持、増加、増強、低下の抑制等の効果を達成し得る。マイオスタチン阻害剤は、本発明に係るペプチドの１種以上、そのプロドラッグの１種以上、もしくは本発明に係る複合体の１種以上、またはこれらの混合物から構成されてもよいが、通常は、本発明に係るペプチドおよびそのプロドラッグならびに本発明に係る複合体から選択される１種以上、ならびに薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。

本発明の一実施形態は、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体の有効量を患者に投与することを含む、マイオスタチンの阻害方法に関する。本発明の一実施形態は、また、マイオスタチンの阻害に使用するための、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体に関する。

本発明の一実施形態では、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体を含む、筋萎縮障害の予防および／または治療剤が提供される（以下、「本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体を含む筋萎縮障害の予防および／または治療剤」を、単に「筋萎縮障害の予防・治療剤」とも称する）。上記筋萎縮障害の予防・治療剤の有効量を患者に投与することにより、筋萎縮障害の進行速度の低下、進行の阻害、進行の停止、改善、治癒、および／または予防等の治療的効果を達成し得る。筋萎縮障害の予防・治療剤は、本発明に係るペプチドの１種以上、そのプロドラッグの１種以上、もしくは本発明に係る複合体の１種以上、またはこれらの混合物から構成されてもよいが、通常は、本発明に係るペプチドおよびそのプロドラッグならびに本発明に係る複合体から選択される１種以上、ならびに薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。

本発明の一実施形態は、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体の有効量を患者に投与することを含む、筋萎縮障害の予防および／または治療方法に関する。本発明の一実施形態は、また、筋萎縮障害の予防および／または治療に使用するための、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体に関する。

マイオスタチン阻害剤、筋萎縮障害の予防・治療剤、ならびに上記予防および／または治療方法は、通常歩行に障害をもつ老人を対象とした局所投与による前脛骨筋の強化にも有効である。前脛骨筋を強化するのみでも足関節の背屈が容易になり、転倒防止に繋がる。また、たとえば、宇宙滞在時の継続的な局所投与を実施できれば、帰還後のリハビリ期間短縮等に貢献できる。

上記の筋萎縮障害としては、特に限定するものではないが、例えば、筋ジストロフィー、遠位型ミオパチー、先天性ミオパチー、封入体筋炎等の炎症性筋疾患、ミトコンドリアミオパチー等のミオパチー；廃用性筋萎縮；サルコペニアなどが例示できる。筋萎縮障害の予防・治療剤は、好ましくは筋ジストロフィーおよびサルコペニアに有効に用いられる。筋萎縮障害の予防・治療剤は、より好ましくはデュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、福山型先天性筋ジストロフィー、メロシン欠損型先天性筋ジストロフィー、肢体型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー、三好型筋ジストロフィー、および乳児型神経軸索筋ジストロフィーなどの筋ジストロフィーならびにサルコペニアに有効に用いられ、この中でもデュシェンヌ型筋ジストロフィーに対して特に有効である。

筋萎縮障害は、筋萎縮性側索硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、癌、ＡＩＤＳ、腎不全、および関節リウマチなどの慢性疾患からも生じ得る。また、筋萎縮障害は、糖尿病および関連障害などの代謝障害からも生じうる。したがって、本発明の筋萎縮障害の予防・治療剤、ならびに上記予防および／または治療方法は、筋肉の萎縮を伴う悪液質の改善に利用できる。さらに、マイオスタチンの阻害によって、筋量を増加させると、骨強度が改善され、そして骨粗しょう症および他の変性骨疾患を減少させることも可能である。

本発明の一実施形態は、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体を含む、糖尿病に起因する筋萎縮障害の予防および／または治療剤に関する。本発明の一実施形態は、また、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体の有効量を患者に投与することを含む、糖尿病に起因する筋萎縮障害の予防および／または治療方法に関する。

本発明の一実施形態は、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体を含む、がん悪質液に起因する筋萎縮障害の予防および／または治療剤に関する。本発明の一実施形態は、また、本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体の有効量を患者に投与することを含む、がん悪質液に起因する筋萎縮障害の予防および／または治療方法に関する。

