JP6018041B2 - Ｓｔ−２４６の多形型および調製方法 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１０年３月２３日に出願された米国特許仮出願第６１／３１６，７４７号および２０１０年８月１２日に出願された米国特許仮出願第６１／３７３，０３１号に対する優先権および便益を主張するものであり、これらの仮出願の内容は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明は、ＳＴ−２４６と名付けられた医薬化合物4-trifluoromethyl-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-octahydro-1,3-dioxo-4,6-ethenocycloprop[f]isoindol-2(1H)-yl)-benzamideの特定の結晶形、それらの調製方法、異なる結晶形を含む医薬組成物、および治療におけるその使用に関する。

連邦支援の研究または開発に関する声明
本発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）が裁定する契約第ＨＨＳＮ２６６２００６０００１４Ｃ号に基づき米国政府の支援をもって実施された。米国政府は本発明に一定の権利を有する。

本願の全体を通じて、本文中にさまざまな刊行物への言及がみられる。このような刊行物の開示は、本願に記述され、請求されている発明の時点で当業者に公知の最新技術をいっそう十分に説明するために、参照によってその全体が本願に組み込まれる。

天然痘が根絶され(Fenner et al., The epidemiology of smallpox. Smallpox and its eradication. スイス：世界保健機構；１９８８年)World Health Organization; 1988)、それに続いて所定の小児期の天然痘予防接種が中止された後、天然痘の病原体である天然痘ウイルス(ＶＡＲＶ)に感染しやすい人の数が世界中で劇的に増加した。さらに、野生動物の生息環境に対する侵害、外来ペットの売買、および野生動物の肉の売買により、天然痘予防接種から多少の干渉効果が得られていたサル痘ウイルス(MPXV)などの他のオルトポックスウイルス属に対する人畜共通感染症のリスクが高まっている(Jezek et al., Human monkey pox. In: Melnick JL ed. Monographs in virology. Vol. 17. バーゼル、スイス：S Karger AG. 1988:81-102)。

全世界の人口の大部分が天然痘にかかりやすいこと、２００３年にアメリカ合衆国でサル痘ウイルスが出現したこと、および天然痘ウイルスが意図的に放出されるのではないかという懸念が続いていることを考えると、天然痘をはじめとするオルトポックスウイルス属に対するいっそう安全なワクチンと抗ウイルス療法との開発には新たな重要性が存在する。

最近発見された抗ウイルス化合物のひとつが、ウイルス成熟に不可欠なオルトポックスウイルスタンパク質の特異的かつ強力な阻害剤であるＳＴ−２４６である。ＳＴ−２４６のオルトポックスウイルスに対する活性を評価したいくつかの研究では、インビトロおよびインビボでの優れた有効性が示されている。(Quenelle et al. 2007. Efficacy of delayed treatment with ST-246 given orally against systemic orthopoxvirus infections in mice. Antimicrobial Agents and Chemotherapy Feb; 51(2):689-95, Smee et al, 2008. Progress in the discovery of compounds inhibiting orthopoxviruses in animal models. Antiviral Chemistry and Chemotherapy 19(3):115-24)。種痘ウイルス(ＶＶ)、牛痘ウイルス(ＣＶ)、ネズミ痘ウイルス(ＥＣＴＶ)、サル痘ウイルス、ラクダ痘ウイルス、および種痘ウイルスに対するインビトロ評価を実施したところ、ＳＴ−２４６は≦０．０７μＭの濃度でウイルス複製を５０％阻害した（５０％有効濃度 [EC₅₀]）。ネズミ痘ウイルス、種痘ウイルス、または牛痘ウイルスへの致命的な感染を用いた動物モデルでは、ウイルス接種後の処置が７２時間まで遅延されてもなおＳＴ−２４６が非毒性であり、死亡率の予防または低減にきわめて有効であったことが報告されている（Quenelle et al., 2007. Efficacy of delayed treatment with ST-246 given orally against systemic orthopoxvirus infections in mice. Antimicrobial Agents and Chemotherapy Feb; 51(2):689-95, Smee et al. 2008. Progress in the discovery of compounds inhibiting orthopoxviruses in animal models. Antiviral Chemistry and Chemotherapy 19(3):115-24）。また非致死的マウス尾病変モデルでも、静脈内種痘ウイルスを用いたＳＴ−２４６の評価が実施されている。体重１ｋｇ当たり１５または５０ｍｇのＳＴ−２４６を１日２回、５日間にわたって経口投与した場合に、尾の病変が有意に軽減されている （Smee et al., 2008. Progress in the discovery of compounds inhibiting orthopoxviruses in animal models. Antiviral Chemistry and Chemotherapy 19(3):115-24）。ごく最近では、親の軍隊配属前の天然痘予防接種に暴露された後に発症した種痘性湿疹の乳児に対し、ＦＤＡが認める応急処置としてＳＴ−２４６が与えられている（Vora et al., 2008, Severe eczema vaccinatum in a household contact of a smallpox vaccine. Clinical Infectious Disease 15; 46(10):1555-61）。

ＳＴ−２４６は、本願に関連するウイルス感染およびウイルス疾患、特にオルトポックスウイルスによって引き起こされるウイルス感染および関連疾患の治療または予防のためのtetracyclic acylhydrazide化合物のひとつとして、国際公開第２００８／１３０３４８号、同第２００４／１１２７１８号、および同第２００８／０７９１５９号に開示されている。この一連の公表文献は、ＳＴ−２４６のあるひとつの調製方法を開示してはいるが、どの多形型ができるかを開示してはいない。それにもかかわらず、開示された方法は、本開示の以下に考察する多形型ＶであるＳＴ−２４６の半水和物を生じさせる。

ＳＴ−２４６の一水和物の調製方法は、ＣＮ １０１４４５４７８Ａに開示されている。この公表文献に示されたデータは、ＳＴ−２４６の多形体に関する本分類の多形型ＩＩＩに相当する。

ＣＮ １０１４４５４７８Ａ

さて、ＳＴ−２４６が多くの異なる多形型で存在し得るということが、思いがけなく明らかになった。ある化合物の特定の結晶形が他の多形型の性質とは異なる性質を持つ場合があり、特に当該化合物が商業規模で調製または使用される場合には、かかる性質が化合物の物理化学的および薬学的な処理過程に著明に影響を及ぼすことがある。このような相違が、化合物の機械的取扱特性（例えば、固形材料の流動率など）および圧縮特性を変化させる可能性がある。さらに、ＳＴ−２４６のように薬学的に重要な化合物の新たな多形型の発見は、薬剤の最終製品の性能を向上させる機会を提供し、また、例えば目標とする放出特性、または他の所望の物理化学的性質を持った薬学的投薬形態などの設計に、製剤科学者が利用することのできる材料の範囲を広げる。
さらに、製剤原料の新たな多形型が、さまざまな融点、吸湿性、安定性、溶解度および／または溶解速度、結晶化度、結晶特性、生体利用効率、毒性、ならびに製剤取扱特性を示す可能性があり、これらが有効に投与し得る薬剤を調合する際に考慮する必要のある多くの性質の一部だということをかんがえると。また、監督官庁は、薬剤の投与形態が固形である場合の有効成分の多形型に関する明確な知識、特性評価、および管理を要求している。そのため、当技術分野では、ＳＴ−２４６の新たな多形型を結晶化して特性評価することが必要とされている。

本発明は、約７．６３、１０．０４、１１．４７、１４．７３、１５．２１、１５．４７、１６．０６、１６．６７、１６．９８、１８．９３、１９．９６、２０．５２、２０．７９、２２．８０、２５．１６、２６．５３、２７．２０、２７．６０、２９．６０、３０．２３、３０．４９、３０．６８、３１．１４、３３．６５、３４．３３、３５．２９、３５．５６、３６．３０、３７．３６、３８．４２、３８．６６度の特性ピークを持ったＸ線粉末回折パターンを示すＳＴ−２４６の多形体の型Ｉを提供する。

本発明はまた、図２の特性を持つＸ線粉末回折パターンを示すＳＴ−２４６の多形体の型ＩＩをも提供する。

本発明はさらに、特性ピークが約６．７１、９．０５、１２．４９、１３．０３、１３．７９、１４．８７、１５．７２、１６．２６、１６．７４、１８．１０、１８．４３、１９．９４、２１．０４、２１．５１、２３．１５、２３．５１、２５．３２、２６．２４、２６．８７、２７．３２、２７．７２、２８．５５、２９．０８、２９．５0、２９．８４、３１．２７、３３．４８、３５．３６、３９．５６度のＸ線粉末回折パターンを示すＳＴ−２４６の多形体の型ＩＩＩを提供する。

本発明はまた、図4に示す特性を持つＸ線粉末回折パターンを示すＳＴ−２４６の多形体の型ＩＶも提供する。

本発明はさらに、図6に示す特性を持つＸ線粉末回折パターンを示すＳＴ−２４６の多形体の型ＶＩを提供する。

本発明はまた、ＳＴ−２４６の多形体の型Ｉ〜ＶＩの各々を含み、さらに薬学的に許容しうる担体、賦形剤、希釈剤、添加剤、充填剤、潤滑剤、または結合剤を１つ以上含む医薬組成物も提供する。

本発明はさらに、ＳＴ−２４６の多形体の型Ｉ〜ＶＩの各々の有効量を、それを必要とする対象の動物またはヒトに投与することを含む、オルトポックスウイルス感染または種痘性湿疹の治療方法を提供する。

本発明はまた、ＳＴ−２４６の多形体の型Ｉ〜ＶＩの各々の合成方法をも提供する。

本発明はまた経口投与のための投与単位形態をも提供し、ここで、ＳＴ−２４６はＤ９０％粒径が約300ミクロンまでである。一部の実施形態では、ＳＴ−２４６、多形体Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶＩはＤ９０％粒径が約５ミクロンであり、他の実施形態では、Ｄ９０％粒径が約１６．６ミクロンであり、さらに別の実施形態では、Ｄ９０％粒径が約２６．６ミクロンであり、さらに別の実施形態では、Ｄ９０％粒径が約７５ミクロンである。

本発明の別の態様では、経口投与のための投与単位形態が、ＳＴ−２４６多形体型ＩＩ，ＳＴ−２４６多形体型ＩＩＩ、ＳＴ−２４６多形体型ＩＶ、およびＳＴ−２４６多形体型ＶＩからなる群より選択されるＳＴ−２４６を２００ｍｇ含み、さらに、３３．１５ｍｇのラクトース一水和物；４２．９０ｍｇのクロスカルメロースナトリウム；１．９５ｍｇのコロイド二酸化ケイ素；１３．６５ｍｇのヒプロメロース；７．８ｍｇのラウリル硫酸ナトリウム；１．９５ｍｇのステアリン酸マグネシウム；および８８．６０ｍｇまでの量の微結晶性セルロースを含むため、投与形態の総重量が不純物、水、および残留溶媒を含めて３９０ｍｇである。

