JP7328073B2 - Ｃｌｓｐ及び／又はｔｉｎｃｒ発現促進剤 - Google Patents
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Description
本発明は、ＣＬＳＰ及び／又はＴＩＮＣＲ発現促進剤、及びかかる発現促進剤を有効成分とする皮膚老化防止剤に関する。
皮膚の表皮はおもに角化細胞と呼ばれる細胞から構成されている。表皮の最内層である基底層で増殖した角化細胞は外側（皮膚表面側）に押し出されるように移動してゆき、その移動に伴って有棘層、顆粒層、および角質層へと順に分化していく。すなわち表皮は、分化の程度が異なる角化細胞の複数の層から構成されている。角化細胞の増殖すなわち細胞分裂は、通常は基底層（表皮の最深部にある単層およびそれに隣接する基底上層を含む）においてのみ起こり、有棘層より外側では細胞分裂は起こらずに細胞分化のみが進行する。
Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ－Ｌｉｋｅ Ｓｋｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＬＳＰ）は、主に皮膚で産生されるカルシウム結合タンパク質である。非特許文献１は、ＣＬＳＰは増殖中の角化細胞においては発現が検出されないが、角化細胞分化の後期、すなわちロリクリンの発現が既に開始された時点以降である分化６～７日目以降において発現されることを記載している。ロリクリンは角化細胞が顆粒層まで移動した段階で発現が開始されるタンパク質である。同様に、非特許文献２も、ＣＬＳＰタンパク質は基底層には不在であって、分化が進んだ表皮外層に多く存在することを記載している。非特許文献２はまた、ｓｈＲＮＡによりＣＬＳＰを欠如させても基底層の細胞増殖には影響がなかったことを記載している。従って、ＣＬＳＰは角化細胞の最終分化（角化）に関与していると考えられている。
特許文献１は、ＣＬＳＰの全長ポリペプチドが記載されており、「例えば、化粧品では、老化の治療、特に、皮膚の老化の治療における、紫外線への暴露に関連した皮膚のダメージの治療における、通常、あるいは、病理的な上皮の増殖の機能不全、あるいは、上皮の分化不全（乾燥肌、角質増殖症、錯角化症、乾癬、魚鱗癬、新生組織形成等々）を調整するために、本発明のタンパク質を利用することができる」ことが開示されている。
また、長鎖ノンコーディングＲＮＡの一種であるＴＩＮＣＲは、ＣＬＳＰｍＲＮＡを安定化することが知られていた（非特許文献２）。
ここで、マジョラム抽出物の有効性は各種検討されており、XVII型コラーゲン産生促進作用（特許文献２）、プロトンポンプ機能促進作用（特許文献３）、活性酸素ラジカル除去作用（特許文献４）、熱ショックタンパク質の発現誘導作用（特許文献５）、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用（特許文献６）、育毛作用（特許文献７）、血小板凝集抑制作用（特許文献８）等数多くの生理活性が知られている。
また、フキタンポポ抽出物の有効性も各種検討されており、皮脂分泌促進作用（特許文献９）、キネシン抑制作用（特許文献１０）、基底膜安定化作用（特許文献１１）、活性酸素消去作用（特許文献１２）、リパーゼ阻害作用（特許文献１３）、メラニン生成細胞増殖促進作用（特許文献１４）等数多くの生理活性が知られている。
The Journal Of Biological Chemistry, Vol. 275, No. 17, April 28, pp. 12841-12847, 2000
Genes & Development, 2015, 29:2225-2230
ＴＩＮＣＲの発現及び／又はＣＬＳＰの発現を促進し、皮膚老化防止に有効な植物抽出物を提供することを本発明の課題の一つとする。また、ＴＩＮＣＲの発現及び/又はＣＬＳＰの発現を相乗的に向上させる植物抽出物の組合わせを提供することを課題とする。
本発明の課題を解決する手段は、下記のとおりである。
（１）
マジョラム抽出物を有効成分とするＣＬＳＰ及び／又はＴＩＮＣＲ発現促進剤。
（２）
さらにフキタンポポ抽出物を有効成分とする請求項１記載の発現促進剤。
（３）
請求項１又は請求項２に記載の発現促進剤を有効成分とする皮膚老化防止剤。
（１）
マジョラム抽出物を有効成分とするＣＬＳＰ及び／又はＴＩＮＣＲ発現促進剤。
（２）
さらにフキタンポポ抽出物を有効成分とする請求項１記載の発現促進剤。
（３）
請求項１又は請求項２に記載の発現促進剤を有効成分とする皮膚老化防止剤。
マジョラム抽出物は濃度依存的に、ＣＬＳＰの発現を促進する効果を有する。
マジョラム抽出物は濃度依存的に、ＴＩＮＣＲの発現を促進する効果を有する。
マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を併用することにより、ＣＬＳＰの発現促進効果が相乗的に向上する。
マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を併用することにより、ＴＩＮＣＲの発現促進効果が相乗的に向上する。
マジョラム抽出物は濃度依存的に、ＴＩＮＣＲの発現を促進する効果を有する。
マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を併用することにより、ＣＬＳＰの発現促進効果が相乗的に向上する。
マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を併用することにより、ＴＩＮＣＲの発現促進効果が相乗的に向上する。
以下本発明を実施するための形態を説明する。
本発明で使用するマジョラム抽出物は、マジョラム（学名：Origanum majorana）から得られる抽出物である。使用し得るマジョラムの構成部位としては、例えば、葉部、茎部、花部、蕾部、根茎部、地上部又はこれらの混合物が挙げられるが、好ましくは葉部である。
抽出物を調製する際には、生の植物をそのまま、若しくは乾燥させて用いる。
