JP7683281B2 - 組織培養容器 - Google Patents

Description

本明細書では、組織培養容器を開示する。

胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）等の多能性幹細胞は目的細胞に分化誘導することができ、再生医療の分野での応用が期待されている。多能性幹細胞を心筋細胞、網膜色素上皮細胞、軟骨細胞など様々な細胞へ分化誘導する方法が報告されている。

例えば特許文献１には、胚性幹細胞及び／又は人工多能性幹細胞から誘導した、空洞を内包する構造を有し、長軸方向の長さが５ｍｍ以上であることを特徴とする腸オルガノイドが開示されている。特許文献１によれば、前記腸オルガノイドは、腸関連疾患を予防又は治療するための薬剤の開発や、腸関連疾患の病理研究のために利用できる。

特許文献２には、細胞塊を培養するための容器であって、前記細胞塊と培養液とを収容可能とする培養空間を有するウェルと、前記ウェルの開口を有する面上に配置され前記培養空間と連通した内腔を有する筒状体とを含み、前記筒状体の筒壁に、前記筒状体の外側に前記細胞塊を通過させることなく前記培養液を排出させうる１個以上の連通部が形成されている、細胞塊用培養容器が記載されている。特許文献２によれば、この容器により、細胞塊への影響が少なく、培養液を効率的に交換することが可能である。

特許文献２と同じ出願人による特許文献３にも同様に、ウェルの開口部に立設した筒状態の隔壁に細胞塊よりも幅の狭い間隙を設けた細胞塊用培養容器が記載されている。特許文献３によれば、この容器により、細胞塊にダメージや刺激を極力与えずに培養液の交換を行うことができ、且つ、細胞塊の生産性も向上できる。

特許文献４には、液体を貯留する容器の底壁に対して間隔を置いた状態で前記液体中に浸漬され、対象物を保持するプレートであって、前記対象物を担持することができ、底に貫通孔が形成された１以上の凹部を有するプレートが開示されている。前記貫通孔の径は、前記所望サイズの対象物を通過させず、前記所望サイズよりも小さな物体を通過させるサイズに選ばれている。このプレートを、液体を貯留する容器に設置すると、前記凹部を培養のためのウェルとして利用することができる。

特開２０１９－００００１４号公報 ＷＯ２０１５／１７８４１３ ＷＯ２０１７／０５７１２６ 特開２０１６－１６３５９１号公報

特許文献１に記載されているような組織に、薬物候補物質や染色物質などの薬剤を作用させる場合、マルチウェルプレートの各ウェルに、前記組織と、前記薬剤を含む培養液とを収容してインキュベートすることが考えられる。このとき、通常のマルチウェルプレートでは、培養液の入れ替えに時間がかかるため、ウェルごとに前記薬剤を含む培養液による処理時間が異なるという課題がある、また、培養液の入れ替えが短時間に行えないため、組織へのダメージが大きいという課題がある。また、培養後に各ウェルに収容された組織を回収するためには、各ウェル内の組織をそれぞれ吸引して回収する必要があり、回収が短時間で行うことができないという課題がある。

特許文献２及び３に記載の容器は、ウェルを含む容器全体を傾斜させて、ウェル内の培養液を排出することを可能にする。しかし、ウェル内の培養液の完全な入れ替えは容易ではないと考えられる。また、培養後の組織の回収はウェルごとに行う必要がある。

特許文献４に記載の技術によれば、培養対象物を保持する各凹部の底に貫通孔が形成されているため、培養対象物の顕微鏡による観察には適していないと考えられる。また、培養後の組織の回収は凹部ごとに行う必要がある。
そこで本明細書では、組織を収容して培養するための複数のウェルを備え、培養液の交換と、培養後の組織の回収が容易な、新たな組織培養容器を開示する。

本明細書は、下記の（１）～（１３）のいずれかに記載の第１実施形態に係る組織培養容器、及び、下記の（１４）～（２４）のいずれかに記載の第２実施形態に係る組織培養容器を開示する。

（１）組織を培養するための組織培養容器であって、
外容器底部と、前記外容器底部の周縁から立設した外容器周壁部とを備え、前記外容器底部及び前記外容器周壁部により画定される第１空間を内包する外容器と、
前記第１空間に分離可能に収容される、連結された複数のウェル底部を備える、底部材と、
前記第１空間に分離可能に収容される、連結された複数のウェル周壁部を備える、周壁部材と、
を備え、
前記複数のウェル底部と、前記複数のウェル周壁部とは、複数の第２空間をそれぞれが内包する、複数のウェルを形成し、
前記複数のウェルの各ウェルの前記第２空間は、前記ウェル底部の１つ、及び、前記ウェル底部の１つの周縁から立設した前記ウェル周壁部の１つにより画定されており、
前記各ウェルにおいて、前記ウェル底部の周縁の周方向の少なくとも一部と、前記ウェル周壁部との間に、前記各ウェル内の前記第２空間と、前記第１空間とを連絡する間隙が形成されている、
ことを特徴とする、組織培養容器。
（２）前記各ウェルにおける前記間隙は、前記各ウェルの前記ウェル底部に対して周方向の同じ位置に形成されている、（１）に記載の組織培養容器。
（３）前記各ウェルにおける前記間隙の幅が、前記各ウェルの前記ウェル底部の周縁の周方向の位置により連続的に及び／又は段階的に異なる、（１）又は（２）に記載の組織培養容器。
（４）前記底部材は、第１係合部を更に備え、
前記周壁部材は、第２係合部を更に備え、
前記外容器は、前記外容器の前記外容器周壁部に、前記底部材の前記第１係合部と係合して前記底部材を位置決めする第３係合部と、前記周壁部材の前記第２係合部と係合して前記周壁部材を位置決めする第４係合部とを備え、
前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部との係合、及び、前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との係合の少なくとも一方は、前記各ウェルにおける前記間隙の幅を変化させることができるように調節可能である、
（１）～（３）のいずれかに記載の組織培養容器。
（５）前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部の少なくとも一方が、前記底部材の、前記周壁部材に対する位置を調節できるよう、加工可能である、及び／又は、
前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部の少なくとも一方が、前記周壁部材の、前記底部材に対する位置を調節できるよう、加工可能である、
（４）に記載の組織培養容器。
（６）前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部とは、前記底部材が前記周壁部材に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、
及び／又は、
前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部とは、前記周壁部材が前記底部材に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、
（４）に記載の組織培養容器。
（７）前記底部材を２以上備え、
２以上の前記底部材は、それぞれ、前記外容器の前記第３係合部と係合して、前記底部材を、前記周壁部材に対し異なる位置に位置決めする前記第１係合部を備える、
（４）に記載の組織培養容器。
（８）前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部との間に、取り外し可能に介在して、前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部との間の間隔を調節することにより、前記底部材の、前記周壁部材に対する位置を調節する、第１スペーサー部材、及び／又は、
前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との間に、取り外し可能に介在して、前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との間の間隔を調節することにより、前記周壁部材の前記底部材に対する位置を調節する、第２スペーサー部材
を更に備える
（４）に記載の組織培養容器。
（９）前記周壁部材を２以上備え、
２以上の前記周壁部材は、それぞれ、前記外容器の前記第４係合部と係合して、前記周壁部材を、前記底部材に対し異なる位置に位置決めする前記第２係合部を備える、
（４）に記載の組織培養容器。
（１０）前記底部材は、第１係合部を更に備え、
前記周壁部材は、前記底部材の前記第１係合部と係合して前記周壁部材を位置決めする第２係合部を更に備え、
前記外容器は、前記外容器の前記外容器周壁部に、前記底部材の前記第１係合部と係合して前記底部材を位置決めする第３係合部を備え、
前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部との係合、及び、前記底部材の前記第１係合部と前記周壁部材の前記第２係合部との係合の少なくとも一方は、前記各ウェルにおける前記間隙の幅を変化させることができるように調節可能である、
（１）～（３）のいずれかに記載の組織培養容器。
（１１）第１周壁部材から第Ｎ周壁部材までのＮ個の前記周壁部材を備え、
第ｎ－１周壁部材が備える前記複数のウェル周壁部の各々である第ｎ－１ウェル周壁部の内径は、第ｎ周壁部材が備える前記複数のウェル周壁部の各々である第ｎウェル周壁部の外径よりも大きく、前記第ｎ－１周壁部材の前記第ｎ－１ウェル周壁部内に、前記第ｎ周壁部材の前記第ｎウェル周壁部が挿入されるように、前記第１周壁部材から前記第Ｎ周壁部材が取り外し可能に組み合わされ、
Ｎは２以上の整数であり、ｎは２以上Ｎ以下の整数であり、
前記各ウェルは、前記ウェル底部の１つと、第１ウェル周壁部から第Ｎウェル周壁部までの組み合わせの１つとにより形成されており、
前記各ウェルの前記第２空間は、前記ウェル底部の１つ、及び、前記ウェル底部の１つの周縁から立設した、前記第１ウェル周壁部から前記第Ｎウェル周壁部までの組み合わせの１つにより画定されており、
前記各ウェルにおいて、前記第ｎ－１ウェル周壁部の下端から前記ウェル底部までの距離は、前記第ｎウェル周壁部の下端から前記ウェル底部までの距離よりも大きい、
（１）～（３）のいずれかに記載の組織培養容器。
（１２）前記外容器を覆うことができる蓋体を更に備え、
前記底部材は、第５係合部を更に備え、
前記周壁部材は、第６係合部を更に備え、
前記蓋体は、前記底部材の前記第５係合部と係合して前記底部材を保持する第７係合部と、前記周壁部材の前記第６係合部と係合して前記周壁部材を保持する第８係合部とを備える、
（１）～（１１）のいずれかに記載の組織培養容器。
（１３）前記外容器の前記外容器底部と、前記底部材の前記ウェル底部とが、ガラス材料により構成される、（１）～（１２）のいずれかに記載の組織培養容器。