図１は、型ＩのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。 図２は、型ＩＩの３つのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す（異なる３つのサンプルから）。 図３は、型ＩＩＩのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。 図４は、型ＩＶの２つのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す（異なる２つのサンプルから）。 図５は、型ＶのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。 図６は、型ＶＩの２つのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す（異なる２つのサンプルから）。 図７は、型Ｉの２つのフーリエ変換赤外（ＦＴＩＲ）スペクトルを表わす。 図８は、型ＩＩＩのフーリエ変換赤外（ＦＴＩＲ）スペクトルを表わす。 図９は、型Ｖのフーリエ変換赤外（ＦＴＩＲ）スペクトルを表わす。 図１０、１１、１２、および１３は、型Ｉ（上方パネル）、型Ｖ（中央パネル）、および型ＩＩＩ（下方パネル）のＦＴＩＲスペクトルの拡大図を表わす。 同上。 同上。 同上。 図１４は、微粉化された（上方のパターン）および微粉化されない（下方のパターン）型ＩのＸＲＰＤパターンを表わす。 図１５は、微粉化された（上方のパターン）および微粉化されない（下方のパターン）型ＩＩＩのＸＲＰＤパターンを表わす。 図１６は、ＨＤＴＭＡを３％含む２００ｍｇＳＴ−２４６型Ｉカプセルの溶解に対する粒径の影響を表わし、ここで溶解条件は、９００ｍｌ、０．０５Ｍのリン酸緩衝液、ｐＨ７．５、７５ＲＰＭでＵＳＰ２、３７℃、および該カプセルは、粒径Ｄ９０が約５．５ミクロンの型ＩのＡＰＩで作られている。 図１７は、ＨＤＴＭＡを３％含むＳＴ−２４６型Ｉの２００ｍｇカプセルの溶解に対する粒径の影響を表わし、ここで溶解条件は、９００ｍｌ、０．０５Ｍのリン酸緩衝液、ｐＨ７．５、７５ＲＰＭでＵＳＰ２、３７℃、および該カプセルは粒径Ｄ９０が約１６．７３ミクロンの型ＩのＡＰＩで作られている。 図１８は、ＨＤＴＭＡを３％含むＳＴ−２４６型Ｉの２００ｍｇカプセルの溶解に対する粒径の影響を表わし、ここで溶解条件は、９００ｍｌ、０．０５Ｍのリン酸緩衝液、ｐＨ７．５、７５ＲＰＭでＵＳＰ２、３７℃、および該カプセルは、粒径Ｄ９０が約２６．５５ミクロンの型ＩのＡＰＩで作られている。 図１９は、ＨＤＴＭＡを３％含むＳＴ−２４６型Ｉの２００ｍｇカプセルの溶解に対する粒径の影響を表わし、ここで溶解条件は、９００ｍｌ、０．０５Ｍのリン酸緩衝液、ｐＨ７．５、７５ＲＰＭでＵＳＰ２、３７℃、および該カプセルは、粒径Ｄ９０が約７５ミクロンの型ＩのＡＰＩで作られている。 図２０は、ＨＤＴＭＡを３％含むＳＴ−２４６型Ｉの２００ｍｇカプセルの溶解に対する粒径の影響を表わし、ここで溶解条件は、９００ｍｌ、０．０５Ｍのリン酸緩衝液、ｐＨ７．５、７５ＲＰＭでＵＳＰ２、３７℃、および該カプセルは粒径Ｄ９０が約２５４ミクロンの型ＩのＡＰＩで作られている。 図２１は、型Ｉの溶解プロフィルを表わす。 図２２は、型ＩＩＩの溶解プロフィルを表わす。 図２３は、型Ｖの溶解プロフィルを表わす。 図２４は、単回経口投与後の時間経過に従った平均（ＳＤ）ＳＴ−２４６プラズマ濃度を表わす。

定義
この詳細な説明によれば、以下の略称および定義が適用される。本明細書で用いる場合、単数形の「ａ、ａｎ」および「ｔｈｅ」は複数の指示対象を含む。ただし、文脈が明らかに別の旨を指示している場合を除く。

本発明におけるＳＴ−２４６の「多形型、多形体、多形体型、結晶形、物理的形態、または結晶多形」という用語はＳＴ−２４６の結晶変態を指し、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）、その融点分析による示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、または赤外分光法（ＦＴＩＲ）などの分析法によって特性評価をすることができる。

本明細書で用いる場合、「水和物」という用語は、本発明の化合物またはその塩を意味し、これはさらに、非共有結合性の分子間力によって結合された水の化学量論的または非化学量論的な量を含む。水和物は、１分子以上の水と当該物質１分子との組み合わせによって形成され、その中で水は、その分子状態をＨ_２Ｏのまま維持する。このような組み合わせは、１以上の水和物を形成することが可能である。「半水和物」という用語は、本明細書で用いられる場合、物質１分子に対してＨ_２Ｏが０．５分子の固体を指す。

「医薬組成物」または「医薬調合物」という用語は、有効成分（複数可）、担体を構成する薬学的に許容しうる賦形剤を含む製剤のほかに、成分のうち任意の２以上の組み合わせ、錯体形成、または凝集から直接または間接に生じるあらゆる産物をも包含する。従って、本発明の医薬組成物は、有効成分、有効成分の分散系または複合体、追加の有効成分（複数可）、ならびに薬学的に許容しうる賦形剤を混合することによって調製される任意の組成物を包含する。

粉末、または粒状体、または液体に分散した粒子の粒径分布（particle size distribution（ＰＳＤ））は、存在する粒子の相対量を定義する数値リストまたは数学関数であり、粒径に従って分類されている。またＰＳＤは、粒度分布（grain size distribution）としても知られている。複合培地の粒径が直径の分布であることから、結果を伝えるために統計を用いることができる。よく行われる方法は、体積配分に基づいてｄ１０、ｄ５０、およびｄ９０の数値を用いることである。それはつまり、粒径分布のそれぞれ１０％、５０％、および９０％が、記載された直径より小さいということである。

「投与単位」という用語は、患者に投与する投与形態の一単位を指す。投与単位は通常、投与単位の単回投与で治療効果を得るのに十分な量の薬物を含むように調製されるが、投与形態の大きさが未解決の場合は、所望の治療効果を得るために複数の投与単位が必要なこともある。例えば、単一の投与単位は通常、１錠、１カプセル、または大匙１杯の液体である。この薬物の量が投与形態の大きさに対して物理的な制約を生じる場合は、治療効果を得るのに十分な薬剤を投与するために複数の投与単位が必要となることもある。

「半減期」という用語は、体内に残留する薬剤の量を５０％除去するのに必要な時間の長さを示すために用いられる薬物動態学用語である。

「ＡＵＣ」（すなわち、「曲線下面積」、「血中濃度曲線下面積」、または「血中濃度−時間曲線下面積」）は、個体のプロットまたは頻繁な間隔で標本抽出した個体の血漿中濃度のプールに基づいて、薬剤の生体利用効率または吸収量を測定する方法を指すために用いる薬物動態学用語である。ＡＵＣは、患者の血漿中未変化薬剤の総量に正比例する。例えば、ＡＵＣ対投与量のプロットに関する線形曲線（すなわち、直線的に上昇する線）は、薬剤が血流中に緩慢に放出され、一定の量で患者に供給されていることを示している。ＡＵＣ対投与量が直線関係であれば、これは一般に、薬剤が患者の血流に最適に送達されていることを表わす。これに対して、ＡＵＣ対投与量の曲線が直線でない場合は、薬剤の放出が急速であるため一部が吸収されないか、または血流に入る前に代謝されていることを示す。

「Ｃ_ｍａｘ」（すなわち、「最大血中濃度」）という用語は、ある特定の薬剤の患者の血漿中での最高濃度を示すために用いる薬物動態学用語である。

「Ｔ_ｍａｘ」（すなわち、「最大血中濃度到達時間」または「Ｃ_ｍａｘ到達時間」）は、薬剤投与の時間的経過過程でＣ_ｍａｘが観察される時間を示すために用いる薬物動態学用語である。予想されるように、速放性成分と胃保持成分とを同時に含むような投与形態では、Ｔ_ｍａｘが速放性投与形態でのＣ_ｍａｘより大きいが、胃保持成分だけの投与形態のＴ_ｍａｘよりは小さいと考えられる。

さて、ＳＴ−２４６がさまざまな結晶形で存在し、型Ｉ、型ＩＩ、型ＩＩＩ、型ＩＶ、型Ｖ、および型ＶＩと命名されていることが明らかになった。

いずれの型についても特性評価が十分に実施され、比較性データが作られている。いずれの型も、とりわけ次の方法論による以下の特性評価が示す通りである。

物理的実験による方法
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
ＸＹＺステージ、位置調整のためのレーザー・ビデオ顕微鏡、およびＨｉＳｔａｒ面検出器で構成されたＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ回折系を用いて、回折パターンを収集した。収集時間は、名目上６０秒であった。Ｃｕ Ｋａ線１．５４０６管を４０ｋＶで操作し、４０ｍＡを用いてサンプルを照射した。Ｘ線光学は、Ｇｏｂｅｌ鏡と０．５ｍｍピンホールコリメータで構成される。Ｔｈｅｔａ−ｔｈｅｔａ連続読み取りを サンプル検出器距離１５ｃｍで採用したが、これによって４〜４０°の有効な２θ測定範囲が得られる。サンプルを低バックグラウンド石英プレートに取付けた。一部の実験用には、可変温度ホットステージを用いてサンプルを操作した。

ＳＴ−２４６の多形体は、そのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）および／またはそのラマン分光法のピークによって特徴づけられる。Ｘ線粉末回折に関して言えば、ある多形体のＸ線粉末回折のピークの相対強度は、パターンの判定に用いる多形体の結晶の大きさによって変化し得る。これは、方位配列の現象である。方位配列は、結晶の形態によって生じる。この場合は、ＸＲＰＤ分析の間はサンプルをサンプルホルダーの中で高速回転させて方位配列の影響を軽減しながら、ＸＲＰＤ分析を実行すればよい。ＸＲＰＤ分析の場合は、ピークの「２θ（２シータ）度（degree of 2θ (two theta)）」の角度を単位としてパターンが得られる。

相対強度（Ｉ／ｌｏ）のパーセント値に関して、Ｉｏは、サンプルのすべての「２θ度．」の角度についてＸＲＰＤにより決定された最大ピークの値を表わし、Ｉは、ある「２θ度」の角度で測定されたピークの強度の値を表わす。

角度「２θ度」は、入射Ｘ線と回折Ｘ線との間の角度である回折角である。パーセントで記載されるあるピークの相対強度と「２θ度．」の値が計算される。しかしながら、所定の多形体型の各々に固有であるこのようなＸ線粉末回折パターンにおいて、一定の角度で重要な大きいピークがある。このようなピークは、結晶サイズが約１０〜４０ミクロンの多形型の各々のＸＲＰＤパターンに存在する。このような大きいピークのいずれもが、単独または任意の特徴的な組み合わせで、多形体型の一つを存在する他の多形型から区別するのに十分である。

赤外分光法（ＦＴＩＲ）
Harrick Splitpea（商標）全反射減衰装置を装備したNicolet 510 M-O フーリエ変換赤外分光計を用いて、赤外スペクトルを得た。スペクトルは、４ｃｍ^−１の解像度で４０００〜４００ｃｍ^−１から取得し、各分析につき１２８走査を収集した。

結晶形の調製
本発明は、以下のステップを含むＳＴ−２４６の多形型Ｉの産生方法を提供する：
ａ）少なくとも１の有機溶媒および溶液を作るための水にＳＴ−２４６を溶解し；
ｂ）前記ＳＴ−２４６多形型Ｉの優先晶出を引き起こす温度まで前記溶液を冷却し；そして
ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６の結晶を乾燥し、
ここで前記溶媒は、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、エチルアセテート、エタノール、メタノール、アセトン、イソプロピルアセテート、およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）からなる群より選択される。

好ましくは、本方法はさらに、ステップ（ｂ）の実施中に多形型ＩのＳＴ−２４６の種結晶を添加することを含む。また好ましくは、冷却ステップが少なくとも１５分間にわたって実施され、さらに好ましくは、少なくとも2時間にわたって実施され、最も好ましくは、少なくとも5時間にわたって実施される。