抽出溶媒としては、メタノール，エタノール，プロパノール，イソプロパノール等の低級アルコール、1,3-ブチレングリコール，プロピレングリコール，ジプロピレングリコール，グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル，プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸エチル，酢酸ブチル等のエステル類、アセトン，エチルメチルケトン等のケトン類などの極性有機溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。
上記溶媒による抽出物は、そのままでも用いることができるが、濃縮，乾固したものを水や極性溶媒に再度溶解したり、或いはそれらの皮膚生理機能向上作用を損なわない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィーによる分画処理を行った後に用いてもよい。また、抽出物を酸、アルカリ、酵素などを用いて加水分解したものを用いてもよい。また保存のため、精製処理の後凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５～３０倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温または還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
例えば、本発明のマジョラム抽出物は、乾燥したマジョラムの葉を８５容量％エタノール水溶液に浸漬後、溶媒を留去し、５０容量％の１，３－ブチレングリコール水溶液にエキス純分として１質量％となるように添加したものを用いることができる。
本発明で使用するフキタンポポ抽出物は、フキタンポポ（学名：Tussilago farfara）から得られる抽出物である。使用し得るフキタンポポの構成部位としては、例えば、全草、葉、茎、花、実、根から選択される１種又は２種以上の部位が挙げられるが、好ましくは葉、茎、及び花から選択される１種又は２種以上、さらに好ましくは花を用いる。
フキタンポポ抽出物の抽出方法としては、上述のマジョラム抽出物と同様である。
例えば、本発明のフキタンポポ抽出物は、乾燥したフキタンポポの花を精製水に浸漬後、溶媒を留去し、２０容量％の１，３－ブチレングリコール水溶液にエキス純分として１質量％となるように添加したものを用いることができる。
本発明の皮膚老化防止剤は、ＣＬＳＰ及び／又はＴＩＮＣＲ発現促進剤を有効成分として含有する。
本発明において上記発現促進剤の皮膚老化防止剤への配合量はそれぞれ、０．００００１～５質量％が好ましい。
本発明の皮膚老化防止剤は、高いＣＬＳＰ及び／又はＴＩＮＣＲ発現促進作用をを有し、高い老化防止効果を発揮する。
本発明の皮膚老化防止剤は、上述の成分の他に、通常の化粧料、医薬部外品に用いられる任意成分を、本発明の効果を阻害しない程度に配合することができる。具体的には、油剤、界面活性剤、増粘剤、防腐剤、香料、保湿剤、抗酸化剤、抗炎症剤、抗菌剤等を挙げることができる。
本発明の皮膚老化防止剤の剤型は、特に限定されず、水系、油系、乳化型等いずれの剤型でもよい。
本発明の皮膚老化防止剤は定法により調製することができる。
本発明の皮膚老化防止剤は、例えば、ローション剤、乳剤、軟膏の剤型で用いることができる。
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、これにより本発明の範囲が限定されるものではない。なお、配合量は特に断りのない限り質量％である。
まず、実施例等に用いる植物抽出物の調製方法を示す。
［マジョラム抽出物］
乾燥したマジョラムの葉を８５容量％エタノール水溶液に浸漬後、溶媒を留去し、５０容量％の１，３－ブチレングリコール水溶液にエキス純分として１質量％となるように添加したものをマジョラム抽出物とした。
乾燥したマジョラムの葉を８５容量％エタノール水溶液に浸漬後、溶媒を留去し、５０容量％の１，３－ブチレングリコール水溶液にエキス純分として１質量％となるように添加したものをマジョラム抽出物とした。
［フキタンポポ抽出物］
乾燥した乾燥したフキタンポポの花を精製水に浸漬後、溶媒を留去し、２０容量％の１，３－ブチレングリコール水溶液にエキス純分として１質量％となるように添加したものをフキタンポポ抽出物とした。
乾燥した乾燥したフキタンポポの花を精製水に浸漬後、溶媒を留去し、２０容量％の１，３－ブチレングリコール水溶液にエキス純分として１質量％となるように添加したものをフキタンポポ抽出物とした。
［ＣＬＳＰ及びＴＩＮＣＲの発現促進作用］
ヒト表皮角化細胞を３×１０５細胞／ウェルの細胞密度にて６ウェルプレートに播種し、ＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地中で一晩培養した。表１に示す抽出物濃度となるように抽出物を添加・溶解した新鮮培地、または抽出物を添加しない新鮮培地（ブランク）で、培地交換を行い、さらに２４時間培養した。その後採取した細胞から、市販のＲＮＡ抽出キットを使用して全ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ合成を行った。ＣＬＳＰまたはＧＡＰＤＨに特異的な下記のプライマーを使用して、サイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲにより発現レベルを定量化した。ＧＡＰＤＨは内部標準として使用した。発現量は、ブランクの発現量を１とした場合の相対値で示した。
ヒト表皮角化細胞を３×１０５細胞／ウェルの細胞密度にて６ウェルプレートに播種し、ＨｕＭｅｄｉａ－ＫＧ２培地中で一晩培養した。表１に示す抽出物濃度となるように抽出物を添加・溶解した新鮮培地、または抽出物を添加しない新鮮培地（ブランク）で、培地交換を行い、さらに２４時間培養した。その後採取した細胞から、市販のＲＮＡ抽出キットを使用して全ＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ合成を行った。ＣＬＳＰまたはＧＡＰＤＨに特異的な下記のプライマーを使用して、サイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲにより発現レベルを定量化した。ＧＡＰＤＨは内部標準として使用した。発現量は、ブランクの発現量を１とした場合の相対値で示した。
