JP7481695B2 - 種子の発芽促進用液体及びそれを用いた種子の発芽促進方法 - Google Patents
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Description
ここで、種子を湿潤させる方法としては、静置状態で活性酸素種及びナノ粒子触媒を含有する水に、種子を浸す方法や、静置状態で活性酸素種及びナノ粒子触媒を含有する水を、種子に噴霧したり、散布したりする方法を含む。
このため、具体的には、以下の事項が推奨される。
・静置状態で活性酸素種及びナノ粒子触媒を含有する水を生成するための原料となる水として、イオン交換水等の精製水を用いる。
・静置状態で活性酸素種及びナノ粒子触媒を含有する水を、生成したり、貯蔵したりするために使用する器機や器具、栽培過程で使用する器機や器具には、ガラス製や金属製等の有機物でないものを、例えば、中性洗剤で洗浄後イオン交換水で複数回濯ぐ、次亜塩素酸ナトリウム水溶液で洗浄後イオン交換水で複数回濯ぐ等の方法で洗浄することによって有機物が残存しない状態で使用する。
これにより、有機物によって、活性酸素種の消滅を抑制し、種子の発芽促進効果が失われることを防止することができる。
ここで、水を循環させることは必須ではなく、例えば、プラズマ発生機構を複数設けたり、電極対を複数組設置したりすることによって、より処理効率を高めることができれば、1パス処理でもよい。
パルス電圧によって生起される放電形態は、グロー放電であることが好ましく、電極31の消耗成分に起因する金属や金属酸化物、液中プラズマによって生成される水に含まれる不純物に起因する硫化物、塩化物等の無機化合物等からなる、結晶、準結晶、アモルファス等の形態のナノ粒子触媒の合成を、低温で、かつ、エネルギ効率よく行うことができる。すなわち、ナノ粒子触媒は、電極31の成分のナノ粒子であり、電極が金属の場合、ナノ粒子ができた瞬間は金属ナノ粒子となり、金属の種類によって、そのナノ粒子が酸化されたり、水に塩素や硫黄が含まれているとナノ粒子が塩化されたり硫化されたりする(不純物に含まれる物質によってその物質との化合物になる場合がある。)。
ここで、プラズマ発生機構3内の電極31付近の水の流速は約10m/sであり、5m/s以上が望ましい。
電極31は、水の流れに対して垂直方向に、対向させて配置することが好ましいが、プラズマが生成できる限りにおいて、ハの字等の配置形態を採用することができる。
電極31の材料には、タングステン、銅、鉄、銀、金、白金のほか、アルミニウム、スカンジウム、チタン、バナジウム、クロム、マンガン、コバルト、ニッケル、亜鉛、ガリウム、ゲルマニウム、イットリウム、ジルコニウム、モリブデン、テクネチウム、ルテニウム、ロジウム、パラジウム、カドミウム、インジウム、錫、アンチモン、ランタノイド、ハフニウム、タンタル、レニウム、オスミウム、イリジウム、タリウム、ビスマス、ボロニウム等の金属、カーボン、導電性ダイヤモンド、それらの合金や複合材料(メッキやドライコーティング等の手法で薄膜で被覆したものを含む。)や酸化物(電極31の表面が水と反応したものを含む。)等の導体材料を、用途に応じて、任意に選択することができる。対向させて配置する電極31で、金と銀など、用いる材料や電極サイズを異ならせることもできる。
電極31の形状は、円柱のほか、角柱、楕円柱、円錐、角錘であってもよい。電極31は、1対あれば問題ないが、より処理効率を上げるために2対以上設置してもよい。また、プラズマ発生機構は1セットあれば問題ないが、より処理効率を上げるために2セット以上設置してもよい。
電極31の片側は接地してもよいし、接地しなくてもよい。接地しない方が放電路は電極間に限定されるため、安全である。
また、必要に応じて、種子の発芽促進用液体の生成装置に設けた冷却手段、例えば、撹拌装置2に設けたジャケット冷却手段(図示省略)を稼働することによって、水を50℃以下で処理するようにすることができる。
