JP6691275B1 - ＦｃεＲＩの発現抑制用組成物及びＦｃεＲＩの発現抑制方法 - Google Patents

Abstract

本発明の目的は、ヒトへの食経験又は摂取経験がありつつも、ｐＤＣによるＦｃεＲＩの発現を抑制する作用を示す物質を有効成分として含有する組成物を提供することにある。上記目的は、ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有する、プラズマサイトイド樹状細胞活性化用組成物などにより解決される。

Description

本発明は、ＦｃεＲＩの発現抑制用組成物及びＦｃεＲＩの発現抑制方法に関する。

近年、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、アナフィラキシー反応、蕁麻疹、食物アレルギーといった、Ｉ型アレルギーに分類されるアレルギー疾患に罹患する者が増えている。

Ｉ型アレルギーでは、まず、花粉及びカビなどのアレルゲン（抗原）が生体内に侵入することにより、該アレルゲンに対応するＩｇＥがＢ細胞によって産生される。産生されたＩｇＥはマスト細胞（肥満細胞）及び好塩基球の表面に発現した高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）と結合する（感作）。

このような感作状態にある中で、再度体内に侵入したアレルゲンは、別々のＦｃεＲＩと結合した２個以上のＩｇＥに結合して、ＩｇＥを介して２個以上のＦｃεＲＩを架橋する（架橋反応）。このとき、マスト細胞及び好塩基球が活性化して脱顆粒が起こり、ヒスタミン、セロトニンといったケミカルメディエーターが放出される。その結果、血管の拡張及び透過性亢進、白血球の遊走などによって、アレルギー症状が現われる。

一方、樹状細胞のうち、プラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）は、細胞表面にＦｃεＲＩを有する。アレルゲンの体内の侵入により、ｐＤＣにおいて架橋反応が生じ得る。ｐＤＣは、樹状形態を有するミエロイド樹状細胞（ｍＤＣ）とは異なり、末梢血中に存在して形質細胞に似た形質を示す。ｐＤＣは、ウイルスなどの外来異物を取り込むなどして刺激を受けると樹状細胞様に分化する。

ｐＤＣが外来異物としてウイルスに応答すると、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）といったＩ型ＩＦＮが大量に産生される。Ｉ型ＩＦＮの抗ウイルス作用によってウイルスの増殖又は複製が阻害され自然免疫が活性化される。

しかし、ｐＤＣ細胞表面において、ＩｇＥ抗体同士がアレルゲンなどを介して架橋反応を生じる場合、ｐＤＣが外来異物を感知するための細胞表面及び細胞膜貫通型のパターン認識受容体であるＴＬＲ（Ｔｏｌｌ ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；トール様受容体）並びにインターフェロン制御因子（ＩＲＦ）の発現が抑制される。この結果として、ｐＤＣによるＩＦＮ−αの生産が抑制される（後述する非特許文献１を参照、該文献の全記載はここに開示として援用される）。

そこで、ｐＤＣへの抗ウイルス作用を期待して、ｐＤＣにおける架橋反応を妨げるためには、ＩｇＥ抗体に高い親和性を示すＦｃεＲＩの発現を抑制することが考えられる。例えば、後述する特許文献１〜３（これらの文献の全記載はここに開示として援用される）には、ＦｃεＲＩ遺伝子の転写を調節するＤＮＡ及び該ＤＮＡを指標としてＦｃεＲＩ遺伝子の発現を抑制する物質をスクリーニングする方法が記載されている。

特許第５１３１６８８号 国際公開第２００４／１８８９２９号 国際公開第１９９９／４６３９３号

Michelle Ann Gill, J Allergy Clin Immunol, April 2012, Vol.129, Number 4, pp.889-901

特許文献１〜３によれば、ＦｃεＲＩ遺伝子の発現抑制物質をスクリーニングすることができる可能性はある。しかし、特許文献１〜３には、そのような物質がスクリーニングして得られたとする記載は無い。実際には、特許文献１〜３に記載のスクリーニング方法によって、ＦｃεＲＩ遺伝子の発現抑制物質を取得することは困難である。

また、ヒトに使用し得る食経験又は摂取経験のある、ＤＣへのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有する物質については、これまでにほとんど知られていない。

そこで、本発明が解決しようとする課題は、ヒトへの食経験又は摂取経験がありつつも、ｐＤＣ細胞表面上に存在するＦｃεＲＩの発現を抑制する作用を示す物質を有効成分として含有する組成物を提供することにある。

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を積み重ねた結果、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）及びペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐ．ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）といったペディオコッカス属乳酸菌が、ｐＤＣへのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有することを見出した。その一方で、ｐＤＣによるＩＦＮ−αの産生を促進しつつも、ＦｃεＲＩの発現抑制作用を示さない乳酸菌が存在することを見出した。このような、ｐＤＣへのＦｃεＲＩの発現抑制作用は、ＩＦＮ−αの産生促進作用と相関関係にはないということは、本発明者らによって初めて見出された非常に驚くべき事実である。

このような事実を基にして、本発明者らは、ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物などを有効成分として含有し、かつ、ｐＤＣへのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有する組成物を創作することに成功した。本発明はこれらの知見及び成功例に基づいて完成するに至った発明である。

したがって、本発明の一態様によれば、以下に示す態様の組成物、方法及び使用が提供される。
［１］ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有する、プラズマサイトイド樹状細胞活性化用組成物。
［２］前記組成物は、プラズマサイトイド樹状細胞へのインターフェロン−αの産生促進作用を有する、［１］に記載の組成物。
［３］前記ペディオコッカス属乳酸菌は、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）及びペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐ．ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）からなる群から選ばれる少なくとも１種のペディオコッカス属乳酸菌である、［１］又は［２］に記載の組成物。
［４］前記組成物は、前記有効成分と同量のラクトバチルス・ペントーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ） Ｋ１１３株を用いるときよりも高い、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有する、［１］〜［３］のいずれか１項に記載の組成物。
［５］前記組成物は、抗ウイルス用組成物、抗感染症用組成物、抗アレルギー用組成物、抗花粉症用組成物及び抗喘息用組成物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抗疾患用組成物である、［１］〜［４］のいずれか１項に記載の組成物。
［６］［１］〜［５］のいずれか１項に記載の組成物を含有する飲食品用組成物。
［７］乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の成分とプラズマサイトイド樹状細胞とを含む被験溶液をインキュベートし、及び該成分を含まず、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞を含む対照溶液をインキュベートする工程；
インキュベート後の被験溶液及び対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量を測定する工程；及び、
測定された被験溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量が対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量よりも小さい場合に、前記成分はプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する有効成分であると判定する工程
を含む、プラズマサイトイド樹状細胞を活性化するための乳酸菌のスクリーニング方法。
［８］乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の成分とプラズマサイトイド樹状細胞とを含む被験溶液をインキュベートし、及び該成分を含まず、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞を含む対照溶液をインキュベートする工程；
インキュベート後の被験溶液及び対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のインターフェロン−αの産生量及びプラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量を測定する工程；及び、
測定された被験溶液におけるインターフェロン−αの産生量が対照溶液におけるインターフェロン−αの産生量よりも大きく、かつ、測定された被験溶液におけるＦｃεＲＩの発現量が対照溶液におけるＦｃεＲＩの発現量よりも小さい場合に、前記成分はプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する有効成分であると判定する工程
を含む、プラズマサイトイド樹状細胞を活性化するための乳酸菌のスクリーニング方法。
［９］ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効成分を使用して、プラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現を抑制する方法。
［１０］プラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現を抑制するための組成物を製造するためのペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効成分の使用。
［１１］プラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現を抑制するためのペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効成分の使用。