（１４）組織を培養するための組織培養容器であって、
外容器底部と、前記外容器底部の周縁から立設した外容器周壁部とを備え、前記外容器底部及び前記外容器周壁部により画定される第１空間を内包する外容器と、
前記第１空間に分離可能に収容される、連結された複数のウェル周壁部を備える、周壁部材と、
を備え、
前記外容器底部と、前記複数のウェル周壁部とは、複数の第２空間をそれぞれが内包する、複数のウェルを形成し、
前記複数のウェルの各ウェルの前記第２空間は、前記外容器底部の複数の部分の１つ、及び、前記部分の１つの周縁から立設した前記ウェル周壁部の１つにより画定されており、
前記各ウェルにおいて、前記外容器底部の前記部分の周縁の周方向の少なくとも一部と、前記ウェル周壁部との間に、前記各ウェル内の前記第２空間と、前記第１空間とを連絡する間隙が形成されている、
ことを特徴とする、組織培養容器。
（１５）前記各ウェルにおける前記間隙は、前記各ウェルの、前記外容器底部の前記部分に対して周方向の同じ位置に形成されている、（１４）に記載の組織培養容器。
（１６）前記各ウェルにおける前記間隙の幅が、前記各ウェルの、前記外容器底部の前記部分の周縁の周方向の位置により連続的に及び／又は段階的に異なる、（１４）又は（１５）に記載の組織培養容器。
（１７）前記周壁部材は、第２係合部を更に備え、
前記外容器は、前記外容器の前記外容器周壁部に、前記周壁部材の前記第２係合部と係合して前記周壁部材を位置決めする第４係合部とを備え、
前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との係合の少なくとも一方は、前記各ウェルにおける前記間隙の幅を変化させることができるように調節可能である、
（１４）～（１６）のいずれかに記載の組織培養容器。
（１８）前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部の少なくとも一方が、前記周壁部材の、前記外容器底部に対する位置を調節できるよう、加工可能である、
（１７）に記載の組織培養容器。
（１９）前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部とは、前記周壁部材が前記外容器底部に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、
（１７）に記載の組織培養容器。
（２０）前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との間に、取り外し可能に介在して、前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との間の間隔を調節することにより、前記周壁部材の前記外容器底部に対する位置を調節する、第２スペーサー部材
を更に備える
（１７）に記載の組織培養容器。
（２１）前記周壁部材を２以上備え、
２以上の前記周壁部材は、それぞれ、前記外容器の前記第４係合部と係合して、前記周壁部材を、前記外容器底部に対し異なる位置に位置決めする前記第２係合部を備える、
（１７）に記載の組織培養容器。
（２２）第１周壁部材から第Ｎ周壁部材までのＮ個の前記周壁部材を備え、
第ｎ－１周壁部材が備える前記複数のウェル周壁部の各々である第ｎ－１ウェル周壁部の内径は、第ｎ周壁部材が備える前記複数のウェル周壁部の各々である第ｎウェル周壁部の外径よりも大きく、前記第ｎ－１周壁部材の前記第ｎ－１ウェル周壁部内に、前記第ｎ周壁部材の前記第ｎウェル周壁部が挿入されるように、前記第１周壁部材から前記第Ｎ周壁部材が取り外し可能に組み合わされ、
Ｎは２以上の整数であり、ｎは２以上Ｎ以下の整数であり、
前記各ウェルは、前記外容器底部の複数の部分の１つと、第１ウェル周壁部から第Ｎウェル周壁部までの組み合わせの１つとにより形成されており、
前記各ウェルの前記第２空間は、前記外容器底部の複数の部分の１つ、及び、前記部分の１つの周縁から立設した、前記第１ウェル周壁部から前記第Ｎウェル周壁部までの組み合わせの１つにより画定されており、
前記各ウェルにおいて、前記第ｎ－１ウェル周壁部の下端から前記外容器底部までの距離は、前記第ｎウェル周壁部の下端から前記外容器底部までの距離よりも大きい、
（１４）～（１６）のいずれかに記載の組織培養容器。
（２３）前記外容器を覆うことができる蓋体を更に備え、
前記周壁部材は、第６係合部を更に備え、
前記蓋体は、前記周壁部材の前記第６係合部と係合して前記周壁部材を保持する第８係合部を備える、
（１４）～（２２）のいずれかに記載の組織培養容器。
（２４）前記外容器の前記外容器底部が、ガラス材料により構成される、（１４）～（２３）のいずれかに記載の組織培養容器。

本開示の一以上の態様による組織培養容器によれば、複数の組織を一度に培養することができ、培養液の交換と、培養後の組織の回収を短時間で行うことができる。

図１は本開示の第１実施形態に係る組織培養容器の分解斜視図である。 図２は、外容器、底部材及び周壁部材を組み合わせた本開示の第１実施形態に係る組織培養容器において、複数のウェル内の第２空間の各々に、被検腸オルガノイドを１つずつ収容し、外容器内の第１空間及び複数のウェル内の第２空間に第１の培養液を貯留した状態の、断面模式図である。 図３は、図２に示す状態の本開示の第１実施形態に係る組織培養容器から、底部材と周壁部材とを、被検腸オルガノイドを収容した複数のウェルを保持したまま、外容器から引き揚げ、外容器内の第１の培養液を除去した状態の断面模式図である。 図４は、図３に示す状態の本開示の第１実施形態に係る組織培養容器において、外容器内の第１空間に色素を含む第２の培養液を貯留した断面模式図である。 図５は、図４に示す状態の色素を含む第２の培養液を貯留した外容器に、被検腸オルガノイドを収容した複数のウェルを形成した底部材と周壁部材との組み合わせを、再び設置し、被検腸オルガノイドを、色素を含む第２の培養液に浸した断面模式図である。 図６は、図５に示す状態での色素を含む第２の培養液中での被検腸オルガノイドの培養後に、底部材と周壁部材とを、被検腸オルガノイドを収容した複数のウェルを形成した状態を保持したまま、外容器から引き揚げた状態を示す断面模式図である。 図７は、図６に示す状態の本開示の第１実施形態に係る組織培養容器から、外容器内の第２の培養液を除去した状態の断面模式図である。 図８は、第３の培養液を貯留した外容器に、被検腸オルガノイドを収容した複数のウェルを形成した状態の底部材と周壁部材とを、再び設置し、被検腸オルガノイドを、第３の培養液中で洗浄する工程を示す断面模式図である。 図９は、図８に示す状態の本開示の第１実施形態に係る組織培養容器から、色素により染色された被検腸オルガノイドを選択的に除去した状態を示す断面模式図である。 図１０は、図９に示す状態の本開示の第１実施形態に係る組織培養容器において、周壁部材を取り外して、外容器の第１空間内に、色素により染色されていない正常な被検腸オルガノイドをまとめて回収する工程を示す断面模式図である。 図１１は、複数のウェルにおける間隙がウェル底部の周縁の周方向の一部のみに形成されており、かつ、間隙の幅が、ウェル底部の周縁の周方向の位置により連続的に異なっている、本開示の第１実施形態に係る組織培養容器の断面模式図である。 図１２は、蓋体を更に備えた本開示の第１実施形態に係る組織培養容器において、複数のウェル内の第２空間の各々に、被検腸オルガノイドを１つずつ収容し、外容器内の第１空間及び複数のウェル内の第２空間に培養液を貯留した状態の、断面模式図である。 図１３は、図１２に示す状態の蓋体を更に備えた本開示の第１実施形態に係る組織培養容器から、蓋体とともに底部材と周壁部材とを、被検腸オルガノイドを収容した複数のウェルを保持したまま、外容器から引き揚げた状態の断面模式図である。 図１４（Ａ）は、本開示の第２実施形態に係る組織培養容器の平面模式図である。図１４（Ｂ）は、本開示の第２実施形態に係る組織培養容器の断面模式図である。 図１５は、本開示の第１実施形態の変形例２の第４の例に係る組織培養容器１の、第２スペーサー部材６０を組み合わせる前の状態の、断面模式図である。 図１６は、本開示の第１実施形態の変形例２の第４の例に係る組織培養容器１に、第２スペーサー部材６０を組み合わせた状態の、断面模式図である。 図１７は、本開示の第１実施形態の変形例４に係る組織培養容器１の、第１周壁部材３０－１及び第２周壁部材３０－２を、第１ウェル周壁部３１－１内に第２ウェル周壁部３１－２が挿入されるように重ね合わせた状態の、断面模式図である。 図１８は、本開示の第１実施形態の変形例４に係る組織培養容器１の、第２周壁部材３０－２を取り外した状態の、断面模式図である。