本明細書において、治療上の「有効量」とは、合理的な利益／リスク比に見合う、なんらかの望ましい治療効果を生じさせるのに有効な量である。

本明細書において、「対象」および「患者」とは、ヒトおよび魚類を含む非ヒト動物が挙げられるが、好ましくは、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウマ（競走馬を含む）、ウシ、ブタ、ウサギ、およびヒツジ等の哺乳動物、ならびにニワトリ、ウズラ、および七面鳥等の家禽から選択され、ヒトであることがより好ましい。

上記の薬学的に許容される担体としては、特に限定されないが、乳糖、ショ糖、マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸等の賦形剤；シリカ、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、デキストリン、ゼラチン等の結合剤；アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、トコフェロール等の酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート剤；ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、他の有機酸等の緩衝剤；注射用水、生理食塩水、エタノール、プロパノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、マクロゴール、オリーブ油、トウモロコシ油等の溶媒；プルロニック（登録商標）、ポリエチレングリコール、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリソルベート、トリトン（登録商標）、レシチン、コレステロール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤または湿潤剤；塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、ブドウ糖、ソルビトール、マンニトール等の等張化剤；安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン等の保存剤；錯化剤；アミノ酸；抗菌剤；着色剤；フレーバー剤および希釈剤；乳化剤；ナトリウム等の塩形成対イオン；搬送ビヒクル；希釈剤などが挙げられる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第１８版， Ａ．Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ監修， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９９０）。

本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体の薬剤中の含有量は、薬剤全体に対して０．０１～１００重量％であり得る。

本発明に係るペプチドもしくはそのプロドラッグまたは本発明に係る複合体の投与量は、年齢、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に、ヒト（体重６０ｋｇとして）に対して、一日につき約０．１～１００ｍｇ、好ましくは約１．０～５０ｍｇ、より好ましくは約１．０～２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は年齢、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常、ヒト（体重６０ｋｇとして）に対して、一日につき約０．０１～３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１～２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１～１０ｍｇ程度を投与するのが好都合である。ヒト以外の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。

本発明の効果を、以下の実施例および比較例を用いて説明する。ただし、本発明の技術的範囲が以下の実施例のみに制限されるわけではない。

＜ペプチドの合成＞
（合成例１）
配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－４の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－４は以下に示すＦｍｏｃ固相ペプチド合成法により合成した。

Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を固相合成用反応容器に量りとり、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液中室温で１時間静置し樹脂を膨潤させた後、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２ｍＬ）中室温（２５℃）で２０分間反応させることで樹脂上の保護基Ｆｍｏｃ（９－フルオレニルメトキシカルボニル）基を除去した。ＤＭＦ（２．５ｍＬ）で１０回樹脂を洗浄し、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）１６ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ，５ｅｑ．）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤ）０．０１６ｍＬ（０．１０ｍｍｏｌ，５ｅｑ．）存在下で、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）を室温で３０分間ＤＭＦ（２ ｍＬ）中にて反応させ、樹脂上にアミノ酸を導入した。次のアミノ酸を縮合させるため、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２．５ｍＬ）中にて２０分間反応させることで樹脂上のＦｍｏｃ基を除去した。以下、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨの場合と同様にして順次Ｃ末端側からＦｍｏｃ－Ｄ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｇ－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（Ｐｍｃ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｇ－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｈｇ－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｇ－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｈｇ－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（Ｐｍｃ）－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｌｅｕ－ＯＨ（０．２０ｍｍｏｌ，１０ｅｑ．）を導入しペプチド鎖を伸長させた。２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２．５ｍＬ）中にて２０分間反応させることでＮ末端のＦｍｏｃ基を除去し、ＤＭＦ（２．５ｍＬ，８回）、メタノール（２．５ｍＬ，５回）およびジエチルエーテル（２．５ｍＬ，５回）洗浄後、樹脂を乾燥させた。各種側鎖保護基の除去および脱樹脂のため、ｍ－クレゾール（０．１０ｍＬ）、チオアニソール（０．１０ｍＬ）および１，２－エタンジチオール（０．１０ｍＬ）存在下でトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）４．０ｍＬ中にて２時間反応させた。フィルター付きロートを用いてろ過することで樹脂を除去した後、窒素噴霧によりＴＦＡを留去し、ジエチルエーテル４０ｍＬを加えて粗精製ペプチドを析出させた。粗精製ペプチドを０．７５Ｍ酢酸－２５％（ｖ／ｖ）アセトニトリル混液に溶解し、０．１％ＴＦＡを含有する水－アセトニトリル混合溶媒を移動相として用いる逆相高速液体クロマトグラフィーによりグラジエント溶離（精製）することで、白色固体を得た（６．６ｍｇ，収率１２％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^３＋＋３Ｈ）１１５７．１３４０，ｆｏｕｎｄ １１５７．１３２６。