また好ましくは、有機溶媒はエチルアセテートであり、含水率は溶媒総量の約４０容量％であり、さらに好ましくは、溶媒総量の約５容量％であり、さらに好ましくは、溶媒総量の約容量３％であり、最も好ましくは、溶媒総量の約２容量％である。また好ましくは、有機溶媒はアルコールであり、含水率は溶媒総量の約５容量％である。

また本発明は、以下のステップを含むＳＴ−２４６の結晶多形型ＩＩの産生方法も提供する：
ａ）少なくとも１の溶媒にＳＴ−２４６を溶解して溶液を作り；
ｂ）前記ＳＴ−２４６の多形型ＩＩの優先晶出を引き起こす温度まで前記溶液を冷却し；そして
ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６の結晶を乾燥し、
ここで前記溶媒は、エチルアセテート、クロロホルム、１−プロパノール、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）エタノール、アセトン、アセトニトリル、トルエン、イソプロピルアセテート、およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）からなる群より選択される。

好ましくは、本方法はさらに、ステップ（ｂ）の実施中に多形型ＩＩのＳＴ−２４６の種結晶を添加することを含む。また好ましくは、溶媒は水を含有せず、エチルアセテートおよびクロロホルムからなる群より選択される。

本発明はさらに、以下のステップを含むＳＴ−２４６の結晶多形型ＩＩの産生方法を提供する：
ａ）ＳＴ−２４６をエタノールおよび水に溶解して溶液を調製し；
ｂ）前記ＳＴ−２４６多形型ＩＩの優先晶出を引き起こす温度まで前記溶液を冷却し；そして
ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６の結晶を乾燥させる。

好ましくは、本方法はさらに、ステップ（ｂ）の実施中に多形型ＩＩのＳＴ−２４６の種結晶を添加することを含む。また好ましくは、エタノール：水の容積比は１：１である。

また本発明は、以下のステップを含むＳＴ−２４６の結晶多形型ＩＩＩの産生方法も提供する：
ａ）少なくとも１の有機溶媒および水にＳＴ−２４６を溶解して溶液を作り；
ｂ）前記ＳＴ−２４６の多形型ＩＩＩの優先晶出を引き起こす温度まで前記溶液を冷却し；そして
ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６の結晶を乾燥し、
ここで有機溶媒は、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、エチルアセテート、およびエタノールからなる群より選択される。

好ましくは、本方法はさらに、ステップ(ｂ)の実施中に多形型ＩＩＩのＳＴ−２４６の種結晶を添加することを含む。また好ましくは、冷却ステップを実施する時間は１５分未満である。

本発明はさらに、以下のステップを含むＳＴ−２４６の結晶多形型ＩＩＩの産生方法を提供する：
ａ）少なくとも１の有機溶媒にＳＴ−２４６を溶解して溶液を調製し；
ｂ）前記ＳＴ−２４６多形型ＩＩＩの優先晶出を引き起こす温度まで前記溶液を冷却し；そして
ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６の結晶を乾燥し、
ここで有機溶媒は、アセトン、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、ジメチルアミン（ＤＭＡ）、ピリジン、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）、メタノール、エタノール、クロロホルム、アセトニトリル（ＡＣＮ）、およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）からなる群より選択される。

好ましくは、本方法はさらに、ステップ（ｂ）の実施中に多形型ＩＩＩのＳＴ−２４６の種結晶を添加することを含む。

また本発明は、以下のステップを含むＳＴ−２４６の結晶多形型ＩＶの産生方法も提供する：
ａ）任意で水を含有する少なくとも１の有機溶媒にＳＴ−２４６を溶解して溶液を調製し；
ｂ）前記ＳＴ−２４６多形型ＩＶの沈殿物のＳＴ−２４６の結晶形への優先晶出を引き起こす温度まで、前記溶液を冷却し；そして
ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６を乾燥し、
ここで前記溶媒は、アセトニトリルとエチルアセテートとの混合物、エタノールとトルエンとの混合物、水とエチルアセテートとの混合物、およびトリフルオロエタノールとＴＨＦとの混合物からなる群より選択される。

好ましくは、本方法はさらに、ステップ（ｂ）の実施中に多形型ＩＶのＳＴ−２４６の種結晶を添加することを含む。また好ましくは、溶媒は、ＡＣＮとエチルアルコールの容積比約１：４の混合物、エタノールとトルエンの容積比約１：４の混合物；水とエチルアセテートの容積比約１：４の混合物、およびＴＦＥとＴＨＦの容積比約１：１の混合物である

本発明はさらに、以下のステップを含むＳＴ−２４６の結晶多形型ＩＶの産生方法を提供する：
ａ）少なくとも１の溶媒にＳＴ−２４６を溶解して溶液を調製し；
ｂ）前記ＳＴ−２４６多形型ＩＶの優先晶出を引き起こす温度までＳＴ−２４６を冷却し；そして
ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６の結晶を乾燥し、
ここで前記溶媒は、１−ブタノール、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）、クロロホルム、ジクロロメタン、およびトルエンからなる群より選択される。

好ましくは、本方法はさらに、ステップ（ｂ）の実施中に、多形型ＩＶのＳＴ−２４６の種結晶を添加するステップを含む。また好ましくは、溶媒は水を含有しない。また好ましくは、溶媒は１−ブタノールである。

また本発明は、以下のステップを含むＳＴ−２４６の結晶多形型ＶＩの産生方法を提供する：
ａ）少なくとも１の溶媒にＳＴ−２４６を溶解して溶液を調製し；
ｂ）前記ＳＴ−２４６多形型ＶＩの優先晶出を引き起こす温度まで前記溶液を冷却し；そして
ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６の結晶を乾燥し、
ここで前記溶媒は、ニトロメタン、メタノール、およびクロロホルムからなる群より選択される。

好ましくは、本方法はさらに、ステップ（ｂ）の実施中に、多形型ＶＩのＳＴ−２４６の種結晶を添加することを含む。また好ましくは、溶媒は水を含有せず、ニトロメタンである。

ＳＴ−２４６は、以下の実施例に沿って調製する。ＳＴ−２４６の多形体の結晶化のプロセスは、技術の多様な組み合わせおよびその変形を包含する。ＳＴ−２４６の多形体の結晶化は、適切な温度でＳＴ−２４６を溶媒中に溶解、分散、またはスラリー化させて、前記溶媒の一部が蒸発して前記溶液、分散液、またはスラリー中のＳＴ−２４６の濃度が上昇するようにし、前記混合物を冷却し、そして任意で、結果として生じるＳＴ−２４６の結晶を洗浄および／またはろ過し、乾燥することによって実行することができる。

結晶の形成には、複数の結晶化プロセスが含まれてよい。ある場合には、１、２、またはそれ以上の結晶化のステップを実施すると、結果として生じる結晶形の質が向上するなどのさまざまな理由から有利となり得る。例えば、本発明の多形体は、ＳＴ−２４６の最初の出発基礎材料に溶媒を加え、一連の物質が完全に溶解するまで一定温度で溶液を撹拌し、真空蒸留で溶液を濃縮し、そして冷却することによって調製することもできる。最初の結晶化が起きたら、形成された結晶を溶媒で洗浄し、同じもしくは異なる溶媒でＳＴ−２４６を可溶化して所望の多形体を形成する。反応混合物を加熱して還流させれば反応混合物の再結晶化が起き、次に還流からの冷却ステップを実施すればよい。任意で、形成された多形体をろ過し、そのまま乾燥させる。

ＳＴ−２４６を溶媒中で溶解し、分散し、もしくはスラリー化することによって、さまざまな程度の分散液、例えば懸濁液、スラリー、もしくは混合物を得るか、または、好ましくは、均質な単相の溶液を得る可能性がある。「懸濁液」という用語は、微粒状の固体、つまり非晶質、結晶形、またはその混合物であるＳＴ−２４６が、通常は溶媒である液体媒体または分散媒体中に分散（懸濁）されたもので構成される二相系を指す。「スラリー」という用語は、固体をわずかしか溶解できない（または溶解しない）液体に、ある量の粉末を混合したときに形成される懸濁液を指す。「スラリー化」とは、スラリーを作ることを指す。

任意で、溶媒媒体には、結晶性懸濁液の調製に通常用いられる添加剤、例えば分散剤、界面活性剤、もしくは他の添加剤、またはその混合物が含まれてもよい。添加剤は、滑らかさを高め、表面積を減少させることによって結晶の形状を変更する際に、有利に用いることができる。

個体を含む溶媒媒体は、任意で一定時間撹拌するか、または、例えば高せん断ミキサーまたはホモジナイザーまたはその両方で強力にかき混ぜて、当該有機化合物の所望の粒径を得てもよい。さらに沈殿温度の制御および播種も用いて、結晶化プロセス、粒径分布、および製品の投与形態の再現性を高めてもよい。そのようなものとして、播種しなくても、ＳＴ−２４６の結晶があれば、または好ましくは、播種によって溶液中に導入されたＳＴ−２４６の結晶が存在すれば、結晶化を引き起こすことができる。また播種は、さまざまな温度で数回実施することができる。播種材料の量は実験規模によって異なり、当業者であれば容易に決定することができる。播種材料の量は、通常、反応から予想される結晶質の量の約０．１〜１重量パーセントである。

結晶化の各ステップにおける結晶化の時間は、適用条件、採用技術、および／または使用溶媒によって異なる。所望の均質な粒径を得るために、結晶転化後に大型粒子または粒子集合をさらに分割することもある。従って、ＳＴ−２４６の多形型の結晶、粉末集合、および粗粉を、転化の過程後に任意で摩砕し、大きさに従って分類してもよい。摩砕または粉砕とは、粉末の粒径を小さくするために、当分野で周知の方法および装置を用いて大型粒子または粒子集合を物理的に分割することを指す。結果として生じる粒径をミリメートルからナノメートルまでの範囲であってよく、つまりナノ結晶、微結晶が生じることになる。摩砕または粉砕に好ましい装置は、粒径分布範囲の狭い小型粒子の生産能力があることから、流体エネルギー摩砕機、すなわちミクロナイザーである。

また本発明は、ろ過または遠心分離に任意で洗浄および乾燥を組み合わせて、得られた結晶形を単離するプロセスも提供する。本発明の各プロセスに用いる出発物質は、ＳＴ−２４６の任意の結晶形または非晶形であり、その水和物も含まれる。

本発明の一態様では、本発明の結晶形の調製に用いる溶媒が、薬学的に許容し得る、または薬学的に許容し得ない溶媒の結晶形である。多形体を医薬調合物中に用いる前に、薬学的に許容し得ない溶媒を除去しなければならない。

本発明の多形型の製造プロセスは通常、溶媒媒体中のＳＴ−２４６の溶液または分散液から、または、最初は非晶形または結晶形であってよいＳＴ−２４６をスラリー化することから、結晶性の固体成分を得ることを含む。結晶化条件は、結晶化プロセスを向上させるため、または沈殿を生じさせるために、かつ生じる多形体の型に影響を及ぼさずに、変更してもよい。このような条件には、ＳＴ−２４６と溶媒との溶液、分散液、またはスラリーを所望の濃度にすること、それを規定の冷却／温度曲線に従って冷却すること、晶種を添加すること、前記溶液、分散液、またはスラリーを所望の温度にすること、任意の適切な圧力をかけること、望ましくないあらゆる材料または不純物を除去および／または分離すること、形成した結晶を乾燥して固体状の多形体を得ることが含まれるが、乾燥は、固体状が所望である場合に限る。