＜第１実施形態に係る組織培養容器＞
本開示の第１実施形態に係る組織培養容器の具体的な態様について図面を参照して説明する。

図１は本開示の第１実施形態に係る組織培養容器の分解斜視図である。図２～図１０は、図１に示す第１実施形態に係る組織培養容器を用いて、組織を培養液中で培養する方法を示す断面模式図である。以下の説明では、図１～１０に示す符号を参照して、第１実施形態に係る組織培養容器１の構造及びその使用方法について説明する。

組織培養容器１は、外容器１０と、底部材２０と、周壁部材３０とを備える。
外容器１０は、外容器底部１１と、外容器底部１１の周縁１１ａから立設した外容器周壁部１２とを備え、外容器底部１１及び外容器周壁部１２により画定される第１空間１３を内包する。第１空間１３には、培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３が貯留される。第１空間１３は、上方が開放され、底が外容器底部１１により画定され、周囲が外容器周壁部１２により画定された空間である。

底部材２０は、第１空間１３に分離可能に収容される、連結された複数のウェル底部２１を備える。複数のウェル底部２１は、図示する例のように、ウェル底部接続部２２を介して連結されていてよい。

周壁部材３０は第１空間１３に分離可能に収容される、連結された複数のウェル周壁部３１を備える。複数のウェル周壁部３１は、図示する例のように、ウェル周壁部接続部３２を介して連結されていてよい。

複数のウェル底部２１と、複数のウェル周壁部３１とは、複数の第２空間４１をそれぞれが内包する、複数のウェル４０を形成する。ここで複数のウェル４０の各々（各ウェル）の第２空間４１は、ウェル底部２１の１つ、及び、ウェル底部２１の１つの周縁から立設したウェル周壁部３１の１つにより画定されている。第２空間４１の各々は、組織を収容して培養するため空間である。

各ウェル４０において、ウェル底部２１の、第２空間４１の側の表面（ウェル４０の内底面）は、細胞接着を抑制する処理が施された表面（低接着表面）であることが好ましい。また、各ウェル４０において、ウェル周壁部３１の、第２空間４１の側の表面（ウェル４０の内側面）は、細胞接着を抑制する処理が施された表面（低接着表面）であることが好ましい。これらの態様の組織培養容器１は、各ウェル４０の第２空間４１において後述する腸オルガノイド又はスフェロイドを培養する目的に特に適している。

そして、各ウェル４０において、ウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の少なくとも一部と、ウェル周壁部３１との間に、各ウェル４０内の第２空間４１と、第１空間１３とを連絡する間隙４２が形成されている。

ウェル周壁部３１は上方及び下方が開口した筒状体であることが好ましい。ウェル周壁部３１は、図示する例では、ウェル４０の深さ方向の位置に関わらず内径が一様であるが、ウェルの深さ方向の位置により連続的に又は段階的に異なる内径を有していてもよい。例えば、図示しない例では、筒状体であるウェル周壁部３１の内径は、下端３１ａで最も小さく、ウェル４０の開口を構成する上端３１ｂに向けて下端３１ａから連続的に拡大し、上端３１ｂに至る途中の位置から上端３１ｂまでは一定である例が挙げられる。

外容器１０の第１空間１３に貯留された培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３は、間隙４２を通じて、複数のウェル４０の各々の第２空間４１に流入し第２空間４１を満たすことができる。更に、外容器１０の第１空間１３に貯留された培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を、組織培養容器１全体を傾斜させることにより又は培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を吸引することにより排出すると、間隙４２を通じて、複数のウェル４０の各々の第２空間４１内の培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を同時に排出することができる。また、外容器１０内で第２空間４１が培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３により満たされた複数のウェル４０を含む組織培養容器１において、底部材２０及び周壁部材３０を組み合わせた状態で、外容器１０から分離することによっても、間隙４２を通じて、複数のウェル４０の各々の第２空間４１内の培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を排出することができる。すなわち組織培養容器１によれば、組織Ｔを各々が収容している複数のウェル４０内の培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３の交換を短時間で一度に行うことが可能である。また複数のウェル４０の各々に収容された組織Ｔに対して、均一な条件で培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３による処理が可能である。

更に、組織培養容器１を用いた培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３による処理の終了後に底部材２０と周壁部材３０をそれぞれ外容器１０から分離すると、ウェル４０は解体され、複数の組織Ｔは、外容器１０の第１空間１３に放出されるため、複数の組織Ｔを一度に回収することが可能である。

ウェル４０における間隙４２は、ウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の少なくとも一部と、ウェル周壁部３１との間に形成されている。間隙４２は、培養対象の組織Ｔが通過できない幅であればよい。例えば間隙４２の幅は、培養対象の組織Ｔの幅の５０％以下の幅であることが好ましい。

図１～１０に示す例に係る組織培養容器１では、ウェル４０における間隙４２は、ウェル底部２１の周縁２１ａと、ウェル周壁部３１の下端３１ａとの間に、ウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の全体にわたり形成されており、かつ、その幅は均一である。この構成によれば次の効果が奏される。すなわち、外容器１０、底部材２０及び周壁部材３０が組み合わされ、第１空間１３及び第２空間４１が培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３により満たされた組織培養容器１は、全体をどの方向に傾斜させても、培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を第１空間１３及び第２空間４１から排出することが可能である。

また、複数のウェル４０の各ウェル４０における間隙４２は、組織培養容器１の平面視において、各ウェル４０のウェル底部２１に対して周方向の同じ位置に形成されていることが好ましく、この場合、ウェル４０における間隙４２は、ウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の一部のみに形成されていてもよい。組織培養容器１の全体を、各ウェル４０における間隙４２の位置が下方となるように傾斜させれば、培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を第１空間１３及び第２空間４１から排出することができる。

また、複数のウェル４０の各ウェル４０における間隙４２の幅は、図１～１０に示す例の組織培養容器１のように、ウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の全体にわたり均一であってもよいし、ウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の位置により連続的に及び／又は段階的に異なっていてもよい。複数のウェル４０の各ウェル４０における間隙４２の幅がウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の位置により位置により異なる組織培養容器１によれば、組織培養容器１の全体を傾斜させて培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を第１空間１３及び第２空間４１から排出する場合に、傾斜させる方向を変化させることにより、第２空間４１からの培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３の排出速度を変化させることが可能である。

図１１に、ウェル４０における間隙４２がウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の一部のみに形成されており、かつ、間隙４２の幅が、ウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の位置により連続的に異なっている以外は、図１～１０と同様の特徴を備える組織培養容器１の例を示す。図１１に示す例では、ウェル底部２１の周縁２１ａに、ウェル周壁部３１の下端３１ａに向けて突出した凸部２１ｂが設けられており、凸部２１ｂの高さが、ウェル底部２１の周縁２１ａの周方向の位置により連続的に異なっている。凸部２１ｂの最も突出した部分がウェル周壁部３１の下端３１ａと接触し、この部分には間隙４２は存在しない。凸部２１ｂの高さが低い部分ほど、ウェル底部２１の周縁２１ａとウェル周壁部３１の下端３１ａとの間の間隙４２の幅が広い。

本明細書において「間隙」とは、各ウェル内の第２空間と第１空間との間での液体の通過を許容する開孔を指す。図１～１０に示す例に係る組織培養容器１における各ウェル４０の間隙４２は、それぞれ、１つの連続した開孔である。しかし、図示の実施形態とは異なり、隣接した複数の開孔を含む間隙も本明細書における「間隙」の一例である。隣接した複数の開孔からなる間隙としては、第１空間と第２空間とを仕切るように網目、柵等の、隣接する複数の開孔を有する部材が配置された、ウェル底部とウェル周壁部との間の間隙が例示できる。

外容器１０の第１空間１３に貯留された培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３は、間隙４２を通じて、複数のウェル４０の各々の第２空間４１に流入し第２空間４１を満たすことができる。更に、外容器１０の第１空間１３に貯留された培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を、組織培養容器１全体を傾斜させることにより又は培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を吸引することにより排出すると、間隙４２を通じて、複数のウェル４０の各々の第２空間４１内の培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を同時に排出することができる。また、外容器１０内で第２空間４１が培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３により満たされた複数のウェル４０を含む組織培養容器１において、底部材２０及び周壁部材３０を組み合わせた状態で、外容器１０から分離することによっても、間隙４２を通じて、複数のウェル４０の各々の第２空間４１内の培養液Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３を排出することができる。

底部材２０は更に第１係合部２３を備える。一方で、外容器１０は、外容器周壁部１２の上端部１２ａに、底部材２０の第１係合部２３と係合して底部材２０を位置決めする第３係合部１４を備える。第１係合部２３は、好ましくは、図示する例のように、ウェル底部連結部２２を介して連結された複数のウェル底部２１の一部から、外容器周壁部１２の第３係合部１４に向けて突出した、複数のアーム状の係合部である。第３係合部１４は、好ましくは、図示する例のように、外容器１０の外容器周壁部１２の上端部１２ａに形成された係合凹部である。