本発明の一態様の組成物は、ｐＤＣへのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有し、さらに該作用に関連して、抗ウイルス効果、抗感染症効果、抗アレルギー効果、抗花粉症効果及び抗喘息効果などを奏することが期待される。

本発明の一態様の組成物で用いられる有効成分は、飲食品の添加物などの使用実績のあるものである。したがって、本発明の一態様の組成物は、安全性が高いものであり、抗ウイルス効果、抗感染症効果、抗アレルギー効果、抗花粉症効果及び抗喘息効果を有する飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして有用であり、経口的又は非経口的な形態で提供することが期待される。

図１は、実施例に記載されているとおりの、ラクトバチルス・ペントーサス Ｋ１３３株（「Ｋ１３３」）、ペディオコッカス・ペントサセウス ＮＲＩＣ９９株（「ＮＲＩＣ９９」）並びにペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ２２６株、Ｋ５３１株、ＪＣＭ８７９７株及びＫ１５株（「Ｋ２２６」、「Ｋ５３１」、「ＪＣＭ８７９７」及び「Ｋ１５」）による、ｐＤＣのＦｃεＲＩの発現相対量の測定結果を示す図である。 図２は、実施例に記載されているとおりの、ＴＬＲ７リガンド、ＴＬＲ８リガンド、ＴＬＲ９リガンド及びペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ１５株（「Ｋ１５」）とともに培養したｐＤＣが産生したＦｃεＲＩのｍＲＮＡの量（相対量）を測定した結果を示す図である。なお、「Ｍｅｄ」はコントロール（乳酸菌非添加時での測定結果）を示す。

以下、本発明の詳細について説明するが、本発明の技術的範囲は本項目の事項によってのみに限定されるものではなく、本発明はその目的を達成する限りにおいて種々の態様をとり得る。

本発明の一態様の組成物は、ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効成分（以下、単に「有効成分」とよぶ場合がある。）を少なくとも含有する。

本発明の一態様の組成物は、含有する有効成分によって、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用又はプラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用及びプラズマサイトイド樹状細胞へのインターフェロン−αの産生促進作用を有し得る。本明細書では、これらの作用を総じて、「有効作用」とよぶ場合がある。本発明の一態様の組成物は、有効作用を有することにより、代表的にはプラズマサイトイド樹状細胞活性化用組成物の態様をとり得る。本発明の別の一態様は、有効成分を使用して、プラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現を抑制する方法である。

本明細書における各用語は、別段の定めがない限り、当業者により通常用いられている意味で使用され、不当に限定的な意味を有するものとして解釈されるべきではない。

例えば、「組成物」との用語は、通常用いられている意味のものとして特に限定されないが、例えば、２種以上の物質が組み合わさってなる物であり、具体的には、有効成分と別の物質とが組み合わさってなるもの、有効成分の２種以上が組み合わさってなるものなどが挙げられ、より具体的には、有効成分の１種以上と固形担体又は溶媒の１種以上とが組み合わさってなる固形組成物及び液性組成物などが挙げられる。

プラズマサイトイド樹状細胞に対する「発現抑制作用」との用語は、遺伝子の発現量を抑制すること、遺伝子産物（タンパク質）の翻訳量を低減すること及び遺伝子産物の産生を阻害するようにプラズマサイトイド樹状細胞を活性化することからなる群から選ばれる少なくとも１種の作用をいう。

プラズマサイトイド樹状細胞に対する「産生促進作用」との用語は、遺伝子の発現量を促進すること、遺伝子産物の翻訳量を増大すること及び遺伝子産物を産生するようにプラズマサイトイド樹状細胞を活性化することからなる群から選ばれる少なくとも１種の作用をいう。

「プラズマサイトイド樹状細胞活性化」との用語は、有効成分により、プラズマサイトイド樹状細胞を有効作用を呈す状態におくことを意味する。

「及び／又は」との用語は、列記した複数の関連項目のいずれか１つ、又は２つ以上の任意の組み合わせ若しくは全ての組み合わせを意味する。

ＦｃεＲＩ（高親和性ＩｇＥ受容体）は、通常知られている意味のものとして特に限定されないが、例えば、プラズマサイトイド樹状細胞及び肥満細胞の表面にあるＩｇＥのＦｃ部に対して高親和性の受容体であるということができる。ＦｃεＲＩには３種類のサブユニットであるα鎖、β鎖及びγ鎖がある。マスト細胞及び好塩基球ではαβγ_２の四量体構造及びαγ_２の三量体構造をとり、プラズマサイトイド樹状細胞などの樹状細胞、単球、好酸球などではαγ_２の三量体構造をとって細胞表面に発現することが知られている。

ＦｃεＲＩのα鎖に結合しているＩｇＥ（ＦｃεＲＩ−ＩｇＥ）の２セット以上に抗原が結合すると、ＦｃεＲＩが抗原によって架橋された形になる。このような架橋により、γ鎖及びβ鎖を通じて、細胞内情報伝達がなされて、プラズマサイトイド樹状細胞及び／又は肥満細胞が活性化される。

インターフェロン（ＩＦＮ）−αは、Ｉ型インターフェロンの一種であり、ウイルスの増殖及び／又は複製を抑制する抗ウイルス作用を有する。また、ＩＦＮ−αは、ウイルスに感染した細胞の増殖抑制作用、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）などの自然免疫に関わる細胞の活性化作用、抗腫傷作用、ウイルス以外の細胞内寄生生物の発育抑制作用などを有する。ＩＦＮ−αはウイルス性肝炎の治療薬として臨床応用されている。

プラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）は、末梢血中に存在して形質細胞に似た形質を示し、外来異物を取り込むなどして刺激を受けると樹状細胞様に分化する細胞である。有効成分は、ｐＤＣに作用して、有効作用をもたらす。

ＦｃεＲＩの発現抑制作用の評価方法は特に限定されず、例えば、後述する実施例に記載があるように、ｐＤＣが発現するＦｃεＲＩの発現量を測定することなどにより評価することができる。