そして、この種子の発芽促進用液体は、種子の発芽促進用液体中に存在する長寿命の活性酸素種(スーパーオキシドアニオンラジカル(・O2 -)、ヒドロペルオキシラジカル(HOO・)、過酸化水素(H2O2))による殺菌作用に加えて、発芽促進用液体中に存在する過酸化水素(H2O2)が、発芽促進用液体中に存在するナノ粒子触媒の触媒作用によって、活性酸素種の中で最も酸化力の高いヒドロキシルラジカル(・OH)等の活性酸素種を持続的に生成させることにより、より増強され、種子の発芽促進効果が長期間持続するものとなる。
このため、種子の発芽促進用液体は、種子の発芽促進用液体中に存在する過酸化水素及びナノ粒子触媒の量が重要であり、本発明によって、原料は水だけで簡単、高速、かつ、大量に同時に生成することができる。
図2からも明らかなように、ヒドロキシルラジカル(・OH)等の活性酸素種は、種子の発芽促進効果に加えて、有機物(微生物(ウイルス、細菌、真菌、原虫)等を含む。)の大きな分解(殺菌)作用を有するため、併せて、種子の消毒効果も期待できる。
表1に、種子の発芽促進用液体の生成装置の処理条件(好ましい範囲)を、図3に、電極の材質ごとの処理時間とpH、導電率、過酸化水素の濃度及び電極消耗量との関係を、それぞれ示す。
・初期(「プラズマ処理前」を意味する。他の項目も同じ。)の導電率は低い方がプラズマ生成率(印加したパルス数に対するプラズマが生成したパルス数の割合。)が高くなり、効率よく種子の発芽促進用液体を生成することができる。
・初期CODが高いと、生成される活性酸素種が消費されてしまい好ましくない。
・初期導電率、初期pH、初期CODが好ましい範囲内であれば、他の混雑物は影響しない。このため、処理原料となる水としては、イオン交換水(本明細書において、「DIW」という場合がある。)等の精製水を用いることが好ましいが、これに限定されるものではない。
・撹拌装置の回転数は高い方がキャビテーション気泡が増えるので、プラズマ生成率が高くなり、効率よく種子の発芽促進用液体を生成することができる。
・印加電圧は低すぎるとプラズマが点灯せず、高くなるとプラズマ生成率が高くなるが、高すぎると好ましいグロー放電からアーク放電に移行してしまい好ましくない。
・パルス幅は短すぎるとプラズマが点灯せず、長くなるとプラズマ生成率が高くなるが、長すぎるとアーク放電に移行してしまい好ましくない。
・繰り返し周波数は高いほどプラズマ生成率が高くなり、安定してプラズマが生成できる。
・パルス電圧の極性は、両極性でも正極性でも負極性でもよい。
・電極材質は、水中で安定な導体であればよい。金属でも合金でもカーボンでもよい。
・種子の発芽促進用液体に不純物として電極成分等のナノ粒子触媒が混入するため、使用方法によって材料を選ぶ必要が生じる場合がある。
・電極直径は細すぎると電界が集中してプラズマが点灯しやすいが、アーク放電に移行しやすくなり、太すぎるとプラズマが点灯しにくくなる。
・電極のギャップ長は短すぎるとアーク放電に移行しやすくなる、長すぎるとプラズマが点灯しにくくなる。
・処理時間は短すぎると生成される活性酸素種及びナノ粒子触媒が少なくなり、長すぎると生成される活性酸素種及びナノ粒子触媒によって導電率が高くなり、プラズマ生成率が低下する。処理時間は、通常は、2-10分程度、好ましくは、3-8分程度、より好ましくは、5分程度である。ここで、種子の発芽促進用液体の生成装置は、撹拌装置の回転数が7200rpmの場合、1秒間に250mLの水が装置内を1回循環するようにされている。
次に、以下の試験方法で、モデルとしてカイワレ大根の種子を用いた発芽試験を行った。
(1)種子及び前処理(後述の種子の発芽試験(2)及び(3)も同じ。)
カイワレ大根の種子を使用し、種子が細菌に汚染されている場合、種子の発芽や成長に影響を与える可能性があるため、種子を殺菌した。種子の殺菌は独立行政法人林木育種センターのマニュアルに従った。供試植物としてカイワレ大根の種子(中原採種場、発芽率85%)を使用した。種子100個を1.0%の次亜塩素酸ナトリウム水溶液100mLで5分間浸透滅菌し、イオン交換水で5回洗浄した。その後、乾燥室(DKM300、Yamato)内にて40℃で17時間乾燥させた。実験で使用するビーカーやシャーレ等は、有機物が残存しない状態にして使用するために、水道水で洗浄し次亜塩素酸ナトリウム水溶液200ppmに15分間浸漬させた。その後、水道水に2分間浸漬させ、チオ硫酸ナトリウム水溶液20ppmに2分間浸漬し、乾燥室(DKM300、Yamato)にて40℃で乾燥させた。また、殺菌試験後にパックテスト(WAK-CIO・DP、kyoritsu Chemica-Cheak Lab)を用いて種子や器具の残留塩素が0.1ppm未満となることを確認した。