ＰＣＲプライマー配列
ＣＬＳＰフォワード：GTTGACACGGATGGAAACG（配列番号1）
ＣＬＳＰリバース：ACTCCTGGAAGCTGATTTCG（配列番号2）
ＴＩＮＣＲフォワード：TGTGGCCCAAACTCAGGGATACAT（配列番号3）
ＴＩＮＣＲリバース：AGATGACAGTGGCTGGAGTTGTCA（配列番号4）
ＧＡＰＤＨフォワード：CCACTCCTCCACCTTTGACG（配列番号5）
ＧＡＰＤＨリバース：CACCCTGTTGCTGTAGCCAA（配列番号6）
ＣＬＳＰフォワード：GTTGACACGGATGGAAACG（配列番号1）
ＣＬＳＰリバース：ACTCCTGGAAGCTGATTTCG（配列番号2）
ＴＩＮＣＲフォワード：TGTGGCCCAAACTCAGGGATACAT（配列番号3）
ＴＩＮＣＲリバース：AGATGACAGTGGCTGGAGTTGTCA（配列番号4）
ＧＡＰＤＨフォワード：CCACTCCTCCACCTTTGACG（配列番号5）
ＧＡＰＤＨリバース：CACCCTGTTGCTGTAGCCAA（配列番号6）
図１及び表１に示した通り、マジョラム抽出物は、濃度依存的にＣＬＳＰの発現量が増加する効果を発揮した。
図２及び表１に示した通り、マジョラム抽出物は、濃度依存的にＴＩＮＣＲの発現量が増加する効果を発揮した。
図３及び表１の試料６に示した通り、マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を併用することにより、それぞれの抽出物を単独で２倍量配合した試料４、試料５と比較して、ＣＬＳＰの発現量が増加し、マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を併用することにより、ＣＬＳＰの発現促進効果が相乗的に向上した。
図４及び表１の試料６に示した通り、マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を併用することにより、それぞれの抽出物を単独で２倍量配合した試料４、試料５と比較して、ＴＩＮＣＲの発現量が増加し、マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を併用することにより、ＴＩＮＣＲの発現促進効果が相乗的に向上した。
［実施例１］乳液
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（１０）精製水 １００とする残部
（１１）アルギニン（１質量％水溶液） ２０．０
（１２）マジョラム抽出物 ０．５
（１３）フキタンポポ抽出物 ０．５
製法：（１）～（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）～（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。冷却後４０℃にて、（１１）～（１３）を順次加え、均一に混合する。
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（１０）精製水 １００とする残部
（１１）アルギニン（１質量％水溶液） ２０．０
（１２）マジョラム抽出物 ０．５
（１３）フキタンポポ抽出物 ０．５
製法：（１）～（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）～（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。冷却後４０℃にて、（１１）～（１３）を順次加え、均一に混合する。
［実施例２］化粧水
（１）エタノール １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 １００とする残部
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）マジョラム抽出物 ０．３
（１０）フキタンポポ抽出物 ０．５
製法：（１）に（２）および（３）を溶解する。さらに（４）～（１０）を順次添加した後、十分に攪拌し、均一に混合する。
（１）エタノール １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 １００とする残部
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）マジョラム抽出物 ０．３
（１０）フキタンポポ抽出物 ０．５
製法：（１）に（２）および（３）を溶解する。さらに（４）～（１０）を順次添加した後、十分に攪拌し、均一に混合する。
［実施例３］クリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（１０）精製水 １００とする残部
（１１）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（１２）マジョラム抽出物 ０．５
（１３）フキタンポポ抽出物 ０．３
製法：（１）～（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）～（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。（１１）を添加して攪拌後、冷却し４０℃にて（１２）、（１３）を加え、均一に混合する。
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（１０）精製水 １００とする残部
（１１）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（１２）マジョラム抽出物 ０．５
（１３）フキタンポポ抽出物 ０．３