ＦｃεＲＩの発現抑制作用の評価方法の一具体例は、各被験体に由来するｐＤＣと本発明の一態様の組成物とを共培養し、次いで培養後に回収した細胞又は培養上清を被験試料として、細胞表面上のＦｃεＲＩを市販の標識化抗ＦｃεＲＩ抗体を用いて標識した後にフローサイトメトリーなどで標識強度を測定すること、及び／又は細胞若しくは培養上清中のＦｃεＲＩのｍＲＮＡの量を市販のキットを用いて各被験体に由来するｐＤＣのＦｃεＲＩの発現量を測定することを含む方法などが挙げられるが、これに限定されない。共培養の条件は特に限定されず、例えば、ＦｃεＲＩの発現が抑制されず、かつ、ｐＤＣが死滅しないような条件などを挙げることができ、ｐＤＣの維持又は増殖に適した培地、温度、ＣＯ_２濃度、ｐＨなどを採用した培養条件であることが好ましい。

ＦｃεＲＩの発現抑制作用の評価方法における被験体の人数は、個体間差を考慮すれば、２名以上であることが好ましく、３名以上であることがより好ましい。ＦｃεＲＩの発現抑制作用は、各被験体に由来するｐＤＣのＦｃεＲＩの発現量からコントロール（本発明の一態様の組成物を用いない系）を基準として求めた相対値について、被験体間で平均をとって評価する。例えば、被験体Ａ、被験体Ｂ、・・・被験体Ｘに由来するそれぞれのｐＤＣのＦｃεＲＩの発現量であるＤ_Ａ、Ｄ_Ｂ、・・・Ｄ_Ｘを測定し、次いでＤ_Ａ、Ｄ_Ｂ、・・・Ｄ_Ｘからコントロールを基準として相対値であるＲ_Ａ、Ｒ_Ｂ、・・・Ｒ_Ｘを求め、次いでＲ_Ａ、Ｒ_Ｂ、・・・Ｒ_Ｘから平均相対値ＡＲ_{ＡＢ・・・Ｘ}を求めて評価する。

ＦｃεＲＩの発現抑制作用の程度は特に限定されないが、例えば、本発明の一態様の組成物を用いない場合（コントロール）と比べて、ｐＤＣへのＦｃεＲＩの発現量が小さくなると評価される程度である。ただし、ＦｃεＲＩの発現抑制作用の程度は、各被験体に由来するｐＤＣのＦｃεＲＩの発現量のいずれにおいても、コントロールよりも小さい（上記の例でいえば、１＞Ｒ_Ａ、１＞Ｒ_Ｂ、・・・１＞Ｒ_Ｘ）と評価される程度であることが好ましい。

後述する実施例に記載があるとおり、ペディオコッカス属乳酸菌の有するＦｃεＲＩの発現抑制作用は、ラクトバチルス・ペントーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ） Ｋ１１３株の有する作用よりも大きい傾向にあることから、本発明の一態様の組成物におけるＦｃεＲＩの発現抑制作用は、有効成分と同量のラクトバチルス・ペントーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ） Ｋ１１３株を用いる場合と比べて、ｐＤＣによるＦｃεＲＩの発現量が小さくなると評価される程度であることがより好ましい。このより好ましい態様は、上記の例でいえば、本発明の一態様の組成物を用いて得られた平均相対値ＡＲ_{ＡＢ・・・Ｘ}が、本発明の一態様の組成物における有効成分と同量のラクトバチルス・ペントーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ） Ｋ１１３株を用いて得られた平均相対値ＡＲ_{ＡＢ・・・Ｘ}よりも小さくなる程度である。

ペディオコッカス属乳酸菌がペディオコッカス・アシディラクティシである場合は、ＦｃεＲＩの発現抑制作用の程度は、有効成分と同量のペディオコッカス・ペントサセウス ＮＲＩＣ９９株を用いる場合と比べて、ｐＤＣへのＦｃεＲＩの発現量が小さくなると評価される程度であることが好ましい。

ＦｃεＲＩの発現抑制作用の程度は、例えば、２００μｌ中に１×１０^７個のペディオコッカス属乳酸菌と２．５×１０^４個のｐＤＣとを共培養して２４時間後に回収した細胞のＦｃεＲＩの発現量から求めた平均相対値が０．９３以下になる程度であり、０．９０以下になる程度が好ましく、０．８５以下になる程度がより好ましく、０．８３以下になる程度がさらに好ましく、０．８１以下になる程度がなおさらに好ましい。また、下限は特に限定されないが、典型的には０．１０以上である。

ＩＦＮ−αの産生促進作用の評価方法は特に限定されず、例えば、後述する実施例に記載があるように、ｐＤＣによって産生されるＩＦＮ−αの量及び／又はｐＤＣが発現するＩＦＮ−α遺伝子の発現量を測定することなどにより評価することができる。

ＩＦＮ−αの産生促進作用の評価方法の一具体例は、ｐＤＣと本発明の一態様の組成物とを共培養し、次いで培養後に回収した培養上清を試料溶液として、市販のＩＦＮ−α測定キットを用いてＩＦＮ−α濃度を測定することを含む方法などが挙げられるが、これに限定されない。共培養の条件は特に限定されず、例えば、ＩＦＮ−αが失活せず、かつ、ｐＤＣが死滅しないような条件を挙げることができ、ｐＤＣの維持又は増殖に適した培地、温度、ＣＯ_２濃度、ｐＨなどを採用した培養条件であることが好ましい。

ＩＦＮ−αの産生促進作用の程度は特に限定されないが、本発明の一態様の組成物を用いない場合と比べてｐＤＣへのＩＦＮ−αの産生量が大きくなる程度であることが好ましい。ペディオコッカス属乳酸菌がペディオコッカス・アシディラクティシである場合は、ＩＦＮ−αの産生促進作用の程度は、有効成分と同量のペディオコッカス・ペントサセウス ＮＲＩＣ９９株を用いる場合と比べて、ｐＤＣへのＩＦＮ−αの産生量が大きくなる程度である。

また、有効作用の程度は、例えば、２００μｌ中に１×１０^７個のペディオコッカス属乳酸菌と２．５×１０^４個のｐＤＣとを共培養して２４時間後に回収した上清中のＩＦＮ−αの濃度（被験体間の平均値）が１０ｐｇ／ｍｌ以上になる程度が好ましく、１００ｐｇ／ｍｌ以上になる程度がより好ましい。また、上限は特に限定されないが、典型的には１０，０００ｐｇ／ｍｌ以下である。

本発明の一態様の組成物は、有効作用を有することにより、抗ウイルス効果、抗感染症効果、抗アレルギー効果、抗花粉症効果及び抗喘息効果などを奏することが期待されるものであることから、抗ウイルス用組成物、抗感染症用組成物、抗アレルギー用組成物、抗花粉症用組成物及び抗喘息用組成物といった態様をとり得る。