沈殿を生じさせるひとつの方法は、ＳＴ−２４６の溶解性を低下させることである。この化合物の溶解性は、例えば溶液の冷却によって低下させることもできる。ＳＴ−２４６の溶解性は、逆溶剤を添加することによって低下させることもできる。ＳＴ−２４６の溶液、分散液、またはスラリーを所望の濃度にするとは、必ずしもＳＴ−２４６の濃度を高くすることを指すわけではない。ある場合には、ＳＴ−２４６の濃度を低下させること、または変えないことが好ましい可能性もある。所望の濃度を得るために用いる技術としては、例えば常圧蒸留による蒸発、真空蒸留、分留（fractioned distillation）、共沸蒸留、膜蒸発、加熱、冷却、当分野で周知の他の技術、およびその組み合わせが挙げられる。所望の濃度を得るための任意のプロセスには、ＳＴ−２４６と溶媒の溶液の飽和を含めることもでき、そのために、例えば溶液に十分な量の非溶媒を加えて飽和点に達するようにしてもよい。

溶液を飽和させるための他の適切な技術の例としては、溶液にＳＴ−２４６を追加すること、および／または溶媒の一部を溶液から蒸発させることが挙げられる。本明細書に言及されているように、飽和溶液には、飽和点に達した溶液、または飽和点を超える、すなわち過飽和の溶液が含まれる。ほぼ飽和した溶液とは、飽和状態に近いが飽和溶解限度にはまだ達していない溶液のことである。

本発明の好ましい態様では、ＳＴ−２４６のどの多形体が形成されるかを判断する際に、結晶化溶媒が重要な因子となる。異なる多形型では水和度がさまざまであるため、含水率も重要である。水と水混和性溶媒との混合物中では水の量が約0.１容量％から約９５容量％まで変化し得るが、好ましくは約１０〜約２０容量％、さらに好ましくは約５〜約１０容量％、そして最も好ましくは約５〜約１容量％の水である。

ＳＴ−２４６の多形型ＩおよびＩＩＩは一水和物であり、そのため、ＳＴ−２４６が一水和物として結晶化するために存在しなければならない水の最小閾値がある。加えて、形成される多形型および／または水和物の決定には、冷却速度および単離温度および水分量が影響を及ぼす可能性がある。以下の表１が示すように、冷却速度と、単離温度と、含水率と、ＳＴ−２４６型ＩまたはＳＴ−２４６型ＩＩＩの生成との間には、相関関係がある。さらに、表１に示されたデータから、溶媒組成、結晶化温度、または冷却速度がＳＴ−２４６の多形型の形成に影響を及ぼす可能性が示唆される。例えば、表１が示す通り、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）とエチルアセテートとがいずれも主要溶媒として用いられる場合に、含水率の高い約３５℃〜約４０℃の温溶液を直ちに氷浴で冷却すると、ＳＴ−２４６型ＩＩＩが生じる。これに対して、含水率が低い場合、または溶液を室温まで冷却して単離した場合は、ＳＴ−２４６型Ｉが得られる。最終結晶化に至る前の材料の多形型は、当該材料が結晶化溶媒に完全に溶解する限り、最終多形型に影響を及ぼさない。

望ましくないあらゆる材料または不純物の除去および／または分離は、精製、ろ過、洗浄、沈殿、または類似技術によって実施することができる。例えば、分離は、公知の固液分離法によって実施できる。ろ過は、とりわけ、溶液、分散液、またはスラリーを濾紙、ガラスろ過器、または他の膜材料を通過させることによって、遠心分離によって、またはＢｕｃｈｎｅｒ式フィルター、Ｒｏｓｅｎｍｕｎｄフィルターまたはプレート、またはフレームプレス使って実施することができる。好ましくは、結果として生じる結晶形の多形性の純度を上げるために、上に開示されたプロセスにインラインろ過または安全ろ過を挿入すると有益となり得る。

得られた結晶をさらに乾燥してもよく、また複数の結晶化工程が適用される場合は、かかる乾燥プロセスを任意でさまざまな結晶化工程に用いてもよい。乾燥方法としては、加熱、真空の適用、空気または気体の循環、乾燥剤の添加、凍結乾燥、噴霧乾燥、蒸発など、またはその任意の組み合わせを挙げることができる。

型Ｉ
本発明の一態様では、ＳＴ−２４６の結晶型が開示され、ＳＴ−２４６の型Ｉ、または簡単に「型Ｉ」と命名される。

型Ｉを確実に結晶化させるためのひとつの好ましいパラメーターは、エチルアセテート／水の混合物の使用である。エチルアセテート／水を用いた結晶化試験では、いくつかのパラメーターが変更され（添加する水の量、溶解温度、単離温度、冷却速度）、表１および２にまとめられている。型Ｉは、水が十分に存在して一水和物の形成が可能であれば、エチルアセテート／水の混合物を用いて作ることができる。さらに、型Ｉは、ＴＨＦ／水の混合物、ＩＰＡ／水の混合物を用いて形成されることが示され、またアセトンとメタノールが、いずれも含水率を上げれば型Ｉを結晶化させる能力を有することが分かった。加えて、型Ｉはまた、型ＩＩＩおよびＶの水スラリーを数日間以上維持することによっても生じさせることができる。

表２−結晶化のパラメーター

型Ｉは、ＳＴ−２４６の一水和物の結晶型である。Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）の例、型Ｉのデータが、図１にまとめられており、以下に示す。

型Ｉの特徴的な赤外線スペクトルを以下に説明し、図７にまとめる。

４０００〜４００ｃｍ^−１の領域
型Ｉは、３４２１ｃｍ^−１に単一の大きなピークを持ち、また約３３００〜２６００ｃｍ^−１にこれらのピークの基礎となる幅広い吸光度を持つ。また、ほかにも３００８および２９５６ｃｍ^−１に２つのピークがあり、Ｃ−Ｈストレッチが原因であると考えられる。型Ｉは、１７９１、１７１７、および１６７１ｃｍ^−１にピークを持つ。３つの型はいずれも、約１５６０ｃｍ^−１にピークを持つ。

ＳＴ−２４６型Ｉは、ＳＴ−２４６の所望の多形体である。他の型がすべて型Ｉに転化されることから、これが熱力学的に最も安定な型であると思われる。

ＳＴ−２４６型Ｉは安定であり、そのため周囲条件での貯蔵が可能である。型Ｉは、製造および貯蔵のさまざまな段階で薬剤が経験し得るいくつかの環境条件および工程条件下では、別の多形体への転化を示さなかった。試験した条件の一部には、高温かつ高湿度、室温かつ高湿度、低湿度、６０℃以下での貯蔵、湿式造粒と乾燥を用いたカプセル製造、摩砕または微粉化工程の過程、懸濁液中、室温での長期貯蔵が挙げられる。さらに、型Ｉは非吸湿性であり、そのため相対湿度が９０％の状況であっても湿気を吸収しない。型Ｉは、商業的なプロセスの結晶化工程でも確実に製造され、純度が９９．０％を超えず、不純物が０．１５％を超えない。

型ＩＩ
本発明の別の態様では、ＳＴ−２４６の結晶形が開示され、ＳＴ−２４６の型ＩＩ、または簡単に「型ＩＩ」と命名される。

ＳＴ−２４６型ＩＩは、いくつかのアルコール類やアセトン／ＩＰＡ混合物の存在下で得られた。本発明の好ましい態様では、型ＩＩは、エチルアセテートまたはクロロホルムの存在下で確実に結晶化する。無水和物の型ＩＩは相対的に不安定であり、水分の吸収によって相ＩＩＩへの転化が起こりやすい。

型ＩＩは、ＳＴ−２４６の無水和の結晶型である。Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）を図２にまとめた。

型ＩＩＩ
本発明の別の態様では、発明は、ＳＴ−２４６の型ＩＩＩと命名されるＳＴ−２４６の結晶形に関わる。

表１および２にまとめたように、多様な水分量のＩＰＡ／水混合物が型ＩＩＩを生じる傾向がある。さらに、型ＩＩＩは、型Ｖの水スラリーから作ることができる。表１にまとめたデータに基づけば、冷却束度が速く、単離温度が低いと型ＩＩＩが生じやすくなる可能性がある。

型ＩＩＩは、ＳＴ−２４６の一水和の結晶型である。型ＩＩＩの単結晶Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）データの例を図３に示し、以下にまとめた。

型ＩＩＩの特徴的な赤外線スペクトルを以下に説明し、図８にまとめた。

４０００〜２５００^−１の領域
型ＩＩＩは、３４５２および３３９７ｃｍ^−１に分裂ピークを持つ。また、〜３００８および２９５６ｃｍ^−１にもピークがあり、Ｃ−Ｈストレッチによるものと思われる。約３３００〜２６００ｃｍ^−１にもピークがある。

２０００〜１５００ｃｍ^−１の領域
型ＩＩＩは、１７９２、１７１３、および１６６２ｃｍ^−１に一連のピークがある。そのいずれも、Ｃ＝Ｏストレッチによるものと思われる。また、１５６０ｃｍ^−１にもピークがあり、暫定的にＮ−Ｈ変形に割り当てた。

１５００〜４００ｃｍ^−１の領域
１５５〜４００ｃｍ^−１では、それほど重要ではないさまざまなピークがある。

型ＩＩＩ（一水和物）は、競争的スラリー実験で型Ｉに転化させることができる。型Ｉから型ＩＩＩへの転化はこれまでに観察されたことがなく、型Ｉが型ＩＩＩより熱力学的に安定な型であることを示唆している。しかしながら、型ＩＩＩは完全に水和しているため、高湿度の貯蔵条件下でも水分をそれ以上吸収することがないという点で、型ＩＩＩは、例えば型Ｖなどの水和度の低い他の型に優っている。

型ＩＶ
型ＩＶのＸＲＰＤの例、単結晶Ｘ線データを、図４に示す。

本発明の好ましい態様では、型ＩＶは、塩素化された溶媒と一部のアルコール類、例えば特に、ＴＦＥ，１ブタノール、トルエン、塩化メチレン、クロロホルムなどの存在下で形成される。無水和の型ＩＶは相対的に不安定であり、水分を吸収して型Ｖに転化しやすい。

型Ｖ
本発明のさらに別の態様では、発明は、ＳＴ−２４６の型Ｖ、または簡単に「型Ｖ」と命名されるＳＴ−２４６の結晶形に関わる。

型Ｖは、ＳＴ−２４６の半水和の結晶形である。型ＶのＸＲＰＤデータを以下に示し、また図５にまとめた。

また型Ｖの赤外線スペクトルを図９にもまとめ、以下でも説明する。下線のあるピークは、この多形体に最も特徴的なものと考えられる：

４０００〜２５００ｃｍ^−１の領域
型Ｖは、３４６４および３４０２ｃｍ^−１に分裂ピークを持ち、また３２３８および３２０６ｃｍ^−１にも第２の幅広い分裂ピークを持つ。これらのピークは、ＯＨおよびＮＧストレッチによるものと考えられ、３つの型の分化を可能にするように思われる。また型Ｖは、〜３００８および２９５６ｃｍ^−１にもピークがあり、Ｃ−Ｈストレッチによるものと考えられる。約３３００〜２６００ｃｍ^−１にもさらにピークがある。

２０００〜１５００ｃｍ^−１の領域
型Ｖはこの領域に、ＳＴ−２４６の他の結晶形と比較して有意に異なるスペクトル特性を持っていて、３個ではなく５個のピークを示し、これらは１７９１、１７３３、１７２１、１６８１、および１６６７ｃｍ^−１にある。このいずれもが、Ｃ＝Ｏストレッチによるものと思われる。３つの型はいずれも、約１５６０ｃｍ^−１のところにピークがあり、暫定的にＮ−Ｈ変形に割り当てた。相Ｖは１５１９および１４９７ｃｍ^−１にピークがある。