(2)発芽条件
種子を発芽用液体(水)に、種子が空気に触れるよう約半分ほど1日間浸漬した後、その時点の発芽率を測定した。
(3)種子の発芽促進用液体の生成装置の操作
種子の発芽促進用液体の生成装置に精製水(イオン交換水)260mLを投入し、表3に示す処理条件で種子の発芽促進用液体の生成装置を作動時間tp=5分間作動させたものを試料水とした。試料水を滅菌合成樹脂製容器に採水し、所定時間tS放置した。所定時間放置後(種子を浸漬させるまでの経過時間tS=1min-4weeks)の試料水4mLをガラス製のビーカー(φ42mm、高さ50mm)に採取し、その中に種子を浸漬した。
なお、対照として精製水(イオン交換水)4mLをガラス製のビーカーに採取し、その中に種子を浸漬した。
・精製水(イオン交換水)(DIW)と比較して、CBP処理水(CBPTW)は、発芽率(発芽促進率)が最大20%向上する。
・使用するCBP処理水の放置時間tS(CBP処理水を生成してからの経過時間)が長くなる程、発芽率(発芽促進率)が低下し、CBP処理水の効果が失われていく。図7に示す試験結果では、4週間で効果がほぼ失われるため、それより早く(できるだけ早く)使用することが望ましいことが分かる。
このことから、水に含まれる活性酸素種の量が発芽率(発芽促進率)に影響している(CBP処理水の放置時間が長くなる程、活性酸素種の量が減少する。)と推定できる。
なお、このことは、図8に示す、種子を浸漬する発芽用液体(水)として、精製水(イオン交換水)のほか、過酸化水素水を用いた比較試験の結果からも推認できる。
次に、以下の手順で、成長試験を行った。
種子の発芽試験で発芽した苗を、培地に定植し、その間の茎の長さ及び太さを測定し、3日後に採取し、根の長さ及び葉の面積を測定し、乾燥し、7日後に乾燥重量を測定した。
ここで、培地は、ロックウール(JAN130031、大和プラスチック)(30mm×30mm×30mm)に電動ドリルで径3mm、深さ5mmで対角線を四等分し等間隔に5つの穴をあけた。その後、穴をあけたロックウール4つをガラスシャーレに設置したものを培地とした。そして、発芽率を24時間測定した後、シャーレに置いた4つのロックウールのそれぞれの穴に1粒ずつ種子を定植した。定植後、イオン交換水100mLをシャーレに入れロックウールに十分給水させた後、シャーレの底から高さ10mmになるまでイオン交換水を入れ、暗室に放置した。そして1日間隔で成長の様子を撮影し、イオン交換水をシャーレの底から高さ10mmに調整した。また、カイワレ大根同士が接触すると成長の妨げとなるため3日目からはLEDプランター(greenteria、Deagostini)でカイワレ大根にLED光を12時間当て茎を垂直に伸ばすようにした。
・精製水(イオン交換水)と比較して、CBP処理水は、成長試験においても、発芽率(発芽促進率)の良好な結果を引き継いで、苗が良好に成長することを確認した。
次に、以下の試験方法で、異なる発芽環境下での発芽試験を行った。
具体的には、(1)種子に溶液を噴霧させる方法と、(2)種子を溶液に浸漬させる方法の2通りの方法で発芽試験を行った。
キッチンペーパー(スーパーグリッドエンポス、エリエール)(22cm×22.5cm)を二つ折りにし、四隅を4cm山折りにしてキッチンペーパーの厚さを均一にし、ガラスシャーレ(φ90mm、高さ20mm)の中に入れたものを苗床とした。
苗床に縦5個、横4個で等間隔に20個の種子を並べた。