本発明の一態様の組成物が奏する、抗ウイルス効果、抗感染症効果、抗アレルギー効果、抗花粉症効果及び抗喘息効果とは、例えば、抗ウイルス効果の場合は、本発明の一態様の組成物の摂取個体における現在又は将来のウイルス性疾患の症状を改善、緩和若しくは治療し、又はウイルス性疾患に罹患しているとされる状態になることを抑制、遅滞若しくは予防することをいう。なお、抗喘息効果については、抗ＩｇＥ抗体であるオマリズマブが喘息症状を改善することが知られており、このメカニズムの一端はＦｃεＲＩ発現抑制効果によると考えられている（例えば、非特許文献１、William W. Busse, et al., N Engl J Med, March 2011, Vol. 17, Number 364, pp. 1005-1015、Calman Prussin, et al., J Allergy Clin Immunol, December 2003, Vol. 112, Number 6, pp1147-1154を参照；これらの文献の全記載はここに開示として援用される）。

非特許文献１には、アレルゲンの存在によりｐＤＣにおけるＦｃεＲＩにて架橋反応が生じ、ＩＦＮ−αの生産量が低下することが記載されている。また、ミッシェルらの文献（Michelle A. Gill et al., J Immunol. 2010 June 1; 184(11): 5999-6006；該文献の全記載はここに開示として援用される）には、健常者よりも喘息患者の方がｐＤＣにおけるＦｃεＲＩの発現量が大きいこと、インフルエンザに罹患した健常者よりもインフルエンザに罹患した喘息患者の方がｐＤＣによるＩＦＮ−αの生産量が少ないことが記載されている。これらの記載を統合して考えれば、本発明の一態様の組成物は、喘息患者において高度な抗ウイルス効果及び抗感染症効果を発揮すると考えられる。

本発明の一態様の組成物の有効成分は、ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種である。

ペディオコッカス属乳酸菌は、通常知られているとおりのグラム陽性の乳酸を生成する球菌であるペディオコッカス属に属する乳酸菌であれば特に限定されないが、例えば、食経験のあるペディオコッカス属乳酸菌などが挙げられる。

ペディオコッカス属乳酸菌の入手方法は特に限定されず、例えば、ペディオコッカス属乳酸菌は漬物、酒粕、乳製品、醤油諸味などの発酵食品といった乳酸菌含有物から単離株として分離してもよいし、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、東京農業大学（ＮＲＩＣ）、理化学研究所（ＪＣＭ）、独立行政法人製品評価技術基盤機構バイオテクノロジーセンター（ＮＢＲＣ）、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター（ＮＩＴＥ−ＩＰＯＤ）から分譲される菌株であってもよい。

ペディオコッカス属乳酸菌の具体例としては、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ペディオコッカス・セリコーラ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｃｅｌｌｉｃｏｌａ）、ペディオコッカス・クラウッセニー（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｃｌａｕｓｓｅｎｉｉ）、ペディオコッカス・ダムノサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｄａｍｎｏｓｕｓ）、ペディオコッカス・エタノーリデュランス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｅｔｈａｎｏｌｉｄｕｒａｎｓ）、ペディオコッカス・イノピナタス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｏｐｉｎａｔｕｓ）、ペディオコッカス・パルヴルス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ペディオコッカス・スティレッシー（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｓｔｉｌｅｓｉｉ）などが挙げられるが、これらに限定されない。ペディオコッカス属乳酸菌としては、これらのいずれか１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用し得る。

ペディオコッカス・アシディラクティシ及びペディオコッカス・ペントサセウスの非限定的な例としては、ペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ１５株、ペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ２２６株、ペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ５３１株、ペディオコッカス・アシディラクティシ ＮＲＩＣ０１２４株、ペディオコッカス・アシディラクティシ ＪＣＭ８７９７株、ペディオコッカス・ペントサセウス ＯＳ株（ＮＩＴＥ Ｐ−３５４）、ペディオコッカス・ペントサセウス ＮＲＩＣ１９１５株、ペディオコッカス・ペントサセウス ＮＲＩＣ９９株、ペディオコッカス・ペントサセウス ＮＲＩＣ１２２株、ペディオコッカス・ペントサセウス ＪＣＭ２０２４株、ペディオコッカス・ペントサセウス ＡＴＣＣ３３３１４株などが挙げられる。

ペディオコッカス属乳酸菌の中でも、有効作用が大きく、食経験が豊富であることから、ペディオコッカス・アシディラクティシ及びペディオコッカス・ペントサセウスが好ましく、有効作用がより大きいことからペディオコッカス・アシディラクティシがより好ましく、ペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ１５株、ペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ２２６株、ペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ５３１株及びペディオコッカス・アシディラクティシ ＪＣＭ８７９７株がさらに好ましい。

以下では、ペディオコッカス属乳酸菌として、ペディオコッカス・アシディラクティシを使用することを想定して、本発明の一態様の組成物の詳細について説明する。ただし、ペディオコッカス・アシディラクティシ以外のペディオコッカス属乳酸菌を用いる場合は、以下の「ペディオコッカス・アシディラクティシ」との記載を「ペディオコッカス・ペントサセウス」などの他のペディオコッカス属乳酸菌に読み替えればよい。

ペディオコッカス・アシディラクティシを分離する方法は特に限定されないが、例えば、常法に従って、乳酸菌含有物の抽出液を適宜希釈して、ＭＲＳ培地及びＭ１７培地などの公知の乳酸菌培養用培地を用いて、３０℃〜４０℃程度で培養することを含む方法などが挙げられる。例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ１５株、Ｋ２２６株及びＫ５３１株は、乳酸菌含有物としてそれぞれ糠床、漬物及びワイン用ぶどうから単離した乳酸菌株であり、それぞれの至適温度は約３７℃〜４２℃程度である。

本発明者らの調べたところによれば、ペディオコッカス・アシディラクティシは、ストレス条件下で培養することにより、二本鎖ＲＮＡを高濃度で含有することができる。二本鎖ＲＮＡの含有量が大きいペディオコッカス・アシディラクティシとしては、例えば、菌体１×１０^１０ｃｆｕあたり１，５００ｎｇ以上の二本鎖ＲＮＡを含有するペディオコッカス・アシディラクティシ及び菌体１×１０^１０ｃｆｕあたり核酸の総量に対する二本鎖ＲＮＡの割合が３．５％以上であるペディオコッカス・アシディラクティシなどが挙げられる。また、上限は特に限定されないが、典型的にはそれぞれ２００，０００ｎｇ以下及び９９％以下である。

ストレス条件とは、高塩濃度、高温、低温、貧栄養、富栄養、低ｐＨ、高ｐＨ、通気及びこれらの組み合わせといった、乳酸菌を通常培養する条件から外れている条件であり、好ましくは乳酸菌の倍加時間が好適な条件で培養した場合の時間よりも長くなるような条件である。