周壁部材３０は更に第２係合部３３を備える。一方で、外容器１０は、外容器周壁部１２の上端部１２ａに、周壁部材３０の第２係合部３３と係合して周壁部材３０を位置決めする第４係合部１５を備える。第２係合部３３は、好ましくは、図示する例のように、ウェル周壁部連結部３２を介して連結された複数のウェル周壁部３１の一部から、外容器周壁部１２の第４係合部１５に向けて突出した、複数のアーム状の係合部である。第４係合部１５は、好ましくは、図示する例のように、外容器１０の外容器周壁部１２の上端部１２ａに形成された係合凹部である。

図２に示すように、外容器１０の第１空間１３に、底部材２０が、外容器１０の第３係合部１４と、底部材２０の第１係合部２３との係合により位置決めされ収容される。更に、外容器１０の第１空間１３に、周壁部材３０が、外容器１０の第４係合部１５と、周壁部材３０の第２係合部３３との係合により位置決めして収容され収容される。その結果、間隙４２が形成された複数のウェル４０が形成される。底部材２０の第１係合部２３、周壁部材３０の第２係合部３３、外容器１０の第３係合部１４及び第４係合部１５のそれぞれの形状及び相互の係合状態は、複数のウェル底部材２１及び複数のウェル周壁部材３１の、外容器１０の第１空間１３内における位置、及び、間隙４２の幅に応じて適宜調節されている。

図２に示すように、外容器１０、底部材２０及び周壁部材３０が組み合わされた組織培養容器１を用いて、複数のウェル４０にそれぞれ組織Ｔを収容し培養する。複数のウェル４０内で培養中の組織Ｔを上方から顕微鏡で観察するとき、各ウェル４０のウェル底部２１及び外容器１０の外容器底部１１が、ポリスチレン等の樹脂材料により構成されていると、樹脂材料の自家蛍光が観察の支障になる場合がある。そこで、各ウェル４０のウェル底部２１及び外容器１０の外容器底部１１は、自家蛍光を有していないガラス材料により構成されていることが好ましい。
続いて、図２～１０を参考に、第１実施形態に係る組織培養容器１を用いて、組織Tとして腸オルガノイドを処理する手順について説明する。

腸オルガノイドとしては、典型的には、特許文献１で記載された腸オルガノイドであり、より具体的には、胚性幹細胞及び／又は人工多能性幹細胞に由来し、空洞を内包する構造を有し、長軸方向の長さが５ｍｍ以上であることを特徴とする腸オルガノイドである。特許文献１に記載の腸オルガノイドは、より好ましくは、内胚葉系細胞、外胚葉系細胞及び中胚葉系細胞を含み、外表面に腸上皮細胞を含む。内胚葉系細胞、外胚葉系細胞及び中胚葉系細胞を含み、外表面に腸上皮細胞を含む腸オルガノイドは、外側にある物質を、外表面の腸上皮細胞を介して空洞内に吸収することができる。また、特許文献１に記載の腸オルガノイドにおいて、外表面の腸上皮細胞が更にトランスポーター陽性であるとき、トランスポーターを介した物質の取り込みが可能となるため更に好ましい。すなわち、トランスポーター陽性の腸上皮細胞を含む腸オルガノイドは、腸と類似した物質吸収能を有する。前記腸オルガノイドは、より好ましくは、外表面に、微絨毛、陰窩の発達が認められる。

上記特徴を有する腸オルガノイドは、内腔に外部から物質を能動的に取り込む能力を有する一方で、能動的に取り込む対象でない物質に対しては内腔への侵入を阻止する能力（バリア性）を有することが好ましい。仮に、内腔を取り囲む細胞層が十分に発達しておらず、前記細胞層に開孔が形成されている等の理由でバリア性が十分でない腸オルガノイドは、能動的に取り込む対象でない物質を非特異的に内腔に吸収する。そこで本明細書では、複数の腸オルガノイドのなかから、バリア性が十分でない腸オルガノイドと、バリア性を有する正常な腸オルガノイドを判別する方法を開示する。

バリア性が十分でない腸オルガノイドと、正常な腸オルガノイドとを判別する方法は、好ましくは、
複数のウェルを含む基材における前記複数のウェルの各ウェルに、被検腸オルガノイドを第１の培養液とともに収容する工程１、
工程１の後に、前記各ウェル内の第１の培養液を、色素を含む第２の培養液に交換し、前記被検腸オルガノイドを、前記第２の培養液中で培養する工程２、
工程２の後に、前記各ウェル内の第２の培養液を、第３の培養液に交換し、前記被検腸オルガノイドを、前記第３の培養液中で洗浄する工程３、並びに、
工程３の後に、前記色素により染色された前記被検腸オルガノイドをバリア性が十分でない腸オルガノイドと判別し、前記色素により染色されていない前記被検腸オルガノイドを正常な腸オルガノイドと判別する工程４
を含む。

工程４は、好ましくは、前記色素により染色された前記被検腸オルガノイドを選択的に除去する工程４－１、及び、前記色素により染色されていない前記被検腸オルガノイドのみを選択的に回収する工程４－２の少なくとも一方、より好ましくは、工程４－１及び工程４－２の両方を含む。
前記色素としては、可視光線または紫外光の吸収放出を起こす、細胞毒性のない水溶性色素を用いることができる。前記色素の具体例としては、ブロモフェノールレッド、ブロモチモールブルー、ニュートラルレッド、フェノールフタレイン等のｐＨ７．４付近で有色を呈するｐＨ指示薬、フラボノイド、アントシアニン等の生物色素が例示できる。

工程１～４を含む、バリア性が十分でない腸オルガノイドと、正常な腸オルガノイドとを判別する前記方法は、好ましくは、「複数のウェルを含む基材」として、図１に示す、第１実施形態に係る組織培養容器１を用いることが好ましい。この方法の一例を図２～１０を参照して説明する。

まず、図２に示すように、外容器１０、底部材２０及び周壁部材３０を組み合わせた組織培養容器１の複数のウェル４０の第２空間４１の各々に、被検腸オルガノイドＴを１つずつ収容する。このとき外容器１０の第１空間１３には第１の培養液Ｌ１が貯留されており、第１の培養液Ｌ１は、間隙４２を通過して、複数のウェル４０の各々が内包する第２空間４１も満たす。以上が工程１である。

続いて図３に示すように、底部材２０と周壁部材３０とを、被検腸オルガノイドＴを収容した複数のウェル４０を形成した状態を保持したまま、外容器１０から引き揚げる。複数のウェル４０の第２空間４１内の第１の培養液Ｌ１は、間隙４２を通じて外容器１０内に排出される。外容器１０内の第１の培養液Ｌ１を除去する。
続いて図４に示すように、外容器１０の第１空間１３に、色素を含む第２の培養液Ｌ２を貯留する。

続いて図５に示すように、色素を含む第２の培養液Ｌ２を貯留した外容器１０に、被検腸オルガノイドＴを収容した複数のウェル４０を形成した底部材２０と周壁部材３０との組み合わせを、再び設置し、被検腸オルガノイドＴを、色素を含む第２の培養液Ｌ２に浸し、第２の培養液Ｌ２中で培養する。この工程が工程２である。

図３～４に示す、底部材２０と周壁部材３０とを外容器１０から引き揚げて外容器１０中の培養液を入れ替える工程の代わりに、図２に示す外容器１０と底部材２０と周壁部材３０との位置関係を維持したまま、第１の培養液Ｌ１を外容器１０の第１空間１３から除去し、続いて第２の培養液Ｌ２を外容器１０の第１空間１３に貯留して、図２に示す段階から図５に示す段階に移行することもできる。

工程２での培養時間（染色時間）は色素の種類や濃度に応じて適宜調節できる。例えば色素としてフェノールレッドを用いる場合、３時間程度が例示できる。工程２を経て、色素により染色されていない被検腸オルガノイドＴ１と、色素により染色された被検腸オルガノイドＴ２が生じる。

工程２での培養後に、図６に示すように、底部材２０と周壁部材３０とを、被検腸オルガノイドＴ１、Ｔ２を収容した複数のウェル４０を形成した状態を保持したまま、外容器１０から引き揚げる。複数のウェル４０の第２空間４１内の第２の培養液Ｌ２は、間隙４２を通じて外容器１０内に排出される。
続いて図７に示すように、外容器１０内の第２の培養液Ｌ２を除去する。

続いて図８に示すように、第３の培養液Ｌ３を貯留した外容器１０に、被検腸オルガノイドＴ１、Ｔ２を収容した複数のウェル４０を形成した状態の底部材２０と周壁部材３０とを、再び設置し、被検腸オルガノイドＴ１、Ｔ２を、第３の培養液Ｌ３中で洗浄する。この工程が工程３である。第３の培養液Ｌ３は、被検腸オルガノイドＴ１、Ｔ２の表面に付着した前記色素を洗浄できる培養液であればよく、好ましくは、無色透明な培養液である。