１５００〜４００ｃｍ^−１の領域
１５００〜４００ｃｍ^−１では、３つの型の赤外線スペクトルはわずかな差を示すだけであり、この領域は、ここに考察するＳＴ−２４６の３つの型を分化させるのには役立たないのであろう。

型Ｖ（半水和物）は、ＳＴ−２４６の早期のＧＭＰ合成の間に作られたものであり、国際公開第２００８／１３０３４８号、同第２００４／１１２７１８号、および同第２００８／０７９１５９に開示されている。この多形体の欠点は、完全に水和していないことである。この型は、湿潤環境に置かれるとすぐに水分を吸収し、競争的なスラリー環境では型Ｉに転化することが明らかにされている。

型Ｖは、水分が十分に存在せず、一水和物の型が生じない場合に形成されやすい。型Ｖは、結晶化に用いられる最初のＳＴ−２４６に水が含まれなければ、エチルアセテート／ヘキサンの混合物から形成される。最初のＳＴ−２４６に水が十分含まれている場合は、型ＩＩＩを生じさせることができる。また型Ｖは、含水量の低いメタノール／水およびＩＰＡ／水の混合物からも生じた。

型ＶＩ
本発明の一態様では、発明はＳＴ−２４６の結晶型に関わり、これはＳＴ−２４６の型ＶＩ、または簡単に「型ＶＩ」と命名される。

型ＶＩは、ＳＴ−２４６の一水和物結晶形である。ＸＲＰＤの例を図６にまとめた。本発明の好ましい態様では、型ＶＩは、一例として、ニトロメタンまたはクロロホルム／メタノールが結晶化溶媒として存在する中で形成され得る。

一般に、多形体型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶを他の多形体型が実質的に存在しない状態で調製する際には、異なる型の混合物からの結晶化を用いる。しかしながら、他の多形体型が実質的に存在しない状態でこの一連の多形体型の各々を作り出すことに関する結晶化技術は異なっており、以下に説明する。

さらに具体的に言えば、本発明は、単離された型Ｉであって、少なくとも約７０％の純度（つまり、他の型が存在しないこと）、好ましくは、少なくとも約８０％の純度、好ましくは、少なくとも約９０％の純度、好ましくは、少なくとも約９５％の純度、さらに好ましくは、少なくとも約９９％の純度、そして最も好ましくは、少なくとも約９９．９％の純度の単離された型Ｉを提供する。

本発明は、単離された型ＩＩであって、少なくとも約７０％の純度（つまり、他の型が存在しないこと）、好ましくは、少なくとも約８０％の純度、好ましくは、約９０％の純度、さらに好ましくは、少なくとも約９９％の純度、そして最も好ましくは、少なくとも約９９．９％の純度の単離された型ＩＩを提供する。さらに、本発明は、単離された型ＩＩＩであって、少なくとも約７０％の純度、好ましくは、少なくとも約８０％の純度、好ましくは、約９０％の純度、好ましくは、約９５％の純度、さらに好ましくは、少なくとも約９９％の純度、そして最も好ましくは、少なくとも約９９．９％の純度の単離された型ＩＩＩを提供する。

また、本発明は、単離された型ＩＶであって、少なくとも約７０％の純度（つまり、他の型が存在しないこと）、好ましくは、少なくとも約８０％の純度、好ましくは、少なくとも約９０％の純度、好ましくは、少なくとも約９５％の純度、さらに好ましくは、少なくとも約９９％の純度、そして最も好ましくは、少なくとも約９９．９％の純度の単離された型ＩＶを提供する。

さらに、本発明は、単離された型ＶＩであって、少なくとも約７０％の純度（他の型が存在しないこと）、好ましくは、少なくとも約８０％の純度、好ましくは、少なくとも約９０％の純度、好ましくは、少なくとも約９５％の純度、さらに好ましくは、少なくとも約９９％の純度、そして最も好ましくは、少なくとも約９９．９％の純度の単離された型ＶＩを提供する。

ＳＴ−２４６の多形体型の結晶、粉末、集合体、および粗粉を、転化を経た後に任意で摩砕し、大きさに従って分類してもよい。摩砕または粉砕とは、粉末の粒径を小さくするために、大型の粒子または粒子の集合体を当分野で周知の方法および装置で物理的に分割することを指す。結果として生じる粒径は、ミリメートルからナノメートルの範囲、すなわちナノ結晶、ミクロ結晶にしてよい。

本発明の多形体は、湿式摩砕などの公知の摩砕方法で摩砕し、錠剤の形成および他の投与形態の種類に適した粒径を得てもよい。本発明の多形体の微粉状（ナノ粒子）の製剤は当分野で公知の工程で製剤化してよく、例えば、国際特許出願の国際公開第０２／００１９６（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ）を参照されたい。

一態様では、本発明のＳＴ−２４６の多形体型Ｉ〜ＩＶおよびＶＩの各々の粒径は、粒子の体積平均径のＤ_９０が、約０．０１〜２００μｍ、好ましくは約１５〜５０μｍ、そして最も好ましくは、約０．０１〜１５μｍの範囲である。かかる粒子は、化学的および物理的な安定性が優っており、材料の流動性が良く、投与形態の均一性を向上させるため、大量調製および製剤化するうえでの利点がある。

製剤および投与
ＳＴ−２４６の多形体型の製剤は、製剤学の技術分野で公知の工程により調製することができる。以下の例（下記）は、当業者が本発明をいっそう明確に理解し、実施することができるように記載するものである。本発明の範囲を限定するものではなく、単にその例示および典型として考えなければならない。

本発明の多形の塩は、さまざまの経口的および非経口的な投与形態で投与することが可能である。経口薬の投与形態は、錠剤、被覆錠剤、硬もしくは軟ゼラチンカプセル、溶液、乳剤、シロップ、または懸濁液であってよい。非経口投与には、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、または腹腔内投与がある。加えて、本発明の塩は、経皮（経皮吸収促進剤を含めてもよい）、口腔内、鼻腔内、および坐剤の経路で投与することが可能である。

本発明の化合物から医薬組成物を調製するために、薬学的に許容し得る担体を、固体または液体とすることができる。固形製剤には、粉末、錠剤、ピル、硬および軟ゼラチンカプセル、オブラート剤、坐剤、ならびに分散性粒剤がある。固体担体が、希釈剤、着香料、潤滑剤、懸濁化剤、結合剤、防腐剤、錠剤崩壊剤、または封入材料の働きもする１または複数の物質であってもよい。

粉末では、担体は微粉固体であり、微粉状の活性成分を含む混合物に含まれる。錠剤では、活性成分は、必要な結合特性を持つ担体と適切な比率で混合され、所望の形状とサイズに成形されている。

錠剤、被覆錠剤、および硬ゼラチンカプセルに適した賦形剤としては、例えば微結晶性セルロース、ラクトース、コーンスターチおよびその誘導体、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、スターチ、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、タルク、および脂肪酸またはその塩、例えばステアリン酸などである。所望であれば、錠剤またはカプセルは、腸溶性製剤または徐放性製剤である。軟ゼラチンカプセルに好適な賦形剤は、例えば植物油、ろう、脂肪、半固体および液体のポリオールである。液状の製剤には、溶液、懸濁液、停留浣腸、および乳剤がある。非経口的注射には、液体製剤を水溶液または水／ポリエチレングリコール溶液に調合することができる。

経口的使用に好適な水溶液は、有効成分を水に溶解し、所望であれば好適な着色剤、香味料、安定化剤、および増粘剤を添加することによって調製することができる。経口使用に好適な水性懸濁液は、微細化した有効成分を、天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁化剤などの増粘剤を水に分散させることによって作ることができる

また組成物にも、活性成分のほかに着色剤、香味料、安定化剤、緩衝剤、人工および天然の甘味料、分散化剤、増粘剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧調整用の塩、マスキング剤、抗酸化剤などを含めてよい。

本発明の化合物は、生理的食塩水の溶液（例えば、ｐＨ約７．２〜７．５）に入れて静脈内投与することができる。本組成物には、リン酸塩、重炭酸塩、またはクエン酸塩などの従来の緩衝剤を用いることができる。

また、経口投与用に、使用直前に液体状に変換して用いるための固形製剤も含まれる。かかる液状の投与形態には、溶液、懸濁液、および乳濁液がある。坐剤の調製に好適な賦形剤としては、天然油脂および硬化油、ワックス、脂肪酸グリセリド、半液体または液体のポリオールなどがある。溶融した均一混合物を、次に都合のよい大きさの型枠に流し入れ、そのまま冷まして固める。好適な医薬用担体、賦形剤、およびその調合物が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎに記載されている：The Science and Practice of Pharmacy 1995、 E. W. Martin編、Mack Publishing Company、第19版、Easton、Pa。

投与量は、広い範囲の中で変えることができ、当然ながら、患者の個々の要望と治療中の病状の重症度に応じて、特定のケースごとに調節する。通常の製剤は、約５％〜約９５％の有効成分（ｗ／ｗ）を含む。単剤療法および／または併用療法での経口投与には、１日につき体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約１００ｍｇの投与量が適切である。好ましい１日投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．１〜約３００ｍｇ、さらに好ましいのは体重１ｋｇ当たり１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、そして最も好ましいのは１日に体重１ｋｇ当たり１．０〜約５０ｍｇである。

通常は、化合物の最適用量より少ない投与量で治療を開始する。その後、当該状況下で最適の効果が達成されるまで、投与量を少しずつ増加させていく。１日投与量は、単回投与量または分割投与量として投与することができ、一般には、１日当たり１〜５回投与する。

好ましくは、医薬製剤は投与単位形態である。かかる投与形態では、製剤は、適切な量の活性成分を含む単位用量へとさらに分割される。投与単位形態は、小瓶またはアンプルに入ったパック入りの錠剤、カプセル、および粉末などの製剤の個別の量を含むパッケージにされた製剤であってよい。また、投与単位形態は、カプセル剤、錠剤、オブラート剤、またはロゼンジ自体であってもよく、または、このうち任意のものの適切な量をパッケージにしたものでもよい。

適切な用量は、当業者には容易に理解されることであろう。治療での使用に必要な本発明の多形体の量は、治療する疾患の性質と患者の年齢および状態によって異なるため、最終的には担当する医師または獣医の裁量で決められることは、十分理解されるであろう。本発明の多形体は、ペニシリン、セファロスポリン、スルホンアミド、またはエリスロマイシンなどの他の抗菌剤併用することが可能である。

上述の組み合わせは製剤処方の形で提供するのが便利であり、従って、上に定義した組み合わせと薬学的に許容し得る担体または賦形剤とを共に含む製剤処方が、本発明のさらなる態様を構成する。かかる組合せの個々の成分は、任意の都合のよい経路によって、個別または一体の製剤処方で連続投与または同時投与することができる。

投与が連続投与の場合は、本発明の多形体または第２の治療薬のいずれを先に投与してもよい。投与が同時投与の場合は、組み合わせを、同じ組成物または異なる組成物のいずれの形でも投与することができる。

以上に述べた投与の経路と方法、および投薬量、ならびに以下に述べる投与形態を使って、型Ｉ、型ＩＩ、型ＩＩＩ、型ＩＶ、型Ｖ、および型ＶＩなどの本発明の個々の多形体型、ならびに本発明の多形体型の混合物を、ヒトのさまざまな疾患および状態の予防および治療に用いることができる。制限ではなく例として挙げると、オルトポックスウイルス感染および関連疾患の場合であれば、前記の治療を必要とするオルトポックスウイルス感染症の患者に対して、例えば、他の多形体型もしくは多形体混合物ならびに不活性の担体もしくは希釈剤が実質的に存在しない型Ｉ、型ＩＩ、型ＩＩＩ、型ＩＶ、型Ｖ、および型ＶＩなどの多形体型のうちの１つを含む組成物を、前記ウイルス感染の予防または治療に有効な量で投与することによって、これが達成される。