具体的には、塩分によるストレス条件下での培養とは、例えば、塩分０．５％（ｗ／ｖ）〜３０％（ｗ／ｖ）、好ましくは５％（ｗ／ｖ）〜１５％（ｗ／ｖ）を含む培地を使用して培養することが挙げられる。塩分濃度が０．５％（ｗ／ｖ）以下又は３０％（ｗ／ｖ）以上の培地では、ペディオコッカス・アシディラクティシの増殖が極端に遅くなることから好ましくない。

高温又は低温によるストレス条件下での培養とは、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシの増殖に適した至適温度±１℃〜３０℃、好ましくは至適温度±５℃〜２０℃で培養することが挙げられ、具体的にはペディオコッカス・アシディラクティシの至適温度が４０℃であれば１０℃〜３９℃又は４１℃〜６０℃で培養することなどが挙げられる。

通気によるストレス条件下での培養とは、例えば、空気を供給して、撹拌などすることにより溶存酸素濃度を高めるような条件下で培養することなどが挙げられる。この際、空気に代えて酸素ガスを用いてもよく、溶存酸素濃度が高められるのであれば撹拌以外に振盪などの手段を採用してもよい。なお、撹拌数は、培養槽の大きさなどによって適宜設定し得る。

空気の供給量（通気量）は特に限定されないが、例えば、単位体積当たり０．０１ＶＶＭ〜１０ＶＶＭ程度であり、好ましくは０．１ＶＶＭ〜１ＶＶＭ程度である。通気量が０．０１ＶＶＭより小さい場合は溶存酸素濃度が高められない可能性があり、通気量が１０ＶＶＭより大きい場合は大量の気泡によって乳酸菌が物理的にダメージを受ける可能性があることから、これらの場合は好ましくない。

ペディオコッカス・アシディラクティシを培養するその他の条件としては、ペディオコッカス・アシディラクティシの増殖に適した条件を用いればよい。例えば、使用する培地としては、ペディオコッカス・アシディラクティシの培養に通常使用する培地を採用することができる。そのような培地としては、例えば、ＭＲＳ培地及びＭ１７培地などを挙げることができるが、これらに限定されない。また、培養時間はペディオコッカス・アシディラクティシの増殖が認められ、充分な菌体密度が得られる時間であれば特に限定されない。

ペディオコッカス・アシディラクティシは、ストレス条件下で培養することにより、ストレスがない条件下で培養する場合と比べて、例えば、二本鎖ＲＮＡなどの菌体成分をより多く産生し得る。

ペディオコッカス・アシディラクティシは、ストレス条件下で培養したペディオコッカス・アシディラクティシであっても、通常の条件下で培養したペディオコッカス・アシディラクティシであっても、いずれでもよい。ペディオコッカス・アシディラクティシは、例えば、ストレス条件下で培養したペディオコッカス・アシディラクティシの１種又は２種以上と、通常の条件下で培養したペディオコッカス・アシディラクティシの１種又は２種以上とを組み合わせたものであってもよい。

本発明の一態様の組成物における有効成分は、ペディオコッカス・アシディラクティシそれ自体、すなわち、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体に加えて、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体成分、ペディオコッカス・アシディラクティシの培養物、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物のいずれかの処理物であり得る。

ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体は、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシの培養物を遠心分離などの一般に公知の固液分離手段を用いて培地を除去することにより得られる菌体などが挙げられる。

ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体成分は、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体内に存在する、又は菌体外に分泌する精製又は非精製の成分が挙げられ、具体的には一本鎖ＲＮＡ及び二本鎖ＲＮＡ並びに一本鎖ＤＮＡ及び二本鎖ＤＮＡなどが挙げられる。

ペディオコッカス・アシディラクティシの培養物は、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシを培養して得た培養液そのものなどが挙げられる。

ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物の処理物は、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物を、殺滅菌処理、乾燥処理などの一般に公知の乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物を処理する方法に供して得られる処理物などが挙げられる。

ペディオコッカス・アシディラクティシの培養物を殺菌し、培地を限外ろ過膜及び遠心濃縮機などの一般に公知の固液分離手段によって培地を除去して菌体を回収し、次いで得られた菌体を水及び食塩水などの洗浄液で洗浄することにより、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体を得ることができる。このようにして得られた菌体をそのままで、又はデキストリンなどの糖といった食品素材と混ぜたものを、乾燥処理に供して得られる乾燥粉末などを、有効成分として使用可能である。乾燥処理の方法は特に限定されず、例えば、自然乾燥、風乾、噴霧乾燥、凍結乾燥などが挙げられる。本発明の一態様の組成物が含有する有効成分は、保存性や製造上の取り扱いの容易さから、ペディオコッカス・アシディラクティシの乾燥粉末であることが好ましい。

有効成分は、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物であれば特に限定されないが、例えば、核酸を含有する菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物が好ましく、ＲＮＡを含有する菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物であることがより好ましく、二本鎖ＲＮＡを含有する菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物であることがより好ましい。

ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物は、それらのいずれか１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用することができる。例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からＲＮＡ、好ましくは二本鎖ＲＮＡを単離して使用してもよい。ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からＲＮＡを単離する方法は特に限定されないが、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体から二本鎖ＲＮＡを単離する方法としては、特許第５３１２３２２号公報に記載の方法などが挙げられる。

二本鎖ＲＮＡを含有するペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物を入手する方法は特に限定されないが、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシを通常のＭＲＳ培地に植菌し、３５℃〜４５℃で２４時間〜７２時間培養することにより、二本鎖ＲＮＡを含有するペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物を入手することを含む方法などが挙げられる。

ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物から二本鎖ＲＮＡを単離する方法の具体例としては、例えば、以下の方法などが挙げられる。すなわち、二本鎖ＲＮＡを含有するペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物を９０℃〜１００℃で５分間〜２０分間の加熱殺菌処理に供して加熱殺菌処理液を得る。次いで加熱殺菌処理液を遠心分離等の固液分離手段に供して固形分を回収する。次いで固形分を洗浄して緩衝液に懸濁して懸濁液を得る。次いで懸濁液にリゾチームを添加して３５℃〜４０℃で加温してリゾチーム処理液を得る。次いでリゾチーム処理液にＳＤＳ及びＰｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋを添加して３５℃〜４０℃で加温してプロテナーゼ処理液を得る。次いでプロテナーゼ処理液をフェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール処理に供し、遠心分離等の固液分離手段により上清として粗核酸抽出液を得る。粗核酸抽出液は、ＤＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡなどを含有する核酸混合物である。次いで、粗核酸抽出液を、セルロースカラムクロマトグラフィーに供することによって、精製された二本鎖ＲＮＡを得ることができる。セルロースカラムクロマトグラフィー及びその後の高度な精製手段は、特許第５３１２３２２号公報の記載に準じて実施することができる。