（合成例２）
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－８の合成
Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－８はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（６．２ｍｇ，収率１１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３８４．３０，ｆｏｕｎｄ ２３８３．６９。

（合成例３）
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－９の合成
Ｈ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－９はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（８．４ｍｇ，収率１６％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２００．１８，ｆｏｕｎｄ ２２００．３０。

（合成例４）
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－１０の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－１０はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（９．５ｍｇ，収率１９％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２１２７．１８，ｆｏｕｎｄ ２１２７．６９。

（合成例５）
以下のアミノ酸配列（配列番号２６：下線部）を含むペプチド：ｒｉＤＭ－１２の合成（比較例）
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－１２はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（４．０ｍｇ，収率７．６％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２１８５．２０，ｆｏｕｎｄ ２１８４．６９。

（合成例６）
配列番号５のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－１３の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ａｌａ（２－Ｎａｐｈ）－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ａｌａ（２－Ｎａｐｈ）：Ｄ－３－（２－ナフチル）アラニン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－１３はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）１０８ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２．９ｍｇ，収率２．６％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３２４．２６，ｆｏｕｎｄ ２３２４．１０。

（合成例７）
配列番号６のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－１４の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ：Ｄ－ホモフェニルアラニン
ｒｉＤＭ－１４はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１．７ｍｇ，収率３．１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２８８．２６，ｆｏｕｎｄ ２２８８．３３。

（合成例８）
配列番号７のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－１５の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ：Ｄ－ホモフェニルアラニン
ｒｉＤＭ－１５はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（７．１ｍｇ，収率１３％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２８８．２６，ｆｏｕｎｄ ２２８８．０８。

（合成例９）
配列番号８のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２６の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－２６はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（４．０ｍｇ，収率７．２％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３４１．２７，ｆｏｕｎｄ ２３４１．１１。

（合成例１０）
配列番号９のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２７の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－２７はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１１．４ｍｇ，収率１９％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３８２．３３，ｆｏｕｎｄ ２３８２．０４。

（合成例１１）
配列番号１０のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２８の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－２８はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（６．２ｍｇ，収率１１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３４１．３０，ｆｏｕｎｄ ２３４０．７４。

（合成例１２）
配列番号１１のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２９の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－２９はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１．２ｍｇ，収率２．２％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３４１．２６，ｆｏｕｎｄ ２３４０．８５。

（合成例１３）
配列番号１２のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－１８の合成
Ｈ－Ｄ－Ｎｌｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｎｌｅ：Ｄ－ノルロイシン
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－１８はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（６．３ｍｇ，収率１１％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３１３．２６，ｆｏｕｎｄ ２３１４．１３。

（合成例１４）
配列番号１３のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－１９の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｎｌｅ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｎｌｅ：Ｄ－ノルロイシン
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－１９はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（５．２ｍｇ，収率９．５％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２８７．２４，ｆｏｕｎｄ ２２８７．１３。

（合成例１５）
配列番号１４のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２０の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｎｌｅ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｎｌｅ：Ｄ－ノルロイシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－２０はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２．２ｍｇ，収率４．０％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２８７．２４，ｆｏｕｎｄ ２２８７．１５。

（合成例１６）
配列番号１５のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２２の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ｏｒｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｏｒｎ：Ｄ－オルニチン
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－２２はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（７．９ｍｇ，収率１５％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２７１．２４，ｆｏｕｎｄ ２２７１．７５。

（合成例１７）
配列番号１６のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２３の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｏｒｎ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｏｒｎ：Ｄ－オルニチン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
ｒｉＤＭ－２３はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（８．６ｍｇ，収率１６％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２９９．２４，ｆｏｕｎｄ ２２９９．４３。