本発明によれば、ＳＴ−２４６は、他の多形体型が実質的に存在しない多形体型かまたは多形体型の混合物かのいずれかの形で、オルトポックスウイルス感染の予防または治療に有効な量で投与される。この組成物には、他の多形体型または多形体型の混合物が実質的に存在しないかかる多形体型を、かかる感染の予防または治療に必要な任意の有効量で使用することができる。一般には、経口剤であれば、１日に体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ〜約５．０ｍｇの投与量を用いる。しかしながら、他の多形体型または多形体型の混合物が実質的に存在しない型Ｉ、型ＩＩ、型ＩＩＩ、型ＩＶ、型Ｖ、および型ＶＩなどの多形体型を経口投与する際の単位用量は、ウイルス感染の状況および患者の体重にかなりの程度まで依存するため、当然ながら、医師の判断にゆだねられる。本発明の一態様では、型Ｉが、投与のために好ましいＳＴ−２４６の多形体型である。

本発明によれば、他の多形体型または多形体型の混合物が実質的に存在しない所定の多形体型を含む経口投与単位形態は、好ましくは１日に約３０ｍｇ〜８００ｍｇ、さらに好ましくは１日に約５０ｍｇ〜約６００ｍｇを、日中に１〜３回または必要に応じて投与することができる。

また本発明のある態様では、本発明の多形体、好ましくは水和物の形のＳＴ−２４６は、次のものと組み合わせて用いることもできる：（１）ワクチン；（２）Ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ、これは、ワクシニアウイルス感染および他の関連疾患の命にかかわる合併症であるワクシニア性湿疹（ＥＶ）を治療するための抗ウイルス薬であり、非環式ヌクレオシドホスホネートであり、そのためウイルス酵素によるリン酸化反応の影響を受けない；および／または（３）ＣＭＸ００１（hexadecyloxypropyl-cidofovir）、これは天然に存在する脂質であるリゾレシチンの模倣体であり、脂質3-hexadecyloxy-1-propanolをcidofovirのホスホン酸基に結合することによって形成される。

また本発明は、型Ｉ、型ＩＩ、型ＩＩＩ、型ＩＶ、型Ｖ、および型ＶＩをはじめとするＳＴ−２４６の結晶性多形体を１以上充填した１以上の容器を含む医薬のパックまたはキットも提供する。かかる容器（複数可）には、医薬品または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形の注意書きを任意で添付することもでき、この注意書きでは、ヒトに投与するための製造、使用、または販売に対する当局の承認を反映する。本発明のある特定の態様では、キットは、ＳＴ−２４６の結晶性多形体を複数含む。

実施例１−多形型Ｉの調製:
さらに具体的には、ＳＴ−２４６の一水和物、型Ｉを調製するには、シクロへプタトリエンをトルエンの存在下で無水マレイン酸と反応させて、主産物である核異性体を得る。トルエン／へプタンからの結晶化によって、さらに核外異性体が約７％〜０．６％得られる。さらに、無水和物または水和物の形のヒドラジンをイソプロパノールの存在下でMethyl 4-(trifluoromethyl) benzoateと反応させて、(4-(trifluoromethyl)-benzhydrazideを得る。生成物を、次にイソプロパノールから結晶化させる。

合成の次のステップでは、endo-tricyclo[3.2.2.0]non-8-endo-6,7-dicarboxylic anhydrideと(4-(trifluoromethyl)-benzhydrazide)とをイソプロパノール中で濃縮する。生成物を、イソプロパノールから結晶化することによって単離し、スラリーをさらに加熱して還流させ、保持する。結果として生じる溶液を冷却し、サンプル採取して反応を終了させる。分析によって反応の終了が示された後に炭素およびセライトを入れ、バッチを加熱して還流させ、維持する。冷却した後、バッチをろ過してこれらの固形物を除去し、続いてＩＰＡでフィルターを取り払う。バッチを冷却し、スラリーが形成される間維持する。バッチをさらに冷却して維持する。内容物を遠心分離器にかけ、合成の生成物を含む湿潤なケーキをヘプタンで洗浄する。この湿潤なケーキを乾燥し、ＳＴ−２４６の不完全水和型と呼ぶ（ＳＧ３）。

ＳＧ３を入れ、続いてエチルアセテートを入れる。この混合物を加熱し、維持してＳＧ３の溶解を確実にする。バッチ上で研磨ろ過を行い、異質物チェックによりろ過の成功を確認する。エチルアセテートを用いてフィルターを満たす。バッチを加熱して還流させたのち、エンドトキシン低減水（ＥＲ）を入れる。バッチに播種し、最後のＥＲ水を満たす。バッチの還流を維持し、スラリーのチェックを行う。

さらに、バッチを冷却し、その時にスラリーのサンプルを得て正しい多形体であることを確認する。バッチをさらに冷却し、遠心分離器で最終的に単離されるまで維持する。最終ＡＰＩを乾燥し、国際公開第０２／００１６の記述に従ってＦｉｔｚ Ｍｉｌｌを用いて摩砕する。型Ｉは、表２および３にさらにまとめたように、さまざまな溶媒および溶媒の組み合わせからＳＴ−２４６を結晶化させることによって調製することができる。

表３−溶媒スクリーニング試験の結果

図１および７にまとめたように、上記のプロセスによって得られるＳＴ−２４６型Ｉの同一性を、ＸＲＰＤおよびＩＲで確認した。

実施例２−多形型ＩＩの調製
型ＩおよびＶの出発物質の再結晶化によって、エチルアセテート溶媒およびクロロホルム溶媒から型ＩＩの標準を調製した。ある量のＳＴ−２４６型Ｉまたは型Ｖをエチルアセテートまたはクロロホルムのいずれかに溶解させ、０．４５□
ｍの膜フィルターでろ過した。ろ過した溶液をさらに高温で過熱させて個体がすべて溶解したことを確認し、次に温度を下げて、窒素置換下で乾燥するまで蒸発させた（〜２ｐｓｉ）。

型ＩＩの好ましい結晶化条件を以下の表４にまとめた：

型ＩＩの結晶化条件のさらなる例も、上記の表１−２にまとめた。

上述したプロセスによって得られたＳＴ−２４６型ＩＩの同一性を、図２にまとめたように、ＸＲＰＳによって確認した。

実施例３−多形型ＩＩＩの調製：
型ＩＩＩは、無水和のＳＴ−２４６を水中で再スラリー化することによって作る。型ＩＩＩを生じさせるのに用いる溶媒のさらなる例を、上の表１〜９にまとめた

上述のプロセスで調製されたＳＴ−２４６型ＩＩＩの同一性は、図３および８にまとめた通り、ＸＲＰＤおよびＩＲにより確認された。

実施例４−多形体型ＩＶの調製：
型Ｉの出発物質を１−ブタノール溶媒から再結晶化させることによって、型ＩＶの標準を作った。固体の出発物質を１−ブタノールに溶解させ、０．４５ｕｍ膜フィルターでろ過した。ろ過溶液は、固体がすべて溶解したことを確実にするためいっそう高い温度で過熱してから温度を下げ、窒素置換下で乾燥するまで蒸発させた（〜２ｐｓｉ）。型ＩＶにとって好ましい結晶化条件を、表５にまとめた。型ＩＶの結晶化のさらなる例を、表１〜３にまとめた。

上述のプロセスによって作り出したＳＴ−２４６型ＩＶの同一性は、図４にまとめたように、ＸＲＰＤによって確認した。

実施例５−多形体型Ｖの調製：
型Ｖ（半水和物）はＳＴ−２４６の早期のＧＭＰ合成の間に作られ、国際公開第２００８／０７９１５９号に開示されている。この多形体のデメリットは完全に水和されていないことである。この型は、湿潤環境に置かれるとすぐに水分を吸収し、また競争的なスラリー実験では、型Ｉに転化することが示されている。

ＳＴ−２４６型Ｖの同一性は、図５および９にまとめた通り、ＸＲＰＤおよびＩＲによって確認した。

実施例６−多形体型ＶＩの調製：
型Ｖの出発物質をニトロメタン溶媒から再結晶化させることによって、型ＶＩの標準を作った。固体の出発物質は、ニトロメタンに溶解させ、０．４５ｕｍ膜フィルターでろ過した。固体がすべて溶解したことを確実にするために温度を上げてろ過した溶液を過熱し、次に温度を下げて窒素置換下で乾燥するまで蒸発させた（〜２ｐｓｉ）。型ＶＩは、いろいろな溶媒および溶媒の組み合わせからＳＴ−２４６を結晶化させることによって調製することができる。下記の表５に結晶化条件をまとめた。好ましい結晶化条件を、下記の表６にまとめた。型ＶＩの結晶化のさらなる例を、表１〜３にまとめた。

上述のプロセスで得られたＳＴ−２４６型ＶＩは、図６にまとめた通り、ＸＲＰＤによって確認した。

実施例７−ＳＴ−２４６、型Ｉ、型ＩＩＩおよび型Ｖの特徴的かつ相対的な物理的特徴：
ＳＴ−２４６は、３つの重要な物理的形状（型Ｉ、ＩＩＩ、およびＶ）で存在しうることが明らかにされた。データは、さまざまな固形が製品の品質に影響を及ぼすかどうかを判定するために、多形体の関連する物理的／化学的性質および安定性について得た。このようなデータには、多形体の結晶学的性質および多形体の物理的／化学的性質（例えば、溶解度、溶解、融解範囲）の加速安定性データが含まれる。

型Ｉ、ＩＩＩ、およびＶのＸ線回折パターンを、それぞれ図１、３、および５に示した。型Ｉ、ＩＩＩ、およびＶの粉末Ｘ線パターンは、その粉末パターンの固有の特徴に基づき、すぐに区別することができる。

型Ｉ、ＩＩＩ、およびＶの相互転換
競争的および非競争的なスラリー実験を実施してＳＴ−２４６の最も安定な型を決定した。スラリー実験は、ＳＴ−２４６の１以上の型の過剰材料を少量の水に暴露し、結果として生じた懸濁液を数日間、周囲温度および／または４５℃で撹拌することによって実施した。また類似の実験も、３０℃で６０分間、異なるｐＨ値で行った。スラリーをろ過し、粉末ＸＲＰＤで固体を分析した。単離後に起こり得る脱溶媒和または物理的変化を回避するために、サンプルは粉末Ｘ線分析の前に乾燥させなかった。競争的および非競争的な水中スラリー実験から、型Ｖおよび型ＩＩＩが水中で型Ｉに転化し、型Ｉは未変化のままであることが明らかである。このスラリーデータを下記の表７にまとめた：

型ＩおよびＩＩＩの微粉化：
ＳＴ−２４６は、生理学的に関連のある溶媒中でその溶解度が低いため、ＢＣＳのクラスＩＩに属する。第１相臨床試験の試験材料は、粒径分布５０％４．８μｍおよび粒径分布９０％１２μｍの粒径の微粉化された型Ｖを用いて作った。そのため、型ＩおよびＩＩＩとも、国際公開第０２／００１９６号に記載されたようなエアジェット摩砕機を使用し、４００ｇｍのスケールで微粉化した。どちらの型も摩砕してすぐに、（ＸＲＰＤに基づく）物理的形状の変化を全く経ることなく所望の粒径を生じた。

微粉化されたおよび微粉化されない型Ｉおよび型ＩＩＩの代表的なＸＲＰＤパターンを、図１４および１５にまとめた。

製剤原料の安定性
微粉化されたものと微粉化されないものをどちらも含めた製剤原料の型Ｉおよび型ＩＩＩに対し、応力条件下の短期安定性評価を実施した。短期試験は完了しており、４０℃／相対湿度７５％で得られたデータを表８および９に示す。