一般的なペディオコッカス・アシディラクティシは、長期にわたりヒトに摂取されてきた実績があり安全性が高いことから、本発明の一態様の組成物は、実用性が高く、そのままで、又は加工することにより、種々の用途に適用可能である。

本発明の一態様の組成物は、その摂取方法について特に限定されず、例えば、経口的又は非経口的に適用され得る。非経口的な適用としては、皮内、皮下、静脈内、筋肉内の投与などによる注射及び注入；経皮；鼻、咽頭などの粘膜からの吸入などが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の一態様の組成物の摂取個体は特に限定されず、例えば、動物、中でも哺乳類が挙げられ、哺乳類としてはヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジなどが挙げられ、これらの中でもヒトであることが好ましい。摂取個体は、健常な個体であってもよいが、抗疾患効果及び／又は免疫賦活効果が望まれる個体であることが好ましい。

本発明の一態様の組成物は、用途に応じて、例えば、有効成分と他の成分とを組み合わせて含有し得る。すなわち、本発明の一態様の組成物は、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物に加えて、本発明の目的を達成し得る限り、他の成分として種々のものを含有してもよい。

他の成分としては、例えば、糖質甘味料、安定化剤、乳化剤、澱粉、澱粉加工物、澱粉分解物、食塩、着香料、着色料、酸味料、風味原料、栄養素、果汁、卵などの動植物性食材、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、香油、保存剤、緩衝剤などの通常の食品加工及び／又は医薬品加工に使用される添加物などを挙げることができる。他の成分の使用量は、本発明の課題の解決を妨げない限り特に限定されず、適宜設定され得る。

本発明の一態様の組成物は、通常用いられる形態であれば特に限定されず、例えば、固形状、液状、ゲル状、懸濁液状、クリーム状、シート状、スティック状、粉状、粒状、顆粒状、錠状、棒状、板状、ブロック状、ペースト状、カプセル状、カプレット状などの各形態を採り得る。

本発明の一態様の組成物は、例えば、経口用組成物である場合に、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物を、食道及び胃を経由して小腸へ送達し得るものとして、腸溶性組成物とすることができる。腸溶性組成物は、胃酸では溶けずに小腸において溶解する形態の組成物であれば特に限定されず、例えば、耐酸性マイクロカプセル及びリポソームの形態の組成物などが挙げられる。

有効成分の含有量は、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用、好ましくはプラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用及びプラズマサイトイド樹状細胞へのインターフェロン−αの産生促進作用が認められる量であれば特に限定されないが、経口用組成物としては、例えば、組成物全体に対して、０．０００１質量％〜９９質量％、好ましくは０．００１質量％〜９０質量％であり、非経口用組成物としては、例えば、０．００００１質量％〜９９質量％、好ましくは０．０００１質量％〜９０質量％である。

本発明の一態様の組成物の摂取量は特に限定されず、摂取個体の年齢、体格、症状などの摂取個体の特性；摂取方法；適用部位などに合わせて適宜設定することができる。本発明の一態様の組成物の摂取量として、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体を有効成分とする組成物の摂取量は１ｍｇ／体重６０ｋｇ／日〜１，０００ｍｇ／体重６０ｋｇ／日である。摂取回数は特に限定されないが、例えば、１日１回〜３回であり、摂取量に応じて適宜回数を増減することができる。

本発明の一態様の組成物は、該組成物を単独で、又は該組成物を配合するものとして、飲食品用組成物及び医薬品用組成物などの形態をとり得る。したがって、本発明の具体的な一態様は、有効成分を含有する、又は本発明の一態様の組成物を含有する、飲食品用組成物、医薬品用組成物、医薬部外品用組成物、化粧品用組成物、動物飼料用組成物などである。

本発明の一態様の組成物が飲食品用組成物である場合は、摂取後に少なくとも有効作用が発揮し得る限り、あらゆる飲食品の形態をとり得る。例えば、果汁飲料、野菜ジュース、果物野菜ジュース、茶飲料、コーヒー飲料、スポーツドリンク、清涼飲料、健康飲料などの飲料；ヨーグルト及びチーズなどの乳製品；スープ、麺、プリン、ジャムなどの加工飲食品；チューインガム、キャンディ、錠菓、グミゼリー、チョコレート、ビスケット、スナックなどの菓子；アイスクリーム、シャーベット、氷菓などの冷菓；醤油及び味噌などの調味料などが挙げられる。

飲食品用組成物の具体的な一態様は、例えば、生体に対して一定の機能性を有する飲食品である機能性飲食品である。機能性飲食品は、例えば、特定保健用飲食品、機能性表示飲食品、栄養機能飲食品、保健機能飲食品、特別用途飲食品、栄養補助飲食品、健康補助飲食品、サプリメント、美容飲食品などのいわゆる健康飲食品に加えて、乳児用飲食品、妊産婦用飲食品、高齢者用飲食品などの特定者用飲食品を包含する。さらに機能性飲食品は、コーデックス（ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品規格委員会）の食品規格に基づく健康強調表示（Ｈｅａｌｔｈ ｃｌａｉｍ）が適用される健康飲食品を包含する。

飲食品用組成物の包装形態は特に限定されず、適用される形態などに応じて適宜選択できるが、例えば、コーティング紙、ＰＥＴ及びＰＴＰなどのプラスチック、アルミなどの金属、ガラスなどを素材とするパック、瓶、缶、パウチなどが挙げられる。

本発明の一態様の組成物が医薬品用組成物である場合は、適用後にプラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用、好ましくはプラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用及びプラズマサイトイド樹状細胞へのインターフェロン−αの産生促進作用が発揮し、それに伴い所望の抗疾患効果が現われる限り、あらゆる医薬品の形態をとり得る。

医薬品用組成物の剤型は特に限定されないが、例えば、注射剤（筋肉、皮下、皮内）、経口製剤、点鼻製剤などが例示される。例えば、医薬品用組成物は、抗ウイルス効果を発揮するためのワクチンとして調製することができる。医薬品用組成物がワクチンの形態である場合、複数種類の有効成分を含む混合カクテルワクチンであってもよい。

本発明の一態様の組成物の製造方法は特に限定されず、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物と、任意に他の成分とを混合して、所望の剤形に成形する方法などが挙げられる。

本発明の一態様の組成物の製造方法の具体的態様としては、例えば、以下の方法などが挙げられる。すなわち、ＭＲＳ培地にペディオコッカス・アシディラクティシを植菌し、ペディオコッカス・アシディラクティシの至適温度±５℃〜２０℃で１２時間〜７２時間培養することにより培養物を得る。次いで該培養物を９０℃〜１００℃で５分間〜２０分間の加熱殺菌処理に供して加熱殺菌処理液を得る。次いで加熱殺菌処理液を限外ろ過膜及び遠心濃縮機などの一般に公知の固液分離手段に供することによって培地を除去して菌体を回収する。次いで得られた菌体を水及び食塩水などの洗浄液で洗浄することにより、ペディオコッカス・アシディラクティシの菌体を得る。このようにして得られた菌体、該菌体を水及び食塩水などの洗浄液に懸濁した菌体懸濁液、該菌体を乾燥処理に供して得られる乾燥粉末などは、本発明の一態様の組成物の有効成分として使用可能である。乾燥処理の方法は特に限定されず、例えば、自然乾燥、風乾、噴霧乾燥、凍結乾燥などが挙げられる。