（合成例１８）
配列番号１７のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２４の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｏｒｎ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
Ｄ－Ｏｒｎ：Ｄ－オルニチン
ｒｉＤＭ－２４はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（５．２ｍｇ，収率９．４％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２９９．２４，ｆｏｕｎｄ ２２９９．２１。

（合成例１９）
配列番号１８のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－２５の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｏｒｎ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｐｈｇ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ｐｈｇ：Ｄ－フェニルグリシン
Ｄ－Ｏｒｎ：Ｄ－オルニチン
ｒｉＤＭ－２５はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（５．７ｍｇ，収率１０％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２７１．２４，ｆｏｕｎｄ ２２７１．１１。

（合成例２０）
配列番号１９のアミノ酸配列を含むペプチド：ｎ－６６ｒｉの合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
ｎ－６６ｒｉはＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）５４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（５．４ｍｇ，収率１０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^３＋＋３Ｈ）７５１．７８９９，ｆｏｕｎｄ ７５１．７８９０。

（合成例２１）
配列番号２０のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－３３の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｇｌｎ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
ｒｉＤＭ－３３はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）１０８ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２６．１ｍｇ，収率２３％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３２３．４１，ｆｏｕｎｄ ２３２２．５３。

（合成例２２）
配列番号２１のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－３４の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｓｅｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
ｒｉＤＭ－３４はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）１０８ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２１．３ｍｇ，収率１９％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２２８１．４０，ｆｏｕｎｄ ２２８２．１８。

（合成例２３）
配列番号２２のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－３５の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
ｒｉＤＭ－３５はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）１０８ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（２６．２ｍｇ，収率２２％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３５０．４６５７，ｆｏｕｎｄ ２３５０．４６４６。

（合成例２４）
以下のアミノ酸配列（配列番号２７：下線部）を含むペプチド：ｒｉＤＭ－４２の合成（比較例）
Ｈ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
ｒｉＤＭ－４２はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）１０８ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（３０．２ｍｇ，収率２８％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２０５２．６３ （ａｖｅｒａｇｅ ＭＳ），ｆｏｕｎｄ ２０５３．２６。

（合成例２５）
配列番号２３のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－３６の合成
Ｈ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
ｒｉＤＭ－３６はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）１０８ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１６．１ｍｇ，収率２８％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^３＋＋３Ｈ）７４６．４６４５，ｆｏｕｎｄ ７４６．７０００。

（合成例２６）
配列番号２４のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－３９の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
ｒｉＤＭ－３９はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）１０８ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（１９．０ｍｇ，収率３３％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^３＋＋３Ｈ）７２２．１３４５，ｆｏｕｎｄ ７２２．４０００。

（合成例２７）
配列番号２５のアミノ酸配列を含むペプチド：ｒｉＤＭ－４６の合成
Ｈ－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ（２－Ｎａｐｈ）－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ａｌａ（２－Ｎａｐｈ）：Ｄ－３－（２－ナフチル）アラニン
Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ：Ｄ－ホモフェニルアラニン
ｒｉＤＭ－４６はＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）１０８ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（４４ｍｇ，収率３７％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３１１．４８，ｆｏｕｎｄ ２３１１．４５。

（合成例２８）
複合体１６ＰＣ－Ｎの合成
Ｘ^１－Ｄ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ（２－Ｎａｐｈ）－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｃｈｇ－Ｄ－Ｌｙｓ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ｉｌｅ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ－ＮＨ_２
Ｄ－Ｃｈｇ：Ｄ－シクロヘキシルグリシン
Ｄ－Ａｌａ（２－Ｎａｐｈ）：Ｄ－３－（２－ナフチル）アラニン
Ｄ－ｈｏｍｏＰｈｅ：Ｄ－ホモフェニルアラニン

ペプチド１は、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ（０．３７ｍｍｏｌ／ｇ，渡辺化学工業株式会社）３０ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）を用いて合成例１と同様の手法により合成および精製した（８．２ｍｇ，２４％）。
ＬＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）２３９２．０３，ｆｏｕｎｄ ２３９１．０４。

化合物２は、以前の報告と同様の手法により合成した（Ｈ．Ｏｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１９，５５，９１０８－９１１１．）。

Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）／メタノール（ＭｅＯＨ）（１：１）中、ペプチド１（０．６０μｍｏｌ，１ｅｑ．）および化合物２（０．６６μｍｏｌ，１．１ｅｑ．）を、トリス［（１－ベンジル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メチル］アミン（ＴＢＴＡ，２．４μｍｏｌ，４ｅｑ．）、Ｌ－アスコルビン酸（１４μｍｏｌ，２４ｅｑ．）およびテトラキス（アセトニトリル）銅（Ｉ）ヘキサフルオロホスファート（１２μｍｏｌ，２０ｅｑ．）存在下、室温（２５℃）で１時間攪拌し、高速液体クロマトグラフィーを用いて精製することにより、濃紺色固体を得た（０．４５ｍｇ，収率２０％）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｃａｌｃｄ ｆｏｒ（Ｍ^＋＋Ｈ）３０６２．６７５２，ｆｏｕｎｄ ３０６２．６８０９。

（試験例１）ｉｎ ｖｉｔｒｏ レポーターアッセイによるペプチド誘導体のマイオスタチン阻害活性評価
各ペプチド誘導体（０．３μＭ）のマイオスタチン阻害活性評価は、以下の手法により実施した。合成例１～１２にて合成した誘導体の結果を図１に、合成例１３～１９にて合成した誘導体の結果を図２に、合成例２０～２４にて合成した誘導体の結果を図３に、合成例２５～２７にて合成した誘導体の結果を図４に示す。比較例として合成した合成例５および２４のペプチド誘導体を除き、本発明に係るペプチド誘導体は０．３μＭの濃度において顕著なマイオスタチン阻害活性を示した。

（１）細胞培養
ヒト胎児腎細胞ＨＥＫ２９３細胞は、非必須アミノ酸（富士フイルム和光純薬株式会社）が添加された１０％ＦＢＳ ＤＭＥＭ（ナカライテスク株式会社）培地を用いて、３７℃、５％ ＣＯ_２インキュベータで培養した。

（２）ｉｎ ｖｉｔｒｏレポーターアッセイ
Ｄ－Ｌｙｓ－ｃｏａｔｅｄ ９６ウェル透明プレート（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）にＨＥＫ２９３細胞を１ウェルたり２．０ｘ１０^４ ｃｅｌｌｓ（１００μＬ ＤＭＥＭ＋１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ）播種し、２４時間培養した。

その翌日、１ウェルあたり１００ｎｇのｐＧＬ４．４８［ｌｕｃ２Ｐ／ＳＢＥ／Ｈｙｇｒｏ］（プロメガ社）、およびインターナルコントロールとして１０ｎｇのｐＧＬ４［ｈＲｌｕｃ／ＴＫ］（プロメガ社）をＦｕＧＥＮＥ ＨＤ（プロメガ社）の最終濃度が４１．２５μｇ／ｍＬになるようＯＰＴＩ－ＭＥＭを用いて混合し、ウェル中の培地に添加した。この細胞を３７℃、２４時間培養したのち、細胞培養液を無血清ＤＭＥＭに交換して８時間培養した。

試験資料であるペプチドはストック溶液として１０ｍＭになるようＤＭＳＯを用いて懸濁させ、－３０℃で保存した。培地に添加する１時間前に、無血清ＤＭＥＭ培地で懸濁して、室温（２５℃）で２０分間静置した。次いで、０．３μＭの最終濃度のペプチドと、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチン（メルクミリポア社）とになるように培地に添加し、その後４時間培養を行った。

ポジティブコントロールとして用いたプロペプチドタンパク質（ＲＳＤ社）は、ストック溶液として１０μＭになるように０．１％（ｖ／ｖ）ＢＳＡ含有ＰＢＳを用いて懸濁し、－３０℃で保存した。培地に添加する１時間前に、無血清ＤＭＥＭ培地で懸濁して室温（２５℃）で２０分間静置した。次いで、１０ｎＭの最終濃度のプロペプチドタンパク質と、８ｎｇ／ｍＬのマイオスタチン（メルクミリポア社）とになるように培地に添加し、その後４時間培養を行った。