微粉化された製剤原料および微粉化されない製剤原料のどちらのデータも、純度、関連物質、水分、ＸＲＰＤ、およびＤＳＣに関する物理的形状の変化がＩでもＩＩＩでも認められなかったことを示している。

この長期試験も完了しており、得られたデータを表１０に示す。

型Ｉ、ＩＩＩ、およびＶの静的収着
型Ｉ、ＩＩＩ、およびＶに対して様々な湿度条件で吸湿性試験を実施し、収着／脱着特性を理解した。各型を約１ｇずつ乳鉢と乳棒ですりつぶした。ＴＧＡにより、含水率を判定した。各型を約１００ｍｇずつ、相対湿度１１および９７％の静止湿度室に約２５℃で１０日間まで配置した。第０日目から重量損失の変化を示したのは、９７％の相対湿度で貯蔵した型Ｖのサンプルであった。このデータを下記の表１１にまとめた：

実施例８−ＳＴ−２４６のＡＰＩの粒径がＳＴ−２４６の硬ゼラチンカプセルの溶解プロフィルに及ぼす影響の分析
薬剤の粒径がその溶解プロフィルに及ぼす影響を広範囲にわたって検討し（Fincherら、１９６８を参照されたい）、やや溶けにくい薬剤の粒径が小さくなると、溶媒に暴露する薬剤の表面積が増大するため、溶解速度の上昇をもたらすとの仮定が行われた。

表１２は、微粉化された、または微粉化されないＳＴ−２４６のＡＰＩの粒径をミクロン単位でまとめたものである。ここで微粉化は、粒径がＳＴ−２４６の溶解プロフィルに及ぼす影響をさらに調べるために実施した。

ＡＰＩの粒子がＳＴ−２４６のカプセルの溶解に及ぼす影響を評価するために、ＳＴ−２４６の多形体型Ｉを含む以下の製剤を評価した。この一連の実験のために、例えばｄ９０％の１０μｍ未満、ｄ９０％の１６μｍ、ｄ９０％の２５μｍ、ｄ９０％の２５４μｍ未満、ｄ９０％の７５μｍ未満など、粒径の異なる製剤原料を用いてＳＴ−２４６（型−Ｉ）の２００ｍｇカプセルを調製した。ＳＴ−２４６のゼラチンカプセルの組成を下記の表１３に示す。

この一連の実験のために、７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ装置２（パドル）でＳＴ−２４６（型Ｉ）の溶解プロフィルを決定する。溶解プロフィルは、ＨＤＴＭＡを３％含むｐＨ７．５のリン酸緩衝液を０．０５Ｍ含む９００ｍｌの溶出溶媒の中で、３７℃で決定する。長時間にわたる累積薬物放出量を溶解したＳＴ−２４６％の割合として表わし、溶出溶媒サンプリング時間の関数としてプロットする。

表１４および図１６〜２０にまとめた通り、Ｄ９０粒径（ｄ９０％）が５．３ミクロンおよび１６．６ミクロンのＳＴ−２４６（型Ｉ）が約２２分間でほぼ１００％溶解したのに対し、Ｄ９０粒径（ｄ９０％）が２６．６のＳＴ−２４６（型Ｉ）は、３０分間でほぼ１００％溶解した。また、Ｄ９０粒径が４０．８５および５８．２ミクロンのＳＴ−２４６（型Ｉ）は、３０分間でほぼ８５％〜８６％溶解する。さらに、Ｄ９０粒径が７５ミクロンのＳＴ−２４６（型Ｉ）は３０分間でほぼ８６％溶解し、Ｄ９０粒径が２５４ミクロンのＳＴ−２４６（型Ｉ）は６０分間で４４％しか溶解しない。表１４は、Ｄ９０粒径（ｄ９０％）が５．３ミクロン、１６．６ミクロン、および２６．６ミクロンのＳＴ−２４６（型Ｉ）で作られたカプセルの溶解プロフィルを、別の溶解法（３７℃でｐＨ７．５の０．０５Ｍリン酸緩衝液９００ｍＬにＨＤＴＭＡを１％加え、５０ｒｐｍで動作するＵＳＰ装置２（パドル）に入れる）を用いて示したものである。

さらに、ＳＴ−２４６型Ｉは、経口投与用に、ＳＴ−２４６を２００ｍｇ含むカプセルに調製することができる。この一連の実験には、Ｄ９０粒径が約５．３〜７５ミクロンのＳＴ−２４６（型Ｉ）を用いることができる。すべての不活性成分が、ＧＲＡＳおよびＵＳＰＬＮＦ賦形剤であってよい。製造プロセスには、高せん断ミキサー／造粒機および硬ゼラチンカプセル充填を用いた湿式造粒法、ならびに硬ゼラチンカプセルへの充填を含めてよい。

好適な投与形態には、さまざまな量の活性成分を含むカプセルを含めることもできる。Ｄ９０粒径を約１０ミクロン未満に微粉化したＳＴ−２４６の一水和物を２００ｍｇ含む典型的な投与形態の定量的組成を、下記の表１５にまとめた：

組成物の他の例を表１７にまとめた。

実施例９−オルトポックスウイルス複製の阻害：
ＳＴ−２４６型Ｉのワクシニアウイルス阻害能力は、以下の実験手順に従って確立する：

ウイルス株の調製
低多重度で感染したベロ細胞にワクシニアウイルス（ＮＹＣＢＨ）のウイルス株を作り（細胞１個あたり０．０１プラーク形成単位（ＰＦＵ））、細胞変性効果が完全になった時点で（４＋ＣＰＥ）集菌する。サンプルを凍結し、解凍し、超音波で分解して、細胞結合ウイルスを開放する。細胞残屑を低速遠心分離で除去し、結果として生じたウイルス懸濁液を−８０℃の１ｍＬアリコートに貯蔵する。ウイルス懸濁液のＰＦＵ／ｍＬを、標準のプラークアッセイでベロ細胞およびＢＳＣ−４０細胞に関して定量化する。

ワクシニアＣＰＥアッセイ
３日間で完全なＣＰＥを生じさせるのに必要なワクシニアウイルス株の量を決定するために、９６ウェルプレート上にベロ細胞単層を播種し、ワクシニアウイルス株の２倍段階希釈液で感染させる。感染後３日目に、培養物を５％のグルタルアルデヒドで固定し、０．１％のクリスタルバイオレットで着色する。ウイルスが誘導したＣＰＥを、ＯＤ_５７０で分光光度的に定量化する。この分析から、ＨＴＳアッセイでの使用には、ワクシニアウイルス株の１：８００希釈液を選択する。この量のワクシニアウイルスは、感染の多重度が１細胞当たり約０．１ＰＦＵであることを表わす。

９６ウェルアッセイの信号対雑音比（Ｓ／Ｎ）を確定し、ウェル間およびアッセイ間のばらつきを評価するために、単独の実験を６回実施する。ワクシニアウイルス株の１：８００希釈液でベロ細胞単層が感染する。

各プレートには次の対照が入っている：４通りのウイルス感染ウェル、４通りの非感染細胞ウェル、ならびに、参考基準として３００、１００、３０、および１０ＤＡＭで添加したシドホビル（ＣＤＶ）または２１００、７１４、２１０、および７１Ｍで添加したホスホノ酢酸（ＰＡＡ）の正副２通の用量反応曲線。感染後３日目に、上述のようにプレートを処理する。この一連の実験の結果は、９６ウェルアッセイの構成が強固かつ再現可能であることを示している。

型Ｉの試験
ＳＴ−２４６型Ｉに対し、ワクシニアウイルスＣＰＥアッセイでの試験を実施する。型ＩをＤＭＳＯに溶解し、培養液で希釈して、各ウェルの最終濃度を５ｐＭ化合物および０．５％ＤＭＳＯとする。Ｂｉｏｍｅｋ．ＲＴＭを用いたロボット制御で、型Ｉを培地に添加する。

化合物の添加に続いて、培養物をワクシニアウイルスに感染させる。３日後に、上述のようにプレートを処理してＣＰＥを定量化する。本発明のＳＴ−２４６型Ｉは、試験濃度（５．ｍｕ．Ｍ）で、ワクシニアウイルスが誘導したＣＰＥを５０％を超えて阻害した。型Ｉをさらに評価し、ＣＰＥアッセイで力価（ＥＣ_５０）を、ＭＴＴアッセイで細胞毒性（ＣＣ_５０）を明らかにする。ＭＴＴアッセイは、細胞を分割する際のミトコンドリアのデヒドロゲナーゼ活性を測定する。４９０ｎｍでのホルマジンの吸収度は、５０％エタノールにホルマジンを溶解させた直後に９６ウェルアッセイから直接測定することができる。ホルマジン生成物の量は、培養物中の生きた細胞の数に正比例する。ＥＣ_５０値は、コンピュータープログラムを使ってＳＴ−２４６型Ｉの処理化合物と未処理化合物とを比較することによって決定される。従って、ＣＥＰアッセイでのＳＴ−２４６型ＩのＥＣ_５０値は、５０ｎＭである。

オルトポックスウイルスの阻害に関するＳＴ−２４６型Ｉの特異性は、ピキンデウイルス、リフトバレー熱ウイルス（ＭＰ１２株）、呼吸器合胞体ウイルス、およびサイトメガロウイルスをはじめとする関係のないウイルスの複製を阻害しない点に反映される。

実施例１０−ＳＴ−２４６型Ｉのインビボ試験：
試験デザイン
試験は、カニクイザル（Macaca fascicularis）を対象とするＳＴ−２４６型Ｉ経口薬の無作為化プラセボ対照平行群間比較縦断試験として設計される。この一連の実験のために、ＭＰＸのザイール７９株５ｘ１０^７ＰＦＵの静脈内注射によって１５のＮＨＰを感染させ、それぞれ３ＮＨＰずつの治療群５群に無作為に割り付ける。ビヒクルまたはＳＴ−２４６型Ｉを、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回経口投与し、続いて、水和して均質なモンキービスケットの３０％懸濁液を５ｍｌ／ｋｇずつ与える。

感染後３日目に治療を開始し、１日１回で１４日間継続する。３３日までの期間にわたって少なくとも１日２回、感染した動物を観察して病気の兆候を点検する。感染した動物から血液検体を採取し、ウイルス学的、血液学的、免疫学的、および化学的な分析を行う。試験期間中に死亡した動物には十分な屍検を行い、組織を採取して病理学検査に供する。感染の程度を判定するために、３日目に動物３匹を安楽死させ、その組織を処理して組織内のウイルスのレベルを判定する。臓器を凍結融解し、１０％の組織ホモジネートを得て定量ＰＣＲにより分析する。Ｑｉａｇｅｎ ＱＩＡｍｐ ＤＮＡミニキットを用いたＤＮＡ抽出、および上述の定量的ＴａｑＭａｎ−ＭＧＢ ＰＣＲによって、血液１ミリリットル当たりのＭＰＸゲノムの数を決定する。サル痘ウイルスの病変を毎日数える。