図６～７に示す、底部材２０と周壁部材３０とを外容器１０から引き揚げて外容器１０中の培養液を入れ替える工程の代わりに、図５に示す外容器１０と底部材２０と周壁部材３０との位置関係を維持したまま、第２の培養液Ｌ２を外容器１０の第１空間１３から除去し、続いて第３の培養液Ｌ３を外容器１０の第１空間１３に貯留して、図５に示す段階から図８に示す段階に移行することもできる。

工程３の後に、色素により染色された被検腸オルガノイドＴ２をバリア性が十分でない腸オルガノイドと判別し、色素により染色されていない被検腸オルガノイドＴ１を正常な腸オルガノイドと判別する。この工程が工程４である。

工程４は、好ましくは、図９に示すように、色素により染色された被検腸オルガノイドＴ２を、それを含むウェル４０から選択的に除去することを含む。この工程が工程４－１の具体例である。

工程４は更に、工程４－１により被検腸オルガノイドＴ２を除去した後に、図１０に示すように、周壁部材３０を取り外して、外容器１０の第１空間１３内に、色素により染色されていない正常な被検腸オルガノイドＴ１をまとめて回収することができる。この工程が工程４－２の具体例である。

このように、工程１～４を含む、バリア性が十分でない腸オルガノイドと、正常な腸オルガノイドとを判別する方法を、組織培養容器１を用いて実施することは次の点で有利である。

第一に、通常のマルチウェルプレートを用いて各ウェル内の培地を交換する場合と比較して、第１の培養液Ｌ１から第２の培養液Ｌ２への交換、及び、第２の培養液Ｌ２から第３の培養液Ｌ３への交換を、短時間に行うことができる。また、全てのウェルについてほぼ同じタイミングで培地の交換を完了することができる。このため複数のウェル４０の各々に収容された複数の被検腸オルガノイドＴに、穏やかで均一な条件で染色処理を施すことが可能となる。

第二に、複数のウェル４１の各々に収容された、色素により染色されていない正常な被検腸オルガノイドＴ１を、外容器１０から周壁部材３０を取り外し（場合によっては更に底部材２０を取り外し）て、複数のウェル４１を解体することで、外容器１０の第１空間１３内に、をまとめて回収することができる。通常のマルチウェルプレートを用いて各ウェル内の正常な被検腸オルガノイドＴ１を回収する場合、各ウェル内の被検腸オルガノイドＴ１を個別に回収する必要があり、短時間の回収が難しく、被検腸オルガノイドＴ１にダメージが加わる可能性があったが、組織培養容器１を用いることでこれらの問題点が解決できる。

本開示に係る組織培養容器１は培養液の交換を速やかに行うことができるため、複数の組織Ｔを同条件で一度に短時間処理する方法において特に有用である。フェノールレッドは、通常はｐＨ指示薬として用いられている。フェノールレッドを含む培養液が空気と接触すると容易に変色することから、工程１～４を含む、バリア性が十分でない腸オルガノイドと、正常な腸オルガノイドとを判別する前記方法において、フェノールレッドを色素として用いる場合には、複数の腸オルガノイドＴを、短時間かつ均一な条件でフェノールレッドを含む培養液により処理する必要がある。本開示に係る組織培養容器１は、このような用途に特に適している。

本開示に係る組織培養容器１は、工程１～４を含む、バリア性が十分でない腸オルガノイドと、正常な腸オルガノイドとを判別する方法のほかに、複数のウェル内の培地の全量交換を短時間で行うことが可能な利点を活かした様々な用途に利用することができる。例えば、薬物等により組織Ｔが影響を受ける過程を小刻みに検証する試験、ｐＨや光の影響を受けやすい化合物を用いた試験に組織培養容器１を利用することができる。組織培養容器１はまた、複数の組織Ｔを同条件で一度に処理する様々な方法に利用することができる。例えば、複数の組織Ｔを、毒物を含む培養液で処理して、前記毒物に対して耐性又は感受性のある組織Ｔを判定する方法や、複数の組織Ｔを、吸収が望まれる物質を含む培養液で処理して、前記物質を吸収する能力のある組織Ｔを判別する方法等において、組織培養容器１を用いることができる。

＜第１実施形態の変形例１＞
本開示の第１実施形態に係る組織培養容器１の変形例１として、図１２及び図１３に示す蓋体５０を更に備える組織培養容器１が挙げられる。

第１実施形態の変形例１の組織培養容器１において、蓋体５０は、外容器１０の第１空間１３の開口を覆い、かつ、外容器１０から分離可能である。

第１実施形態の変形例１の組織培養容器１は更に、
底部材２０が、第５係合部２４を更に備え、
周壁部材３０が、第６係合部３４を更に備え、
蓋体５０が、底部材２０の第５係合部２４と係合して底部材２０を保持する第７係合部５１と、周壁部材３０の第６係合部３４と係合して周壁部材３０を保持する第８係合部５２とを備える。

図１２及び図１３に示す第１実施形態の変形例１の組織培養容器１において、底部材２０の第５係合部２４は、第１係合部２３の先端側に設けられ、蓋体５０の第７係合部５１に向け突出した係合爪である。

図１２及び図１３に示す第１実施形態の変形例１の組織培養容器１において、周壁部材３０の第６係合部３４は、第２係合部３３の先端側に設けられ、蓋体５０の第８係合部５２に向け突出した係合爪である。

図１２に示すように、外容器１０、底部材２０、周壁部材３０及び蓋体５０を組み合わせた第１実施形態の変形例１の組織培養容器１の複数のウェル４０の第２空間４１の各々に、組織Ｔを１つずつ収容する。このとき外容器１０の第１空間１３には培養液Ｌが貯留されており、培養液Ｌは、間隙４２を通過して、複数のウェル４０の各々が内包する第２空間４１も満たす。

図１２に示す状態の培養液Ｌと組織Ｔを収容した第１実施形態の変形例１の組織培養容器１において、培養液Ｌを別の培養液に交換する場合、図１３に示すように、蓋体５０を外容器１０から引き揚げる。このとき、底部材２０の第５係合部２４と、蓋体５０の第７係合部５１との係合、並びに、周壁部材３０の第６係合部３４と、蓋体５０の第８係合部５２との係合により、蓋体５０とともに、底部材２０及び周壁部材３０が、組織Ｔを収容した複数のウェル４０を形成した状態を保持したまま、外容器１０から引き揚げられることとなる。複数のウェル４０の第２空間４１内の培養液Ｌは、間隙４２を通じて外容器１０内に排出される。図１３に示す状態から、外容器１０の第１空間１３内の培養液Ｌを他の培養液に交換し、続いて、蓋体５０とともに、組織Ｔを収容した複数のウェル４０を形成した底部材２０と周壁部材３０との組み合わせを、外容器１０に再び設置することで、組織Ｔを新たな培養液に浸すことができる。

このように、第１実施形態の変形例１の組織培養容器１によれば、底部材２０及び周壁部材３０を蓋体５０と一体に外容器１０から取り外すこと及び外容器１０に再び設置することが特に容易であり、培養液の交換を短時間で行うことができる。

＜第１実施形態の変形例２＞
本開示の第１実施形態に係る組織培養容器１の変形例２として、底部材２０の第１係合部２３と、外容器１０の第３係合部１４との係合、及び、周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５との係合の少なくとも一方は、各ウェル４０における間隙４２の幅を変化させることができるように調節可能である例が挙げられる。第１実施形態の変形例２の組織培養容器１によれば、複数のウェル４０の各々の間隙４２の幅を変化させることができる。培養しようとする組織Ｔのサイズに応じて適した間隙４２の幅を選択することができる。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第１の例は、
底部材２０の第１係合部２３と、外容器１０の第３係合部１４の少なくとも一方が、底部材２０の、周壁部材３０に対する位置を調節できるよう、加工可能である、及び／又は、
周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５の少なくとも一方が、周壁部材３０の、底部材２０に対する位置を調節できるよう、加工可能である、
組織培養容器１である。

ここで「加工可能である」とは、底部材２０の第１係合部２３、外容器１０の第３係合部１４、周壁部材３０の第２係合部３３、又は、外容器１０の第４係合部１５が、切削や変形により不可逆的に加工可能であるか、或いは、変形やアタッチメントの取り付けにより可逆的に加工可能であることを指す。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第１の例では、底部材２０の第１係合部２３、外容器１０の第３係合部１４、周壁部材３０の第２係合部３３、又は、外容器１０の第４係合部１５を加工することで、係合位置を変化させ、間隙４２を調節する。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第２の例は、
底部材２０の第１係合部２３と、外容器１０の第３係合部１４とは、底部材２０が周壁部材３０に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、
及び／又は、
周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５とは、周壁部材３０が底部材２０に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、組織培養容器１である。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第２の例によれば、組織Ｔの成長による寸法変化に伴って、間隙４２の幅を適宜調節可能である。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第２の例では、底部材２０の第１係合部２３、外容器１０の第３係合部１４、周壁部材３０の第２係合部３３、又は、外容器１０の第４係合部１５が、多段状の突起又は凹部であることができる。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第３の例は、
底部材２０を２以上備え、
２以上の底部材２０は、それぞれ、外容器１０の第３係合部１４と係合して、底部材２０を、周壁部材３０に対し異なる位置に位置決めする第１係合部２３を備える、組織培養容器１である。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第３の例によれば、培養しようとする組織Ｔの寸法に合わせて適切な幅の間隙４２が形成されるよう、２以上の底部材２０のなかから適切なものを選択することができる。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第４の例は、
底部材２０の第１係合部２３と、外容器１０の第３係合部１４との間に、取り外し可能に介在して、底部材２０の第１係合部２３と、外容器１０の第３係合部１４との間の間隔を調節することにより、底部材２０の、周壁部材３０に対する位置を調節する、第１スペーサー部材、及び／又は、
周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５との間に、取り外し可能に介在して、周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５との間の間隔を調節することにより、周壁部材３０の、底部材２０に対する位置を調節する、第２スペーサー部材６０
を更に備える
組織培養容器１である。