４時間の培養後、アスピレーターで培養液を取り除き、細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。その後、１ウェルあたり５０μＬのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ（プロメガ社）を加えて細胞を溶解した。溶解液を４℃条件下、４５００ｒｐｍで６分間遠心分離した。遠心分離後の上清２０μＬを白色９６ウェルプレート（コスター社）へ移した後、５０μＬのＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ（プロメガ社）を添加し、発光をＬｕｍｉｎｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）で検出してホタルルシフェラーゼ活性を測定した。さらに、５０μＬのＳｔｏｐ ＆ Ｇｌｏ Ｂｕｆｆｅｒを添加した後、発光をＬｕｍｉｎｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔで検出してウミシイタケルシフェラーゼ活性を測定することで、インターナルコントロールとした。

（試験例２）ペプチドのウシ膵臓由来トリプシン溶液中での安定性評価
合成例２３で合成したｒｉＤＭ－３５のウシ膵臓由来トリプシン溶液中での安定性を検証するため以下の手法により評価した。

ｒｉＤＭ－３５を最終濃度５０μＭになるように５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＣａＣｌ_２、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ－３５含有）溶液に溶解し、ＴＰＣＫ処理済みウシ膵臓由来トリプシン（シグマアルドリッチ社）を最終濃度１μｇ／ｍＬになるように添加し（総容量１００μＬ）、３７℃で４００分間インキュベートした。インキュベート開始０分およびインキュベート開始後４００分に２０μＬをサンプリングし、２５％アセトニトリル水溶液８０μＬで希釈後、２０μＬを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、株式会社日立ハイテク、Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ（登録商標））に注入し、得られたｒｉＤＭ－３５のピーク面積に基づく残存率から安定性を解析した。カラムはＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８－ＡＲ－ＩＩ ４．６×１５０ｍｍ（ナカライテスク株式会社）を用い、１ｍＬ／ｍｉｎの流速にて、０．１％トリフルオロ酢酸含有水－アセトニトリル系におけるアセトニトリルの直線グラジエント（２５～４０％，３０分）をかけることで、ＵＶ検出器（２２０ｎｍ）でペプチドのピークを検出した。

この結果を図５に示す。ｒｉＤＭ－３５に由来する分解物は、ＬＣＭＳ－２０２０（株式会社島津製作所）を用いた質量分析にて同定されなかった。ｒｉＤＭ－３５はウシ膵臓由来トリプシン溶液中で極めて高い安定性を示した。

（試験例３）ｒｉＤＭ－３５のウシ膵臓由来α－キモトリプシン溶液中での安定性評価
合成例２３で合成したｒｉＤＭ－３５のウシ膵臓由来α－キモトリプシン溶液中での安定性を検証するため以下の手法により評価した。

ｒｉＤＭ－３５を最終濃度５０μＭになるように１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．８、１０ｍＭ ＣａＣｌ_２含有）溶液に溶解し、ＴＬＣＫ処理済みウシ膵臓由来α－キモトリプシン（シグマアルドリッチ社）を最終濃度２ μｇ／ｍＬになるように添加して（総容量１００μＬ）、３７℃で４００分間インキュベートした。インキュベート開始０分およびインキュベート開始後４００分に２０μＬをサンプリングし、２５％アセトニトリル水溶液８０μＬで希釈後、２０μＬを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、株式会社日立ハイテク、Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ（登録商標））に注入し、得られたｒｉＤＭ－３５のピーク面積に基づく残存率から安定性を解析した。カラムはＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８－ＡＲ－ＩＩ ４．６×１５０ｍｍ（ナカライテスク株式会社）を用い、１ｍＬ／ｍｉｎの流速にて、０．１％トリフルオロ酢酸含有水－アセトニトリル系におけるアセトニトリルの直線グラジエント（２５～４０％，３０分）をかけることで、ＵＶ検出器（２２０ｎｍ）でペプチドのピークを検出した。

この結果を図６に示す。ｒｉＤＭ－３５に由来する分解物は、ＬＣＭＳ－２０２０（株式会社島津製作所）を用いた質量分析にて同定されなかった。ｒｉＤＭ－３５はウシ膵臓由来α－キモトリプシン溶液中で極めて高い安定性を示した。

（試験例４）ｒｉＤＭ－４のデュシェンヌ型筋ジストロフィーモデルｍｄｘマウス前脛骨筋に及ぼす影響（ｉｎ ｖｉｖｏ評価）
合成例１で合成したｒｉＤＭ－４のｉｎ ｖｉｖｏにおける握力増大効果を検証するため以下の手法により評価を行った。