本発明の一態様の組成物の製造方法では、本発明の目的を達成し得る限り、上記した工程の前段若しくは後段又は工程中に、種々の工程及び／又は操作を加入することができる。

本発明の別の一態様は、本発明の一態様の組成物の有効成分として使用し得る、プラズマサイトイド樹状細胞を活性化するための乳酸菌のスクリーニング方法である。本発明の一態様のスクリーニング方法は、２種の具体的態様に大別される。

本発明の第１の具体的態様のスクリーニング方法は、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用を指標とする方法であり、少なくとも以下の工程を含む：
乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の成分とプラズマサイトイド樹状細胞とを含む被験溶液をインキュベートし、及び該成分を含まず、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞を含む対照溶液をインキュベートする工程；
インキュベート後の被験溶液及び対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量を測定する工程；及び、
測定された被験溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量が対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量よりも小さい場合に、前記成分はプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する有効成分であると判定する工程。

本発明の第２の具体的態様のスクリーニング方法は、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用及びプラズマサイトイド樹状細胞のインターフェロン−αの産生促進作用を指標とする方法であり、少なくとも以下の工程を含む：
乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の成分とプラズマサイトイド樹状細胞とを含む被験溶液をインキュベートし、及び該成分を含まず、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞を含む対照溶液をインキュベートする工程；
インキュベート後の被験溶液及び対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のインターフェロン−αの産生量及びプラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量を測定する工程；及び、
測定された被験溶液におけるインターフェロン−αの産生量が対照溶液におけるインターフェロン−αの産生量よりも大きく、かつ、測定された被験溶液におけるＦｃεＲＩの発現量が対照溶液におけるＦｃεＲＩの発現量よりも小さい場合に、前記成分はプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する有効成分であると判定する工程。

本発明の一態様のスクリーニング方法における被験物質とプラズマサイトイド樹状細胞との共培養、プラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現量及びプラズマサイトイド樹状細胞のインターフェロン−αの産生量の測定などは、上記の記載を参照して実施することができる。

本発明の一態様のスクリーニング方法では、本発明の目的を達成し得る限り、上記した工程の前段若しくは後段又は工程中に、種々の工程及び／又は操作を加入することができる。

以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。

［例１．乳酸菌のＦｃεＲＩ発現抑制試験］
乳酸菌が有する高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）発現抑制作用を以下のとおりに評価した。

１−１．乳酸菌懸濁液の調製
乳酸菌としては、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ） Ｋ１５株、Ｋ２２６株、Ｋ５３１株及びＪＣＭ８７９７株；ペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐ．ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ） ＮＲＩＣ９９株；ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ） ＪＣＭ１０２２株（Ｋ１１６７株）；ラクトバチルス・デルブルエッキ（Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ） ＮＲＩＣ１６８８株（Ｋ１１７５株）；ラクトバチルス・ペントーサス（Ｌ．ｐｅｎｔｏｓｕｓ） Ｋ１３３株及びＮＲＩＣ１８３６株を用いた。

なお、「ＮＲＩＣ」の菌株は東京農業大学、「ＪＣＭ」の菌株は理化学研究所から分譲された菌株であることを示す。また、Ｋ１５株、Ｋ２２６株、Ｋ５３１株及びＫ１３３株は、乳酸菌含有物として、糠床、漬物、ワイン用ぶどう及び糠床から単離した。

各乳酸菌株は、ＭＲＳ培地に１×１０^７個／ｍｌとなるように接種して乳酸菌原液を調製した。この乳酸菌原液を、２６℃〜３０℃で２４時間〜３６時間静置培養した後、９５℃で１０分間の煮沸殺菌処理を行うことにより、培養殺菌処理液を調製した。培養殺菌処理液を遠心分離して得た菌体を、生理食塩水にて洗浄した後、生理食塩水に懸濁し、乳酸菌懸濁液を調製した。

１−２．プラズマサイトイド樹状細胞（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ＤＣ；ｐＤＣ）の分離
非ウイルス感染健常者である被験者Ａ〜Ｈの８名の各末梢血５０ｍｌより、リンパ球分離液（ナカライテスク社）を用いて低密度勾配遠心法により末梢血単核細胞を分離した。その後、末梢血単核細胞からＣＤ１４マイクロビーズ（ミルテニーバイオテク社）及びＭＡＣＳ（ミルテニーバイオテク社）を用いて、ＣＤ１４陽性細胞を取り除いた。ＣＤ１４陽性細胞を取り除いた後に、ＦＩＴＣ標識ＣＤ３０４抗体（ミルテニーバイオテク社）で標識後、ＦＩＴＣマイクロビーズ（ミルテニーバイオテク社）と反応させ、ＭＡＣＳによりＣＤ３０４陽性細胞を分離し、この細胞（ＣＤ１４陰性ＣＤ３０４陽性）をｐＤＣとして用いた。

１−３．乳酸菌とｐＤＣとの共培養
細胞培養液として１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）、２５ｍＭ Ｄ−グルコース、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ及び１μＭ ピルビン酸ナトリウムを含有するＩＭＤＭ培地（ＧＩＢＣＯ社）を用いた。９６ウェルＲｏｕｎｄ−ｂｏｔｔｏｍプレート（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ社）を用いて、各ウェル内で１×１０^７個の各乳酸菌株と２×１０^４個又は４×１０^４個のｐＤＣとを共培養し、２４時間後に細胞及び上清を回収した。乳酸菌を用いずにｐＤＣのみを培養したウェルから回収した上清をコントロールとした。使用したｐＤＣが由来する被験者と使用した乳酸菌株との組み合わせを表１に示す。

１−４．ＦｃεＲＩ発現抑制活性の測定
共培養後に回収した細胞を用いて、７ＡＡＤ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社）、ＰＥ標識抗ＦｃεＲＩα（Ｂｉｏ Ｒｅｇｅｎｄ社）抗体を用いて、ＦｃεＲＩαの発現についてフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ａｒｉａ ＩＩ、ベクトン・ディッキンソン社）を用いて定量した。得られた定量値について、コントロールの値を１として、各乳酸菌株を用いた場合の値を相対値により求めた。