第２スペーサー部材６０を備える、第１実施形態の変形例２の第４の例に係る組織培養容器１を図１５及び１６に示す。図１５及び１６に示す例では、第２スペーサー部材６０は幅が先細りになった先端部６１を有する。図１５に示す、周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５とが直接係合した状態の組織培養容器１では、ウェル４０における間隙４２は狭い。図１６に示すように、第２スペーサー部材６０の先端部６１を、周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５との間に挿入して介在させることにより、周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５との間隔が広がり、前記間隔の広がりに応じて、周壁部材３０の全体が上方に持ち上げられ、ウェル底部２１の周縁２１ａと、ウェル周壁部３１の下端３１ａとの間の距離、すなわち、ウェル４０における間隙４２の幅が広がる。周壁部材３０の第２係合部３３と外容器１０の第４係合部１５との間への、第２スペーサー部材６０の先端部６１の挿入の深さを調節することにより、ウェル４０における間隙４２の幅を調節することが可能である。
図１５及び１６に示す、第２スペーサー部材６０を備える、第１実施形態の変形例２の第４の例に係る組織培養容器１を用いることで、例えば以下のようなスフェロイド培養が可能になる。まず、図１５に示すように、第２スペーサー部材６０を用いずに、周壁部材３０の第２係合部３３と外容器１０の第４係合部１５とが直接係合するように外容器１０、底部材２０及び周壁部材３０を組み合わせて、間隙４２が、細胞Ｃの寸法以下（例えば１０μｍ以下）の複数のウェル４０を備える組織培養容器１を形成する。そして組織培養容器１の第１空間１３及び第２空間４１にスフェロイド培養に必要な培養液Ｌを満たし、各ウェル４０内の第２空間４１に、細胞Ｃを播種する。この状態で培養を行い、細胞ＣからスフェロイドＴを調製する。図１６に示すように、第２スペーサー部材６０の先端部６１を、周壁部材３０の第２係合部３３と、外容器１０の第４係合部１５との間に挿入して介在させることにより、ウェル４０における間隙４２の幅を広げる。第２スペーサー部材６０の介在後の間隙４２の幅を、所望の寸法以上に成長したスフロイド組織Ｔは通過しないが、前記所望の寸法未満のスフェロイド及びスフェロイドを形成していない細胞Ｃは通過する幅（例えば４５０μｍ以下）に調整することで、所望の寸法以上に成長したスフェロイドＴを含むウェル４０内にはスフェロイドＴが残り、その他のウェル４０からは、前記所望の寸法未満のスフェロイド及びスフェロイドを形成していない細胞Ｃが、間隙４２を通過して外容器１０の第１空間１３内に排出される。続いて、図６及び７の例と同様に、底部材２０と周壁部材３０とを、スフェロイドＴを収容した複数のウェル４０を形成した状態を保持したまま、外容器１０から引き揚げる。続いて、図示しないが、外容器１０内の、所望の寸法未満のスフェロイド及び細胞Ｃを含む培養液Ｌを廃棄し、必要に応じて別の液体（例えば凍結保存液）に置換する。その後に、スフェロイドＴを収容した複数のウェル４０を形成した状態の底部材２０と周壁部材３０との組み合わせを、前記別の液体を含む外容器１０に戻し、更に、周壁部材３０と底部材２０とを順に外容器１０から取り外してウェル４０を解体し、前記別の液体を含む外容器１０中に、所望の寸法以上のスフェロイドＴのみを回収することができる。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第５の例は、
周壁部材３０を２以上備え、
２以上の周壁部材３０は、それぞれ、外容器１０の第４係合部１５と係合して、周壁部材３０を、底部材２０に対し異なる位置に位置決めする第２係合部３３を備える、組織培養容器１である。

第１実施形態の変形例２の組織培養容器１の第４の例によれば、培養しようとする組織Ｔの寸法に合わせて適切な幅の間隙４２が形成されるよう、２以上の周壁部材３０のなかから適切なものを選択することができる。

＜第１実施形態の変形例３＞
本開示の第１実施形態に係る組織培養容器１の変形例３として、図示しないが、
周壁部材３０の第２係合部３３が、底部材２０の第１係合部２３と係合して、周壁部材３０の底部材２０に対する位置を位置決めするよう形成されており、
底部材２０の第１係合部２３と、外容器１０の第３係合部１４との係合、及び、底部材２０の第１係合部２３と周壁部材３０の第２係合部３３との係合の少なくとも一方は、各ウェル４０における間隙４２の幅を変化させることができるように調節可能である例が挙げられる。
第１実施形態の変形例３の組織培養容器１によれば、複数のウェル４０の各々の間隙４２の幅を変化させることができる。培養しようとする組織Ｔのサイズに応じて適した間隙４２の幅を選択することができる。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第１の例は、
底部材２０の第１係合部２３と、外容器１０の第３係合部１４の少なくとも一方が、底部材２０の、周壁部材３０に対する位置を調節できるよう、加工可能である、及び／又は、
底部材２０の第１係合部２３と、周壁部材３０の第２係合部３３の少なくとも一方が、周壁部材３０の、底部材２０に対する位置を調節できるよう、加工可能である、
組織培養容器１である。

ここで「加工可能である」とは、底部材２０の第１係合部２３、外容器１０の第３係合部１４、又は、周壁部材３０の第２係合部３３が、切削や変形により不可逆的に加工可能であるか、或いは、変形やアタッチメントの取り付けにより可逆的に加工可能であることを指す。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第１の例では、底部材２０の第１係合部２３、外容器１０の第３係合部１４、又は、周壁部材３０の第２係合部３３を加工することで、係合位置を変化させ、間隙４２を調節する。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第２の例は、
底部材２０の第１係合部２３と、外容器１０の第３係合部１４とは、底部材２０が周壁部材３０に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、
及び／又は、
底部材２０の第１係合部２３と、周壁部材３０の第２係合部３３とは、周壁部材３０が底部材２０に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、組織培養容器１である。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第２の例によれば、組織Ｔの成長による寸法変化に伴って、間隙４２の幅を適宜調節可能である。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第２の例では、底部材２０の第１係合部２３、外容器１０の第３係合部１４、又は、周壁部材３０の第２係合部３３が、多段状の突起又は凹部であることができる。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第３の例は、
底部材２０を２以上備え、
２以上の底部材２０は、それぞれ、外容器１０の第３係合部１４と係合して、底部材２０を、周壁部材３０に対し異なる位置に位置決めする第１係合部２３を備える、組織培養容器１である。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第３の例によれば、培養しようとする組織Ｔの寸法に合わせて適切な幅の間隙４２が形成されるよう、２以上の底部材２０のなかから適切なものを選択することができる。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第４の例は、
周壁部材３０を２以上備え、
２以上の周壁部材３０は、それぞれ、底部材２０の第１係合部２３と係合して、周壁部材３０を、底部材２０に対し異なる位置に位置決めする第２係合部３３を備える、組織培養容器１である。

第１実施形態の変形例３の組織培養容器１の第４の例によれば、培養しようとする組織Ｔの寸法に合わせて適切な幅の間隙４２が形成されるよう、２以上の周壁部材３０のなかから適切なものを選択することができる。

＜第１実施形態の変形例４＞
本開示の第１実施形態に係る組織培養容器１の変形例４として、図１７及び図１８に示すように、
第１周壁部材３０－１及び第２周壁部材３０－２の２個の周壁部材３０を備え、
第１周壁部材３０－１が備える複数のウェル周壁部の各々である第１ウェル周壁部３１－１の内径は、第２周壁部材３０－２が備える複数のウェル周壁部の各々である第２ウェル周壁部３１－２の外径よりも大きく、第１周壁部材３０－１の第１ウェル周壁部３１－１内に、第２周壁部材３０－２の第２ウェル周壁部３１－２が挿入されるように、第１周壁部材３０－１及び第２周壁部材３０－２が取り外し可能に組み合わされ、
各ウェル４０は、ウェル底部２１の１つと、第１ウェル周壁部３１－１及び第２ウェル周壁部３１－２の組み合わせの１つとにより形成されており、
各ウェル４０の第２空間４１は、ウェル底部２１の１つ、及び、当該ウェル底部２１の１つの周縁から立設した、第１ウェル周壁部３１－１及び第２ウェル周壁部３１－２の組み合わせの１つにより画定されており、
各ウェル４０において、第１ウェル周壁部３１－１の下端３１－１ａからウェル底部２１までの距離（ウェル４０の深さ方向の距離）は、第２ウェル周壁部３１－２の下端３１－２ａからウェル底部２１までの距離（ウェル４０の深さ方向の距離）よりも大きい、
組織培養容器１の例が挙げられる。