ｒｉＤＭ－４を生理食塩水に０．７５ｍＭになるよう溶解した。麻酔下にある５週齢のｍｄｘ雄マウス（日本クレア社より購入）の両後肢計８箇所の筋肉内に４０μＬ筋肉内投与した（対照群には生理食塩水を同様に４０μＬ投与した）。２週間後、再度同じ量のｒｉＤＭ－４（対照群には生理食塩水）を投与し、さらに４週間後、マウスの握力測定（齋藤式マウス用握力測定装置ＭＫ－３８０Ｍ、室町機械株式会社）を行った。

この結果を図７に示す。ｒｉＤＭ－４はそのマイオスタチン阻害活性に基づいて６０％程度ｍｄｘマウスの後肢の握力を有意に増大させた。既存のＭＩＰＥ－１６８６よりも改善効果が大きかった。

（試験例５）１６ＰＣ－Ｎを用いたマイオスタチン酸素化評価
合成例２８で合成した１６ＰＣ－Ｎのマイオスタチン酸素化は、以下の手法により実施した。

リン酸緩衝液（１０ｍＭ，ｐＨ７．４）中の１６ＰＣ－Ｎ（３μＭ）とマイオスタチン（１μＭ）とに、３７℃下で３０分間光照射（７３０ｎｍ，１４ｍＷ）を行った。ジチオスレイトールによる還元、リシルエンドペプチドダーゼによる消化、ＺｉｐＴｉｐ Ｃ１８による脱塩処理を経て、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ分析を行った。

この結果を図８に示す。反応後のサンプルでマイオスタチン酸素化体が観測され、１６ＰＣ－Ｎによってマイオスタチンが光酸素化されたことが示唆された。

（試験例５）ｒｉＤＭ－３５の筋肉内投与によるがん悪液質モデルマウスの筋肉消耗改善効果の検証（ｉｎ ｖｉｖｏ評価）
合成例２３で合成したｒｉ－ＤＭ３５をＰＢＳ（リン酸緩衝液；１０ｍＭ，ｐＨ７．４）に１ｍＭになるよう溶解した。麻酔下にあるＣ５７ＢＬ６／Ｊ雄マウス（オリエンタル酵母より購入）の背部皮下に、ルイス肺腺癌細胞（ＬＬＣ）を５．０×１０^６移植してがん悪液質モデルマウスを作製した。移植後４、１１、１８日にｒｉ－ＤＭ３５溶液を両足腓腹筋に３０μＬずつ筋肉内投与した（対象群にはＰＢＳを同様に３０μＬ投与した）。ＬＬＣ移植２２日目にマウスの四肢握力をイマダデジタルフォースゲージにより測定した。

この結果を図９に示す。ｒｉ－ＤＭ３５投与群はがん悪液質モデルマウスの握力を４１．３％改善した。

また、ＬＬＣ移植２２日目にマウスの剖検を行い、両足腓腹筋を摘出して重量および筋線維面積を測定した。

がん悪液質モデルマウスの体重当たりの腓腹筋重量を図１０に示す。ｒｉ－ＤＭ３５投与群はがん悪液質モデルマウスの体重当たりの腓腹筋重量が１９．６％増加した。

がん悪液質モデルマウスの筋線維面積の度数分布表を図１１に示す。ｒｉ－ＤＭ３５投与群はがん悪液質モデルマウスの筋線維面積を肥大した。

本出願は、２０２０年７月６日に出願された日本国特許出願第２０２０－１１６５８３号に基づいており、その開示内容は、参照により全体として引用されている。

Claims (12)

1. 下記式（１）で表されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基数が１５～１７であり、マイオスタチン阻害活性を有する、ペプチド、またはその薬学的に許容される塩：
   