１−５．評価
試験した乳酸菌株のうち、ラクトバチルス・ジョンソニー Ｋ１１６７株、ラクトバチルス・デルブルエッキ Ｋ１１７５株及びラクトバチルス・ペントーサス ＮＲＩＣ１８３６株は、１名以上の被験者に由来するｐＤＣにおいて、コントロールよりも高い値（＞１）を示した。特に、ラクトバチルス・ジョンソニー Ｋ１１６７株及びラクトバチルス・デルブルエッキ Ｋ１１７５株については、２名の被験者に由来するｐＤＣにおいて、コントロールよりも高い値を示した。これらの乳酸菌株については、ＦｃεＲＩ発現抑制作用を有さないと判定した。

残りの乳酸菌株について、各被験者から採取したｐＤＣのＦｃεＲＩ発現量（相対値）から乳酸菌株ごとに被験者間の平均値を求めた結果を図１に示す。図１が示すとおり、ラクトバチルス・ペントーサスに対して、ペディオコッカス・アシディラクティシ及びペディオコッカス・ペントサセウスは、ｐＤＣのＦｃεＲＩ発現量が０．９以下と低かった。特に、ペディオコッカス・アシディラクティシは、いずれの菌株においても、ｐＤＣのＦｃεＲＩ発現量が低かった。

以上の結果より、ペディオコッカス属乳酸菌はｐＤＣに対するＦｃεＲＩの発現抑制作用を有し、なかでもペディオコッカス・アシディラクティシは顕著に優れた、ｐＤＣに対するＦｃεＲＩの発現抑制作用を有することが確認された。

［例２．乳酸菌のインターフェロン−α産生促進試験］
乳酸菌が有するインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）産生促進作用を以下のとおりに評価した。

２−１．ＩＦＮ−α産生促進活性の測定
例１の乳酸菌とｐＤＣとの共培養後に回収した培養上清を用いて、ＩＦＮ−αの濃度をＨｕｍａｎ ＩＦＮ−α Ｍａｔｃｈｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐａｉｒｓ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）を用いて定量した。得られた定量値について、コントロールの値を１として、各乳酸菌株を用いた場合の値を相対値により求めた。

２−２．評価
試験した乳酸菌株のうち、ラクトバチルス・ジョンソニー Ｋ１１６７株以外の乳酸菌株については、ｐＤＣが由来する被験者及び乳酸菌株に関係無く、ｐＤＣに対するＩＦＮ−αの産生誘導能を確認することができた。ラクトバチルス・ジョンソニー Ｋ１１６７株については、いずれの被験者に由来するｐＤＣを用いても、ＩＦＮ−αの産生量が少なく（被験者間の平均で１．８）、コントロールに対して僅かな増加しか認められなかった。

一方、試験した乳酸菌株の中でｐＤＣに対するＩＦＮ−αの産生誘導能が最も大きかった菌株はラクトバチルス・デルブルエッキ Ｋ１１７５株であった。ラクトバチルス・デルブルエッキ Ｋ１１７５株はＦｃεαＩ発現抑制作用を有さないとする例１の結果と合せて考えると、ｐＤＣに対するＩＦＮ−αの産生促進作用とＦｃεαＩ発現抑制作用とは必ずしも相関関係にはないことがわかった。

以上の結果より、ペディオコッカス・アシディラクティシ及びペディオコッカス・ペントサセウスといったペディオコッカス属乳酸菌はｐＤＣに対するＦｃεＲＩの発現抑制作用を有し、さらにＩＦＮ−αの産生促進作用を有するということは、本発明者らによって初めて見出された非常に驚くべき事象であった。

［例３．ＦｃεＲＩ発現抑制作用に関するＴＬＲリガンドとの比較試験］
ペディオコッカス・アシディラクティシ Ｋ１５株が有するＦｃεＲＩ発現抑制活性とＴＬＲリガンドが有する活性との比較を、以下のとおりに評価した。

３−１．ＴＬＲリガンドが有するＦｃεＲＩ発現抑制作用の測定
被験者Ｈから採取したｐＤＣについて、各乳酸菌株の代わりに、最終濃度が１０μｇ／ｍｌになるようにＴＬＲ７のリガンドであるＩｍｉｑｕｉｍｏｄ（Ｒ８３７；ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社）、ＴＬＲ８のリガンドであるｓｓＲＮＡ４０／ＬｙｏＶｅｃ（ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社）及びＴＬＲ９のリガンドであるＯＤＮ２２１６（ＣｐＧ；ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社）を用いた以外は、例１と同様にｐＤＣとの共培養を実施した。Ｋ１５株又はリガンドを用いずにｐＤＣのみを培養したウェルから回収した上清をコントロールとした。

共培養後に回収した細胞を用いて、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ ＲＮＡ ＸＳ（ＭＡＣＨＥＲＥＹ−ＮＡＧＥＬ社）によりＲＮＡを抽出し、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（タカラバイオ社）、及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ ＩＩ（タカラバイオ社）を用いて定量ＰＣＲ法により、ＦｃεＲＩα、β−ａｃｔｉｎのｍＲＮＡ発現量を測定した。各プライマーはタカラバイオ社より購入した。ＦｃεＲＩαのｍＲＮＡ発現量はβ−ａｃｔｉｎの測定値を用いて標準化を行い、コントロール（Ｍｅｄ）の値を１として、Ｋ１５株又はリガンドを用いた場合の値を相対値により求めた。

３−２．評価
Ｋ１５株及び各ＴＬＲリガンドのＦｃεＲＩのｍＲＮＡの相対量を図２に示す。図２が示すとおり、ＦｃεＲＩのｍＲＮＡの相対量から、Ｋ１５株のＦｃεＲＩ発現抑制活性は、各ＴＬＲリガンドの活性と同程度又はそれよりも強い活性であることがわかった。

本発明の一態様の組成物は、経口的及び非経口的のいずれの態様においても適用可能な有効成分を含むものであり、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用を通じて、抗ウイルス活性、抗感染症活性、抗アレルギー活性、抗花粉症活性及び抗喘息活性を期待する摂取個体にとって有用なものであり、このような摂取個体の健康及び福祉に資する飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして利用可能なものである。

関連出願の相互参照

本出願は、２０１８年８月９日出願の日本特願２０１８−１５０１５２号の優先権を主張し、その全記載は、ここに開示として援用される。

Claims (5)

1. ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有する、プラズマサイトイド樹状細胞活性化用組成物。
2. 前記組成物は、プラズマサイトイド樹状細胞へのインターフェロン−αの産生促進作用を有する、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物は、前記有効成分と同量のラクトバチルス・ペントーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ） Ｋ１１３株を用いるときよりも高い、プラズマサイトイド樹状細胞へのＦｃεＲＩの発現抑制作用を有する、請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物。
4. 前記組成物は、抗ウイルス用組成物、抗感染症用組成物、抗アレルギー用組成物、抗花粉症用組成物及び抗喘息用組成物からなる群から選ばれる少なくとも１種の抗疾患用組成物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
5. ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効成分を使用して、プラズマサイトイド樹状細胞のＦｃεＲＩの発現を抑制する方法。

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