この変形例４に係る組織培養容器１の機能について図１７及び図１８を参照して説明する。図１７に示す組織培養容器１は、第１周壁部材３０－１及び第２周壁部材３０－２を、第１周壁部材３０－１の第１ウェル周壁部３１－１内に、第２周壁部材３０－２の第２ウェル周壁部３１－２が挿入されるように重ね合わせた状態では、個々のウェル４０が有する間隙４２の幅は、第２ウェル周壁部３１－２の下端３１－２ａからウェル底部２１までのウェル４０の深さ方向の距離であるため、比較的小さい。図１７に示す組織培養容器１から、第２周壁部材３０－２のみを取り外すと、図１８に示すように、個々のウェル４０が有する間隙４２の幅は、第１ウェル周壁部３１－１の下端３１－１ａからウェル底部２１までのウェル４０の深さ方向の距離であるため、比較的大きい。すなわち、この変形例４に係る組織培養容器１を、第１周壁部材３０－１及び第２周壁部材３０－２からなる全ての周壁部材を重ね合わせた状態で組織培養を開始し、組織が成長した段階で第２周壁部材３０－２を取り外し更に培養を継続することで、組織の成長段階に応じてウェル４０の間隙４２の幅を段階的に広げながら組織培養を行うことが可能となる。周壁部材を３以上用いれば、間隙４２の幅を更に細かく調節することが可能である。Nの範囲は２以上であればよく、例えば２～５が例示できる。

第１実施形態の変形例４に係る組織培養容器１を用いることで、例えば以下のようなスフェロイド培養が可能になる。まず、図１７に示すように、第１周壁部材３０－１及び第２周壁部材３０－２を組み合わせた周壁部材３０と、外容器１０及び底部材２０を組み合わせて、間隙４２が、細胞Ｃの寸法以下（例えば１０μｍ以下）の複数のウェル４０を備える組織培養容器１を形成する。そして組織培養容器１の第１空間１３及び第２空間４１にスフェロイド培養に必要な培養液Ｌを満たし、各ウェル４０内の第２空間４１に、細胞Ｃを播種する。この状態で培養を行い、細胞ＣからスフェロイドＴを調製する。続いて、図１８に示すように、第２周壁部材３０－２を取り外すことにより、ウェル４０における間隙４２の幅を広げる。第２周壁部材３０－２を取り外した後の間隙４２の幅を、所望の寸法以上に成長したスフロイド組織Ｔは通過しないが、前記所望の寸法未満のスフェロイド及びスフェロイドを形成していない細胞Ｃは通過する幅（例えば４５０μｍ以下）に調整することで、所望の寸法以上に成長したスフェロイドＴを含むウェル４０内にはスフェロイドＴが残り、その他のウェル４０からは、前記所望の寸法未満のスフェロイド及びスフェロイドを形成していない細胞Ｃが、間隙４２を通過して外容器１０の第１空間１３内に排出される。続いて、図６及び７の例と同様に、底部材２０と周壁部材３０とを、スフェロイドＴを収容した複数のウェル４０を形成した状態を保持したまま、外容器１０から引き揚げる。続いて、図示しないが、外容器１０内の、所望の寸法未満のスフェロイド及び細胞Ｃを含む培養液Ｌを廃棄し、必要に応じて別の液体（例えば凍結保存液）に置換する。その後に、スフェロイドＴを収容した複数のウェル４０を形成した状態の底部材２０と周壁部材３０との組み合わせを、前記別の液体を含む外容器１０に戻し、更に、周壁部材３０と底部材２０とを順に外容器１０から取り外してウェル４０を解体し、前記別の液体を含む外容器１０中に、所望の寸法以上のスフェロイドＴのみを回収することができる。

＜第２実施形態に係る組織培養容器＞
本開示の第２実施形態に係る組織培養容器の具体的な態様について図１４を参照して説明する。第２実施形態に係る組織培養容器において、第１実施形態に係る組織培養容器との共通の特徴及び機能を有する構成については同じ符号を付し、説明を省略する。

図１４（Ａ）は、本開示の第２実施形態に係る組織培養容器１の平面模式図である。図１４（Ｂ）は、本開示の第２実施形態に係る組織培養容器１の断面模式図である。

第２実施形態に係る組織培養容器１は、
外容器底部１１と、外容器底部１１の周縁１１ａから立設した外容器周壁部１２とを備え、外容器底部１１及び外容器周壁部１２により画定される第１空間１３を内包する外容器１０と、
第１空間１３に分離可能に収容される、連結された複数のウェル周壁部３１を備える、周壁部材３０と、
を備え、
外容器底部１１と、複数のウェル周壁部３１とは、複数の第２空間４１をそれぞれが内包する、複数のウェル４０を形成し、
複数のウェル４０の各ウェル４０の第２空間４１は、外容器底部１１の複数の部分１１ｂの１つ、及び、部分１１ｂの１つの周縁１１ｂａから立設するウェル周壁部３１の１つにより画定されており、
各ウェル４０において、外容器底部１１の部分１１ｂの周縁１１ｂａの周方向の少なくとも一部と、ウェル周壁部３１との間に、各ウェル４０内の第２空間４１と、第１空間１３とを連絡する間隙４２が形成されている、
ことを特徴とする。

第２実施形態に係る組織培養容器１において、外容器１０の第１空間１３に貯留された培養液は、間隙４２を通じて、複数のウェル４０の各々の第２空間４１に流入し第２空間４１を満たすことができる。更に、外容器１０の第１空間１３に貯留された培養液を、組織培養容器１全体を傾斜させることにより又は培養液を吸引することにより排出すると、間隙４２を通じて、複数のウェル４０の各々の第２空間４１内の培養液を同時に排出することができる。すなわち第２実施形態に係る組織培養容器１によれば、組織Ｔを各々が収容している複数のウェル４０内の培養液の交換を短時間で一度に行うことが可能である。また複数のウェル４０の各々に収容された組織Ｔに対して、均一な条件で培養液による処理が可能である。

更に、第２実施形態に係る組織培養容器１を用いた培養液による処理の終了後に周壁部材３０を外容器１０から分離すると、ウェル４０は解体され、複数の組織Ｔは、外容器１０の第１空間１３に放出されるため、複数の組織Ｔを一度に回収することが可能である。

ウェル４０における間隙４２は、ウェル４０の第２空間４１の底をなす外容器底部１１の部分１１ｂの周縁１１ｂａの周方向の少なくとも一部と、ウェル周壁部３１との間に形成されている。間隙４２は、培養対象の組織Ｔが通過できない幅であればよい。例えば間隙４２の幅は、培養対象の組織Ｔの幅の５０％以下の幅であることが好ましい。

第２実施形態に係る組織培養容器１において、複数のウェル４０内で培養中の組織Ｔを上方から顕微鏡で観察するとき、各ウェル４０の底をなす外容器１０の外容器底部１１が、ポリスチレン等の樹脂材料により構成されていると、樹脂材料の自家蛍光が観察の支障になる場合がある。そこで、外容器１０の外容器底部１１は、自家蛍光を有していないガラス材料により構成されていることが好ましい。

第２実施形態に係る組織培養容器１の他の特徴、使用方法、及び変形例は、第１実施形態に係る組織培養容器１に関して説明した通りである。

Claims (23)