   上記式（１）において、
   Ｘ^０は、Ｄ－Ａｌａ残基または欠損であり；
   Ｘ^１は、Ｄ－Ｌｅｕ残基、Ｄ－ノルロイシン残基または欠損であり；
   Ｘ^２は、Ｄ－Ａｒｇ残基またはＤ－オルニチン残基であり；
   Ｘ^３は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基またはＤ－ノルロイシン残基であり；
   Ｘ^４は、Ｄ－Ｌｙｓ残基、Ｄ－Ａｒｇ残基またはＤ－オルニチン残基であり；
   Ｘ^５は、Ｄ－Ｓｅｒ残基またはＤ－Ａｒｇ残基であり；
   Ｘ^６は、Ｄ－Ｔｒｐ残基またはＤ－３－（２－ナフチル）アラニン残基であり；
   Ｘ^７は、Ｄ－２－フェニルグリシン残基、Ｄ－ノルロイシン残基またはＤ－Ｉｌｅ残基であり；
   Ｘ^８は、Ｄ－Ｇｌｎ残基またはＤ－Ａｒｇ残基であり；
   Ｘ^９は、Ｄ－２－シクロヘキシルグリシン残基であり；
   Ｘ^１０は、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－ＡｒｇおよびＤ－オルニチンからなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
   Ｘ^１１は、Ｄ－２－フェニルグリシン残基またはＤ－Ｉｌｅ残基であり；
   Ｘ^１２は、Ｄ－Ｔｒｐ残基、Ｄ－オルニチン残基またはＤ－ホモフェニルアラニン残基であり；
   Ｘ^１３は、Ｄ－Ａｒｇ残基であり；
   Ｘ^１４は、Ｄ－２－フェニルグリシン残基またはＤ－Ｉｌｅ残基であり；
   Ｘ^１５は、Ｄ－Ｔｙｒ残基であり；ならびに
   Ｘ^１６は、Ｄ－Ｔｒｐ残基、Ｄ－ホモフェニルアラニン残基または欠損である。
2. 配列番号１～２５で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項１に記載のペプチドまたはその薬学的に許容される塩。
   
3. 配列番号１～４、６、８～１８、２０～２３および２５で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項２に記載のペプチドまたはその薬学的に許容される塩。
4. 配列番号２０～２３および２５で表されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、請求項２または３に記載のペプチドまたはその薬学的に許容される塩。
5. 下記式（２）で表される複合体またはその薬学的に許容される塩：
   
   式（２）中、
   Ｙは、下記式（３）：
   
   ［式３中、
   Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ハロゲノアルキル基またはハロゲン原子を表し、
   Ｒ^３は、臭素原子、ヨウ素原子またはセレン原子を表し、
   Ｒ^４およびＲ^５は、それぞれ独立して、水素原子または置換もしくは非置換のアルキル基を表し、
   Ｒ^６およびＲ^７は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基または置換もしくは非置換のアルキル基を表し、この際Ｒ^４およびＲ^６またはＲ^５およびＲ^７が一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成してもよく、
   Ｒ^８は、水素原子または置換もしくは非置換のアルキル基を表し、
   Ｒ^９およびＲ^１０は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基または置換もしくは非置換のアルキル基を表し、この際Ｒ^８とＲ^９またはＲ^１０とが一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成してもよく、
   ｍおよびｎは、１～３の整数を表し、
   ＊は、Ｌとの結合部位である］
   で表される化合物であり；
   Ｌは、ＹおよびＺ間のリンカーを表し；
   Ｚは、請求項１～４のいずれか１項に記載のペプチドである。
6. 前記Ｒ^１がハロゲン原子であり、前記Ｒ^２がハロゲノアルキル基である、請求項５に記載の複合体。
7. 前記ｍおよびｎが１である、請求項５または６に記載の複合体。
8. Ｒ^４およびＲ^６、Ｒ^５およびＲ^７ならびにＲ^８およびＲ^１０が一緒になって、置換または非置換のアルキレン基またはアルケニレン基を形成し、この際前記アルキレン基またはアルケニレン基の炭素数が２または３である、請求項５～７のいずれか１項に記載の複合体。
9. 請求項１～４のいずれか１項に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、または請求項５～８のいずれか１項に記載の複合体もしくはその薬学的に許容される塩を含む、マイオスタチン阻害剤。
10. 請求項１～４のいずれか１項に記載のペプチドもしくはその薬学的に許容される塩、または請求項５～８のいずれか１項に記載の複合体もしくはその薬学的に許容される塩を含む、筋萎縮障害の予防および／または治療剤。
11. 前記筋萎縮障害が、筋ジストロフィーまたはサルコペニアである、請求項１０に記載の筋萎縮障害の予防および／または治療剤。
12. 前記筋萎縮障害が、糖尿病またはがん悪質液に起因する筋萎縮障害である、請求項１０に記載の筋萎縮障害の予防および／または治療剤。