製法：（１）～（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）～（１０）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。（１１）を添加して攪拌後、冷却し４０℃にて（１２）、（１３）を加え、均一に混合する。
［実施例４］美容液
（１）精製水 １００とする残部（質量％）
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム（１質量％水溶液） １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）Ｎ－ラウロイル－Ｌ－グルタミン酸
ジ（フィトステリル－２－オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（１０）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（１１）ベヘニルアルコール ０．７５
（１２）ミツロウ １．０
（１３）ホホバ油 １．０
（１４）１，３－ブチレングリコール １０．０
（１５）Ｌ－アルギニン（１０質量％水溶液） ２．０
（１６）マジョラム抽出物 １．０
（１７）フキタンポポ抽出物 １．０
製法：（１）～（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）～（１４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。冷却後５０℃にて（１５）を、４０℃にて（１６）、（１７）を加え、均一に混合する。
（１）精製水 １００とする残部（質量％）
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム（１質量％水溶液） １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）Ｎ－ラウロイル－Ｌ－グルタミン酸
ジ（フィトステリル－２－オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（１０）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（１１）ベヘニルアルコール ０．７５
（１２）ミツロウ １．０
（１３）ホホバ油 １．０
（１４）１，３－ブチレングリコール １０．０
（１５）Ｌ－アルギニン（１０質量％水溶液） ２．０
（１６）マジョラム抽出物 １．０
（１７）フキタンポポ抽出物 １．０
製法：（１）～（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）～（１４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。冷却後５０℃にて（１５）を、４０℃にて（１６）、（１７）を加え、均一に混合する。
［実施例５］水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（質量％）
（２）精製水 １００とする残部
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液） ０．５
（４）グリセリン １０．０
（５）１，３－ブチレングリコール １０．０
（６）エタノール １０．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（８）香料 ０．１
（９）マジョラム抽出物 ０．７
（１０）フキタンポポ抽出物 ０．７
（１１）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 １．０
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）～（１１）を加え、均一に攪拌混合する。
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（質量％）
（２）精製水 １００とする残部
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液） ０．５
（４）グリセリン １０．０
（５）１，３－ブチレングリコール １０．０
（６）エタノール １０．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（８）香料 ０．１
（９）マジョラム抽出物 ０．７
（１０）フキタンポポ抽出物 ０．７
（１１）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 １．０
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）～（１１）を加え、均一に攪拌混合する。
Claims (1)
- マジョラム抽出物とフキタンポポ抽出物を有効成分とするＣＬＳＰ及び／又はＴＩＮＣＲ発現促進剤。
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-
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Non-Patent Citations (2)
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| Natural Plus Sun Stick SPF50+PA++++, Carver Korea, 2017年6月, Mintel GNPD [online]， [検索日 2023.04.12], インターネット<URL:https://www.gnpd.com>, ID#:4922369 |
| Premium Essence, IK Cosmetics, 2016年8月, Mintel GNPD [online]，[検索日 2023.04.12], インターネット<URL:https://www.gnpd.com>, ID#:4228007 |
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