1. 組織を培養するための組織培養容器であって、
   外容器底部と、前記外容器底部の周縁から立設した外容器周壁部とを備え、前記外容器底部及び前記外容器周壁部により画定される第１空間を内包する外容器と、
   前記第１空間に分離可能に収容される、連結された複数のウェル底部を備える、底部材と、
   前記第１空間に分離可能に収容される、連結された複数のウェル周壁部を備える、周壁部材と、
   を備え、
   前記複数のウェル底部と、前記複数のウェル周壁部とは、複数の第２空間をそれぞれが内包する、複数のウェルを形成し、
   前記複数のウェルの各ウェルの前記第２空間は、前記ウェル底部の１つ、及び、前記ウェル底部の１つの周縁から立設した前記ウェル周壁部の１つにより画定されており、
   前記各ウェルにおいて、前記ウェル底部の周縁の周方向の少なくとも一部と、前記ウェル周壁部との間に、前記各ウェル内の前記第２空間と、前記第１空間とを連絡する間隙が形成されている、
   ことを特徴とする、組織培養容器。
2. 前記各ウェルにおける前記間隙は、前記各ウェルの前記ウェル底部に対して周方向の同じ位置に形成されている、請求項１に記載の組織培養容器。
3. 前記各ウェルにおける前記間隙の幅が、前記各ウェルの前記ウェル底部の周縁の周方向の位置により連続的に及び／又は段階的に異なる、請求項１又は２に記載の組織培養容器。
4. 前記底部材は、第１係合部を更に備え、
   前記周壁部材は、第２係合部を更に備え、
   前記外容器は、前記外容器の前記外容器周壁部に、前記底部材の前記第１係合部と係合して前記底部材を位置決めする第３係合部と、前記周壁部材の前記第２係合部と係合して前記周壁部材を位置決めする第４係合部とを備え、
   前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部との係合、及び、前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との係合の少なくとも一方は、前記各ウェルにおける前記間隙の幅を変化させることができるように調節可能である、
   請求項１～３のいずれか１項に記載の組織培養容器。
5. 前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部の少なくとも一方が、前記底部材の、前記周壁部材に対する位置を調節できるよう、加工可能である、及び／又は、
   前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部の少なくとも一方が、前記周壁部材の、前記底部材に対する位置を調節できるよう、加工可能である、
   請求項４に記載の組織培養容器。
6. 前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部とは、前記底部材が前記周壁部材に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、
   及び／又は、
   前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部とは、前記周壁部材が前記底部材に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、
   請求項４に記載の組織培養容器。
7. 前記底部材を２以上備え、
   ２以上の前記底部材は、それぞれ、前記外容器の前記第３係合部と係合して、前記底部材を、前記周壁部材に対し異なる位置に位置決めする前記第１係合部を備える、
   請求項４に記載の組織培養容器。
8. 前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部との間に、取り外し可能に介在して、前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部との間の間隔を調節することにより、前記底部材の、前記周壁部材に対する位置を調節する、第１スペーサー部材、及び／又は、
   前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との間に、取り外し可能に介在して、前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との間の間隔を調節することにより、前記周壁部材の前記底部材に対する位置を調節する、第２スペーサー部材
   を更に備える
   請求項４に記載の組織培養容器。
9. 前記周壁部材を２以上備え、
   ２以上の前記周壁部材は、それぞれ、前記外容器の前記第４係合部と係合して、前記周壁部材を、前記底部材に対し異なる位置に位置決めする前記第２係合部を備える、
   請求項４に記載の組織培養容器。
10. 前記底部材は、第１係合部を更に備え、
    前記周壁部材は、前記底部材の前記第１係合部と係合して前記周壁部材を位置決めする第２係合部を更に備え、
    前記外容器は、前記外容器の前記外容器周壁部に、前記底部材の前記第１係合部と係合して前記底部材を位置決めする第３係合部を備え、
    前記底部材の前記第１係合部と、前記外容器の前記第３係合部との係合、及び、前記底部材の前記第１係合部と前記周壁部材の前記第２係合部との係合の少なくとも一方は、前記各ウェルにおける前記間隙の幅を変化させることができるように調節可能である、
    請求項１～３のいずれか１項に記載の組織培養容器。
11. 第１周壁部材から第Ｎ周壁部材までのＮ個の前記周壁部材を備え、
    第ｎ－１周壁部材が備える前記複数のウェル周壁部の各々である第ｎ－１ウェル周壁部の内径は、第ｎ周壁部材が備える前記複数のウェル周壁部の各々である第ｎウェル周壁部の外径よりも大きく、前記第ｎ－１周壁部材の前記第ｎ－１ウェル周壁部内に、前記第ｎ周壁部材の前記第ｎウェル周壁部が挿入されるように、前記第１周壁部材から前記第Ｎ周壁部材が取り外し可能に組み合わされ、
    Ｎは２以上の整数であり、ｎは２以上Ｎ以下の整数であり、
    前記各ウェルは、前記ウェル底部の１つと、第１ウェル周壁部から第Ｎウェル周壁部までの組み合わせの１つとにより形成されており、
    前記各ウェルの前記第２空間は、前記ウェル底部の１つ、及び、前記ウェル底部の１つの周縁から立設した、前記第１ウェル周壁部から前記第Ｎウェル周壁部までの組み合わせの１つにより画定されており、
    前記各ウェルにおいて、前記第ｎ－１ウェル周壁部の下端から前記ウェル底部までの距離は、前記第ｎウェル周壁部の下端から前記ウェル底部までの距離よりも大きい、
    請求項１～３のいずれか１項に記載の組織培養容器。
12. 前記外容器を覆うことができる蓋体を更に備え、
    前記底部材は、第５係合部を更に備え、
    前記周壁部材は、第６係合部を更に備え、
    前記蓋体は、前記底部材の前記第５係合部と係合して前記底部材を保持する第７係合部と、前記周壁部材の前記第６係合部と係合して前記周壁部材を保持する第８係合部とを備える、
    請求項１～１１のいずれか１項に記載の組織培養容器。
13. 前記外容器の前記外容器底部と、前記底部材の前記ウェル底部とが、ガラス材料により構成される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の組織培養容器。
14. 組織を培養するための組織培養容器であって、
    外容器底部と、前記外容器底部の周縁から立設した外容器周壁部とを備え、前記外容器底部及び前記外容器周壁部により画定される第１空間を内包する外容器と、
    前記第１空間に分離可能に収容される、連結された複数のウェル周壁部を備える、周壁部材と、
    を備え、
    前記外容器底部と、前記複数のウェル周壁部とは、複数の第２空間をそれぞれが内包する、複数のウェルを形成し、
    前記複数のウェルの各ウェルの前記第２空間は、前記外容器底部の複数の部分の１つ、及び、前記部分の１つの周縁から立設した前記ウェル周壁部の１つにより画定されており、
    前記各ウェルにおいて、前記外容器底部の前記部分の周縁の周方向の少なくとも一部と、前記ウェル周壁部との間に、前記各ウェル内の前記第２空間と、前記第１空間とを連絡する間隙が形成されており、
    前記各ウェルにおける前記間隙の幅が、前記各ウェルの、前記外容器底部の前記部分の周縁の周方向の位置により連続的に及び／又は段階的に異なる、
    ことを特徴とする、組織培養容器。
15. 前記各ウェルにおける前記間隙は、前記各ウェルの、前記外容器底部の前記部分に対して周方向の同じ位置に形成されている、請求項１４に記載の組織培養容器。
16. 前記周壁部材は、第２係合部を更に備え、
    前記外容器は、前記外容器の前記外容器周壁部に、前記周壁部材の前記第２係合部と係合して前記周壁部材を位置決めする第４係合部とを備え、
    前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との係合の少なくとも一方は、前記各ウェルにおける前記間隙の幅を変化させることができるように調節可能である、
    請求項１４又は１５に記載の組織培養容器。
17. 前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部の少なくとも一方が、前記周壁部材の、前記外容器底部に対する位置を調節できるよう、加工可能である、
    請求項１６に記載の組織培養容器。
18. 前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部とは、前記周壁部材が前記外容器底部に対し複数の異なる位置に位置決めされるよう、複数の位置で係合することができる、
    請求項１６に記載の組織培養容器。
19. 前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との間に、取り外し可能に介在して、前記周壁部材の前記第２係合部と、前記外容器の前記第４係合部との間の間隔を調節することにより、前記周壁部材の前記外容器底部に対する位置を調節する、第２スペーサー部材
    を更に備える
    請求項１６に記載の組織培養容器。
20. 前記周壁部材を２以上備え、
    ２以上の前記周壁部材は、それぞれ、前記外容器の前記第４係合部と係合して、前記周壁部材を、前記外容器底部に対し異なる位置に位置決めする前記第２係合部を備える、
    請求項１６に記載の組織培養容器。
21. 第１周壁部材から第Ｎ周壁部材までのＮ個の前記周壁部材を備え、
    第ｎ－１周壁部材が備える前記複数のウェル周壁部の各々である第ｎ－１ウェル周壁部の内径は、第ｎ周壁部材が備える前記複数のウェル周壁部の各々である第ｎウェル周壁部の外径よりも大きく、前記第ｎ－１周壁部材の前記第ｎ－１ウェル周壁部内に、前記第ｎ周壁部材の前記第ｎウェル周壁部が挿入されるように、前記第１周壁部材から前記第Ｎ周壁部材が取り外し可能に組み合わされ、
    Ｎは２以上の整数であり、ｎは２以上Ｎ以下の整数であり、
    前記各ウェルは、前記外容器底部の複数の部分の１つと、第１ウェル周壁部から第Ｎウェル周壁部までの組み合わせの１つとにより形成されており、
    前記各ウェルの前記第２空間は、前記外容器底部の複数の部分の１つ、及び、前記部分の１つの周縁から立設した、前記第１ウェル周壁部から前記第Ｎウェル周壁部までの組み合わせの１つにより画定されており、
    前記各ウェルにおいて、前記第ｎ－１ウェル周壁部の下端から前記外容器底部までの距離は、前記第ｎウェル周壁部の下端から前記外容器底部までの距離よりも大きい、
    請求項１４又は１５に記載の組織培養容器。
22. 前記外容器を覆うことができる蓋体を更に備え、
    前記周壁部材は、第６係合部を更に備え、
    前記蓋体は、前記周壁部材の前記第６係合部と係合して前記周壁部材を保持する第８係合部を備える、
    請求項１４～２１のいずれか１項に記載の組織培養容器。
23. 前記外容器の前記外容器底部が、ガラス材料により構成される、請求項１４～２２のいずれか１項に記載の組織培養容器。