イオン交換水及び表3の条件で処理したCBP処理水(経過時間tS=1min)を霧吹きで6mL種子に噴霧しシャーレに蓋をした。なお、CBP処理水は、作製後、装置からビーカーに移し、その後霧吹きに入れた。カイワレ大根の種子は暗発芽種子であるため苗床は25(±2)℃、湿度30(±5)%の暗室に1日間設置し、各条件下における発芽率を30分間隔でインターバル撮影のアプリ(HD Camera Lite)を用いて測定した。試料の個数は1つの苗床に種子20個とし、苗床を5個用意することで計100個とした。
ガラスビーカー(φ42mm、高さ50mm)に種子20個入れイオン交換水、表3の条件で処理したCBP処理水(種子を浸漬させるまでの経過時間tS=1min-4weeks)を4mL霧吹きで種子に振りかけ、種子が空気に触れるよう約半分ほど浸漬させた状態で同様に発芽率を測定した。
・(2)種子を溶液に浸漬させる方法と異なり、(1)のシャーレにキッチンペーパーを敷き、種子に溶液を噴霧させる方法では、CBP処理水は、精製水(イオン交換水)と有意差がなく、種子の発芽促進効果がないことを確認した。これは、キッチンペーパーには有機物(材質そのもの+結着剤)が含まれており、その有機物によってCBP処理水が有する種子の発芽促進効果が早期に失われたものと考えられる。また、このことから、CBP処理水が有する種子の発芽促進効果を発揮させるためには、有機物がない環境で使用することが重要であり、具体的には、CBP処理水が接触する、CBP処理水の生成過程や貯蔵過程で使用する器機や器具、栽培過程で使用する器機や器具には、ガラス製や金属製等の有機物でないものを、次亜塩素酸ナトリウム水溶液等の洗浄液を用いて洗浄することによって有機物が残存しない状態で使用することが重要であることが分かる。
次に、以下の試験方法で、モデルとしてカイワレ大根の種子を用いた発芽試験を行った。
(1)発芽条件
種子を発芽用液体(水)に、種子が空気に触れるよう約半分ほど1日間浸漬した後、その時点の発芽率を測定した。
(2)種子の発芽促進用液体の生成装置の操作
種子の発芽促進用液体の生成装置に精製水(イオン交換水)260mLを投入し、表9に示す処理条件で種子の発芽促進用液体の生成装置を作動時間tp=1-30分間作動させたものを試料水とした。試料水を滅菌合成樹脂製容器に採水し、所定時間tS放置した。所定時間放置後(種子を浸漬させるまでの経過時間tS=1min)の試料水15mLをガラス製のシャーレ(φ92mm、高さ15mm)に採取し、その中に種子を浸漬した。
・精製水(イオン交換水)(DIW)と比較して、CBP処理水(CBPTW)は、発芽率(発芽促進率)が向上するが、24h後の発芽率の結果から、特に、処理時間tp=5min付近で発芽率(発芽促進率)のピークが出現する。このことから、処理時間tpは、5minを中心に、3~10min程度が好ましいといえる。
・苗の成長度合い(葉の面積)の試験結果も、同様の傾向(種子の発芽が促進されることによって、苗の成長度合いも速くなる。)を示し、処理時間tpは、5minを中心に、3~10min程度が好ましいといえる。
2 撹拌装置
21 ケーシング
22 ロータ
23 モータ
3 プラズマ発生機構
31 電極
32 パルス電源
4 管路
Claims (3)
- 水にキャビテーションを起こさせ、それによって発生する水蒸気を主成分とする気泡を含む水中で、電極間にパルス電圧を印加するようにしたプラズマ発生機構によりプラズマを発生させることによって生成した、静置状態で活性酸素種及びナノ粒子触媒を含有する水からなることを特徴とする種子の発芽促進用液体。
- 水にキャビテーションを起こさせ、それによって発生する水蒸気を主成分とする気泡を含む水中で、電極間にパルス電圧を印加するようにしたプラズマ発生機構によりプラズマを発生させることによって生成した、静置状態で活性酸素種及びナノ粒子触媒を含有する水を用いて、種子を湿潤させることを特徴とする種子の発芽促進方法。
- 前記静置状態で活性酸素種及びナノ粒子触媒を含有する水を、有機物に触れない環境下で使用することを特徴とする請求項2に記載の種子の発芽促進方法。
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