カニクイザル（ＮＨＰ）を対象とするＳＴ−２４６型Ｉの薬物動態分析
飼料を与えた状態のＮＨＰに対し、１０、２０、および３０ｍｇ／ｋｇのＳＴ−２４６を経口強制飼養により投与する。投与日には、用量投与の直前に、どの動物にも霊長動物用のビスケットスラリーを投与する。ビスケットスラリーには、Ｅｎｓｕｒｅ１缶（８ｏｚ）または他の流動食、液体および電解質置換調製粉乳（electrolyte replacement formula）（Ｐｒａｎｇ）約３６ｇ、特殊調製粉乳約９４ｇ、ろ過した果物１ジャー（２．５ｏｚ）、サル用固形ビスケット５個、ならびに水２ｏｚが含まれ、これを混合して硬度を均一にしてある。ビスケットスラリーは、１０ｍｌ／ｋｇの用量体積のものを強制飼養で経口投与する。被験物質の各用量を投与した後、そして強制飼養管を除去する前に、１０ｍｌの水道水で管を洗い流した。投与調合物を磁石の撹拌棒と撹拌皿で撹拌する。個別の用量は、ごく最近の体重に基づく。２０−ｍｇ／ｋｇ用量群を除いて、それぞれの用量群にはＮＨＰのオス３匹とメス３匹を含め、２０−ｍｇ／ｋｇ用量群にはオス４匹とメス４匹を含める。１０−および３０−ｍｇ／ｋｇ用量群はＳＴ−２４６型Ｉを連続１４日間摂取し、２０−ｍｇ／ｋｇ群のＮＨＰはＳＴ−２４６の単回投与を受けた。大腿動脈／静脈予備試験（０時間）で（投与前）、ならびに第１日目、７日目、および１４日目の投与後０．５、１、２、３、４、６、８、１２、および２４時間に血液検体を採取し、ＳＴ−２４６型Ｉの血漿中濃度を判定する。

カニクイザルのサル痘モデルに対するＳＴ−２４６型Ｉの有効性の評価
ここに記載する試験は、ＭＰＸに静脈内感染させたＮＨＰに対するＳＴ−２４６型Ｉの経口投与の無作為化プラセボ対照平行群間比較縦断試験である。動物は、主要組織の広範囲にわたるＭＰＸ感染を示しており、これは組織内のウイルスのレベルによって示される。ＳＴ−２４６型Ｉ処置を行う時点で、ＮＨＰの３分の１がウイルス病変を抱えている。ビヒクルだけの投与を受けた動物は、全匹が死亡したかまたは安楽死を必要としている。何故なら、この動物群は、３３日間の試験の間瀕死の状態だったからである。これに対して、ＳＴ−２４６型Ｉを投与された動物は全匹が生き延びている。ＳＴ−２４６型Ｉの投与を受けた動物はいずれも、試験期間全体を通じて生き延びている。

この一連の実験では、ウイルス負荷および病変の発現を毎日定量化した。ビヒクル用量群の動物の場合と比べて、ＳＴ−２４６型Ｉのすべての用量で、存在するウイルスＤＮＡの量が最初の５ｄｐｉから有意に低下している。１４日間にわたる治療の最後には、ＳＴ−２４６型Ｉで治療した群のウイルス負荷が直線的な用量反応を示し、いずれの群でも、１０００倍を超えるウイルス複製のレベルに、ビヒクル治療群より有意な低下が認められる。

実施例１１−抗オルトポックスウイルス化合物ＳＴ−２４６の型Ｉカプセルおよび型Ｖカプセルの健常ヒト志願者に対する単回経口投与の薬物動態比較
試験デザイン
これは、ＳＴ−２４６型Ｉ（試験）とＳＴ−２４６型Ｖ（基準）との単回４００ｍｇ（２ｘ２００ｍｇ）経口投与の薬物動態（ＰＫ；ＡＵＣの変数およびＣ_ｍａｘ）を比較し、満腹の健常志願者に対する両化合物の安全性および耐容性を評価するための第Ｉ型無作為化二重盲検クロスオーバー探索的試験であった。ふるい分けした６３例の被験者（男性および妊娠していない女性、１８歳〜５０歳）のうち、１２例の試験への参加を認め、次の順序のうちいずれかに無作為に割り付けた：型Ｉの後で型Ｖ、または型Ｖの後で型Ｉ。

ＳＴ−２４６のＰＫを決定するために、１日目に尿および投与前（０日目）静脈血サンプルを得て、次に薬剤投与後の一連の採血を行った。いずれの被験者にも、標準的な軽い食事の後３０分以内に、ＳＴ−２４６の型Ｉかまたは型Ｖの単回用量４００−ｍｇ（２ｘ２００ｍｇ）を経口投与した。投与後（治療１）のＰＫ分析のための血液サンプルを、０．５、１、２、３、４、８、１２、２４、３６、４８、および７２時間に採取した。２日目に、投与後の尿サンプルを採取した。試験の２〜１０日目に無治療期間が生じたため、治療２は１１日目に始まった。この時に、最初にＳＴ−２４６の型Ｉを投与された被験者が今度は型Ｖの４００ｍｇの単回用量（２ｘ２００ｍｇ）を投与され、また逆も同様であった。治療２実施後のＰＫ分析のための血液採取を治療１の実施後と同様に行い、１４日目に尿の採取を実施した。血漿サンプルを採取して−７０℃で保存した後、最大薬物濃度（Ｃｍａｘ）、最大薬物濃度に達する時間（Ｔｍａｘ）、終末型半減期（ｔ１／２）、血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、腎クリアランス（Ｃｌｒ）を分析した。尿サンプルを直ちに４℃で１０分間、２０００ｘｇで遠心分離し、尿排泄を評価した。ＳＴ−２４６の類似体を内標準に用いて、有効な液体クロマトグラフィーおよびタンデム型質量分析により、ヒト血漿サンプルからＳＴ−２４６を定量化した。

試験は、ＳＴ−２４６の型Ｉカプセルおよび型Ｖカプセルの単回用量を経口投与した後に、薬物動態（ＰＫ）を比較したものである。この目標は、被験者１２人中１２人を対象とした型ＩのＰＫ評価、および被験者１２人中１１人を対象とした型ＶのＰＫ評価のための血漿サンプルを採取し、分析することによって達成された。ＳＴ−２４６の薬物動態パラメーターである最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）、用量投与後Ｃｍａｘに到達した時間（Ｔｍａｘ）、プラズマ照射（ＡＵＣ０−τ、ＡＵＣ０−∞）、および排出半減期（ｔ１／２）を、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアのプロフェッショナル版（Pharsight Corporation, Version 5.2）を用いた無隔壁分析を使って推定した。

ＳＴ−２４６型Ｉおよび型Ｖの薬物動態を、下記の表１８にまとめた：

単回経口投与後の時間経過に従ったＳＴ−２４６の平均（標準偏差）血漿中濃度（ＰＫ母集団）を、図２４に示す。

Claims (12)

1. ７．６３、１０．０４、１１．４７、１４．７３、１５．２１、１５．４７、１６．０６、１６．６７、１６．９８、１８．９３、１９．９６、２０．５２、２０．７９、２２．８０、２５．１６、２６．５３、２７．２０、２７．６０、２９．６０、３０．２３、３０．４９、３０．６８、３１．１４、３３．６５、３４．３３、３５．２９、３５．５６、３６．３０、３７．３６、３８．４２、３８．６６度の反射角２θの特性ピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す、4-トリフルオロメチル-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-オクタヒドロ-1,3-ジオキソ-4,6-エテノシクロプロプ[F]イソインドール−2(1H)-イル)-ベンズアミド（ＳＴ−２４６）の多形体型Ｉ。
2. 治療的有効量の請求項１に記載の多形体を含み、さらに、担体、賦形剤、希釈剤、添加剤、充填剤、潤滑剤、および結合剤からなる群より選択される薬学的に許容し得る成分を１以上含む、オルトポックスウイルスに対する活性を有する医薬組成物。
3. 経口投与用に製剤化された、請求項２に記載の医薬組成物。
4. オルトポックスウイルス感染または種痘性湿疹の治療のための、請求項１に記載の多形体の治療的有効量を含む組成物。
5. 請求項１に記載の4-トリフルオロメチル-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-オクタヒドロ-1,3-ジオキソ-4,6-エテノシクロプロプ[F]イソインドール−2(1H)-イル)-ベンズアミド（ＳＴ−２４６）の結晶多形体型Ｉの生成方法であって、
   ａ）溶媒にＳＴ−２４６を溶解させて溶液を作るステップと、
   ｂ）前記溶液を少なくとも１５分間を超えて冷却して、前記ＳＴ−２４６多形体型Ｉの優先晶出を引き起こすステップと、そして
   ｃ）任意で、形成されたＳＴ−２４６の結晶を乾燥するステップと、を含み、
   ここで、前記溶媒はイソプロピルアルコールまたはエチルアセテートと5%の水とを含み、前記溶液は室温に冷却される、あるいは、前記溶媒はイソプロピルアルコールまたはエチルアセテートと2%の水とを含み、前記溶液は2-5℃に冷却される、方法。
6. ステップ（ｂ）の実施中に、多形体型Ｉの4-トリフルオロメチル-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-オクタヒドロ-1,3-ジオキソ-4,6-エテノシクロプロプ[F]イソインドール−2(1H)-イル)-ベンズアミド（ＳＴ−２４６）の種晶を添加することをさらに含む、請求項５に記載の方法。
7. 前記冷却ステップが少なくとも１５分間を超えて実施される、請求項５に記載の方法。
8. Ｄ９０％粒径が１０ミクロン未満である4-トリフルオロメチル-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-オクタヒドロ-1,3-ジオキソ-4,6-エテノシクロプロプ[F]イソインドール−2(1H)-イル)-ベンズアミド（ＳＴ−２４６）を２００ｍｇ含む、経口投与用に製剤化された請求項２に記載の医薬組成物を含む投与単位形態。
9. 4-トリフルオロメチル-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-オクタヒドロ-1,3-ジオキソ-4,6-エテノシクロプロプ[F]イソインドール−2(1H)-イル)-ベンズアミド（ＳＴ−２４６）が３００ミクロンまでの直径のＤ９０％粒径を有する、請求項２に記載の医薬組成物を含む経口投与のための投与単位形態。
10. 4-トリフルオロメチル-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-オクタヒドロ-1,3-ジオキソ-4,6-エテノシクロプロプ[F]イソインドール−2(1H)-イル)-ベンズアミド（ＳＴ−２４６）が５ミクロンの直径のＤ９０％粒径、１６．６ミクロンの直径のＤ９０％粒径、２６．６ミクロンの直径のＤ９０％粒径、または７５ミクロンの直径のＤ９０％粒径を有する、請求項９に記載の経口投与のための投与単位形態。
11. カプセルまたは錠剤の形態で存在する、請求項１０に記載の投与単位形態。
12. オルトポックスウイルスに対する活性を有する経口投与のための単位投与形態であって、
    (ａ）4-トリフルオロメチル-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-オクタヒドロ-1,3-ジオキソ-4,6-エテノシクロプロプ[F]イソインドール−2(1H)-イル)-ベンズアミド（ＳＴ−２４６）が、多形体型Ｉである、２００ｍｇの4-トリフルオロメチル-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-オクタヒドロ-1,3-ジオキソ-4,6-エテノシクロプロプ[F]イソインドール−2(1H)-イル)-ベンズアミド（ＳＴ−２４６）と、
    （ｂ）３３．１５ｍｇのラクトース一水和物と、
    （ｃ）４２．９０ｍｇのクロスカルメロースナトリウムと、
    （ｄ）１．９５ｍｇのコロイド状二酸化ケイ素と、
    （ｅ）１３．６５ｍｇのヒドロキシプロピルメチルセルロースと、
    （ｆ）７．８ｍｇのラウリル硫酸ナトリウムと、
    （ｇ）１．９５ｍｇのステアリン酸マグネシウムと、そして
    （ｈ）投与形態の総重量を３９０ｍｇにするための、８８．６０ｍｇまでの量の微結晶性セルロース、を含む、単位投与形態。